El reino fung consta de un grupo diverso de ms de 100000 especies mviles dispersas por el viento o los animales.Los hongos constituyen un grupo muy heterogneo de organismos eucariotas, unicelulares, hetertrofos no fotosintticos, con pared celular. Basndose en la apariencia macroscpica de la colonia se pueden diferenciar dos tipos de hongos. Si producen colonias opacas, cremosas o pastosas se denominan levaduras; si producen crecimientos areos, velludos, algodonosos o pulverulentos se llaman hongos filamentosos.El conjunto de elementos que constituyen un hongo se denomina talo. El talo puede ser unicelular (en levaduras). En hongos filamentosos el talo incluye una parte vegetativa, el micelio, compuesto por hifas y una parte reproductora.Las hifas son tubos que contienen ncleos y citoplasma. Pueden presentar septos (micelio tabicado) o no (micelio no tabicado). Los septos presentan poros que conectan los distintos segmentos de la hifa. A veces las levaduras constituyen cadenas de clulas denominadas pseudomicelio. Los hongos se pueden reproducir asexuada y sexualmente. En algunas especies coexisten las dos formas de reproduccin en el mismo organismo que se denomina entonces holomorfo. La reproduccin asexuada puede ocurrir por propagacin vegetativa a partir de fragmentos de micelio, o por formacin de esporas de distinto tipo (conidios, esporangiosporas, etc.).La reproduccin sexuada se caracteriza por la unin de dos ncleos que dan lugar a esporas sexuadas (zigosporas, ascosporas, etc.). En general la reproduccin asexuada es ms importante para la propagacin de la especie. En muchos hongos la reproduccin sexuada se da solo una vez al ao.Por lo tanto este laboratorio se hace con el fin de identificar todas las caractersticas anteriores.En la identificacin de hongos se hizo necesario un Agar que en su composicin tuviera un inhibidor. Para esta procedimiento se utilizo el petrifilm previamente hidratado con un mililitro de agua y Agar Saboreaud con cloranfenicol esta ultima sustancia inhibe el crecimiento de otros microorganismos diferentes a los hongos y levaduras. El tipo de Agar que se utilizo fue el Agar Saboreaud utilizado para el cultivo, aislamiento e identificacin de hongos patgenos. Para inhibir el crecimiento de bacterias se ajusta el pH a 5.6. El medio saboreaud esta compuesto por peptonas, D(+) glucosa y Agar-Agar. La muestra fue toma de la politeca y se reporto 1UFC/15 minutos. Los hongos pueden ser unicelulares o pluricelulares. Las levaduras son hongos unicelulares con forma oval (5-30 mm), inmviles y que se dividen por mecanismos diversos, especialmente por gemacin. Deben considerarse como hongos que han perdido su forma filamentosa y se han convertido en organismos unicelulares.La mayora de los hongos, sin embargo, son pluricelulares o filamentosos y se caracterizan por estar constituidos por filamentos ramificados o hifas que se desarrollan y entrelazan formando el micelio. Existe un micelio vegetativo adosado a la superficie del sustrato (suelo, plantas, alimentos) y un micelio areo o reproductor, donde se forman las esporas (asexuales y sexuales). Los hongos filamentosos y levaduras son en su mayora saprfitos, hallndose libres en la naturaleza, especialmente en la materia orgnica en descomposicin. Algunas especies son parsitas, formando parte de la flora normal del hombre, como por ejemplo Candida albicans, que es una levadura y puede comportarse como oportunista y resultar patgena cuando se produce una disminucin en los mecanismos de resistencia del individuo. Otras especies de hongos pueden producir durante su desarrollo sustancias txicas o micotoxinas como, por ejemplo, las aflatoxinas producidas por Aspergillus fla vus, que es un hongo filamentoso. Por otra parte, algunos hongos son difsicos, es decir, unas veces se comportan como hongos filamentosos y otras pueden comportarse como levaduras.Las condiciones necesarias para que un hongo crezca en una superficie son: existencia de esporas, base nutriente, humedad y temperatura entre 4 y 38oC. En la prctica, los hongos filamentosos y las levaduras tambin se diferencian en el laboratorio en dos grupos segn el aspecto macroscpico de sus colonias: las levaduras forman colonias hmedas, cremosas, opacas o pastosas, y los hongos filamentosos producen colonias algodonosas, lanosas o pulverulentas. Especies ms comunes en aire interior Las especies ms comunes que se encuentran en aire interior son las reflejadas en la tabla 1, a partir de los resultados obtenidos en dos estudios diferentes (Health y Welfare, 1987 y Flanigan et al. 1993) publicados en Biocontaminants in Indoor Environment. Los hongos ms comunes existentes en el polvo de origen domstico pueden fcilmente pasar al aire; y si se dan las condiciones adecuadas para su desarrollo en cuanto a temperatura y humedad relativa, tambin pueden acantonarse en cualquier tipo de material (como alfombras, moquetas, empapelado de una pared, etc.) y crecer desmesuradamente, proyectando al ambiente un nmero elevado de esporas con el consiguiente riesgo para la salud. Efectos sobre la salud Los hongos a travs de sus esporas, micotoxinas y por la emisin de VOC (compuestos voltiles orgnicos), pueden causar diferentes tipos de enfermedades o alteraciones de la salud:Enfermedad infecciosa o patognica: aspergilosis (por exposicin a Aspergillus fumigatus), histoplasmosis (por Histoplasma), criptococosis (por Crypto coccus) y coccidiomicosis (por Coccidioides), Reacciones alrgicas, como rinitis y asma, Neumonitis por hipersensibilidad, Cncer debido a micotoxinas carcinognicas, Desrdenes inmunolgicos por micotoxinas inmunosupresivas, Reacciones txicas por micotoxinas, Reacciones de inflamacin debidas al -1,3-glucano, compuesto de la pared celular de los hongos, Irritacin debida a VOC fngicos como por ejemplo alcohol, Sndrome del edificio enfermo. Principales mtodos de identificacin de hongos filamentososLa identificacin de los hongos filamentosos se basa en el examen macroscpico de la colonia y en sus caractersticas microscpicas. Semejanzas macroscpicas como la forma de la colonia, el color de la superficie, la textura y la produccin de pigmentos son muy tiles para la identificacin. En general, la morfologa microscpica de los hongos es estable y presenta pocas variaciones. La identificacin definitiva se basa en la forma caracterstica, mtodo de produccin y ordenamiento de las esporas, siendo tambin importante conocer el tamao y la disposicin de las hifas. La preparacin del material para la observacin microscpica puede realizarse en fresco, con cinta de celofn adhesiva o mediante cultivo sobre portaobjetos. Preparacin en frescoSe realiza empleando el procedimiento descrito a continuacin:Seleccionar una colonia aislada. Calentar a la llama el alambre de un asa de siembra, y doblar de forma que se convierta en un objeto cortante. Con la ayuda del asa, extraer un fragmento triangular de la colonia que contenga adems un poco de agar en la parte inferior. Depositar el fragmento extrado sobre un portaobjetos en el cual, previamente, se ha depositado una gota de azul de lactofenol. Cubrir con un portaobjetos y presionar suavemente para dispersar la colonia y el agar; de esta forma, la muestra est disponible para su observacin al microscopio.Este procedimiento es el que utilizan la mayora de los laboratorios, ya que las muestras se preparan con facilidad y rapidez y adems permite identificar muchas de las especies de hongos ms habituales. El mayor inconveniente de la observacin en fresco es que se puede alterar el ordenamiento caracterstico de las esporas al presionar con el cubreobjetos, por lo que este procedimiento no es vlido en los casos en que es necesario conocer la disposicin de las esporas.Preparacin con cinta de celofn adhesivaEl procedimiento se lleva a cabo como sigue :Apoyar el lado engomado de un trozo de cinta adhesiva transparente sobre la superficie de una colonia.Colocar la cinta bien extendida sobre una gota de azul de lactofenol o azul de anilina colocada, a su vez, sobre un portaobjetos. Observar al microscopio para conocer la forma y ordenamiento caracterstico de las esporas.Este mtodo puede considerarse como el ms simple, econmico y adecuado para la identificacin de hongos, recomendable para los laboratorios microbiolgicos de cualquier nivel. La preparacin de la cinta transparente permite observar al microscopio como se desarrolla el microorganismo en el cultivo. Generalmente las esporas se mantienen intactas y la identificacin se realiza con facilidad. Una de las desventajas de este mtodo es que si la cinta transparente no se presiona con suficiente firmeza sobre la superficie de la colonia, la muestra no es adecuada, ya que al no quedar bien adherida la cinta, las esporas o las hifas no se pueden identificar.En los casos en que mediante este mtodo no se observen esporas deber realizarse la preparacin en fresco.Cultivo sobre portaobjetosSe realiza empleando el procedimiento descrito a continuacin:Cortar un bloque pequeo de un medio slido adecuado (agar), que ha sido vertido en una cpsula de Petri, hasta una altura de 2 cm. El bloque puede cortarse con la ayuda de un bistur estril o con un tubo de ensayo estril sin reborde (lo que permite obtener un taco redondo). Colocar un portaobjetos estril sobre una capa de agar al 2% contenida en una cpsula de Petri. Colocar el bloque de agar sobre el portaobjetos. Con una asa de siembra cuyo alambre ha sido doblado en ngulo recto, inocular los cuatro cuadrantes del taco con el microorganismo a identificar. Colocar un cubreobjetos estril sobre la superficie del bloque de agar. Tapar la cpsula de Petri que contiene el cultivo e incubar a 30oC. Finalizado el perodo de incubacin, retirar el cubreobjetos (este proceso debe realizarse en una cabina de seguridad biolgica), y colocarlo en un portaobjetos que contenga azul de lactofenol o azul de anilina. La observacin al microscopio permite distinguir la forma y disposicin de las esporas.Si con este proceso no ha sido posible la identificacin, el resto del cultivo puede ser usado ms adelante si se contina incubando. Entonces se retira el bloque de agar y se agrega una gota de azul de lactofenol o azul de anilina sobre la zona del cultivo y se coloca un cubreobjetos sobre ella. Es recomendable realizar dos cultivos sobre el mismo portaobjetos de modo que si en uno no se pueden observar las caractersticas microscpicas puede disponerse del segundo despus de un perodo adicional de incubacin. Este mtodo permite la observacin microscpica del hongo mientras se desarrolla directamente debajo del cubreobjetos, de forma que las caractersticas microscpicas se distinguen con facilidad, las estructuras se mantienen intactas y puede observarse un gran nmero de reas representativas. No deben realizarse cultivos en portaobjetos de hongos de crecimiento lento que pueden ser patgenos dimorfos, como Histoplasma capsulatum, Blastomyces derma titidis, Coccidioides immitis, Paracoccidioides brasilien sis o Sporothrix schenckii.Los hongos forman dos grupos: los hongos filamentosos multicelulares, o hifas, y las levaduras unicelulares. El comportamiento nico y distintivo de la organizacin celular de los hongos filamentosos presenta retos especiales al describir su forma y funcin, indican los microbilogos de la Universidad Estatal de Colorado. El citoplasma dentro de los filamentos tubulares se puede mover en respuesta a las condiciones ambientales, campos elctricos, superficies y gravedad. Esta inusual formacin celular distingue a los hongos filamentosos de entre el resto de los organismos del suelo y les permite formar redes de hifas que son predominantemente benficas para la mayora de las plantas.Los hongos presentan requerimientos nutricionales muy simples, pero su desarrollo es mas lento que el de las bacterias, necesitando varios das de incubacin. Los hongos pueden ser unicelulares o pluricelulares. Las levaduras son hongos unicelulares con forma oval (5-30 m), inmviles y que se dividen por mecanismos diversos, especialmente por gemacin. Deben considerarse como hongos que han perdido su forma filamentosa y se han convertido en organismos unicelulares. La mayora de los hongos, sin embargo, son pluricelulares o filamentosos y se caracterizan por estar constituidos por filamentos ramificados o hifas que se desarrollan y entrelazan formando el micelio. Existe un micelio vegetativo adosado a la superficie del sustrato (suelo, plantas, alimentos) y un micelio areo o reproductor, donde se forman las esporas (asexuales y sexuales). Los hongos filamentosos y levaduras son en su mayora saprfitos, hallndose libres en la naturaleza, especialmente en la materia orgnica en descomposicin. Algunas especies son parsitas, formando parte de la flora normal del hombre, como por ejemplo Candida albicans, que es una levadura y puede comportarse como oportunista y resultar patgena cuando se produce una disminucin en los mecanismos de resistencia del individuo. Otras especies de hongos pueden producir durante su desarrollo sustancias txicas o micotoxinas como, por ejemplo, las aflatoxinas producidas por Aspergillus fla vus, que es un hongo filamentoso. Por otra parte, algunos hongos son difsicos, es decir, unas veces se comportan como hongos filamentosos y otras pueden comportarse como levaduras. Las condiciones necesarias para que un hongo crezca en una superficie son: existencia de esporas, base nutriente, humedad y Las NTP son guas de buenas prcticas. Sus indicaciones no son obligatorias salvo que estn recogidas en una disposicin normativa vigente. A efectos de valorar la pertinencia de las recomendaciones contenidas en una NTP concreta es conveniente tener en cuenta su fecha de edicin. Ao: 1998 temperatura entre 4 y 38 oC. En la prctica, los hongos filamentosos y las levaduras tambin se diferencian en el laboratorio en dos grupos segn el aspecto macroscpico de sus colonias: las levaduras forman colonias hmedas, cremosas, opacas o pastosas, y los hongos filamentosos producen colonias algodonosas, lanosas o pulverulentas.La mayora de los hongos viven libres en el suelo o en el agua y obtienen su energa por respiracin o fermentacin de materiales orgnicos solubles presentes en estos ambientes. El aire no es un medio en el que pueden desarrollarse los microorganismos pero es el portador de aerosoles biolgicos como polvo, gotitas de agua y otros, que pueden estar cargados de los diversos grupos de microorganismos. De las capas de aire se han encontrado esporas de hongos que proceden principalmente del suelo, de la vegetacin y del mar. Algunos de los gneros ms comnmente aislados del aire son Penicillium, Aspergillus, Rhizopus, Mucor y Cladosporium, entre otros.Pluricelularmente (mohos).Se forman hifas que crecen formando micelios. Estas hifas crecen por elongacin de sus extremos y con produccin de ramas laterales (crecimiento apical).Este micelio puede ser areo: crecimiento del hongo es hacia la superficie y si tiene esporaso clulas reproductoras se llamar micelio reproductor.micelio vegetativo: crecimiento del micelio hacia el interior en buscade nutrientes.Unicelularmente (levaduras).Clulas eucariotas esfricas u ovales. Reproduccin por gemacin. Tienen pared celular rgida y la estructura est formada por polmeros de hexosas y hexosaminas y tiene quitina.Morfologa y crecimientoLos hongos que producen micosis en el ser humano se encuentran en dos estados morfolgicos bsicos: levaduras y mohos.Levaduras:Son hongos unicelulares, redondos o elipsoides que se repoducen por gemacin o fisin binaria. La gemacin es la protusin externa del protoplasma materno formando un saliente (yema o gema), que va creciendo poco a poco y, finalmente, se desprende cnvirtindose en un nuevo individuo. En alguno casos permanecen unidas distintas gemas alrededor de la clula madre y, en otro, la gema sigue creciendo a su vez porduciendo nuevos bortes y dando la imagen de seudomicielio formado por blastoconidias. Una levadura tambin puede ser el estadio morfolgico en el cilo biolgico de una espeie filamentosa; a este hecho se le denomina "dimorfismo" y al hongo "hongo dimrfico". Tambin existe la situacin inversa: una levadura puede tener capacidad de producir hifas como ocurre conCandida albicans.Mohos: Son hongos multicelulares. El elemento tubular que emerge se denomina "hifa"; ste sigue creciendo y ramificndose, formando un conjunto entrelazado al que se denomina "micelio" o thallus. Parte de las hifas se introducen en el sustrato y forman el micelo vegetativo, las que se proyectan hacia el exterior constituyen el micelo areo, que puede presentar microscpicamente un aspecto algodonoso, velloso, mate, plegad, etc... Estas caractersticas fenotpicas sirven para una aproximacin taxonmica en la identificacin. En el se producen los elemento de propagacin que pueden ser esporas, conidios, fragemento de micelio, etc. En micologa mdica y microbiologa a este conjunto visible sobre el medio de cultivo se le denomina colonia.CULTIVO.- Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos simples, una fuente de carbono orgnicco, generalmente azcar, y de nitrgeno suelen ser los elementos suficientes para obtener un buen crecimiento. Junto a ellos, un soporte slido, el agar, permite a los hongos filamentosos el desarrollo del micelo areo, donde se localizan las estructuras resproductoras y el desarrollo de colonias en el caso de las levaduras. El medio de cultivo ms utilizado para los hongos es el medio de Saouraudm que rene estas caractersticas y un pH de 5,6, que dificulta el crecimiento bacteriano.No es cierto que los hongos requieran necesariamente para su crecimiento ser cultivados en el medio de Saboureaud, la mayro parte de medios de cultivo utilizados en basteriologa permiten su desarrollo, pero su utilizacin est consagrada por la costumbre. De hecho, la mayora de las descripciones de crecimiento y caractersticas morfolgicas de las colonias fngicas se han hecho sobre el medio Saboureaud.La adicin al medio de antibiticos como el cloranfenicol o la gentamicina,, que inhiben el crecimiento bacterias contaminantes, o antifngicos especiales (como la actidiona o cilohexamida) que inhiben el crecimiento de uchos hongos no patgenos, transforman al medio de Sabouraud en un medio ms selectivo.Los medios de cultivo espus de sembrados, se incuban en aerobiosis y la temperatura ptima suele ser 25-30 C para los que preducen infecciones prefundas. se utilizan medios de cultivo que sean generales como el agar saboraud o agar papa dextrosa, o depende del hongo que quieras aislar si ya quieres uno especifico..... necesitas medios selectivos para que tenga exactamente los nutrientes que necesita ese hongo pues hay hongos que no crecen en cualquier medio...La ventaja que tienen los medios de cultivo sinteticos con respecto a los naturales..es que los nutrientes son mas faciles de asimilar a compracion de los naturales pues hay algunos nutrientes que tienen cadenas muy largas y que si las asimilan pero es mas tardado.. ademas hay lugares naturales donde hay mas cantidad de un nutriente que de otro y puede dificultar su obtencion.......aqui tambien estan relacionados los factores de crecimiento (ph, humedad, etc)Los medios de cultivo mas usados en los laboratoriosdepende el hongo y del laboratorio ademas de los recursos economicos ...casi siempre utilizan medios generales luego ya medios especificos...Depende del gupo de hongos que quieras es el tipo de medio qu utilizas..por ejemplopara crecimiento de candida sp.. se ultiliza el agar selectivo biggy, o por ejemplo si quieres hongos patogenos o del suelo puedes utilizar medio micobiotico aunque no es muy selectivo que digamos..Considera los factores de cirecimiento para su buen desarrollo y esporulacin si no son adecuadas no crecera o no habra esporulacion solo habra crecimiento vegetativoLos hongos levaduriformes dan lugar en 24-48 horas a colonias de aspecto y morfolog similar a las basterias. El desarrollo de las colonias de os hongos filamentosos es mucho ms variable; algunos crecen muy lentamente, pero sus colonias son muy caractersticas y en general se diferencian fcilmente de las levaduras.HONGOS FILAMENTOSOS Cuando el crecimiento detectado corresponda a un hongo filamentoso, la identificacin se debe hacer por el examen macroscpico de la colonia: forma, color, textura, velocidad de crecimiento y reverso. Si el hongo tiene abundantes formas de reproduccin se emplea la tcnica del scotch o papel de celofn, que consiste en tocar la superficie de la colonia con la cinta adhesiva y colocarla sobre un porta, en el que se ha depositado una gota de azul de lactofenol y observar al microscopio. Cuando no se puede conseguir una buena observacin de las formas de reproduccin por las tcnicas anteriores, es necesario hacer un microcultivo. Esta tcnica consiste en depositar sobre un porta un trozo de agar de Sabouraud, o del medio recomendado segn el gnero de hongo filamentoso que se presume, de 1 cm2 de superficie aproximadamente, en cuyos extremos se inocula el hongo problema (en profundidad). Posteriormente se le coloca un cubre encima y se incuba en c- mara hmeda a 25C hasta observar crecimiento; entonces se toma el cubre, que es donde se han depositado las formas de reproduccin, y se coloca sobre un porta que lleva una gota de azul de lactofenol y se observa al microscopio. Los criterios de identificacin son fundamentalmente morfolgicos basados en la presencia de estructuras de reproduccin sexual, estructuras de reproduccin asexual y caractersticas especiales de las hifas, cuya descripcin pueden ser consultados en atlas micolgicos. En ocasiones, la identificacin se complementa con pruebas bioqumicas, como la investigacin de la ureasa, que diferencia T. mentagrophytes (positivo) de T. rubrum (negativo). Todava limitada a determinados laboratorios especializados, pero en continuo desarrollo, est la identificacin molecular de los aislamientos fngicos, basada en los mapas de restriccin de fragmentos del opern ribosomal, digeridos con un panel de enzimas de restriccin, que permite la elaboracin de rboles filogenticos.Macroscpicamente, los mohos se desarrollan en el laboratorio sobre la superficie de sustratos o medios de cultivo, formando colonias areas, de aspecto algodonoso, vellosas o pulvurulentas y de color variable. (figura 1.3)Macroscpicamente las levaduras crecen en los medios de cultivo slidos formando colonias opacas, de aspecto pastoso, color cremoso aunque algunas especies son caractersticamente pigmentadas (figura 1.6).MONTAJE HUMEDOLa mayora de los preparados en montaje hmedo se secan alrededor de la media hora. Puedes prolongar la humedad de la muestra en montaje hmedo aplicando una delgada capa de vaselina sobre los bordes externos del cubreobjetos. Presiona muy suavemente los bordes al colocar el cubreobjetos sobre tu portaobjetos. Esto produce un sellado que evitar que el lquido sobre el portaobjetos se seque demasiado rpido. Los preparados lquidos con sellado de vaselina normalmente duran 1 o 2 das.La clave para hacer un preparado en montaje hmedo es usar la cantidad justa de agua. Si no usas suficiente agua, el agua no sostendr el cubreobjetos, lo que podra provocar que el mismo mate los organismos vivos del agua. Si usas demasiada agua, el cubreobjetos no se sostendr sobre el portaobjetos.La ventaja del montaje hmedo es que justamente por tratarse de material vivo, y ms en este caso que se trata de clulas vegetales,el agu hace que las clulas se conserven por ms tiempo en el estado en que se encontraban antes de ser tomada la muestra. Se mantiene la forma y la estructura de la pared celular , lo mismo que la membrana citoplasmtica, se conserva en buen estado el citoplasma y por lo tanto se pueden observar bien las organelas, y como te dije antes es como si la muestra estuviera todava en la planta. Es una tcnica muy usada para hacer observaciones de muestras vegetales in vivo.8. IDENTIFICACIN 8.1. HONGOS FILAMENTOSOS Cuando el crecimiento detectado corresponda a un hongo filamentoso, la identificacin se har: 1) examen macroscpico de la colonia: forma, color, textura, velocidad de crecimiento y reverso. 2) Si el hongo tiene abundantes formas de reproduccin se emplea la tcnica del scotch o papel de celofn, que consiste en tocar la superficie de la colonia con la cinta adhesiva y colocarla sobre un porta, en el que se ha depositado una gota de azul de lactofenol y observar al microscopio. Mejora ostensiblemente la visin microscpica si se aade, adems, una gota de azul de lactofenol sobre el celofn y se deposita un cubre sobre ella. Cuando no se puede conseguir una buena observacin de las formas de reproduccin por las tcnicas anteriores, es necesario hacer un microcultivo. Esta tcnica consiste en depositar sobre un porta un trozo de agar de Sabouraud, o del medio recomendado segn el gnero de hongo filamentoso que se presume, de 1 cm2 de superficie aproximadamente, en cuyos extremos se inocula el hongo problema (en profundidad). Posteriormente se le coloca un cubre encima y se incuba en cmara hmeda a 25C hasta observar crecimiento; entonces se toma el cubre, que es donde se han depositado las formas de reproduccin, y se coloca sobre un porta que lleva una gota de azul de lactofenol y se observa al microscopio. Los criterios de identificacin son fundamentalmente morfolgicos basados en la presencia de estructuras de reproduccin sexual, estructuras de reproduccin asexual y caractersticas especiales de las hifas, cuya descripcin excede los propsitos de este documento y que pueden ser consultados en atlas micolgicos. En ocasiones, la identificacin se complementa con pruebas bioqumicas, como la investigacin de la ureasa, que diferencia T. mentagrophytes (positivo) de T. rubrum (negativo). Todava limitada a determinados laboratorios especializados, pero en continuo desarrollo, est la identificacin molecular de los aislamientos fngicos, basada en los mapas de restriccin de fragmentos del opern ribosomal, digeridos con un panel de enzimas de restriccin, que permite la elaboracin de rboles filogenticos. 8.2. LEVADURAS La identificacin de la especie de toda levadura aislada en sangre o en cualquier otro lquido corporal estril est plenamente justificada. Tambin es conveniente la identificacin de las levaduras de otras procedencias, sobre todo cuando ocurre de forma reiterada en diferentes muestras clnicas del mismo paciente, y siempre que se asuma que se trata de un organismo responsable de patologa. La mayora de los organismos levaduriformes crecen fcilmente en un gran nmero de medios de cultivo usados rutinariamente en el laboratorio de microbiologa (agar sangre, agar chocolate, agar Cled, etc.). Sin embargo, el AGS, con o sin antibiticos aadidos, es el medio de aislamiento por excelencia para la identificacin de levaduras. En el medio AGS las colonias de levaduras suelen ser completas, ligeramente abombadas o planas, de consistencia mantecosa, lisa o rugosa, con olor dulzn agradable, volvindose ms pastosas a medida que la colonia envejece. Por lo general, las colonias de levaduras no desarrollan micelio areo, aunque en ocasiones pueden aparecer prolongaciones aracneiformes en la periferia de las colonias. 8.2.1. Identificacin convencional. Si se visualiza crecimiento en cualquier medio que sugiera posibilidad de levaduras, se realiza una extensin en fresco. Si en la misma se observan levaduras, se procede a la identificacin mediante subcultivo a un medio cromognico, de los que hay varios comercializados. En el caso que no se trate de ninguna de las especies que este medio identifica, se procede a hacer la identificacin mediante auxonograma de carbono preparado en el propio laboratorio, o mediante alguno de los mtodos comerciales basados en l. La identificacin bioqumica debe completarse con una identificacin morfolgica mediante un subcultivo al medio agar harina de maz con o sin Tween 80. Si se observa un micelio areo definido, debe considerarse la posibilidad de que se trate de un hongo dimrfico o de ciertas especies de levaduras que pueden formar micelio verdadero como Geotrichum, Dipodascus o Trichosporon. Una colonia de aspecto y consistencia mucoide sugiere la formacin de cpsulas y puede ser el paso inicial para la identificacin de C. neoformans. Las colonias de color rojoanaranjado o naranja, de aspecto cremoso o rugoso son caractersticas de las especies del gnero Rhodotorula (rhodo: rojo), color que manifiesta esta levadura por su riqueza en carotenoidesntroduccin:MTODO DE MONTAJE HMEDOEl procedimiento se lleva a cabo con el ansa de gancho o con una aguja montada sobre un trozo de varilla, se procede tomando una pequea porcin de la colonia a estudiar (a veces es necesario ayudarse con otra ansa). La muestra debe tomarse de un sitio intermedio entre el centro y la periferia de la colonia. Este pequeo fragmento de colonia se transfiere a una gota de lactofenol azul de algodn en un portaobjeto y se cubre con un cubreobjetos. Se presiona suavemente directamente sobre el fragmento de la colonia para deprimir las hifas y otras estructuras y permitir un mejor examen microscpico.Ventajas Eficiente para la identificacin de muchos hongos Es rpida y fcil.Desventajas Dificultad para conservar la continuidad entre las esporas, los frutos e hifas debido al riguroso tratamiento.MTODO DE MONTAJE CON CINTA ADHESIVASe aconseja usar cinta adhesiva de alta transparencia. Se hace un doblez de una tira de 4 cm, con el lado adhesivo hacia afuera, y se sostiene entre los dedos pulgar e ndice. El lado adhesivo se presiona firmemente contra la superficie de la colonia del hongo. El micelio areo se adhiere a la superficie y puede separarse del resto. Las tirasde cinta inoculadas se colocan en una gotita de lactofenol-azul de algodn en un portaobjeto.Ventajas. Es superior a los montajes por diseccin porque se conserva la asociacin original de esporas y segmentos de las hifas.Desventajas. Si la cinta no se presiona bien firmemente sobre la superficie de la colonia, la muestra puede no ser la adecuadaDiscusin:En la prctica realiza en laboratorio encontramos las diferencia entre dos mtodos para diferenciar estructuras somticas al microscopio. Las tcnicas utilizadas fueron montaje hmedo y montaje con cinta adhesiva.Con la tcnica de montaje hmedo se utilizo lactofenol azul para teir las estructuras vegetativas en las cuales se observo bien sus septos e hifas ceptadas pero no se pudieron observar las conidias probablemente por el uso del ansa al inocular pero a su favor es una tcnica muy rpida y eficaz para formar colonias de hongos y un examen microscpico.En cambio el mtodo de montaje con cinta adhesiva es ms eficaz por que pudimos observar sus estructuras tanto reproductivas como vegetativas como: crecimiento de hifas, conidiforos, conidias y esporas la nica desventaja es que si a la hora de aplicar la cinta adhesiva no se hacede manera adecuada podra a ver un error en la colonia y as no se observara adecuadamente al microscopio.Conclusin:Conocimos adecuadamente estas dos tcnicas y sus diferencias, su ventajas y desventajas y por esto concluyo que el mtodo de con cinta adhesiva es mejor porque se observaron mucho mejor las estructuras vegetativas adems es ms rpida.Tambin se aprendi a diferencias las estructuras de diferentes hongos con diferentes tcnicas.Preguntas:Qu caractersticas de un hongo se visualizan en un microcultivo?R= podemos observar el crecimiento de las hifas en busca de nutrientes y poder observar las estructuras de reproduccin para la identificacin del hogo.Qu ventajas y desventajas tiene el microcultivo cuando se compara con el cultivo primario?Microcultivo.Ventajas. Observamos las estructuras de reproduccin y se pudo observar el crecimiento de la hifaDesventajas: mtodo muy engorrosa y no es muy adecuado para diagnosticar rpidoCultivo primario.Ventajas: mtodo adecuado para un diagnostico rpido.Desventajas: dificultad para conservar estructuras somticas y vegetativas.Qu estructuras pueden realizarse despus de realizar un microcultivo?R= estructuras de reproduccin.