Immunoanal Biol Sp6c (1991) 25, 59-61 Dosage de la NSE dans le sang 59 © Elsevier, Paris

Techniques au quotidien

Importance du milieu de recueil pour le dosage de la NSE dans le sang.

Int6r t du recueil sur citrate

A Coquerel, M Vasse, L Thiberville, C Basset, G Nouvet, J Testart

Laboratoire de radioanalyse, laboratoire d'h6matologie, clinique de pneumologie et clinique chirurgicale. Centre hospitalier universitaire de Rouen, 76031 Rouen C#dex.

(Re(~u le 22 novembre 1990; accept~ le 28 d6cembre 1990)

Resume- Les auteurs ont 6tudi6 I'influence des conditions de pr61~vement sur le taux de NSE mesur6e & I'aide de deux trousses (RIA et IRMA). IIs recommandent un recueil du sang sur citrate et un acheminement rapide au laboratoire pour ~viter une 6ventuelle augmentation art~factuelle, augmentation qu'ils attribuent & des facteurs de I'h~mostase.

neuron specific-enolase / NSE / recueil des specimens

Summary - Importance of blood sampling for NSE dosage : interest of using citrate. Conditions for blood sampling seem to have a strong influence on the NSE /eve/ measured by R/A or/RMA ; the authors preconize the use of citrate as an anticoagulant and a rapid shift to the laboratory, in order to avoid a false increase in NSE concentration. Hypothesis are proposed to explain the observed phenomens.

neuron specific-enolase / specimen sampling

Introduction

Le dosage de la NSE serique est utilis~ comme outil biologique dans le diagnostic des tumeurs & diff~ren- ciation neuroendocrine [7], des neuroblastomes [3], et plus particuli~rement dans les cancers bronchiques anaplasiques & petites cellules [5].

La pratique du dosage s6rique de cette enzyme s'est d~velopp~e gr&ce & I'apparition de trousses RIA (Pharmacia) puis IRMA (Sangtec). Ces deux trousses ont en commun de mesurer les deux formes de la NSE : I'h~t~ro-dimere alpha-gamma (AG-NSE) et I'homodim~re gamma-gamma (GG-NSE).

Brown et al [1] et Pahlman et al [5] ont soulign~ la n~cessit6 d'6carter tout liquide h~morragique, du fait d'interferences possibles des enolases 6rythrocy~ taires avec les RIA classiques. En fait, il n'y a pas de

GG-NSE dans les el6ments figures du sang et les pla- quettes ; quanta I'AG-NSE, elle repr~sente environ 10% de I'activite enolasique des ~rythrocytes et 6,7% de celle des plaquettes, oQ sa concentration atteint toutefois 470 ng/mg de prot~ine [4] soit environ 3% des concentrations de NSE observ~es dans le cortex c6r6bral. Compte tenu du nombre de ces 616ments circulants on con£:oit bien, qu'en cas d'h~molyse et/ou de degranulation plaquettaire, il y ait relargage d'AG- NSE, source de faux positifs.

Objet de notre dtude

Lors du bilan initial et du suivi th~rapeutique de can- cers bronchopulmonaires, nous avons dos~ a titre sys- tematique la NSE et nous avons ~tudi~ le r61e du milieu de recueil afin \d'essayer de mettre en 6vidence un

60 Dosage de la NSE dans le sang

possible effet matrice et d'~ventuels troubles de I'h~- mostase dans cette pathologie n~oplasique.

II n'existe pas d'effet matrice Iors de la reconstitution des gammes ~talons. Nous avons reconstitu~ des gammes ~talons avec de I'eau, ou de I'eau plus des concentrations d'EDTA ou de citrate identiques aux concentrations finales des tubes de pr~l~vement. Tant en IRMA qu'en RIA nous n'avons note de diffe- rence significative des CPM ou des concentrations re- calcul~es pour aucun des deux milieux anticoagu- lants. Les moyennes des ~carts des cpm (en CV %) ~taient de 4,9% pour I'EDTA (extremes : 2,9 - 8,1%) et 4,3% sur citrate (extr#mes 2,3 - 6,2%) [2].

Au contraire nous avons retrouv~ des cas de faux positifs et de faux n~gatifs Iors des ~tudes cliniques [2].

Cas cliniques de faux positif et de faux negatifs

Faux positif sur plasma

Nous avons retrouv~ un faux positif en citrate et EDTA qui etait n~gatif en s~rum. II s'agissait d'un cas de m~tastase h~patique unique d'un cancer colique op~- r~ 2 ans plus t6t. En preoperatoire taux positif en IRMA et RIA (respectivement 36 et 29,5 ng/ml ; en postop~- ratoire (J + 8 et J + 60) les taux ~taient normaux dans les deux techniques. L'ex~r~se de la tumeur ayant ~te totale et la r~mission complete, confirmee avec 3 mois de recul, on peut interpreter ce r~sultat comme un faux n~gatif du dosage de la NSE sur s~rum vis-a-vis du diagnostic de cancer au sens non restrictif de I'~tiolo- gie neuroendocrine. II est en effet classique que les m~tastases h~patiques de divers types de cancers puissent s~cr~ter de la NSE ; celle-ci est en g~n~ral de type AG-NSE.

Faux n6gatifs sur s#rum

Nous avons retrouv~ deux cas de faux n~gatifs sur s~rum. II s'agissait d'un ph~ochromocytome et d'une tumeur bronchique.

Pheochromocytome

Les valeurs pr~op~ratoires (sur citrate) ~taient de 71,3 ng/ml en IRMA et de 89,2 ng/ml en RIA. Avec ces deux m~thodes le dosage s~rique ~tait n~gatif : respective- ment de 6,7 et 6,0 ng/ml.

Tumeur bronchique

Une n~oplasie a ~t~ r~v61~e initialement par des trou- bles de coagulation avec ~l~vation de la NSE plasma- tique au cours d'une pneumopathie aigue chez une femme &g6e. Elle pr6sentait depuis quelques mois des troubles r#cidivants de I'h~mostase avec en particulier une augmentation tr~s nette des D-dim~res ( > 2 000 ng/ml; N < 300).

Les dosages de la NSE sur EDTA et citrate ~taient positifs tant en IRMA qu'en RIA alors que le dosage

Tableau I. Variations des ratios des taux obtenus en RIA et IRMA selon le milieu de recueil.

RIA Pharmacia IRMA Sangtec

rE/rC (n=74) = 128 % iE/iC (n=43) = 125 % rE/rN (n=45) = 137 % iE/iN (n=127) = 140 % rC/rN (n=80) = 1 1 1 % iC/iN (n=36) = 116 %

i technique IRMA ; r technique RIA ; E pr~lev~ sur EDTA ; C prelev~ sur Citrate ; N pr61ev~ sur tube neutre, iE/rE (n=26) = 108 % ; iN/rN (n=19) = 96 % ; iC/rC (n=66) = 1 2 1 %

serique restait inf~rieur ~ 10 ng/ml. La disparition des troubles cliniques initiaux sous traitements sympto- matiques (antibioth~rapie et anticoagulants) a ~t6 sui- vie d'une quasi-normalisation des taux dans les deux techniques (respectivement 17 et 15 ng/ml sur ci- trate).

Les variations des taux de NSE selon le milieu de recueil sont tres frequentes

Nous avons pu ~tablir en 1986 que le dosage sur un plasma citrat~ ~tait plus fiable que le dosage s~rique mais que cela changeait quelque peu les normales (de + 10 ~ + 20 %).

Les plaquettes ~tant les elements sanguins les plus riches en NSE [4] nous avons recherch6 si I'activation plaquettaire in vitro pouvait majorer le taux plasmati- que de la NSE. Pour ce faire n0us avons compar~ les taux de gamma-NSE obtenus sur plasma citrat~ ceux obtenus sur un milieu special CTAD (citrate, theophylline, adenine et dipyridamole) qui inhibe la degranulation plaquettaire au contact du tube. Nous avons par ailleurs ~tudi6 le taux de b6ta-thromboglo- buline (BTG) et du facteur 4 plaquettaire (PF4) qui sont des prot6ines sp~cifiquement d'origine plaquet- taire. Dans la majorit~ des cas de cancer bronchiques avec NSE elevee nous avons observ~ des valeurs tr~s augment~es de BTG et FP4 avec des r~sultats comparables sur tubes CTAD et citrates (mais bien s0r ininterpr~tables sur tubes h~parin6s ou EDTA du fait de I'activation plaquettaire in vitro).

Les troubles de la coagulation intravasculaire au cours des cancers sont connus et le dosage des D-di- m~res est un moyen tr~s sensible de les mettre en ~vidence (Sagripanti et al [6]).

Mesure des effets matrices avec les trousses RIA et IRMA

Cette ~tude a 6t~ faite sur I'ensemble des pr61~ve- ments que nous avons re£;u au laboratoire def~vrier

septembre 1990. Les valeurs normales 6tablies sur plasma citrate sont pour les adultes sains : en RIA < 15 ng/ml et en IRMA < 17 ng/ml.

Le ratio moyen des taux de NSE mesur6s sur diff,- rents milieux de recueil, avec les deux methodes est indique dans le tableau I.

Dosage de la NSE dans le sang 61

Discussion et conclusion R~ferences

Les differences de taux de NSE que nous avons ob- serv~es selon le milieu de recueil ne d~pendent pas du type de dosage utilise. Elles pourraient ~tre dues au fait qu'il existe des concentrations non negligeables d'AG-NSE tant dans les globules rouges que les pla- quettes. Cela corrobore les augmentations de NSE par art~fact en cas d'hemolyse ou de trouble de la coagulation. Selon nos constatations le recueil sur ED- TA pourrait, chez certains sujets, activer la d~granu- lation plaquettaire (cela est corrobor~ par un accroiss- sement art~factuel tr~s important du D-dim~re sur ce milieu). Nous confirmons donc que le recueil sur citrate est le seul milieu usuel gr&ce auquel on peut inhiber la d6granulation plaquettaire et par I& m~me 6viter une cause d'augmentation art~factuelle du taux de NSE. Paradoxalement nous avons aussi mis en ~vidence que le recueil en tube neutre entrafne parfois une baisse des taux de NSE (peut-~tre par absorption sur le caillot de fibrine ? ).

Nous concluons qu'il faut recommander que le do- sage de la NSE soit pratiqu6 sur plasma citrat~ et que le pr~l~vement soit rapidement achemin~ au labora- toire. Les facteurs de I'h~mostase qui interviennent dans les modifications apparentes du taux de cette enzyme restent & pr~ciser, en particulier dans les tu- meurs o0 les deux m~canismes d'augmentation de la NSE peuvent exister : s~cr~tion endocrine et activa- tion de la degranulation plaquettaire.

1 Brown KW, Kynoch PAM, Thompson RJ (1980) Immuno- reactive nervous system specific enolase (14-3-2 protein) in human serum and cerebrospinal fluid. Clin Chim Acta 101, 257-264

2 Coquerel A (1990) Rapport d'expertise sur la trousse de dosage immunoradiometrique (IRMA) de la neuron-specific enolase (laboratoires Sangtec) distribuee par les Labora- toires Mallickrodt France. Minist~re de la Sant6, septembre

3 Ishiguro Y, Kato K, Shimizu A, Ito T, Nagaya M (1982) High levels of immunoreactive nervous system-specific en- olase in sera of patients with neuroblastoma. Clin Chim Acta 121,173-179

4 Marangos P J, Campbell IC, Schmechel DE, Murphy DL, Goodwin FK, (1980) Blood platelets contain a neuron-spe- cific enolase subunit. JNeurochem 34, 1254-1258

5 Pahlman S, Esscher T, Bergvall P, Odelstad L (1984) Pu- rification and characterization of human neuron-specific en- olase : radioimmunoassaydevelopment. TumorBiol 5,127- 132

6 Sagripanti A, Ferdeghini M, Baicchi L, Pinori E, Grassi B (1989) Solid neoplasms and hemostatic activation (Abstr). Thromb Haemostasis 62, 135

7 Tapia F J, Polak JM, Barbosa AJA, Bloom SR, Marangos P J, Dermody C, Pearse AGE (1981) Neuron-specific en- olase is produced by neuroendocrine tumors Lancet i, 808- 810