Growth Hormone (hGH) · IMMULITE/IMMULITE 1000 Growth Hormone (hGH) (PILKGH-12, 2005-05-09) 5 NIBSC 1st International Standard 80/505, with a conversion factor of 2.6. If customers

Growth Hormone (hGH)

For use on the IMMULITE®

and IMMULITE® 1000 systems

IMMULITE®/IMMULITE 1000® Growth Hormone (hGH)

2 IMMULITE/IMMULITE 1000 Growth Hormone (hGH) (PILKGH-12, 2005-05-09)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE and IMMULITE 1000Analyzers — for the quantitativemeasurement of human growth hormone(hGH) in serum, as an aid in patientmanagement.Catalog Number: LKGH1 (100 tests),LKGH5 (500 tests)Test Code: GH Color: Light GrayCDC Analyte Identifier Code: 2547CDC Test System Identifier Code: 10159CLIA Complexity Category: Moderate

Summary and ExplanationHuman growth hormone (hGH,somatotropin) is a polypeptide originatingin the anterior pituitary. It is 191 aminoacids in length and has a molecular massof approximately 22,000 daltons. Itsmetabolic effects are primarily anabolic. Itpromotes protein conservation andengages a wide range of mechanisms forprotein synthesis. It also enhancesglucose transport and facilitates thebuildup of glycogen stores. Another familyof peptide hormones, the somatomedins,mediates its cascade of growth-promotingactions.1

Measurement of hGH is primarily ofinterest in the diagnosis and treatment ofvarious forms of inappropriate growthhormone secretion. Clinical disorders ofhyposecretion include dwarfism andunattained growth potential.Hypersecretion is associated withgigantism and acromegaly.

Caution must be exercised in the clinicalinterpretation of growth hormone levels.These vary throughout the day, making itdifficult to define a reference range or tojudge an individual's status based onsingle determinations. Many factors areknown to influence the rate of growthhormone secretion, including periods ofsleep and wakefulness, exercise, stress,hypoglycemia, estrogens, corticosteroids,L-dopa, and others.1 Because of itssimilarity to prolactin and placentallactogen, earlier growth hormone

immunoassays were often plagued withfalsely high values in pregnant andlactating women.Because not all acromegalic individualshave elevated baseline levels,suppression tests based on glucoseloading are of value in this context. Inspite of the induced hyperglycemia, thereis rarely a decrease from baseline levels inacromegaly.2

Growth hormone-deficient individuals havefasting/resting levels similar to those foundin healthy individuals. Various challengetests have therefore been devised todifferentiate these groups. Thus, with theonset of deep sleep or after 15 to 20minutes of vigorous exercise, growthhormone levels normally show a rise.Other tests of growth hormoneresponsiveness are based on theadministration of L-dopa, arginine andinsulin. Propanolol or estrogen aresometimes given in conjunction with theprimary stimulus to accentuate theresponse.4,5

A small number of cases of dwarfism havebeen documented in which both the basallevel and the response to challengetesting were normal. Such cases mayinvolve tissue insensitivity to either growthhormone or the somatomedins, or thepresence of antibodies or immunoreactivebut biologically inactive growth hormone.4

Principle of the ProcedureIMMULITE/IMMULITE 1000 GrowthHormone is a solid-phase, two-sitechemiluminescent immunometric assay.The solid phase (bead) is coated withmurine monoclonal anti-hGH antibody.The reagent contains alkalinephosphatase (bovine calf intestine)conjugated to a rabbit anti-hGH polyclonalantibody. The reagent and hGH in thesample are incubated together with abead coated with a murine anti-hGHmonoclonal antibody to form an antibody-sandwich complex. Unbound enzymeconjugate is then removed by a centrifugalwash. Finally, chemiluminescent substrateis added to the bead and signal isgenerated in proportion to the boundenzyme.

IMMULITE/IMMULITE 1000 Growth Hormone (hGH) (PILKGH-12, 2005-05-09) 3

Incubation Cycles: 1 × 30 minutes.

Specimen CollectionPatient must be fasting and at completerest 30 minutes before blood collection.6,7

The use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receiptby the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with caution.Icteric or grossly contaminated samplesmay give erroneous results.Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.IMMULITE/IMMULITE 1000 GrowthHormone has not been tested with allpossible variations of tube types. Consultthe section on Alternate Sample Types fordetails on tubes that have been tested.Volume Required: 50 µL serum. (Samplecup must contain at least 100 µL morethan the total volume required.)

Storage: Refrigerate immediately. Stableat 2–8°C for 8 hours,6,7 or for 2 months(aliquotted) at –20°C.

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.Follow universal precautions, and handleall components as if capable oftransmitting infectious agents. Sourcematerials derived from human blood weretested and found nonreactive for syphilis;for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitisB surface antigen; and for antibodies tohepatitis C.

Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as apreservative. On disposal, flush with largevolumes of water to prevent the buildup ofpotentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Thebarcode labels are needed for the assay.

GH Test Units (LGH1)Each barcode-labeled unit contains onebead coated with murine monoclonal anti-hGH antibody. Stable at 2–8°C untilexpiration date.LKGH1: 100 units. LKGH5: 500 units.Allow the Test Unit bags to come to roomtemperature before opening. Open bycutting along the top edge, leaving theziplock ridge intact. Reseal the bags toprotect from moisture.

GH Reagent Wedge (LGH2)With barcode. 7.5 mL alkalinephosphatase (bovine calf intestine)conjugated to rabbit polyclonal anti-hGHantibody in buffer, with preservative. Storecapped and refrigerated: stable at 2–8°Cuntil expiration date. Recommendedusage is within 30 days after openingwhen stored as indicated.LKGH1: 1 wedge. LKGH5: 5 wedges.

GH Adjustors (LGHL, LGHH)Two vials (Low and High) containinglyophilized hGH in nonhuman serum, withpreservative. Reconstitute each vial with3.0 mL distilled or deionized water. Mix bygentle swirling or inversion until thelyophilized material is fully dissolved.Stable at 2–8°C for 30 days afterreconstitution, or for 6 months (aliquotted)at –20°C.LKGH1: 1 set. LKGH5: 2 sets.

Kit ComponentsSupplied Separately

GH Sample Diluent (LGHZ)For the manual dilution of patient samples.25 mL of processed nonhuman serum,


with preservative. Stable at 2–8°C for30 days after opening, or for 6 months(aliquotted) at –20°C.LSUBX: Chemiluminescent SubstrateLPWS2: Probe Wash ModuleLKPM : Probe Cleaning KitLCHx-y: Sample Cup Holders (barcoded)LSCP: Sample Cups (disposable)LSCC: Sample Cup Caps (optional)CON6: Tri-level, multi-constituent control

Also RequiredSample transfer pipets, distilled ordeionized water, controls.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE or IMMULITE 1000 Operator'sManual.See the IMMULITE or IMMULITE 1000Operator's Manual for: preparation, setup,adjustment, assay and quality controlprocedures.Visually inspect each Test Unit for thepresence of a bead before loading it ontothe system.Recommended Adjustment Interval:2 weeks.Quality Control Samples: Use controlsor sample pools with at least two levels(low and high) of growth hormone.

Expected ValuesA study performed at a large referencelaboratory in the western United States on59 healthy adult males and 60 healthyadult females yielded the followingreference intervals:

Males: Up to 1 ng/mLFemales: Up to 10 ng/mL

Secretion of growth hormone by thepituitary gland is episodic and pulsatile,and transient levels up to 40 ng/mL havebeen observed in healthy subjects.Because serum levels are rather lowbetween pulses in healthy individuals,immunoassays with sufficient sensitivityare necessary to distinguish patients withabnormally low values from healthysubjects who have values that happen tofall in the low-normal range. Thus, basal orrandom levels of hGH provide little

diagnostic information. In someindividuals, spontaneous growth hormonesecretion is better monitored by using acontinuous withdrawal pump, or bydrawing specimens for hGH assay every20 to 30 minutes over a 12-to-24-hourperiod. A number of provocative testsdesigned to stimulate or suppress releaseare also used to assess growth hormonesecretion; the definition of abnormalresponses varies with the laboratory.1

Consider these limits as guidelines only.Each laboratory should establish its ownreference ranges.

LimitationsPatients on hGH therapy may develophuman antibodies to hGH that will interferein the assay and cause falsely low values.

Heterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay's performance.Results are expressed in ng/mL. (Unlessotherwise noted, all were generated onserum samples collected in tubes withoutgel barriers or clot-promoting additives.)Please note that beginning with softwareversions 4.13 (IMMULITE) and 5.7b(IMMULITE 1000), the alternate units arein terms of WHO NIBSC 2nd InternationalStandard 98/574 for r-DNA GrowthHormone, with a conversion factor of 2.4.For previous software versions, thealternate units are in terms of WHO


NIBSC 1st International Standard 80/505,with a conversion factor of 2.6.

If customers reprint results generatedon previous software versions, resultswill be expressed relative to WHONIBSC 2nd International Standard98/574 for r-DNA Growth Hormone.Conversion Factor:ng/mL × 2.6 → mIU/L WHO 1st IS 80/505ng/mL × 2.4 → mIU/L WHO 2nd IS 98/574Calibration Range: Up to 40 ng/mL(Up to 104 mIU/L, WHO 1st IS 80/505)(Up to 96 mIU/L, WHO 2nd IS 98/574)Analytical Sensitivity: Up to 0.01 ng/mL(0.026 mIU/L).

High-dose Hook Effect:None up to 17,000 ng/mL.

Intraassay Precision (Within-Run):Statistics were calculated for samplesfrom the results of 20 replicates in a singlerun. (See “Intraassay Precision” table.)

Interassay Precision (Run-to-Run):Statistics were calculated for samplesassayed in 11 different runs. (See“Interassay Precision” table.)

Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)Recovery: Samples spiked 1 to 19 withthree growth hormone solutions (115, 230and 476 ng/mL) were assayed. (See"Recovery" table for representative data.)Specificity: The antibody used in theIMMULITE Growth Hormone procedure ishighly specific for hGH, with lowcrossreactivity to other naturally occurringhormones. (See “Specificity” table.)

A second, smaller form of growth hormone(approximately 20,000 daltons) accountsfor 15% of the total growth hormonecontent of the human pituitary. This formhas the normal growth promoting activity,but lacks the insulin-like activityassociated with the 22,000 dalton form.The 20 kDa form was tested forcrossreactivity in the IMMULITE GrowthHormone assay and was found tocrossreact to the extent of 63%.

Bilirubin: Presence of bilirubin inconcentrations up to 100 mg/L has noeffect on results, within the precision of theassay. Levels of 200 mg/L interfere with

the assay, causing a slight depression ofvalues. (See “Bilirubin” table.)

Hemolysis: Presence of packed red bloodcells in concentrations up to 30 µL/mL hasno effect on results, within the precision ofthe assay.

Alternate Sample Type: To assess theeffect of alternate sample types, bloodwas collected from 15 volunteers intoplain, heparinized, and Becton DickinsonSST® vacutainer tubes. Equal volumes ofthe matched samples were spiked withvarious concentrations of hGH, to obtainvalues throughout the calibration range ofthe assay, and then assayed by theIMMULITE Growth Hormone procedure.(Heparin) = 0.99 (Serum) – 0.55 ng/mLr = 0.982

(SST) = 0.92 (Plain Tubes) + 2.3 ng/mLr = 0.975

Means:26.1 ng/mL (Heparin)25.8 ng/mL (Serum)26.0 ng/mL (SST Tubes)

Method Comparison: The IMMULITEGrowth Hormone procedure wascompared to an immunoradiometric assay(Kit A) on 84 patient samples.(Concentration range: approximately 0.04to 27 ng/mL. See graph.) By linearregression:(IML) = 0.92 (Kit A) + 0.47 ng/mLr = 0.937

Means:6.0 ng/mL (IMMULITE)6.0 ng/mL (Kit A)

References1) Whitley RJ, Meikle AW, Watts NB.Endocrinology. Part 2: Protein hormones. In:Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz textbookof clinical chemistry. 2nd ed. Philadelphia:Saunders, 1994: 1665-70. 2) Daughaday WM,Cryer PE. Growth hormone hypersecretion andacromegaly. Hospital Practice. no. 8 August1978;13:75-80. 3) Raite S. The standards forhuman growth hormone assays. In: Laron Z,Butenandt O, editors. Evaluation of GrowthHormone Secretion. Basel: Karger, 1983: 162-9.4) Van Wyk JJ. Diagnosis of growth hormonedeficiency and other causes of growth failure.The Endocrine Society: Syllabus for the 35thAnnual Postgraduate Assembly October 1983:90-106. 5) Van Wyk JJ, Underwood L. Growthhormone, somatomedins and growth failure.Hospital Practice no. 8 August 1978;13:57-67. 6)Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratorytests. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders,


1995: 300. 7) Burtis CA, Ashwood ER, editors.Tietz textbook of clinical chemistry. 2nd ed.Philadelphia: W.B. Saunders, 1994: 1670. 8)National Committee for Clinical LaboratoryStandards. Procedures for the collection ofdiagnostic blood specimens by venipuncture;approved standard. 4th ed. NCCLS DocumentH3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998.

Technical AssistanceIn the United States, contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.

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Tables and Graphs

Intraassay Precision (ng/mL)

Mean1 SD2 CV3

1 1.7 0.09 5.3%

2 3.1 0.18 5.8%

3 7.8 0.47 6.0%

4 15 0.93 6.2%

5 31 2.0 6.5%

Interassay Precision (ng/mL)

Mean1 SD2 CV3

1 3.0 0.17 5.7%

2 7.1 0.39 5.5%

3 9.3 0.58 6.2%

4 16 0.90 5.6%

5 18 1.1 6.1%

Linearity (ng/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 8 in 85 12 — —

4 in 8 5.1 6.0 85%

2 in 8 2.6 3.0 87%

1 in 8 1.5 1.5 100%

2 8 in 8 23 — —

4 in 8 11 12 92%

2 in 8 5.1 5.8 88%

1 in 8 2.7 2.9 93%

3 8 in 8 29 — —

4 in 8 14 15 93%

2 in 8 6.3 7.3 86%

1 in 8 3.2 3.6 89%

4 8 in 8 40 — —

4 in 8 21 20 105%

2 in 8 9.9 10 99%

1 in 8 4.5 5.0 90%

Recovery (ng/mL)

SampleSpiking

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — 7.5 — —

A 15 13 115%

B 21 19 111%

C 33 31 106%

2 — 8.2 — —

A 14 14 100%

B 23 20 115%

C 35 32 109%

3 — 23 — —

A 31 28 111%

B 36 34 106%

C >40 46 —

4 — 26 — —

A 31 31 100%

B 38 37 103%

C >40 49 —


Specificity

Compound1ng/mLAdded2

ApparentConc.ng/mL3

% Cross-reactivity4

FSH 10,000 ND ND

β-subunitHCG

10,000 ND ND

HPL 10,000 ND ND

LH 3,663 ND ND

40,000 ND ND

10,000 ND ND

1,000 ND ND

Prolactin

200 ND ND

TSH 11,125 0.941 0.0085%

ND: not detectable.5

Bilirubin

Unspiked1 50 mg/L 100 mg/L 200 mg/L

1 7.4 7.1 7.4 5.9

2 12 11 11 9.3

3 21 21 19 17

4 28 27 24 24

5 33 34 31 29

Method Comparison

Kit A, ng/mL 0 5 10 15 20 25

IMM

ULI

TE h

GH

0

5

10

15

20

25

(IML) = 0.92 (Kit A) + 0.47 ng/mLr = 0.937

Deutsch. Intraassay Precision: 1Mittelwert, 2S(Standardabweichung), 3CV(Variationskoeffizient). Interassay Precision:1Mittelwert, 2S (Standardabweichung), 3CV(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8.Recovery: 1Lösung, 2Beobachtet (B), 3Erwartet(E), 4% B/E. Specificity: 1Verbindung,

2zugesetzte Menge, 3 AusgewieseneKonzentration, 4% Kreuzreaktivität, 5NN: Nichtnachweisbar. Bilirubin: 1Ohne Zugabe von.Method Comparison: Growth Hormone: hGH(humanes Wachstumshormon).

Español. Intraassay Precision: 1Media, 2DS,3CV. Interassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV.Linearity: 1Dilución, 2Observado (O), 3Esperado(E), 4%O/E, 58 en 8. Recovery: 1Solución,2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E.Specificity: 1Compuesto, 2Cantidad añadida,3Concentración aparente, 4% Reacción cruzada,5ND: no detectable. Bilirubin: 1Sin añadir.Method Comparison: Growth Hormone:Hormona de Crecimiento.

Français. Intrraassay Precision: 1Moyenne,2SD, 3CV. Interassay Precision: 1Moyenne,2SD, 3CV. Linearity: 1Dilution, 2Observé (O),3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8. Recovery:1Solution, 2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A.Specificity: 1Composé, 2ajouté, 3 Concentrationapparente, 4Réaction croisée %. 5ND: nondétectable. Bilirubin: 1Non chargés. MethodComparison: Growth Hormone: hGH.

Italiano. intraassay Precision: 1Media, 2SD(Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente diVariazione). Interassay Precision: 1Media, 2SD(Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente diVariazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Recovery:1Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.Specificity: 1Composto, 2quantità aggiunta, 3Concentrazione apparente, 4Percentuale diCrossreattività, 5ND: non determinabile.Bilirubin: 1Semplice, senza aggiunte. MethodComparison: Growth Hormone: hGH.

Português. Intraassay Precision: 1Média,2Desvio padrão, 3Coeficiente de variação.Interassay Precision: 1Média, 2Desvio padrão,3Coeficiente de variação. Linearity: 1Diluição,2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8.Recovery: 1Solução, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E. Specificity: 1Composto,2Quantidade adicionada, 3ApparentConcentration, 4Percentagem de reacçãocruzada, 5ND: não detectável. Bilirubin: 1Nãoadicionada. Method Comparison: GrowthHormone: Hormona de crescimento.

Deutsch

hGH (humanes Wachstums-hormon) IMMULITEAnwendung: Zur in vitro-Diagnostik unterVerwendung der IMMULITE undIMMULITE 1000 Systeme –zurquantitativen Messung von humanenWachstumshormon (hGH) im Serum, als


Hilfestellung in der Therapie- undVerlaufskontrolle.

Artikelnummern: LKGH1 (100 Tests),LKGH5 (500 Tests).Testcode: GH Farbe: hellgrau

Klinische RelevanzHumanes Wachstumshormon,Somatotropes Hormon (STH) oderHuman-Growth-Hormon (hGH), ist eineinkettiges Proteohormon, das aus 191Aminosäuren und 2 Disulfidbrückenbesteht. Seine Molmasse beträgtca. 22 000 Dalton. Die Synthese desWachstumshormons findet in denRibosomen der acidophilen somatotropenZellen des Hypophysen-Vorderlappensstatt. Dies geschieht unter demstimulierenden Einfluß des imHypothalamus gebildeten Growth-Hormon-Releasing-Hormons (GH-RH)über einen negativenRückkoppelungsmechanismus. Dietägliche Produktionsrate beträgt beimErwachsenen etwa 350 µg/24 Stunden.Das hGH besitzt einen proteinanabolenEffekt. Es beeinflußt den Protein-, denKohlenhydrat- und den Fettstoffwechsel,aber auch den Elektrolyt- undWasserhaushalt. hGH führt zurVerminderung der Stickstoffausscheidungund dadurch zur positiven Stickstoffbilanz.Der Aminosäurentransport in der Zelle undder Einbau der Aminosäuren ins Eiweißwird gefördert. Es stimuliert zudem dieRNA-Polymeraseaktivität. Mediatoren derwachstumsfördernden Wirkung des hGHsind die Somatomedine, eine andereGruppe von Peptidhormonen.1

Die Bestimmung der Serum-hGH-Spiegelist insbesondere von Bedeutung fürDiagnose und Therapiekontrolle vonStörungen der hGH-Sekretion. KlinischeBilder einer hGH-Hyposekretion sindZwergwuchs und Minderwuchs. Resultateiner Hypersekretion von hGH sindGigantismus und Akromegalie.2

Die klinische Interpretation von basalenhGH-Spiegeln kann nur mit äußersterVorsicht erfolgen. Infolge des circadianenRhythmus des hGH ist es äußerstschwierig, Referenzwerte zu definierenbzw. einzelne Basalwertbestimmungen zuinterpretieren. Zahlreiche Faktoren, wieSchlaf, Schlaflosigkeit, körperliche

Belastung, Stress, Hypoglykämie,Östrogene, Kortikosteroide, L-Dopa u.a.können die hGH-Sekretion beeinflussen.1Wegen der Ähnlichkeit des hGH zuProlaktin und HPL wurden mit älterenhGH-Assays bei schwangeren undstillenden Frauen oft falsch erhöhte hGH-Spiegel bestimmt.

Da nicht alle akromegalen Patientenerhöhte hGH-Basalwerte aufweisen, sindin diesen Fällen Glukose-Suppressionsteste von klinischerBedeutung. Bei Gesunden kommt es nachoraler Glukosezufuhr zu einem Abfall derhGH-Konzentrationen auf nichtnachweisbare Werte. Bei Patienten mitAkromegalie ist hGH entweder nichtsupprimierbar, oder es findet sich einparadoxer Anstieg.

Patienten mit hGH-Mangel haben basalehGH-Spiegel, ähnlich denen vonGesunden. Zur Differentialdiagnostik deshGH-Mangels werden daher verschiedeneFunktionsteste eingesetzt. So führt zumBeispiel eine körperliche Belastung von15–20 Minuten bei Gesunden zu einemAnstieg der hGH-Spiegel. AndereFunktionsteste zur Überprüfung der hGH-Antwort basieren auf der Verabreichungvon L-Dopa, Arginin oder Insulin. Inmanchen Fällen werden Propanolol oderÖstrogene in Kombination mit demprimären Stimulus verabreicht, um diehGH-Antwort zu verstärken.4,5

Es ist eine kleine Zahl von Patienten mitZwergwuchs dokumentiert, die sowohlnormale hGH-Basalwerte, als auch einenormale Antwort auf Funktionstestezeigten. In solchen Fällen kann eineUnempfindlichkeit der Gewebe auf hGHoder die Somatomedine (IGFs) vorliegen,es können Antikörper vorhanden sein oderdas gebildete hGH ist immunreaktiv, aberbiologisch inaktiv.4

MethodikIMMULITE/IMMULITE 1000Wachstumshormon ist ein Festphasen,zwei Phasen-Chemilumineszenzimmunometrischer Assay.Die Festphase(Kugel) ist mit einemmonoklonalen Maus-anti-hGH-Antikörperbeschichtet. Das Reagenz enthältAlkalische Phosphatase(Rinderkalbsdarm), die an einenpolyklonalen Kaninchen-anti-hGH


konjugiert ist. Das Reagenz und hGH ausder Probe werden gemeinsam mit einermit monoklonalen Maus-anti-hGH-Antikörper beschichteten Kugel inkubiertum einen Antikörper-Sandwich-Komplexzu bilden. Unkonjugiertes Enzymkonjugatwird anschließend durch einen Zentrifugal-Waschschritt entfernt. Zuletzt wirdChemilumineszenz-Substrat zur Kugelhinzugefügt und das Messsignal wird imVerhältnis zum gebundenen Enzymgebildet.Inkubationszyklen: 1 × 30 minuten.

ProbengewinnungDie Patienten müssen nüchtern sein und30 Minuten vor der Blutentnahmevollkommen ruhen.6,7

Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.Bei hämolysierten Proben besteht dieMöglichkeit einer unsachgemäßenHandhabung vor Eintreffen im Labor,daher sind die Ergebnisse zurückhaltendzu interpretieren.Ikterische oder grob kontaminierte Probenkönnen zu fehlerhaften Ergebnissenführen.Die Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab.IMMULITE/IMMULITE 1000Wachstumshormon sind nicht mit allenmöglichen Röhrchenvariationenausgetestet worden. Details dergetesteten Röhrchenarten sind demKapitel "Alternative Probenarten" zuentnehmen.

Erforderliche Menge: 50 µl Serum.(Inhalt der Probenschale mussmindestens 100 µl über der erforderlichenGesamtmenge liegen.)Lagerung: Sofort kühlen. 8 Stunden bei2–8°C haltbar6,7 oder 2 Monate bei –20°C(aliquotiert).

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.

Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhaltenund alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle ausmenschlichem Blut gewonnenenMaterialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Umdie Bildung von explosiven Metallaziden inBlei- und Kupferrohren zu vermeiden,sollten die Reagenzien nur zusammen mitgroßen Wassermengen in die Kanalisationgespült werden.Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkteSonneneinstrahlung vermeiden. SiehePackungsbeilage.Wasser: Destilliertes oder deionisiertesWasser verwenden.

Im Lieferumfang enthaltenDie Komponenten sind aufeinanderabgestimmt. Die Barcode-Etikettenwerden für den Assay benötigt.

GH- Testeinheiten (LGH1)Jede mit Barcode-Etikette verseheneEinheit enthält eine mit monoklonalemAnti-hGH-Mausantikörper beschichteteKugel. Bei 2–8°C bis zum Ablaufdatumhaltbar.LKGH1: 100 Testeinheiten.LKGH5: 500 Testeinheiten.Verpackte Testeinheiten vor dem Öffnenstehen lassen, bis sie Zimmertemperaturerreicht haben. Oben entlang der Kante


aufschneiden, ohne den Plastikverschlusszu beschädigen. Verpackungen wiederdicht verschließen, damit der Inhalttrocken bleibt.

GH- Reagenzbehälter (LGH2)Mit Barcode. 7,5 ml mit alkalischerPhosphatase (Rinderkalbsdarm)konjugiertes polyklonales anti-hGH (Hase)Antikörper in Pufferlösung, mitKonservierungsmittel. Verschlossen undgekühlt aufbewahren: Bei 2–8°C bis zumAblaufdatum haltbar. Bei entsprechenderLagerung beträgt die empfohleneAufbrauchfrist nach dem Öffnen 30 Tage.LKGH1: 1 Behälter.LKGH5: 5 Behälter.

GH- Kalibratoren (LGHL, LGHH)Zwei Fläschchen (niedrig und hoch) mitlyophilisiertem hGH in nichthumanemSerum, mit Konservierungsmittel.Fläschchen mit je 3,0 ml destilliertem oderdeionisiertem Wasser rekonstituieren.Zum Mischen leicht schwenken oderumdrehen, bis das lyophilisierte Materialvollständig aufgelöst ist. NachRekonstituierung 30 Tage bei 2–8°C oder6 Monate (aliquotiert) bei –20°C haltbar.LKGH1: 1 Set.LKGH5: 2 Sets.

Separat erhältliche Testsystem-Komponenten

GH-Verdünnungspuffer (LGHZ)Zum manuellen Verdünnen derPatientenproben. 25 ml prozessiertesnichthumanes Serum, mitKonservierungsmittel. 30 Tage nach demÖffnen bei 2–8°C haltbar oder 6 Monatebei –20°C (aliquotiert).LSUBX: Chemilumineszenz-SubstratLPWS2: PipettenwaschlösungLKPM: PipettenreinigungssetLCHx-y: Halterungen für dieProbenschalen (mit Barcodierung)LSCP: Probenschalen (Einwegartikel)LSCC: Verschlüsse für die Probenschalen(optional)CON6: Multikomponentenkontrolle in dreiKonzentrationen.

Ebenfalls benötigt werden destilliertesbzw. deionisiertes Wasser, Teströhrchenund Kontrollen.

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE oderIMMULITE 1000-Handbuch beschrieben,regelmäßig durchgeführt werden.

Das Handbuch für das IMMULITE oderIMMULITE 1000 enthält die Anweisungenfür: Vorbereitung, Geräteeinstellungen,Kalibrierung, Testdurchführung undQualitätskontrollen.Überprüfen Sie jedes Testeinheit auf dasVorhandensein der Polystyrol-Kugel vordem Einsetzen in das Gerät.Empfohlenes Kalibrationsintervall:2 Wochen.

Proben zur Qualitätskontrolle:Kontrollen oder Poolseren mit hGH inmindestens zwei Konzentrationen (niedrigund hoch) verwenden.

ReferenzwerteEine Studie, durchgeführt in einem großenReferenzlabor im Westen der USA, mit 59gesunden Männern und 60 gesundenFrauen ergab folgende Referenzbereiche:

Männer: bis 1 ng/mlFrauen: bis 10 ng/ml

Die Sekretion des Wachstumshormonsdurch die Hypophyse erfolgt beiGesunden episodisch und pulsatil mit GH-Spitzen bis 40 ng/ml. Da die GH-Serumspiegel zwischen den PulsenGesunder sehr niedrig sind, müssenImmunoassays mit ausreichenderSensitivität zwischen pathologischniedrigen GH-Spiegeln von Patienten undGH-Spiegeln von Gesunden, die in denniedrig-normalen Bereich abgefallen sind,differenzieren können. Daher ermöglichenbasale hGH-Spiegel nur eineeingeschränkte diagnostische Information.Bei einzelnen diagnostischenFragestellungen kann die spontane GH-Sekretion besser durch die Verwendungeines kontinuierlich arbeitendenBlutabnahmesystems oder durchBlutentnahmen alle 20–30 Minuten übereine 12–24h-Periode überprüft werden.Eine Reihe von Provokationstesten(Stimulations- bzw. Suppressionsteste)werden ebenfalls eingesetzt, umStörungen in der GH-Sekretion zuüberprüfen. Die Definition einer


abnormalen Testantwort differiert starkzwischen den einzelnen Laboratorien.1

Diese Referenzwerte sind lediglich alsRichtlinien aufzufassen. Jedes Laborsollte seine eigenen Referenzbereicheetablieren.

Grenzen der MethodePatienten unter hGH-Therapie könnenhumane Antikörper gegen hGH bilden, diemit dem Assay interferieren und zu falscherniedrigten Werten führen können.

Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen innerhalb des invitro Immunoassays verursachen. (Clin.Chem. 1988:34:27-33) Proben vonPatienten, die häufig mit Tier- bzw.Tierserumprodukten zu tun haben, könnendie erwähnten Interferenzen verursachenund zu anomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind sokonzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe Tabellen und Grafiken mitrepräsentativen Daten für den Assay. DieErgebnisse sind als ng/ml ausgedrückt.(Alle Daten wurden – sofern nicht andersangegeben – aus Serumproben inRöhrchen ohne Gelbarrieren odergerinnungsfördernde Zusätze gewonnen.)

Bitte beachten Sie, dass mit der SoftwareVersion 4.13 (IMMULITE) und 5.7b(IMMULITE 1000) sich die alternativenEinheiten auf den internationalen WHOStandard NIBSC 2nd 98/574 für r-DNAWachstumshormon beziehen. Derzugehörige Umrechnungsfaktor ist 2,4(ng/ml × 2,4 → mIU/l).Für die bisherigen Software Versionenbeziehen sich die alternativen Einheitenauf den WHO-Standard NIBSC 1st 80/505.Hier ist der Umrechnungsfaktor 2,6.

Wenn der Anwender erneut Ergebnisseausdruckt, die mit der bisherigenSoftware Version erstellt wurden,werden die Ergebnisangaben in Bezugauf den internationalen WHO-StandardNIBSC 2nd 98/574 für r-DNAWachstumshormon ausgegeben.Umrechnungsfaktor:ng/ml × 2,6 → mIU/l WHO 1st IS 80/505ng/ml × 2,4 → mIU/l WHO 2nd IS 98/574Messbereich: Bis zu 40 ng/ml(Bis zu 104 mIU/l, WHO 1st IS 80/505)(Bis zu 96 mIU/l, WHO 2nd IS 98/574)

Analytische Sensitivität: 0,01 ng/ml(0,026 mIU/l).High-Dose-Hook-Effect:Bis 17 000 ng/ml keiner.Präzision im einzelnen Testansatz(intraassay): Statisik aus einem einzelnenTestansatz mit 20 Einzelmessungen(siehe Tabelle “Intraassay Precision“).Präzision zwischen Testansätzen(interassay): Statistik aus 11verschiedenen Testansätzen (sieheTabelle “Interassay Precision“).Linearität: Proben wurden inverschiedenen Verdünnungen getestet.(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle “Linearity“.)Wiederfindung: Die getesteten Probenwaren mit drei hGH-Lösungen (115, 230und 476 ng/ml) 1:19 versetzt.(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle “Recovery“.)Spezifität: Hochspezifischer Anti-hGH-Antikörper, mit geringer Kreuzreaktivität zuanderen natürlich vorkommendenHormonen. (Siehe Tabelle ”Specificity“).Etwa 15% des Gesamt hGH in derhumanen Hypophyse liegen in einerkleineren Form (etwa 20 000 Dalton) vor.Diese hat auch wachstumsförderndeAktivität, verfügt aber nicht über dieInsulin-ähnliche Aktivität der 22 kD Form.Die Kreuzreaktivität zu der 20 kD Formbeträgt 63%.Bilirubin: Bilirubin hat in Konzentrationenbis zu 100 mg/l keinen Einfluss auf dieErgebnisse, der größer als die Impräzisiondes Assays selbst ist. Level von 200 mg/lkönnen mit dem Assay interferieren undzu einer leichten Erniedrigung der Werteführen. (Siehe Tabelle "Bilirubin".)


Hämolyse: Erythrozytenkonzentratehaben in Konzentrationen bis zu 30 µl/mlkeinen Einfluss auf die Messung, dergrößer als die Impräzision des Assaysselbst ist.

Alternativer Probentyp: Um dieAuswirkungen von verschiedenenProbenarten zu untersuchen, wurde Blutvon 15 Freiwilligen in Röhrchen ohneAdditiva, in Heparin-, und BectonDickinson SST® Vacutainer-Rörchengesammelt. Gleiche Volumina derjeweiligen Proben wurden mitverschiedenen Konzentratonen anWachstumshormon versetzt, um Werte imgesamten Kalibrationsbereich zu erhalten,und die Proben anschließend mit demIMMULITE Assay für Wachstumshormongemessen.(Heparin) = 0,99 (Serum) – 0,55 ng/mlr = 0,982

(SST) = 0,92 (einfachen Röhrchen) + 2,3 ng/mlr = 0,975

Mittelwerte:26,1 ng/ml (Heparin)25,8 ng/ml (Serum)26,0 ng/ml (SST)

Methodenvergleich: Der Assay wurdeanhand von 84 Proben mit einemradioimmunometrischen Assay (Kit A)verglichen. (Konzentrationsbereich: 0,04bis ca. 27 ng/ml. Siehe Grafik.) Durchlineare Regression:(IML) = 0,92 (Kit A) + 0,47 ng/mlr = 0,937

Mittelwerte:6,0 ng/ml (IMMULITE)6,0 ng/ml (Kit A)

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Hergestellt von Euro/DPC Ltd. unter demQualitätssystem ISO 13485:2003.

Español

Hormona de CrecimientoUtilidad del análisis: Para su uso en eldiagnóstico in vitro con los analizadoresIMMULITE e IMMULITE 1000 — para lamedición cuantitativa de hormona humana

del crecimiento (hGH) en suero, comoayuda en el seguimiento del paciente.

Números de Catálogo:LKGH1 (100 tests), LKGH5 (500 tests)Código del Test: GH Color: Gris claro

Resumen y Explicacióndel TestLa hormona del crecimiento humana(hGH, somatotropina) es un polipéptidoque se origina en la pituitaria anterior.Tiene 191 aminoácidos de longitud y unpeso molecular de aproximadamente22 000 daltons. Sus efectos metabólicosson principalmente anabólicos. Activa laconservación de la proteínas y participaen una amplia variedad de mecanismosde síntesis de proteínas. También mejorael transporte de glucosa y facilita laacumulación de almacenes de glucógeno.Otra familia de hormonas peptídicas, lassomatomedinas, median en su cascadade acciones de activación delcrecimiento.1

La medida de hGH es de primordialinterés en el diagnóstico y tratamiento dediversas formas de secreción inadecuadade la hormona del crecimiento. Entre lostrastornos clínicos de hiposecreción seincluyen el enanismo y el potencial decrecimiento no alcanzado. Lahipersecreción se asocia con gigantismo yacromegalia.La interpretación clínica de los niveles dehormona del crecimiento debe hacersecon precaución. Estos niveles varían a lolargo del día, lo que hace difícil definir unintervalo de referencia o juzgar el estadode un individuo sobre la base de una soladeterminación. Se sabe que hay muchosfactores que influyen en la tasa desecreción de hormona del crecimiento,entre las que se incluyen los periodos desueño y vigilia, el ejercicio, el estrés, lahipoglucemia, estrógenos,corticosteroides, L-dopa y otros.1 Debido asu similitud con la prolactina y ellactógeno de la placenta, anterioresinmunoensayos de la hormona delcrecimiento arrojaban a menudo valoreserróneamente altos en mujeres gestantesy en periodo de lactancia.

Puesto que no todos los individuosacromegálicos tienen niveles de baseelevados, los análisis de supresión


basados en carga de glucosa resultanvaliosos en este contexto. A pesar de lahiperglucemia inducida, en la acromegaliararamente se produce un descenso de losniveles de base.2

Los individuos con déficit de hormona delcrecimiento tienen niveles, en ayunas ydescanso, similares a los de los individuossanos. Se han ideado varios análisis decarga para diferenciar estos grupos. Así,al iniciarse el sueño profundo o biendespués de 15 a 20 minutos de ejerciciovigoroso, los niveles de hormona delcrecimiento suelen mostrar un aumento.Otros análisis de sensibilidad a hormonadel crecimiento se basan en laadministración de L-dopa, arginina einsulina. Para acentuar la respuesta seadministra a veces propanolol o estrógenojunto con el estímulo primario.4,5

Se han documentado algunos casos deenanismo en los que tanto el nivel basalcomo la respuesta a análisis de cargaeran normales. En tales casos suele darseuna insensibilidad tisular a la hormona delcrecimiento o a las somatomedinas, obien la presencia de anticuerpos o dehormona del crecimiento inmunorreactivapero biológicamente inactiva.4

Principio del análisisIMMULITE/IMMULITE 1000 Hormona deCrecimiento es un ensayo inmunométricoquimioluminiscente de dos sitios de uniónen fase sólida.

La fase sólida (bola) se encuentrarecubierta con anticuerpo monoclonal deratón anti hGH. El reactivo contienefosfatasa alcalina (de intestino de ternera)conjugados con un anticuerpo policlonalde conejo anti-hGH. El reactivo y la hGHde la muestra son incubados junto conuna bola recubierta con anticuerpomonoclonal de ratón anti-hGH para formarun complejo de anticuerpos tipo sandwich.El conjugado con enzima no unido esentonces eliminado mediante lavado ycentrifugación. Finalmente, es añadido elsustrato quimioluminiscente a la bola y laseñal es generada de maneraproporcional a la cantidad de enzimaunida.Ciclos de incubación: 1 × 30 minutos.

Recogida de la muestraEl paciente debe estar descansado y enayunas 30 minutos antes de la toma de lamuestra.6,7

Se recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.

Las muestras hemolizadas podrían indicaruna mala manipulación de la muestraantes de ser recibida por el laboratorio; eneste caso, los resultados debeninterpretarse con precaución.Ictericas o ampliamente contaminadaspueden dar resultados erróneos.La centrifugacion de las muestras desuero antes de que se forme el coagulopuede ocasionar la presencia de fibrina.Para evitar resultados erroneos debidos ala presencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coagulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulacion.Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El Hormona deCrecimiento IMMULITE/IMMULITE 1000no ha sido analizado con todos losdistintos tipos de tubos. Para obtenerdetalles sobre los tipos tubos que se hananalizado, consulte la sección de Tipos deMuestras Alternativos.Volumen Requerido: 50 µl suero. (Elrecipiente de la muestre debe contener,como mínimo, 100 µl más que el volumentotal requerido).Conservación: Refrigerarinmediatamente. Estable a 2–8°C durante8 horas,6,7 o hasta 2 meses (alicuotados)a –20°C.

Advertencias y PrecaucionesPara uso diagnóstico in vitro.Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo con las normas aplicables.Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como si


fueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.Se ha usado Azida sodica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dl,como conservante. Para su eliminacion,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitucion de residuos deazidas metalicas, potencialmenteexplosivas, en las cañerías de cobre yplomo.Sustrato quimioluminiscente: evite lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto.)Agua: Use agua destilada o desionizada.

Materiales SuministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas de código debarras son necesarias para el ensayo.

Unidades de análisis de GH (LGH1)Cada unidad etiquetada con código debarras contiene una bola recubierta deanticuerpos monoclonales murinos anti-hGH. Estable a 2–8°C hasta la fecha decaducidad.LKGH1: 100 unidades.LKGH5: 500 unidades.Espere a que las bolsas de las unidadesde análisis alcancen la temperaturaambiente antes de abrirlas. Ábralascortando por el extremo superior, dejandoel borde del cierre de cremallera intacto.Vuelva a cerrar las bolsasherméticamente para protegerlas de lahumedad.

Vial de reactivo de GH (LGH2)Con códigos de barras. 7,5 ml fosfatasaalcalina (de intestino de ternera)conjugada con anticuerpo policlonal deconejo anti-hGH en solución tampón, conconservante. Estable a 2–8°C hasta lafecha de caducidad. Guardar tapado yrefrigerado: estable a 2–8°C hasta lafecha de caducidad. Se recomiendautilizarlo antes de que pasen 30 díasdespués de abrirlo cuando se guardasegún lo indicado.LKGH1: 1 vial. LKGH5: 5 viales.

Ajustadores de GH (LGHL, LGHH)Dos viales (bajo y alto) de hormona decrecimiento hGH liofilizada en suero nohumana, con conservante. Reconstituyacada vial con 3,0 ml de agua destilada odesionizada. Mezcle por agitación oinversión suave hasta que se hayadisuelto completamente el materialliofilizado. Estable a 2–8°C durante30 días después de la reconstitución, ohasta 6 meses (alicuotados) a –20°C.LKGH1: 1 juego. LKGH5: 2 juegos.

Componentes del kit que sesuministran por separado

Diluyente de GH (LGHZ)Para la dilución manual de las muestrasde los pacientes. Un vial que contiene25 ml de suero no humana procesado,con conservante. Estable a 2–8°C durante30 días después de abrirlo, o hasta6 meses (alicuotados) a –20°C.LSUBX: Sustrato quimioluminiscenteLPWS2: Lavado de sondaLKPM: Kit de limpieza de sondaLCHx-y: Soportes de recipientes demuestras (con códigos de barras)LSCP: Recipientes de muestras(desechables)LSCC: Tapas para los recipientes demuestras (opcionales)CON6: control multiconstituyente de tresnivelesTambién necesarioPipetas de transferencia de muestras;agua destilada o desionizada; controles.

EnsayoAviso: para obtener el funcionamientoóptimo, es importante realizar todos losprocedimientos del mantenimiento generalsegún lo definido en el manual deloperador de IMMULITE o IMMULITE1000.Ver el Manual del Operador delIMMULITE o IMMULITE 1000 para:preparación, procesamiento, ajuste,procedimientos de ensayo y control decalidad.

Inspeccionar visulamente cada unidad derección para asegurarse de que hay unabola antes de introducirla en el Sistema.Intervalo de ajuste recomendado:2 semanas.


Muestras de Control de Calidad: Utilizarcontroles o pooles de sueros con almenos dos niveles diferentes de hormonade crecimiento (bajo y alto).

Valores EsperadosUn estudio realizado en un laboratoriogrande de referencia en el occidente delos Estados Unidos en 59 hombresadultos sanos y 60 mujeres adultas sanasrindio los siguientes intervalos dereferencia:

Hombres: hasta 1 ng/mlMujeres: hasta 10 ng/ml

La secreción de hormona del crecimientopor parte de la glándula pituitaria esepisódica y pulsátil, y se han observadoniveles transitorios de hasta 40 ng/ml ensujetos sanos. Dado que en los individuossanos los niveles en suero son bastantebajos entre pulsos, son necesariosinmunoensayos con sensibilidadsuficiente para distinguir entre pacientescon niveles anormalmente bajos ypaciente cuyos niveles caen en elintervalo de bajo a normal. Por lo tanto,los niveles basales o aleatorios de hGHofrecen poca información de diagnóstico.En algunos individuos, la secreciónespontánea de hormona del crecimientose controla mejor por medio de unabomba de extracción continua, o bienextrayendo muestras para el ensayo hGHcada 20 a 30 minutos, durante un periodode 12 a 24 horas. También se utilizan unaserie de análisis de activación, diseñadospara estimular o suprimir la producción, enla valoración de la secreción de hormonadel crecimiento; la definición de lasrespuestas anormales varía con ellaboratorio.1

Estos límites han de considerarse sólocomo una guía. Cada Laboratorio deberáestablecer sus propios rangos dereferencia.

LimitacionesLos pacientes que se encuentran bajotratamiento con hGH pueden desarrollaranticuerpos anti-hGH que interferirán en elensayo y causarán valores falsamentebajos.

Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes del

ensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características AnalíticasPara ver resultados representativos de lascualidades del ensayo ver las tablas y losgráficos. Los resultados se expresanen ng/ml. (A no ser que se indique locontrario, todos los resultados fuerongenerados en muestras de suerorecogidas en tubos sin geles oactivadores de la coagulación).

Por favor, observe que a partir de lasversiones de software 4.13 (IMMULITE)y 5.7b (IMMULITE 1000), las unidadesalternativas aparecen en términos del 2ºIS (Estándar internacional) de la OMSNIBSC 98/574 para la Hormona deCrecimiento r-DNA, con un factor deconversión de 2,4 (ng/ml × 2,4 → mIU/l).Para versiones anteriores de software, lasunidades alternativas aparecen entérminos del 1º IS de la OMS NIBSC80/505, con un factor de conversión de2,6.Si el usuario vuelve a imprimrresultados generados en versionesanteriores de software, los resultadosse expresarán en términos del 2ª IS dela OMS NIBSC 98/574 para Hormona deCrecimiento r-DNA.Factor de Conversión:ng/ml × 2,6 → mIU/l WHO 1º IS 80/505ng/ml × 2,4 → mIU/l WHO 2º IS 98/574Rango de Calibración: Hasta 40 ng/ml(Hasta 104 mIU/l, WHO 1º IS 80/505)(Hasta 96 mIU/l, WHO 2º IS 98/574)


Sensibilidad: 0,01 ng/ml (0,026 mIU/l).Efecto de gancho a altas dosis:Ninguno hasta 17 000 ng/ml.

Precisión intraensayo (dentro de unatanda): Se han calculado datosestadísticos para las muestras a partir delos resultados de 20 replicados en unasola tanda. (Ver la tabla de "IntraassayPrecision").Precisión entre ensayos (de una tandaa otra): Se han calculado datosestadísticos para las muestras analizadasen 11 tomas distintas. (Ver la tabla de“Interassay Precision”).Linealidad: Las muestras fueronanalizadas en varias diluciones. (Ver latabla de “Linearity” para resultadosrepresentativos.)Recuperación: Se analizaron muestrassobrecargadas 1 en 19 con tressoluciones de hGH (115, 230 y476 ng/ml). (Ver la tabla de “Recovery”para resultados representativos.)

Especificidad: El anticuerpo utiliazdo enla técnica IMMULITE Hormona deCrecimiento es altamente específico parahGH, presentando muy poca reaccióncruzada con otras hormonas presentes encondiciones normales. (Ver la tabla"Specificity").Una segunda, y más pequeña forma dehormona de creciimiento(aproximadamente de 20 000 daltons)constituye el 15% de la hormona decrecimiento total de la pituitaria humana.Esta forma presenta la actividad inductoradel crecimiento, pero carece de laactividad análoga de insulina de lamolécula de 22 000 daltons. La forma de20 kDa ha sido evaluada con el kit deIMMULITE Hormona de Crecimiento,encontrando una reactividad cruzada del63%.Bilirrubina: La presencia de bilirrubina,en concentraciones hasta 100 mg/l, notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión. Niveles de200 mg/l interfieren con el ensayo,causando una ligera disminución de losresultados (Ver la tabla de “Bilirubin”).Hemolisis: La presencia de eritrocitoshasta concentraciones de 30 µl/ml notiene efecto en los resultados, en loconcerniente a la precisión del ensayo.

Tipo de Muestra Alternativa: paraevaluar el efecto de los diferentes tipos demuestras alternativos, se recogió sangrede 15 voluntarios en tubos normales,tubos con Heparina, y tubos vacutainerSST® de Becton Dickinson. Volúmenesiguales de las diferentes muestras fueronsobrecargadas con diferentesconcentraciones de hGH, con la finalidadde cubrir todo el rango de calibración delensayo, y procesadas con elprocedimiento Hormona de CrecimientoIMMULITE.(Heparina) = 0,99 (Suero) – 0,55 ng/mlr = 0,982

(SST) = 0,92 (tubos simples) + 2,3 ng/mlr = 0,975

Medias:26,1 ng/ml (Heparina)25,8 ng/ml (Suero)26,0 ng/ml (SST)

Comparación del Método: El ensayo seha comparado con un radioinmunoensayo(Kit A) sobre 84 muestras. (Rango deConcentración: aproximadamente 0,04 a27 ng/ml. Ver el gráfico.) Por regresiónlinear:(IML) = 0,92 (Kit A) + 0,47 ng/mlr = 0,937

Medias:6,0 ng/mL (IMMULITE)6,0 ng/mL (Kit A)

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Français

IMMULITE hGHDomaine d'utilisation Dosage quantitatifde l'hormone de croissance humaine(hGH) dans le sérum. Réservé à un usagediagnostic in vitro avec les analyseursIMMULITE et IMMULITE 1000, ce testconstitue une aide pour la prise en chargethérapeutique du patient.Référence catalogue : LKGH1 (100 tests),LKGH5 (500 tests)Code produit : GH couleur : gris clair.


IntroductionL'hormone de croissance humaine (hGH)est un polypeptide produit parl'antéhypophyse. Elle compte 191 acidesaminés pour une masse moléculaire de22 000 daltons environ. Ses effetsmétaboliques sont essentiellementanabolisants. Elle favorise la conservationdes protéines et stimule un vasteensemble de mécanismes de labiosynthèse des protéines. Elle stimuleégalement le transport du glucose etfacilite l'accumulation de réserves deglycogène. Une autre famille d'hormonespeptidiques, les somatomédines, médie lacascade des actions stimulant lacroissance.1

Le dosage de l'hGH présente surtout unintérêt pour le diagnostic et le traitementde différentes formes de sécrétionpathologiques de l'hormone decroissance. Les manifestations cliniquesd'hyposécrétion comprennent le nanismeet un développement incomplet.L'hypersécrétion est associée augigantisme et à l'acromégalie.

L'interprétation clinique des tauxd'hormone de croissance est délicate. Eneffet, ils présentent une variation diurnequi rend difficile la définition d'un intervallede référence ou l'appréciation du statutd'un individu à partir de dosages uniques.De nombreux facteurs sont connus pourinfluencer le rythme de sécrétion del'hormone de croissance, parmi lesquelsles périodes de sommeil et d'éveil,l'activité physique, le stress,l'hypoglycémie, les œstrogènes, lescorticostéroïdes, la L-dopa et d'autresencore.1 En raison de sa similitude avec laprolactine et l'hormone lactogèneplacentaire, les premiers immunodosagesde l'hGH étaient souvent entachés devaleurs faussement élevées pour lesfemmes enceintes ou les femmes quiallaitaient.

Etant donné que les individusacromégales n'ont pas tous des taux debase élevés, une épreuve de freinagebasée sur une charge de glucose est utiledans ce contexte. En dépit de cettehyperglycémie provoquée, on noterarement une diminution des taux de baseinitiaux dans l'acromégalie.2

Les individus qui présentent uneinsuffisance en hormone de croissance

ont des taux à jeun/ au repos similaires àceux des individus en bonne santé. Desépreuves de confrontation variées ont étémises au point pour différencier cesgroupes. Ainsi, avec la venue du sommeilprofond ou après 15 à 20 minutesd'exercice physique vigoureux, les tauxd'hormone de croissance enregistrentnormalement une élévation. D'autres testsde la réactivité à l'hormone de croissancesont basés sur l'administration de L-dopa,d'arginine ou d'insuline. Le propanolol oul'œstrogène sont parfois administrés enassociation avec le stimulus principal pouraccentuer la réponse.4,5

On a recensé un petit nombre de cas denanisme pour lesquels les niveaux debase, comme la réponse aux épreuves destimulation étaient normaux. De tels caspeuvent venir soit d'une insensibilitétissulaire à l'hormone de croissance ouaux somatomédines, soit de la présenced'anticorps ou d'hormone de croissanceimmunoréactive mais biologiquementinactive.4

Principe du testIMMULITE/IMMULITE 1000 Hormone deCroissance est un dosagechimiluminescent immunométrique, endeux étapes, en phase solide.

La phase solide (bille) est revêtued’anticorps monoclonal murin anti-hGH.Le réactif contient un anticorps polyclonalde lapin anti-hGH conjugué à laphosphatase alcaline (intestins de veau).Le réactif et l’hGH contenue dansl’échantillon du patient sont incubésensemble avec une bille revêtued’anticorps monoclonaux murins anti-hGHpour former un complexe anticorps-sandwich. Le conjugué enzymatique nonlié est ensuite éliminé par un lavage aveccentrifugation axiale. Enfin, le substratchimiluminescent est ajouté à la bille et lesignal généré est proportionnel à l’enzymeliée.Cycles d'incubation : 1 × 30 minutes.

Recueil des échantillonsLe patient doit être à jeun et au reposcomplet pendant 30 minutes avant leprélèvement sanguin.6,7


Il est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.Des échantillons hémolysés peuvent êtrerévélateurs d'une préparation inadéquatedu prélèvement avant son envoi aulaboratoire ; il faudra donc interpréter lesrésultats avec prudence.Ictériques ou fortement contaminéspeuvent donner des résultats érronés.

La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.

Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret Hormone de croissanceIMMULITE/IMMULITE 1000 n'a pas ététesté sur tous les types de tubespossibles. Veuillez consulter le chapitreintitulé Autres Types d'Échantillons pourplus de renseignements sur les tubes quiont été évalués.

Volume nécessaire : 50 µl sérum.L'unité-échantillon doit contenir au moins100 µl de plus que le volume totalnécessaire.Conservation : Réfrigérer immédiatement.Stable à +2°/ +8°C pendant 8 heures,6,7

ou 2 mois (aliquoté) à –20°C.

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.Réactifs : conserver les réactifs à +2/+8 °C. Eliminer les déchets conformémentà la réglementation en vigueur.

Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellementinfectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-

VIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène desurface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l'azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l'élimination,l'évacuer avec de grandes quantités d'eaupour éviter une accumulation d'azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.Substrat chimiluminescent : éviter toutecontamination et l'exposition directe ausoleil. (Voir notice).Eau : utiliser de l'eau distillée oudésionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à l'intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Tests unitaires GH (LGH1)Avec code-barres. Chaque unité-testcontient une bille revêtue d'anticorpsmonoclonal anti-hGH murin. Stable à+2°C/+8°C jusqu'à la date de péremption.LKGH1: 100 unités. LKGH5: 500 unités.Porter les sachets à température ambianteavant leur ouverture pour éviter tout risquede condensation. Lors de la premièreutilisation, ouvrir le sachet avec desciseaux en préservant le dispositif defermeture. Refermer les sachets aprèsouverture pour les protéger de l'humidité.

Cartouche à réactif GH (LGH2)Avec code-barres. Flacon de 7,5 mlcontenant un anticorps polyclonal ovin anti-hGH conjugué à la phosphatase alcalined'intestins de veau, dans un tampon avecconservateur. Conserver bouché etréfrigéré : stable à +2/ +8 °C jusqu'à ladate de péremption. A utiliser depréférence dans les 30 jours qui suiventl'ouverture, si les recommandations destockage sont respectées.LKGH1: 1 cartouche.LKGH5: 5 cartouches.

Ajusteurs GH (LGHL, LGHH)2 flacons d'ajusteurs (« bas » et « haut »)contenant de l'hGH lyophilisée dans dusérum non-humain, avec conservateur.Reconstituer chaque flacon avec 3,0 mld'eau distillée ou désionisée. Mélanger en


imprimant un léger mouvement circulaireou en retournant délicatement jusqu'àcomplète dissolution de la substancelyophilisée. Stable à +2°/ +8 °C pendant30 jours après reconstitution, ou 6 mois(aliquoté) à –20 °C.LKGH1: 1 jeu. LKGH5: 2 jeux.

Composants du coffret fournisséparément

Diluant échantillon GH (LGHZ)Pour la dilution manuelle des échantillonscliniques. Un flacon de 25 ml de sérumnon-humain prétraité, avec conservateur.Stable à +2/ +8 °C pendant 30 jours aprèsouverture, ou 6 mois (aliquoté) à –20 °C.LSUBX : substrat chimiluminescentLPWS2 : solution de lavage de la sondeLKPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLCHx-y : Supports pour unitéséchantillons (avec code-barre)LSCP : unités échantillons (à usageunique)LSCC : Bouchons pour unités échantillons(optionnel)CON6 : Contrôle multiparamétrique à troisniveaux

Egalement requisPipettes pour transfert d'échantillon ; eaudistillée ou désionisée ; contrôles.

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation de l'IMMULITE ou del'IMMULITE 1000.Voir le manuel d'utilisation de l'IMMULITEou de l'IMMULITE 1000 pour lapréparation, le démarrage du système, lesajustements, le dosage et les procéduresde contrôle de qualité.Vérifier visuellement que chaque Unité-Test contient bien une bille avant de lacharger dans l'automate.

Intervalle d'ajustement recommandé :2 semaines.Echantillons pour le contrôle de qualité :Utiliser des contrôles ou des pools desérums avec au moins deux niveaux deconcentration (faible ou élevé) d'hGH.

Valeurs de référenceUne étude réalisée dans un grandlaboratoire de référence de l'ouest desEtats Unis sur 59 hommes et 60 femmesadultes en bonne santé apparente adonné les intervalles de référence ci-après:

Hommes: jusqu'à 1 ng/mlFemmes: jusqu'à 10 ng/ml

La sécrétion d'hormone de croissance parl'hypophyse est pulsatile, et des tauxtranstoires allant jusqu'à 40 ng/ml ont étéobservés chez des individus sains.Comme les taux sont bas entre les picssécrétoires chez les individus sains, lesdosages in vitro doivent avoir unesensibilité suffisante pour permettre dedistinguer les patients avec des tauxanormalement bas des sujets en bonnesanté dont les valeurs peuvent chuterdans la zone subnormale. C'est pourquoiun taux de base d'hCG ou un dosageréalisé aléatoirement ne fournit que peud'information diagnostique. Chez certainspatients, la sécrétion spontanéed'hormone de croissance est mieux suivieà l'aide d'un système de prélèvement encontinu ou en prélevant des échantillonspour le dosage de l'hGH toutes les 20 à30 minutes, sur une période de 12 à 24 h.Certaines épreuves de provocationdestinées à stimuler ou à supprimer lalibération d'hormone sont égalementemployées pour évaluer la sécrétiond'hormone de croissance ; la définition dece qui constitue une réponse anormalevariant selon les laboratoires.1

Utiliser ces valeurs à titre indicatifuniquement. Chaque laboratoire devraitétablir ses propres valeurs de référence.

LimitesLes patients sous traitement par hormonede croissance peuvent développer desanticorps qui interféreront dans le dosageentraînant des résultats faussementabaissés.Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir BoscatoLM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Les échantillons


provenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre des rares sérums rares et lescomposants du test peuvent se produire.Dans un but diagnostique, les résultatsobtenus avec ce dosage doivent toujoursêtre utilisés en association avec unexamen clinique, l'histoire médicale dupatient et d'autres résultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances du test. Les résultats sontdonnés en ng/ml. (En l'absence deprécision supplémentaire, tous lesrésultats ont été obtenus sur deséchantillons sériques prélevés sur tubessans gel, ni activateur de la coagulation).Merci de bien vouloir noter qu'à partir desversions 4.13 du logiciel Immulite et5.7b du logiciel Immulite 1000, l'unitéalternative se réfère au 2ème StandardInternational de l'OMS NIBSC IS 98/574de GH recombinante, et avec un facteurde conversion de 2,4 (ng/ml × 2,4 →mIU/l).Pour les versions antérieures de logiciels,l'unité alternative se réfère au 1er StandardInternational de l'OMS NIBSC IS 80/505avec un facteur de conversion de 2,6.Si vous rééditez des résultats obtenussur une version antérieure du logiciel,les résultats seront exprimés parrapport au 2ème Standard Internationalde l'OMS NIBSC IS 98/574 de GHrecombinante.Facteur de conversion :ng/ml × 2,6 → mUI/l WHO 1er IS 80/505ng/ml × 2,4 → mUI/l WHO 2ème IS 98/574Domaine de mesure: jusqu 'à 40 ng/ml(jusqu 'à 104 mUI/l, WHO 1er IS 80/505)(jusqu 'à 96 mUI/l, WHO 2ème IS 98/574)Sensibilité analytique : 0,01 ng/ml(0,026 mUI/l).Effet-crochet aux doses élevées:aucun jusqu'à 17 000 ng/ml.

Précision intra-essai (au sein d'unemême série) : les statistiques ont étéréalisées sur les résultats de 20 doubletsd'échantillons dosés au cours d'une mêmesérie. (Voir le tableau « IntraassayPrecision ».)Précision inter-essais (entre plusieursséries) : les statistiques ont été réaliséessur des échantillons dosés dans 11 sériesdifférentes. (Voir le tableau « InterassayPrecision ».)Test de dilution : les échantillons ont ététestés avec des taux de dilution variés.(Voir le tableau “ Linearity ” pour desdonnées représentatives.)Test de récupération: les échantillonstestés ont été chargés dans un rapport de1 à 19 avec trois solutions d'hGH (115,230 et 476 ng/ml). (Voir le tableau“ Recovery ” pour des donnéesreprésentatives.)

Spécificité : L'anticorps utilisé dans letest Immulite hGH est hautementspécifique de l'hGH, présentant une faibleréaction-croisée aux autres hormonesprésentes naturellement. (Voir le tableau« Specificity ».)Une seconde forme d'hormone decroissance (approximativement 20 000daltons) représente 15% du total deshormones de croissance présentes dansl'hypophyse humaine. Cette formed'hormone a les mêmes capacités d'aide àla croissance, mais ne présente pasl'activité “insuline like” associée à la formede 22 000 daltons. Les hormones de type20 kDa ont été testées avec le dosageImmulite hGH pour les réactions croiséeset ont présenté une réaction croisée del'ordre de 63%.Bilirubine : La présence de bilirubine neprésente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 100 mg/l.Des concentrations de 200 mg/l interfèrentavec ce dosage, entrainant une légèredépression des valeurs. (Voir le tableau" Bilirubin ".)Hémolyse : La présence d'agrégatd'hématies jusqu'à une concentration de30 µl/ml, n'a aucun effet sur les résultatsquant à la précision du dosage.Autres types d'échantillons: pourestimer l'effet de l'utilisation de différentstype d'échantillons, 15 volontaires ont été


prélevés sur tubes secs, héparinés, et surtubes vacutainer SST® Becton Dickinson.Des volumes égaux de ces différentséchantillons ont été mélangés avecplusieurs concentrations d' hGH pourobtenir des valeurs à l'intérieur dudomaine de mesure du test puis dosésavec le protocole l'IMMULITE Hormone decroissance.(Hépariné) = 0,99 (Sérum) – 0,55 ng/mlr = 0,982

(SST) = 0,92 (tubes ordinaires) + 2,3 ng/mlr = 0,975

Moyennes :26,1 ng/ml (Hépariné)25,8 ng/ml (Sérum)26,0 ng/ml (SST)

Comparaison de méthodes : le test a étécomparé à un dosageimmunoradiométrique (coffret A) sur 84échantillons. (dont les concentrationsallaient d'environ 0,04 à 27 ng/ml. Voirgraphique.) Par régression linéaire :(IML) = 0,92 (Coffret A) + 0,47 ng/mlr = 0,937

Moyennes :6,0 ng/ml (IMMULITE)6,0 ng/ml (Coffret A)

Assistance techniqueEn France distribué par DPC France 90bd National 92257 La Garenne-Colombes.Fabriqué par EURO/DPC Ltd. dans le cadre d'unSystème Qualité enregistré sousISO 13485:2003.

Italiano

hGHUso: Ad uso diagnostico in vitro con gliAnalizzatori IMMULITE ed IMMULITE1000 — per la misurazione quantitativadell'ormone della crescita umana (hGH)nel siero, quale ausilio nella gestione deipazienti.Codice: LKGH1 (100 test), LKGH5 (500test)

Codice del Test: GHColore: Grigio Chiaro

Riassunto e Spiegazione delTestL'ormone della crescita umana (hGH,somatotropina) è un polipeptide che haorigine nell'ipofisi anteriore. E' costituito dauna catena di 191 aminoacidi ed unamassa molecolare di circa 22 000 dalton.Gli effetti metabolici sono principalmenteanabolici. Favorisce la conservazionedelle proteine ed utilizza un vasto range dimeccanismi per la sintesi delle proteine.Migliora anche il trasporto del glucosio efacilita l'accumulo del glicogeno. Un'altrafamiglia di ormoni peptidici, lesomatomedine, media le azioni chefavoriscono la crescita.1

La misurazione dell'hGH è interessanteprincipalmente nella diagnosi e nellaterapia delle varie forme di secrezioneanomala dell'ormone della crescita. Idisturbi clinici legati all'iposecrezioneincludono il nanismo ed il potenziale diaccrescimento non raggiunto.L'ipersecrezione viene associata algigantismo ed all'acromegalia.

Si consiglia di essere prudentinell'interpretazione dei livelli dell'ormonedella crescita. I livelli variano durante ilgiorno, rendendo difficile la definizione diun range di riferimento o lo stato delpaziente sulla base di singoledeterminazioni. E' stato riscontrato chemolti fattori influenzano il tasso disecrezione dell'ormone della crescita,inclusi periodi di sonno e veglia, eserciziofisico, stress, iperglicemia, estrogeni,corticosteroidi, L-dopa, ed altri.1 A causadella sua somiglianza con la prolattina edil lattogeno placentare, i primiimmunodosaggi sull'ormone della crescitahanno prodotto valori erroneamenteelevati in gravidanza ed in donne inallattamento.Poichè non tutti gli individui acromegalicihanno livelli di base elevati, i test disoppressione basati sul carico di glucosiosono importanti in questo contesto.Nonostante l'iperglicemia indotta, è raronell'acromegalia che si riscontri unadiminuzione dai livelli di base.2

Individui con deficienze nell'ormone dellacrescita hanno livelli a digiuno/riposo similiai livelli riscontrati in individui sani. Perquesto motivo, sono stati sviluppati varitest per differenziare questi gruppi. Conl'inizio del sonno profondo o dopo 15–20


minuti di esercizio fisico vigoroso, i livellidell'ormone della crescita presentano unaumento. Altri test per valutare la rispostadell'ormone della crescita sono basatisulla somministrazione di L-dopa, diarginina e di insulina. Propanololo oestrogeni vengono somministrati incombinazione allo stimolo principale peraccentuare la risposta.4,5

Sono stati documentati alcuni casi dinanismo in cui sia il livello di base che larisposta al test sono stati normali. Questicasi possono includere insensibilitàall'ormone della crescita o allesomatomedine, o la presenza di anticorpio dell'ormone della crescitaimmunoreattivo ma biologicamenteinattivo.4

Principio del procedimentoIMMULITE/IMMULITE 1000 Ormone dicrescita è un dosaggio immunometrico infase solida a doppio sito, inchemiluminescenscenza.La fase solida (sferetta) è coattata conanticorpo monoclonale murino anti-hGH. Ilreagente contiene fosfatasi alcalina(intestino di vitello) coniugata conanticorpo policlonale di coniglio anti-hGH.Il reagente e l’hGH sono incubati insiemecon una sferetta coattata con un anticorpomonoclonale murino anti-hGH per formareun complesso. Il coniugato enzimatico nonlegato è quindi rimosso attraverso unlavaggio a centrifuga. Infine, il substratochemiluminescente viene aggiunto allasferetta e viene prodotto un segnale inproporzione all’enzima legato.Cicli d'incubazione: 1 × 30 minuti.

Raccolta del CampioneIl paziente deve essere a digiuno ecompletamente a riposo 30 minuti primadel prelievo. 6,7

Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.I campioni emolizzati posson indicare iltrattamento non idoneo del campioneprima dell'arrivo al laboratorio; per questomotivo, i risultati devono essereinterpretati con prudenza.

Itterici o grossolamente contaminatipossono produrre risultati errati.

La centrifugazione dei campioni di sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli di pazientisottoposti a terapia con anticoagulanti,possono richiedere tempi di coagulazionepiù lunghi.

Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE/IMMULITE 1000 Ormone dicrescita non é stato verificato con tutte lepossibili variazioni di tipi di provette.Consultare la sezione riguardanteCampioni Alternativi per dettagli sulleprovette testate.

Volume richiesto: 50 µL di siero.(Il Porta Campioni deve contenere almeno100 µL più del volume totale richiesto).Conservazione: Conservare in frigoriferoimmediatamente. Stabile a 2–8°C per8 ore,6,7 o per 2 mesi (aliquotato) a–20°C.

Avvertenze e PrecauzioniAd uso diagnostico in vitro.Reagenti: Conservare i reagenti a 2–8°C.Eliminare in conformità alle leggi vigenti.

Seguire le precauzioni generali emanipolare tutti i componenti come sefossero potenzialmente infetti. I materialiderivati dal sangue umano sono statitestati con esito negativo per la sifilide, glianticorpi anti-HIV 1 e 2, l'Antigene diSuperficie dell'Epatite B e gli anticorpiAnti-Epatite C.

E' stata aggiunta Sodio Azide aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acquaper evitare la formazione di azidimetalliche potenzialmente esplosive nelletubature di piombo e di rame.

Substrato Chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucesolare diretta. (Vedi metodica.)Acqua: Utilizzare solo acqua distillata odeionizzata.


Materiali FornitiI componenti sono un gruppo accoppiato.Le etichette del codice a barra sononecessarie per la prova.

Test Unit GH (LGH1)Ogni test unit con codice a barra contieneuna test unit coattata con un anticorpomonoclonale murino anti-hGH. Stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza.LKGH1: 100 unit. LKGH5: 500 unit.

Le buste delle test unit devono essere atemperatura ambientale prima di aprire.Aprire tagliando lungo il bordo superiore,lasciando intatto la chiusura ermetica.Risigillare le buste per proteggere controumidità.

Porta Reagente GH (LGH2)Con codice a barre. 7,5 mL di fosfatasialcalina (intestino di vitello) coniugata conun anticorpo coniglio policlonale anti-hGHin un tampone, con conservanti.Conservare chiuso nel frigorifero: stabile a2–8°C fino alla data di scadenza. Siconsiglia di utilizzare il prodotto entro 30giorni dall'apertura se viene conservatonella maniera indicata.LKGH1: 1 Porta Reagente.LKGH5: 5 Porta Reagenti.

Aggiustatori GH (LGHL, LGHH)Due flaconi (Basso ed Alto), ciascuno conhGH liofilo in siero non umano, conconservanti. Ricostituire ogni flacone con3,0 mL di acqua distillata o deionizzata.Mescolare agitando delicatamente oinvertendo la miscela finchè il materialeliofilo sia completamente dissolto. Stabilea 2–8°C per 30 giorni dopo laricostituzione, o per 6 mesi (aliquotato) a–20°C.LKGH1: 1 set. LKGH5: 2 set.

Componenti del kit fornitiseparatamente

Diluente dell'hGH (LGHZ)Per la diluizione manuale dei campioni deipazienti. Un flacone contenente 25 mL disiero non umano processato, conconservanti. Stabile a 2–8°C per 30 giornidopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotato) a–20°C.

LSUBX: Substrato ChemiluminescenteLPWS2: Tampone di lavaggio dell'Ago

LKPM: Kit di Pulizia dell'AgoLCHx-y: Tubi porta campioni (con codicea barre)LSCP: Porta Campioni (monouso)LSCC: Coperchi per Porta Campioni(opzionali)CON6: 3 livelli, controllo multicostituitoMateriali richiestiPipette per la dispensazione dei campioni;acqua distillata o deionizzata; controlli.

Procedura del DosaggioAttenzione: per avere prestazioni ottimali,è importante effettuare le procedure dimanutenzione di routine cosiccomedefinito nel Manuale dell'Operatoredell'IMMULITE o IMMULITE 1000.

Vedi il Manuale dell'Operatore IMMULITEo IMMULITE 1000 per: preparazione,setup, calibrazione, dosaggio e controllodi qualità.

Controllate ogni test unit verificando lapresenza della sferetta prima di caricarlasullo strumento.Intervallo di Calibrazione Consigliato:2 settimane.

Controllo di Qualità: Utilizzare controlli opool di sieri con almeno due livelli (alto ebasso) di hGH.

I valori attesiUno studio effettuato presso un grossolaboratorio nell'ovest degli Stati Uniti su 59adulti maschi sani e 60 femmine adultesane ha prodotto i seguenti intervalli diriferimento:

Maschi: fino a 1 ng/mLFemmine: fino a 10 ng/mL

La secrezione dell'ormone della crescitada parte dell'ipofisi è episodica e adintermittenza e sono stati osservati livellitransittori fino a 40 ng/mL in soggetti sani.Poichè i livelli nel siero sono piuttostobassi tra un rilascio e l'altro in individuisani, sono necessari immunodosaggi consensibilità sufficiente per distinguere trapazienti con valori anormalmente bassi esoggetti sani con valori che rientrano nellarange basso – normale. Per questomotivo, livelli di base o random di hGHforniscono poche informazionidiagnostiche. In alcuni individui, lasecrezione spontanea dell'ormone della


crescita viene controllata mediantel'utilizzo di una pompa di prelievo incontinuo, o prelevando i campioni per ildosaggio dell' hGH ogni 20 – 30 minuti inun periodo da 12 a 24 ore. Vengonoutilizzati anche alcuni dosaggi atti astimolare o a sopprimere il rilasciodell'hGH per monitorare la secrezionedell'ormone della crescita.; la definizionedelle risposte anomale varia a secondadel laboratorio.1

Considerare questi limiti soltanto comelinee guida. Ogni laboratorio dovrebbestabilire le proprie gamme di riferimento.

LimitiPazienti sottoposti a terapia con hGHpotrebbero sviluppare anticorpi anti-hGHche interferiscono con il dosaggiocausando risultati falsamente bassi.Gli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nellecomponenti del dosaggio provocandoun'interferenza con i dosaggi in vitro. [VediBoscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenutida questo dosaggio devono sempreessere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.

Prestazioni del DosaggioVedere le tabelle e le grafiche per i datirappresentativi delle prestazioni dellaprova. I risultati sono espressi in ng/mL.(Se non è notato altrimenti, tutti i risultatisono stati generati nei campioni di sieroraccolti in tubi senza barriere di gelatina oadditivi che promuovono la coagulazione.)

Attenzione a partire dalle versionisoftware 4.13 (IMMULITE) e 5.7b(IMMULITE 1000), le unità alternativesono in termini di WHO NIBSC 2°

Standard Internazionale 98/574 per l'r-

DNA Ormone della Crescita, con unfattore di conversione di 2,4 (ng/mL × 2,4→ mIU/L).Per quanto riguarda le versioni precedentidel software, le unità alternative sono intermini di WHO NIBSC 1° StandardInternazionale 80/505, con un fattore diconversione di 2,6.i risultati ristampati, generati suversioni precedenti del softwaresaranno espressi in termini di WHONIBSC 2° Standard Internazionale98/574 per l'r-DNA Ormone dellaCrescita.Fattore di Conversione:ng/mL × 2,6 → mIU/L WHO 1° IS 80/505ng/mL × 2,4 → mIU/L WHO 2° IS 98/574Range di calibrazione: Fino a 40 ng/mL(Fino a 104 mIU/L, WHO 1° IS 80/505)(Fino a 96 mIU/L, WHO 2° IS 98/574)Sensibilità analitica: 0,01 ng/mL(0,026 mIU/L).Effetto Gancio per Dosi Elevate:Nessuno fino a 17 000 ng/mL.

Precisione intraprove (Entro la stessaesecuzione): Sono state calcolatestatistiche per campioni dai risultati di 20ripetizioni in un'esecuzione unica (Vederela tabella “Intraassay Precision”).Precisione interprove (Daun'esecuzione all'altra): Sono statecalcolate statistiche per campioni dairisultati di 11 esecuzioni diverse (Vederela tabella “Interassay Precision”).Linearità: I campioni sono stati provatisotto varie diluzioni (Vedere la tabella“Linearity” per i dati rappresentativi).Ricupero: Sono stati analizzati i campionietichettati da 1 a 19 con tre soluzioni dihGH (115, 230 e 476 ng/mL. (Vedere latabella “Recovery” per i datirappresentativi).Specificità: L'anticorpo utilizzato neldosaggio IMMULITE Ormone di crescita èaltamente specifico per l'hGH con unabassa crossreattività verso altri ormonipresenti in natura. (Vedi la tabella"Specificity")

Una seconda forma più piccola di ormonedella crescita (approssimativamente20 000 dalton) costituisce il 15% del totaledell'ormone della crescita contenutonell'ipofisi umana. Questa forma presenta


la normale funzione di promozione dellacrescita, ma manca dell'attività insulina-simile associata alla forma da 22 000dalton. E' stata testata la crossreattivitànella forma da 20 kDa all'interno deldosaggio IMMULITE Ormone di crescita,la stessa è stata riscontrata essere del63%.

Bilirubina: La presenza di bilirubina inconcentrazioni fino a 100 mg/L non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio. Livelli di200 mg/L interferiscono con il dosaggio,causando un leggero decremento deivalori. (Vedi la tabella “Bilirubin”).Emolisi: La presenza di globuli rossiimpaccati in concentrazioni fino a30 µL/mL non ha effetto sui risultati entro ilrange di precisione del dosaggio.Tipo di Campione Alternativo: Perdeterminare l'effetto di campionialternativi, è stato prelevato del sangue da15 volontari in provette semplici,eparinizzate, e Becton Dickinsonvacutainer SST®. Ad ugual volumi dicampioni misti sono state aggiunte varieconcentrazioni di hGH per ottenere valorilungo l'intero range di calibrazione deldosaggio e quindi dosati con il kitIMMULITE Ormone di crescita.(Eparina) = 0,99 (siero) – 0,55 ng/mLr = 0,982

(SST) = 0,92 (tubi semplici) + 2,3 ng/mLr = 0,975

Valore medio:26,1 ng/mL (Eparina)25,8 ng/mL (siero)26,0 ng/mL (SST)

Confronto di Metodi: il dosaggio è statocomparato ad un dosaggioimmunoradioimetrico (Kit A) in 84campioni dei pazienti. (Range diconcentrazione: da 0,04 fino a 27 ng/mL.Vedi grafico.) Con regressione lineare:(IML) = 0,92 (Kit A) + 0,47 ng/mLr = 0,937

Valore medio:6,0 ng/mL (IMMULITE)6,0 ng/mL (Kit A)

Assistenza TecnicaAll'estero: Si prega di contattare il proprioDistributore DPC Nazionale.Prodotto dalla EURO/DPC Ltd. nell'ambito di unSistema di Qualità Certificato ISO 13485:2003.

Português

Hormona de CrescimentoUtilização: Para uso diagnóstico in vitronos analisadores IMMULITE e IMMULITE1000 — para o doseamento quantitativoda hormona de crescimento humano(hGH) em soro, como auxiliar no controlodo doente.Números de catálogo: LKGH1 (100testes), LKGH5 (500 testes)Código do teste: GH. Cor: Cinzento claro

Sumário e explicação do testeA hormona de crescimento humano (hGH,somatotrofina) é um polipeptídeooriginado na pituitária anterior. Tem 191aminoácidos de comprimento e tem umpeso molecular de aproximadamente22 000 daltons. Os seus efeitosmetabólicos são principalmenteanabólicos. Promovem a conservação daproteína e envolvem uma vasta gama demecanismos para síntese de proteína.Também aumenta o transporte de glucosee facilita o armazenamento de glicogénio.Uma outra família de hormonaspeptídicas, as somatomedinas sãoresponsáveis pela mediação da suasequência de acções que promovem ocrescimento.1

A medição de hGH é principalmente deinteresse no diagnóstico do tratamento devárias formas de secreção inapropriadade hormonas do crescimento. Asdesordens clínicas de hiposecreçãoincluem nanismo e crescimento potencialnão obtido. A hipersecreção é associadacom o gigantismo e a acromegalia.

Deve-se ter cuidado na interpretaçãoclínica de níveis de hormonas docrescimento. Estes variam durante todo odia, dificultando a definição duma faixa dereferência ou a avaliação do estado deum indivíduo baseado numa únicadeterminação. Muitos factores sãoconhecidos na influência da taxa desecreção da hormona do crescimento,incluindo períodos de sono e estado dealerta, exercício, stress, hipoglicémia,estrogénios, corticosteróides, L-dopa eoutros.1 Devido à sua semelhança com aprolactina e lactogénio placental,


imunodoseamentos mais antigos dahormona do crescimento apresentavamem geral valores falsamente altos nasmulheres em fase de lactação e grávidas.Como nem todos os indivíduosacromegálicos possuem níveis basaiselevados, os testes de supressãobaseados na carga de glucose sãovaliosos neste contexto. Apesar dahiperglicémia induzida, existe raramenteuma redução dos níveis de linha base naacromegalia.2

Indivíduos com deficiência de hormona decrescimento possuem níveis dejejum/repouso semelhantes aosencontrados em indivíduos saudáveis.Vários testes de provocação têm sidoconcebidos para avaliar a reacçãodurante o período de sono profundo oudentro de 15 a 20 minutos após exercíciofísico enérgico, os níveis de hormona docrescimento apresentam normalmente umaumento.

Outros testes de resposta da hormona decrescimento estão baseados naadministração de L-dopa, arginina einsulina. Propanolol ou estrogénio sãomuitas vezes administrados em conjuntocom o estímulo primário para acentuar aresposta.4,5

Um pequeno número de casos denanismo tem sido documentado nos quaiso nível basal e a resposta ao teste deprovocação foram normais. Tais casospodem envolver não sensibilidade dotecido ou à hormona de crescimento ou asomatomedinas, ou à presença deanticorpos ou hormonas do crescimentoimunoreactivas porém inactivasbiologicamente.4

Princípio do ProcedimentoA Hormona de CrescimentoIMMULITE/IMMULITE 1000 é um ensaioimunométrico em fase sólida de doisciclos, quimioluminescente.A fase sólida (esfera ) é revestida comanticorpo monoclonal murino anti-hGH. Oreagente contem fosfatase alcalina (deintestino de vitela) conjugado a umanticorpo policlonal de coelho anti-hGH. Oreagente e a hGH na amostra sãoincubados juntamente com a esferarevestida com um anticorpo monoclonalmurino anti hGH de modo a formar um

complexo sandwich/anticorpo. Oconjugado de enzima não ligado é entãoremovido por lavagem centrifuga.Finalmente é adicionado substratoquimioluminescente á esfera gerando umsinal proporcional á enzima ligada.Ciclos de incubação: 1 × 30 minutos.

ColheitaO doente deve estar em jejum e emrepouso 30 minutos antes da colheita dosangue.6,7

Recomenda-se o uso de uma ultracentrífuga para clarear amostraslipémicas.Amostras hemolisadas podem indicartratamento incorrecto de uma amostraantes do envio para o laboratório; portantoos resultados devem ser interpretadoscom cuidado.Ictéricas ou totalmente contaminadaspodem causar resultados errados.

A centrifugação de amostras de soroantes da formação completa do coágulopode resultar na presença de fibrina. Paraprevenir resultados errados devido àpresença de fibrina, certifique-se que aformação do coágulo foi completa antesda centrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentes querecebem terapia anticoagulante podemrequerer um maior tempo de formação docoágulo.Os tubos para colheita sanguínea dediferentes fabricantes, podem originardiferentes valores, dependendo dosmateriais e aditivos, incluíndo gel oubarreiras fisicas, activadores do coáguloe/ou anti coagulantes. IMMULITE /IMMULITE 1000 Hormona deCrescimento não foram ainda testadoscom todas as possiveis variaçõesoriginadas pelos tipos de tubos. Consultara secção Tipos de Amostras Alternativaspara obter detalhes sobre os tubos queforam testados.

Volume de amostra: 50 µL soro.(A cuvete de amostra deve conter ummínimo de100 µL a mais que o volumetotal exigido.)

Estabilidade: Refrigerar imediatamente.Estável durante 8 horas a 2–8°C,6,7 ou por2 meses (aliquotado) a –20°C.


PrecauçõesPara uso de diagnóstico in vitro.Reagentes: Manter a 2–8°C. Elimine deacordo com as leis aplicáveis.

Manipule com as devidas precauçõestodos os materiais capazes de transmitirdoenças infecciosas. As matérias primas,obtidas de soro humano, foram testadas,revelando resultados negativos para asífilis, para os anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;para o antigénio de superfície da hepatiteB (HBsAg) e para os anticorpos do vírusda hepatite C.Azida de sódio foi adicionada comoconservante; para evitar acumulações deazidas metálicas explosivas emcanalizações de cobre e alumínio, osreagentes devem ser rejeitados no esgotoapenas se estiverem diluídos e foremlavados com grandes volumes de água.Substrato quimioluminescente: Evitecontaminação e exposição à luz directa(ver bula do substrato).Água: Use água destilada ou deionizada.

Materiais fornecidosOs componentes formam um conjunto unoe indivisível. As etiquetas no interior dascaixas são necessárias para o ensaio.

Unidades de Teste de GH (LGH1)Cada unidade rotulada com código debarras contém uma esfera revestida comanticorpo monoclonal de murino anti-hGH.Estável até a data de validade a 2–8°C.LKGH1: 100 unidades.LKGH5: 500 unidades.

Antes de abrir as saquetas com Unidadesde Teste, deixe que estas atinjam atemperatura ambiente. Corte as saquetaspela borda superior, mantendo o fechointacto. Feche novamente as saquetaspara proteger contra a humidade.

Embalagem de reagentes de GH (LGH2)Com código de barras. Contém 7,5 mL defosfatase alcalina (intestino de bezerro)conjugada com anticorpo policlonal decoelho anti-hGH tamponada, comconservante. Armazene tapado erefrigerado: Estável até à data de validadea 2–8°C. Recomenda-se a utilização até30 dias após aberto quando armazenado

de acordo com as indicações.LKGH1: 1 embalagem.LKGH5: 5 embalagens.

Ajustes GH (LGHL, LGHH)Dois frascos (alto e baixo) de hGHliofilizado em soro de origem não humana,com conservante. Reconstitua cada frascocom 3,0 mL de água destilada oudesionizada. Misture por inversão oumovimentos lentos até o materialliofilizado dissolver completamente.Estável, após a reconstituição, durante30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses(aliquotado) a –20°C.LKGH1: 1 conjunto. LKGH5: 2 conjuntos.

Componentes do kit fornecidosseparadamente

Diluente de amostra para GH (LGHZ)Para a diluição manual de amostras dedoentes. Um frasco com 25 mL de soro deorigem não humana processado, comconservante. Estável, após a abertura,durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses(aliquotado) a –20°C.LSUBX: Substrato quimioluminiscenteLPWS2: Solução de lavagemLKPM: Dispositivo de limpeza dopipetadorLCHx-y: Contentores de vasos deamostra (com código de barras)LSCP: Tubos de amostra (descartáveis)LSCC: Tampas de tubos de amostra(opcional)

CON6: Controlo multiparamétrico de trêsníveis.Também necessárioPipetas de transferência de amostra; águadestilada ou deionizada; controlos.

Procedimento do doseamentoTêr em atenção que para obter umdesempenho óptimo, é importanteefectuar todos os procedimentos demanutenção de rotina conforme definidono Manual de Operador do IMMULITE ouIMMULITE 1000.Ver o Manual do Operador do IMMULITEou IMMULITE 1000 para: preparação,setup, ajustes, procedimento do ensaio econtrolo de qualidade.


Confirme a presença da esfera em cadaUnidade de Teste antes de a colocar nosistema.Intervalo entre ajustes aconselhável:2 semanas.Amostras de controlo de qualidade:utilize controlos ou "pools" com, pelomenos, dois níveis (alto e baixo) dehormona de crescimento.

Valores de ReferênciaUm estudo executado num grandelaboratório de referência nos EstadosUnidos em 59 homens adultos saudáveise 60 mulheres adultas forneceu osseguintes resultados:

Homens: Até 1 ng/mLMulheres: Até 10 ng/mL

A secreção da hormona de crescimentopela glândula pituitária é episódica epulsátil, e níveis transitórios de até40 ng/mL foram observados em indivíduossaudáveis. Já que os níveis no soro sãobastante baixos entre os máximos emindivíduos saudáveis, osimunodoseamentos com sensibilidadesuficiente são necessários para distinguirdoentes com valores anormalmentebaixos de pessoas saudáveis quepossuem valores que se situam na faixabaixa-normal. Portanto, os níveis basaisou aleatórios de hGH fornecem poucainformação diagnóstica. Em algunsindivíduos, a secreção expontânea dahormona de crescimento é melhormonitorizada usando-se uma bomba deextracção contínua, ou extraindo amostraspara um doseamento de hGH a cada 20 a30 minutos durante um período de 12 a24 horas. Um número de testes deestimulação projectados para estimular ousuprimir a libertação são também usadospara avaliar a secreção da hormona decrescimento; a definição de respostasanormais varia com o laboratório.1

Estes valores devem ser consideradosapenas como directrizes. Cada laboratóriodeve estabelecer os seus própriosvalores.

LimitaçõesDoentes sujeitos à terapia de hGHpoderão desenvolver anticorpos à hGH

que interferem com o doseamento epodem causar valores falsamente baixos.

Os anticorpos heterófilos no soro humanopodem reagir com as imunoglobulinaspresentes no ensaio, causandointerferência com os imunoensaios invitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC.Heterophilic antibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Amostras de doentes expostas emrotina a produtos ou soros de animaispodem demonstrar este tipo deinterferência, potencial causador deresultados anómalos. Estes reagentesforam formulados para minimizar o riscode interferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do teste. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos nesteensaio devem ser sempre analisados emcombinação com o exame clínico, históriade medicação do doente e outros dadosque possam correlacionar-se.

Características do EnsaioConsulte Tabelas e Gráficos para dadosrepresentativos do desempenho dodoseamento. Os resultados sãoapresentados em ng/mL. (Salvo referênciaem contrário, todos os dados provêm deamostras de soro colhidas em tubos semanticoagulantes, barreiras de gel ouaditivos promotores da coagulação.)Ter em atenção que com início nasversões de software 4.13 (IMMULITE) e5.7b (IMMULITE 1000), as unidadesalternativas usam como referência “WHONIBSC 2nd International Standard 98/574”para a Hormona de Crescimento r-DNA,com um factor de conversão de 2,4(ng/mL × 2,4 → mIU/L).Para versões de software anteriores, asunidades alternativas usam comoreferência “WHO NIBSC 1st InternationalStandard 80/505”, com um factor deconversão de 2,6.

Se forem impressos resultados obtidosem versões anteriores de software,estes serão expressados relativamenteà “WHO NIBSC 2nd InternationalStandard 98/574”, para a Hormona deCrescimento r-DNA.Factor de conversão:ng/mL × 2,6 → mIU/L WHO 1st IS 80/505ng/mL × 2,4 → mIU/L WHO 2nd IS 98/574


Calibração: Até 40 ng/mL(Até 104 mIU/L, WHO 1st IS 80/505)(Até 96 mIU/L, WHO 2nd IS 98/574)Sensibilidade Analítica: 0,01 ng/mL(0,026 mIU/L).Efeito Hook de Alta Dose:Nenhum até 17 000 ng/mL.

Precisão Intra-ensaio (Entre ensaios):Foram efectuados cálculos estatisticospara os resultados de 20 réplicas numúnico ensaio. (Ver a tabela de “IntraassayPrecision”)Precisão Inter-ensaio (Ensaio aensaio): Foram efectuados cálculosestatisticos para os resultados de 11ensaios diferentes. (Ver a tabela de“Interassay Precision”).Linearidade: As amostras foramdoseadas sob vários níveis de diluição.(Ver a tabela de "Linearity" para dadosrepresentativos.)Recuperação: Às amostras foramadicionadas, na relação de 1 para 19, trêssoluções GH (115, 230 e 476 ng/mL)antes do doseamento. (Ver tabela de"Recovery" para dados representativos.)Especificidade: o anticorpo usado noprocedimento do IMMULITE Hormona deCrescimento é altamente específico parahGH, com poucas reacções cruzadas comoutras hormonas que ocorramnaturalmente. (Ver tabela de "Specificity".)Uma segunda, pequena forma dehormona de crescimento(aproximadamente 20 000 daltons)representa 15% do total de hormona docrescimento originado pela pituitáriahumana. Esta forma tem a mesmaactividade normal de promoção docrescimento, mas não apresenta aactividade insulin-like associada com aforma de 22 000 dalton. A forma de 20kDa foi testada, para avaliar a reacçãocruzada, com o IMMULITE Hormona deCrescimento e encontrou-se umapercentagem de 63% de reacção cruzada.Bilirrubina: A presença de bilirrubina emconcentrações até 100 mg/L não temefeito nos resultados, dentro da precisãodo ensaio. Niveis de 200 mg/L interferemcom o ensaio, causando uma ligeiradescida dos valores. (Vêr a tabela"Bilirubin".)

Hemolise: A Presença de eritrocitos emconcentrações até 30 µL/mL não temefeito no resultado, dentro da precisão doensaio.Tipo de amostra alternativa: Paradeterminar o efeito de amostrasalternatives, foi colhido sangue de 15voluntários em tubos secos, heparinizadose tubos de vacum SST® da BectonDickinson. A volumes iguais das mesmasamostras foram adicionadas váriasconcentrações de hGH para obter valoresao longo da gama de calibração doensaio. As amostras foram doseadas como IMMULITE Hormona de Crescimento.(Heparin) = 0,99 (Soro) – 0,55 ng/mLr = 0,982

(SST) = 0,92 (tubos simples) + 2,3 ng/mLr = 0,975

Means:26,1 ng/mL (Heparin)25,8 ng/mL (Soro)26,0 ng/mL (SST Tubes)

Comparação de métodos: Odoseamento foi comparado com umdoseamento imunoradiométrico (Kit A) em84 amostras de doentes. (Zona detrabalho: aproximadamente 0,04 a27 ng/ml. Ver gráfico.) Regressão linear:(IML) = 0,92 (Kit A) + 0,47 ng/mLr = 0,937

Médias:6,0 ng/mL (IMMULITE)6,0 ng/mL (Kit A)

Assistência Técnica:Por favor contacte o seu DistribuidorNacional.Fabricado pela EURO/DPC Ltd. de acordo como Sistema de Qualidade registado segundo anorma ISO 13485:2003.


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Growth Hormone (hGH) · IMMULITE/IMMULITE 1000 Growth Hormone (hGH) (PILKGH-12, 2005-05-09) 5 NIBSC 1st International Standard 80/505, with a conversion factor of 2.6. If customers