LIBRO DE ACTAS...Nutrición y crecimiento Efectos de la ración sobre la expresión génica y perfiles de ácidos grasos del músculo de dorada (Sparus aurata). Regulación alostática

LIBRO DE ACTAS

Presentación................................................................................................ 3

Conferencia Inaugural.............................................................................. 4

Comunicaciones OralesNutrición.y.crecimiento.001-015................................................................. 5Sanidad.animal.016-031............................................................................ 21Medio.ambiente.032-039........................................................................... 39Reproducción.040-050............................................................................... 47Economía.052-057..................................................................................... 63Calidad.058-065......................................................................................... 68Tecnología.de.la.producción.066-072........................................................ 78Genética.073-078....................................................................................... 85

PóstersNutrición.y.crecimiento.001-090................................................................. ?Sanidad.animal.091-119.............................................................................. ?Medio.ambiente.120-128............................................................................. ?Reproducción.129-153................................................................................. ?Economía.154-156....................................................................................... ?Calidad.157-167........................................................................................... ?Tecnología.de.la.producción.168-180.......................................................... ?Genética.181-189......................................................................................... ?

Índice Autores.............................................................................................. ?

ISBN.978-84-937611-9-6EditoresFundación.Observatorio.Español.de.AcuiculturaMorris.Villarroel.RobinsonLourdes.Reig.PuigClara.Almansa.LagunasDepósito Legal.B-39.487-2011

Tiraje.105.ejemplares

El libro de Actas del XIII Congreso Nacional de Acuicultura ha sido editado en este formato para minimizar el consumo de papel y su impacto en el medioambiente.

Índice

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Presentación

La. Sociedad. Española. de. Acuicultura. os. da. una. calurosa. bienvenida. al. Congreso. Nacional. de. Acuicultura. XIII,.auspiciado.por.la.Universitat.Politècnica.de.Catalunya.(UPC),.en.la.l’Escola.Superior.d’Agricultura.de.Barcelona.(ESAB).que.este.año.también.celebra.su.100.aniversario..La.ESAB.tiene.su.sede.en.el.Campus.del.Baix.Llobregat,.situado.en.el.Parc.Mediterrani.de.la.Tecnologia..Estamos.seguros.que.todos.se.van.a.sentir.muy.cómodos.en.esta.sede.En.esta.edición.hemos.querido.mantener.el.formato.general.de.los.Congresos.Nacionales.de.los.últimos.años,.en.especial.las.últimas.ediciones.celebradas.en.Madrid,.Vigo.y.Gandía,.con.sesiones.científicas.tradicionales.y.sesiones.técnicas.sobre.temas.concretos..Aunque.hemos.tenido.que.ajustarnos.a.un.panorama.económico.negativo.y.a.la.falta.de.presupuesto.de.muchas. instituciones.que. tradicionalmente.han.patrocinado.nuestras.actividades,. con.mucho.esfuerzo.personal,.especialmente.de.los.organizadores.locales.y.los.Comités.Científico.y.Organizador,.creemos.que.hemos.podido.ofrecer.un.congreso.de.calidad,.a.la.altura.de.las.expectativas..¡Muchas.gracias.a.todos!La.meta.principal.de.los.Congresos.Nacionales.de.Acuicultura.es.proporcionar.un.foro.abierto.para.presentar.los.resultados. de. investigación. y. discutir. sobre. los. últimos. avances. en. diferentes. líneas.. Como. en. otras. ocasiones,.hemos. querido. hacer. énfasis. sobre. las. aplicaciones. técnicas. del. conocimiento,. y. así,. esperemos. que. las. ideas.surgidas.en.las.diferentes.sesiones.del.congreso.puedan.ayudar.a.fomentar.la.investigación.aplicada.y.el.contacto.entre.científicos,.empresarios.y.la.administración.Para.el.XIII.CNA.hemos.elegido.el.lema.“En equilibrio con el medioambiente”..Queremos.hacer.llegar.a.la.sociedad.en.general.que.la.acuicultura.bien.llevada.es.sostenible,.y.además.proporciona.alimento.de.gran.calidad.utilizando.procesos.de.producción.modernos.y.muy.controlados.

El Comité Ejecutivo del Congreso

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Papel de los océanos en la alimentación humana el siglo XXI. Efectos medioambientales de la acuiculturaNaciones.Unidas.estima.que.la.población.mundial.en.el.año.2050.superará.los.9000.millones.de.personas..Las.fuentes.de.alimento.actuales.(agricultura,.ganadería.y.pesquerías).serán.insuficientes.para.satisfacer.la.demanda.de.alimento.mundial..La.disponibilidad.de.agua.dulce.ya.es.escasa.en.algunas.zonas.y.su.disponibilidad.actual.disminuirá.debido.al.cambio.climático..Ello,.junto.a.que.difícilmente.podrá.aumentar.la.extensión.de.terreno.agrícola.actual,.limitará.el.crecimiento.de.la.producción.de.alimento.en.tierra..Igualmente,.la.producción.pesquera.no.podrá.aumentar.ya.que.muchos.stocks.pesqueros.están.actualmente.sobreexplotados..Mientras.que.la.producción.de.alimento.mediante.agricultura.y.ganadería.está.creciendo.a.una.tasa.del.2.%.anual.y.la.producción.pesquera.no.crece,.la.producción.de.alimento.a.través.de.la.acuicultura.marina.tiene.un.crecimiento.de.más.del.7.%.anual..El.rápido.crecimiento.de.la.acuicultura.está.siendo.posible.gracias.al.conocimiento.de.la.biología.de.las.especies.y.tecnológico.y.a.que.es.una.actividad.que.se.está.desarrollando.a.escala.global,. con.múltiples.especies.y.bajo.condiciones.ambientales.muy.diversas..La.acuicultura.marina.es.el.único.sector.productor.de.alimento.cuyo.crecimiento.no.se.verá.limitado.por.la.disponibilidad.de.agua.ni.espacio,.y.por.tanto.podría.suministrar.una.parte.importante.de.la.demanda.de.alimento.mundial.durante.este.siglo..Sin.embargo,.para.que.esto.sea.posible.hay.conseguir.cerrar.el.ciclo.de.producción.(i.e..producir.las.harinas.de.pescado.en.cultivos,.cerrar.el.ciclo.de.vida.en.cautividad),.disminuir.el.nivel.trófico,.desplazar.los.cultivos.a.mar.abierto,.pasar.de.monocultivos.a.policultivos.(incluso.combinando.las.granjas.de.acuícolas.con.granjas.productoras.de.otros.recursos.-e.g..energía).y.minimizar.impactos.en.el.ecosistema.adyacente..Si.se.superan.estos.retos,.probablemente.el.alimento.no.limitará.la.capacidad.de.carga.del.planeta.durante.el.siglo.XXI.

Núria.MarbàInstitut.Mediterrani.d’Estudis.Avançats,.IMEDEA.(CSIC-UIB)

Conferencia Inaugural

COMUNICACIONES ORALES

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Nutrición y crecimiento

Presencia de disruptores tiroideos en piensos para acuiculturaA..Quesada1,.A..Valdehita1,.M.M..Belinchón2,.M.L..Fernández-Cruz1,.J.M..Cerdá-Reverter3,.J.M.Navas1

1Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria (INIA). Departamento de Medio Ambiente. Carretera de La Coruña Km 7.5, E-28040 Madrid. E mail: [email protected] de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, Arturo Duperier 4, E-28029 Madrid3Instituto deAcuicultura de Torre de la Sal, IATS-CSIC. E-12595 Ribera de Cabanes, Castellón

AbstractNormal.function.of.the.endocrine.system.is.essential.for.the.proper.development.and.reproduction.in.most.animals..Substances.interfering.with.its.homeostasis.are.called.endocrine.disruptors.(EDs).and.may.represent.a.risk.for.the.health.of.the.organism..Among.EDs,.those.interacting.with.the.estrogen.receptor.have.been.commonly.studied..Much.less.attention.has.been.paid.to.those.substances.disrupting.the.thyroid.axis,.which.in.fish.plays.critical.roles.in.a.variety.of.biological.functions..In.the.present.work,.32.fish.feeds.were.screened in vitro.for.their.ability.to.disrupt.the.thyroid-axis.at.the.thyroid-hormone.receptor.(TR).level..18.of.them.provoked.a.statistically.significant.activation.of.the.TR,.some.even.provoking.very.high.levels.of.Relative.Transcriptional.Activity.(above.40%)..The.results.suggest.that.fish.feeds.are.a.potential.source.of.thyroid.disruption,.probably.due.to.the.presence.of.hormones,.and.requires.deeper.investigation.

JustificaciónEn.los.últimos.años.se.ha.intentado.disminuir.la.fuente.proteica.de.origen.animal.en.piensos.comerciales.para.acuicultura..Sin.embargo,.todavía.hoy,.estos.piensos.contienen.elevadas.concentraciones.de.harinas.de.pescado.(Mantovani.et al.,.2009)..Este.tipo.de.ingredientes.puede.ser.la.fuente.de.diferentes.hormonas.(Pelissero.y.Sumpter,.1992).que.actúen.como.disruptores.endocrinos..Estos.pueden.causar.alteraciones.en.el.sistema.hormonal.y.provocar.efectos.adversos.en. la.salud.de. los. individuos..Dentro.del.sistema.endocrino,.el.eje.tiroideo. controla. procesos. vitales. clave. para. la. acuicultura. como. son. el. crecimiento,. el. desarrollo. y. la. reproducción. de. los. peces.. A.pesar.de.esto,.hasta.la.fecha,.no.se.ha.estudiado.la.disrupción.a.nivel.tiroideo.causada.por.la.posible.presencia.de.hormonas.tiroideas.o.agonistas.de.sus.receptores.en.los.piensos..Teniendo.en.cuenta.todo.lo.anterior,.el.objetivo.de.este.trabajo.fue.evaluar.in vitro.la.potencial.carga.tiroidea.de.32.piensos.empleados.en.acuicultura.

Material y MétodosExtracción de disruptores endocrinos en piensos para pecesLa. presencia. de. disruptores. tiroideos. se. testó. en. 32. piensos. comerciales.. Se. mezclaron. 0.5. g. de. pienso. con. 2.5. ml. de. metanol. y. tras.sonicación.y.centrifugación.de.las.muestras,.el.sobrenadante.fue.llevado.a.sequedad..El.concentrado.se.resuspendió.en.300.µl.de.metanol.y.se.almacenó.a.-20ºC.hasta.su.uso..Todos.los.piensos.se.testaron.en.un.rango.de.concentraciones.comprendido.entre.0.008.y.16.7.mg.pienso/ml..La.eficiencia.de.la.extracción.se.evaluó.enriqueciendo.un.pienso.con.100.nM.de.T3.y.sometiéndolo.al.mismo.proceso.de.extracción.Línea CelularLa.capacidad.de.disrupción.tiroidea.de.los.32.piensos.se.evaluó.mediante.ensayos.in vitro.empleando.la.línea.celular.PC-DR-LUC,.la.cual.expresa.el.gen.informante.de.la.luciferasa.bajo.el.control.del.receptor.de.hormonas.tiroideas.(TRα,.Jugan.et al.,.2007).Ensayos de viabilidad celular del gen reportero de la luciferasaEl.efecto.de.los.extractos.de.pienso.sobre.la.viabilidad.celular.se.evaluó.fluorimétricamente.con.el.método.de.la.resazurina.que.mide.la.actividad.metabólica.de.las.células.mediante.fluorescencia..A.continuación.se.valoró.la.capacidad.de.inducción.de.la.expresión.del.gen.de.la.lucíferasa.bajo.el.control.del.TRα, midiendo.la.luminiscencia.producida.por.las.células.tras.lisarlas.y.exponerlas.al.sustrato.adecuado,.luciferina.

Resultados y discusiónDieciocho.de. los.32.piensos.analizados. fueron.capaces.de.activar.al.TRα. e.inducir. de. manera. significativa. la. expresión. de. la. luciferasa.. Las. máximas.inducciones.se.observaron.a.las.concentraciones.más.altas.(entre.4.1.y.16.4.mg.pienso/ml.de.medio.de.cultivo).que.causan.un.aumento.en.la.expresión.de.entre.1.5.y.2.5.veces.respecto.de.las.células.que.tan.solo.recibieron.el.vehículo..Uno.de.los.piensos.es.capaz.incluso.de.triplicar.la.expresión.de.la.luciferasa..La.figura.1.muestra.como.ejemplo.el.efecto.causado.por.los.extractos.de.seis.piensos.diferentes.La.máxima.actividad.transcripcional.relativa.(ATR).de.los.piensos,.referida.a.la.máxima.respuesta.obtenida.por.el.control.positivo.(pienso.enriquecido.con.T3),.muestra.que.en.siete.de.los.piensos,.la.ATR.estaba.comprendida.entre.el.10-20%.y.en.otros.cuatro.entre.el.20.y.el.40.%.respecto.del.control.positivo..Asimismo,.dos.de. las.muestras.exhibieron.una.ATR.superior.al.40%..Todos.estos.resultados.indican.la.presencia.efectiva.de.disruptores.tiroideos.en.los.piensos. para. peces.. Las. posibles. implicaciones. de. esta. presencia. para. el.normal.desarrollo,. crecimiento. y.bienestar.animal.deberían.ser.estudiadas.en. profundidad,. así. como. el. origen. preciso. de. los. compuestos. tirogénicos.presentes.en.los.piensos.

BibliografíaBeresford,. N.,. J.V.. Brian,. T.. J.. Runnalls,. J.P.. Sumpter. y. S.. Jobling.. 2011.. Estrogenic. activity. of. tropical. fish. food. can. alter. baseline.vitellogenin.concentrations.in.male.fathead.minnow.(Pimephales promelas)..Environmental Toxicology and Chemistry. 30.(5):.1139-1145.Jugan,.M.L.,.M..Lévy-Bimbot,.M..Pomérance,.S..Tamisier-Karolak,.J.P..Blondeau.y.T..Lévi..2007..A.new.bioluminescent.cellular.assay.to.measure.the.transcriptional.effects.of.chemicals.that.modulatethe.alpha-1.thyroid.hormone.receptor..Toxicology in vitro. 21:.1197-1205.Mantovani,.A.,.C..Frazzoli.y.C..La.Rocca..2009..Risk.assessment.of.endocrine-active.compounds.in.feeds..The Veterinary Journal..182:.392-401.Matsumoto,.T.,.M..Kobayashi,.T..Moriwaki,.S..Kawai.y.S..Watabe..2004..Survey.of.estrogenic.activity.in.fish.feed.by.yeast.estrogen-screen.assay..Comparative Biochemistry and Physiology-Part.C..139:.147-152.Pelissero,.C.,.y.J.P..Sumpter.1992..Steroids.and.“steroid-like”.substances.in.fish.diets..Aquaculture..107:283-301.

AgradecimientosLa.línea.celular.utilizada.en.esta.investigación.fue.donada.por.Juan.Bernal.(CSIC,.Madrid)..Este.trabajo.ha.sido.realizado.en.el.marco.de.los.proyectos.RTA2009-0074-00-00.(JMN),.AGL2010-22247-C03-01.y.CSD.2007-00002.(JM.C-R).

Figura 14Ejemplo. representativo. del incremento. en. la.luminiscencia. y. fluorescencia. en. las. células. expuestas. a.seis.extractos.de.piensos.

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Efectos de la ración sobre la expresión génica y perfiles de ácidos grasos del músculo de dorada (Sparus aurata). Regulación alostática de los fosfolípidosL..Benedito-Palos,.J.A..Calduch-Giner.y.J..Pérez-SánchezInstituto de Acuicultura Torre de la Sal (IATS-CSIC), 12595 Castellón. e-mail: [email protected]

Abstract The.effect.of.ration.size.on.the.muscle.fatty.acid.profile.and.gene.expression.of.key.enzymes.involved.on.tissue.fatty.acid.uptake,.polyun-saturated.fatty.acid.(PUFA).biosynthesis.and.phospholipid.(PL).metabolism.was.addressed.in.juvenile.gilthead.sea.bream..Feed.restriction.was.accompanied.by.a.reduced.muscle.lipid.deposition.and.triglyceride.(TG)/PL.ratio..The.fatty.acid.profile.of.TG.was.not.altered.by.ra-tion.size,.whereas.the.PL.fraction.was.enriched.on.long-chain.PUFA,.especially.docosahexaenoic.acid.(DHA).and.arachidonic.acid.(ARA)..These.changes.on.fatty.profile.were.associated.to.the.up-regulated.mRNA.expression.of.the.lipoprotein.lipase-like,.which.may.favour.the.selective.tissue.fatty.acid.uptake.of.LC-PUFA.from.circulating.lipoproteins..In.parallel,.lipogenic.markers.such.as.Δ9.desaturase.enzymes.were.markedly.down-regulated.with.the.reduction.of.feed.intake..These.findings.highlight.the.allostatic.regulation.of.PL.as.a.conserved.mechanism.throughout.vertebrate.evolution,.which.is.probably.involved.to.the.increased.insulin.sensitivity.with.feed.restriction.

JustificaciónMás.del.70%.de.los.lípidos.del.músculo.de.las.doradas.de.cultivo.son.lípidos.neutros,.principalmente.triglicéridos.(TG),.cuyo.perfil.de.ácidos.grasos.(AG).refleja.en.gran.medida.la.composición.de.la.dieta.(Ballester-Lozano.et al.,.2011)..Los.lípidos.polares.(fosfolípidos,.PL).constituyen.aproximadamente.un.20%.y.su.perfil.se.caracteriza.por.un.elevado.contenido.en.AG.poli-insaturados.de.cadena.larga.(AGP-CL)..Esta.incorporación.selectiva.confiere.a.la.fracción.polar.una.notable.robustez.y.permite.su.uso.como.marcador.de.deficiencias.en.AG.esenciales.(Benedito-Palos.et al.,.2010)..Los.efectos.de.la.temperatura.sobre.el.perfil.de.los.PL.de.membrana.se.conocen.amplia-mente,.aumentando.su.grado.de.insaturación.con.el.descenso.de.la.temperatura..A.su.vez,.en.mamíferos,.está.generalmente.aceptado.que.el.nivel.de.ingesta.es.por.sí.mismo.uno.de.los.factores.con.mayor.incidencia.sobre.el.perfil.de.los.PL.de.membrana..Sin.embargo,.en.vertebrados.inferiores,.y.concretamente.en.peces,.este.proceso.no.se.ha.estudiado.en.detalle,.por.lo.que.el.objetivo.de.este.trabajo.ha.sido.evaluar.en.la.dorada.el.efecto.de.tres.niveles.de.ingesta.sobre.el.perfil.muscular.de.AG.y.la.expresión.de.genes.relacionados.con.el.metabolismo.lipídico..

Material y MétodosJuveniles.de.dorada.(17.g).se.distribuyeron.en.9.tanques.de.500.L.a.razón.de.50.peces.por.tanque.(3.tanques.por.grupo.experimental)..Los.peces.se.alimentaron.durante.11.semanas.con.un.pienso.comercial.(Skretting).con.tres.niveles.de.ingesta:.ad.libitum.(R100),.al.70%.de.sa-ciedad.visual.(R70).y.al.70%.de.saciedad.durante.9.semanas.con.una.fase.final.de.mantenimiento.de.dos.semanas.(R70-20)..Al.final.del.engor-de,.se.tomaron.muestras.de.músculo.esquelético.de.9.animales.por.tratamiento..El.contenido.graso.se.determinó.gravimétricamente.por.el.método.de.Soxhlet..Paralelamente,.se.extrajo.grasa.por.el.método.de.Folch.para.el.análisis.de.clases.lipídicas.y.AG..Las.clases.lipídicas.se.separaron.por.doble.desarrollo.en.cromatografía.de.capa.fina.de.alta.resolución.y.análisis.por.densitometría..Los.ésteres.de.los.AG.se.transmetilaron.utilizando.el.método.de.Christie.y.se.purificaron.por.cromatografía.de.capa.fina..El.perfil.de.AG.de.los.lípidos.totales.(LT),.TG.y.PL.se.determinó.por.cromatografía.de.gases..El.análisis.de.la.expresión.génica.de.Δ-9.desaturasas.(SCD1a,.SDC1b),.Δ-6.desaturasa.(FADS2),.lisofosfatidilcolina.aciltransferasa.2.y.3.(PCAT2,.PCAT3),.fosfatidiletanolamina.N-metiltransferasa.(PEMT),.lipoproteína.lipasa.(LPL).y.LPL-like.se.realizó.mediante.PCR.en.tiempo.real,.utilizando.la.β-actina.como.gen.constitutivo.

Resultados y DiscusiónEl.peso.de.los.animales.disminuyó.de.acuerdo.con.la.reducción.del.nivel.de.ingesta.(Figura.1A)..El.mismo.patrón.se.observó.con.el.con-tenido.graso.del.músculo.esquelético.que.disminuyó.desde.6,5%.en.el.grupo.R100.hasta.3,4%.en.el.grupo.R70-20..Estos.cambios.también.estuvieron.acompañados.de.una.disminución.del.porcentaje.total.de.TG.con.respecto.al.de.PL.

Figura 14(A).Efecto.de.la.ración.sobre.el.peso.de.los.animales.en.cultivo..(B).Expresión.diferencial.de.genes.relacionados.con.el.metabo-lismo.lipídico.entre.los.dos.grupos.extremos.(R100.y.R70-20)..Los.genes.representados.como.círculos.blancos.indican.diferencias.estadísti-camente.significativas.(P<0,05).

La.reducción.de.la.ingesta.también.modificó.el.perfil.de.AG.de.los.LT,.disminuyendo.progresiva.y.significativamente.el.porcentaje.de.14:0,.16:1n-7,.18:1n-9,.18:2n-6,.18:3n-6.y.18:3n-3,.y.aumentando.el.de.22:6n-3.(DHA)..El.perfil.de.los.TG.se.mantuvo.invariable,.mientras.que.el.de.los.PL.mostró.un.descenso.significativo.de.14:0,.17:0.y.la.gran.mayoría.de.AG.poli-insaturados.n-3.y.n-6,.con.la.excepción.del.20:4n-6.(ARA).y.DHA.que.aumentaron.notablemente.con.la.restricción.del.alimento..De.este.modo,.los.cambios.observados.en.los.LT.se.debieron,.no.sólo.a.un.aumento.de.la.proporción.de.PL.en.R70-20.sino.también.a.los.cambios.producidos.en.el.perfil.de.la.fracción.polar..No.se.observaron.cambios.en.la.expresión.génica.de.enzimas.claves.en.la.biosíntesis.de.AGP-CL.(FADS2).y.del.metabolismo.de.los.PL.(PCAT,.PEMT).(Figura.1B)..La.expresión.de.LPL.tampoco.se.vio.afectada.significativamente.por.la.ración,.mientras.que.la.de.LPL-like.aumentó.con.la.restricción.de.la.ingesta..Dada.la.diferente.afinidad.de.los.miembros.de.la.superfamilia.de.las.lipasas.por.los.TG.y.PL,.ello.podría.ser.uno.de.los.mecanismos.a.nivel.molecular.que.facilitase.la.captación.selectiva.de.AGP-CL.circulantes.por.parte.del.músculo.y.su.incorporación.en.la.fracción.polar..Esta.incorporación.también.se.vería.favorecida.por.un.menor.acúmulo.de.TG,.acompañado.de.una.importante.reducción.de.la.expresión.de.SCD1a.y.SCD1b,.considerados.robustos.marcadores.lipogénicos..Todo.ello.configura.una.res-puesta.alostática.altamente.conservada.a.lo.largo.de.la.evolución,.que.aumentarían.con.la.restricción.de.ingesta.la.retención.de.AGP-CL.y.posiblemente.la.sensibilidad.del.músculo.a.la.acción.lipogénica.de.la.insulina.

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BibliografíaBallester-Lozano,.G.F.,.L..Benedito-Palos,.J.C..Navarro,.S..Kaushik.y.J.Pérez-Sánchez..2011..Prediction.of.fillet.fatty.acid.composition.of.market-size.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata).using.a.regression.modelling.approach..Aquaculture..319:81-88.Benedito-Palos,. L.,. J.C.. Navarro,. S.. Kaushik,. J.. Pérez-Sánchez.. 2010.. Tissue-specific. robustness. of. fatty. acid. signatures. in. cultured.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata L.).fed.practical.diets.with.a.combined.high.replacement.of.fish.meal.and.fish.oil..Journal of Animal Science..88:.1759-1770..

AgradecimientosEsta.investigación.ha.sido.financiada.por.los.proyectos.AQUAFAT.(AGL2009-07797).y.PROMETEO.2010/06.

Estructura genómica y caracterización funcional del promotor del transportador de glucosa GLUT4 en fugu (Takifugu rubripes)J.V..Planas.y.R..Marín-JuezDep. de Fisiologia i Immunologia, Facultat de Biologia, Universitat de Barcelona. Av. Diagonal 643, 08028 Barcelona. [email protected]

AbstractEn.peces,.la.expresión.del.promotor.del.transportador.de.glucosa.GLUT4.está.inducida.por.la.insulina..Con.la.finalidad.de.estudiar.la.activación.transcripcional.del.gen.que.codifica.GLUT4.en.peces,.hemos.caracterizado.la.respuesta.del.promotor.de.GLUT4.de.peces.a.la.insulina..Hemos.clonado.1.3kb.de.la.región.5’.flanqueante.del.gen.GLUT4.en.fugu.(Takifugu rubripes).y.hemos.identificado.motivos.de.unión.a.factores.de.transcripción.conservados.en.otros.promotores.de.GLUT4..Mediante.la.clonación.del.promotor.de.GLUT4.de.fugu.en.una.construcción.reporter.con.luciferasa.y.transfectando.de.manera.transitoria.células.musculares.L6,.hemos.comparado.la.actividad.del.promotor.de.fugu.de.GLUT4.con.la.del.promotor.de.GLUT4.de.rata.bajo.condiciones.basales.o.estimuladas.con.insulina..Nuestros.resultados.indican.que.la.expresión.basal.del.promotor.de.fugu.de.GLUT4.es.mayor.que.la.del.promotor.de.GLUT4.de.rata..Sin.embargo,.como.ha.estado.descrito.anteriormente.para.el.promotor.de.rata,.un.tratamiento.con.insulina.provoca.una.disminución.de.la.actividad.del.promotor.de.GLUT4.de.fugu..Actualmente.se.está.caracterizando.su.respuesta.a.distintos.tiempos.y.en.deleciones.del.promotor.

JustificaciónLa. regulación. endocrina. del. metabolismo. de. la. glucosa. y. concretamente. del. papel. que. juegan. los. transportadores. de. glucosa. en.la. homeostasis. de. la. glucosa. en. peces. teleósteos. es. un. área. de. interés. desde. el. punto. de. vista. de. la. utilización. de. dietas. ricas. en.carbohidratos..Nuestro.grupo.fue.el.primero.en.identificar.y.caracterizar.desde.un.punto.de.vista.molecular.la.presencia.en.el.músculo.esquelético.de.un.transportador.de.glucosa.sensible.a.la.insulina.o.GLUT4.(Planas.et al.,.2000)..La.expresión.a.nivel.de.proteína.y.de.mRNA.de.GLUT4.en.músculo.esquelético.de.teleósteos.salmónidos.varía.en.relación.con.los.niveles.plasmáticos.de. insulina. (Capilla.et al.,.2002;.Díaz.et al.,.2007)..Asimismo,.nuestro.grupo.ha.demostrado.que.la.insulina.y.el.IGF-I.actúan.directamente.sobre.las.células.musculares.de.trucha.estimulando.los.niveles.de.mRNA.de.GLUT4.(Díaz.et al.,.2009),.lo.cual.se.relaciona.con.el.efecto.estimulador.de.éstos.péptidos.sobre. la.captación.de.glucosa..Estos. indican.que.en.peces. teleósteos,.al. igual.que.en.mamíferos,. la. regulación.de. la.captación.de.glucosa.por.insulina.viene.mediada.por.el.transportador.de.glucosa.GLUT4..Por.lo.tanto,.nuestros.estudios.demuestran.que.los.peces.teleósteos,.concretamente.los.salmónidos,.no.son.organismos.intolerantes.a.la.glucosa,.al.contrario.de.lo.que.se.ha.postulado.en. la. literatura,.puesto.que.en. los. tejidos.diana.de. la. insulina. (principalmente.el.músculo).existen. los.mecanismos.necesarios.para.llevar.a.cabo.la.homeostasis.de.la.glucosa..De.todas.formas,.no.existe.información.sobre.si.los.efectos.de.la.insulina.incrementando.los.niveles.de.mRNA.(y.posteriormente.de.la.proteína).son.debidos.a.un.efecto.transcripcional..Por.ello,.nos.hemos.propuesto.identificar.y.caracterizar.la.respuesta.a.la.insulina.del.promotor.del.gen.que.codifica.para.GLUT4.en.fugu.(Takifugu rubripes).

Material y MétodosSe.ha.utilizado.el.pGL3.Expression.Vector.System.(Promega,.USA).como.gen.reportero.para.evaluar.la.actividad.transcripcional.de.la.región.5’.del.gen.de.GLUT4.en.fugu..En.este.vector.se.subclonó.un.fragmento.de.DNA.de.fugu.correspondiente.a.1314.nt.5’.del.codón.de. inicio. de. la. traducción. (ATG).. Deleciones. seriadas. del. promotor. de. GLUT4. de. fugu. fueron. generadas. por. PCR. utilizando. primers.específicos. con. dianas. de. restricción. para. Kpn. y. XhoI.. La. línea. de. células. musculares. de. rata. L6. fue. transfectada. con. las. distintas.construcciones.y,.tras.su.estimulación.con.insulina,.las.células.fueron.lisadas.para.determinar.la.actividad.luciferasa.utilizando.el.kit.Dual.Luciferase.reported.sysytem.(Promega).

Resultados y DiscusiónLa.secuencia.correspondiente.al.promotor.del.gen.que.codifica.para.GLUT4.de.fugu.contiene.lugares.de.unión.a.factores.de.transcripción.muy.similares.a. los.del.promotor.de.GLUT4.humano,. incluyendo.MEF2,.PPARg,.MyoD,.etc..Cuando.comparamos. la.actividad.basal.del.promotor.de.GLUT4.de.fugu.con.el.humano.se.evidencia.una.mayor.actividad.basal.del.promotor.de.fugu..Sin.embargo,.la.actividad.de.ambos.promotores.es.inhibida.por.insulina..La.inhibición.de.la.actividad.del.promotor.de.GLUT4.de.fugu.por.insulina.es.dosis-.y.tiempo-dependiente..Estos.resultados.indican.que,.al.igual.que.se.ha.descrito.anteriormente.para.el.promotor.de.GLUT4.en.mamíferos,.la.insulina.inhibe.la.actividad.del.promotor.de.GLUT.de.fugu..El.hecho.de.que.estos.resultados.no.concuerden.con.el.conocido.efecto.estimulador.de.la.insulina.sobre.los.niveles.de.mRNA.de.GLUT4.indica.que.la.regulación.de.la.actividad.del.promotor.de.GLUT4.es.compleja.y.que.posiblemente.intervienen.en.ella. factores.distintos.a. la. insulina..En. la.actualidad.se.está.estudiando. la.regulación.de. la.actividad.del.promotor.de.GLUT4.de.fugu.en.respuesta.a.estímulos.contráctiles.y.a.agonistas.de.PPARg,.al.igual.que.las.regiones.del.promotor.de.GLUT4.de.fugu.responsables.de.su.respuesta.hormonal.

BibliografíaCapilla,.E.,.M..Diaz,.J..Gutierrez.y.J.V..Planas..2002..Physiological.regulation.of.the.expression.of.a.GLUT4.homolog.in.fish.skeletal.muscle..American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism..283:.E44-49.Díaz,.M.,.E..Capilla.y.J.V..Planas..2007..Physiological.regulation.of.glucose.transporter.(GLUT4).protein.content.in.brown.trout.(Salmo.trutta).skeletal.muscle..Journal of Experimental Biology.210:.2346-51.Díaz,.M.,.Y.Vraskou,.J..Gutiérrez.y.J.V..Planas..2009..Expression.of.rainbow.trout.glucose.transporters.GLUT1.and.GLUT4.during.in.vitro.muscle.cell.differentiation.and.regulation.by.insulin.and.IGF-I..American Journal of Physiology Regulatory Integrative Comparative Physiology..296:.R794-800.Planas,.J.V.,.E..Capilla.y.J..Gutiérrez,.J..2000..Molecular.identification.of.a.glucose.transporter.from.fish.muscle..FEBS Letters..481,.266-70.

AgradecimientosEl. presente. trabajo. ha. sido. financiado. por. los. proyectos. MICINN. AGL2009-07006. y. CSD2007-0002.. R.M.J.. ha. recibido. una. beca. del.programa.de.Formación.de.Personal.Investigador.del.MICINN.

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Análisis transcripcional de la respuesta al estrés por confinamiento en doradas (Sparus aurata L.) alimentadas con aceites vegetalesM..Borrel-Roda,.L..Benedito-Palos,.J..Calduch-Giner.y.J..Pérez-SánchezInstituto de Acuicultura Torre de la Sal (IATS-CSIC), Castellón. e-mail: [email protected]

AbstractJuveniles.of.gilthead.sea.bream.were.fed.over.the.course.of.10.weeks.with.plant.protein-based.diets.with.fish.oil.(FO).or.vegetable.oils.(66VO).at.the.66%.of.replacement..At.the.end.of.the.feeding.trial,.no.differences.in.growth.performance.were.found.between.groups,.and.fish.with.an.average.body.weight.of.65-70.g.were.subjected.to.crowding.stress.by.confinement.exposure.at.90-100.kg/m3..Control.fish.(8-9.kg/m3).remained.undisturbed.and.unfed.over.the.course.of.the.72.h.stress.exposure..Stressed.and.control.fish.were.sampled.at.3.h,.24.h.and.72.h.for.liver.transcriptomic.analysis.(7.fish.per.nutritional.and.stress.condition),.using.a.candidate.gene.approach.with.a.wide.range.of.metabolic.and.oxidative.stress.biomarkers..The.nutritional.background.affected.the.gene.expression.pattern.with.a.down-regulated.mRNA.expression.of.stress.oxidative.markers.at.3.h.and.24.h.in.the.66VO.stressed.fish.that.was.followed.by.an.enhanced.oxidative.capacity.and.glutathione.recycling..This.gene.expression.pattern.supports.different.allostatic.equilibrium.after.stress.exposure,.which.agrees.with.a.lower.oxidative.risk.and.fatty.acid.unsaturation.degree.of.fish.fed.vegetable.oils.

JustificaciónEstudios.recientes.demuestran.que.un.alto.nivel.de.sustitución.conjunto.de.harinas.y.aceites.de.pescado.por.ingredientes.vegetales.no.compromete.el.crecimiento.de.juveniles.de.dorada.(Benedito-Palos.et al.,.2007)..Los.efectos.del.historial.nutricional.sobre.la.calidad.del.producto.final.también.han.sido.analizados,.poniéndose.de.manifiesto.la.necesidad.de.una.fase.finalizadora.basada.en.aceites.de.pescado.para.revertir.el.perfil.de.ácidos.grasos.del.filete.a.uno.típicamente.marino.(Benedito-Palos.et al.,.2009)..La.capacidad.de.respuesta.frente.a.determinados.retos.infecciosos.también.se.ve.afectada.por.el.bagaje.nutricional.(Estensoro.et al.,.2011)..La.respuesta.de.marcadores.convencionales.de.estrés.(cortisol,.glucosa).también.es.dependiente.del.historial.nutricional..No.obstante,.no.es.determinante.si.ello.mejora.o.empeora. la.capacidad.de.adaptación.al.estrés..En.este.contexto,.este.trabajo.pretende.analizar. los.efectos.de.altos.niveles.de. sustitución. de. aceites. de. pescado. por. aceites. vegetales. sobre. la. expresión.hepática. de. marcadores. moleculares. de. estrés,. utilizando. una. aproximación.de.genes.candidatos.en.base.a.estudios.previos.con.microarrays.específicos.de.dorada.(Calduch-Giner.et al.,.2010).

Material y MétodosJuveniles.de.dorada.con.un.peso. inicial.de.17.g. fueron.alimentados.durante.10.semanas.con.dos.dietas.isolipídicas.e.isoproteicas.basadas.en.harinas.vegetales..En. la. dieta. FO,. el. aceite. de. pescado. fue. la. única. fuente. lipídica,. mientras. que.en.la.dieta.66VO,.el.66%.del.aceite.de.pescado.fue.sustituido.por.una.mezcla.de.aceites.vegetales..Al.final.del.periodo.de.engorde,.no.se.detectaron.diferencias.de. crecimiento,. y. animales. con. un. peso. medio. de. 65-70. g. fueron. confinados.(90-100. kg/m3). en. cestos. de. 10. L. de. capacidad,. suspendidos. en. tanques. de. 90.L.. Los. animales. utilizados. como. controles. permanecieron. en. los. tanques. de.engorde. (500.L).a.una.densidad.de.8-9.kg/m3..A. tiempos.pre-fijados. (3,.24.y.72.horas.post-confinamiento),.tanto.los.controles.(FO-C,.66VO-C).como.los.animales.estresados. (FO-S,. 66VO-S). (7. animales. por. estado. nutricional. y. tiempo). fueron.muestreados.para.el.análisis.trancripcional.del.hígado.mediante.PCR.cuantitativo.en.tiempo.real..Dicho.análisis.contempló.el.uso.de.marcadores.de.i).metabolismo.energético.(Cox4a,.CPT1,.ECH,.EL,.HADH,.H-FABP,.HL,.HSL,.LAL,.LPL,.UCP1),.ii).factores.de.crecimiento.(IGF-I,.IGF-II),.iii).enzimas.antioxidantes.(CAT,.Cu-Zn-SOD,.GPX1,.GPX4,.GR,.HEPC,.Mn-SOD,.PRDX3,.PRDX5),. iv).chaperonas.moleculares.y.marcadores.de.estrés.del.retículo.endoplasmático.(DER-1,.ERj3,.GRP-170,.GRP-.94,.GRP-75),.v).metabolismo.de.xenobióticos.(AHR1,.CYP1A1,.GST3),.vi).receptores.nucleares.(ER-α,.GCR).y.vii).factores.de.transcripción.(CREB-2,.HIF-1).

Resultados y discusiónAl.comparar.dentro.de.cada.grupo.experimental.animales.control.y.estresados,.se.observaron.importantes.cambios.en.el.transcriptoma.hepático.que.resultaron.especialmente.evidentes.a.las.24.h.post-confinamiento..Esta.cinética.es.similar.a.la.descrita.anteriormente.con.animales.de.la.misma.clase.de.edad.(Calduch-Giner.et al.,.2010),.lo.que.confirma.el.carácter.secuencial.de.las.diferentes.respuestas.adaptativas.de.doradas.sometidas.a.estrés.por.confinamiento..Cuando.se.comparan.entre.sí.los.animales.estresados.(66VO-S.vs.FO-S),.el.patrón.de. expresión. génica. mostró. una. respuesta. diferente. que. varió. en. función. del.tiempo.de.confinamiento. (Figura.1)..A. las.3.h.post-confinamiento,. fueron.pocos.los. genes. que. presentaron. diferencias. significativas,. y. los. que. lo. hicieron. son.marcadores.de.estrés.oxidativo.con.una.menor.expresión.en.el.grupo.66VO-S..Este.patrón.cambió.a.las.24.h,.con.el.aumento.de.la.expresión.de.enzimas.claves.de.la.β-oxidación.de.ácidos.grasos.(ECH,.HADH).y.de.receptores.estrogénicos.(ER-α).y.de.glucocorticoides.(GCR),.al.mismo.tiempo.que.se.mantuvo.baja.la.expresión.de. transportadores. mitocondriales. de. electrones. (Cox4a). y. chaperonas. (GRP-170,.GRP-75).con.función.reparadora.de.daño.oxidativo..A.las.72.h,.persistió.en.el.grupo.66VO-S,.la.sobre-expresión.de.genes.relacionados.tanto.con.la.oxidación.y.captación.tisular.de.ácidos.grasos.(HADH,.LPL).como.con.la.acción.antioxidante.(GR,.PRDX3,.PRDX5)..Dado.que.el.nivel.de.insaturación.de.los.ácidos.grasos.de.los.aceites.vegetales.es.menor.que.el.del.aceite.de.pescado,.este.patrón.de.expresión.génica.se.puede.interpretar.como.el.resultado.de.un.menor.riesgo.oxidativo.y.un.diferente.estado.de.equilibrio.alostático.

Figura 14Correlaciones. del. patrón. de. expresión.génica. en. animales. estresados. (66VO-S. vs. FO-S)..Genes.de.expresión.aumentada.( ).y.disminuida.( ).(prueba.t.de.Student,.P.<.0,05).

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BibliografíaBenedito-Palos,.L.,.A..Saera-Vila,.J..Calduch-Giner,.S..Kaushik.y.J..Pérez-Sánchez..2007..Combined.replacement.of.fish.meal.in.practical.diets.for.fast.growing.juveniles.of.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata L.):.Networking.of.systemic.and.local.components.of.GH/IGF.axis..Aquaculture..267:.199-212..Benedito-Palos,.L.,.J.C..Navarro,.A..Bermejo-Nogales,.A..Saera-Vila,.S..Kaushik,.J..Pérez-Sánchez..2009..The.time.course.of.fish.oil.wash-out.follows.a.simple.dilution.model.in.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata.L.).fed.graded.levels.of.vegetable.oils..Aquaculture..288:.98-105..Calduch-Giner,. J.,. G.. Davey,. A.. Saera-Vila,. B.. Houeix,. A.. Talbot,. P.. Prunet,. M.. T.. Cairns. y. J.. Pérez-Sánchez.. 2010.. Use. of. microarray.technology.to.assess.the.time.course.of.liver.stress.response.after.confinement.exposure.in.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata.L.)..BMC Genomics..11:193.Estensoro,.I.,.L..Benedito-Palos,.O..Palenzuela,.S..Kaushik,.A..Sitjà-Bobadilla,.J..Pérez-Sánchez..2011..The.nutritional.background.of.the.host.alters.the.disease.outcome.of.a.fish-myxosporean.system..Veterinary Parasitology.175:141-150.

AgradecimientosEsta.investigación.ha.sido.financiada.por.los.proyectos.AQUAGENOMICS.(CDS.2007-00002).y.PROMETEO.2010/06..

El LPS de la bacteria Gram negativa Pantoea agglomerans estimula el crecimiento y respuesta inmune en juveniles de trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss) E..Gisbert1,.M..Castillo2,.A..Skalli1,.D..Borrás3,.G..Jiménez2,.L..Tort3.y.K..Andree1

1IRTA, Centre de Sant Carles de la Ràpita (IRTA-SCR), Sant Carles de la Rápita, e-mail: [email protected] 2RUBINUM SA, Av. de La Llana 123, 08191-Rubí3Dept. Biologia Cel·lular, Fisiologia i Immunologia, UAB, 08193-Bellaterra

AbstractThe.incorporation.of.LPS.obtained.from.Pantoea agglomerans was.tested.in.diets.for.rainbow.trout.fingerlings.(4.2.±.0.1.g).in.terms.of.growth.performance.and.innate.immune.response..Fish.were.fed.the.immunostimulant.at.0,.10.and.20.µg.LPS/Kg.BW.during.a.period.of.93.days.at.13ºC..Results.showed.that.LPS.at.both.tested.diets.improved.fish.growth.performance.and.their.proximate.corporal.biochemical.composition..Fish.fed.diets.supplemented.with.LPS.were.ca..15%.larger.in.body.weight.than.those.fed.the.control.diet.(Aller.FuturaTM),.whereas.those.fed.20.µg.LPS/Kg.BW.showed.the.highest.content.of.proteins.and.lipids..Considering.the.haematological.parameters.measured,.the.results.showed.that.those.animals.fed.with.LPS.had.better.nonspecific.immune.response,.as.evidenced.by.the.lysozyme.and.bactericidal.activity.results.in.the.serum,.and.respiratory.burst.activity.in.haemocytes..The.set.of.results.showed.that.the.use.of.LPS.obtained.from.the.Gram-negative.bacteria.P. agglomerans.is.a.good.alternative.to.improve.the.overall.condition.of.the.animals.and.to.encourage.their.growth.

Justificación Uno.de.los.factores.limitantes.de.la.acuicultura,.es.el.desarrollo.de.enfermedades.y.la.existencia.de.limitadas.herramientas.terapéuticas.(vacunas.y/o.inmunoestimulantes).para.su.prevención..En.acuicultura.existen.dos.estrategias.para.aumentar.la.inmunocompetencia.de.los.animales.en.cultivo,.ya.sea.mediante.vacunas.o.dietas.inmunoestimulantes..Si.bien.las.vacunas.pueden.ser.el.método.profiláctico.más.eficaz.de.controlar.enfermedades.en.peces,.su.uso.se.encuentra.limitado.a.sólo.una.pequeña.gama.de.agentes.patógenos,.además.de.presentar.un.reducido.espectro.de.actividad.(Sakai,.1999)..Los.inmunoestimulantes.se.describen.como.sustancias.que.son.capaces.de. potenciar. el. estado. inmunológico. de. los. ejemplares. y. pueden. encontrarse. a. menudo. de. forma. natural. como. componentes. de. la.dieta..Adicionalmente,.en.algunos.trabajos.la.incorporación.de.inmunoestimulantes.en.la.dieta.se.ha.relacionado.también.con.un.mayor.crecimiento.y.mejores.índices.de.conversión.de.alimento.(Sakai,.1999)..Una.gran.parte.de.las.moléculas.que.se.utilizan.en.acuicultura.como.inmunoestimulantes.son.fragmentos.de.la.pared.celular.de.bacterias,.levaduras.y.hongos.a.los.que.el.sistema.inmune.del.animal.responde.como.una.agresión.bacteriana.confiriéndole.a.éste.una.mayor.resistencia.a.infecciones..Los.distintos.compuestos.activos.que.se.extraen.de.las.paredes.celulares.de.microorganismos.son.péptidos.muramil,.lipopéptidos,.aciloligopéptidos.y.lipopolisacáridos.(LPS).en.el.caso.de.bacterias,.y.ß-glucanos.para.levaduras.y.hongos.El. objetivo. del. presente. trabajo. fue. evaluar. el. efecto. de. distintos. niveles. de. inclusión. del. LPS. derivado. de. Pantoea agglomerans. en.juveniles.de.trucha.arcoíris.en.función.del.estado.general.del.animal,.crecimiento.y.estado.inmunológico.

Material y Métodos Juveniles.de.trucha.arcoíris.(4,2.±.0,1.g).se.alimentaron.con.tres.dietas,.una.de.comercial.(Dieta.A;.Aller.FuturaTM,.Aller.Aqua,.Dinamarca).y. la. misma. dieta. en. la. que. se. incorporó. el. LPS. obtenido. de. la. bacteria. Gram. negativa.P. agglomerans. (RUBINUM. SA).. Los. peces. se.alimentaron.con.10.y.20.µg.LPS/kg.biomasa.(Dietas.B.y.C)..La.composición.de.todas.las.dietas.fue:.64%.de.proteína,.12%.de.grasa,.11%.de.cenizas.y.0,5%.de.fibra.según.el.fabricante..El.LPS.disuelto.en.aceite.de.pescado.se.incorporó.a.la.dieta.por.pulverización.según.el.proceso.de.fabricación.del.pienso.(Aller.Aqua)..Cada.dieta.se.analizó.por.triplicado.(400-L.tanque,.125.peces/tanque).durante.93.días..Los.valores.de.temperatura,.oxígeno.disuelto.y.pH.fueron:.13,2.±.0,2.ºC,.8,0.±.0,3.mg/L.y.7,5.±.0,01.(media.±.DE),.respectivamente..Los.tanques.estuvieron.conectados.a.un.sistema.de. recirculación. (IRTAmarTM). con.el.fin.controlar. y.mantener.una.calidad.del.agua..Los.peces.se.alimentaron.a.aparente.saciedad.mediante.alimentadores.automáticos..Al.final.del.ensayo,. todos.los.peces.fueron.medidos.(longitud.estándar.y.peso).y.de.45.ejemplares. (15/réplica).se.analizó.su.composición.bioquímica.corporal.y.se.obtuvo.sangre.para.el.estudio.de.parámetros.inmunológicos:.complemento.hemolítico,.lisozima,.actividad.bacteriolítica.y.explosión.respiratoria..Los.distintos.parámetros.analizados.fueron.comparados.entre.grupos.mediante.una.ANOVA.(SigmaStat.3.1),.aquellos.datos.expresados.en.porcentaje.se.transformaron.mediante.√arcsin.x.y.el.nivel.de.significación.estadística.se.estableció.al.5%.(P.<.0.05).

Resultados y Discusión Al.final.del.estudio,. los.animales.alimentados.con.la.dieta.suplementada.con.LPS.mostraron.un.mejor.crecimiento.en.peso.(P),. talla.(LS).y.tasa.específica.de.crecimiento.en.peso.(TECP).en.comparación.con.los.de.la.dieta.control,.no.encontrándose.diferencias.a.nivel.de.supervivencia.(S).(Tabla.1)..

Tabla 14Supervivencia, crecimiento en peso, talla y tasa específica de crecimiento en peso de juveniles de trucha alimentados con las dietas experimentales (ANOVA, P < 0.05).

Tratamiento experimental S (%) LS (cm) P (g) TECP (% dia-1)Dieta A 99.2.±.0.8 14.1.±.1.1.b 42.5.±.7.6.b 2.1.±.0.1.bDieta B (LPS.10µg/kg.B) 98.4.±.2.1 14.9.±.1.0.a 49.7.±.8.1.a 2.4.±.0.1.aDieta C.(LPS.20µg/kg.B) 98.9.±.0.5 15.0.±.0.9.a 50.1.±.8.2.a 2.4.±.0.1.a

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Asimismo,.los.animales.alimentados.con.las.Dietas.B.y.C.mostraron.un.mayor.porcentaje.de.individuos.de.clases.de.talla.comprendidas.entre.los.51.y.70.g.(38.y.43%,.respectivamente).en.comparación.con.la.Dieta.A.(13%)..La.composición.proximal.de.los.peces.se.vio.afectada.por.la.dieta.suministrada.(Tabla.2).Tabla 24Composición corporal de truchas alimentadas con las dietas experimentales (ANOVA, P < 0.05).

Tratamiento experimental Proteínas (%) Lípidos (%) Carbohidratos (%)

Dieta A 41.4.±.7.1.b 17.6.±.3.5.b 1.14.±.0.16

Dieta B (LPS.10µg/kg.B) 41.2.±.0.5.ab 20.8.±.0.3.ab 1.08.±.0.07

Dieta C.(LPS.20µg/kg.B) 45.6.±.5.0.a 22.7.±.0.8.a 1.15.±.0.15.

En.relación.a.los.parámetros.hematológicos.medidos,.los.resultados.muestran.como.aquellos.animales.alimentados.con.LPS.presentaron.una.mejor.respuesta. inmune. inespecífica. tal.y.como. lo.demuestran. los.resultados.de. lisozima.y.actividad.bactericida.en.suero,.y.de.estallido.respiratorio.en.hemocitos;.si.bien,.el.estado.inmune.de.los.peces.estuvo.ligeramente.más.elevado.en.el.grupo.alimentado.con.la.Dieta.B..El.conjunto.de.los.resultados.muestra.que.el.uso.de.LPS.obtenido.de.P. agglomerans.es.una.buena.alternativa.para.mejorar.la.condición.general.de.los.animales,.además.de.favorecer.su.crecimiento.

BibliografíaSakai,.M.,.1999..Current.research.status.of.fish.immunostimulants..Aquaculture.172:.63-92.

AgradecimientosEste.trabajo.se.ha.ejecutado.dentro.del.proyecto.CENIT-ACUISOST.del.CDTI..Los.autores.expresan.su.gratitud.a.M..Matas,.M..Monllaó,.M..Sastre.y.O..Bellot.(IRTA-SCR),.por.su.asistencia.en.el.desarrollo.del.experimento.y.procesado.de.las.muestras.biológicas.

Mortandad de alevines de tenca por ingestión de semillas de una gramínea invasoraH.J..Pula,.J.J..Pérez,.P..Moreno,.M..Pascual,.J.C..Ramírez,.C..Fallola.Centro de Acuicultura “Vegas del Guadiana”, Ctra. antigua N-V, km 391,7. 06195 Villafranco del Guadiana (Badajoz) [email protected]

Abstract Moderate.mortality.of.80-days.old.offsprings.of.tench.(Tinca tinca).was.detected.in.a.pond.from.Centro.de.Acuicultura.“Vegas.del.Guadiana”..Some.of.the.death.fish.showed.a.fragment.of.plant.material.that.appeared.from.the.mouth..Fish.were.dissected.and.death.was.diagnosed.by.ingestion.of.seeds.of.a.grass,.Echinochloa hispidula,.identified.in.the.pond..This.grass.releases.its.mature.seeds.whilst.adhering.to.the.cover.that.constitutes.the.awned.lemma..This.cover.shows.hooks.preventing.expulsion.of.the.spikelet.after.ingestion..After.diagnosis,.the.plant.and.its.sedes.were.removed.from.the.pond.by.manual.methods.Colonization.of.Echinochloa hispidula.in.aquaculture.areas.could.have.negative.economic.implications.

JustificaciónEl.Centro.de.Acuicultura.“Vegas.del.Guadiana”,.dependiente.de.la.Junta.de.Extremadura,.centra.actualmente.su.producción.en.la.tenca.(Tinca tinca),.mediante.métodos.extensivos.tradicionales.y.mediante.reproducción.inducida.en.la.que.las.larvas.obtenidas.se.mantienen.en.pilas.interiores.durante.las.primeras.cuatro.semanas,.llevándose.posteriormente.a.estanques.exteriores.de.desarrollo..Durante.el.seguimiento.realizado.en.estos.estanques.de.desarrollo.se.detectó.en.el.mes.de.julio.de.2011.una.mortandad.de.alevines.en.uno.de.los.mismos,.de.la.que.se.realizó.un.estudio.y.su.posterior.diagnóstico..La.causa.de.la.mortandad.podría.tener.relación.con.la.aparición.en.el.estanque.de.una.gramínea.invasora..La.tenca.incluye.en.su.dieta.alimentación.vegetal.(Pérez-Bote.et.al.,.1998),.aunque.no.se.ha.descrito.el.consumo.de.semillas..El.consumo.de.semillas.por.peces.es.un.fenómeno.de.escasa.importancia.en.zonas.templadas,.habiéndose.registrado.solo.para.dos.especies.en.la.región.Paleártica.(Correa.et al.,.2007).

Material y métodosLos.estanques.de.desarrollo.de.alevines.de.tenca.son.sometidos.a.control.diario.de.parámetros.ambientales.(oxígeno.y.temperatura)..Semanalmente.se.realizan.análisis.de.calidad.de.las.aguas.de.los.estanques.y.del.agua.de.suministro..Mensualmente.se.toman.muestras.para.evaluar.el.desarrollo.de.los.alevines,.pesando.y.midiendo.los.ejemplares.Así.mismo,.se.registra.cualquier.incidencia.en.los.estanques.y,.cuando.existen.mortandades,.se.realizan.los.análisis.pertinentes.para.determinar.la.causa.Los.estanques.exteriores,.donde.se.desarrollan.las.larvas,.tienen.½.de.lecho.de.tierra.con.la.finalidad.de.que.se.implante.una.masa.de.macrófitas.que.sirven.de.refugio.a.los.peces.y.contribuyan.a.la.producción.natural.de.recursos.alimenticios.para.los.alevines..Durante.el.mes.de.julio.de.2011.se.detectó.mortandad.de.alevines.en.uno.de.los.estanques.de.desarrollo,.recogiéndose.los.individuos.muertos,. algunos. de. los. cuales. presentaban. saliendo. de. la. cavidad. bucal. un. fragmento. de. materia. vegetal.. Los. ejemplares. fueron.diseccionados.y.analizados.

Resultados y discusiónSe.recogieron.un.total.de.36.individuos.muertos.flotando.en.el.agua,.ocho.de.los.cuales.presentaban.el.elemento.vegetal.saliendo.de.la.cavidad.bucal..Una.vez.diseccionados.se.identificó.la.estructura.como.la.espiguilla.de.la.gramínea.Echinochloa hispidula,.presente.en.todos.los.ejemplares.encontrados..La.semilla.de.esta.planta.conserva.una.vez.madura.la.lemao.cubierta.que.posee.garfios.para.facilitar.la.dispersión,.lo.que.dificulta.o.impide.la.expulsión.o.el.tránsito.por.el.digestivo.una.vez.ingerida..El.carácter.emergente.de.esta.gramínea.favorece.la.liberación.de.las.semillas.maduras.a.la.superficie.del.agua,.donde.han.debido.atraer.la.atención.de.los.peces.Esta. planta. invasora,. que. en. Europa. está. asociada. a. cultivos. de. arrozal. (Sanz. Elorza. et al.,. 2004),. se. ha. desarrollado. durante. esta.temporada.en.el.estanque.donde.apareció.la.mortandad,.pudiendo.observarse.semillas.de.la.misma.flotando.en.la.superficie..Una.vez.diagnosticada.la.causa.de.la.muerte.de.los.alevines,.se.procedió.a.eliminar.los.ejemplares.de.E. hispidula.del.estanque..Sin.embargo,.no.se.ha.descrito.la.ingesta.de.semillas.con.efectos.adversos.como.los.expuestos.Las.especies.del.género.Echinochloa.son.plantas.problemáticas.para.los.cultivos.de.arroz.por.su.dificultad.de.control,.debido.en.parte.a.la.gran.cantidad.de.semillas.que.producen,.entre.10.000.y.100.000.por.planta.(Márquez,.1998).y.a.la.germinación.escalonada.del.banco.de.

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semillas..Echinocloa hispidula.es.una.planta.invasora.que.parece.tener.una.buena.capacidad.de.dispersión,.que.forma.bancos.de.semillas.persistentes.en.el.suelo.(Sanz.et al.,.2004).y.presenta.mecanismos.de.dispersión.autócora,.hidrócora.y.zoócora..Este.último.mecanismo.puede.aumentar.la.eficacia.de.la.dispersión.(Mueller.et a.l,.2002).y.probablemente.sea.el.que.explique.la.aparición.de.esta.gramínea.en.el.Centro.de.Acuicultura.“Vegas.del.Guadiana”..El.fenómeno.observado.parece.ser.puntual,.pero.debido.a.la.eficacia.de.la.dispersión,.los.hábitats.que.ocupa.y.la.elevada.producción.de.semillas,.podría.en.determinadas.circunstancias.tener.implicaciones.económicas.en.caso.de.no.tomar.las.medidas.preventivas.pertinentes.

BibliografíaCorrea,.S..B.,.K..O..Winemiller,.H..López-Hernández.y.M..Galetti,.2007..Evolutionary.Perspectives.o.Seed.Consumption.and.Dispersal.by.Fishes..BioScience..57.(9):.748-756.Márquez,.T..1998..Malas.hierbas.en.el.cultivo.de.arroz.en.España..Vida.Rural,.23-26.Mueller,.M..H..&.Van.der.Valk,.A.G.,.2002..The.potential.role.of.ducks.in.wetland.seed.dispersal..Wetlands.22:1.Perez-Bote,.J.L.,.M..Blasco,.E..Da.Silva.y.J.I..Ruiz.de.la.Concha,.1998..Régimen.alimentario.de.la.Tenca.(Tinca.tinca.Linneo,.1758).en.balsas.de.cultivo.extensivo..En:.La.Tenca,.un.recurso.irrenunciable.para.Extremadura..Pub. Cám. Comerc. & Ind. Cáceres,.63:.111-115.Sanz.Elorza,.M.,.E..Dana.Sánchez.y.E..Sobrino,.eds..2004..Atlas.de.las.plantas.alóctonas.invasoras.en.España..Dirección.General.para.la.Biodiversidad..Madrid,.384.pp.

AgradecimientosEste.estudio.ha.sido.financiado.por.los.Fondos.Europeos.de.la.Pesca.Programa.Operativo.Extremadura.2007-2013..Eje.3.medidas.de.interés.público..Proyecto:.Nº.exp.fFEP351CEXT00002..Servicio.para.el.desarrollo.y.optimización.de.técnicas.de.producción.intensiva.de.tencas.en.el.centro.de.acuicultura.Vegas.del.Guadiana.

O-007Cambios en el uso de los nutrientes en la dorada según el régimen diarioO..Felip,.A..Ibarz,.J..Blasco,.M..Martín-Pérez.y.J..Fernández-Borràs.XRAq. Departament de Fisiologia i Immunologia, Facultat de Biologia, Universitat de Barcelona. e-mail: [email protected]

Abstract To.analyse.the.use.of.carbohydrates.and.protein.in.Sparus aurata,. juveniles.of.21.g.were.fed.at.10.am.and.5.pm.combining.2.different.diets.(Fd.and/or.CH).for.2.months,.resulting.in.3.feeding.regimes.(Fd/Fd;.CH/Fd;.Fd/CH,.by.triplicate)..Final.body.weight.significantly.dif-fered.among.regimes,.being.Fd/CH.10%.lower..Main.tissues.(liver,.white.and.red.muscles).revealed.high.differences.among.regimes.7.h.post-feeding,.but.they.were.much.lower.after.24.h..The.distribution.and.fate.of.the.stable.isotopes.labelled.nutrients.(13C-carbohydrate.and.15N-protein).revealed.postprandial.metabolic.changes.due.to.both.factors.(time.of.feeding.and.diet.composition)..A.reduction.in.the.dietary.protein.content.was.compensated.by.more.efficient.N.retention.combined.with.an.increased.use.of.carbohydrates..Nevertheless,.carbohydrates.were.not.used.as.efficiently.afternoon.that.morning.

Justificación Las.necesidades.energéticas.de.la.dorada.varían.a.lo.largo.del.día.(Sánchez-Muros.et al.,.2003).y.los.ciclos.de.alimentación.determinan.ritmos.diarios.en.los.peces..El.uso.de.los.nutrientes.debería.por.ello.variar.en.consonancia..Se.ha.relacionado.un.mejor.crecimiento.con.elevados.niveles.de.proteína.y.lípidos.en.la.dieta,.mientras.que.dietas.ricas.en.carbohidratos.ofrecían.menores.crecimientos..Algunos.estudios.han.mostrado.que.en.la.dorada.los.carbohidratos.pueden.reemplazar.parcialmente.la.proteína,.mejorando.la.tasa.de.crecimiento.y.evitando.pérdidas.de.nitrógeno..En.condiciones.de.mayor.demanda.energética,.como.el.ejercicio.sostenido,.la.dorada.puede.aprovechar.los.carbohidratos.de.la.dieta.con.un.ahorro.proteico.(Felip.et al.,.2009)..En.el.presente.estudio.se.usan.dos.dietas.de.diferente.composición,.una.dieta.comercial.(Fd).y.una.dieta.experimental.rica.en.carbohidratos.(CH),.que.se.alternan.en.dos.tomas.diarias.según.tres.regímenes.de.alimentación.(Fd/Fd;.Fd/CH;.CH/Fd).con.el.objetivo.de.conocer.si.el.uso.de.los.nutrientes.presenta.un.ritmo.diario.y.en.qué.momento.del.día.puede.resultar.más.eficiente.la.reducción.de.los.niveles.de.proteína.de.la.dieta.sustituidos.parcialmente.por.carbohidratos..Para.conocer.el.destino.de.los.nutrientes.(almidón.y.proteína).de.las.dietas.se.usaron.los.isótopos.estables.C13.y.N15.(respectivamente),.anali-zándose.cómo.se.distribuyen.y.retienen.en.los.principales.tejidos.según.el.momento.del.día.

Material y Métodos Juveniles.de.dorada,.de.21±1.g.peso.inicial.y.adaptados.durante.un.mes.a.las.condiciones.de.estabulación.del.Servicio.de.la.Facultad.de.Biología.(24ºC.y.fotoperiodo.12L/12D),.se.distribuyeron.en.tres.grupos.experimentales.(con.3.réplicas.por.grupo)..Se.alimentaron.dos.ve-ces.al.día.(60%.de.la.ración.a.las.10.am.y.40%.de.la.ración.a.las.5.pm).combinando.dos.dietas,.Fd.(Prot:.48%,.Lip:.20%,.NFE:.19.5%,.Energía.Dig.19.5.MJ/Kg).y.CH.(Prot:.37.1%,.Lip:.12.5%,.carbohidratos,.40%,.Energía.Dig,:.17.5.MJ/Kg),.resultando.3.regímenes.de.alimentación.(Fd/Fd;.Fd/CH;.CH/Fd.a.10.am.y.5.pm)..Al.cabo.de.2.meses.de.mantener.esos.regímenes,.se.realizaron.dos.estudios.post-prandiales.del.destino.de.una.ingesta.de.la.respectiva.dieta.marcada.con.isótopos.estables.(3%.C13-almidón.y.1%.N15-proteína)..El.primer.postprandial.(Pp-1),.se.realizó.para.la.alimentación.de.la.mañana.(toma.forzada.a.las.10.am).y.el.segundo.(Pp-2).para.la.tarde.(toma.forzada.a.las.5.pm)..En.ambos.casos.se.administró.un.1%.de.la.ración.mediante.una.cánula.gástrica.y.con.los.peces.ligeramente.anestesiados..En.el.Pp-1.se.sacrificaron.9.doradas.de.cada.régimen.a.las.5.pm.(es.decir,.7.horas.postingesta).y.a.las.10.am.(24.horas.postingesta)..En.Pp-2.se.analizaron.9.doradas.de.cada.régimen.a.las.10.am.(17.horas.postingesta).y.a.las.5.pm.(24.horas.postingesta)..Además.del.peso.y.longitudes.corporales,.se.obtuvieron.muestras.de.sangre,.hígado,.músculo.blanco.y.rojo,.paquete.visceral.y.del.resto.del.pez..Se.analizó.la.composición.tisular.(glucógeno,.lípidos.y.proteína).de.cada.tejido.y.la.incorporación.de.C13.y.de.N15.en.el.total.del.tejido.y.en.sus.com-ponentes.principales.(espectrometría.de.masas.de.relación.isotópica,.IRMS)..Además,.se.analizaron.los.niveles.de.glucosa.y.fracciones.lipídicas.del.plasma.

Resultados y Discusión El.ritmo.de.alimentación.y.la.composición.de.la.dieta.influyeron.en.el.crecimiento.de.los.animales..Así,.en.el.grupo.Fd/CH.fue.un.10%.menor.tras.los.2.meses..La.glucosa.y.lípidos.en.plasma.sólo.fueron.elevados.a.7.h.postingesta.según.la.dieta.ingerida.(hiperglucemia.tras.CH.y.hipertrigliceridemia.tras.Fd),.indicando.un.tránsito.diferente.de.nutrientes.según.la.dieta..Respecto.a.los.tejidos.y.su.composi-ción,.el.hígado.es.mayor.en.los.regímenes.con.la.dieta.CH.por.su.mayor.contenido.de.glucógeno,.sobre.todo.comiendo.CH.por.la.tarde..Las.concentraciones.totales.de.proteínas.y.lípidos.hepáticos.son.muy.similares.en.los.3.grupos..Los.músculos.blanco.y.rojo.presentaron.composiciones.constantes,.sin.grandes.diferencias.de.proteínas.o.de.glucógeno.entre.los.grupos..Con.independencia.de.los.regímenes,.la.composición.de.los.órganos.presentó.diferencias.entre.los.valores.de.10.am.y.de.5.pm,.aumentando.durante.el.día.el.glucógeno.hepático.y.disminuyendo.la.proteína.del.hígado;.en.músculos.la.situación.fue.la.contraria,.aumentó.la.proteína.y.disminuyó.el.glucógeno,.aunque.con.cambios.muy.pequeños..Respecto.a.la.distribución.de.los.isótopos.estables.(Figura.1),.en.el.régimen.Fd/Fd.hay.una.rápida.incorporación.


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del.C13-almidón.a.los.principales.órganos,.pero.sobre.todo.al.hígado.en.forma.de.glucógeno..En.los.regímenes.que.incluyen.a.la.dieta.CH.la.incorporación.fue.menor..Tras.24.horas.queda.un.marcaje.menor.en.estos.regímenes,.indicando.el.uso.preferente.de.los.carbohidratos.para.energía.cuando.incluyen.la.dieta.CH..La.retención.del.N15-proteína.aumentó.en.los.regímenes.con.dieta.CH.en.proporción.directa.a.la.reducción.del.contenido.proteico.de.la.dieta,.siendo.un.efecto.compensador..Podemos.concluir.que.una.dieta.con.mayor.proporción.de.carbohidratos.en.alguna.de.las.dos.tomas.diarias.no.perjudicó.a.la.incorporación.de.las.proteínas.de.la.dieta,.ni.a.la.composición.del.músculo,.ni.al.crecimiento.en.la.toma.de.la.mañana.

BibliografíaSánchez-Muros.M.J.,.Corchete.V.,.Suárez.M.D.,.Cardenete.G.,.Gómez-Milán.E.,.De.la.Higuera.M.,.2003..Effect.of.feeding.method.and.pro-tein.source.on.Sparus aurata.feeding.patterns..Aquaculture.224:.89-103.Felip.O.,.Martín-Pérez.M.,.Ibarz.A.,.Blasco.J.,.Jover.M.,.Fernández-Borràs.J.,.2009..Beneficios.del.ejercicio.sostenido.sobre.el.uso.y.des-tino.de.los.carbohidratos.de.la.dieta.en.la.dorada.En:.Actas del XII Congreso Nacional de Acuicultura:.Pag..110.

AgradecimientosFinanciado.por.los.proyectos.AGL2009-12427.y.2009SGR-410..OF.disfruta.de.beca.doctoral.FPI2007.

Efectos sobre la actividad digestiva de dorada de la sustitución parcial del lípido de la dieta por almidónI..García-Meilán1,.B..Ordóñez-Grande1,.R..Fontanillas2.y.M.A..Gallardo1

1 XRAq. Departament de Fisiologia i Immunologia, Biologia, Universitat de Barcelona. Diagonal 643, 08028, Barcelona, [email protected] Skretting Aquaculture Research Center (ARC), Sjøhagen 3, Stavanger, Norway

AbstractSea.bream.juveniles.were.fed.during.a.period.of.13.weeks.with.4.isoproteic.diets.in.which.part.of.lipid.content.was.substituted.by.starch..After.the.growth.period.and.at.7h.post-feeding,.protease,.lipase.and.α-amylase.activity.were.measured.in.pyloric.caeca.and.proximal.intestine.and.nutrient.absorptive.capacity.was.studied.in.proximal.intestine..Replacement.from.lipid.of.the.diet.by.starch.could.be.done.without.effects.in.the.growth.performance,.but.this.change.of.diet.composition.provokes.modifications.in.intestinal.transit.speed,.enzy-matic.activity.and.nutrient.absorption.capacity.in.order.to.improve.the.use.of.diet..

JustificaciónDado.el.limitado.suministro.de.aceite.de.pescado,.junto.con.el.incremento.de.la.acuicultura.(SOFIA,.2010),.y.teniendo.en.cuenta.que.la.dorada.es.un.omnívoro.ocasional.que.presenta.una.buena.digestibilidad.de.carbohidratos.como.el.almidón.(Felip et al.,.2009),.se.hace.conveniente.testar.el.reemplazamiento.del.lípido.de.la.dieta.por.carbohidrato..El.presente.trabajo.estudia.en.juveniles.de.dorada.los.efectos.de.4.dietas.isoproteicas.con.diferente.nivel.de.sustitución.de.lípidos.por.almidón.sobre.la.actividad.proteasa,.lipasa,.α-amilasa.y.la.capacidad.de.absorción.intestinal.

Material y MétodosDurante.13.semanas.se.cultivaron.juveniles.de.dorada.(de.unos.115g).con.4.dietas.isoproteicas.en.las.que.parte.de.la.proteína.provenía.de.ingredientes.vegetales.(concentrado.de.soja,.gluten.de.trigo.y.de.maíz)..Las.dietas.diferían.en.el.nivel.de.lípido.y.carbohidrato,.se.nombra-ron:.L23S12,.L20S16,.L19S22,.L17S28.en.función.del.porcentaje.de.lípido.(L).y.de.almidón.(S).del.pienso..El.crecimiento.se.realizó.por.triplicado..Los.animales.fueron.alimentados.2.veces.al.día.a.saciedad.y.se.mantuvieron.a.una.temperatura.entre.los.22-24ºC.en.condiciones.de.fotoperiodo.naturales..Ni.el.crecimiento.ni.la.ingesta.se.vieron.afectados..Al.final.del.período.de.crecimiento.se.realizó.un.muestreo.a.las.7h.post-ingesta..Se.midieron.las.actividades.proteolítica.total,.lipasa.y.α-amilasa.en.ciegos.pilóricos.e.intestino.proximal.y.se.determinó.la.capacidad.de.absorción.de.D-glucosa,.L-lisina.y.L-alanina.en.vesículas.de.membrana.apical.obtenidas.de.intestino.proximal.(Santigosa.et al.,.2011)..Las.diferencias.significativas.(p<0.05).entre.los.grupos.se.determinaron.con.un.ANOVA.de.una.vía.y.un.test.de.Duncan..El.software.utilizado.fue.el.PASW.Statistics.17.0.

Resultados y DiscusiónLa.figura.1.muestra.las.actividades.proteolítica.(APT).y.lipasa.medidas.en.ciegos.pilóricos.e.intestino.proximal.a.7h.post-ingesta..La.APT.detectada.en.ciegos.pilóricos.presentó.valores.basales.(Santigosa.et al.,.2008).al.igual.que.la.actividad.lipasa,.indicando.que.el.contenido.intestinal.a.este.tiempo.post-prandial.ha.pasado.ya.a.regiones.intestinales.posteriores..En.intestino.proximal,.la.APT.tendió.a.ser.más.elevada.en.las.doradas.L23S12.y.la.lipasa.en.los.animales.alimentados.con.las.dos.dietas.de.mayor.contenido.lipídico,.indicando.un.enlen-tecimiento.de.la.digestión.y.una.mayor.liberación.enzimática.como.adaptación.a.la.dieta..La.actividad.α-amilasa.no.presentó.diferencias.significativas.entre.grupos.(12.76.±.0.69.mU.α-amilasa·mg.prot-1·min-1),.siendo.más.elevada.que.la.reportada.en.doradas.alimentadas.con.dietas.con.niveles.de.inclusión.de.almidón.inferiores.(Santigosa.et al.,.2008)..Se.estudió,.también,.la.capacidad.de.absorción.de.D-glucosa.y.aminoácidos.en.intestino.proximal.(Fig..2),.los.resultados.indican.una.modulación.del.influjo.de.nutrientes.en.función.de.su.disponibilidad.en.el.intestino,.siendo.dependiente.de.la.velocidad.de.tránsito.intestinal,.del.contenido.del.nutriente.en.la.dieta.y.de.la.actividad.enzimática.digestiva..Así,.el.influjo.de.D-glucosa.incrementó.en.los.animales.L23S12.y.L20S16.y.el.de.L-lisina.tendió.a.disminuir.en.las.doradas.alimentadas.con.la.dieta.menos.lipídica.

Figura 14Actividad.proteolítica.total.(A).y.lipasa.(B).en.ciegos.pilóricos.(barras.negras).y.en.intestino.proximal.(barras.blancas)..Los.re-sultados.se.expresan.como.la.media.±.S.E.M..(n=10)..Las.diferencias.significativas.entre.dietas.se.presentan.con.diferentes.letras.y.entre.regiones.intestinales.con.*.

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Caracterización de las principales enzimas digestivas presentes en la liseta (Chelon labrosus) durante su desarrolloI.M..Pujante1*,.J.M..Mancera1.y.F.J..Moyano2.

1Departamento de Biología, Facultad de Ciencias del Mar y Ambientales, Universidad de Cádiz, 11510 Puerto Real, Cádiz*e-mail: [email protected] de Biología Aplicada, Escuela Politécnica, Universidad de Almería, 04120 La Cañada de San Urbano, Almería

AbstractThe.aim.of.this.study.was.to.determine.if.there.are.changes.in.the.digestive.capacity.of.thick-lipped.grey.mullet Chelon labrosus.during.its.development.to.justify.the.change.inpreference.for.food.(animal.origin.in.early.stages.and.vegetable´s.food.in.adults)..Specimens.of.C. labrosus.of.three.different.weight.range.(Juvenile.1:.28-60.g;.Juvenile.2:.150-199.g;.Adults:.200-690.g).which.was.measured.the.activity.of.various.digestive.enzymes.(pepsin,.amylase.and.alkaline.protease)..This.study.has.confirmed.that.the.existence.of.a.tendency.to.consume.vegetable.foods.throughout.the.development.of.C. labrosus.directly.affects.to.the.digestive.enzyme.system,.adapting.it.to.the.type.of.ingested.food.

JustificaciónLos.teleósteos.pueden.modificar.su.hábito.alimenticio.debido.a.limitaciones.ambientales.o.bien.por.cambios.durante.su.desarrollo..Para.que.este.cambio.sea.eficiente.el.teleósteo.debe.poseer.la.habilidad.de.digerir.alimentos.de.distinto.origen..Diversos.estudios.indican.que.la.liseta.(Chelon labrosus).modifica.su.dieta.a.lo.largo.de.su.desarrollo,.pasando.de.una.dieta.zooplantófaga.en.individuos.pequeños.a.una.dieta.fitobentónica.en.individuos.adultos.(Wassef.et al.,.2001);.y.que.existe.una.relación.entre.las.características.morfométricas.del.aparato.digestivo.y.el.origen.del.alimento.(Drake.y.Arias,.1984)..Sin.embargo,.se.desconoce.si.esta.variación.en.la.elección.del.alimento.es.dependiente.de.cambios.en.el.sistema.enzimático-digestivo.de.la.especie,.aspecto.importante.a.la.hora.de.la.fabricación.de.un.pienso..Este.hábito.alimenticio.tan.variado.hace.que.C. labrosus.sea.una.opción.interesante.para.el.proceso.de.diversificación.en.acuicultura..De.este.modo,.el.objetivo.de.este.trabajo.fue.determinar.si.existe.un.cambio.en.la.capacidad.digestiva.de.dicha.especie.en.relación.a.su.desarrollo,.que.justifique.la.modificación.de.su.hábito.alimenticio.

Material y MétodosSe.utilizaron.33.ejemplares.de.C. labrosus.de.tres.rangos.de.peso.diferente.(Juveniles.1:.28-60.g;.Juveniles.2:.150-199.g;.Adultos:.200-690.g).procedentes.de.una.puesta.obtenida.en.el.Centro.IFAPA.“El.Toruño”.(El.Puerto.de.Santa.María,.Cádiz)..Tras.el.sacrificio.de.los.individuos.se.procedió.a. la.extracción.y. liofilizado.del. tracto.digestivo.completo..Las.muestras. fueron.homogenizadas.manualmente.en.frío.con.agua.destilada..La.cantidad.de.proteína.soluble.presente.en.los.extractos,.las.proteasas.ácidas,.la.actividad.alcalina.así.como.la.actividad.amilasa.fueron.determinadas.según.la.metodología.descrita.anteriormente.(Moyano.et al., 2005)..Para.el.estudio.de.la.actividad.relativa.(óptimos.funcionales).se.utilizó.un.rango.de.pH.entre.1.y.11,.y.un.rango.de.temperatura.entre.10.y.50.ºC..Para.el.análisis.de.la.estabilidad.temporal.se.midió.la.actividad.de.cada.grupo.de.enzimas.a.diferentes.temperaturas.de.pre-incubación.(30,.40,.50.y.60.ºC).e.intervalos.de.tiempo.(0,.30,.60.y.90.minutos).

Resultados y DiscusiónLos.datos.obtenidos.de.actividad.residual.(%).revelaron.que.los.óptimos.de.pH.se.asemejaban.a.los.óptimos.encontrados.en.otras.especies.herbívoras.(Fernández.et al.,.2001)..En.el.caso.de.los.óptimos.de.temperatura,.la.actividad.amilasa.presentó.dos.picos.de.actividad..Esto.podría.indicar.la.presencia.de.isoenzimas,.lo.que.representa.una.ventaja.ecológica.para.la.especie.Los.resultados.de.actividad.pepsina.mostraron.un.descenso.significativo.en.dicha.actividad.a.medida.que.aumentaba.el.tamaño.de.los.individuos.(Tabla.I)..El.hecho.de.que.los.niveles.de.esta.enzima.sean.tan.bajos.podría.deberse.a.que.C. labrosus.no.tiene.un.estómago.bien.definido.y,.por.tanto,.no.acidifica.lo.suficiente.para.activar.esta.enzima..Por.su.parte,.los.niveles.de.actividad.de.proteasas.alcalinas.fueron.significativamente.diferentes.entre.individuos.juveniles.y.adultos,.mostrando.una.tendencia.ascendente.al.incrementar.el.tamaño.de.la.especie.(Tabla.I)..Estos.resultados.coinciden.con.los.propuestos.por.Smoot.y.Findlay.(2000),.quienes.sugerían.que.los.peces.detritívoros.invierten.significativamente.en.proteasas.para.digerir.las.proteínas.disponibles.de.su.dieta..En.este.trabajo.los.resultados.de.actividad.amilasa.(Tabla.I).se.asemejan.a.los.publicados.por.Hofer.y.Schiemer.(1981),.quienes.plantean.que.peces.como.los.ciprínidos.presentan.altos.niveles.de.actividad.carbohidrasa.favoreciendo.tanto.los.hábitos.herbívoros.como.los.carnívoros.

Figura 24Capacidad.de.absorción.medida.en.vesículas.de.membrana.apical.de.intestino.proximal.de.D-glucosa.y.de.L-lisina..Los.resulta-dos.se.expresan.como.la.media.±.S.E.M..(n=12)..Las.diferencias.significativas.entre.dietas.se.representan.con.diferentes.letras.

BibliografíaFelip.O.,.A..Ibarz,.J..Blasco.,.M..Martín-Pérez,.M..Jover.y.J..Fernández-Borrás..2009..Beneficios.del.ejercicio.sostenido.sobre.el.uso.y.destino.de.los.carbohidratos.de.la.dieta.de.dorada..XII Congreso Nacional de Acuicultura,.Madrid..Page:.110.Santigosa,.E.,.J..Sánchez,.F..Médale,.S..Kaushik,.J..Pérez-Sánchez.y.M.A..Gallardo..2008..Modifications.of.digestive.enzymes.in.trout.(O. mykiss).and.sea.bream.(S. aurata)..Aquaculture 282:.68-74.Santigosa,.E.,.I..García-Meilán,.J.M..Valentín,.I..Navarro,.J..Pérez-Sánchez.y.M.A..Gallardo..2011..Plant.oils’.inclusion.in.high.fish.meal-substituted.diets:.effect.on.digestion.and.nutrient.absorption.in.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata L.)..Aquaculture Research.42:.962–974SOFIA..2010..The.state.of.World.fisheries.and.aquaculture..FAO,.pp.1-197.

AgradecimientosEste.proyecto.ha.sido.financiado.por.CICYT.(AGL2008-00783/ACU)..Irene.García-Meilán.ha.recibido.una.beca.de.la.Universitat.de.Barcelona.

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Tabla I4Promedios.de.las.actividades.enzimáticas.digestivas.medidas.en.los.ejemplares.de.C.labrosus.de.los.distintos.grupos.experimentales.

Actividad (U/g peso) Juveniles 1 Juveniles 2 Adultos

Pepsina 0.5.±.0.1a 0.1.±.0.0b 0.0.±.0.0c

Proteasas alcalinas 0.7.±.0.2a 0.9.±.0.2a 1.7.±.0.2b

Amilasa 6.9.±.1.2a 4.7.±.0.9a 7.3.±.1.3a

Este.estudio.ha.confirmado.la.existencia.a.lo.largo.del.desarrollo.de.C. labrosus.de.cambios.en.el.sistema.enzimático-digestivo.que.lo.adapta.al.tipo.de.alimento.ingerido.y.justifica.la.tendencia.al.consumo.de.alimentos.de.origen.vegetal.en.especimenes.adultos..Por.tanto,.aparentemente,.esta.especie.puede.funcionar.como.un.verdadero.herbívoro.y.asimilar.el.material.vegetal.con.relativa.eficiencia,.ya.que.muestra.los.perfiles.de.actividad.enzimática.digestiva.esperados.en.un.herbívoro.

BibliografíaDrake,.P.,.y.A.M..Arias..1984..Biología.de.los.Mugílidos.(Osteichthyes,.Mugilidae).en.los.esteros.de.las.salinas.de.San.Fernando.(Cádiz)..III..Hábitos.alimentarios.y.su.relación.con.la.morfometría.del.aparato.digestivo..Investigación.Pesquera,.48.(2):.337-367.Fernández.I.,.F.J.Moyano,.M..Díaz.y.T..Martínez..2001..Characterization.of.α-amylase.activity.in.five.species.of.Mediterranean.sparid.fishes.(Sparidae,.Teleostei)..Journal.of.Experimental.Marine.Biology.and.Ecology,.262:.1-12.Hofer.R.,.y.F..Schiemer..1981..Proteolytic.activity.in.the.digestive.tract.of.several.species.of.fish.with.different.feeding.habits..Oecologia,.48.(3):.342-345.Moyano.F.J.,.A.M..Barros,.A..Prieto,.J..P..Cañavate.y.S..Cárdenas,.2005..Evaluación.de.la.ontogenia.de.enzimas.digestivas.en.larvas.de.hurta,.Pagrus auriga.(Pisces:.Sparidae)..AquaTIC,.22:.39-47.Soomt. J.C.,. y. R.H.. Findlay.. 2000.. Digestive. enzyme. and. gut. surfactant. activity. of. detritivorous. gizzard. shad. (Dorosoma cepedianum)..Canadian.Journal.of.Fisheries.and.Aquatic.Sciences,.57.(6):.1113-1119.Wassef. E.A.,. M.H.. El. Masry,. y. F.R.. Mikhail.. 2001.. Growth. enhancement. and. muscle. structure. of. stripped. mullet,. Mugil cephalus L.,.fingerlings.by.feeding.algal.meal-based.diets..Aquaculture.Research,.32.(1):.315-322.

AgradecimientosLos.autores.agradecen.a.D..José.Mª.Naranjo.y.al.Centro.IFAPA.“El.Toruño”.(El.Puerto.de.Santa.María,.Cádiz).la.cesión.de.los.animales..Este.trabajo.ha.sido.subvencionado.por.el.proyecto.PO7-RNM-02843.(Consejería.de.Innovación,.Ciencia.y.Empresa..Junta.de.Andalucía).de.JMM.

Ontogenia digestiva y visual de la merluza Europea, Merluccius merluccius durante la fase endo-exotróficaC..Sarasquete1,.J.B..Ortiz-Delgado1,.J..Otero2,.R..Cal2,.M.J..Lago2,.F.J..Sanchez2,.J..Iglesias2.1Cadiz/ES; 2Vigo/ES

AbstractHisto-physiological.events.during.the.European.hake,.Merluccius merluccius.larvae.development.are.showed..During.lecitotrophic.phase.(0-5.dph),.the.mouth.and.the.anus.were.closed..Larvae.4.dph.present.well.differentiated.and.pigmented.eyes.and.the.notochord,.trunk.and.dorsal.part.of.the.digestive.tract.was.spotted.with.melanophores..When.mouth.opening.and.endogenous.and.first.exogenous.feeding.coexisted.(from.6.dph),.most.systems,.organs.and.tissues.(digestive,.liver,.exocrine.pancreas,.eyes,.swim.bladder),.were.sufficiently.well.differentiated,.and.it.may.be.compatible.with.an.adequate.growth.and.development.from.this.time.onwards..The.yolk-sac.assures,.via.periblast.or.yolk.syncytial.layer,.the.nutritive.supply.of.the.larvae.during.organogenesis,.morphogenesis.and.growth..At.10.dph,.remaining.yolk-sac.and.functional.liver.are.connected;.stomach.gastric.glands.are.not.differentiated,.but.lipid.absorption.in.anterior.intestine.and.pinocytotic.uptake.and.posterior.intracellular.protein.digestion.within.posterior.intestine.are.detected..Swimbladder.and.visual.activity.(cones.and.rods)).are.well.developed.and.enough.functional.in.hake.larvae.10.dph..

JustificaciónLa.merluza.Europea,.Merluccius merlucius.es.una.de. las.especies.demersales.mas.abundantes.en. las.pesquerías.españolas..Debido.al.progresivo.descenso.de.capturas.desde.los.años.60,.su.alta.tasa.de.crecimiento,.adaptación.a.climas.templados.y.buen.precio.en.el.mercado.(Alheit.&.Pitcher,.1995;.Palomera.et.al.,.2005).es.considerada.como.una.especie.prometedora.para.la.diversificación.de.peces.en.Acuicultura.(Iglesias.et.al.,.2010)..En.la.actualidad.existe.un.stock.de.reproductores.en.Brekke.(Noruega).y.otro.establecido.desde.2008.en.las.instalaciones.españolas.del.IEO.de.Vigo.(Bjelland.&.Skiftesvik,.2006;.Iglesias.et.al.,.2010),.obteniéndose.puestas.y.larvas.viables..Sin.embargo,.para.la.diversificación.de.especies.acuícolas.es.necesario.conocer.las.características.biológicas,.fisiológicas.y.el.patrón.de.desarrollo.larvario.y.alimentación.y.crecimiento.de.las.nuevas.especies.objeto.de.cultivo.(Zambonino.et.al.,.2008)..Se.muestran.aspectos.morfo-histológicos,.histoquímicos.y.funcionales.durante.el.desarrollo.larvario.de.la.merluza.cultivada,.durante.la.fase.de.alimentación.endógena.(0-5.dph).y.en.la.transición.endo-exotrófica.(6-10.dph),.especialmente.sistema.digestivo.y.actividad.visual,.que.permitirá.sentar.las.bases.para.la.obtención.de.larvas.y.juveniles.de.calidad,.siempre.y.cuando.se.establezcan.la.zootecnia.óptima.del.cultivo..

Material y MétodosLos.reproductores.de.merluza.Europea,.Merluccius merluccius.proceden.de.pesquerias.de.Galicia.y.se.encuentran.estabulados.en.las.instalaciones.del.IEO.(Vigo,.NO,.España)..Los.protocolos.zootécnicos.para.conseguir.su.reproducción.y.cultivo.larvario.en.cautividad.han.sido.descritos.por.Iglesias.(2010)..Larvas.desde.la.eclosión.(0.dph).hasta.10.dph.han.sido.fijadas.(n=.15.x.día).en.formol.tamponado.con.fosfatos.0.1.M.(pH:.7.2).y.procesados.para.su.inclusión.convencional.en.parafina..Cortes.seriados.de.5-6.µ.son.utilizados.para.el.estudio.morfohistológico,.utilizando.Hematoxilina-Eosina/HE.y.Hematoxilina-VOF.(Sarasquete.y.Gutiérrez,.2005)..Para.el.estudio.histoquímico.de.carbohidratos.y.proteínas.se.han.utilizado.las.técnica.del.PAS,.diastasa-PAS,.Azul.Alcián.(pH.0.5,.1.y.2.5).y.Azul.de.Bromofenol,.así.como.técnicas. especificas. para. localizar. proteínas. ricas. en. diferentes. aminoácidos. (arginina,. triptófano,cisteina,. cistina),. optimizadas. para.larvas.de.peces.por.nuestro.grupo..Los.lípidos.neutros.son.visualizados,.como.glóbulos.o.vacuolas,.al.ser.disueltos.durante.el.proceso.de.inclusión.en.parafina,.y.son.conservados.mediante.una.postfijación.con.tetróxido.de.osmio.(Zambobino.et.al.,.2008)..

Resultados y DiscusiónDurante.el.cultivo. larvario.de. la.merluza.Europea.la.captura.de.presas.está.garantizada.muy.pronto,.durante. la.ontogenia,.debido.al.desarrollo.de.mandíbulas,.dientes,.aletas.(Palomera.et.al.,.2005;.Bjelland.&.Skifftesvik,.2006),.sistema.digestivo.y.órganos.sensoriales..

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Durante.la.fase.endo-exotrófica,.coincidiendo.con.la.apertura.bucal.y.anal.se.produce.un.incremento.de.amplitud.del.tracto.digestivo,.absorción.lipídica,.micropinocitosis.proteica.y.aparición.de.vellosidades.intestinales.que.facilitan.la.ingestión,.retención.y.digestión.de.las.presas.(6.dph)..La.funcionalidad.de.la.vejiga.natatoria. (rete mirabile.y.glándulas.de.gas).durante.la.fase.endo-exotrófica.facilita.el.equilibrio.y.natación.y.la.captura.de.presas.es.mas.eficiente..Las.larvas.de.merluza.se.alimentan.durante.el.día.y.la.noche,.aunque.es.una.especie.mas.crepuscular.(Morote.et.al.,.2011)..El.primer.indicio.de.la.funcionalidad.visual.es.la.presencia.de.melanina.en.la.eyecup.y.la.diferenciación.paralela.de.la.neuroretina.(4.dph):.los.fotorreceptores.tipo-conos.y.células.ganglionares.y.posteriormente.las.neuronas.de.la.capa.nuclear.interna,.mostrando.sub-estratificación.(6.dph),.y.finalmente.se.desarrollan.los.bastones.(10dph);.determinantes.durante.el.cambio.de.habitat.y,.por.tanto,.en.la.adaptación.a.bajas.intensidades.de.luz.según.diferentes.autores..

BibliografíaAlheit.J.,.Picher.T.J..1995..Hake,.fisheries,.ecology.and.markets..Fish.and.fisheries.series.15..Chapman.&.Hall,.London,.487.pp.Bjelland.R.M.,.Skiftesvik.A.B..2006..Larval.development.in.European.hake.(Merluccius merluccius.L).reared.in.a.semi-intensive.culture. Aqua Res,.37:.1117-1129..Iglesias.J.,.Lago.M.J.,.Sanchez.F.J.,.Cal.R..2010..Capture,.transport.and.acclimation.to.captivity.of.the.European.hake,.Merluccius merluccius:.preliminary.date.on.feeding.and.growth..Aqua Res..41:.607-609.Morote.E.,.Olivar.M.P.,.Bozzano.A.,.Villate.F.,.Uriarte.I..2011..Feeding.selectivity.in.larvae.of.the.European.hake.(Merluccius merluccius).in.relation.to.ontogeny.and.visual.capabilities..Mar. Biol..(en.prensa).Palomera.I.,.Olivar.M.P.,.Morales-Nin.B..2005..Larval.development.and.growth.of.the.European.hake.in.the.NW.Mediterranean..Sci Mar,.69:.221-258..Sarasquete.C.,.Gutiérrez.M..2005..New.Tetrachromic.VOF.Stain.(Type.III-G.S).For.Normal.and.Pathological.Fish.Tissues..Eur. J. Histoch.,.49(2):.105-114.Zambonino.J.,.Gisbert.E.,.Sarasquete.C.,.Navarro. I.,.Gutiérrez.J.,.Cahu.C.L..2008..Ontogeny.and.physiology.of. the.digestive.system.of.marine.fish.larvae..In.“Feeding and Digestive Functions of Fish”..Science.Publishers,.Inc,.Enfield.(NH),.Jersey,.Plymouth,.pp:.281-348..

AgradecimientosDeseamos.expresar.nuestro.sincero.agradecimiento.al.personal. técnico.de.apoyo.del. IEO.e. ICMAN.CSIC,.así.como.a. todo.el.soporte.(infraestructura,.recursos.económicos).de.ambas.Instituciones.para.la.realización.del.trabajo.

Cultivo del mero (Epinephelus marginatus) en el litoral almeriense: Evolución anual de parámetros biométricos y composición muscular M.I..Sáez1,.F..Gonzálvez1,.G..Navarro1,.J.L..Guil-Guerrero2,.T.F..Martínez1.y.M.D..Suárez1*1Departamento de Biología Aplicada. Universidad de Almería, 04120 Almería (Spain). *[email protected]Área de Tecnología de los Alimentos. Universidad de Almería, 04120 Almería (Spain)

AbstractThe.dusky.grouper,.Epinephelus marginatus,. is.a.fish.species.with.excellent.quality,.a.desirable. taste,.and.consequently,. it. reaches.a.high.market.value..These.facts.make.this.species.a.potential.candidate.for.intensive.aquaculture..The.aims.of.this.study.were.basically.providing.new.knowledge.about.morphological.and.nutritional.features.of.dusky.grouper.over.a.long.production.cycle,.in.a.fish.farm.based.in.off-shore.cages.in.the.Mediterranean..Juvenile.grouper.with.a.average.initial.weight.of.535±30.g.were.introduced.in.a.cage-based.fish.farm.(Acuisleta.S.L,.La.Isleta.del.Moro,.Almería,.Spain).during.a.experimental.period.of.20.months..The.biometric.parameters,.weight.and.muscle.composition.were.seasonally.influenced.notably,.showing.the.highest.growth.in.spring,.although.the.proportion.of.fillets,.a.factor.that.determines.further.the.profitability.of.the.product.increased.with.age,.regardless.of.the.season.considered..It.was.also.observed.an.important.seasonality.in.the.chemical.composition.of.muscle,.protein.content.being.highest.in.spring.and.in.summer.of.lipids,.showing.minimum.values.for.both.parameters.in.fall.

JustificaciónEl.mero.Epinephelus marginatus.(Lowe,.1834),.es.una.especie.con.una.calidad.excelente,.un.sabor.agradable.y,.en.consecuencia,.alcanza.un.alto.valor.de.mercado..Se.ha.descrito.que.esta.especie.tiene.un.rápido.crecimiento.con.muy.buenos.índices.de.conversión.y.es.resistente.en.ambientes.hostiles.(Millamena,.2002),.estas.características.junto.a.la.sobreexplotación.de.esta.especie.en.el.área.mediterránea.(Russo.et al.,.2009).la.hacen.buena.candidata.para.la.acuicultura.intensiva..En.los.últimos.años.se.ha.realizado.un.progreso.considerable.en.su.reproducción.inducida.y.cultivo.larvario,.sin.embargo,.la.investigación.realizada. sobre. la. fase. de. crecimiento. y. engorde. es. escasa. (Glamuzina. et al., 2001).. Algunos. estudios. con. meros. en. tanques. han.demostrado.un.buen.potencial.de.crecimiento.a.altas.temperaturas.y.salinidades.(Gracia.López.y.Castello.Orvay,.2003)..Estos.resultados.preliminares.son.prometedores,.y.fomentan.nuevos.estudios.centrados.en.el.cultivo.de.esta.especie.El.objetivo.del.presente.estudio.es.la.evaluación.de.la.adaptación.del.mero.a.su.cultivo.en.jaulas.en.el.litoral.almeriense.durante.un.ciclo.largo.de.producción.y.la.influencia.de.la.época.del.año.sobre.las.características.morfológicas.y.nutricionales.que.repercuten.en.la.calidad.de.su.músculo.

Material y MétodosJuveniles.de.mero,.procedentes.de.la.cría.en.cautividad.en.el.centro.IFAPA.“El.Toruño”,.con.un.peso.inicial.de.535±30.g.fueron.introducidos.en.jaulas.flotantes.en.las.instalaciones.de.Acuisleta.S.L..(La.Isleta.del.Moro,.Almería).durante.un.periodo.experimental.de.20.meses..Los.peces.fueron.alimentados.con.una.ración.diaria.total.del.1%.del.peso.corporal.durante.todo.el.experimento.con.una.dieta.comercial.(47%.de.proteína.y.20%.de.lípidos).Trimestralmente,.se.tomaron.muestras.de.4.peces.después.de.un.período.de.24.h.de.ayuno.y.se.sacrificaron.con.una.sobredosis.de.aceite.de.clavo..En.estos.ejemplares.se.determinaron.medidas.biométricas.y.composición.química.del.músculo.en.los.distintos.periodos...Los.índices.morfométricos.como.factor.de.condición.[100.x.(peso./.total.longitud3)],.índice.craneal.(longitud.de.la.cabeza./.longitud.total),.índice. de. agilidad. (longitud. ágil. /. altura. máxima),. e. índices. hepatosomático. (IHS). y. digestivosomático. (IDS). se. calcularon.a. partir. de.mediciones.lineales.y.de.peso..Tras.la.eliminación.de.la.piel,.los.filetes.enteros.fueron.diseccionados.y.pesados...y.se.calculó.el.rendimiento.de.filete.(RF).y.los.músculos.liofilizados.se.trituraron.y.se.analizaron.de.acuerdo.a.AOAC.(2000).

Resultados y discusiónLas. observaciones. realizadas,. relativas. a. la. ausencia. de. mortalidad. y. de. canibalismo,. y. a. la. apariencia. saludable. de. los. individuos.muestreados,.nos.permiten.deducir.que.la.adaptación.de.esta.especie.al.cultivo.en.jaulas.ha.sido.favorable,.a.pesar.de.que.los.incrementos.de.peso.obtenidos.no.han.sido.muy.altos..Sin.embargo,.sería.necesario.considerar.que.no.existe.todavía.un.conocimiento.completo.de.las.

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condiciones.óptimas.de.cultivo.en.esta.fase.de.crecimiento..La.época.del.año.ha.influido.de.forma.significativa.sobre.el.peso,.los.índices.biométricos.y.la.composición.del.músculo.de.los.meros,.observándose.los.mayores.crecimientos.en.primavera..El. índice.craneal.(IC).aumentó.considerablemente.durante.el.experimento.(de.26.a.33%)..Por.el.contrario,.el.índice.de.agilidad.(IA).se.redujo.significativamente,.lo.cual. indica.un.ligero.ensanchamiento.de.los.peces.durante.todo.el.período.experimental..Los. índices. IDS.y. IHS.mostraron.valores.cercanos.a.2.y.el.0,5%,.respectivamente,.en.el.periodo.inicial,.y.estos.parámetros.aumentaron.significativamente.durante.los.primeros.meses..A.partir.de.entonces,.IDS.ha.tendido.a.estabilizarse.y.por.lo.tanto.no.hubo.diferencias.significativas.entre.los.valores.iniciales.y.finales..Esta.tendencia.no.fue.similar.para.IHS,.y.los.valores.finales.fueron.más.altos.que.los.iniciales..El.rendimiento.de.filete.(24,6±1,5).fue.muy.bajo.en.comparación.con.otras.especies.mediterráneas.cultivadas.(de.20.a.26%)..Los.valores.de.este.índice.aumentaron.ligeramente.entre.las.muestras.iniciales.y.finales,.esto.muestra.un.efecto.positivo.sobre.el.crecimiento.y.la.rentabilidad.del.producto.También.se.ha.observado.una.marcada.estacionalidad.en.la.composición.química.del.músculo,.siendo.el.contenido.de.proteína.máximo.en.primavera.y.el.de.lípidos.en.verano,.mostrando.valores.mínimos.para.ambos.parámetros.en.el.otoño..En.general,.el.contenido.de.lípidos.fueron.claramente.inferiores.(entre.0,38.y.0,70%.sf).con.respecto.a.otros.peces.cultivados.como.la.dorada.(5%).o.la.lubina.(6%).pero.similar.al.obtenido.para.la.corvina.(1.06%).(Grigorakis,.2007).

BibliografíaGlamuzina,.B.,.Glaviβ,.N.,.Skaramuca,.B.,.Koβul,.V.,.Tutman,.P..2001..Early.development.of.the.hybrid.Epinephelus costae ×E. marginatus ..Aquaculture.198:.55–61..Gracia.López,.V..y.Castelló-Orvay,.F..2003..Preliminary.data.on.the.culture.of.juvenile.of.the.dusky.grouper,.Epinephelus marginatus.(Lowe,.1834)..Hidrobiológica.13:.321-327.Grigorakis.K..2007..Compositional.and.organoleptic.quality.of.farmed.and.wild.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata).and.sea.bass.(Dicentrarchus labrax).and.factors.affecting.it:.A.review..Aquaculture.272:.55-75.Millamena,.O..M..2002..Replacement.of.fish.meal.by.animal.by-product.meals.in.a.practical.diet.for.growout.culture.of.grouper.Epinephelus.coioides..Aquaculture.204:75–84.Russo,.T.,.Boglione,.C.,.Marzi,.P.,.Cataudella,.S..2009..Feeding.preferences.of.the.dusky.grouper.(Epinephelus marginatus,.Lowe.1834).larvae.reared.in.semi-intensive.conditions:.A.contribution.addressing.the.domestication.of.this.species..Aquaculture.289:.289–296

AgradecimientosEsta.investigación.ha.sido.subvencionada.por.los.“Planes.Nacionales.de.Acuicultura.(JACUMAR)“,.en.colaboración.con.centros.del.IFAPA.“El.Toruño“.(Cádiz),.Náutico.Pesquero.(Almería).y.SL.Acuisleta.(La.Isleta.del.Moro,.Almería)..M.I..Sáez.recibió.una.beca.predoctoral.de.la.Universidad.de.Almería.

Composición nutricional de presas alternativas para su uso en la alimentación de paralarvas de pulpo común (Octopus vulgaris) M.V..Martín1,.D..Reis2,.I..García-Herrero1,.C..Rodríguez3,.R..Riera4,.A..Sykes2,.B.C..Felipe1,.E..Rodríguez5,.M..Samper1.y.E..Almansa1.1Centro Oceanográfico de Canarias, Instituto Español de Oceanografía, C/General Gutiérrez, 4, 38003 Santa Cruz de Tenerife, España. [email protected] CCMar, Campus de Gambelas, Faculdade de Ciéncias e Tecnologia, Universidade do Algarve, 8005-139, Faro, Portugal3 Dpto. Biología Animal, Facultad de Biología, Universidad de La Laguna, 38206, La Laguna, Tenerife 4 Centro de Investigaciones Medioambientales del Atlántico (CIMA SL), Arzobispo Elías Yanes, 44, 38206 La Laguna, Tenerife5 Dpto. de Química Analítica, Nutrición y Bromatología, Facultad de Química, Universidad de La Laguna, 38206, La Laguna, Tenerife

AbstractThe.common.octopus.(Octopus vulgaris).is.a.promising.cephalopod.species.for.aquaculture.industry..However,.its.planktonic.stage.(par-alarvae).is.identified.as.the.largest.bottleneck.due.to.the.inexistence.of.a.suitable.diet..The.aim.of.the.present.study.was.to.characterize.nutritional.composition.of.initial.Octopus.paralarvae.compared.to.several.selected.live.preys.(Artemia sp..nauplii.and.juveniles,.Palaemon elegans.zoeae,.Plesionika narval.eggs.and.Grapsus adscensionis.zoeae),.in.order.to.assess.their.suitability.for.paralarvae.feeding..Initial.paralarvae.presented.high.contents.of.moisture.and.total.protein.only.comparable.to.those.of.P. narval.eggs..Paralarvae.also.showed.a.high.content.of.phospholipids.and.n-3.HUFA.(20:5n-3.and.22:6n-3),.whereas.n-3.HUFA.contents.of.live.preys.were.globally.low,.with.only.P. elegans.zoeae.reaching.a.similar.level..Finally,.the.oligoelement.composition.of.paralarvae.showed.a.high.content.in.phosphorus.also.present.in.P. narval,.and.a.remarkable.richness.in.copper.that.may.also.indicate.a.particular.nutritional.requirement.of.an.element.which.is.almost.absent.in.all.live.preys.studied.

JustificaciónEl.pulpo.común.(Octopus vulgaris).constituye.una.de.las.especies.más.prometedoras.de.cara.a.su.desarrollo.para.la.acuicultura..Esta.especie.reúne.una.serie.de.características.que.la.sitúan.como.candidata.idónea.para.su.cultivo.comercial,.entre.las.que.destacan.la.fácil.adaptación.a.la.cautividad,.sus.tasas.de.crecimiento.y.reproducción.elevadas,.y.su.alto.precio.en.el.mercado..Sin.embargo,.en.la.actuali-dad,.la.fase.limitante.en.el.cultivo.de.esta.especie.se.halla.en.la.paralarva.(estadio.planctónico.posterior.a.la.eclosión.del.huevo.y.previo.a.la.fase.bentónica),.en.la.que.se.alcanzan.altas.mortalidades.debido.entre.otras.causas,.a.la.ausencia.de.una.dieta.viva.adecuada.en.tama-ño.y.composición.nutritiva..Por.todo.ello,.el.principal.objetivo.de.este.estudio.fue.caracterizar.la.composición.nutricional.de.las.paralarvas.recién.eclosionadas.así.como.de.algunas.presas.vivas.seleccionadas.por.su.posible.uso.como.alimento.de.las.paralarvas,.y.entre.las.que.se.encuentran.nauplios.y.juveniles.de.Artemia sp.,.zoeas.de.Palaemon elegans y Grapsus adscensionis y.huevos.de Plesionika narval.

Material y MétodosLas.paralarvas.de.pulpo.fueron.obtenidas.a.partir.de.ejemplares.adultos.capturados.en.aguas.costeras.de.Tenerife.y.mantenidos.en.las.instalaciones.de.la.Planta.de.Cultivos.del.Centro.Oceanográfico.de.Canarias.(IEO)..Los.juveniles.de.Artemia sp..(INVE.Aquaculture,.Bél-gica).fueron.cultivados.con.Tetraselmis chuii.durante.7.a.10.días..Asimismo,.tanto.nauplios.como.juveniles,.fueron.enriquecidos.con Nan-nochloropsis gaditana durante.24.h,.para.incrementar.su.valor.nutricional..Los.individuos.adultos.de.P. narval, P. elegans y G..adscensionis.fueron.capturados.en.la.costa.de.Tenerife.y.mantenidos.en.las.mismas.instalaciones.hasta.la.obtención.de.la.puesta..La.composición.proximal.(humedad,.cenizas,.lípido,.proteína.y.nitrógeno.no.proteico),.el.perfil.de.clases.lipídicas.y.de.ácidos.grasos.y.el.contenido.en.oli-goelementos.fueron.determinados.en.muestras.de.paralarvas.recién.eclosionadas,.nauplios.y.juveniles.de.Artemia.sp.,.zoeas.de.P. elegans y G. adscensionis.y.huevos.de.P. narval.(Horwitz,.1980;.Christie,.1982;.Olsen.y.Henderson,.1989,.Astorga.España.et.al.,.2005,.AOAC,.2006).en.los.laboratorios.de.la.Universidad.de.La.Laguna.

Resultados y DiscusiónEl.análisis.de.la.composición.proximal.de.las.paralarvas.mostró.un.elevado.contenido.en.humedad.(78.8±0.2%).y.proteína.total.(75.4±0.8%.p.s.),.este.último.sólo.comparable.al.de.los.huevos.de.P. narval.(68.8±3.4%.p.s.),.teniendo.el.resto.de.las.presas.valores.marcadamente.

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inferiores..Las.paralarvas.presentan.niveles.bajos.de.lípido.total.(9.0±1.9%.p.s.),.con.mayor.proporción.de.lípidos.polares.que.de.lípidos.neutros.(57.0±3.0.vs.43.0±3.0),.siendo.la.fosfatidilcolina,.fosfatidiletanolamina.y.colesterol.las.clases.lipídicas.mejor.representadas..Tam-bién.destaca.el.elevado.contenido.en.n-3.HUFA.(44.4±2.0%).y,.específicamente,.20:5n-3.y.22:6n-3,.que.junto.al.16:0.representan.el.70%.del.total.de.ácidos.grasos..De.las.presas.vivas.analizadas,.sólo.los.juveniles.de.Artemia presentaron.un.perfil.de.clases.lipídicas.comparable.al.de.las.paralarvas.con.valores.similares.de.fosfatidilcolina.y.colesterol.pero.niveles.muy.inferiores.de.n-3.HUFA,.siendo.P. elegans.la.única.presa.que.alcanzó.valores.comparables.de.n-3.HUFA.(29.5±5.9%)..Es.destacable.de.la.Artemia.nauplii.su.elevadísimo.porcentaje.de.lípido.neutro,.específicamente.triacilglicéridos.(53.7±0.9%),.y.el.pobre.contenido.de.n-3.HUFA.(3.8±0.1%).de.su.lípido.total.Entre.los.oligoelementos,.el.fósforo.es.el.mineral.más.abundante.en.las.paralarvas,.alcanzando.un.valor.de.7.0.g/kg..Así.mismo,.es.es-pecialmente.destacable.la.presencia.de.cobre.en.su.composición.(56.8±5.2.mg/kg),.oligoelemento.escasamente.presente.en.el.resto.de.las.presas.y.que.sin.embargo.es.un.componente.esencial.del.pigmento.respiratorio.hemocianina.(Villanueva.y.Bustamante,.2006)..Entre.las.presas,.los.huevos.de.P. narval.presentaron.la.composición.en.oligoelementos.más.próxima.a.las.paralarvas,.con.niveles.comparables.de.fósforo,.calcio.y.magnesio..Por.otra.parte,.es.destacable.el.elevado.contenido.en.calcio.(67.4.g/kg).y.magnesio.(11.1.g/kg).alcanzado.por.las.zoeas.de.G. adscensionis,.posiblemente.como.parte.de.su.exoesqueleto..Los.resultados.obtenidos.sugieren.que.la.composición.nutricional.de.las.paralarvas.de.pulpo.difiere.significativamente.de.la.de.las.distintas.presas.vivas.analizadas.siendo.P. elegans.la.presa.más.próxima.en.cuanto.a.su.contenido.de.n-3.HUFA.y.P. narval.en.cuanto.a.su.composición.en.oligoelementos,.sin.cubrir.ninguna.de.ellas.las.posibles.demandas.de.cobre.

BibliografíaAOAC..Association.Official.of.Analytical.Chemists..2006..Official.methods.of.analysis.of.AOAC.International..18th.ed..W..Horwitz.(Ed).and.G.W..Latimer,.Jr..(assistant.editor)..AOAC.International,.Gaithersburg,.Md.Christie,.W.W..1982..Lipid.Analysis,.2nd.ed..Pergamon,.Oxford..209.pp.Horwitz,.W..1980..Methods.of.Analysis,.13th.edn..Association.of.Official.Analytical.Chemists,.Washington,.DC.Olsen,.R.E..y.R.J..Henderson..1989..The.rapid.analysis.of.neutral.and.polar.marine.lipids.using.double-development.HPTLC.and.scanning.densitometry..J. Exp. Mar. Biol. Ecol..129:.189–197.Astorga.España,.M.S.,.E.M..Rodríguez.Rodríguez.y.C..Díaz.Romero..2005..Sodium,.K,.Ca,.Mg,.Fe,.Cu,.and.Zn.concentrations.in.molluscs.from.the.Magellan.Strait.(Chile):.Their.contribution.to.dietary.intake..Int. J. Food Sci. Nutr..56:.337-347.

AgradecimientosEste.estudio.se.enmarca.dentro.del.proyecto.PRESAPUL.(PI.SolsubC200801000162;.2009-2011-ACIISI).

Efecto de la dieta en el perfil lipídico de músculo, glándula digestiva y gónada de pulpo Octopus vulgarisJ..Estefanell1,.J..Socorro1,2,.M..Izquierdo1,.H..Fernández.Palacios,.J..Roo1.

1Grupo de Investigación en Acuicultura, Instituto Canario de Ciencias Marinas & Instituto Universitario de Sanidad Animal y Seguridad Alimen-taria, PO Box 56, E-35200 Telde, Las Palmas, Canary Islands, Spain. E-mail: [email protected] 2IES Marítimo Pesquero de Las Palmas. Simón Bolívar, 15. Las Palmas. Canary Islands, Spain

Abstract Octopus.vulgaris.(1483±269.g,.sex.ratio.1.4:1).were.reared.for.2.months.in.floating.cages..Two.diets.were.tested.(N=32.per.diet):.a.mixed.diet.containing.a.60-40%.crab.Portunus.pelagicus-bogue.Boops.boops,.and.bogue.as.a.single.diet..Bogue.was.supplied.by.fish.farms.as.aquaculture.by-product..Octopuses.showed.similar.growth.rates.regardless.of.diet.(1.3-1.4%/day)..In.comparison.with.crab.and.wild.octopus.muscle,.bogue.showed.high.lipid,.high.EPA.and.low.ARA.content..Digestive.gland.reflected.dietary.lipids,.contrary.to.muscle.or.gonad..In.increase.in.EPA.and.a.decrease.in.ARA.was.observed.in.all.tissues,.with.no.negative.effect.on.growth..The.decrease.in.DHA.in.muscle.was.related.to.changes.in.body.proportions..Selective.accumulation.of.DHA.and.ARA.in.gonads.underlines.the.importance.of.these.fatty.acids.in.egg.and.sperm.quality.in.O..vulgaris..

JustificaciónLa.boga.Boops boops,.engordada.accidentalmente.en.granjas.marinas.(subproducto.de.la.acuicultura),.ha.dado.resultados.prometedores.en.el.engorde.de.pulpo.común.(Socorro.et al.,.2005)..Su.perfil.nutricional.presenta.un.elevado.contenido.lipídico,.y.unos.valores.particu-larmente.bajos.en.20:4n-6.(ARA)..Los.pulpos.alimentados.con.esta.boga.acumularon.los.lípidos.de.la.dieta.exclusivamente.en.la.glándula.digestiva,.reflejando.además.el.perfil.de.ácidos.grasos.de.la.dieta,.mientras.que.el.músculo.presentó.una.composición.más.estable..Sin.embargo,.ambos.tejidos.presentaron.una.disminución.de.ARA,.sin.efecto.negativo.sobre.el.crecimiento.durante.4.semanas.(Estefanell.et al.,.2009)..En.el.presente.estudio.se.pretende.evaluar.el.efecto.de.la.dieta.de.boga.de.descarte.sobre.la.composición.lipídica.de.músculo,.glándula.digestiva.y.gónadas.de.pulpo tras.2.meses.de.cultivo,.en.comparación.con.una.dieta.mixta.de.cangrejo.y.boga.(García.García.y.Cerezo.Valverde,.2006).

Material y MétodosSe.seleccionaron.64.pulpos.(1483±269.g),.sex.ratio.1.4:1,.y.fueron.estabulados.en.2.jaulas.flotantes.de.5.m3..Se.suministraron.2.dietas.(N=32.por.dieta).durante.2.meses:.60-40%.de.cangrejo.Portunus.pelagicus-boga.Boops.boops.y.otra.dieta.basada.exclusivamente.en.boga..La.boga.utilizada.fue.un.subproducto.de.la.acuicultura..La.temperatura.media.de.cultivo.fue.de.18.3±0.3ºC..Al.final.del.experimen-to.se.seleccionaron.3.machos.y.3.hembras.al.azar..Se.extrajeron.muestras.de.músculo.(brazo.izquierdo.II),.glándula.digestiva.y.gónada.(testículo.u.ovario)..Se.realizó.análisis.proximal.y.de.ácidos.grasos.(AOAC,.1997;.Christie,.1982),.tanto.de.las.dietas.como.de.los.tejidos.de.pulpo..Además.se.tomaron.muestras.de.los.mismos.tejidos.en.pulpos.salvajes.al.inicio.del.experimento..Los.resultados.fueron.compara-dos.mediante.ANOVA.de.2.vías.(dieta.y.sexo)..En.las.tablas,.distintos.subíndices.denotan.diferencia.estadística.en.cuanto.a.sexo.(p<0.05).y.distintos.superíndices.denotan.diferencia.estadística.en.cuanto.a.tratamiento.(inicial,.dieta.mixta,.dieta.de.boga).(p<0.05).

Resultados y Discusión Los.pulpos.presentaron.un.crecimiento.similar.con.ambas.dietas,.de.un.1.4%/día.con.la.dieta.mixta.y.1.3%/día.con.la.dieta.de.boga..La.presencia. de. cangrejo. enriqueció. la. dieta. mixta. en. ARA. (Tabla. 1).. Los. resultados. de. macronutrientes. corroboran. resultados. previos.(Estefanell.et al.,.2009),.con.una.acumulación.de.lípidos.en.la.glándula.digestiva,.una.disminución.de.ARA.y.un.aumento.de.EPA.en.todos.los.tejidos.(Tabla.2),.sin.efecto.limitante.sobre.el.crecimiento..La.disminución.de.DHA.en.el.músculo.podría.ser.debida.a.cambios.en.las.proporciones.corporales.(Navarro.y.Villanueva,.2003),.sugiriendo.que.este.ácido.graso.podría.ser.muy.abundante.en.la.piel..Los.pulpos.presentaron.una.acumulación.selectiva.de.DHA.en.las.gónadas,.y.en.particular.los.ejemplares.alimentados.con.la.dieta.mixta.también.presentaron.una.acumulación.selectiva.de.ARA.en.testículo.y.ovario,.lo.que.resalta.la.importancia.de.estos.ácidos.grasos.en.la.calidad.del.esperma.y.del.huevo.de.O. vulgaris,.al.igual.que.ocurre.en.peces.marinos.(Izquierdo.et.al.,.2001).

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Tabla 14Lípidos totales y ácidos grasos principales (% peso seco) del cangrejo, la boga y la dieta mixta.

Cangrejo Boga Dieta mixta

Lípidos (%) 5.7±1.0.a. 43.8±6.1.b 22.8±2.4.b

ARA (%) 0.5±0.0.c 0.2±0.02.a 00.4±0.0.b

EPA (%) 0.8±0.1.a 2.4±0.3.c 01.5±0.1.b

DHA (%) 0.7±0.1.a 2.2±0.4.c 01.4±0.1.b

Tabla 24Lípidos totales y ácidos grasos principales (% peso seco) de la glándula digestiva (GD), músculo (M) y gónada (G)

Inicial Dieta mixta Dieta BogaMacho Hembra Macho Hembra Macho Hembra

GD

Líp.(%) 18.3±6.5Aa 23.4±5.0B

a 43.8±13.6Ab 54.8±5.3B

b 40.4±3.4Ab. 49.3±4.9B

b

ARA.(%) 1.6±0.3Ac. 2.2±0.1B

c 1.0±0.0Ab 1.2±0.3B

b 0.6±0.1Aa 0.8±0.1B

a

EPA.(%) 1.8±0.8Aa 1.5±0.5A

a 3.4±1.0Ab 5.0±0.7B

b 3.6±0.5Ab 5.0±0.2B

b

DHA.(%) 4.2±1.3A 5.6±1.2B 4.1±0.9A 5.9±0.6B 4.6±0.5A 6.2±0.3B

M

Líp.(%) 5.3±0.5c 5.3±0.2c 3.5±0.3a 3.8±0.2a 4.6±0.1b 4.7±0.3b

ARA.(%) 0.8±0.1b 0.7±0.0b 0.2±0.0a 0.2±0.0a 0.2±0.0a 0.2±0.0a

EPA.(%) 0.5±0.0a 0.6±0.1a 0.5±0.1a 0.6±0.1a 0.7±0.1b 0.8±0.1b

DHA.(%) 1.3±0.1c 1.3±0.2c 0.8±0.1a 0.9±0.2a 1.0±0.1b 1.1±0.1b

G

Líp.(%) 15.2±1.3bB 16.1±0.6b

B 15.8±1.3Ba 11.6±1.5A

a 14.4±2.1Ba 11.4±1.6A

a

ARA.(%) 2.9±0.3Bc 1.7±0.1A

c 2.0±0.2Bb 0.7±0.0A

b 1.3±0.2Ba 0.4±0.1A

a

EPA.(%) 0.8±0.2a 1.0±0.1a 1.5±0.1b 1.6±0.4b 1.5±0.3b 1.6±0.4b

DHA.(%) 2.4±0.2 3.3±0.4 3.0±0.4 2.1±0.4 2.7±0.4 2.4±0.2

Bibliografía AOAC,.1997..Official Methods of Analysis..Association.of.Official.Analytical.Chemists,.Washington.Christie,.W.W.,.1982..Lipids Analysis..Pergamon.Press,.Oxford.Estefanell,.J.,.Roo,.J.,.Socorro,.J.,.Guirao,.R.,.Fernández-Palacios,.H..e.Izquierdo,.M.,.2009..Efecto.del.origen.y.presentación.de.la.boga.en.el.engorde.de.pulpo.común.Octopus vulgaris..Oral.presentation..In:.Book of abstracts of the 12th National Aquaculture Congress:.42-43.García.García,.B..y.Cerezo.Valverde,.J.,.2006..Optimal.proportions.of.crabs.and.fish.in.diet.for.common.octopus.(Octopus vulgaris).ongrowing..Aquaculture.253:.502–511.Izquierdo,. M.. S.,. Fernandez-Palacios,. H.. y. Tacon,. A.G.J.,. 2001.. Effect. of. broodstock. nutrition. on. reproductive. performance. of. fish..Aquaculture.197:.25-42.Navarro,.J.C..y.Villanueva,.R.,.2003..The.fatty.acid.composition.of.Octopus vulgaris.paralarvae.reared.with.live.and.inert.food:.deviation.from.their.natural.fatty.acid.profile..Aquaculture.219:613–631.Socorro,.J.,.Roo,.J.,.Fernández-López,.A.,.Guirao,.R.,.Reyes,.T.,.Izquierdo,.M.,.2005..Ongrowing.of.Octopus vulgaris.(Cuvier, 1797).in.floating.cages.fed.with.bogue Boops boops.(L.,.1758).from.fish.farm.discards..Boletín.del.Instituto.Español.de.Oceanografía,.21.(1-4),.189-194.

AgradecimientosEste.trabajo.ha.sido.financiado.por.los.Planes.Nacionales.de.Cultivos.Marinos.(JACUMAR),.2007-2009.

Primeros datos del cultivo larvario de Palinurus Elephas Fabricius, 1787 (Decapoda Palinuruidae) en GaliciaE..Poza.y.L..HernándezEstación de Ciencias Mariñas de Toralla -Universidad de Vigo. Isla de Toralla s/n, E-36331 Vigo, Galicia (NW Spain). e-@mail: [email protected]

AbstractThe.main.objective.of.the.present.work.was.to.determine.the.efficiency.of.the.Palinurus elephas.larvae.growth.based.on.an.Artemia salina.diet.enriched.with.Isochrysis galbana.phytoplankton. Culture.of 550.phyllosomas.in.stage.I.was.performed.at.18.ºC.in.two.70.L.cylindro-conical.tanks.using.a.reverse.flow.open.circulation.system.and.seawater,.previously.filtered.through.1µm.membranes.and.sterilized.with.UV..Juvenile A. Salina organisms.were.used.to.feed.phyllosoma.from.stage.I.to.II.while.adults.were.employed.for.feeding.phyllosoma.from.stage.III..On.Survival.of.stages.II.to.IV.was.higher.than.50%..A.decreased.of.30.%.in.survival.was.detected.in.stage.V.and,.finally,.phyllosoma.in.stage.VI.survived.for.14.days.and.no.larvae.reached.the.puerulus.stage..The.period.of.each.larval.stages.from.I.to.IV.was.10.days.and.increased.to.21.days.in.stage.V..Results.suggested.that.juvenile.and.adult.A. salina.organisms.constitute.an.efficient.food.for.the.correct.larval.development.of.P. elephas.in.stages.I.to.IV,.while.other.nutritional.requirements.are.needed.for.stages.V.and.VI..

JustificaciónEn.Galicia.la.langosta.Palinurus elephas ha.sufrido.un.intenso.esfuerzo.pesquero.en.el.siglo.XX.lo.que.le.ha.llevado.a.una.situación.de.ago-tamiento.y.sobrepesca..Presenta.una.veda.prolongada.y.solo.se.permite.su.pesca.en.los.meses.de.julio.y.agosto..Su.escasez.y.su.alto.valor.dificultan.su.estudio.y.su.muestreo.experimental.según.Goñi.y.Latrouite.(2005),.siendo.éste.el.primer.trabajo.con.esta.especie.en.Galicia.Estudios.previos.(Mercer.et al.,.1997;.Kittaka.y.Abrunhosa,.1997).mostraron.que.utilizando.la.larva.nauplius.de.Artemia salina.como.ali-mento,.no.se.superaban.los.primeros.estadíos.larvarios..Sin.embargo,.Kittaka.e.Ikegami.(1998).completaron.el.ciclo.larvario.hasta.la.fase.juvenil.mediante.sistemas.de.recirculación.con.medio.de.cultivo.de.microalgas,.una.mezcla.de.nauplius,.adultos.de.A. salina y.gónada.de.mejillón..Kittaka.et.al.,.(2001).redujo.la.duración.del.ciclo.larvario.de.132.a.70.días.utilizando.como.alimento.la.larva.de.12mm.de.longitud.del.pez.Arctoscopus japonicus..De.esta.manera.se.demostró.que.la.duración.del.período.de.intermuda.de.cada.estadio.está.relacionada.con.el.estado.nutricional.de.la.larva.

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Sanidad AnimalA.partir.de.estos.resultados.el.objetivo.de.nuestro.trabajo.fue.probar.desde.el.primer.estadío.larvario.A. salina.de.tallas.juvenil.y.adulta.como.único.alimento..Esta.talla.de.presa.nos.permite.realizar.el.cultivo.larvario.en.un.sistema.de.circuito.abierto.usando.filtros.con.luz.de.malla.mayores.de.250.µm,.logrando.una.higiene.mayor.que.en.los.sistemas.de.recirculación..Esto.fue.posible.gracias.a.la.calidad.óptima.del.agua.de.la.ECIMAT,.procedente.de.10.m.de.profundidad.en.una.zona.abierta.de.la.Ría.de.Vigo.(Galicia).

Material y métodosSe.estabuló.una.hembra.ovada.de.P. elephas,.de.551.g.de.peso.y.longitud.total.(Lt).244,5.mm.procedente.de.la.pesquería.gallega,.el.16-12-2010.en.un.tanque.rectangular.de.200L.en.circuito.abierto.a.una.temperatura.de.13.8ºC..El.01-02-2011.se.aclimató.a.18.±.0.4.ºC.hasta.la.eclosión.de.los.huevos.22.días.después..Mensualmente.la.puesta.de.huevos.se.desinfectó.mediante.inmersión.del.abdomen.según.Browne.et al..(2009).y.semanalmente.se.examinó.el.estado.embrionario.de.los.huevos..Se.cultivó.A. salina,.enriquecida.con.fitoplancton.Isocrysis galbana Clon.T-ISO.como.alimento.vivo,.utilizando.una.serie.temporal.de.4.cilin-dros.de.metacrilato.de.35.L,.en.circuito.cerrado,.con.aireación,.agua.filtrada.a.1µm,.tratada.con.luz.UVA.y.a.una.Tª.constante.de.26ºC..Se.seleccionaron.dos.clases.de.tallas,.A. salina.juvenil.correspondiente.a.10.a.12.días.con.una.Lt.5,5.mm.como.alimento.de.las.phyllosomas.(Phy).I.y.II.y.A. salina.adulta.de.20.a.24.días.con.una.Lt.de.10,31.mm.para.Phy.III.a.VI.El.cultivo.de.las.phyllosomas.se.realizó.en.dos.tanques.troncocónicos.de.70.L.con.flujo.inverso.(180.L/h).y.desagüe.superficial.central.rodeado.con.una.malla.cilíndrica.de.250.µm..El.agua,.tratada.con.luz.UVA.y.filtrada.a.1µm,.se.calentó.a.18ºC..Se.introdujeron.280.y.270.Phy.I.por.tanque.y.se.mantuvo.una.densidad.de.A. salina.de.1500.ind./tanque..Cada.dos.días.se.muestreo.el.nº.total.de.larvas,.su.estadio.larvario.según.Kittaka.et al..(2001).y.se.les.renovó.las.A. salina.enriquecidas.y.desinfectadas..Todo.ello.se.llevo.a.cabo.en.una.sala.clima-tizada.con.una.Tª.media.de.18,9ºC.

Resultados y DiscusiónSe.obtuvieron.seis.estadios.de.la.larva.phyllosoma.mediante.5.mudas,.y.no.se.alcanzó.el.estadio.de.puerulus..La.duración.del.período.de.intermuda.de.cada.estadio.fue.de.10.días.para.la.Phy.I,.II,.III.y.IV,.21.días.para.la.Phy.V,.las.Phy.VI.sobrevivieron.solo.hasta.el.día.12-.14.La.supervivencia.del.primer.estadío.larvario.fue.menor.del.30%.en.el.tanque.1.y.del.40%.en.el.T2..En.el.estadío.de.Phy.II.la.supervivencia.fue.superior.al.50%.al.igual.que.en.Phy.III.y.IV..En.Phy.V.disminuyó.hasta.un.31%.en.T1.y.un.38%.en.el.T2..En.el.último.estadío.(.Phy.VI).no.sobrevivió.ninguna..La.larvas.phyllosoma.I.son.capaces.de.capturar.A. salina.de.5,5mm.±.0,7.utilizando.los.dáctilos.de.los.pereiópodos.2º.y.3º.para.la.captura.de.sus.presas..Posteriormente.las.transportan.enganchadas.con.el.dáctilo.del.3º.pereiópodo.hasta.su.consumo.pudiendo.capturar.otra.presa.nueva..En.el.estadío.II.se.observó.que.tenían.preferencia.por.la.A..salina.de.mayor.tamaño.por.lo.que.en.la.Phy.III.se.les.suministró.mayor.de.10.mm..En.la.Phy.V.y.VI.se.observó.dificultad.de.la.captura.de.la.A. salina.adulta.y.ocasionalmente.las.rechazaban.una.vez.cap-turadas..La.duración.de.10.días.a.18ºC.de.las.cuatro.primeras.phyllosomas.es.similar.a.la.obtenida.por.Kittaka.et al..(2001).9.días.para.cada.estadio.a.19ºC..Si.comparamos.la.supervivencia.larvaria,.nuestra.experiencia.presenta.unos.porcentajes.mayores.que.los.del.mismo.autor..En.el.estadío.V,.en.nuestra.experiencia.aumenta.la.duración.del.período.de.intermuda.de.10.a.21.días.y.disminuye.la.supervivencia.larvaria.La.conclusión.de.estas.primeras.experiencias.es.que.la.A. salina.juvenil.y.adulta.es.un.alimento.eficaz.para.los.cuatro.primeros.estadíos.larvarios,.mientras.que.no.es.una.talla.o.clase.de.presa.idónea.para.las.phyllosomas.V.y.VI,.por.lo.que.se.debería.utilizar.una.presa.dife-rente.en.estos.estadios.larvarios..

BibliografíaBrowne,.R.,.G..Pérez-benavente,.I..Uglem.and.J..C..Mariño..2009..An.illustrated.guide.for.the.production.of.clawed.lobsters..(Using.a.green.water.thecnique)..Aquaculture.Explained,.23:34.pp.Goñi,.R..and.D..Latroite..2005..Review.of.the.biology,.ecology.and.fisheries.of.Palinurus.spp..Species.of.European.waters:.Palinurus elephas.(Fabricius,.1787).and.Palinurus mauritanicus.(Gruvel,.1911)..Cah..Biol..Mar.,.46:127-142.Kittaka,.J..and.E..Ikegami..1988..Culture.of.the.Palinurid.Palinurus elephas from.egg.stage.to.puerulus..Nippon.Suisan.Gakkaishi,.54(7),.1149-1154.Kittaka,.J..y.F..A..Abrunhosa..1997..Characteristics.of.palinurids.(Decapoda:Crustacea).in.larval.culture..Hydrobiología:.358:.305-311..Kittaka,.J.,.R..Kudo,.S.Onoda,.K..Kanemaru.And.J..Mercer..2001..Larval.culture.of. the.european.spiny. lobster.Palinurus elephas..Mar..Freshwater.Re.,.52:1439-1444.Mercer.JP,.Maddock.T,.Browne.R,.O’Ceidigh.E..1997..Solving.the.crawfish.enigma. Aquaculture.Ireland,.79:13-15.

AgradecimientosAgradecemos.la.inestimable.colaboración.de.Diego.G..Baz,.Leticia.Vidal,.Marga.Poza,.Alba.Herrnández.Otero,.Adrián.Pedreira.y.a.la.Di-rección.y.Unidad.de.Cultivos.Marinos.de.la.ECIMAT.

Efecto de la densidad de cultivo en hatchery sobre el crecimiento y supervivencia larval del mejillón Mytilus galloprovincialisLagos,.L.1*.e.I..Martínez.Pita1

1I.F.A.P.A. Centro Agua del Pino, Consejería de Agricultura y Pesca, Junta de Andalucía, Carretera Punta Umbría–Cartaya, Km 3.8, 21450, Huelva, España. E-mail [email protected]*Programa Doctorado en Acuicultura, Pontificia Universidad Católica de Chile

AbstractMytilus galloprovincialis.culture.interest.has.increased.in.Andalusia.during.last.years.but.the.presence.of.natural.seed.in.its.coasts.is.very.low.so.obtaining.seed.in.hatchery.has.become.necessary..In.this.study.the.effect.of.larval.density.in.culture.success.has.been.assessed..Under.homogeneous.conditions.of.feeding,.light.and.temperature.(22.ºC),.the.growth.and.survival.of.M. galloprovincialis larvae.cultured.at.three.larval.densities.(5,.25.and.50.larvae.ml-1).have.been.obtained..Results.show.faster.growth.and.higher.survival.at.5.larvae.ml-1..However,.the.highest.number.of.settlement.larvae.was.observed.at.major.density.so.for.massive.mussel.seed.production,.this.density.seems.to.be.better.since.the.productive.effort.of.hatchery.facilities.is.lower.

JustificaciónEn.Andalucía.existen.buenas.condiciones.para.la.miticultura.(Tirado.et al.,.2005),.principalmente.en.la.zona.Sur.mediterránea;.por.lo.que.durante.los.últimos.años.ha.aumentado.esta.actividad..De.hecho.el.cultivo.alcanzó.el.83,1%.de.la.producción.acuícola.de.moluscos.en.Andalucía.en.el.año.2009,.con.326.Tm..y.un.valor.de.comercialización.de.214,07.miles.de.euros.(Galisteo.et al.,.2009)..El.problema.de.

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esta.actividad.en.las.costas.andaluzas.reside.en.la.baja.disponibilidad.de.semilla.en.el.medio.natural,.por.lo.que.ha.de.importarse.desde.otras.zonas.de.España.(Tirado.et al.,.2005)..Surge.entonces.la.posibilidad.de.producirla.en.un.criadero.bajo.condiciones.controladas..Con.esta.alternativa.se.elimina.el.riesgo.de.introducción.de.patógenos.foráneos.y.además.permite.mejorar.progresivamente.la.calidad.de.la.semilla.(Galley.et al.,.2010).mediante.por.ejemplo,.mejora.genética..La.fase.más.crítica.de.la.obtención.de.semilla.es.el.cultivo.larvario.que.ha.de.optimizarse.para.así.disminuir.los.costos.de.producción..Uno.de.los.factores.que.ha.de.considerarse.es.la.densidad.de.cultivo.larvario;.en.este.trabajo.se.ha.evaluado.la.supervivencia.y.tasa.de.crecimiento.en.tres.densidades.de.cultivo,.identificando.la.que.ofrece.mejores.perspectivas.para.el.escalamiento.productivo.

Materiales y métodosEn.la.primavera.de.2011.se.trajeron.individuos.maduros.de.Mytilus galloprovincialis.procedentes.de.Cádiz,.España..Dichos.ejemplares.fueron.inducidos.a.la.puesta.mediante.shock.térmico..Tras.48.horas,.de.los.ovocitos.fertilizados.se.obtuvieron.las.larvas.D.eclosionadas.tras.filtrarlas.a.41.µm.y.se.cultivaron.a.22.ºC,.en.tanques.de.47.litros.en.circuito.cerrado.y.con.tres.densidades:.5,.20.y.50.larvas.(L).ml-1,.cada.tratamiento.con.4.replicas..Cada.4.–.6.días.se.limpiaban.los.tanques.y.se.cambiaba.el.agua.y.se.muestreaban.las.larvas,.tomándose.datos.de.supervivencia.y.longitud..Además.se.ajustaba.el.volumen.del.estanque.para.mantener.la.densidad.correspondiente..El.cultivo.se.mantuvo.hasta.que.más.del.60.%.de.las. larvas.alcanzaron.el.estado.de.postlarva..La.alimentación.fue.de.50.cél.µl-1.con. Isochrisis galbana.(clon.T-ISO).y.Chaetoceros spp.en.proporción.1:1..Se.comprobó.la.distribución.normal.de.los.datos.(Test.Kolmogorov.–.Smirnov).y. la.determinación.de. la.homogeneidad.de.varianza. (Test.Levene),. se. realizó.un.análisis.estadístico.de.varianza.ANOVA.de.una.vía. y.posteriormente.una.prueba.de.comparaciones.múltiples.Tukey,.mediante.el.software.Statistica.7.0.de.Statsoft.Inc.

Resultados y DiscusiónEl.crecimiento.larvario.de.M. galloprovincialis fue.significativamente.mayor.en.la.densidad.menor.(5.L.ml-1),.no.encontrándose.diferencias.entre.25.y.50.L.ml.-1.(Fig..1)..El.cultivo.a.5.L.ml-1.se.retiró.el.día.28.post.eclosión,.a.25.L.ml-1.se.mantuvo.hasta.31días.y.a.50.L.ml-1.hasta.33.días.post.eclosión..El.crecimiento.larvario.del.presente.estudio.en.todas.las.densidades.estudiadas.es.similar.al.descrito.por.Ruiz.et al., (2008).en.M. galloprovincialis.y.superior.al.señalado.por.Galley.et al.,.(2010).en M. edulis. La.supervivencia.(%).fue.significativamente.mayor.a.5.L.ml-1.respecto.a.la.mayor.densidad.(Fig..1),.mientras.que.a.25.L.ml-1.el.valor.fue.intermedio,.no.habiendo.diferencias.significativas.con.los.otros.dos.tratamientos..No.obstante.en.términos.absolutos,.el.número.final.de.larvas.obtenido.por.unidad.de.esfuerzo.(tanques.de.cultivo).fue.significativamente.mayor.a.50.L.ml-1.así.como.a.25.L.ml-1.fue.mayor.que.a.5.L.ml-1..Nuestros.resultados.indican.que.el.cultivo.larval.de.M. galloprovincialis.está.influenciado.por.la.densidad.de.cultivo,.aumentando.la.tasa.de.crecimiento.y.disminuyendo.el.porcentaje.de.supervivencia.a.medida.que.se.incrementa.la.densidad..Ello.concuerda.con.lo.expresado.para.otros.bivalvos.y.se.explicaría.por.un.aumento.de.la.competencia.por.el.espacio.y.el.alimento.y.un.más.rápido.deterioro.de.la.calidad.del.agua.(Liu.et al.,.2010;.Velasco.&.Barros,.2008)..Dados.estos.antecedentes,.para.la.producción.intensiva.de.semilla.de.M. galloprovincialis.en.hatchery,.se.recomienda.utilizar.50.larvas.ml-1.como.densidad.para.el.cultivo..

Figura 14Supervivencia.(%).y.Crecimiento.(longitud.valvar.en.µm).de.M. galloprovincialis.a.distintas.densidades.de.cultivo.larval

BibíografiaGalisteo.A.,.G..Pérez,.F..Naranjo,.S..Abreu,.L..Losa,.Mª.T..Alonso,.C..Cobo,.R..Castillo,.R..Espinosa.&.M..David..2010..Producción pesquera andaluza: año 2009. Junta de Andalucía, Consejería de Agricultura y Pesca, Servicio de Publicaciones y Divulgación,.358.pp.Galley.Th.,.M..Batista,.R..Braithwaite,.J..King.&.A..Beaumont..2010..Optimisation.of.larval.culture.of.the.mussel.Mytilus edulis.(L.). Aquacult International (18):.315–325.Liu.W.,.H..Gurney-Smith,.A..Beerens.&.C.M..Pearce..2010..Effects.of.stocking.density,.algal.density,.and. temperature.on.growth.and.survival.of.larvae.of.the.basket.cockle,.Clinocardium nuttallii..Aquaculture.(299):.99–105.Ruiz.M.,.E..Tarifeño,.A..Llanos-Rivera,.Ch..Padget.&.B..Campos..2008..Efecto.de.la.temperatura.en.el.desarrollo.embrionario.y.larval.del.mejillón,.Mytilus galloprovincialis (Lamarck,.1819). Revista de Biología Marina y Oceanografía 43(1):.51-61.Tirado.C.,.J..C..Macías,.R..M..Villarías,.J..M..Gaiteiro,.D..Gómez,.M..J..Martín,.J..L..Rueda,.C..Álamo,.M..Manchado.&.C..Infante..2005..Conclusiones.derivadas.del.estudio.sobre.el.potencial.del.cultivo.de.mejillón.Mytilus galloprovincialis Lamarck,.1819,.en.Andalucía..Boletín. Instituto Español de Oceanografía 21.(1-4):.455-464.Velasco.L..&.J..Barros..Experimental.larval.culture.of.the.Caribbean.scallops.Argopecten nucleus.and.Nodipecten nodosus..2008..Aquaculture Research.(39):.603-618.

AgradecimientosProyecto.“Viabilidad.del.cultivo.del.mejillón.Mytilus galloprovincialis en.Andalucía.a.partir.de.semilla.producida.en.criadero”.concedido.por.la.Consejería.de.Innovación,.Ciencia.y.Empresa.de.la.Junta.de.Andalucía..A.la.empresa.Pescados.y.Mariscos.Mar.de.la.Línea.(Caladero-Mercadona).por.proveernos.los.adultos.de.Mytilus galloprovincialis..


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Sanidad Animal

Diferencias en la actividad antiviral de las proteínas Mx1, Mx2 y Mx3 de dorada (Sparus aurata) frente al Virus de la Necrosis Pancreática Infecciosa (IPNV)M.A..Fernández-Trujillo1,.E..García-Rosado2,.M.C..Alonso2,.D..Alvarez-Torres,.J.J..Borrego2,.M.C..Alvarez1.y.J..Béjar1

1Departamento de Genética, y 2Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Málaga, 29071 Málaga; [email protected]

AbstractMx.proteins.are.crucial.effectors.of.the.antiviral.response.mediated.by.the.interferon.type.I.pathway..Recently,.three.Mx.proteins:.SauMx1,.SauMx2.and.SauMx3,.have.been.identified.in.gilthead.seabream.(Sparus aurata)..In.this.study,.the.three.SauMx.cDNAs.were.cloned.into.expression.vectors.and.used.for.transfection.of.CHSE-214.cells..Monoclonal.cell.populations.stably.expressing.each.recombinant.protein.have.been.obtained.and.characterized..The.protection.conferred.by.each.SauMx.against.Infectious.Pancreatic.Necrosis.Virus.(IPNV).has.been.in vitro.evaluated,.having.found.clear.differences.among.them..According.to.the.cytopathic.effect.development.and.the.virus.yield.reduction.assays,.only.cells.expressing.SauMx2.and.SauMx3.showed.significant.resistance.to.IPNV.infection..Otherwise,.the.analysis.of.the.viral.RNA.synthesis.by.quantitative.RT-PCR.suggested.that.each.SauMx.protein.has.a.different.target.during.the.viral.inhibition.process..The.differences.observed.among.the.three.SauMx.proteins.are.discussed.in.terms.of.their.differential.mechanism.of.action.and.antiviral.specificity,.suggesting,.as.a.whole,.to.play.a.synergistic.activity.in.the.protection.of.gilthead.seabream.against.IPNV.

JustificaciónLas.proteínas.Mx.son.componentes.fundamentales.del.estado.antiviral.desencadenado.por.el.interferón.tipo.I.en.respuesta.a.las.infeccio-nes.virales.en.vertebrados..Estas.proteínas.interfieren.con.la.replicación.viral.en.distintos.estadíos.dependiendo.del.sistema.virus-célula.hospedadora.(revisado.en.Haller.et al.,.2007)..En.peces,.la.actividad.antiviral.de.las.proteínas.Mx.se.ha.demostrado.en.varias.especies.y.frente.a.diversos.virus.(García-Rosado.et al.,.2010)..La.importancia.de.las.infecciones.virales.en.acuicultura,.y.la.falta.de.tratamientos.profilácticos.eficaces,.hace.necesario.el.desarrollo.de.medidas.de.control,.las.cuales.deben.basarse.en.los.mecanismos.naturales.de.defensa.frente.a.estos.patógenos..Por.tanto,.el.estudio.de.la.interacción.entre.el.sistema.inmune.innato.y.las.infecciones.virales.es.prioritario.Nuestro.grupo.de.investigación.ha.clonado.recientemente.tres.genes.de.Mx.de.dorada.(Sparus aurata), denominados.SauMx1,.SauMx2.y.SauMx3.(Fernández-Trujillo.et al.,.2011)..Para.estudiar.la.actividad.antiviral.de.estas.tres.proteínas,.en.este.trabajo.se.han.desarrollado.y.caracterizado.tres.sistemas.experimentales. in vitro,.en.los.que.se.ha.evaluado.el.efecto.protector.que.la.expresión.de.cada.proteína.confiere.a.las.células.frente.al.virus.de.la.necrosis.pancreática.infecciosa.(IPNV).

Material y MétodosCélulas.CHSE-214.se. transfectaron.con.vectores.de.expresión.para.cada.una.de. las.proteínas.Mx.de.dorada..Mediante.selección.con.antibióticos.se.obtuvieron.tres.poblaciones.monoclonales.que.expresan.de.forma.estable.cada.proteína,.sin.que.se.observara.ningún.otro.cambio.en.el.aspecto.o.en.el.comportamiento.de.las.células..El.aislado.de.IPNV.utilizado,.serotipo.Sp,.se.inoculó.a.una.multiplicidad.de.infección.(MOI).de.0,1.en.los.clones.celulares.obtenidos,.así.como.en.células.CHSE-214.sin.transfectar,.utilizadas.como.control..Los.títulos.víricos.se.calcularon.mediante.el.método.de.dilución.final.(TCID50),.a.partir.de.los.sobrenadantes.de.las.células.a.las.72.horas.post-inoculación.(p.i.)..La.síntesis.de.ARN.viral.se.analizó.mediante.RT-PCR.cuantitativa.a.las.24,.48.y.72.horas.p.i..Los.datos.se.presentan.en.relación.a.la.transcripción.del.factor.de.elongación.1α.

Resultados y DiscusiónEl.título.vírico.fue.100.veces.menor.en.los.sobrenadantes.de.las.células.que.expresan.SauMx2.y.SauMx3.que.en.los.de.las.células.que.expresan.SauMx1.y.en.los.de.las.control.(Fig..1A)..En.cuanto.a.la.síntesis.de.ARN.viral.(Fig..1B),.se.observó.una.disminución.significativa.en.la.síntesis.del.ARN.que.codifica.la.proteína.viral.VP1.en.las.células.que.expresan.SauMx1.a.las.72.h.p.i.,.así.como.en.la.síntesis.del.ARN.que.codifica.la.poliproteína.viral.(pVP2-VP4-VP3).en.las.células.que.expresan.SauMx3.a.las.48.h.p.i.

Figura 14(A).Título.vírico.en.los.sobrenadantes.de.células.infectadas;.(B).Cuantificación.de.la.síntesis.de.ARN.viral.(VP1.y.pVP2-VP4-VP3).durante.la.infección..Los.asteriscos.indican.diferencias.significativas.respecto.al.control.de.células.sin.transfectar..

Estos.resultados.indican.que.las.tres.proteínas.Mx.de.dorada.están.implicadas.de.alguna.forma.en.la.defensa.frente.a.IPNV..Sin.embargo,.sus.dianas.de.actuación.y,.probablemente,.sus.mecanismos.de.acción.son.diferentes:.SauMx1.hace.disminuir.la.síntesis.del.ARN.que.codifica.para.VP1.(RNA.polimerasa.dependiente.de.RNA),.sin.afectar.la.replicación.viral;.SauMx2.reduce.el.título.vírico.sin.afectar.a.la.síntesis.de.ARN.viral;.y.SauMx3.reduce.tanto.la.síntesis.de.ARN.viral.(poliproteína.pVP2-VP4-VP3)).como.el.título.vírico..Por.tanto,.es.posible.sugerir.que,.in vivo,.las.tres.proteínas.podrían.colaborar.en.la.actividad.antiviral.del.sistema.inmune.innato.de.la.dorada.frente.a.IPNV..La.presencia.de.estas.tres.proteínas.Mx.en.dorada,.junto.a.su.putativa.actividad.sinérgica,.pueden.ser.factores.clave.en.la.elevada.resistencia.de.esta.especie.frente.a.las.infecciones.virales.

BibliografíaFernández-Trujillo,.M.A.,.P..Novel,.M..Manchado,.M.P.,.Sepulcre,.V..Mulero,.J.J..Borrego,.J.J.,.M.C..Alvarez,.y.J..Béjar..2011..Three.Mx.genes.with.differential.response.to.VNNV.infection.have.been.identified.in.Gilthead.seabream.(Sparus aurata)..Mol Immunol..48:.1216-1223.García-Rosado,.E.,.M.C..Alonso,.M.A..Fernández-Trujillo,.M..Manchado.y.J..Béjar,.2010..Characterization.of.flatfish.Mx.proteins..En:.Veteri-nary Immunology and Immunopathology..Nermann,.L.,.Meiers.S..(Eds)..Nova.Science.Publishers,.Inc.,.New.York:.99-128.Haller,.O.,.P..Staeheli,.y.G..Kochs,.2007..Interferon-induced.Mx.proteins.in.antiviral.host.defense..Biochimie..89:.812-818.

AgradecimientosEste.trabajo.ha.sido.financiado.por.los.proyectos:.IMAQUANIM.(UE,.007103),.AGL2007-60113.(MICINN),.y.BIOÁNDALUS.08/7/L2.5.(Instituto.Andaluz.de.Biotecnología).

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Sanidad Animal

Determinación de genotipos de Streptotcoccus iniae por la detección de los genes rbsD (ribosa) y la enzima de hidrólisis de ArgigninaN..Halaihel*1,.D..Vendrell2,.T..Pérez1,.H..Fuertes1,.J.Orós1.y.O..Girpnés.1Universidad de Zaragoza, Dpto. Patología Animal, Facultad de Veterinaria. Miguel Servet 177, 50013, Zaragoza, España). [email protected] 2Laboratorios Hipra, S.A.Hipra España. [email protected]*N. Halaihel es Director Técnico de Alquizvetek S.L. Zaragzoa y Profesor Asociado en la Universidad Zaragoza

AbstractLa. identificación. de. Streptococcus iniae,. en. el. laboratorio. es. de. gran. importancia. para. la. elaboración. de. vacunas.. Sin. embargo,. los.métodos.convencionales.que.se.utilizan.para. identificar.estreptococos.resultan. insuficientes..Los.dos.serotipos.conocidos.se.pueden.distinguir.bioquímicamente.por.las.diferencias.en.sus.actividades.enzimáticas..Hemos.desarrollado.una.PCR.dúplex.cuantitativo.para.el.serotipdado.de.esta.bacteria.basadonos.en.la.detección.simultánea.de.dos.genes:.rbsD.y.arginina.hidrolasa..El.serotipo.I.siendo.positvo.mientras.el.serotipo.II.es.negativo.a.ambas.determinaciones,.

JustificaciónStreptococcus iniae.como.patógeno.se.ha.descrito.en.27.especies.de.peces.cultivados.o.silvestres.de.todo.el.mundo..Existen. dos. serotipos. descritos. que. se. pueden. distinguir. bioquímicamente. por. las. diferencias. en. sus. actividades. enzimáticas..Hemos.desarrollado.una.PCR.dúplex.cuantitativo.para.el.serotipdado.de.esta.bacteria.basándonos.en.la.detección.simultánea.de.dos.genes.rbsD.y.arginina.hidrolasa.

Material y Métodos Hemos.utilizado.varios.aislados.de.S.iniae.de.diferentes.origines.(10.en.total):.España,.Francia.y.Turquia..A.todas.hemos.realizando.lo.siquiente:.1..Identificación.por.API.20.S.2..Confirmación.por.PCR.a.tiempo.real.3..Tipificación.polimórfica.por.ampliación.alearotoria.del.DNA.=.random.amplified.polymorphic.DNA.(.RAPD).y.comparación.de.los.perfiles.

resultantes.de.las.diferentes.cepas.aplicando.un.programa.software.especifico.para.imágenes.(Syngene.U.K.)..4..Diseño.de.unos.cebadores.que.detectan.el.gene.rbsD.que.codifica.una.proteína.que.se.une.de.forma.especifica.a.la.D-ribosa.y.otro.para.

detectar.el.gene.de.la.enzima.Arginina.Dehidrolasa..Ambas.rutas.metabólicas.están.relacionado.con.que.una.cepa.se.considera.del.serogrupo.I.o.seropgrupo.II.de.S iniae.

Resultados y Discusión Todas. las. cepas. demuestran. las. mismas. propiedades. enzimaticas. indicando. un. metabolismo. similar. característico. de. una. misma.especie..El.sistema.de.identificación.de.Biomérieux.(.Api.S20).no.reconoció.estas.cepas.como.Streptococcus iniae.en.su.base.de.datos..Sin.embargo,.se.puede.constatar.que.se.trata.del.mismo.agente.baterianoLa.tipificación.que.se.realizó.por.la.técnica.de.RAPD.utilizando.el.cebador.(GTG)5.

Demuestra.que.la.cepa.351.(numero.7).presenta.un.perfile.polimórfica.aleatoria.diferente.de.las.demás.cepas.

Resultados de PCR a tiempo real para los genes de rbsD Arginina hidrolasa.Todas.las.bacterias.estudiadas.resultaron.negativas.para.la.presencia.del.gene.de.Arginina.hidrolasa.excepto.la.Yersinia ruckeri..(Utilizada.como.control.positivo).

Todas.las.cepas.de.S iniea.resultaron.positivas.(.314,.315,.323,.336,337.y.350).para.la.presencia.del.gen.de.transporte.de.ribosa.excepto.la.cepa.numero.7=.351.

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Sanidad Animal

Expresión de genes de respuesta inmune tras la administración de cepas probióticas durante una infección experimental con Lactococcus garvieae en trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss)T..Pérez-Sánchez1,.J..L..Balcázar2,.N..Halaihel1,.D..Vendrell1,.I..de.Blas1.e.I..Ruiz-Zarzuela1

1Laboratorio de Ictiopatología, Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza. C/Miguel Servet 177, CP 50013, Zaragoza.e-mail: [email protected] 2Instituto Catalán de Investigación del Agua (ICRA), Parque Científico y Tecnológico de la Universidad de Gerona. C/Emili Grahit 101, 17003, Girona

AbstractLactobacillus plantarum,.Lactococcus lactis and.Leuconostoc mesenteroides,.were.administered.orally.at.106.CFU.g-1.feed.to.rainbow.trout.for.36.days..Twenty-one.days.after.the.start.of.the.feeding.period,.fish.were.challenged.with.Lactococcus garvieae..Only.the.fish.fed.the.diet.containing.Lb. plantarum showed.a.significantly.improved.protection.against.L. garvieae.compared.to.the.control..Subsequently,.real-time.PCR.was.employed.to.determine.the.mRNA.levels.of.IL-1β,.IL-10.and.TNF-α.in.the.head.kidney,.and.IL-8,.Tlr5.and.IgT.in.the.intestine.of.the.control.and.Lb. plantarum groups..IL-1β,.IL-10.and.TNF-α.gene.expression.were.significantly.up-regulated.by.Lb. plantarum..Moreover,.IL-10.gene.expression.was.also.significantly.higher.in.the.Lb. plantarum.group.after.L. garvieae.infection,.suggesting.that.Lb. plantarum.can.stimulate.innate.immunity.in.rainbow.trout.

JustificaciónLactococcus garvieae.es.el.agente.etiológico.de.la.Lactococosis,.enfermedad.de.gran.relevancia.que.afecta.a.numerosas.especies.de.peces.tanto.de.agua.dulce.como.salada.y.que.causa.importantes.pérdidas.económicas,.principalmente.cuando.la.temperatura.del.agua.supera.los.16ºC.(Vendrell et al.,.2006)..El.tratamiento.de.la.enfermedad.se.basa.en.el.uso.de.antibióticos,.sin.embargo.su.utilización.no.está.exenta.de.problemas,.debido.principalmente.a.la.aparición.de.resistencias..El.uso.de.probióticos,.los.cuales.controlan.los.patógenos.a.través.de.una.serie.de.mecanismos.de.acción.(Balcázar et al.,.2006;.Pérez.et al.,.2010),.constituye.una.alternativa.al.tratamiento.antibiótico,.lo.que.permite.que.puedan.ser.utilizados.para.prevenir.este.tipo.de.enfermedades..El.objetivo.del.presente.trabajo.fue.evaluar.la.capacidad.protectora.de.cepas.bacterianas,.previamente.aisladas.por.su.efecto.inhibitorio.frente.a.L. garvieae,.determinando.la.expresión.de.genes.de.respuesta.inmune.en.riñón.anterior.e.intestino.de.truchas.arco.iris.

Material y MétodosLactobacillus plantarum subsp..plantarum,.Lactococcus lactis subsp. cremoris y.Leuconostoc mesenteroides,.previamente.aisladas.de.la.mucosa.intestinal,.branquias.y.mucus.cutáneo.de.truchas.arco.iris,.y.tras.caracterizar.sus.principales.propiedades.probióticas.(Pérez-Sánchez.et al.,.2011),.fueron.administradas.en.el.pienso.de.los.peces.a.una.concentración.de.106.UFC.g-1.durante.36.días..Después.de.21.días.de.tratamiento,.se.infectó.al.20.%.de.los.peces.(infección.por.cohabitación).del.grupo.control.positivo.y.de.los.suplementados.con.las.bacterias..La.infección.se.realizó.por.vía.intraperitoneal.con.una.suspensión.bacteriana.de.L..garvieae,.a.razón.de.1000.UFC·mL-1.por.animal..Los.peces.se.mantuvieron.en.observación.15.días.más,.durante.los.cuales.fue.registrada.la.mortalidad.en.todos.los.grupos.A.partir.de.muestras.tomadas.de.intestino.y.riñón.anterior.se.procedió.a.la.extracción.del.RNA,.para.la.cual.se.utilizó.el.método.TRIZOL..Se.diseñaron.cebadores.específicos,.mediante.el.programa.informático.Primer-BLAST.(National.Center.for.Biotechnology.Information),.para.amplificar.las.siguientes.citoquinas.IL-1β,.TNF-α,. IL-10.en.riñón.anterior.e.IL-8,.Tlr5,. IgT.en.intestino..Para.la.síntesis.del.DNA.complementario.se.utilizó.un.kit.iScript.cADN.Synthesis.(Bio-Rad),.tras.la.cual.se.realizaron.las.PCR.por.duplicado.para.cada.una.de.la.muestras.mediante.el.método.de.SYBR.Green,.utilizando.un.termociclador. iQ5.iCycler.(Bio-Rad)..El.programa.informático.iQ5.optical.system.(Bio-Rad).fue.utilizado.para.calcular.los.niveles.de.expresión.de.las.citoquinas.estudiadas.en.comparación.a.la.expresión.de.la.β-actina.y.el.gen.60S,.utilizados.como.controles..Los.resultados.obtenidos.se.analizaron.estadísticamente.mediante.el.método.de.Kaplan-Meier.y.el.test.log-rank..Para.determinar.diferencias.significativas.entre.la.respuesta.inmune.de.los.grupos.tratados.y.el.control.se.utilizó.el.test.ANOVA.de.una.vía.y.la.prueba.de.Tukey.

Resultados y DiscusiónSe. realizó. un. análisis. de. supervivencia. y. sólo. se. observaron. diferencias. significativas. para. el. grupo. tratado. con. Lb. plantarum. en.comparación.al.grupo.control..En. las.muestras.de.riñón.anterior.del.grupo. tratado.con.Lb. plantarum,. la.expresión.de. IL-1β,. IL-10.y.TNF-α.fue.mayor.que.la.del.grupo.control;.así.mismo,.la.expresión.de.IL-10.también.se.incrementó.tras.la.infección.con.L. garvieae..En.las.muestras.de.intestino,.la.expresión.de.la.IL-8.fue.mayor.en.el.grupo.al.que.se.le.administró.Lb. plantarum.tanto.antes.como.después.de.la.infección..Sin.embargo,.la.IgT.sólo.se.incrementó.tras.la.infección.con L. garvieae..Por.el.contrario,.la.expresión.de.Tlr5.en.el.grupo.tratado.con.probióticos.fue.menor.que.la.del.grupo.control.tras.la.infección.con.la.cepa.patógena..Estos.resultados.demuestran.que.la.respuesta.inmune.en.el.grupo.tratado.con Lb. plantarum.fue.la.responsable.de.la.protección.frente.a.la.Lactococosis.

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Conclusión:.El.uso.de.la.PCR.a.tiempo.real.para.la.detección.de.los.genes.relacionados.con.la.ribosa.y.la.hidrólisis.de.la.arginina,.junto.con.la.ampliación.aleatoria.del.ADN.(RAPD).para.la.caracterización.de.las.diferentes.cepas.de.Streptococcus iniae,.demuestran.ofrecer.una.alternativa.muy.interesante.para.clasificar.de.forma.especifica.las.diferentes.cepas.de.campo.de.S.iniae.

Bibliografía Pier.GB,.Madin.SH..1976..Streptococcus.iniae.sp..nov.,.a.beta-hemolytic.streptococcus.isolated.from.an.Amazon.Freshwater.Dolphin,.Inia.geoffrensis..International Journal of Systematic Bacteriology:.26.(4):.545–53.Nawawi.RA,.Baiano.J,.Barnes.AC..(2008)..Genetic.variability.amongst.Streptococcus.iniae.isolates.from.Australia. Journal of Fish Diseases:.31.(4):.305–9..Agnew.W,.Barnes.AC..2007..Streptococcus.iniae:.an.aquatic.pathogen.of.global.veterinary.significance.and.a.challenging.candidate.for.reliable.vaccination..Veterinary Microbiology.122.(1-2):.1–15.

Agradecimientos Agradecemos.la.ayuda.técnica.del.grupo.de.Ictiopatología.de.la.Facultad.de.Veterinaria.de.Zargoza,.y.a.los.Laboratorios.Hipra.S.A..por.el.envio.de.las.diferentes.cepas.de.Stroptococcus iniae


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Medio ET para la detección selectiva y diferencial de Edwardsiella tarda en sistema acuícolasN..Castro,.A.E.Toranzo,.S..Núñez.y.B..MagariñosDepartamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Biología-CIBUS e Instituto de Acuicultura, Universidad de Santiago de Composte-la, 15782 - Santiago de Compostela (A Coruña). [email protected]

AbstractEdwardsiella tarda. is.an. important.pathogen. in.aquaculture. that.causes.serious. losses. in. this. industry..Since.a.rapid.detection.of. the.pathogen.could.be.essential.for.minimize.mortalities.caused.for.this.disease,.in.this.work.the.effectiveness.of.the.selective-diferential.Edwardsiella tarda.medium.(ET).was.evaluated.for.the.diagnosis.of.edwardsiellosis.as.well.as.for.possible.usefulness.in.epidemiologi-cal.studies..ET.medium.was.evaluated.in.parallel.with.the.commercial.Salmonella-Shigella.Agar.(SS),.usually.employed.for.the.selective.isolation.of.enteric.bacilli..Moreover.two.general.media.(TSA-1.and.MA).were.employed.as.control..The.results.obtained.showed.that.ET.is.distinctly.selective.for.the.isolation.of.E. tarda,.allowing.its.recovery.from.mixed.cultures.and.natural.samples.as.unique.species..In.contrast,.although.colonies.of.E. tarda.could.be.clearly.distinguishable.in.SS.due.to.the.appearance.of.a.characteristic.black.center,.other.enteric.and.non-enteric.bacterial.species.could.also.grow.on.this.medium..In.conclusion,.we.recomend.ET.agar.as.an.usseful.medium.for.the.primary.isolation.and.detection.of.E. tarda.from.aquaculture.industry.

JustificaciónEdwardsiella tarda.es.un.patógeno.bacteriano.que.presenta.un.distribución.ubicua.y.una.gran.variedad.de.hospedadores..La.edwardsielo-sis.es.una.grave.enfermedad.que.causa.importantes.mortalidades.y.pérdidas.económicas.en.la.industria.acuícola,.tanto.de.agua.dulce.como.marina..Además,.en.lo.últimos.años.es.una.de.las.patologías.emergentes.más.importantes.en.la.acuicultura.del.rodaballo,.tanto.en.Europa.(Castro.et al.,.2006).como.en.China.(Xiao.et al.,.2009)..La.temprana.detección.del.agente.causal.de.una.enfermedad.es.de.vital.im-portancia.para.minimizar.las.pérdidas.que.ésta.produce..Por.ello,.se.han.desarrollado.métodos.moleculares.que.permiten.un.diagnóstico.rápido,.sensible.y.eficaz.de.las.enfermedades..Sin.embargo,.muchos.de.estos.métodos.no.permiten.disponer.de.cultivos.puros.del.agente.causal.y,.además,.resultan.costosos..En.laboratorios.convencionales,.el.diagnóstico.está.normalmente.basado.en.medios.de.cultivo.que.son.económicamente.más.accesibles.y.facilitan.el.aislamiento.del.patógeno..E. tarda.crece.en.medios.generales.empleados.normalmente.en.laboratorios.de.microbiología.como.el.TSA.(tripticasa.soja.agar).o.el.AM.(agar.marino)..Sin.embargo,.la.identificación.de.las.diferentes.colonias.bacterianas.suele.llevar.implicado.un.tiempo.del.que.en.ocasiones.no.se.dispone.cuando.ocurre.un.brote.de.edwardsielosis..El.uso.de.medios.de.cultivo.selectivos.adecuados.puede.contribuir.a.minimizar.este.tiempo.sin.comprometer.la.recuperación.del.agente.causal..En.este.trabajo.hemos.evaluado.el.medio.selectivo.y.diferencial.ET.(diseñado.para.el.aislamiento.de.E. tarda).(Lindquist,.1991).en.comparación.con.el.medio.SS.(medio.selectivo.comúnmente.empleado.para.el.aislamiento.de.varias.especies.de.enterobacterias.entre.las.que.se.encuentra.E. tarda).para.su.uso.en.el.diagnóstico.rutinario.de.la.edwardsielosis.en.acuicultura.así.como.para.su.posible.utilidad.en.estudio.epidemiológicos..

Material y MétodosSe.evaluaron.en.paralelo.dos.medios.de.cultivo.selectivos:.el.SS.(Difco.Laboratory,.Detroit,.USA).y.el.medio.ET..Como.control.se.emplearon.dos.medios.generales,.comúnmente.empleados.en.diagnóstico.en.acuicultura:.el.TSA-1.(TSA.con.1%.de.ClNa).(Difco.Laboratory,.Detroit,.USA).y.el.AM.(Difco.Laboratory,.Detroit,.USA)..Para.la.realización.del.estudio.se.utilizaron.13.cepas.de.E. tarda.aisladas.de.diferentes.hospedadores.y.20.cepas.de.diferentes.especies.bacterianas.(Tabla.1)..Se.evaluó.la.eficiencia.de.recuperación.para.cada.cepa.en.los.cuatro.medios.mediante.el.método.de.límite.de.dilución.(Daly.y.Stevenson,.1985).que.se.determinó.como.la.última.dilución.en.la.que.pudo.observarse.crecimiento..Además,.se.determinó.la.eficiencia.de.recuperación.de.E. tarda.en.estos.medios.empleando.cultivos.bacterianos.mixtos,.muestras.de.riñones.de.rodaballo.infectadas.experimentalmente.y.muestras.de.peces.procedentes.de.de.plantas.de.cultivo.con.antecedentes.de.edwardsielosis.

Tabla 14Cantidad.de.RNA.mensajero.de.cada.uno.de.los.genes.estudiados.

TratamientosRiñón Intestino

IL-1β TNF-α IL-10 IL-8 Tlr5 IgTControl.-.AI 1.2±0.1a 1.1±0.1.a 1.1±0.1.a 1.2±0.1.a 7.0±2.8.a 1.6±0.3.a

L. p..-.AI 10.9±1.5b 25.9±3.3.b 7.2±0.8.b 2.3±0.4.b 2.0±0.7.a 1.3±0.3.a

Control-.DI 5.7±.0.5c 12.6±1.2.c 7.0±0.8.b 1.7±0.2.ab 52.8±7.5.b 3.3±0.4.b

L. p. -DI 2.2±0.3a 9.6.±1.5.c 11.0±0.7.c 4.6±0.6.c 7.1±1.5.a 4.5±0.4.c

AI:.antes.de.la.infección.con.L..garvieae.DI:.después.de.la.infección.con.L..garvieae.L. p.:.Lactobacillus plantarumLos.diferentes.superíndices.indican.diferencias.significativas.entre.los.tratamientos.

BibliografíaBalcázar,.J.L.,.I..de.Blas,.I..Ruiz-Zarzuela,.D..Cunningham,.D..Vendrell.y.J.L..Múzquiz..2006..The.role.of.probiotics.in.aquaculture..Veterinary Microbiology..114:.173-186.Pérez,.T.,.J.L..Balcázar,.I..Ruiz-Zarzuela,.N..Halaihel,.D..Vendrell,.I..de.Blas.y.J.L..Múzquiz..2010..Host-microbiota.interactions.within.the.fish.intestinal.ecosystem..Mucosal Immunology..4:.355-360.Pérez-Sánchez,. T.,. J.L.. Balcázar,. Y.. García,. N.. Halaihel,. D.. Vendrell,. I.. de. Blas. I,. D.. Merrifield. e. I.. Ruiz-Zarzuela.. 2011.. Identification.and.characterization.of.lactic.acid.bacteria.isolated.from.rainbow.trout.Oncorhynchus mykiss (Walbaum).with.inhibitory.activity.against.Lactococcus.garvieae..Journal of Fish Diseases..34:.499-507.Vendrell,.D.,.J.L..Balcázar,.I..Ruiz-Zarzuela,.I..de.Blas,.O..Gironés.y.J.L..Múzquiz..2006..Lactococcus garvieae.in.fish:.a.review..Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Disease..29:.177-198.

AgradecimientosEste.estudio.ha.sido.financiado.por.el.Departamento.de.Ciencia,.Tecnología.y.Universidad.del.Gobierno.de.Aragón.a.través.de.una.beca.doctoral.concedida.a.T..Pérez-Sánchez..Agradecemos.la.asistencia.técnica.de.MC..Uriel,.J..Orós.y.R..Claver.

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Resultados y DiscusiónLos.resultados.obtenidos.demuestran.que.en.los.dos.medios.selectivos.(ET.y.SS).E. tarda.puede.ser.fácilmente.diferenciable.gracias.a.un.característico.punto.negro.en.el.centro.de.las.colonias..ET.resultó.el.medio.más.selectivo,.permitiendo.solamente.el.crecimiento.de.las.13.cepas.de.E. tarda.y.del.aislado.de.E. hoshinae,.mientras.que.el.SS.permitía.el.crecimiento.de.otras.especies.bacterianas..Sin.embargo,.solamente.el.0.1%.de.las.colonias.de.E. hoshinae.presentaron.la.formación.del.punto.negro..Además,.la.ocurrencia.de.esta.especie.es.muy.escasa.y.siempre.a.partir.de.aves.y/o.reptiles..No.se.observaron.diferencias.considerables.en.los.límites.de.dilución.obtenidos.en.los.cuatro.medios.empleados.para.las.13.cepas.de.E. tarda..A.partir.de.cultivos.mixtos,.la.recuperación.de.E. tarda.fue.más.rápida.y.eficaz.en.el.medio.ET,.ya.que.ninguna.otra.especie.pudo.crecer.en.él..Resultados.similares.se.obtuvieron.a.partir.de.las.muestras.de.riñón.inocula-das.experimentalmente..El.análisis.de.peces.procedentes.de.plantas.de.cultivo.mostró.que.existen.diferencias.significativas.en.el.tiempo.necesario.para.el.diagnóstico.de.la.edwardsielosis.en.función.del.medio.utilizado..Así,.cuando.se.emplearon.los.medios.TSA-1,.AM.y.SS,.el.crecimiento.de.otras.especies.bacterianas.hizo.necesario.un.paso.intermedio.de.aislamiento.y.purificación.de.las.colonias.de.E. tarda.para.su.posterior.identificación.que.retrasó.el.diagnóstico,.como.mínimo,.24.h..Sin.embargo,.el.medio.ET.permitió.obtener.cultivos.puros.de.E. tarda.que.pudieron.ser.usados.directamente.para.su.identificación.confirmativa..En.resumen,.proponemos.el.medio.ET.como.el.más.adecuado.para.llevar.a.cabo.estudios.epidemiológicos.de.la.edwarsielosis.en.sistemas.acuícolas.ya.que.permite.la.recuperación.de.E. tarda.y.evita.el.crecimiento.de.especies.no.deseadas..Además,.el.uso.del.medio.ET.en.paralelo.con.otros.medios.generales.como.el.TSA-1.o.el.AM.en.laboratorios.de.ictiopatología.puede.contribuir.a.un.diagnóstico.más.rápido.de.esta.importante.enfermedad.

Tabla 14Límites.de.dilución.de.Edwardsiella tarda.y.otras.especies.bacterianas..-:.indica.ausencia.de.crecimiento.en.todas.las.diluciones.

Especie (nº de cepas) OrigenMedio de cultivo

TSA-1 MA SS ET

Edwardsiella tarda(13)

Rodaballo(4),.platija(1),.pez.gato(1),.lenguado(1),.especie.de.pez.sin.determinar(1),.humanos(1),.tilapia(1),.anguila(1),.lubina(2)

10-8 10-7 10-8 10-8

Edwardsiella ictaluri(1) Pez.gato 10-8 - 10-6 -

Edwardsiella hoshinae (1) Frailecillo 10-8 - 10-8 10-5

Escherichia coli (2) Humano 10-8 10-7 10-6 -

Hafnia alvei (2) Trucha(1).y.salmón.atlántico(1) 10-8 10-7 10-7 -

Yersinia ruckeri (3) Trucha 10-8 10-7 10-7 -

Vibrio anguillarum (4) Rodaballo.(2).y.lubina.(2) 10-8 10-8 10-2 -

Aeromonas hydrophila (2) Rodaballo(1).y.salmón.atlántico(1) 10-8 10-8 10-7 -

Aeromonas salmonicida subsp. sal-monicida (2) Rodaballo 10-7 10-7 10-2 -

Tenacibaculum maritimum (3) Dorada(1),.rodaballo(1).y.lenguado.(1) - 10-8 - -

BibliografíaCastro,.N.,.Toranzo,.A.E.,.Barja,.J.L.,.Núñez,.S..y.Magariños,.B..2006..Characterization.of.Edwardsiella.tarda.strains.isolated.from.turbot..J Fish Dis 29:.541-547.Daly,.J.G..y.Stevenson,.R.M.W..1985..Charcoal.agar,.a.new.growth.medium.for.the.fish.disease.bacterium.Renibacterium.salmoninarum,.Appl Environ Microbiol 50,.868–871.Lindquist,.J.A.,.1991.Medium.and.procedure.for.the.direct,.selective.isolation.of.Edwardsiella.tarda.from.environmental.water.samples..Abstr. Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol. C-303,.p..302.

Efecto protector de Vagococcus sp. en lubinas (Dicentrarchus labrax) frente a una infección experimental con Vibrio anguillarumL..Sorroza1,.D..Padilla1,.P..Curiel2,.F..Acosta1,.L..Román1,.F..El.Aamri1,.J..Vega,.J..Bravo,.V..Grasso.y.F..Real1

1Instituto Universitario de Sanidad Animal y Seguridad Alimentaria. Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. Transmontaña s/n. 35413. Arucas. Gran Canaria. [email protected] de Biocombustible y Bioproductos del Instituto Tecnológico Agrario de la Comunidad Autónoma de Castilla y León

AbstractThe.presence.of.infectious.diseases.in.aquaculture.is.inevitable.due.to.the.intensive.culture.conditions..Outbreaks.of.Vibrio anguillarum.cause.huge.economic.losses. in.this.sector,.and.the.probiotics.are.a.good.alternative.for.the.control.of.this.pathogen..The.aim.of.this.work.is.evaluate.the.protective.effect.of.Vagococcus.sp..against.V. anguillarum..This.strain.was.previously.isolated.from.sole.intestine.and.showed.inhibitory.effect.against.V. anguillarum..Inoculated.fish.and.fed.with.the.probiotic.strain.showed.higher.survival.rate.than.control.fish..In.conclusion,.Vagococcus.sp..can.be.used.as.probiotic.bacteria.to.protect.sea.bass.against.infection.by.V. anguillarum,.and.may.be.an.important.management.tool.for.the.control.of.this.disease.in.marine.culture.

Justificación El.cultivo.de.la.lubina.es.uno.de.los.mas.importantes.en.España.y.puede.verse.afectado.por.enfermedades.infecciosas.como.la.vibriosis,.cuyo.principal.agente.causal.es.Vibrio anguillarum..Debido.a.las.restricciones.existentes.en.el.uso.de.antibióticos.y.a.que.las.vacunas.existentes.no.siempre.producen.resultados.satisfactorios,.la.búsqueda.de.métodos.alternativos.como.los.probióticos.que.permitan.curar.y/o.prevenir.las.enfermedades.infecciosas.tiene.un.enorme.interés.(Abbass,.Sharifuzzaman.y.Austin,.2010)..


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Materiales y MétodosEl.estudio.parte.de.una.cepa.aislada.de.lenguado.(Solea solea).con.demostrado.efecto.inhibitorio.frente.a.V. anguillarum..La.cepa,.identificada.como.Vagococcus sp..por.secuenciación.parcial.del.gen.16sRNA,.fue.sometida.a.ensayos.de.resistencia.a.pH.ácidos.y.a.la.acción.de.la.bilis,.simulando.su.paso.por.el.tracto.gastrointestinal.de.los.peces.(Nikoskelainen.et al.,.2001),.así.como.su.capacidad.de.adhesión.y.crecimiento.al.mucus.intestinal.(Van.der.Marel.et al.,.2008).para.determinar.su.capacidad.de.colonizar.el.intestino.de.los.peces..A.su.vez,.determinamos.la.producción.de.ácidos.orgánicos.por.HPLC.con.un.detector.de.índice.de.refracción.(Algilent.1200.RID),.y.columna.Aminex.HPX-87H.Ion.300.mm.x.7.8.mm.en.el.(Anderson.y.Hedlund,.1983).como.posible.mecanismo.de.acción.del.efecto.inhibitorio.mostrado..La.dieta.experimental.se.preparó.adicionando.al.pellet.la.cepa.probiótica.(Irianto.y.Austin,.2002).a.una.concentración.final.de.107.ufc/gr..Lubinas.de.18.g.fueron.alimentadas.durante.30.días.con.esta.dieta.experimental,.y.la.infección.experimental.con.V. anguillarum se.realizó.por.baño.durante.8.horas.a.una.concentración.de.108ufc/ml.para.tratar.de.simular.las.condiciones.normales.en.el.cultivo..

Resultados y Discusión La. cepa. analizada. mostró. una. aceptable. resistencia. al. efecto. de. la. bilis. y. el. pH,. con. tasas. de. supervivencia. del. 66,7%. y. 53,5%,.respectivamente,.ya.que.si.bien.es.cierto.se.evidencia.una.disminución.significativa.en.la.viabilidad.de.la.cepa,.hay.que.tener.en.cuenta.que.el.ensayo.de.resistencia.a.la.bilis.se.realiza.a.una.concentración.del.10%.frente.al.3%.en.humanos.ya.que.se.desconoce.el.porcentaje.real.en.los.peces,.y.además.la.cepa.probiótica.va.mezclada.con.el.alimento,.por.lo.que.la.acción.de.la.bilis.y.pH.ácido.no.es.directa..Esta.cepa.tiene.una.excelente.capacidad.de.crecer.y.desarrollarse.en.el.mucus.intestinal.de.la.lubina,.con.un.ratio.de.crecimiento.1.logaritmo.superior. al. control.. Asimismo,. esta. cepa. presenta. una. excelente. capacidad. de. adherirse. al. mucus. de. la. lubina. (42,56%),. sugiriendo.que. dicho. proceso. se. realiza. por. factores. específicos,. ya. que. se. evidenciaron. diferencias. significativas. con. superficies. inespecíficas.como.la.albúmina.sérica.bovina.y.poliestireno.usados.como.controles.negativos..Estos.resultados.nos.permiten.asegurar.que.la.cepa.probiótica,.una.vez.administrada.a.los.peces.y.tras.atravesar.el.tracto.digestivo,.podría.establecerse.en.el.intestino.y.llegar.a.colonizarlo..El.análisis.por.HPLC.de.los.productos.extracelulares del.sobrenadante.del.cultivo.de.Vagococcus.sp..evidenció.la.producción.de.ácido.láctico.(35,93%),.glicerol.(6,96%),.ácido.acético.(20,01%).y.etanol.(9,53%)..En.el.desafío.experimental.frente.a.V. anguillarum,.las.lubinas.alimentadas.con.la.cepa.probiótica.presentaron.una.tasa.de.mortalidad.del.17,.3%.frente.al.30%.del.grupo.control.(lubinas.infectadas.alimentadas.con.pienso.comercial.sin.probiótico),.lo.que.supone.una.protección.del.42,3%.(Figura.1)..En.conclusión,.podemos.decir.que.la.cepa.Vagococcus.sp..aislada.del.intestino.de.lenguado.puede.ser.capaz.de.proteger.a.las.lubinas.frente.a.una.infección.con.V. anguillarum,.pudiendo.ser.una.importante.herramienta.para.el.control.de.la.vibriosis.en.la.acuicultura.marina.

Figura 14Porcentaje.de.supervivencia.de.lubinas.inoculadas.con.V. anguillarum.tras.la.administración.de.la.cepa.probiótica.Vagococcus.sp.

BibliografiaAbbass,. A.,. S.. Sharifuzzaman.,. y. B.. Austin.. 2010.. Cellular. components. of. probiotics. control. Yersinia ruckeri. infection. in. rainbow. trout,.Oncorhynchus mykiss (Walbaum)..Journal Fish Disease..33:.31-37.Irianto,.A.,.y.B..Austin..2002..Use.of.probiotic.to.control.furunculosis.in.rainbow.trout.(Oncorhynchus mykiss). Journal Fish Disease..25:333-342.Nikoskelainen,.S.,.S..Salminen.,.G..Bylund.,.A..Ouwehand..2001..Characterization.of.the.properties.of.human-and.dairy-derived.probiotics.for.prevention.of.infectious.diseases.in.fish..Applied Environment.Microbiology..67:.2430-2435.Van.der.Marel,.M.,.V..Schroers.,.H..Neuhaus.,.D..Steinhagen..2008..Chemotaxis.towards,.adhesion.to,.and.growth.in.carp.gut.mucus.of.two.Aeromonas hydrophila.strains.with.different.pathogenicity.for.common.carp,.Cyprinus carpio.L..Journal Fish Diseases..31(5):.321-30..

Aspectos ultraestructurales, histopatológicos e inmunohistoquímicos de Streptococcus iniae en dorada (Sparus aurata L.) y bocinegro (Pagrus pagrus)F..El.Aamri,.F..Real,.F..Acosta,.MJ..Caballero,.L..Sorroza,.L..Román,.J..Vega,.V..Grasso,.J..Bravo,.D..PadillaInstituto Universitario de Sanidad Animal y Seguridad Alimentaria. Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. Trasmontaña s/n. 35413. Arucas, España. [email protected]

AbstractStreptococcosis.in.cultured.gilthead.seabream.(Sparus aurata).and.red.porgy.(Pagrus pagrus).was.reported.in.the.Canary.Islands.(Spain)..Diseased.fish.showed.both.unilateral.and.bilateral.exophtalmia,.haemorrhagic.septicemia,.petechiae.around.the.anus.and.on.body.sides.and.fin.bases..Internally,.the.liver,.spleen,.and.kidneys.were.pale.and.swollen,. infected.animals.circled.listlessly.at.the.water.surface.and.showed.various.signs.of.disorientation..Histopathological.study.showed.meningoencephalitis,.epicarditis,.myocarditis.and.multifocal.infiltration.of.macrophage.cells.in.different.tissues,..Inmunohistochemical.examination.revealed.intense.positive.reaction.a.S. iniae..

Justificación La. estreptococosis. causada. por. Streptococcus iniae. es. una. enfermedad. emergente. de. gran. importancia. en. la. acuicultura. marina. y.continental..La. infección.causa.una.meningoencefalitis.aguda.con.elevadas. tasas.de.mortalidad.en.más.de.30.de.especies.de.peces.(Bercovier.et al.,.1997),.incluyendo.lubina.(Dicentrarchus labrax).(Colorni.et al.,.2002),.lenguados.(Paralichthys olivaceus).(Nguyen.et.al.,.2002),.dorada.(Sparus aurata).(El.Aamri.et al.,.2010).y,.más.recientemente,.bocinegro.(Pagrus pagrus).(El.Aamri.et al.,.2010)..La.infección.

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humana. suele. ser. el. resultado. de. la. exposición. de. manos. heridas. durante. la. manipulación. de. los. peces. enfermos. (Lau. Woo. et al.,.2006). En.el.presente.trabajo.realizamos.un.estudio.ultraestructural,.histopatológico.e.inmunohistoquímico.de.la.infección.por.S. iniae en.juveniles.de.bocinegro.y.dorada.

Material y métodos La.cepa.utilizada.en.este.estudio.fue.aislada.previamente.de.un.brote.natural.de.enfermedad.en.dorada.y.bocinegro.en.España.(El.Aamri.et al.,.2010)..Los.estudios.ultraestructurales,.histopatológicos.e.inmunohistoquímicos.se.realizaron.a.partir.de.las.muestras.procedentes.de.la.inoculación.experimental.de.un.grupo.de.20.peces.por.especie.con.un.peso.medio.aproximado.de.20.g.con.una.dosis.de.105.ufc/pez.por.vía.intraperitoneal..Los.peces.posteriormente.se.monitorizaron.durante.14.días.y.los.peces.muertos.y/o.con.signos.evidentes.de.enfermedad.se.sometieron.a.necropsia.reglada.y.toma.de.muestras..Como.grupo.control.se.inocularon.peces.con.PBS.estéril..Muestras.de. cerebro,. riñón,. bazo,. corazón. y. músculo. se. fijaron. en. formalina. tamponada. al. 10%. para. su. estudio. histopatológico,. realizándose.secciones.de.corte.de.4.micras.que.posteriormente. teñidas.con.hematoxilina-eosina..El.estudio. inmunohistoquímico.se. llevó.a.cabo.con.la.metodología.descrita.por.Martín.de.las.Mulas.et al.. (1990)..Para.el.estudio.ultraestructural,.muestras.de.cerebro,.bazo.y.riñón.se.fijaron.en.glutaraldehído.al.2%.y.posteriormente.en.tetróxido.de.osmio.(OsO4)..Los.cortes.se.realizaron.en.un.ultramicrotomo.con.un.grosor.de.50.nm,.se.contrastaron.con.citrato.de.plomo.y.se.observaron.en.un.microscopio.de.transmisión.(TEM).perteneciente.al.Servicio.de.Microscopía.Electrónica.de.la.Ulpgc.

Resultados y Discusión Tras. dos. días. de. la. inoculación. experimental. empezaron. a. observarse. los. primeros.signos. de. enfermedad. y. las. primeras. muertes.. Los. peces. presentaron. melanosis,.natación.errática,.exoftalmia.y.opacidad.corneal,.así.como.la.presencia.de.hemorragias.petequiales.y.ulceraciones..El.estudio.histopatológico.del.sistema.nervioso.destacó. la.presencia.de.una.meningoencefalitis.granulomatosa.caracterizada.por.la.infiltración.de.células.inflamatorias,.principalmente.macrófagos,.eosinofilos.y.células.mononucleares..En. tejido. muscular. y. subcutáneo. se. observó. la. infiltración. de. células. inflamatorias,.proliferación.de.células.mucosas.y.aumento.en.el.número.de.melanóforos..En.corazón.se. observó. epicarditis. y. miocarditis.. En. riñón. y. bazo. se. encontraron. granulomas,. y.la. proliferación. de. centros. melanomacrofágicos. que. contenían. menor. cantidad. de.pigmento..El.examen.inmunohistoquímico.reveló.una.reacción.positiva.a.S..iniae.en.los.diferentes.tejidos.procesados..La. meningoencefalitis. se. presenta. como. la. lesión. histopatológica. más. importante.producida.por.S. iniae.(Figura.1).y.otros.estreptococos.en.diferentes.especies.de.peces.(Altun.et al.,.2005),.pudiéndose.correlacionar.esta. lesión.con. los.síntomas.clínicos.de.letargia.y.pérdida.de.orientación.encontrados.en.nuestro.estudio,.tal.y.como.han.sugerido.anteriormente. Eldar. et al.. (1999).. Al. nivel. ultraestructural. encontramos. macrófagos.conteniendo. numerosas. bacterias. intracelulares. dentro. de. fagosomas. y. en. varias.etapas.de.degradación..El.citoplasma.de.los.macrófagos.mostraba.zonas.degenerativas,.abundancia.de.material.vesicular.y.membranoso.en.el.espacio.de.fagosoma.

BibliografíaAltun,.S.,.A..Diler,.Ö..Diler,.K..Basak.y.B..Isikli..2005..Histopathology.of.streptococcosis.in.rainbow.trout.(Oncorhynchus mykiss Walbaum)..Bulletin of the European Association of Fish Pathologist..25:.131-135..Bercovier,.H.,.C..Ghittino.y.A..Eldar..1997..Immunization.with.bacterial.antigens:.Infections.with.streptococci.and.related.organisms..En:.Fish.Vaccinology. Gudding,.Lillehaug,.Midtlyng,.y.Brown..(Eds,):.153-160..Colorni,.A.,.A..Diamant,.A..Eldar,.H..Kvitt. y.A..Zlotkin..2002..Streptococcus iniae infections. in.Red.Sea.cage-cultured.and.wild.fishes..Diseases of Aquatic Organisms..49:.165-170..El.Aamri,.F.,.D..Padilla,.F..Acosta,.M..J..Caballero,.J..Roo,.J..Bravo,.J..Vivas.y.F..Real..2010..First.report.of.Streptococcus iniae.in.red.porgy.(Pagrus pagrus,.L.)..Journal of Fish Diseases..33:.901-905..Eldar,.A.,.S..Perl,.P.F..Frelier.y.H..Bercovier..1999..Red.drum.Sciaenops ocellatus mortalities.associated.with.Streptococcus iniae infection..Diseases of Aquatic Organisms. 36:.121-127.Lau,.S.K.,.P.C..Woo,.W.K..Luk,.A.M..Fung,.W.T..Hui,.A.H..Fong,.C.W..Chow,.S.S..Wong.y.K.Y..Yuen..2006..Clinical.isolates.of.Streptococcus.iniae.from.Asia.are.more.mucoid.and.beta-hemolytic.than.those.from.North.America..Diagnostic Microbiology and Infectious Disease..54:.177-181.Martin.de.las.Mulas,.J.,.A..Fernández,.M.A..Sierra,.J.B..Poveda.y.J..Carranza..1990..Immunohistochemical.demonstration.of.Mycoplasma ealliaarum.and.Mycoplasma eallinaceum.in.naturally.infected.hen.oviducts..Research in Veterinarv Science..49:.339-345.Nguyen,.H.T.,.K..Kanai.y.K..Yoshikoshi..2002..Ecological.investigation.of.Streptococcus iniae in.cultured.Japanese.flounder.(Paralichthys olivaceus).using.selective.isolation.procedures..Aquaculture..205:.7-17.

Figura 14Cerebro. de. bocinegro. inoculado.con. Streptococcus iniae. Meningoencefalitis.aguda. caracterizada. por. la. formación. de.granulomas. con. infiltración. de. macrófagos,.eosinófilos.y.células.mononucleares.(x40,.HE).

Saprolegniosis en boga del Duero Pseudochondrostoma durienseJ.M..Aller.Gancedo.1,.J.M..Fregeneda.Grandes,.M.J..García.Iglesias,.C..González.Palacios.y.L.I..Pérez-Ordoyo.G1Universidad de León. Facultad de Veterinaria. Departamento de Sanidad Animal. Campus de Vegazana, s/n. 24071 León. Españajmallg@unileon

AbstractAn.outbreak.of.saprolegniosis.in.Iberian.nase, Pseudochondrostoma.duriense,.that.affected.several.hundred.fish.in.the.river.Bernesga.(León,.Spain),.coinciding.with.the.spawning.season,.is.described..The.fish.had.typical.skin.lesions.of.saprolegniosis.from.which.Saproleg-nia parasitica.was.isolated..Histopathologically.there.was.destruction.of.the.dermis,.necrosis.of.muscle.fibres.and.ulcerative.queratocon-juntivis..This.study.is.the.first.report.of.an.outbreak.of.saprolegniosis.in.P. duriense.

JustificaciónEn.abril.de.2011.surgió.un.brote.de.saprolegniosis.que.afectó.a.bogas,.Pseudochondrostoma duriense.(Coelho,.1985),.del.río.Bernesga.a.su.paso.por.el.casco.urbano.de.la.ciudad.de.León..Aunque.esta.enfermedad.se.ha.diagnosticado.en.diversas.ocasiones.y.con.alta.prevalencia.en.trucha.común.Salmo trutta.L.en.ríos.de.la.provincia.(Aller.y.Fernández,.1987;.Fregeneda,.Carbajal.y.Aller,.2009),.esta.es.la.primera.ocasión.en.que.se.detecta.un.brote.de.saprolegniosis.en.una.especie.de.la.familia.Cyprinidae.


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Sanidad Animal

Material y MétodosSe.recogieron.15.bogas.enfermas.y.una.sana.(9.β.y.7.β).de.la.especie.P. duriense.que.se.trasladaron.vivas.al.laboratorio..Se.realizó.mi-croscopía.directa.y.siembras.en.agar.glucosa.peptona.de.las.lesiones.cutáneas.y.cultivos.en.agar.triptona.soja.(TSA).de.órganos.internos..También.se.efectuó.un.estudio.histopatológico.de. las. lesiones.utilizando. las. técnicas.de. tinción.hematoxilina-eosina,.PAS.y.Gomori-Grocott..La.identificación.de.los.aislados.de.Saprolegnia.se.basó.en.las.características.morfológicas..Para.la.identificación.de.los.aislados.bacterianos.se.utilizaron.galerías.API.20.NE.(Biomerieux).y.el.sistema.automatizado.Vitek®.2.System.(Biomerieux).

Resultados y DiscusiónSe.desconoce.el.número.de.bogas.afectadas.pero.como.mínimo.alcanzó.a.varios.centenares..Los.peces.presentaban.lesiones.cutáneas.típicas.de.saprolegniosis,.de.aspecto.blanquecino.y.algodonoso,.con.ulceración.de.la.piel.en.algunos.casos..Las.lesiones.se.localizaban.en.la.cabeza,.tronco.y.aletas,.ocupando.en.algunos.individuos.un.alto.porcentaje.de.la.superficie.corporal..No.se.detectaron.lesiones.macroscópicas.en.órganos.internos.Histopatológicamente.se.observó.una.dermatitis.no.purulenta.con.destrucción.de.la.dermis.y.degeneración,.necrosis.e.inflamación.de.las.fibras.musculares.esqueléticas.localizadas.superficialmente..Uno.de.los.peces.presentaba.una.queratoconjuntivitis.ulcerativa..En.todos.los.casos.las.lesiones.histopatológicas.estaban.asociadas.a.la.presencia.de.hifas.de.Saprolegnia.En.todos.los.peces.muestreados.se.aisló.Saprolegnia parasitica.de.las.lesiones.cutáneas..Los.cultivos.en.TSA.de.riñón,.hígado.y.bazo.pro-porcionaron.un.crecimiento.variable.y.múltiple.de.bacilos.Gram-negativos..Se.seleccionaron.los.más.representativos.siendo.identificados.principalmente.como.Aeromonas hydrophila-caviae.y.Aeromonas sobria.El.brote.coincidió.con.el.periodo.reproductor.de.la.boga,.lo.que.teóricamente.facilitó.la.infección.por.S. parasitica.al.igual.que.ocurre.en.los.salmónidos.El.análisis.de.los.factores.físico-químicos.del.agua.dio.valores.normales.dentro.de.la.calidad.exigible.a.las.aguas.ciprinícolas,.no.obstante.la.presencia.de.gérmenes.tipo.Aeromonas.es.habitual.en.el.agua,.tratándose.además.en.este.caso.de.una.zona.donde.existen.vertidos.urbanos,.por.lo.que.no.es.anormal.su.aislamiento.de.órganos.internos..Probablemente.todas.estas.condiciones.favorecieron.el.brote.de.saprolegniosis.Tenemos.noticias.anteriores,.no.confirmadas.en.el.laboratorio,.de.la.visión.de.bogas.aisladas.y.de.otros.ciprínidos.que.presentaban.lesio-nes.cutáneas.compatibles.con.saprolegniosis..No.obstante,.esta.es.la.primera.descripción.de.un.brote.de.saprolegniosis.por.Saprolegnia parasitica.afectando.a.la.especie.Pseudochondrostoma duriense.(boga.del.Duero),.cuya.área.de.distribución.es.la.península.Ibérica,.con-cretamente.la.cuenca.del.Duero.y.Galicia..En.España.se.ha.descrito.la.infección.por.Saprolegnia.sp..en.otra.especie.de.boga,.Chondrostoma polylepis,.del.río.Chanza.en.Huelva.(González,.et al.,.2001),.pero.no.hay.citas.de.infección.por.Saprolegnia.en.P. duriense.

BibliografíaAller.Gancedo,.J.M..y.Fernández.Díez,.M..1987..Saprolegniosis.en.la.trucha.común.(Salmo trutta.L.).de.los.ríos.de.León.(España)..Medicina Veterinaria,.4(3):.181-184Fregeneda.Grandes,.J.M.,.Carbajal.González,.M.T..y.Aller.Gancedo,.J.M..2009..Prevalence.of.serum.antibodies.against.Saprolegnia para-sitica.in.wild.and.farmed.brown.trout.Salmo trutta..Diseases of Aquatic Organisms,.83:.17-22González.de.Canales,.M.L.,.J..Bosco.Ortiz,.M..González.del.Valle.y.C..Sarasquete..2001..Saprolegniasis.en.poblaciones.naturales.de.peces..Ciencias Marinas,.27(1):.125-137.

AgradecimientosAgradecemos.la.colaboración.del.Servicio.Territorial.de.Medio.Ambiente.de.León.(Junta.de.Castilla.y.León).en.la.recogida.de.los.peces,.del.Laboratorio.Regional.de.Sanidad.Animal.de.León.(J..de.C..y.L.).por.los.datos.del.Vitek.2.y.de.la.Confederación.Hidrográfica.del.Duero.por.los.datos.del.análisis.del.agua.

Estudios sobre ectoparásitos en piscicultura: Del conocimiento básico al control sostenibleC..Agustí1,.C.R..Wiik-Nielsen1,.M.M..Isern2,.I..Alonso3,.S..Grove1,.J.A..Raga3.y.N..Sánchez-García3

1Instituto Nacional Veterinario de Oslo, Ullevålsveien 68, Pb 750 Sentrum, N-0106 Oslo (Noruega), [email protected] Culmarex. C/Don Carnal, S/N, 30880-Águilas, Murcia3Instituto Cavanilles de Biodiversidad y Biología Evolutiva, y Parque Científico, Universidad de Valencia. Edificio Institutos, Campus de Paterna, Apartado de Correos 22085, 46071 Valencia

AbstractEctoparasites. infections. are. a. big. problem. in. European. aquaculture,. causing. mortality. and. serious. economical. losses. in. fish. farms..Currently,.control.of.the.parasites.principally.relies.on.chemical.treatments,.but.this.practice.comes.with.several.problems..Alternative.solutions,.such.as.vaccination.or.natural.oral.anti-parasitics,.are.hence.urgently.needed..This.strategy.however,.requires.that.suitable.parasite.antigens.can.be.identified.and.used.in.the.vaccines..In.the.present.study,.we.have.undertaken.such.search.for.antigens.in.two.ectoparasites,. the. monogenean. Sparicotyle chrysophrii,. infecting. gilthead. seabream,. and. the. salmon. louse,. Lepeophtheirus salmonis,.infecting.Atlantic.salmon..Our.strategy.has.been.to.look.for. ‘weak.points’. in.the.digestive.system.of.the.parasites..Both.parasites.are.blood.feeders,.and.hence.need.mechanisms.to.protect.themselves.against.harmful.substances.in.the.ingested.blood,.such.as.proteases.and. complement. factors.. Using. advanced. techniques,. including. ‘phage. display’,. we. detected. several. digestive. enzymes. and. possible.complement.inhibitors.that.might.be.of.value.for.vaccine.development..

JustificaciónUno. de. los. objetivos. prioritarios. del. sector. acuícola. es. el. control. de. enfermedades.. En. concreto,. las. ectoparasitosis,. enfermedades.producidas.por.parásitos.externos,.como.monogeneos.y.crustáceos.parásitos,.son.un.problema.creciente.en.los.últimos.años,. llegando.a. producir. importantes. mortandades. en. granjas. de. peces,. con. la. consiguiente. pérdida. económica. (Dalvin. et. al,. 2009;. Sitja-Bobadilla. y.Alvarez-Pellitero,.2009)..En.la.actualidad,.el.control.de.las.ectoparasitosis.se.basa.en.el.uso.de.productos.químicos.antiparasitarios.(como.la.ampliamente.utilizada.formalina,.el.peróxido.de.hidrógeno.o.los.antiparasitarios.prazicuantel.o.avermectina.en.casos.experimentales).y.en.medidas.profilácticas.y.de.manejo.(limpieza.y.desinfección.periódicas.de.las.redes.y.herramientas.de.trabajo).(Sitja-Bobadilla.et.al,.2006)..Sin.embargo,.los.tratamientos.químicos.conllevan.multitud.de.problemas.logísticos,.medioambientales,.económicos.y.legales,.especialmente.en.granjas.en.mar.abierto..Además,.ya.se.han.detectado.serios.problemas.de.resistencia.frente.a.antiparasitarios.en.algunos.ectoparásitos,.como.el.piojo.del.salmón.(crustáceo,.copépodo),.debido.a.tratamientos.subóptimos.o.parcialmente.efectivos..Si.a.todo.ello.sumamos.la.creciente.restricción.del.uso.de.la.formalina,.el.tratamiento.más.extendido.contra.muchas.ectoparasitosis,.el.control.de.estos.parásitos.va.a.resultar.extremadamente.difícil.en.un.futuro.muy.cercano..Por.ello,.la.búsqueda.de.tratamientos.alternativos.que.sean.realmente.eficaces.y.seguros.es.una.prioridad.absoluta..De.entre.las.pocas.alternativas.que.cumplen.estos.requisitos.están.la.vacunación.y.el.desarrollo.de.tratamientos.antiparasitarios.orales.naturales,.por.lo.que.los.esfuerzos.deberían.dirigirse.hacia.el.desarrollo.y.uso.de.los.mismos.

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La. tarea.más.difícil.en.el.desarrollo.de. tratamientos.alternativos.eficaces.contra.ectoparásitos.es. la. identificación.de.moléculas.del.parásito.que.puedan.ser.usadas.en.vacunación.y/o.como.diana.de.productos.antiparasitarios.y.que.sean.importantes.para.su.supervivencia.(Willadsen,.2006)..En.el.presente.trabajo.se.estudian.diferentes.moléculas.en.dos.especies.de.ectoparásitos:.i).el.monogeneo.microcotílido.Sparicotyle chrysophrii,.que.parasita.a.la.dorada.(Sparus aurata);.ii).el.piojo.del.salmón,.Lepeophtheirus salmonis,.que.parasita.al.salmón.atlántico.(Salmo salar)..Ambos.parásitos.constituyen.una.amenaza.muy.seria.para.los.cultivos.de.sus.peces.hospedadores..

Material y MétodosObtención.de.muestras:Se.obtuvo.suero.de.pez.y.espécimenes.de.S. chrisophrii y.L. salmonis.de.doradas.y.salmones.procedentes.de.granjas.de.mar.españolas.y.noruegas.respectivamente.Detección.de.moléculas:.Ambas. especies. de. parásitos. se. alimentan. de. sangre. del. pez,. por. lo. deben. tener. un. sistema. de. protección. frente. al. sistema. del.complemento.(muy.potente.en.peces.y.capaz.de.dañar.a.ectoparásitos).que.ingieren.con.dicho.alimento.(Buchmann,.1998;.Schroeder.et.al.,.2009)..Se.han.realizado.diferentes.estudios.con.el.fin.de.identificar.esos.elementos/moléculas.que.los.protegen.

•. Para.testar.la.acción.del.complemento.sobre.S. chrisophrii y.L. salmonis.se.realizó.un.estudio.con.el.fin.de.testar.la.supervivencia.del.parásito.cuando.es.sumergido.en.suero.de.dorada.y.salmón.respectivamente.(diluciones.del.suero.en.PBS:.1:10,.1:20,.1:50,.1:100,.1:200)..Se.sumergieron.3-5.parásitos.en.cada.una.de.las.diluciones.y.se.registro.la.supervivencia.de.los.parásitos.durante.30.horas..

•. Para.caracterizar.cuantitativamente.esos.posibles.inhibidores.se.desarrolló.un.ensayo.hemolítico.con.suero.de.dorada.y.S. chrisophrii..El.complemento.presente.en.el.suero.del.pez.es.capaz.de.lisar.o.romper.glóbulos.rojos.de.conejo..Al.poner.en.contacto.una.dilución.del.suero.del.pez,.proteínas.del.parásito.y.eritrocitos.de.sangre.de.conejo,.el.inhibidor.del.complemento.del.parásito.inactiva.la.reacción.evitando.así.la.lisis.de.los.eritrocitos..El.grado.de.inhibición.del.complemento.es.medido.espectrofotométricamente.

•. Para.aislar.y.caracterizar.dichos.inhibidores.se.está.utilizando.la.tecnología.“phage.display”.con.el.modelo.L. salmonis.–.salmón.atlántico..Dicha.tecnología.selecciona.las.proteínas.del.parásito.que.interactúan/se.unen.a.los.factores.del.complemento.del.pez.(técnica.del.“biopanning”)..Las.proteínas.del.parásito.son.expresadas.de.modo.recombinante.en.la.superficie.(cápside).de.virus.bacteriófagos.(fagos)..Las.proteínas.del.complemento.son.aisladas.mediante.métodos.cromatográficos.(FPLC)..Posteriormente.se.debe.averiguar.si.las.proteínas.del.parásito.que.han.interactuado.son.realmente.los.inhibidores.del.complemento.que.se.buscan..

•. Unos.100.espécimenes.de.S. chrisophrii.fueron.analizados.mediante.métodos.histoquímicos.para.la.detección.de.enzimas.digestivos.y.otras.moléculas.(kits.comerciales)..

Resultados y Discusión•. Acción.del.complemento.sobre.S. chrisophrii y.L. salmonis:.los.parásitos.sumergidos.en.las.diferentes.concentraciones.de.suero.

sobrevivieron.tras.30.horas.de.incubación,.lo.que.indica.la.presencia.de.mecanismos.de.protección.frente.a.factores.del.sistema.inmune.del.pez..

•. El.ensayo.hemolítico.mostró.que.S. chrysophrii.es.capaz.de.inhibir.la.ruta.alternativa.de.activación.del.complemento.de.dorada.en.aproximadamente.un.50%.(proteínas.extraídas.de.un.espécimen.de.S. chrysophrii.en.5µl.de.suero.de.dorada).

•. Análisis.“phage.display”:.se.ha.obtenido.una.biblioteca.de.proteínas.de.L. salmonis.expresadas.en.la.cápside.de.fagos.T7Select.10-3b..Datos.de.la.biblioteca:.longitud.del.inserto:.350-900.bp;.tamaño.de.la.biblioteca.primaria:.2,4x106.fagos.o.pfu;.tamaño.de.la.biblioteca.amplificada:.4x1010.pfu/ml..Se.han.aislado.parcialmente.mediante.FPLC.varias.proteínas.clave.del.complemento.de.suero.de.salmón.que.serán.usadas.como.moléculas.diana.en.la.técnica.del.biopanning:.C5.y.tres.variantes.de.C3..Se.han.realizado.4.rondas.de.biopanning.para.seleccionar.las.los.fagos.que.se.unen.con.más.afinidad.a.dichas.proteínas.del.complemento,.y.se.ha.encontrado.una.proteína.de.piojo.de.salmón.con.una.alta.afinidad.por.C3..

•. Análisis. histoquímico:. se. han. detectados. tres. tipos. de. enzimas. en. diferentes. partes. del. sistema. digestivo. de. S. chrysophrii:.fosfatasas.ácidas.y.alcalinas.y.esterasas.carboxílicas..Además,.se.ha.encontrado.calcio.en.las.pinzas.del.haptor..

La.identificación.de.estas.moléculas.constituye.el.primer.y.mas.importante.paso.en.el.desarrollo.de.vacunas.y/o.antiparasitarios.realmente.eficaces.en.el.control.de.las.ectoparasitosis.producidas.por.S. chrisophrii y.L. salmonis..El.uso.de.vacunas.y/o.antiparasitarios.inactivaría.esas.moléculas.del.parásito.(inhibidores.del.complemento.y.enzimas.digestivos),.dejándolo.así.desprotegido.frente.a.la.acción.del.sistema.inmune.del.pez.que.ha.ingerido.al.alimentarse.de.sangre,.y.anulando.la.acción.de.los.enzimas.digestivos.del.parásito,.necesarios.para.una.correcta.asimilación.del.alimento..El.desarrollo.de.estos.tratamientos.alternativos.supondría.un.gran.avance.en.el.desarrollo.y.la.competitividad.de.la.acuicultura.española.y.europea.a.corto.y.largo.plazo..

BibliografíaBuchmann,.K..1998..Binding.and. lethal.effect.of.complement. from.Oncorhynchus.mykiss.on.Gyrodactylus.derjavini. (Platyhelminthes:.Monogenea)..Diseases of Aquatic Organisms..32:.195-200..Dalvin,.S.,.P..Frost,.E..Biering,.L.A..Hamre,.C..Eichner,.B..Krossøy.y.F..Nilsen..2009..Functional.characterisation.of.the.maternal.yolk-associated.protein. (LsYAP).utilising.systemic.RNA.interference. in. the.salmon.louse. (Lepeophtheirus salmonis). (Crustacea:.Copepoda)..International Journal for Parasitology..39:.1407–1415.Schroeder,.H.,.P.J..Skelly,.P.F..Zipfel,.B..Losson.y.A..Vanderplasschen..2009..Subversion.of.complement.by.hematophagous.parasites..Developmental and Comparative Immunology..33:.5–13.Sitja-Bobadilla.A,.de.Felipe.MC.y.Alvarez-Pellitero.P..2006...In.vivo.and.in.vitro.treatments.against.Sparicotyle chrysophrii (Monogenea:.Microcotylidae).parasitizing.the.gills.of.gilthead.seabream.(Sparus aurata.L.)..Aquaculture..261(3):.856-864.Sitja-Bobadilla,.A..y.P..Alvarez-Pellitero..2009..Experimental.transmission.of.Sparicotyle chrysophrii.(Monogenea:.Polyopisthocotylea).to.gilthead.seabream.(Sparus aurata).and.histopathology.of.the.infection..Folia Parasitologica..56.(2):.143–151.Willadsen,.P..2006..Vaccination.against.ectoparasites..Parasitology..133:.S9-S25.

AgradecimientosAgradecemos.sinceramente.la.ayuda.recibida.por.los.técnicos.del.Instituto.Nacional.Veterinario.de.Oslo,.Karen.Bækken.Soleim.y.Inger.A..Heffernan,.por.su.ayuda.en.el.laboratorio..Asimismo,.Francisco.E..Montero,.Aigües.Repullés.y.Ana.E..Ahuir,.del.Instituto.Cavanilles.de.Biodiversidad.y.Biología.Evolutiva,.y.Parque.Científico.(Universidad.de.Valencia),.han.sido.de.gran.ayuda.en.el.desarrollo.de.este.trabajo..Y.por.supuesto,.agradecer.a.Luis.Aranda,.Joaquín.Palomar,.Pedro.de.Montesinos,.Francisco.García,.Marilo.López.y.Ana.Belén.Garcia,.del.Grupo.Culmarex,.su. inestimable.ayuda.en.la.obtencion.de.muestras..Este.trabajo.ha.sido.posible.gracias.a. la.financiacion.de.los.proyectos.“PrevenT..Salmon.louse.–.prevention.and.treatment”.(Norwegian.Research.Council;.proyecto.número.199778/S40;.2010-2013),.y. proyecto. PATHMEDA. (Pathogen. research. in. Mediterranean. aquaculture). (www.uv.es/pathmeda). (EC’s. 6th. Framework. Programme;.MTKD-CT-20050254;.2006-2009)..Además,.C..Agustí.es.beneficiaria.de.una.beca.postdoctoral.financiada.por.la.Fundación.Alfonso.Martín.Escudero.(FAME).


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O-024Sinuolinea psettae n. sp. una nueva especie de mixosporidio parásito del rodaballo (Psetta maxima)J.M..García.Estévez1,.J.J..Rodríguez1,.N..García1,.C..Arias1,.J..Hernández-Urcera2,.R..Cal2.y.R..Iglesias1

1Laboratorio de Parasitología Marina. Estación de Ciencias Marinas de Toralla (ECIMAT). Facultad de Ciencias del Mar. Campus As Lagoas- Marcosende. 36310 Vigo. e-mail: [email protected] 2Instituto Español de Oceanografía (I.E.O.). Centro Oceanográfico de Vigo. 36390 Vigo

AbstractIn.recent.years.the.aquaculculture.of.turbot (Psetta maxima).is.affected.by.various.emerging.parasitic.diseases.that.affect.productivity..In.this.paper.we.describe.a.new.sepecies.of.coelozoic.myxosporean.Sinuolinea psettae.n..sp..in.turbot.and.could.become.a.new.problem.for.its.culture.

JustificaciónEn.los.últimos.años.el.cultivo.del.rodaballo.(Psetta maxima).se.ha.visto.afectado.por.diversas.enfermedades.parasitarias.emergentes.que.influyen.en.su.productividad..En.el.presente.trabajo.describimos.una.nueva.especie.de.mixosporidio.celozoico.Sinuolinea psettae.n..sp..y.que.podría.convertirse.en.un.nuevo.problema.para.su.cultivo.

Material y Métodos1..Peces:.Rodaballos.procedentes.de.un.stock.de.reproductores.del.I.E.O..con.un.peso.>4.Kg.en.los.que.se.detecto.una.mortalidad.inusual..2..Las.muestras.de.orina.recogidas.de.la.vejiga.urinaria.se.analizaron.mediante:.a).microscopia.óptica.(MO),.b).microscopia.electrónica.de.barrido.(SEM).y.c).microscopía.electrónica.de.transmisión.(TEM)..3..Histología:.Se.recogieron.muestras.de.riñón.y.vejiga.urinaria.que.se.procesaron.para.su.estudio.histopatológico..Para.la.realización.de.estas.técnicas.se.siguieron.los.protocolos.descritos.en.Crespo.González.et al..(2011).

Resultados y DiscusiónEn.todos.los.rodaballos.examinados.se.detectó.en.la.vejiga.urinaria.y.en.los.túbulos.renales.una.gran.cantidad.de.esporas.de.mixosporidios.(Figs..1.A-B)..En.la.orina.se.observó.la.presencia.de.fases.vegatativas.en.diferentes.estadios.de.desarrollo,.siendo.las.formas.iniciales.móviles.con.una.morfología.ameboide.y.un.tamaño.entre.18-22.µm.de.diámetro.(Fig..1.C).y.que.darán.lugar.a.plasmodios.dispóricos.(Fig..1.D)..Las.esporas.maduras.(Fig..1.E).tienen.forma.esférica.(13.µm.de.diámetro).con.dos.cápsulas.polares.esféricas.(2,9.µm.de.diámetro).localizadas.en.uno.de.sus.polos.y,.en.cuyo.interior.se.encuentran.enrollados.entre.5.y.7.veces.(Figs..1.F-G).los.filamentos.polares.(38.µm.de.longitud)..Las.esporas.presentan.una.línea.de.sutura.muy.marcada.y.sinuosa.(Fig..1.H).y.un.esporoplasma.binucleado.(Fig..1.I)..En.peces.planos.únicamente.estaba.descrita.la.especie.S. rebae.en.vejiga.urinaria.de.Solea solea.(Tripathi,.1948)..En.rodaballos.se.describe.por.primera.vez.un.mixosporidio.perteneciente.al.género.Sinuolinea que.en.base.a.sus.características.morfológicas.la.identificamos.como.una.nueva.especie.a. la.que.hemos.denominado.como.Sinuolinea psettae..Los.correspondientes. fotosintipos. fueron.depositados.en.el.Museo.Nacional.de.Ciencias.Naturales.(CSIC).con.el.código.MNCN.37.01/16.

BibliografíaCrespo.González,.C.,.H..Rodríguez,.P..Segade,.R..Iglesias.y.J.M..García.Estévez..2011..Metodología.y.aplicaciones.de. las. técnicas. histológicas. en. el. diagnóstico. de.parásitos. de. organismos. acuáticos.. En:. Métodos y Técnicas en Investigación Marina..J.M..García.Estévez.et al..(Eds.):.185-194.Tripathi,. Y.R.1948.. Some. new. myxosporidia. from.Plymouth. with. a. proposed. new. classification. of. the.order..Parasitology..39:110-118.

AgradecimientosContrato. Programa. UVigo. (IN845B-2010/166).. Inés.Pazos.y.Jesús.Méndez.(CACTI).

Figura 14Sinuolinea psettae n sp..en.Psetta maxima..A).Esporas.en.diferente.estado.de.maduración.en.la.orina.de.rodaballo..B).Sección.histológica.de.riñón.en.la.que.se.aprecia.una.espora.en.el.interior.de.un.túbulo.renal..C). Trofozoito.. Plasmodio. ameboide. con. ectoplasma.y. endoplasma. diferenciado.. D). Fase. esporogónica:.plasmodios. dispóricos.. E).. Esporas. maduras.. F).Sección. transversal. de. una. capsula. polar. mostrando.cinco.vueltas.del.filamento.polar..G).Sección.transversal.de. una. capsula. polar. mostrando. siete. vueltas. del.filamento. polar.. H). Detalle. de. la. morfología. de. las.esporas. maduras. mostrando. una. marcada. y. sinuosa.línea.de.sutura..I)..Sección.de.una.espora.en.desarrollo.en.la.que.se.aprecia.su.esporoplasma.binucleado..A.B,.C,.D,.E.(MO);.F,.G,.I.(TEM);.H.(SEM).


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Primera detección de OSHV-1 microvar en ostra del Pacífico (Crassostrea gigas) en EspañaA..Roque12*,.N..Carrasco12,.K..B..Andree12,.B..Lacuesta12,.L..Elandaloussi1,.I..Gairin12,.C..Rodgers12,.L..Arinero3,.M.D..Furones12

1IRTA Sant Carles de la Ràpita, Ctra. Poble Nou, km 5.5, Sant Carles de la Rápita, Tarragona2Red de Referencia de Investigación, Desarrollo e Innovación en Acuicultura de la Generalitat de Cataluña (XRAq)3Departamento de Agrigultura, Ganadería, Pesca, Alimentación y Medio Natural de la Generalitat de Cataluña (DAAM)

AbstractIn.France.there.have.been.increased.mortality.events.in.Pacific.oysters.(Crassostrea gigas).since.2008..There.is.a.strong.correlation.with.these.events.suggestive.of.the.etiological.agent.being.a.variant.of.Ostreid.herpesvirus-1.(OsHV-1),.designated.OsHV-1.microvar.(µvar)..During.the.past.ten.years,.mortalities.of.Pacific.oyster.have.also.affected.the.shellfish.culture.regions.in.Catalonia..Due.to.the.suspicion.of.the.etiology.in.France,.and.the.oyster.seed.in.Catalonia.being.100%.of.French.origin,.samples.from.2005,.2008,.2009.and.2010.were.recently.analyzed.for.the.presence.of.OsHV-1.and.OsHV-1.µvar.following.COMMISSION.REGULATION.(EU).No.175/2010..Positive.results.were.obtained,.and.further.testing.was.performed.retroactively.using.samples.collected.as.far.back.as.2005..Sequencing.confirmed.the.PCR.positive.results.and.both.OsHV-1.and.OsHV-1.µvar.have.been.identified..Cytopathic.effects.typical.of.a.viral.infection.were.observed.in.samples.collected.in.2008,.2009,.and.2010..

Justificación Durante.los.últimos.diez.años..se.han.producido.episodios.de.mortalidad.de.ostra.del.Pacífico.(Crassostrea gigas).en.la.zona.de.cultivo.de.moluscos.del.Delta.del.Ebro.(Cataluña),.estos.episodios.fueron.estudiados.por.encargo.del.Gobierno.de.la.Generalitat.de.Cataluña.(DAAM)..Aunque.el.virus.OsHV1.se.detectó.por.primera.vez..con.baja.prevalencia.en.muestras.del.año.2005,..mediante.PCR.anidada,..hasta.el.año.2008.no.saltó.la.sospecha.en.Francia.de.que.OsHV-1.µvar.pudiera.ser.responsable.de.elevadas.mortalidades...Al.ser.la.semilla.de. ostrón. en. Cataluña. casi. al. 100%. de. origen. francés,. . en. 2011,. se. analizaron. diferentes. lotes. de. muestras. . de. archivo. disponibles.de. los.años.2008,. .2009.y.2010. .para. la.presencia.de.OsHV-1.µvar.y.OsHV-1..Las.muestras.positivas.se.detectaron.por.OsHV-1.PCR.anidada.(Renault.et.al..2001),.y.OsHV-1µvar.PCR.(REG.Anon,.2010)..Para.corroborar.la.detección.de.OsHV-1.µvar..se.realizó.secuenciación.de.ADN.de.plásmidos.recombinantes.que.contenían.los.productos.de.PCR.de.las.muestras.positivas..Las.secuencias.de.este.estudio.se.compararon.con.la.proporcionada.por.Segarra.et.al..(2010).con.las.que.resultaron.ser.coherentes.

Material y MétodosTodas.las.muestras.de.C. gigas.eran.de.origen.francés.y.fueron.procesadas.y.conservadas.para.la.extracción.de.ADN.e.histología..Se.muestrearon.lotes.de.varios.años:.2005.(lotes.A1.y.A2),.2008.(lote.B),.2009.(lotes.C1.y.C2),.y.2010.(lote.D)..Para.el.estudio.histológico.se.realizaron.secciones.de.parafina.de.aproximadamente.5.micras,.se. tiñeron.con.hematoxilina/.eosina.y.se.observaron.al.microscopio.óptico.para.diagnóstico..Con.las.muestras.de.2005,.2008.y.2009,.el.ADN.total.fue.extraído.a.partir.de.tejido.de.ostras.enteras.utilizando.un.método.de.fenol-cloroformo,.para.llevar.a.cabo.la.reacción.de.PCR.anidada.con.los.pares.de.cebadores.específicos.de.OsHV-1.A3/A4.y.A5/A6.(Renault.et.al,.2000;.Renault.y.Lipart,.1998)..En.2010,.se.muestrearon.30.individuos.siguiendo.las.instrucciones.del.protocolo.descrito.en.el.Reglamento.(UE).no.175/2010.(Anónimo.2010b)..En.enero.de.2011,.conscientes.de.la.existencia.de.la.nueva.propuesta.de.genotipo,.el.ADN.extraído.de.todos.los.lotes.(conservado.a.-80.ºC),.se.volvió.a.analizar.para.el.genotipo.OsHV-1.µvar...Los.productos.de.PCR.fueron.secuenciados.para.su.estudio..La.identidad.de.las.secuencias.de.los.diferentes.clones.fue.verificada.por.comparación.con.las.depositadas.en.las.bases.de.datos.de.GenBank.y.EMBL.usando.el.algoritmo.BLAST..Se.realizó.también.alineamiento.de.secuencias.múltiples.para.la.comparación.de.las.secuencias.obtenidas.en.este.estudio,.con.el.C2/C6.OsHV-1.µvar.secuencia.(Segarra.et.al..2010).

Resultados y Discusión Mediante. las. observaciones. histológicas. de. los. tejidos. de. los. órganos. principales. de. los. ostrones,. se. observó. la. presencia. de.núcleos.hipertrofiados.con.cromatina.periférica.condensada.en.algunos.de. los. individuos.de. las.muestras.de.2008,.2009.y.2010..Los.datos. de. los. análisis. de. PCR. se. presentan. en. la. Tabla. 1. y. Figura. 1.. Las. secuencias. obtenidas. de. las. muestras. recogidas. en. 2009. y.2010.mostraron.la.detección.de.12.pares.de.bases.esperada.de.OsHV-1.µvar..y,.además,.otra.detección.de.dos.pares.cerca.del.extremo.5.‘de.la.región.de.repetición.y.otra.par.de.bases.eliminado.en.el.extremo.3’,.lo.que.es.consistente.con.la.secuencia.de.OsHV-1.µvar..publicada.por.Segarra.et.al..(2010).Mientras.que.las.muestras.de.los.años.2008,.2009.y.2010.se.asociaron.con.eventos.de.mortalidad.en.varios.lugares.y.se.corresponden.con.prevalencias.importantes.de.virus.en.las.mismas.(Tabla.1),.la.asociación.causal.con.este.patógeno.y.los.eventos.de.mortalidad.detectada.en. 2005. no. es. obvia,. debido. a. las. bajas. prevalencias. y. a. las. muy. diferentes. características. del. evento. (condiciones. ambientales),.posiblemente.también.debido.a.las.diferencias.genotípicas.observadas.en.la.región.C2/C6..Seria.necesario.un.estudio.epidemiológico.completo.para.hacer.un.análisis.causal.más.robusto..Por.lo.tanto,.este.estudio..corresponde.a.la.primera.detección.del.OsHV-1.µvar.en.España,.(los.resultados.actuales.se.encuentran.en.proceso.de.ser.corroborados.por.las.autoridades.nacionales).

Figura 14La. secuencia. de. arriba. es. la. publicada. por. Segarra. et. al.. 2010. para. OsHV-1. µvar.. Las. secuencias. siguientes. son.secuencias.de.varios.clones.de.diferentes.individuos.PCR.positivos.detectados.a.partir.de.2011.(uvar.1a.y.3a).y.retrospectivamente.a.partir.de.2005.(57-10,.57-23,.57-30.y).

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Sanidad Animal

Primera detección de parásitos del género Bonamia en Cataluña y el Mediterráneo español, en ostra plana O. edulis cultivada en el Delta del Ebro N..Carrasco1,2,.A..Villalba3,.K..B..Andree1,2,.B..Lacuesta1,2,.A..Ramilo3,.I..Gairin1,2.y.M.D..Furones1,2.1IRTA-Sant Carles de la Ràpita, Ctra. Poblenou Km 5 43540, Sant Carles de la Ràpita, [email protected] de Referència de Recerca i Desenvolupament en Aqüicultura de Catalunya, XRAq3CIMA, Pedras do Corón s/n, 36620 Vilanova dÁrousa, Pontevedra

Abstract Bonamia exitiosa.and.B. ostreae.are.microcell.parasites.affecting.the.haemocytes.of.several.oyster.species..In.Europe.the.affected.species.is.the.flat.oyster.Ostrea edulis..The.parasite.B. ostreae.has.been.historically.responsible.for.massive.outbreaks.of.flat.oyster.producing.a.high.impact.on.the.European.aquaculture..Until.recently,.B. exitiosa.was.considered.an.exotic.parasite.in.Europe..However,.in.2008.the.pathogen.was.observed.for.the.first.time.in.our.continent.in.flat.oysters.cultured.in.Galicia.(Spain)..Since.there,.the.parasite.has.been.also.detected.in.other.European.countries.such.as.France,.Italy.and.United.Kingdom..The.bays.of.the.Ebre.Delta.in.the.south.of.Catalonia.represent. the. main. bivalve. culture. area. in. the. Mediterranean. coast. of. Spain.. Historical. information. reported. from. the. area. involved.several.flat.oyster.pathogens,. including.the.notifiable.parasite.Marteilia refringens.. In.the.present.study.presence.of.M. refringens.and.B. exitiosa.was.observed.in.the.flat.oysters.cultured.in.the.Alfacs.Bay.of.the.Ebre.Delta..This.is.the.first.detection.of.a.Bonamia.parasite.Catalonia.and.the.Spanish.Mediterranean.coast.in.cultured.flat.oysters..

Justificación Las.bahías.del.Delta.del.Ebro,.en.el.sur.de.Cataluña.representan.la.principal.área.de.cultivo.de.bivalvos.de.la.costa.mediterránea.española..En.los.últimos.años,.C. gigas está.siendo.víctima.de.importantes.episodios.de.mortalidades.masivas,.y.apuestan.por.una.diversificación.de.especies.de.cultivo.en.la.zona.del.Delta.del.Ebro..Actualmente.estudian.la.posibilidad.de.retomar.el.cultivo.de.la.ostra.plana.en.la.zona..Por.esa.razón,.se.está.llevando.a.cabo.el.estudio.patológico.de.los.pocos.cultivos.de.ostra.plana.existentes.en.la.zona,.con.semilla.de.diferentes.orígenes,.con.el.objetivo.de.maximizar.la.información.para.mejorar.el.manejo.y,.en.consecuencia,.las.posibilidades.de.éxito.del.cultivo.de.la.ostra.plana.en.el.delta.del.Ebro..El.objetivo.de.este.estudio.consistió.en.estudiar.la.potencial.presencia.de.los.parásitos.de.declaración.obligatoria.Bonamia ostreae,.Bonamia exitiosa.y.Marteilia refringens.(2006/88/CE).en.un.lote.de.ostra.plana.cultivado.durante.un.periodo.de.dos.años.en.la.bahía.de.Alfacs.del.Delta.del.Ebro.

Material y Métodos Treinta.ostras.planas.Ostrea edulis procedentes.de.un.cultivo.de. la.bahía.de.Alfacs. (Delta.del.Ebro).se.recogieron.en.Mayo.de.2011,.se.diseccionaron.y.fijaron.en.Davidson.y.etanol.(96%),.para.su.posterior.procesado.histológico.y.molecular,.respectivamente..El.ADN.obtenido.se.utilizó.para.la.detección.molecular.por.qPCR.de.Bonamia.sp..(Corbeil.et al.,.2006;.Engelsma.y.Voorbergen-Laarman.2009),.para.PCR.convencional.Bo-Boas. (Cochennec.et.al.,.2000).y.posterior.clonación.y.digestión.enzimática. (PCR-RFLP).con. las.enzimas.BgL I. y.Hae II.(Cochennec.et.al.,.2003)..Además.se.estudió.la.presencia.de.Marteilia refringens.por.PCR,.siguiendo.el.protocolo.de.López-Flores.et al..(2004).

Resultados y Discusión La.prueba.de.qPCR.para.Bonamia.(Corbeil.et al.,.2006).mostró.amplificación,.con.menos.de.35.ciclos.de.amplificación.(valores.de.Ct),.en.13.de.las.30.ostras.estudiadas.(prevalencia.43,34%)..Estudiando.el.perfil.de.la.curva.de.disociación.(valores.Tm).se.observó.que.todas.las.amplificaciones.tenían.un.perfil.y.temperatura.de.disociación.comparable.al.control.B. exitiosa (79,8ºC),.entre.79,.5ºC.i.80,.1ºC.(Fig..1),.y.diferente.al.rango.de.temperaturas.que.estaría.relacionado.con.B. ostreae. (78,5ºC.+/-.0,3)..Esta.diferencia.en.la.temperatura.de.disociación.(Tm).entre.las.dos.especies.de.Bonamia.al.realizar.tal.qPCR.ya.fueron.observadas.anteriormente.por.Engelsma.y.Voorbergen-Laarman.(2009)..El.análisis.enzimático.de.los.5.clones.obtenidos.a.partir.de.la.PCR.Bo-Boas,.mostraron.en.todos.los.casos.el.perfil.de.B..exitiosa.al.no.digerirse.con.el.enzima.BgL I,.y.sí,.segmentarse.en.un.fragmento.de.117.pb.y.otro.de.187.pb.con.el.enzima.Hae II..Por.

BatchDate of collection Bay N

No. of positives for OsHV-1 and prevalence No. of positives for OsHV-1 uvar and prevalence

A1 23/05/2005 Fangar 10 1.(10%) 3.(14.9%)

A2 23/05/2005 Fangar 10 0.(0%) 0.(0%)

B 21/10/2008 Fangar 30.(6x5) 6.(40%) 6.(40%)

C2 05/05/2009 Fangar 36 (18x2) 3.(7.1%) 11.(31.4%)

C1 13/05/2009 Alfacs 30 25.(87.5%) 26.(91.2%)

D 19/04/2010 Fangar 30 not.performed 18.(62.8%)

Tabla 14Resultados.de.la.prueba.de..PCR.de.OsHV-1.y.Uvar.OsHV-1.de.los.lotes.de..C. gigas.

BibliografíaAnon..2010.COMMISSION.REGULATION.(EU).No.175/2010.of.2.March.2010.Renault,.T.,.Le.Deuff,.R-M.,.Lipart,.C.,.Delsert,.C..2000..Development.of.a.PCR.procedure.for.the.detection.of.a.herpes-like.virus.infecting.oysters.in.France..Journal.of.Virological.Methods,.88,.41–50.Renault,. T.,. Lipart,. C.,. 1998.. Diagnosis. of. herpes-like. virus. infections. in. oysters. using. molecular. techniques.. European. Aquaculture.Society,.Special.Publication,.26:.235-236.Segarra,.A.,.Pépin,.J.F.,.Arzul,.I.,.Morga,.B.,.Faury,.N.,.Renault,.T..2010..Detection.and.description.of.a.particular.Ostreid.herpesvirus1.genotype.associated.with.massive.mortality.outbreaks.of.Pacific.oysters,.Crassostrea gigas,.in.France.in.2008..Virus.Research,.153:.92–99.

AgradecimientosEste.estudio.ha.sido.financiado.por.el.Departamento.de.Agricultura,.Ganadería,.Pesca,.Alimentación.y.Medio.Natural.de.la.Generalitat.de.Cataluña.(DAAM).y.por.los.proyectos.MICINN.AGL2009-11607.e.INIA.(RTA.2007-.00063.00)..Agradecemos.las.muestras.a.los.productores.César.Gómez.y.Carles.Boris,. los.ADNs.de. los.controles.positivos.a.C.S..Friedman.y.al.CRL;.a. la.USMM.del. IRTA.su.colaboración.en.muestreos..N..Carrasco.agradece.al.INIA.su.contrato.postdoctoral.INIA-Doc.CCAA.y.B..Lacuesta.su.contrato.de.técnico.especializado.MICINN-PTA.

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Sanidad Animal

histología.se.observaron.las.lesiones.típicas.del.parásito,.con.grandes.focos.de.infiltración.hemocitaria.en.el.tejido.conjuntivo.que.rodea.el.área.gonadal.y.algunas.células.de.Bonamia.exitiosa.en.el.interior.de.los.hemocitos.(Fig..2),.en.concordancia.con.los.resultados.observados.por.qPCR.y.PCR-FRLP..Además,.en.el.mismo.lote.estudiado,.10.de.las.30.ostras.analizadas.(33,34%).fueron.positivas.en.la.amplificación.por.PCR.de.la.región.IGS.de.Marteilia;.3.de.ellas.mostraron.co-infección,.siendo.positivas.para.ambos.parásitos.M. refringens.y.B. exitiosa..Está.primera.detección.de.Bonamia.en.cultivos.en.Cataluña,.y.ha.sido.reportada.a.las.autoridades.sanitarias.catalanas.

Bibliografía Corbeil,.S.,.Arzul,.I.,.Diggles,.B.,.Heasman,.M.,.Chollet,.B.,.Berthe,.F.C.J.,.Crane,.M..StJ.,.2006..Development.of.a.Taqman.PCR.assay.for.the.detection.of.Bonamia.species..Diseases of Aquatic Organisms.71:.75-80.Cochennec,.N.,.Le.Roux,.F.,.Berthe,.F.,.and.Gerard,.A. (2000)..Detection.of.Bonamia ostreae.based.on.small.subunit.ribosomal.probe..Journal.of.Invertebrate.Pathology.76(1):.26-32.Cochennec.Laureau,.N.,.Reece,.K..S.,.Berthe,.F..C..J.,.and.Hine,.P..M. (2003)..Mikrocytos roughleyi.taxonomic.affiliation.leads.to.the.genus.Bonamia.(Haplosporidia)..Diseases of Aquatic Organisms.54(3):.209-217.Engelsma.M..and.Voorbergen-Laarman,.M.,.2009..En:.Report from the Annual Meeting and Technical Workshop of the NRLs for Molluscs Diseases:.30-31. López-Flores,.I.,.de.la.Herran,.R.,.Garrido-Ramos,.M.,.Navas,.J.,.Ruiz-Rejon,.C.,.Ruiz-Rejon,.M.,.2004..The.molecular.diagnosis.of.Marteilia refringens.and.differentiation.between.Marteilia.strains.infecting.oysters.and.mussels.based.on.the.rDNA.IGS.sequence..Parasitology.129,.411-419.

Agradecimientos Los.autores.quisieran.agradecer.al.Dr..M..Engelsma.(CVI,.The.Netherlands).por.facilitar.tejido.infectado.de.B. ostreae,.y.a.O..Bellot.y.E..Fatsini.(IRTA).su.apoyo.técnico..N..C..agradece.su.contrato.INIA-Doc.CCAA.y.B..L..su.contrato.MICINN-PTA..Esta.investigación.ha.sido.financiada.por.el.proyecto.MICINN.(AGL2009-11607).y.el.contrato.MARBO.del.DAR.de.la.Generalitat.de.Catalunya.

Figura 24Células.de.Bonamia exitiosa.observadas.en.el.tejido.conjuntivo.de.Ostrea edulis.cultivada.en.el.Delta.del.Ebro.

Figura 14Curva.de.disociación.(valores.Tm).de.los.productos.amplificados.por.qPCR.Bonamia.ITS.y.los.controles.positivos.(Corbeil.et.al.,.2006).

Distribución espacial y temporal de Vibrio vulnificus en moluscos bivalvos cultivados en las bahías del delta del EbroC..Lopez-Joven.1,2.*,.I..de.Blas.3,.M..Fernandez.1,2.y.A..Roque.1,2

1IRTA-SCR. Ctra. Poble Nou km 5.5, 43540 Sant Carles de la Ràpita, Spain. *e-mail: [email protected] de Referència en Aquicultura 3Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, c/Miguel Servet 177, 50013 Zaragoza, Spain

AbstractPrevalence.and.characteristics.of.Vibrio vulnificus.in.the.environment.are.unclear,.which.limits.the.knowledge.about.this.pathogen.and.the.expression.of.its.virulence..The.diversity.of.Vibrio.species.associated.with.bivalves.and.their.abundance.in.water.is.seasonally.variable,.reaching.its.maximum.in.summer.when.temperature.is.at.its.highest..The.distribution.and.prevalence.of.this.bacterium.were.investigated.over. four.campaigns. in. two.bays.of. the.Ebro.delta,. in. four.species.of.bivalve.molluscs..Vibrio vulnificus.was.present. in.all.batches.of.samples.bivalves..Observed.prevalence.of.this.bacterium.was.10.9%..Using.multivariate.analysis,.a.significant.logistic.regression.model.to.explain.the.presence/absence.(P/A).of.V. vulnificus.in.bivalve.molluscs.was.generated,.and.it.allowed.us.to.establish.that.presence.of.V. vulnificus.depends.on.molluscs,.year.of.harvest,.and.temperature..Results.of.the.present.study.contribute.to.the.production.of.data.to.be.used.in.quantitative.risk.analysis..

JustificaciónEspaña. está. a. la. cabeza. en. producción. y. consumo. de. moluscos. bivalvos. en. Europa. y. es. el. segundo. productor. a. nivel. mundial.. Los.moluscos.bivalvos.son.considerados.una.importante.fuente.de.alimento,.especialmente.en.las.poblaciones.que.viven.cerca.del.mar..En.España,.se.consumen.más.de.60.mil.toneladas.al.año.(FAO,.2008),.crudos.o.cocinados..Sin.embargo,.representan.un.reto.para.la.salud.pública,.debido.a.su.naturaleza.filtradora.que.los.hace.portadores.de.una.serie.de.patógenos,.como.V. vulnificus,.que.habita.de.manera.natural. en. aguas. de. estuarios. y. marinas. templadas. de. todo. el. mundo,. ya. que. al. ser. consumidos. crudos. o. poco. cocinados,. pueden.transmitir.enfermedades,.que.van.desde.una.gastroenteritis.apenas.perceptible.hasta.casos.fatales.(Oliver.y.Kaper,.2001)..La.enfermedad.causada.por.V. vulnificus.tiene.tres.presentaciones.clínicas:.septicemia,.infección.de.heridas.y.gastroenteritis..La.tasa.de.mortalidad.es.muy.alta.(60%).en.personas.con.enfermedades.hepáticas.o.comprometidas.inmunológicamente.(www.cdc.gov)..Aunque.a.nivel.mundial,.se.reconoce.ampliamente.el.impacto.de.los.brotes.de.diarrea.causados.por.el.consumo.de.moluscos.bivalvos,.la.mayoría.de.los.programas.de.vigilancia.de.la.calidad.de.los.mariscos,.no.legislan.para.la.contaminación.por.vibrios.en.estos.organismos..

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Sanidad Animal

Para.esta.ausencia.de.legislación.se.han.apuntado.varias.razones.y.una.de.ellas.es.la.falta.de.datos.sobre.la.frecuencia/presencia.del.patógeno.en.agua.y.alimento..En.el.ámbito.de.la.Unión.Europea,.el.parecer.emitido.por.“El.comité.científico.sobre.medidas.veterinarias.relacionadas.con.salud.pública”.considera.que,.aunque.los.V. parahaemolyticus.y.V. vulnificus.son.patógenos.importantes.para.la.salud.publica,. existen. varios. puntos. que. dificultan. su. legislación,. siendo. uno. de. ellos. la. insuficiencia. de. datos. sobre. prevalencia. de. estas.especies.en.la.U..E.(European.Commission,.2001)..El.presente.estudio.presenta.algunas.de.estos.datos.obtenidos.en.sistemas.de.cultivo.con.características.mediterráneas..

Material y MétodosDe.2006.a.2010.se.llevaron.a.cabo.campañas.anuales.de.vigilancia.para.detectar.V. vulnificus en.bivalvos.cultivados.en.el.delta.del.Ebro..De.la.bahía.dels.Alfacs.fueron.analizadas.283.ostras.(Crassostrea gigas),.306.mejillones.(Mytilus galloprovincialis).y.120.almejas.(Ruditapes decussatus).. Del. Fangar. fueron. analizadas. 330. ostras,. 300. mejillones. y. 120. almejas. (Ruditapes philippinarum).. Se. analizaron. lotes.similares.por.especie,.en.cada.año..Los.bivalvos.se.transportaban.al.laboratorio.en.bolsas.de.plástico,.dentro.de.hieleras.con.hielo..A.su.llegada,.las.muestras.se.procesaban.individualmente.en.condiciones.estériles..Todos.los.animales.fueron.abiertos,.la.carne.removida.y.homogenizada..Posteriormente,.1.ml.fue.inoculado.en.9.ml.de.agua.de.peptona.alcalina.(APW,.Scharlau,.España).y.tras.6h.de.incubación.a.37ºC,.una.pequeña.cantidad.fue.sembrada.en.placas.de.Chromagar.Vibrio.(Chromagar,.Francia).y.éstas.fueron.incubadas.a.37ºC,.18h..Las.colonias.moradas.fueron.purificadas.y.criopreservadas.a.-80ºC..El.ADN.total,.de.cada.aislado.purificado,.fue.extraído.con.el.kit.Wizard.genomic.DNA.purification.kit.(Promega)..Se.llevaron.a.cabo.PCRs.de.un.paso.para.identificar/confirmar.los.aislados.que.tenían.el.gen.citolisina-hemolisina..Las.PCRs.se.hicieron.de.acuerdo.al.protocolo.propuesto.por.Coleman.et al..(1996),.con.las.siguientes.condiciones.de.amplificación:.desnaturalización.inicial.3.min.a.94oC,.seguido.de.30.ciclos.de.amplificación,.cada.ciclo.consistiendo.en.una.desnaturalización.94ºC.por.45.s,.anillado.de.cebadores.a.55ºC.por.45.s,.extensión.a.72ºC.por.45.s.y.extensión.al.final.de.los.ciclos.de.2.min.a.72ºC.La. comparación. de. las. variables. cualitativas. fue. realizada. mediante. un. análisis. de. Chi-cuadrado. con. un. error. alfa. igual. a. 0.05.. Los.análisis.estadísticos.fueron.llevados.a.cabo.con.el.programa.SPSS.17.0.(Chicago,.IL,.USA)..

Resultados y DiscusiónLa.prevalencia.global.observada.de.V. vulnificus.fue.de.10.9%..Se.encontraron.diferencias.significativas.(P <.0.001),.a.lo.largo.de.las.cuatro.campañas.realizadas,.en.cuánto.a.la.prevalencia.de.V. vulnificus:.2006.(6.0%),.2008.(15.6%),.2009.(6.7%).y.2010.(16.1%)..Sin.embargo,.no.se.registraron.diferencias.significativas.(P =.0.902).entre.Alfacs.(11.0%).y.Fangar.(10.8%)..Al.estudiar.las.prevalencias.de.V. vulnificus,.entre.las.diferentes.especies.de.moluscos.bivalvos,.se.encontraron.diferencias.significativas.(P <.0.001):.ostras.9.0%,.mejillones.8.4%,.almeja.fina.21.7%.y.almeja.japonesa.22.5%..Y.al.analizar.por.años.estas.prevalencias.en.moluscos,.se.observó.diferencias.significativas.en.el.2006.(P.<.0.001),.con.prevalencia.máxima.en.R. decussatus.(36.7%),.y.en.2008.(P.=.0.018).y.2010.(P.=.0.002),.con.prevalencia.máxima.en.R. philippinarum.(33.3%.y.40.0%,.respectivamente)..Estas.altas.prevalencias.podrían.ser.debidas.a.que.las.muestras.fueron.cosechadas.en.verano.con.elevadas.temperaturas..Al.analizar.por.bahías.las.prevalencias.observadas.en.moluscos.bivalvos,.también.se.obtuvieron.diferencias.significativas.para.ambas.(P <.0.001)..Y.al.analizar.los.datos.para.cada.especie.de.molusco,.a.lo.largo.del.tiempo,.se.observaron.diferencias.significativas.para.todas.las.especies.de.moluscos:.C. gigas.(P <.0.001),.M. galloprovincialis.(P =.0.006),.R. decussatus.(P =.0.032).y.R. philippinarum.(P =.0.002)..En.todos.los.casos.(excepto.en.el.2006.para.R. decussatus),.las.prevalencias.máximas.fueron.registradas.en.el.2008.y.en.el.2010..Se.generó.un.modelo.de.regresión.logística.significativo.(P.<.0.001),.que.estableció.que.la.presencia/ausencia.de.V. vulnificus.dependía.de.la.especie.de.molusco.bivalvo.(P.<.0.001),.del.año.de.la.campaña.(P.<.0.001).y.de.la.temperatura.(P.=.0.033).

BibliografíaCenter.for.Disease.Control.and.Prevention..En:.http://www.cdc.gov/Coleman,.S.S.,.D.M..Melanson,.E.G..Biosca.y.J.D..Oliver..1996..Detection.of.Vibrio vulnificus.biotypes.1.and.2.in.eels.and.oysters.by.PCR.amplification..Applied and Environmental Microbiology..62(4):.1378-1382.European.Commission..2001..Opinion.of.the.Scientific.Committee.on.Veterinary.Measures.Relating.to.Public.Health.on.Vibrio vulnificus.and.Vibrio parahaemolyticus.(in.Raw.and.Undercooked.Seafood)..En:.European.Commission.Health.&.Consumer.Protection.Directorate.General:.1–64.FAO..2008..FishStat.Plus.-.Departamento.de.pesca.y.acuicultura,.Organización.de.las.Naciones.Unidas.para.la.Agricultura.y.la.Alimentación..http://www.fao.org/fishery/statistics/software/fishstat/esOliver,.J.D..y.J.B..Kaper..2001..Vibrio.species..En:.Food.Microbiology:.Fundamentals.and.Frontiers..M.P..Doyle,.L.R..Beuchat.y.T.J..Montville.(Eds.):.228-264.

AgradecimientosEl.estudio.fue.financiado.por.el.INIA.con.fondos.Feder..Proyecto.Nº.RTA2007-00063-00-00.otorgado.a.AR..CLJ.disfrutó.de.una.beca.FPI.del.INIA..Nuestro.sincero.agradecimiento.a.Beatriz.Lacuesta.por.el.apoyo.técnico.y.al.personal.de.la.USMM.del.IRTA.por.la.asistencia.en.la.recogida.de.muestras.en.campo..

Respuesta de las almejas fina (Tapes decussatus) y japonesa (Tapes philippinarum) frente al parásito Himasthla elongataJ.M..García.Estévez,.J.J..Rodríguez,.N..García,.C..Arias.y.R..IglesiasLaboratorio de Parasitología Marina. Estación de Ciencias Marinas de Toralla (ECIMAT). Facultad de Ciencias del Mar. Campus As Lagoas - Marcosende. 36310 Vigo. e-mail: [email protected]

AbstractRecently.our.laboratory.has.described.the.presence.of.the.parasite.species.Himasthla elongata.in.bivalve.molluscs.of.the.Vigo.estuary..In.this.paper.investigates.the.knowledge.of.the.phagocytic.response.of.carpet-shell.clams.and.manila.clams.against. infection.by.this.digenean.parasite.

JustificaciónUno. de. los. principales. sistemas. de. defensa. de. los. moluscos. son. los. hemocitos. (Hcs),. células. responsables. del. reconocimiento. y.destrucción.de.una.gran.variedad.de.patógenos,.aunque.en.ocasiones.los.parásitos.trematodos.consiguen.evadir.su.destrucción.(Iakovleva.et.al.,.2005)..Recientemente.nuestro.laboratorio.ha.descrito.la.presencia.de.la.especie.parasita.Himasthla elongata.en.moluscos.bivalvos.de.la.Ría.de.Vigo.(Rodríguez.Quiroga.et al.,.2010)..En.el.presente.trabajo.se.indaga.en.el.conocimiento.de.la.respuesta.de.la.almeja.fina.y.de.la.almeja.japonesa.frente.a.la.infección.por.este.digenido.

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Material y Métodosa). Evaluación. de. la. parasitación. en. una. población. natural:. En. un. banco. marisquero. donde. está. presente. el. parásito. H. elongata. se.examinaron.72.almejas. japonesas (Tapes philippinarum).y.105.almejas.finas.(Tapes decussatus)..Sifón,.pie.y.manto.de.cada.almeja.se.separaron.y.depositaron.entre.dos.placas.de.vidrio.y.bajo.estereomicroscopio.se.hizo.el.recuento.de.las.metacercarias.presentes.b).Estudio.histopatológico:.Una.vez.cuantificadas.las.metacercarias,.se.procedió.a.la.fijación.de.los.diferentes.órganos.en.Davidson..Tras.la.deshidratación.y.posterior.inclusión.en.parafina.los.cortes.realizados.(4.µm).se.tiñeron.con.hematoxilina/eosina.c). Obtención. del. parásito. y. preparación. del. antígeno. de. H. elongata: Las. cercarias. de. H. elongata se. obtuvieron. de. forma. natural. a.partir.de.gasterópodos.Littorina littorea.parasitados..Tras.la.disgregación.de.las.cercarias.mediante.sonicación.se.centrifugó.y.recogió.el.sobrenadante.y.almacenándolo.a.-30.ºC..d).Ensayos.de.fagocitosis: A.24.almejas.(12.almejas.finas.y.12.almejas.japonesas).procedentes.una.zona.libre.de.parasitación.y.aclimatadas.durante.15.días.en.el.laboratorio.se.les.extrajo.individualmente.la.hemolinfa..Efectuado.el.recuento.y.la.comprobación.de.la.viabilidad.de.los.Hcs,.en.una.placa.de.96.pocillos.se.añaden.100.µl/pocillo.conteniendo.105.células..Una.vez.adheridos.los.Hcs.se.les.añade.una.suspensión. adecuada. de. perlas. fluorescentes. (Fluoresbrite®Microparticles.. Polysciences,. Inc). sin. acoplar. y. acopladas. a. la. fracción.antigénica.del.parásito.(FITC-Ag).(ajustando.a.una.relación.perlas:.Hcs.10:1)..Las.placas.se.leyeron.con.los.filtros.441.nm/486.nm.en.un.fluorímetro.Fluoroskan.Ascent.FL.(Thermo.Scientific)..Como.control.de.fagocitosis.se.hicieron.los.ensayos.en.presencia.de.10µg/ml.de.Citocalasina.B.(Sigma).(Hégaret.et al.,.2003).

Resultados y DiscusiónNo.todos. los.bivalvos.reaccionan. igual.ante.una. infección.parasitaria.de.digeneos,.y.así.parece.suceder.en. la.almeja.fina.y. la.almeja.japonesa. En. el. medio. natural. hemos. encontrado. diferencias. en. la. intensidad. de. infección. de. H. elongata. entre T. decussatus y. T. philippinarum.siendo.la.cantidad.de.parásitos.mucho.menor.en.la.almeja.japonesa..Este.resultado.se.puede.relacionar.con.la.presencia.de.abundantes.infiltraciones.hemocitarias.alrededor.de.las.metacercarias.y.a.su.vez.con.numerosas.reabsorciones.de.las.mismas,.proceso.que.no.es.observado.con. la.misma. frecuencia.en. la.almeja.fina. (Figura.1)..Parece.que.en.condiciones.naturales. la.almeja. japonesa.muestra.una.mayor.resistencia.al.trematodo.H. elongata..Una.de.las.explicaciones.a.esta.resistencia.la.hemos.obtenido.en.los.ensayos.de.fagocitosis.in vitro,.que.nos.muestran.una.mayor.capacidad.de.respuesta.por.parte.de.los.Hcs.de.la.almeja.japonesa.frente.a.partículas.con.FICT.(Figura.2)..Si. bien. hay. una. clara. diferencia. de. viabilidad. de. las. metacercarias. de.H. elongata. en. el. interior. de. las. dos. especies. de. almejas,. las.cercarías.que.representan.la.fase.inicial.de.la.infección.del.digenido.parecen.tener.la.capacidad.de.invadir.a.ambos.hospedadores.bivalvos.e.incluso.la.reducir.la.capacidad.de.respuesta.de.los.Hcs.de.la.almeja.japonesa.(Figura.2).

Figura 14Cortes. histológicos. realizados.sobre. pies. de. almejas. parasitadas. con.metacercarias.de.H. elongata..A).T. decussatus:.no. existe. infiltración. hemocitaria.. B. y. C). T. philippinarum:.se.observa.un.gran.número.de.Hcs.(flecha).rodeando.a.la.metacercaria.(B).que.incluso.llegan.a.ser.reabsorbidas.(*).(C).

Figura 2. Actividad. fagocítica.de. los.Hcs.de.almeja. fina. (T. decussatus). y. japonesa (T. philippinarum).expresada.como.unidades.de.fluorescencia.±.EE..(Perlas-FITC:.perlas.sin.acoplar..Perlas.FITC-Ag:.perlas.acopladas.a.la.fracción.antigénica.del.parásito).

BibliografíaHégaret,. H.,. G.H.. Wikfors. y. P.. Soudant.. 2003.. Flow. cytometric. analysis. of. haemocytes. from. eastern. oysters,. Crassostrea virginica,.subjected.to.a.sudden.temperature.elevation.II..Haemocyte.functions:.aggregation,.viability,.phagocytosis,.and.respiratory.burst..Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 293:.249-265.Iakovleva,.N.V.,.T.G..Shaposhinikova.y.A.M..Gorbushin..2006..Rediae.of.echinostomatid.and.heterophyid.trematodes.suppress.phagocytosis.of.haemocytes.in.Littorina littorea.(Gastropoda:.Prosobranchia)..Experimental Parasitology..113:.24-29.Rodríguez.Quiroga,.J.J.,.E..Peñaranda,.D..Costas,.F..Russell-Pinto,.R..Iglesias.y.J.M..García.Estévez..2010..First.report.of.Himastla elongata.parasitizing.molluscs.from.the.Vigo.estuary.(Galicia,.NW.Spain)..En:.Abstacts Aquaculture Europe 10:.1124-1125.

AgradecimientosContrato.Programa.Universidad.de.Vigo.(IN845B-2010/166).


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Administración de Shewanella putrefaciens Pdp11 en engorde de lenguado senegalés Solea senegalensis (Kaup 1858): efectos metabólicosI..Ruiz-Jarabo1,.C..Lobo2,.S..Tapia-Paniagua3,.A..Medina-López.3,.I..García.de.la.Banda2.y.J.M..Mancera1,1Dpto. de Biología, Facultad de Ciencias del Mar y Ambientales, Universidad de Cádiz, 11510 Puerto Real, Cádiz. [email protected] Español de Oceanografía. C.O. Santander. Promontorio San Martín s/n. Ap. 240. 39080 Santander3Departamento de Microbiología. Universidad de Málaga. Campus de Teatinos. CP29071. Málaga

AbstractThe. effect. of. food. supplementation. with. probiotic.Shewanella putrefaciens. Pdp. 11. on. several. metabolic. parameters. was. assessed. in.Senegalese.sole Solea senegalensis.juveniles.(22.7.g).cultivated.at.low.(6.4.Kg/m2).and.high.(21.7.Kg/m2).densities.during.63.days..Groups.cultured.at.low.density.presented.similar.growth.as.well.as.values.of.plasmatic.parameters,.while.hepatic.parameters.showed.a.general.tendency.to.enhance.in.specimens.fed.Pdp11.diet..High.density.induced.general.decrease.in.plasmatic.and.hepatic.metabolic.parameters.in.groups.fed.control.and.supplied.Pdp11.diets..However,. this.situation.was.attenuated. in.specimens.treated.with.Pdp11..Our.results.supported.a.positive.influence.of.probiotic.Pdp.11.on.plasmatic.and.hepatic.metabolic.parameters.in.S. senegalensis.

JustificaciónLa.optimización.de.los.sistemas.productivos.en.acuicultura.induce.a.incrementar.las.densidades.de.cultivo..Sin.embargo,.esto.puede.originar.una.situación.de.estrés.crónico.que.se.manifiesta.en.las.tres.típicas.fases.de.respuesta:.alarma.inicial,.resistencia.y.agotamiento..Es.en.esta.última.fase.donde.los.ejemplares.muestran.altos.niveles.de.cortisol.así.como.un.desgaste.debido.a.la.activación.del.metabolismo.para.superar.esta.situación,.interfiriendo.con.otros.procesos.fisiológicos.(crecimiento,.reproducción,.sistema.inmunitario).y.originando.situaciones.letales.(Wendelaar.Bonga,.1997).Nuestro.Grupo.de.Investigación.ha.utilizado.la.cepa.probiótica.Pdp.11.con.el.objeto.de.evaluar.las.ventajas.de.su.uso.en.el.cultivo.del.lenguado.Solea senegalensis.(Kaup,.1858)..Este.probiótico.induce.una.mejora.en.el.crecimiento.de.juveniles.de.lenguado,.así.como.una.menor.cantidad.de.inclusiones.lipídicas.en.las.vellosidades.intestinales..A.nivel.inmunológico,.el.tratamiento.con.probiótico.aumenta.el.grado.de.protección.frente.a.posibles.patógenos.gracias.a.una.activación.de.la.respuesta.inmunitaria.(León-Rubio.et al.,.2005;.García.de.la.Banda.et al.,.2010)..En.este.estudio.se.analiza.el.efecto.de.la.adición.de.probiótico.Pdp11.sobre.el.metabolismo.de.especímenes.de.S. senegalensis.cultivados.a.diferentes.densidades.

Material y métodosEjemplares.de.lenguado.senegalés.de.22.7±.1.6.g.de.peso.medio.inicial,.fueron.cultivados.en.tanques.circulares.de.150.l.(6.4.Kg/m2).y.400.l.(21.7.Kg/m2).durante.dos.meses.a.una.temperatura.de.19.2.±.0.5ºC.según.duplicados..Los.peces.fueron.alimentados.con.pienso.comercial.(57%.proteínas,.18%.lípidos,.Skretting).según.8.tomas.diarias..El.probiótico.Shewanella putrefaciens.Pdp11.se.incorporó.fresco.al.pienso.(109.cfu/g) mediante.una.solución.de.alginato.sódico.(2g/Kg),.según.lo.descrito.por.Díaz-Rosales.et al..(2009)..La.fabricación.se.llevó.a.cabo.cada.3.días,.manteniéndose.a.4ºC.hasta.su.utilización,.con.el.fin.de.permitir.una.adecuada.viabilidad..Se.realizaron.diversos.muestreos.biométricos.para.la.evaluación.del.crecimiento..A.los.días.inicial.y.final.del.experimento.(día.63).se.realizaron.muestreos.(12.individuos.por.tratamiento).obteniéndose.muestras.de.plasma,.hígado.y.músculo.para.análisis.de.metabolitos.y.cortisol.

Resultados y discusiónLos. ejemplares. cultivados. a. baja. densidad. y. alimentados. con. probiótico. Pdp. 11. mostraron. una. tendencia. a. aumentar. los. niveles.plasmáticos.de.algunos.metabolitos.(glucosa,.lactato,.triglicéridos,.ácidos.grasos.y.aminoácidos).frente.a.aquellos.que.recibieron.pienso.control.a.los.63.días.del.inicio.del.experimento.(datos.no.mostrados)..Esto.concuerda.con.la.idea.de.que.la.adición.de.probiótico.en.el.pienso.mejora.el.estado.metabólico.del.ejemplar.(León-Rubio.et al.,.2005;.Varela.et al.,.2010)..El.cultivo.a.alta.densidad.indujo.una.clara.situación.de.estrés.caracterizada.por.unos.valores.plasmáticos.de.cortisol.ligeramente.elevados,.así.como.una.tendencia.a.disminuir. los.niveles.de.metabolitos.plasmáticos..Sin.embargo,. los.ejemplares.alimentados.con.probiótico.Pdp11.presentaron.una.atenuación.en.la.disminución.de.estos.metabolitos.respecto.a.lo.observado.en.los.ejemplares.que.recibieron.pienso.control..Los.valores.de.cortisol.detectados.al.final.de.la.experiencia.(día.63).no.presentaron.diferencias.significativas,.si.bien.la.densidad.de.cultivo,. fue. inferior.en.el.grupo.control.dada.la.mayor.mortalidad.registrada.(Tabla. I)..Nuestros.resultados.sugieren.una.mejor.capacidad.metabólica.de.los.especímenes.alimentados.con.Pdp11.frente.a.una.situación.de.estrés.crónico.como.ha.sido.descrito.en.dorada.por.Varela.et al.,.(2010)..La.adición.probiótica.se.reflejó.también.en.la.mayor.capacidad.de.los.ejemplares.en.cuanto.a.resistencia.a.infecciones.naturales.y.experimentales.frente.al.grupo.control.(ver.comunicación.García.de.la.Banda.et al.,.presente.Congreso).Tabla I: Valores.de.metabolitos.plasmáticos.en.lenguado.senegalés.alimentado.con.pienso.control.y.con.Pdp11.fresco.en.alta.densidad.de.cultivo.a.los.63.días.de.cultivo..Media.±.SEM.(N=12)..Letras.diferentes.indican.diferencias.estadísticamente.significativas.(p<0.05,.ANOVA)..

GrupoPlasma Hígado

Glucosa (mM) Osmolalidad (mOsm/kg)

Cortisol (ng/mL)

Glucosa (mg/g ph)

Amino ácidos (µmol/g ph)

Control día 0 (21.7 Kg/m2) 6.9.±.0.5.a 245.±.4.ab 11.5.±.2.1.b 3.0.±.0.2 43.3.±.2.4.ab

Control día 63 (11.1 Kg/m2) 3.5.±.0.5.b 263.±.4.a 21.3.±.5.5.ab 2.3.±.0.3 33.6.±.2.5.b

Pdp 11 día 63 (15.6 Kg/m2) 4.1.±.0.5.b 241.±.5.b 26.5.±.5.0.a 3.0.±.0.3 55.1.±.4.3.a

AgradecimientosEste.estudio.ha.sido.financiado.por.el.PN.de.Lenguado.(JACUMAR)..Los.autores.desean.expresar.su.agradecimiento.a.los.ayudantes.y.técnicos.de.la.Planta.de.Cultivos.del.C.O..de.Santander.

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Administración de Shewanella putrefaciens Pdp11 en engorde de lenguado senegalés Solea senegalensis (Kaup 1858): efectos inmunológicosI..García.de.la.Banda1,.C..Lobo1,.L.M.Lucas2,.X.Moreno-Ventas2,.S..Tapia-Paniagua.3,.A.Medina-López3,.S..Arijo3..y.M.A..Moriñigo3

1 Instituto Español de Oceanografía. C.O. Santander. Promontorio San Martín s/n. Ap. 240. 39080 Santander. España. [email protected] Area Ecología. Dpto CYTAMA. Universidad Cantabria. Avda de los Castros s/n. CP39005. Santander 3 Departamento de Microbiología. Universidad de Málaga. Campus de Teatinos. CP29071. Málaga

AbstractCommercial.aquaculture. involves.high.density.stocks..Nevertheless,.these.conditions.may. influence.fish. immunity.and.welfare..Since.2004,. several. infection. outbreaks. on. Solea. senegalensis. have. been. reported. in. Spain,. requesting. the. development. of. vaccines. and.probiotics..In.this.study.we.present.the.influence.of.Shewanella.putrefaciens.Pdp11.addition.on.sole.juveniles.(22.7.g).cultivated.at.low.and.high.densities..A.natural.infection.due.to.the.presence.of.Vibrio.parahaemolyticus.and.Vibrio.harveyi.was.detected.at.day.7.in.fish.cultivated.at.high.density..Infected.fish.showed.skin.wounds.in.head.and.dorsal.areas..Mortality.reached.43-85.%.in.controls.but.only.15-17%.in.the.probiotic.group,.which.had.a.natural.recuperation.from.their.skin.injuries.by.day.15..Low-density.cultivated.sole.were.challenged.(ip).with.Photobacterium.damselae.subsp..piscicida..Results.from.this.challenge.confirmed.the.resistance.conferred.by.Pdp11.addition.by.a.66.7%.of.relative.percentage.of.survival..

JustificaciónLa.acuicultura.comercial.implica.altas.densidades.de.cultivo..Sin.embargo,.estas.condiciones.pueden.afectar.la.inmunidad.y.bienestar.de.los.ejemplares..En.nuestro.país.se.han.detectado.desde.2004.continuadas.infecciones.durante.el.engorde.del.lenguado.senegalés.que.han.llevado.al.estudio.de.vacunas.y.probióticos.como.alternativa.profiláctica..En.anteriores.trabajos.se.ha.demostrado.la.efectividad.como.probiótico.de.Shewanella putrefaciens.Pdp11.adicionada.en.dieta.comercial.para.Solea senegalensis.(Kaup,.1858).(García.de.la.Banda.et.al.,.2010)..En.este.estudio.se.confirma.la.resistencia.frente.a.infección.experimental.con.Photobacterium damselae.subsp..piscicida,.principal.patógeno.de.esta.especie,.así.como.un.efecto.de.protección.frente.a.patógenos.cuando.el.engorde.de.lenguado.se.realiza.a.densidades.de.cultivo.elevadas.

Material y métodosEjemplares.de.lenguado.senegalés.de.22.7±.1.6.g.de.peso.medio.inicial,.fueron.cultivados. en. tanques. circulares. de. 150. l. (6.4. Kg/m2). y. 400. l. (21.7. Kg/m2).durante.dos.meses.a.una.temperatura.de.19.2.±.0.5ºC.según.duplicados..Los.peces.fueron.alimentados.con.pienso.comercial.(57%.proteínas,.18%.lípidos,.Skretting).según.8.tomas.diarias..El.probiótico.Shewanella putrefaciens.Pdp11.se. incorporó. fresco.al.pienso. (109.cfu/g) mediante.una.solución.de.alginato.sódico.(2g/Kg),.según.lo.descrito.por.Díaz-Rosales.et al..(2009)..La.fabricación.se.llevó.a.cabo.cada.3.días,.manteniéndose.a.4ºC.hasta.su.utilización,.con.el.fin.de.permitir.una.adecuada.viabilidad.La.supervivencia.fue.evaluada.diariamente..En.los.ejemplares.cultivados.a.alta.densidad.en.los.que.se.presentó.una.infección.natural.se.tomaron.muestras.de.heridas.y.órganos.internos.que.fueron.sembradas.en.TSAs.y.posteriormente.se.realizó.una.identificación.de.patógenos.mediante.análisis.ribosómico.16s..Asímismo.se.realizó.una.infección.experimental.(i.p.).con.P. damselae.Lgh41/01.(2.4*105.ufc/g).según.replicados.en.los.ejemplares.cultivados.a.densidad.baja,.a. las. 3. semanas. del. comienzo. de. la. experiencia.. Las. mortalidades. fueron.registradas.diariamente.y.se.confirmó.la.presencia.del.patógeno.en.hígado,.riñón.y.bazo.mediante.el.test.Mono-Pp.(BIONOR,.Skien,.Norway),.calculándose.los.porcentajes.relativos.de.supervivencia.(RPS)..

Resultados y discusiónEn.los.ejemplares.cultivados.a.alta.densidad.se.presentó.una.infección.natural.a. los. 7. días. del. inicio. de. la. experiencia,. observándose. heridas. en. cabeza. y.zona.dorsal..La.mortalidad.comenzó.a.los.9.días.y.fue.superior.en.el.grupo.control.(43-85.%).frente.al.que.recibió.probiótico.en.dieta.(15-17%).(Fig..1)..Las.heridas.en.los.ejemplares.alimentados.con.Pdp11.remitieron.de.forma.natural.al. cabo. de. 15. días.. El. análisis. bacteriológico. de. los. ejemplares. infectados.demostró.la.presencia.de.Vibrio parahaemolyticus,.Vibrio harveyi.y.varias.cepas.pertenecientes.al.género.Vibrio sp..

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BibliografíaDíaz-Rosales P., Arijo S., Chabrillón M., Alarcón F.J., Tapia-Paniagua S.T., Martínez-Manzanares E., Balebona M.C.y Moriñigo M.A..2009..Effects.of. two.closely.related.probiotics.on.respiratory.burst.activity.of.Senegalese.sole. (Solea senegalensis,.Kaup).phagocytes.and.protection.against.Photobacterium.damselae.subsp.piscicida”..Aquaculture.293:.16-21..García de la Banda I., Lobo C., León-Rubio J.M., Tapia-Paniagua S., Balebona M.C., Moriñigo M.A., Moreno-Ventas X., Linares F., Arce F. y Arijo S. Influence. of. two. closely. related. probiotics. on. juvenile. Senegalese. sole. (Solea senegalensis, Kaup. 1858). performance. and. protection. against.Photobacterium damselae.subsp..piscicida..Aquaculture.306:.281-288.León-Rubio J.M., Alarcón F.J., Arijo S., Saénz de Rodrigáñez M., Rico R., Díaz Rosales P., Ruiz F., Chabrillón M., Zamorano F.J., y Moriñigo M.A. 2005..Efecto.de.la.incorporación.de.bacterias.prebióticas.en.piensos.para.el.engorde.de.lenguados.(Solea senegalensis)..Libro.de.Resúmenes.de.X.Congreso.Nacional.de.Acuicultura,.(Gandía,.Valencia)..Tomo.1:.216-217.Varela J.L., Ruiz-Jarabo I., Vargas-Chacoff L., Arijo S., León-Rubio J.M., García-Millán I., Martín del Río M.P., y Mancera J.M.. 2010.. Dietary.administration.of.probiotic.Pdp11.promotes.growth.and.improves.stress.tolerance.to.high.stocking.density.in.Sparus auratus. Aquaculture.309:.265-271.Wendelaar-Bonga, S.E. 1997..The.stress.response.in.fish..Physiological Reviews 7:.591–625.

Figura 14Evolución. de. la. mortalidad. (%). en. lenguado.senegalés. alimentado. con. pienso. control. y. con. Pdp11.fresco.(Pb1.y.Pb2).en.alta.densidad.de.cultivo.

Figura 24Mortalidad. acumulada. en. ejemplares. de. len-guado.senegalés.cultivado.a.baja.densidad.tras.infección.experimental.con.P. damselae subsp. pìscicida.


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Sanidad Animal

La.infección.experimental.con.P. damselae subsp. piscicida.(ip).confirmó.(RPS.66.7%).la.protección.conferida.por.Pdp11.en.los.ejemplares.de.lenguado.senegalés.cultivados.a.densidad.baja,.respecto.a.los.controles..La.presencia.del.patógeno.fue.en.todos.los.casos.confirmada.Estos.resultados.parecen.estar.relacionados.con.los.mayores.niveles.de.tres.isoformas.de.transferrina.detectadas.en.el.suero.de.los.ejemplares.alimentados.con.Pdp11.frente.al.grupo.control.(Arijo.et.al.,.2011)

AgradecimientosEste.estudio.ha.sido.financiado.por.el.PN.de.Lenguado.(JACUMAR)..Los.autores.desean.expresar.su.agradecimiento.a.los.ayudantes.y.técnicos.de.la.Planta.de.Cultivos.del.C.O..de.Santander..Un.especial.agradecimiento.a.José.Ramón.Mira,.tècnico.del.Dpto.CYTAMA.(UC)..

BibliografíaArijo S., Medina A., García de la Banda I. Lobo C., Fumanal M., Balebona M.C. & Moriñigo M.A., 2011..Expression.of.serum.proteins.in.Solea senegalensis (Kaup,.1858)).fed.with.the.probiotic.Shewanella putrefaciens.(Pdp11.strain)..Abstracts.of.the.International.Scientific.Conference.of.Probiotics.and.Prebiotics..Cosice.(Slovak.Republic)Díaz-Rosales P., Arijo S., Chabrillón M., Alarcón F.J., Tapia-Paniagua S.T., Martínez-Manzanares E., Balebona M.C.& Moriñigo M.A..2009..Effects.of.two.closely.related.probiotics.on.respiratory.burst.activity.of.Senegalese.sole.(Solea.senegalensis,.Kaup).phagocytes.and.protection.against.Photobacterium.damselae.subsp.piscicida”..Aquaculture.vol.293:.16-21..García de la Banda I., Lobo C., Chabrillón M., León-Rubio J.M., Arijo S., Pazos G., Lucas M.L. & Moriñigo M.A. 2011..Influence.of.dietary.administration.of.a.probiotic.strain.Shewanella.putrefaciens.on.senegalese.sole.(Solea senegalensis,.Kaup,.1858).growth,.body.composition.and.resistance.to.Photobacterium damselae.subsp..Piscicida..Aquaculture.Research.DOI:.10.1111/j.1365-2109.2011.02871.x

Administración de Shewanella putrefaciens Pdp11 en engorde de lenguado senegalés Solea senegalensis (Kaup 1858): efectos en la microbiota intestinalS.T..Tapia-Paniagua.2,.C..Lobo1,.I..García.de.la.Banda1,.M.C..Balebona2..y.M.A..Moriñigo2

1 Instituto Español de Oceanografía. C.O. Santander. Promontorio San Martín s/n. Ap. 240. 39080 Santander2 Departamento de Microbiología. Universidad de Málaga. Campus de Teatinos. CP29071. Málaga. E-mail: [email protected]

AbstractCommercial.aquaculture.involves.high.density.stocks..Nevertheless,.these.conditions.may.influence.fish.immunity.and.welfare..Since.2004,.several.infection.outbreaks.on.Solea senegalensis.have.been.reported.in.Spain,.requesting.the.development.of.vaccines.and.probiotics..In.this.study.we.present.the.influence.of.Shewanella putrefaciens.Pdp11.addition.on.the.evolution.of.the.intestinal.microbiota.of.sole.juveniles.(22.7.g).cultivated.at.low.and.high.densities.along.two.months..Pdp11.probiotic.administration.modulated.sole.intestinal.microbiota,.being.this.response.quicker.and.more.intense.at.low.culture.densities.This.beneficial.effect.might.be.related.with.the.protection.detected.for.probiotic.groups,.both.in.the.challenge.with.Photobacterium damselae subsp. piscicida.(low.density.trial).and.in.the.natural.infection.where.Vibrio parahaemolyticus.and.Vibrio harveyi.were.detected.(high.density.trial)..

JustificaciónLa.acuicultura.comercial.implica.altas.densidades.de.cultivo..Sin.embargo,.estas.condiciones.pueden.afectar.la.inmunidad.y.bienestar.de.los.ejemplares..En.nuestro.país.se.han.detectado.desde.2004.continuadas.infecciones.durante.el.engorde.del.lenguado.senegalés.que.han.llevado.al.estudio.de.vacunas.y.probióticos.como.alternativa.profiláctica..En.anteriores.trabajos.se.ha.demostrado.la.efectividad.como.probiótico.de.Shewanella putrefaciens.Pdp11.adicionada.en.dieta.comercial.en.la.modulación.de.la.microbiota.digestiva.del.lenguado.senegalés.Solea senegalensis.(Kaup,.1858).(Tapia-Paniagua.et.al.,.2010.)..En.este.estudio.se.analiza.la.evolución.durante.dos.meses.de.la.microbiota.intestinal.en.individuos.de.S.senegalensis.alimentados.con.una.dieta.comercial.suplementada.con.probiótico.y.sometidos.a.densidades.altas.y.bajas.de.cultivo..

Material y métodosEjemplares.de.lenguado.senegalés.de.22.7±.1.6.g.de.peso.medio.inicial,.fueron.cultivados.en.tanques.circulares.de.150.l.(6.4.Kg/m2).y.400.l.(21.7.Kg/m2).durante.dos.meses.a.una.temperatura.de.19.2.±.0.5ºC.según.duplicados..Los.peces.fueron.alimentados.con.pienso.comercial.(57%.proteínas,.18%.lípidos,.Skretting).según.8.tomas.diarias..El.probiótico.Shewanella putrefaciens.Pdp11.se.incorporó.fresco.al.pienso.(109.cfu/g) mediante.una.solución.de.alginato.sódico.(2g/Kg),.según.lo.descrito.por.Díaz-Rosales.et al..(2009)..La.fabricación.se.llevó.a.cabo.cada.3.días,.manteniéndose.a.4ºC.hasta.su.utilización,.con.el.fin.de.permitir.una.adecuada.viabilidad.del.probiótico..A.lo.largo.de.la.experiencia.(21,.30.y.60.días).se.tomaron.muestras.de.10.digestivos.por.tratamiento.que.fueron.conservadas.a.-20ºC.hasta.su.posterior.análisis,..El.DNA.existente.en.el.contenido.intestinal.se.extrajo.mediante.el.método.empleado.por.Martínez.et.al.,.1998.y.fue.amplificado.mediante.PCR..El.producto.resultante.se.analizó.mediante.la.técnica.de.electroforesis.en.gel.con.gradiente.desnaturalizante.(DGGE).según.la.metodología.descrita.por.Konstantinov.et al..(2003)..El.gel.obtenido.se.analizó.con.el.software.FPQuest.4.5..Los.perfiles.de.similitud.obtenidos.fueron.usados.para.construir.un.dendograma.mediante.el.algoritmo.UPGMA.(Unweighted.Pair.Groups.Method.using.Arithmetic.Averages).

Resultados y discusiónLa.microbiota.intestinal.analizada.estudiando.el.16SrDNA,.móstró.una.sucesión.a.lo.largo.del.tiempo.estableciéndose.3.clusters.diferentes..El.primero,.independiente.del.tiempo,.se.corresponde.con.las.muestras.de.la.microbiota.de.todos.los.ejemplares.control..Este.cluster.es.el.que.presenta.una.mayor.heterogeneidad.con.respecto.a.los.otros.dos.grupos,.siendo.ésta.superior.en.el.caso.de.los.juveniles.cultivados.a.alta.densidad..El.segundo.grupo.lo.forman.las.muestras.de.microbiota.de.los.ejemplares.alimentados.con.probiótico.a.baja.densidad,.observándose.un.aumento.de.la.homogeneidad.a.partir.de.las.3.semanas.de.adición.de.Pdp11..El.tercer.cluster.agrupa.las.muestras.de.microbiota.intestinal.de.los.ejemplares.alimentados.con.probiótico.y.cultivados.a.alta.densidad..Resaltar.que.este.grupo.presenta.una.mayor.variabilidad.en.la.microbiota.intestinal.en.comparación.con.el.grupo.probiótico.cultivado.a.baja.densidad..Los.resultados.obtenidos. indican.que. la. incorporación.del.probiótico.Pdp11.al.pienso,.produce.una.homogenización.de. la.microbiota.intestinal. del. lenguado. senegalés,. tanto. en. condiciones. de. alta. como. de. baja. densidad. de. cultivo.. La. modulación. ejercida. en. altas.densidades.parece.estar.retrasada,.quizás.debido.a.una.mayor.producción.de.hormonas.asociadas.al.estrés,.En.este.trabajo.se.detectó.tambien.un.aumento.de.la.respuesta.inmune.en.los.ejemplares.alimentados.con.Pdp11,.tanto.en.condiciones.de.baja.y.alta.densidad.de.cultivo,.hecho.que.puede.estar.relacionado.con.las.diferencias.en.la.microbiota.intestinal.registradas.en.ambos.grupos.experimentales.con.respecto.al.control.(García.de.la.Banda.etal..2010).

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Medio ambiente

AgradecimentosS.T.Tapia-Paniagua.agradece.al.Ministerio.de.Educación.y.Ciencia.por.la.beca.F.P.U

BibliografíaDíaz-Rosales P., Arijo S., Chabrillón M., Alarcón F.J., Tapia-Paniagua S.T., Martínez-Manzanares E., Balebona M.C.& Moriñigo M.A..2009..Effects.of.two.closely.related.probiotics.on.respiratory.burst.activity.of.Senegalese.sole.(Solea.senegalensis,.Kaup).phagocytes.and.protection.against.Photobacterium.damselae.subsp.piscicida”..Aquaculture.293:.16-21García de la Banda I., Lobo C., León-Rubio J.M., Tapia-Paniagua S., Balebona M.C., Moriñigo M.A., Moreno-Ventas X., Linares F., Arce F. & Arijo S.,.2010..Influence.of.two.closely.related.probiotics.on.juvenile.Senegalese.sole.(Solea senegalensis, Kaup.1858).performance.and.protection.against.Photobacterium damselae.subsp..piscicida..Aquaculture.306:.281-288.Konstantinov, S.R., Zhu, W.Y., Williams, B.A., Tamminga, S., De Vos, W.M. and Akkermans,.A.D.L..2003..Effect.of.fermentable.carbohydrates.on.faecal.bacterial.communities.as.revealed.by.DGGE.analysis.of.16S.rDNA..FEMS.Microbioly.Ecology.43:.225–235Martínez G., Shaw E.M., Carrillo M., Zanuy S. 1998..Protein.salting-out.method.applied.to.genomic.DNA.isolation.from.fish.whole.blood..Biotechniques.24:.238-239.Tapia-Paniagua S. T., Chabrillón M., Díaz-Rosales P., García de la Banda I., Lobo M.C., Balebona M.C. & Moriñigo M.A..Intestinal.microbiota.diversity.of.the.flat.fish.Solea senegalensis.(Kaup.1858).following.probiotic.administration..Microbial.Ecology.60(2):.310-319

Indicadores de sostenibilidad para viveros flotantes del MediterráneoC..García-Diez1*,.J..Remiro1,.F..Simard3,.S..Simoes3,.P..Ávila5,.J..Ojeda2,.F..Massa4

1Fundación Observatorio Español de Acuicultura (FOESA) c/Fortuny, 47 1º 17 28010 Madrid. E-mail: [email protected]ón de productores de cultivos marinos de España (APROMAR)3Unión Internacional para la Conservación de la Naturaleza (UICN)4Comisión General de Pesca del Mediterráneo/FAO5Agencia de Gestión Agraria y Pesquera de Andalucía

Abstract Se. definen. indicadores. de. sostenibilidad. con. el. fin. de. llevar. a. cabo. una. evaluación. de. la. sostenibilidad. de. la. acuicultura. marina.mediterránea..Un.número.reducido.de. indicadores.que.cubren. las.dimensiones.social,.ambiental.y.económica.servirá.como.base.de.la.evaluación..La.batería.de.indicadores.ha.sido.seleccionado.por.un.grupo.de.expertos.en.varias.reuniones.y.talleres.de.trabajo,.con.base.a.un.conjunto.de.criterios.para.las.especies.marinas.criadas.en.viveros.flotantes.e.independientes.en.el.tiempo..Los.indicadores.definidos.se.dividen.en.3.niveles.orientados.a.las.instalaciones/empresas,.países.y.la.región.mediterránea..La.obtención.de.los.valores.de.los.indicadores.es.simple.y.fácilmente.medible..La.bibliografía.revisada.en.cuanto.a.la.producción.sostenible.de.alimento.mundial.sugiere.que.el.uso.de.indicadores.por.los.responsables.políticos.y.demás.agentes.implicados.contribuirá.al.desarrollo.sostenible.de.la.acuicultura.

Justificación Nuestra.sociedad.se.enfrenta.en.estos.días.a.nuevos.y.grandes.retos.a.la.hora.de.fomentar.e.implementar.de.forma.efectiva.un.desarrollo.social. y. económico. más. sostenible. en. todos. y. cada. uno. de. los. ámbitos. y. actividades. socioeconómicas. que. hacen. avanzar. nuestra.civilización..Este.modelo.de.desarrollo.está.obligando.a.todos.los.agentes.sociales.a.la.búsqueda.y.adopción.de.nuevos.mecanismos.de.coordinación,.que.contemplen.el.mundo.de.una.manera.global,.cuyo.reflejo.son.las.últimas.cumbres.internacionales.celebradas.para.avanzar.de.manera.conjunta.en.todo.lo.referente.a.la.sostenibilidad.(FOESA,.2010)..Si.entendemos.que.un.sistema.sostenible.o.proceso.debe.considerar.en.su.desarrollo.a.las.gneraciones.futuras,.la.acuicultura.sostenible.es.aquella.que.contempla.las.interacciones.de.la.actividad.acuícola.con.el.medio.ambiente.basándose.en.buenas.prácticas.y.utilizando.los.recursos.de.manera.responsable,.fomenta.el.desarrollo.socio-económico.de.los.lugares.en.los.que.se.desarrolla,.íntegrandose.de.forma.armoniosa.con.el.resto.de.actividades,.generando.empleo.y.garantizando.su.viabilidad.y.perdurabilidad.en.el.tiempo..Encontrar.los.indicadores.adecuados.para.evaluar.el.estado.de.salud.de.la.acuicultura.mediterránea.ayudará.a.los.consumidores,.los.mercados,.los.responsables.políticos.y.acuicultores.a.beneficiarse.de.los.recursos.naturales.hoy.y.mañana..Los.indicadores.cuantifican.y.simplifican.la.información.acerca.de.los.problemas.que.a.menudo.son.derivados.de.la.investigación.técnica,.dependen.del.enfoque,.y.están.abiertos.a.cualquier.interpretación.(UNEP,.2003).

Material y Métodos Existen.muchos.enfoques.para.definir. indicadores,.para.este.estudio.escogió.el.enfoque.de. indicador.que,.a.menudo,.es.mucho.más.sencillo.de.aplicar.y.más.fácil.para.los.responsables.políticos.y.la.sociedad.a.la.hora.de.comprender.cómo.los.indicadores.reflejan.los.cambios.en.el.sistema,.y.la.importancia.de.los.cambios.en.el.valor.de.los.indicadores.El.enfoque.dado.al.estudio.de.los.indicadores.se.basó.en.el.siguiente.supuesto:.la.opinión.de.expertos.es.un.valor.añadido.y.el.consenso.de.varios.expertos.es.mejor.que.la.opinión.de.uno.solo,.y.esto.se.constató.durante.dos.talleres.de.trabajo..El.panel.de.expertos.consistió.en.productores.acuícolas,.investigadores,.autoridades.reguladoras.y.organizaciones.internacionales.(UICN,.FAO)..Todos.los.expertos.tienen.una.considerable.experiencia.y.el.know-how.de.proyectos.similares.anteriores.(UICN,.2007,.2009a,.2009b).El.punto.de.partida.fue.la.selección.de.una.lista.de.indicadores.formuladas.por.los.expertos.que.participan.en.el.Grupo.de.Trabajo.de.Sostenibilidad.en.Acuicultura.(WGSA).que.apoya.el.proyecto.InDAM.desde.2008..Los.indicadores.fueron.priorizados.y.validados.a.través.de.tres.casos.piloto.(Turquía,.Túnez.y.España).con.el.apoyo.de.la.Comisión.de.Acuicultura.(CAQ).de.la.CGPM.

Resultados y Discusión Los.indicadores.fueron.dirigidos.a:.1).Instalaciones.y.productores:.como.principales.partes.interesadas.por.el.efecto.directo.de.las.huellas.de.sus.industrias,.2).Países.y.gobiernos:.como.responsables.de.las.políticas.para.el.marco.institucional.que.permita.y.facilite.las.vías.administrativas.para.los.acuicultores,.3).Región.mediterránea:.la.promoción.de.redes.regionales.y.los.conocimientos.necesarios.sobre.el.principio.de.“actuar.localmente,.pensar.globalmente”..Una. segunda. clasificación. se. centra. en. la. dimensión. de. los. indicadores. seleccionados:. los. sistemas. sostenibles. de. producción. no.sólo.tienen.en.cuenta.los.aspectos.medioambientales.del.proceso.de.producción,.sino.también.a.sus.aspectos.económicos.y.sociales,.especialmente.en.el.caso.de.“comercio.justo”..La.sostenibilidad.se.puede.alcanzar.gestionando.de.forma.equilibrada.las.dimensiones.siguientes:. 1). Ambiental:. muestra. las. posibles. interacciones. ambientales. sobre. la. flora,. fauna,. paisaje,. biodiversidad. y. sedimentos.marinos,.2).Social:.muestra.las.interacciones.entre.la.industria.y.los.empleados.relacionados.con.las.condiciones.de.trabajo,.los.riesgos.o.los.precios.de.consumo,.y.entre.los.distintos.usuarios.de.la.zona.costera,.3).Económico:.muestra.las.entradas.y.salidas.de.los.procesos.productivos.y,.por.último,.la.gobernanza,.reflejada.en.todos.los.indicadores.para.la.mejora.de.la.gestión.a.largo.plazo.

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BibliografíaFOESA,.2010..Definicion.de.indicadores.de.sostenibilidad.en.la.acuicultura.mediterranea..FOESA,.Madrid,.Espana,.152p.GFCM,.2011..Indicators.for.the.sustainable.development.of.finfish.Mediterranean.aquaculture:.highlights.from.the.InDAM.project..Studies and Reviews. General Fisheries Comission for the Mediterranean..No.90.Rome,.FAO..2011:.218.p.UICN,.2007..Guia para el Desarrollo Sostenible de la Acuicultura Mediterranea 1. Interacciones entre la Acuicultura y el Medio Ambiente..UICN,.Gland,.Suiza.y.Malaga,.Espana..VI.+.114.paginas.UICN,.2009a..Guia para el Desarrollo Sostenible de la Acuicultura Mediterranea 2. Acuicultura: Selección y Gestion de Emplazamientos..IUCN,.Gland,.Switzerland.and.Malaga,.Spain..VIII.+.332.pages.UICN,.2009b..Guia para el Desarrollo Sostenible de la Acuicultura Mediterranea 3. Acuicultura: Practicas Responsables y Certificacion..Gland,.Suiza.y.Malaga,.España:.UICN..vi+78.paginas.UNEP,. 2003.. Monitoring. and. Indicators:. designing. national. level. monitoring. programmes. and. indicators.. Convention. on. Biological.Diversity..UNEP/CBD/SBSSTA/9/10.

AgradecimientosLos. autores. agradecen. a. la. Fundación. Biodiversidad,. que,. con. su. apoyo,. ha. hecho. posible. el. desarrollo. y. realización. del. proyecto.Mediterrane-On:.‘Definición.de.indicadores.de.sostenibilidad.en.la.acuicultura.mediterránea’..También.merecen.una.mención.especial.todas.aquellas.personas.que.han.participado.en.los.talleres.o.que.han.colaborado.en.la.elaboración.de.artículos,.la.revisión.de.textos,.la.traducción.de.los.contenidos,.la.maquetación.de.los.documentos.o.el.diseño.de.la.pagina.Web.del.proyecto.(www.mediterraneon.es),.sin.los.cuales.el.resultado.no.habría.sido.el.mismo.

Respuesta de los índices ambientales, tróficos y estructurales al gradiente de materia orgánicaJ.M..Gutiérrez1,.A.J..Perán,.A..Belmonte,.V..Aliaga,.P..Miñano,.T..Senabre,.I..Sánchez,.D..Andreo,.C..Carrasco.y.M.E..García1Taxon Estudios Ambientales S.L. C/. Uruguay s/n parcela 8/27, nave 31. Polígono 8 Industrial Oeste. Alcantarilla 30820, Murciae-mail: [email protected]

Abstract The.main.impact.of.aquaculture.facilities.is.the.organic.enrichment..Data.from.the.literature.(for.review.see.Black.and.Pearson,.2001).are.consistent.with.the.empirical.model.of.succession.in.relation.to.organic.enrichment.proposed.by.Pearson.and.Rosenberg.(1978)..However,.there.is.little.information.on.the.quantitative.expression.of.the.model..To.assess.the.relationship.between.the.environmental.characteristics.of.the.sediment.and.its.community.of.polychaetes.we.have.used.multiple.linear.regressions..The.introduction.of.the.quadratic.term.of.the.independent.variables.gave. the.best.fits..This. implies. that. the. indices.show.a.unimodal. response.as.described.by.Pearson.-Rosenberg.model.for.organic.matter..The.variance.explained.by.the.models.ranges.from.5%.of.the.Fisher.Diversity.Index.and.34%.of.the.ecological.index.BENTIX,.but.all.multiple.regression.models.are.significant,.according.to.results.of.ANOVA.(p.<0.05).and.all. independent.variables.(parameters.of.the.sediment).included.in.the.models.have.a.significant.relationship.with.the.independent.variables.evaluated.(p.<0.05)..

Justificación El.modelo.conceptual.desarrollado.por.Pearson.y.Rosenberg.(1978),.sobre.la.base.de.trabajos.realizados.en.un.lago.escocés.y.en.un.fiordo.sueco,.sienta.las.bases.del.conocimiento.actual.sobre.la.perturbación.bentónica.debida.al.enriquecimiento.orgánico,.principal.impacto.de.las.instalaciones.de.acuicultura..Este.modelo.establece.el.cambio.de.la.composición.de.la.fauna.bentónica.a.lo.largo.de.un.gradiente.de.materia.orgánica..En.general,.los.datos.extraídos.de.la.literatura.científica.(para.una.revisión.ver.Black.y.Pearson,.2001).concuerdan.con.el.modelo.empírico.sobre.la.sucesión.en.relación.con.el.enriquecimiento.orgánico.propuesto.por.Pearson.y.Rosenberg.(1978)..Sin.embargo.existe.poca.información.sobre.la.expresión.cuantitativa.del.modelo.En. la. naturaleza. existen. gradientes. ambientales,. es. decir. variaciones. graduales. espaciales. y. temporales. de. variables. ambientales.cuantitativas.(temperatura,.iluminación,.disponibilidad.de.alimento,.etc.),.a.los.cuales.responden.los.organismos,.siendo.más.o.menos.abundantes.o.diversos,.o.simplemente.estando.presentes.o.ausentes.a.partir.de.unos.determinados.umbrales..La.respuesta.de.una.especie,.una.población.o.una.comunidad.a.estos.cambios.ambientales.puede.describirse.mediante.funciones.matemáticas.(rectas,.curvas.unimodales,.bimodales.o.sigmoides,.etc.)..El.estudio.de.estas.relaciones.entre.una.o.más.variables.y.la.distribución.de.los.organismos,.es.lo.que.se.conoce.en.Ecología.como.análisis.directo.de.gradientes,.una.de.cuyas.aproximaciones.más.frecuentes.es.el.análisis.de.regresión.dentro.del.marco.de.los.Modelos.Lineales.Generalizados.(McCullah.y.Nelder,.1989)..

Material y Métodos La.base.de.datos.manejada.para.valorar.la.relación.entre.las.características.ambientales.del.sedimento.y.la.comunidad.de.poliquetos.que. la. habitan. contiene. un. total. de. 1096. registros. (muestras).. Se. han. utilizado. los. datos. recopilados. durante. 10. años. en. diferentes.lugares.y.circunstancias.ambientales.a.lo.largo.de.la.costa.de.Murcia..Se.construyeron.modelos.de.regresión.múltiple,.que.se.ajustaron.por.el.método.forward stepwise..Por.el.tipo.de.datos.manejados.se.ensayaron.regresiones.lineales,.regresiones.de.Poisson.y.regresiones.lineales.introduciendo.un.término.cuadrático.de.las.variables.independientes.Como. estimadores. de. la. población. de. poliquetos,. variable. dependiente,. se. han. empleados. diferentes. índices. de. la. estructura. de. la.población.como.la.Diversidad.medida.usando.varios.índices.de.(Shannon-Wienner,.Diversidad.máxima,.Equitabilidad,.Margalef,.Simpson,.Diversidad.de.Brillouin.y.Fisher)..Además.se.ha.estudiado.el.comportamiento.de.índices.tróficos,.como.ITI,.e.índices.ecológicos,.como.AMBI.y.BENTIX..Los.datos.de.organismos.corresponden.a.la.población.de.poliquetos.infaunal.determinada.a.nivel.de.familia..Como.variables.ambientales,.variables.independientes,.se.usaron.el.contenido.en.materia.orgánica.y.granulometría.del.sedimento.fundamentalmente;.pero. también. se. tuvieron. en. consideración. otros. parámetros. fisicoquímicos. del. sedimento. (pH,. Eh,. DQO,. microorganismos. fecales)..Asimismo,.se.consideraron.algunas.variables.de.la.columna.de.agua.(clorofila,.salinidad,.temperatura,.turbidez,.DQO,.nitratos,.nitritos,.amonio,.fosfatos,.DBO,.COT,.oxígeno.disuelto,.materiales.en.suspensión,.microbiología.fecal).

Resultados y Discusión Las.regresiones.lineales.introduciendo.un.término.cuadrático.de.las.variables.independientes.dieron.mejores.ajustes..Esto.implica.que.los.índices.para.describir.la.estructura.de.las.poblaciones.de.poliquetos.en.este.estudio.responden.a.las.variables.ambientales.testadas.de.forma.unimodal,.es.decir.siguiendo.curvas.que.presenta.un.máximo.de.respuesta,.esto.es.un.valor.óptimo,.hasta.el.que.los.valores.del.índice.crecen.para.después.decrecer..Este.tipo.de.comportamiento.es.el.descrito.por.el.modelo.de.Pearson.y.Rosenberg.(1978).para.la.materia.orgánica..Además.del.contenido.en.materia.orgánica,.objeto.de.interés.del.presente.estudio,.los.parámetros.granulométricos.que.más.aparecen.en.los.modelos.son.las.arenas,.arenas.finas.en.los.índices.de.Diversidad.y.las.gruesas.en.los.tróficos.y.ecológicos..El.resto.de.los.parámetros.testados.no.eran.significativos.como.variables.independientes.en.los.modelos.

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Entre.los.índices.de.diversidad.destacan,.con.una.mayor.varianza.explicada,.el.de.Brillouin.y.la.Diversidad.Máxima.(R2ajustado.=.0,3.y.0,32,.

respectivamente);.los.índices.de.Simpson.y.Margalef.explican.un.26%.de.la.varianza,.algo.más.que.el.de.Shannon-Wienner.(24%);.el.de.Fisher.sólo.un.5%..El.Infauna.Trofic.Index.(ITI),.el.único.índice.trófico.testado,.adaptado.para.ser.aplicado.a.las.familias.de.poliquetos.en.este.trabajo,.explica.un.33%.de.la.varianza.ambiental..Finalmente.los.índices.ecológicos,.adaptados.para.ser.aplicados.a.las.familias.de.poliquetos.en.este.trabajo,.AMBI.y.BENTIX,.explican.respectivamente.el.26.y.34%.de.la.varianza..En.todos.los.modelos.incluidos.las.variables.independientes.(los.parámetros.del.sedimento).mantienen.una.relación.significativa.con.las.variables.independientes.evaluadas.(p<0,05)..Todos.los.modelos.de.regresión.múltiple.presentados.en.las.tablas.son.significativos,.según.los.resultados.del.ANOVA.(p<0,05)..Aunque.los.modelos.son.consistentes,.convendría.explorar.nuevas.variables.ambientales,.no.consideradas.en.la.base.de.datos.usada,.relacionadas.con.la.calidad.de.la.materia.orgánica.(nitrógeno,.fósforo,.etc.),.con.las.condiciones.del.sedimento.(contenido.en.sulfuros,.si.bien.se.han.evaluado.el.Eh.y.la.DQO.sin.éxito).y.otras.relacionadas.con.la.capacidad.de.colonización.de.los.organismos.(hidrodinamismo,.ciclos.de.vida,.etc.).

Bibliografía Black,.K.D.y.Pearson,.T.H..2001..En:.Black.K.D..(ed.).Environmental impacts of aquaculture..Sheffield.Academic.Press,.Sheffield,.pp.1-31.McCullagh,.P..y.Nelder,.J.A..1989..Generalized Linear Models (2ª ed)..Chapman.y.Hall,.London.Pearson,.T..y.R..Rosenberg..1978..Macrobenthic.succession.in.relation.to.organic.enrichment.and.pollution.of.the.marine.environment..Oceanography and Marine Biology Annual Review,.16:.229-311.

Agradecimientos Los. autores. quieren. agradecer. al. Grupo. Fuentes. y. al. Servicio. de. Pesca. y. Acuicultura. de. la. CARM. la. colaboración. prestada. para. la.realización.del.presente.estudio.

Utilización de perfiles ecológicos para la selección de variables geoquímicas de sedimentos marinos como indicadoras del impacto ambiental generado por los cultivos marinos en mar abiertoA.. Carballeira1,. F.. Aguado-Giménez2,.N.. González3,. P.. Sánchez-Jerez4,. J.M.. Texeira5,. J.I.. Gairin6,. C.. Carballeira7,. B.. García-García2,. V..Fernández-González4,.J..Carreras6,.Macías,.J.C.8,.D..Acosta9,.Collado,.C10

AbstractEnvironmental.monitoring.plans.(EMPs).require.selection.of.environmental.variables.that.allow.to.predict.the.ecological.quality.of.the.environment.and.defining.which.of.their.values.indicate.an.environmental.impact..Two.samplings.were.performed.during.periods.with.dif-ferent.poduction.intensity..Marine.sediments.were.collected.at.3.different.distances.from.10.offshore.fish.farms.cages..Physico-chemical.(pH,.Eh,.%.fines,.OM,.TOC,.P,.N,.S,.TFS,.d15N).and.biological.(polychaete.community.structure.and.amphipods).analysis.were.performed.for.each.sample..The.variables.and.their.limit.values.indicating.the.ecological.status.of.benthos.were.selected.through.multiple.regression.techniques.and.analysis.of.gradients:.frequency.analysis.(ecological.profiles).and.β.diversity..Index.of.community.structure.of.polychaetes.was.selected.as.the.response.variable,.while.d15N.and.TFS.were.the.variables.that.best.predicted.the.ecological.status..Finally,.the.envi-ronmental.quality.standards,.the.undesirable.and.permissible.effect.levels,.and.priority.variables.to.be.used.in.a.EMP.for.offshore.marine.fish.farms.were.proposed.Palabras clave: monitoring;.annelide.polychaeta;.β15N;.TFS

IntroducciónLa.monitorización.del.impacto.ambiental.generado.por.los.cultivos.marinos.requiere.de.la.utilización.de.variables.ambientales.que.nos.permitan.interpretar.el.estado.de.calidad.ecológica.del.medio,.así.como.poder.establecer.relaciones.causa-efecto..En.el.contexto.de.los.planes.de.vigilancia.ambiental.que.las.empresas.productoras.han.de.llevar.a.cabo.de.manera.preceptiva,.y.en.base.a.los.conceptos.de.“zona.de.efectos.permitidos”.(ZEP).y.a.la.formulación.de.“estándares.de.calidad”.(EQ),.es.además.necesario.el.establecimiento.de.valores.de.referencia.para.las.variables.ambientales.que.vayan.a.ser.utilizadas..Así,.la.selección.de.las.mejores.variables.debe.hacerse.en.función.de.su.sensibilidad.frente.al.origen.de.los.impactos,.de.su.capacidad.de.establecer.relaciones.causa-efecto,.de.la.posibilidad.de.establecer.valores.límite.(EQ).tanto.dentro.como.fuera.de.la.ZEP.y.de.su.correlación.con.el.estado.de.calidad.ecológico..El.objetivo.de.este.trabajo.es.seleccionar.las.mejores.variables.geoquímicas.del.sedimento.y.definir.sus.valores.límite.para.ser.utilizadas.como.variables.indicadoras.del.impacto.ambiental.derivado.del.cultivo.de.peces.en.mar.abierto.mediante.la.aplicación.de.perfiles ecológicos..

Material y MétodosSe.tomaron.3.muestras.de.sedimentos.marinos.con.dragas.tipo.Van-Veen.en.3.zonas.(A:.impacto.permitido;.B:.impacto.moderado;.C:.control).de.10.granjas.marinas.(2.por.CCAA:.Andalucía,.Canarias,.Cataluña,.Murcia.y.Valencia).en.épocas.de.máxima.y.mínima.intensidad.de.producción..En.total.se.obtuvieron.108.muestras.de.sedimento.por.cada.localidad..En.cada.muestra.de.sedimento.se.analizan.las.siguientes.variables.explicativas.(VE):.pH,.potencial.redox.(Eh),.granulometría.(<63m),.materia.orgánica.(MO),.carbono.orgánico,.fósforo,.nitrógeno.y.azufre.totales.(COT,.PT,.NT,.ST),.Sulfuros.libres.totales.(TFS).y.la.señal.isotópica.d15N..La.comunidad.bentónica.de.cada.muestra.estuvo.representada.por.las.poblaciones.de.anélidos.poliquetos.y.de.anfípodos.(nivel.de.familia)..El.status.ecológico.de.cada.punto.de.muestreo.se.caracterizó.con.las.siguientes.variables.respuesta.(VR):.riqueza.(S),.abundancia.A),.índice.de.riqueza.(R).de.Margalef,.índice.de.diversidad.(H´).de.Shannon-Wiener.e.índice.de.equitabilidad.(J´).de.Pielou..Mediante.técnicas.de.regresión.múltiple.se.seleccionan.las.VE.que.forman.las.ecuaciones.que.mejor.predicen.las.VR.;.el.porcentaje.de.explicación.determinó.la.selección.de.la.VR.más.representativa..A.continuación.se.realizó.un.análisis.directo.de.los.gradientes.ambientales.explorados.con.técnicas.de.análisis.frecuencial.(López.et.al.1997)..Mediante.“perfiles.ecológicos”.(PE).se.estudió.el.comportamiento.de.la.VR.a.lo.largo.del.gradiente.de.cada.VE.construido.con.los.puntos.de.muestreo.ordenados.por.clases..En.primer.lugar.se.construyeron.los.PE.con.clases.de.rango.y.se.verificó.la.regularidad.de.la.distribución.muestral..Para.las.variables.con.una.distribución.inadmisible.se.construyeron.los.perfiles.con.clases.de.frecuencia..Para.cada.VE.se.construyeron.tres.tipos.de.PE:.con.los.valores.medios.de.cada.clase.(PEmed),.con.los.5.mayores.de.cada.clase.(PEmax).y.con.la.media.del.4º.cuartil.de.los.valores.(PEcuartil)..

Resultados y DiscusiónLos.resultados.obtenidos.con.la.comunidad.de.poliquetos.fueron.los.que.mejor.explicaron.el.impacto.de.las.granjas..Las.respuestas.más.esclarecedoras.se.obtuvieron.con.los.PEmax.al.optimizar.la.VR.para.cada.clase.del.gradiente.de.cada.VE..Se.construyeron.los.PEmax.de.las.frecuencias.corregidas.y.se.calculó.la.significación.estadística.de.todo.y.de.cada.clase.del.perfil,.lo.cual.permite.valorar.la.importancia.de.la.VE.que.más.condiciona.el.status.ecológico.(VR);.y.es.una.ayuda.para.seleccionar.que.valor/es.(umbrales.ecológicos).de.la.VE.provoca/n.cambios.de.estado.significativos.de.la.VR..

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La.importancia.de.la.VE.y.la.significación.de.los.umbrales.ecológicos.se.verificó.a.nivel.de.comunidad.de.poliquetos.mediante.la.tasa.de.renovación.específica.(diversidad.β).aplicada.a.todo.el.gradiente.y.a.las.clases.consecutivas..Cuanto.mayor.es.β.para.todo.el.gradiente.mayor.es.el.cambio.de.variación.que.una.VE.provoca.en.la.estructura.de.la.comunidad.(VR)..Un.cambio.brusco.de.la.diversidad.β.en.una.clase.del.perfil.señala.la.existencia.de.un.valor.crítico.significativo.para.la.estructura.de.la.comunidad.(VR)..Para.la.selección.final.de.VEs.y.de.umbrales.también.se.utilizó.la.información.bibliográfica.disponible..Las.VR.que.mejor.indican.el.status.de.una.EE.fueron.la.diversidad.(H).y.la.equitatividad.(J´).de.anélidos.poliquetos..Las.VE.que.mejor.predicen.el.estado.son.la.señal.isotópica.(β15N).y.la.concentración.de.sulfuros.libres.(TFS),.seguidas.de.TOC,.MO.y.granulometría..La.β15N.debe.ser.tomada.como.un.descriptor.de.estado.que.informa.de.manera.integrada.sobre.la.materia.orgánica.(cantidad).recientemente.depositada.(degradabilidad).procedente.de.la.granja.(actividad.humana)..La.concentración.de.TFS.informa.sobre.la.toxicidad.del.medio,.representando.la.interacción.de.ciertas.condiciones.del.medio.(pH,.Eh,.MO,.granulometría)..La.granulometría.no.es.una.VR.sensu strictu.pero.condiciona.la.capacidad.de.asimilación.del.impacto,.siendo.desfavorables.tanto.los.finos.como.las.arenas.Con.los.resultados.obtenidos.y.el.apoyo.bibliográfico.se.proponen.los.umbrales.de.las.VE.prioritarias.y.complementarias.que.definen.cambios.de.estado.significativos.de.la.comunidad.de.poliquetos,.a.modo.de.estándares.de.calidad.ambiental,.nivel.de.efectos.permitidos.y.nivel.de.efectos.indeseables..

BibliografíaLopez,.J..Retuerto,.R..and.Carballeira.A..1997..D665/D665a.versus.frecuencies.as.indicator.of.bryophytes.responses.to.physicochemical.gradients..Ecology.78.(1.):.260-271.(1997)

AgradecimientosEste.trabajo.fue.financiado.por.la.JACUMAR.(2008-10).bajo.el.título:.“Selección de indicadores, determinación de valores de referencia, diseño de programas y protocolos de métodos y medidas para estudios ambientales en acuicultura marina”(INDAQUA)..Desarrollado.en.las.CCAA:.Andalucía,.Canarias,.Cataluña,.Galicia,.Murcia.y.Valencia.

Diseño de un plan de integral para la vigilancia ambiental de las piscifactorías marinas instaladas en tierraA..Carballeira1,.J..Ramos-Gómez1.y.C..Carballeira2

1Ecotoxicología, área de Ecología. Facultad de Biología, Universidad de Santiago de Compostela, 15782, E-mail: [email protected]ón de sistemas acuáticos, área de Quimica-física. Facultad de Ciencias del Mar, Universidad de Cádiz, 11510, Puerto Real

AbstractThe.need.of.designing.an.environmental.monitoring.plan.(EMP).adapted.to.intensive.land-based.marine.fish.farms.(LBMFFs).arises.due.to.the.recent.expansion.of.this.activity.in.the.northwest.of.the.Iberian.Peninsula.(Galicia)..This.design.requires.determining.the.pollutants.and.their.toxicities,.and.the.assimilative.capacities.of.receiving.environments..To.this.end,.several.experiments.and.analysis.were.con-ducted.at.eight.LBMFFs..Different.physico-chemical,.molecular.and.histopathological.markers.were.analyzed.on.effluents.and.on.native.and.transplanted.organisms..In.the.laboratory,.we.have.studied.the.toxic.and.trophic.effects.of.effluents.through.a.battery.of.bioassays.with.organisms.from.different.trophic.levels,.and,.in.the.field,.the.communities.that.have.colonized.artificial.substrates.The.parameters.selected.for.the.EMP.were;.ammonia,.pH.and.suspended.solids.(SS),.the.d15N.isotopic.signal.in.native.macroalgae,.the.po-tential.toxicity.of.effluents,.the.coverage.of.opportunistic.intertidal.algae.and.the.histopathology.of.native.mussel..The.type.and.frequency.of.these.checks.depends.on.the.effluent.load.and.the.sensitivity.of.the.receiving.ecosystem.Palabras clave:.land.based.marine.fish.farm;.environmental.assesment;.β15N;.eutrophication;.ecotoxicity.bioassay;.biomarkers;.fouling.community..

IntroducciónDadas.las.características.singulares,.como.una.ubicación.en.zonas.de.alto.hidrodinamismo,.y. la.escasez.de.estudios.sobre. impactos.ambientales.de. las.piscifactorías.marinas. instaladas.en. tierra. (LBMFF,. land-based marine fish farm).se.planteó. la.realización.de.una.serie.de.experiencias.capaces.de.aportar.información.científica.básica.que.fuera.útil.para.el.diseño.de.un.plan.de.vigilancia.ambiental.(EMP,. environmental monitoring plan). adaptado. a. este. tipo. de. granjas.. Se. consideró. que. la. aproximación. TRIAD. (Chapman. 2007). es.conceptualmente.la.más.adecuada.para.el.diseño.de.un.EMP.integral.ya.que.sintetiza.la.información.en.tres.grandes.líneas.de.evidencia:.1ª/. Contaminación,. 2ª/. Ecotoxicidad. y. 3ª/. Integridad. ecológica.. Además,. esta. aproximación. permite. reconocer. interacciones. entre.descriptores. pertenecientes. a. distintas. líneas. de. evidencia. (i.e.. relación. isotópica. d15N-eutrofización). lo. que. refuerza. la. información.obtenida.

Material y MétodosSe. estudiaron. las. características. ambientales. de. las. LBMFFs,. se. revisó. el. origen. y. la. posible. presencia. de. los. contaminantes. en. el.medio.marino.y.el. tipo.de.alteraciones.que.pueden.generarse.debido.a.esta.actividad..De.este.modo.se.llevaron.a.cabo.una.serie.de.experiencias.en.el.área.de.influencia.de.8.LBMFFs.instaladas.en.la.costa.de.Galicia,.dedicadas.al.engorde.de.rodaballo.(Psetta maxima).y.ocasionalmente.de.lenguado.(Solea solea),.con.diferentes.niveles.de.producció..El.estudio.de.la.Contaminación.(1ª.línea.de.evidencia).se.centró,.por.un.lado,.en.la.creación.y.en.el.análisis.de.una.base.de.datos.con.el.objeto.de.definir.los.umbrales.y.los.objetivos.de.calidad.(mediante.un.control de verificación.de.los.vertidos).basados.en.las.diferencias.físico-químicas.del.agua.de.salida.respecto.a.la.de.entrada..Estos.datos.fueron.suministrados.por.la.agencia.ambiental.responsable.(Augas.de.Galicia,.XUGA).y.los.propios.piscicultores..Por.otro.lado,.se.realizó.el.estudio.de.tres.tipos.de.marcadores.químicos.en.organismos;.bioacumulación.metálica,.enriquecimiento.nutritivo.y.señales.isotópicas.Respecto.a. la.Ecotoxicidad (2ª. línea.de.evidencia),.el. impacto.de. los.efluentes.se.dividió.en.efectos.tróficos.y.efectos.tóxicos..Para. la.vigilancia.de.los.efectos tróficos.se.analizó.la.fertilidad.de.los.efluentes.tanto.in vitro.(i.e..test.de.microalgas).como.in situ.(trasplantes.de.la.comunidad.de.fitoplancton,.trasplantes.de.discos.de.Ulva.sp.y.cultivo.de.S. saccharina)..El.potencial.efecto.tóxico.de.los.efluentes.se.determinó.mediante.una.batería.de.bioensayos.(test.de.luminiscencia.de.Vibrio fisheri;.test.de.inhibición.del.crecimiento.algal;.test.de.desarrollo.embrionario.de.Paracentrotus lividus).Respecto.a.la.3ª.línea.de.evidencia.(Alteración de la Integridad ecológica),.la.instalación.de.las.LBMFF.en.costas.muy.expuestas.limita.el.tradicional.estudio.de.las.comunidades.en.sustratos.blandos..Se.proponen.como.herramientas.sustitutivas;.el.estudio.de.las.comunidades.colonizadoras.de.sustratos.artificiales.esféricos.y.el.análisis.de.biomarcadores.(moleculares.e.histopatológicos).en.organismos.nativos.(M. galloprovincialis.y.A. sulcata).y.trasplantados.(V. decussata),.recolectados.o.expuestos.en.el.área.de.influencia.

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Resultados y DiscusiónCon.los.resultados.obtenidos,.se.seleccionaron.una.serie.de.parámetros.y.se.establecieron.los.umbrales.significativos.para.un.diagnóstico.inicial.y.que.permitan.detectar.tendencias.dentro.de.un.EMP.dinámico,.mediante.la.comparación.con.las.condiciones.de.referencia.o.iniciale..Los.parámetros.prioritarios.fuero:.• El.balance.out-input.de.parámetros.físico-químicos.convencionales.(las.variables.seleccionadas.fueron.amonio,.pH.y.SS).• La.señal.isotópica.d15N.en.macroalgas.nativas.recolectadas.a.modo.de.gradiente.ha.demostrado.ser.buen.descriptor.de.exposición.a.los.

vertidos.por.su.capacidad.de.integrar.la.carga.y.la.capacidad.dispersiva.del.medio..Su.aplicación.sistemática.permite.el.seguimiento.de.la.intensidad.y.la.extensión.del.impacto.potencia..

• Se. propone. un. sistema. de. evaluación. de. la. toxicidad. potencial. de. los. efluentes. mediante. un. índice. que. considera:. el. número. de.bioensayos,.los.niveles.tróficos.de.los.organismos.test.y.el.caudal.del.efluente.

• Debido.a.la.complejidad.que.supone.el.estudio.de.la.integridad.ecológica.se.sugiere,.en.una.primera.aproximación,.el.seguimiento.de.la.cobertura.de.algas.oportunistas.en.la.franja.intermareal.del.área.de.influencia.potencial.y,.en.segundo.lugar,.el.estudio.histopatológico.de.organismos.nativos.(i.e..M. galloprovincialis..

Se.discute.el.tipo.y.la.periodicidad.de.los.controles.en.función.de.la.carga.del.efluente.(proporcional.a.la.producción.de.peces,.Tn.año-1).y.de.la.sensibilidad.del.medio.(capacidad.dispersiva,.presencia.de.poblaciones.sensibles,.etc...

BibliografíaChapman,. P.M.. 2007:. Determining. when. contamination. is. pollution-weight. of. evidence. determination. for. sediments. and. effluents..Environment.International.33(4):492-501.

AgradecimientosEste.trabajo.fue.financiado.por.la.JACUMAR.(2008-10).bajo.el.título:.“Selección.de.indicadores,.determinación.de.valores.de.referencia,.diseño.de.programas.y.protocolos.de.métodos.y.medidas.para.estudios.ambientales.en.acuicultura.marina”(INDAQUA)..Carlos.Carballeira.agradece.a.la.Universidad.de.Cádiz.la.Beca.Predoctoral.de.Formación.de.Personal.Investigador.(España).

Meta-análisis de los cambios en la estructura del poblamiento de poliquetos debido a la actividad de engorde de peces en jaulas flotantes en las costas españolasE..Martinez-Garcia1,.A..Carballeira2,.F..Aguado-Giménez³,.N.González4,.P..Sanchez-Jerez¹,.J.I..Gairin5,.C.Carballeira6,.B..García-García³,.J.L..Sánchez-Lizaso¹,.J..Carreras5,.J.C..Macías7,.D..Acosta8,.C..Collado9

1 UA. Dep. de Ciencias del Mar y Biología Aplicada. Facultad de Ciencias. Universidad de Alicante. Ap. C 99, E- 03080. [email protected] USC. Ecotoxicología, Ecología. Facultad de Biología. Univ. Santiago de Compostela. 15782. A Coruña. [email protected] IMIDA. E. Acuicultura Marina. Puerto de San Pedro del Pinatar. 30740. Murcia. [email protected] ICCM. Instituto Canario de Ciencias Marinas. Gestión litoral. Ctra. de Taliarte, s/n 35200 Telde, Gran Canaria. [email protected] IRTA Investigación y Tecnología Agroalimentaria. Ctra. de Poblenou Km 5.5, 43540 Sant Carles de la Rápita (Tarragona) [email protected] UCA Ecotoxicología Marina. Química Física. Facultad de Ciencias del Mar. Universidad de Cádiz.. [email protected] J.C. Macías. Profesional Libre, experto en acuicultura. c/Crucero 1. 11540 Sánlucar de Barrameda, Cádiz. [email protected] DAP Dir. Gen. de Pesca y Acuicultura. Cons. Agricultura y Pesca. C/Tabladilla, s/n 41071 Sevilla. [email protected] Dep. de Química. Universidad Las Palmas de Gran Canaria. [email protected]

AbstractTen.fish.farms.along.the.Spain.coast.were.studied.to.detect.the.changes.in.polychaetes.assemblages.under.the.influence.of.the.cages..Organic.enrichment.from.excess.uneaten.food.and.fish.excretions.produce.a.reduction.of.oxygen.concentration.and.the.increase.of.dissolved.sulfide.from.microbial.anaerobic.respiration..Meta-analysis.was.used.to.define.which.polychaeta.families.can.be.used.as.indicator.for.monitoring.programs.to.detect.an.impact.of.benthos..There.was.found.a.significant.decrease.of.polychaeta.abundance.under.the.fish.farms..Moreover.the.families.Sabellidae,.Paralacydonidae,.Paraonida,.Onuphidae,.Nephtydae,.Magelonidae,.Maldanidae.and.Cirratulidae.had.a.significant.decrease.under.the.cages..On.the.other.hand.the.families.Dorvilleidae,.Capitellidae,.Nereididae,.Oweniidae,.Spionidae.and.Glyceridae.had.a.significant.increase..These.results.are.consistent.with.other.studies.from.the.Mediterranean.Sea.

Justificación En. la. zona. Mediterránea. y. Sur-atlántica. de. aguas. más. templadas. se. desarrolla. la. producción. de. lubina. y. dorada,. generalmente. en.sistemas.de.jaulas.flotantes,.generando.cambios.en.la.composición.de.la.comunidad.bentónica.debido.al.enriquecimiento.orgánico..La.clase.Polychaeta.se.considera.el.grupo.taxonómico.de.sustratos.blandos.con.mayor.sensibilidad.a.alteraciones,.y.por.tanto,.son.utilizados.habitualmente.en.programas.de.seguimiento.ambiental..Debido.a.la.fuerte.variabilidad.espacio-temporal.de.la.respuesta.de.la.infauna.en.relación.a.la.presión.ejercida.por.las.jaulas.de.engorde.de.dorada.y.lubina,.y.a.la.necesidad.de.obtener.indicadores.consistentes.para.todo.el.territorio.del.estado.español,.se.realizó.un.estudio.a.una.escala.espacial.de.centenares.de.kilómetros,.para.definir.las.mejores.variables. que. definan. la. respuesta. de. los. sistemas. bentónicos. al. enriquecimiento. orgánico. Por. lo. tanto. el. objetivo. concreto. ha. sido.identificar.la.respuesta.global.de.los.poblamientos.de.poliquetos.a.nivel.de.familia.para.poder.definir.su.robustez.como.indicadores.de.impacto.ambiental.utilizando.técnicas.de.meta-análisis..

Material y Métodos Los.muestreos.se. llevaron.a.cabo.entre.Septiembre.de.2009.y.Mayo.de.2010.en.dos.granjas.de.dorada.y. lubina.de. las.comunidades.autónomas.de.Cataluña,.Comunidad.Valenciana,.Murcia,.Andalucía.y.Canarias..Los.muestreos.se.realizaron.debajo.de.las.jaulas,.en.zona.de.influencia.(100.m).y.en.zonas.control.(1.km.de.distancia),.en.tres.sitios.al.azar,.tomando.tres.muestras.en.cada.uno..Para.el.presente.estudio.solo.se.utilizaron.los.datos.de.las.localidades.impactadas.y.control..Los.datos.se.transformaron.a.m².para.su.análisis..Debido.a.la.alta.heterogeneidad.de.los.datos.y.diferentes.métodos.de.muestreo.utilizados,.se.realizó.un.meta-análisis.tomando.los.estudios.como.factores.aleatorios,.con.el.método.de.la.varianza.inversa.(Ihaka.and.Gentleman,.1996),.definiendo.el.efecto.de.las.jaulas.en.las.20.familias.principales.de.poliquetos,.presentes.en.todas.las.localidades..

Resultados y Discusión El.meta-análisis.detectó.un.efecto.total.significativo.de.disminución.de.la.abundancia.de.poliquetos.por.la. influencia.de.las.jaulas.de.acuicultura.en.comparación.con.los.controles.(Tamaño.de.efecto.MD:.-29.238,.[-42.0967;.-16.3793].95%.CI,.p<0.0001)..A.pesar.de.esa.disminución.general.de.la.abundancia.hay.ciertas.familias.que.se.vieron.favorecidas.por.la.influencia.de.las.jaulas.(figura.1).

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Medio ambiente

Se.puede.concluir.que.el.estudio.de.los.poblamientos.de.poliquetos.es.una.herramienta.consistente.en.los.planes.de.seguimiento.de.las.instalaciones.de.acuicultura,.pudiendo.sacar.conclusiones.precisas.sobre.el.estado.ecológico.del.bentos..Los.resultados.del.meta-análisis.concuerdan.con.otros.trabajo.en.el.carácter.oportunista.de.ciertas.familias.como.Capitellidae,.Cirratulidae,.Spionidae,.Oweniidae.y.Dorvilleidae.(Tomassetti.y.Porrello,.2005),.y.permite,.bajo.la.robustez.de.un.programa.de.muestreo.a.gran.escala,.definir.la.respuesta.de.estas.familias.al.impacto.producido.por.el.enriquecimiento.de.materia.orgánica.

BibliografíaTomassetti,.P..and.Porrello,.S.2005..Polychaetes.as.indicators.of.marine.fish.farm.organic.enrichment..En:.Aquaculture International 13:.109-128Ihaka.R..&.Gentleman.R..1996..R:.a.language.for.data.analysis.and.graphics..Journal.of.Computational.and.Graphical.Statistics.5:299-314

Agradecimientos Este. trabajo. fue. financiado.por. JACUMAR. (2008-10).en. el. marco.del. proyecto. “Selección de indicadores, determinación de valores de referencia, diseño de programas y protocolos de métodos y medidas para estudios ambientales en acuicultura marina” (INDAQUA)..

Figura 14Forest plot.del.efecto.de.las.jaulas.sobre.la.abundancia.total.de.cada.familia.de.poliquetos..La.línea.vertical.representa.la.separación.entre.los.controles.y.el.efecto.de.las.jaulas..Las.barras.de.error.equivalen.al.intervalo.de.confianza.al.95%.

Cambios en el ecosistema bentónico tras el cese de una piscifactoría de dorada en el Mediterráneo occidentalTania.Morata1,.Isabel.Gadea,.Silvia.Falco,.Miguel.Rodilla1Instituto de Investigación para la Gestión Integrada de zonas Costeras IGIC, Universidad Politécnica de Valencia, C/Paranimf, 1. 46730, Gandía (Valencia) [email protected]

Abstract After.closing.of.a.fish.farm.of.Spaurus aurata.in.Comunidad.Valenciana,.was.conducted.a.recovery.study.of.benthic.ecosystem..Oxygen.and.nutrients.fluxes.were.determined. in situ.at.the.sediment-water.interface.in.two.sampling.stations.(under.the.cages.and.a.control.station).. Also. physicochemical. and. biological. parameters. were. measured. in. unaltered. sediment. samples.. There. were. four. sampling.campaigns,.one.before.and.three.after.the.cessation.of.the.activity..Results.showed.that.3.months.after.the.closure.of.the.farm.there.were.no.significant.differences.between.the.fluxes.measured.at.the.two.stations,.where.previously.if.there.were.differences..9.months.after.cessation.of.the.activity.there.were.no.significant.differences.in.physicochemical.parameters.measured.in.sediments,.but.benthic.macrofauna.under.the.cages.still.showed.differences.with.the.control.station,.although.abundance.of.opportunistic.polychaetes.under.the.cages.had.dropped.significantly..

JustificaciónLa.acuicultura.intensiva.en.jaulas.marinas.produce.cambios.en.el.bentos.debido.al.enriquecimiento.de.los.sedimentos.con.los.productos.de.desechos.orgánicos..Los.procesos.biogeoquímicos.de.recuperación.después.del.cierre.de.una.piscifactoría.o.de.un.periodo.de.barbecho.están.poco.estudiados.y.el.tiempo.necesario.para.la.recuperación.del.ecosistema.no.está.determinado.(McGhie.et.al.,.2000;.Pereira.et.al.,.2004).y.dependerá.de.muchos.factores,.principalmente.de.cada.lugar.y.de.la.actividad.acuícola.realizada.

Material y MétodosSe.realizaron.4.campañas.de.muestreo,.en.junio.del.2009.antes.del.cese.de.la.actividad.(I_0;.C_0).y.a.los.pocos.días,.(I_1;.C_1),.a.los.3.meses.(I_3;.C_3).y.a.los.9.meses.(I_9;.C_9).tras.el.cierre.de.una.piscifactoría.de.engorde.de.dorada.en.Burriana.(Castellón)..Las.medidas.se.tomaron.tanto.en.la.instalación.como.en.una.estación.control,.situada.a.100.m.al.norte.de.la.instalación.en.dirección.opuesta.a.las.corrientes. dominantes. de. la. zona.. Para. el. estudio. de. los. flujos. de. nutrientes. y. oxígeno. en. la. interfase. agua-sedimentos,. se. hicieron.medidas. in situ.mediante.cámaras.bentónicas..Los.parámetros.analizados.fueron:.NH4

+,.NO3-,.PO4

3-,.Si.y.oxígeno.disuelto.(DO)..En.cada.muestreo.también.se.tomaron.muestras.de.sedimentos.inalterados.utilizando.corers.para.medir:.el.%.de.materia.orgánica.(MO),.fósforo.total.(PT).y.potencial.redox.(Eh).y.para.la.identificación.y.recuento.de.macroinvertebrados.bentónicos..

Resultados y discusiónSe.observó.que.a.los.pocos.días.del.cese.de.la.actividad.se.seguían.apreciando.diferencias.significativas.entre.instalación.y.control.en.los.flujos.de.OD.y.de.PO4

3-.y.en.el.%M.O,.PT.y.la.medida.del.Eh.de.los.sedimentos,.sin.embargo.ya.no.se.observaron.diferencias.en.el.flujo.de.NH4+,.

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sugiriendo.que.la.mayor.parte.de.la.materia.orgánica.nitrogenada.aportada.por.la.piscifactoría.ya.se.había.biodegradado..A.los.tres.meses.después.del.cierre,.seguían.encontrándose.diferencias.significativas.en.el.contenido.de.PT.y.la.medida.de.Eh.en.los.sedimentos,.sin.embargo.después.de.9.meses.ya.no.hubo.diferencias.significativas.en.ninguno.de.los.parámetros.fisicoquímicos.donde.antes.si.las.había..Otros.estudios.como.el.de.McGhie.et.al..(2000).mostraron.que.a.los.12.meses.tras.el.cierre.de.una.piscifactoría.de.salmón.en.Tasmania.los.sedimentos.habían.recuperado.las.condiciones.normales.óxicas..Las.diferencias.encontradas.en.los.flujos.de.Si.poco.tienen.que.ver.con.la.actividad.acuícola.y.se.debieron.posiblemente.a.la.presencia.de.diatomeas.bentónicas..Sin.embargo.la.macrofauna.bentónica.no.mostró.una.recuperación.tan.rápida..Los.poliquetos.no.mostraron.aumentos.de.riqueza.de.especies.bajo.las.jaulas,.aunque.disminuyó.de.manera.importante.la.abundancia.sobre.todo.a.partir.de.los.tres.meses.después.del.cese.de.la.actividad.debido.a.la.reducción.de.densidad.de.especies.oportunistas.indicadoras.de.enriquecimiento.orgánico..En.cuanto.a.los.crustáceos,.continuó.habiendo.en.instalación.menos.especies.y.abundancia.con.respecto.la.estación.control.(Tabla.2)..Los.moluscos.no.presentaron.cambios.representativos.con.el.tiempo..Pereira.et.al..(2004).mostraron.una.lenta.recuperación.de.las.comunidades.bentónicas.tras.el.cierre.de.una.piscifactoría.de.salmón.en.Escocia.

Tabla 14Valores.de.los.parámetros.geoquímicos.medidos.bajo.la.instalación.(I).y.en.la.estación.control.(C).en.las.4.campañas.de.muestreo..*Diferencias.significativas.(ANOVA,.p<.0,05).

Flujo.OD Flujo.NH4+ Flujo.NO3

- Flujo.PO43- Flujo.Si %.M.O PT Eh

I_0 -64±17 12,7±1,3 -0,10±0,12 0,74±0,12 1,3±0,3 1,8±0,7 1350±411 -207±90

C_0 *-24±36 *1,8±1,4 -0,15±0,11 *0,01±0,10 3,2±2,3 *0,6±0,1 *200±49 *-101±67

I_1 -32±13 1,3±0,7 -0,44±0,23 0,13±0,03 1,2±0,8 1,1±0,1 1314±287 -250±49

C_1 *-9±12 1,4±0,8 -0,28±0,03 *0,01±0,03 0,6±0,2 *0,9±0,1 *216±18 *-96±37

I_3 -17±7 1,6±0,2 -0,22±0,06 0,03±0,04 5,0±1,2 0,9±0,1 1124±63 -193±83

C_3 -21±19 1,5±0,4 -0,14±0,16 0,07±0,06 *1,6±0,9 0,8±0,1 *230±18 *-40±54

I_9 -24±14 0,6±0,3 -0,44±0,45 0,11±0,08 -0,58±0,7 1,1±0,2 242±19 -16±41

C_9 -10±23 0,4±0,3 -0,44±0,14 0,07±0,02 *2,4±2,6 0,7±0,1 205±13 19±24

Tabla 24Número.de.especies.y.densidad.de.individuos.en.los.sedimentos.bajo.la.instalación.(I).y.en.el.punto.control.(C).en.las.4.campañas.de.muestreo.

Crustáceos Moluscos Poliquetos

Nº.de.crustáceos Densidad.(ind/m2) Nº.de.especies Densidad.(ind/m2) Nº.de.especies Densidad.(ind/m2)

I_0 - <110 4 994 1 31151

C_0 4 3203 3 2430 11 3038

I_1 2 331 2 663 2 15025

C_1 2 442 2 221 4 1440

I_3 - <110 2 221 2 444

C_3 4 994 - <110 8 13927

I_9 2 331 1 994 1 222

C_9 3 773 1 5855 5 3429

BibliografíaMcGhie,.T.K.,.Crawford,.C.M.,.Mitchell,.I.M.y.O’Brien,.D.2000..The.degradation.of.fish-cage.waste.in.sediments.during.fallowing..Aquaculture.187:.351-366.Pereira,.P.M.F.,.Black,.K.D.,.McLusky,.D.S.y.Nickell,.T.D..2004..Recovery.of.sediments.after.cessation.of.marine.fish.farm.production..Aquaculture.235:315-330.

AgradecimientosCaja.del.Mediterráneo.(CAM).por.financiar.una.beca.predoctoral.para.estas.investigaciones.

Desarrollo vegetal integrado a la producción intensiva de tenca. Pruebas preliminaresJambrina,.M.C1.,.Forcadell,.A.1,.Cowler,.P.P.1,.Redó,.J.M.1,.Cerdá,.J.2.&.Jover.M3

1Continaqua, S.L. C/ Llarga de Sant Vicent 73. 43500 Tortosa. E-mail: [email protected] Pollensa SAT. C/ Ginebró, 200 4-B. 07470. Port de Pollença3GAB (Grupo de Acuicultura y Biodiversidad) Instituto de Ciencia y Tecnología Animal, Departamento de Ciencia Animal, Universidad Politécni-ca de Valencia. Camino de Vera s/n. 46071 Valencia

AbstractThis.paper.describes.vegetal.development.of.six.horticultural.especies.growing.into.an.aquaponic.system.(hydroponic.root.floating.system.integrated.to.an.intensive.tench.rearing.system)..A.trial.of.28.days.was.conducted.aiming.to.compare.their.potentials.in.terms.of.biomass.production.and.water.depuration..Results.shown.that.celery.and.romaine.lettuce.have.the.biggest.daily.growth.rates.(weigth.and.size).and.no.significative.differences.was.observed.between.both..However,.relative.increments.were.significantly.high.in.romaine.lettuce..

JustificaciónLa.acuaponía.(acuicultura.+.hidroponía).es.una.forma.de.producción.sostenible.que.implica.integrar.la.producción.de.peces.y.plantas.con.rendimiento.comercial.en.un.sistema.de.recirculación..De.esta.forma,.los.residuos.producidos.por.los.peces.(nutrientes).son.aprovechados.por.las.plantas.para.su.crecimiento.resultando.un.aprovechamiento.máximo.de.los.recursos.al.tiempo.que.se.incrementa.la.calidad.del.agua.(Lennard,.2004)..Realizando.en.nuestra.empresa.la.depuración.de.las.aguas.residuales.mediante.un.“lagunado.dinámico”.(Cerdá.i.Mulet,.2001),.planteamos.como.objetivo.de.estas.pruebas.determinar.el.crecimiento.vegetal.de.diversos.plantones.para.comprobar.cuales.son.las.especies.y.variedades.que.potencialmente.podrían.ofrecer.mejores.resultados.en.términos.de.producción.y.eficiencia.

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Material y MétodosEl.experimento.se.realizó.en.un.invernadero.cubierto..Se.emplearon.4.tanques.de.sección.circular.(3.m.de.diámetro.y.7.m3.de.capacidad).de.tela.de.PVC.de.color.azul.oscuro.y.desagüe.central,.suministrando.agua.y.aire.de.forma.constante.con.boquillas.Venturi..Alevines.de.tenca.previamente.clasificados.(rejilla.<.7.mm,.biomasa.total.inicial.27015.g.).fueron.estabulados.a.una.carga.inicial.media.de.0,960.Kg/m3.(±,.0,143)..Diariamente.se.limpió.el.fondo.de.los.tanques.y.los.peces.se.alimentaron.con.pienso.comercial.de.forma.manual.(1,76%.±.0,37.de.la.biomasa.inicial).repartido.en.4.tomas.al.día..La.temperatura.media.del.agua.fue.de.20,63.(±.1,69.oC).con.una.oscilación.máxima.en.todo.el.periodo.de.6,3.oC..Para.el.experimento.se.emplearon.planteles.de.cuatro.variedades.comerciales.de.lechuga.(maravilla,.iceberg,.romana.y.hoja.de.roble),.perejil.y.apio..Antes.de.su.trasplante,.las.raíces.fueron.lavadas.con.agua.abundante.y.se.dispusieron.en.planchas.de.poliestireno.expandido.de.3.cm.de.grosor.introduciéndolas.a.través.de.un.orificio.de.3.cm.de.diámetro,.y.se.desarrollaron.directamente.sobre.la.superficie.de.los.tanques.(sistema.de.raíz.flotante)..El.seguimiento.del.peso.y.longitud.total.en.cada.planta,.permitió.describir.las.curvas.de.crecimiento,.calcular.los.respectivos.incrementos.absolutos.a.los.28.días.y.estimar.las.tasas.de.crecimiento.diario.e.incremen-tos.relativos.(expresados.como.%.de.los.valores.iniciales)..

Resultados y discusiónPartiendo.de.97.planteles.se.recuperaron.al.cabo.de.28.días.82.ejemplares.con.un.peso.total.de.3856.gr.(586,33%.de.incremento.relativo.en.peso)..La.mortalidad.absoluta.se.ha.estimado.en.15,6%.y.por.especies.varió.entre.0.y.17,78%..Un.test.-t.ha.permitido.verificar.que.todas.las.especies,.con.la.excepción.del.perejil,.presentaron.valores.medios.de.peso.significativamente.mayores.a.los.13.días,.aunque.en.relación.a.la.longitud.total,.los.valores.fueron.significativamente.mayores.en.todas.las.especies.a.los.13.días..La.Tabla.1.indica.los.incrementos.(absolutos.y.relativos).y.tasas.de.crecimiento.diario.en.peso.(TCDP).y.longitud.total.(TCDLT).estimados.en.un.periodo.de.28.días..El.apio.y.la.variedad.romana.presentaron.las.mayores.TCD.en.peso.y.longitud.y.no.mostraron.diferencias.significativas..Sin.embargo,.los.incrementos.relativos.en.peso.y.longitud.fueron.significativamente.mayores.en.la.variedad.romana..

Tabla 1..Valores medios de los incrementos absolutos, relativos y tasas de crecimiento diario en peso y longitud total. Igual letra indica inexistencia de diferencias significativas (p>0,05).

Especie N Incremento Absoluto Peso (g)

Incremento Relativo Peso (%)

TCDP(g/día)

Med D.S. Med D.S. Med D.S.

H roble 14 28,43a 18,89 434,52a 409,31 1,02a 0,67

Iceberg 17 28,65a 14,93 321,96a 254,01 1,02a 0,53

Romana 13 56,85b 25,22 992,63b 366,49 2,23b 0,93

Maravilla 13 40,46b 16,06 1196,47b 795,53 1,45a 0,57

Perejil 10 2,6c 4,72 104,83c 150,87 0,09c 0,17

Apio 15 63,13d 16,19 699,88d 268,64 2,25b 0,58

Especie N Incremento Absoluto LT (cm)

Incremento Relativo LT (%)

TCDLT(cm/día)

Med DS Med DS Med DS

H roble 14 19,07a 4,37 111,06a 34,39 0,68a 0,16

Iceberg 17 22,29c 5,39 150,70c 35,12 0,80a 0,19

Romana 13 28,81b 5,60 196,73b 42,13 1,03b 0,20

Maravilla 13 23,96c 3,65 168,36b 29,82 0,86c 0,13

Perejil 10 17,75a 7,88 143,77a 69,69 0,63a 0,28

Apio 15 28,67b 3,99 118,43a 27,57 1,02b 0,14

BibliografíaCerdá.i.Mulet,.J.,.2001.-.El.lagunado:.eficiencia.racional.y.económica.de.la.cadena.trófica..In:.V.Jornadas.Técnicas.de.la.Sociedad.Española.de.Agricultura.Ecológica..“El.agua.y.la.agricultura:.Gestión.ecológica.de.un.recurso.crítico”..Mallorca,.26,.27,.28.y.29.de.Septiembre.de.2001.Lennard. W.,. 2004.-. Aquaponics,. the. theory. behind. the. integration.. In. GAIN. (Gippsland. Aquaculture. Industry. Network).. http://www.growfish.com.au/content.asp?contentid=1060.

Agradecimientos Este.trabajo.forma.parte.del.proyecto.de.investigación.PTQ-10-04066.financiado.por.el.MICINN.

Cultivo suspendido en cuerdas, de mejillón (Mytilus galloprovincialis) asociado a cultivo de dorada (Sparus aurata) y lubina (Dicentrarchus labrax) en jaulas en mar abiertoM..Fernández1,.C..López1,.A.J..Ibañez1,.P.A..Álvarez1

1Agenciade Gestión Agraria y Pesquera de Andalucía. Consejería de Agricultura y Pesca. Junta de Andalucía. c/Bergantín, 39, 41012, Sevilla. Correo electrónico: [email protected]

AbstractAs.a.complement.to.the.action.implemented.in.South.Atlantic.waters,.this.experience.was.took.place.in.typically.Mediterranean.waters..Moreover,.the.use.of.mussel.as.a.supplementary.species.is.determined.by.the.excellent.culture.conditions.in.the.southern.Mediterranean.area,.and.its.potential.contribution.to.diversification.of.aquaculture.in.Andalusia..The.culture.experience.has.been.designed.taking.into.account.the.oceanographic.features. in.the.study.area..A.longline. installation. is.foreseen.near.the.existing.floating.fish.rearing.cages,.perpendicular.to.the.direction.of.the.prevailing.current..The.structure.shall.consist.of.a.20-metre.main.line.to.which.five.12-metre.ropes.shall.be.attached..Should.technical.difficulties.arise.when.using.and.maintaining.this.longline,.it.may.be.replaced.with.new.rearing.cages.provided.by. the.partner.undertaking,.and. to.whose.floating.structure.ropes.may.be.suspended..Lastly,.another. longline.of. the.same.dimensions.and.characteristics.shall.be.installed.one.nautical.mile.from.the.culture.polygon,.where.the.impact.from.release.of.effluent.is.minimal,.so.as.to.use.it.as.a.mussel.rearing.“target”.

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JustificaciónLa.Agencia.de.Gestión.Agraria.y.Pesquera.de.Andalucía.de.la.Consejería.de.Agricultura.y.Pesca.de.la.Junta.de.Andalucía,.está.desarrollando.por.encargo.de.esta.Consejería.un.proyecto.Jacumar.(Junta.Asesora.de.Cultivos.Marinos.del.Ministerio.de.Medioambiente,.Medio.rural.y.Marino).denominado.“Acuicultura.Integrada:.Experiencia.Piloto.para.el.Desarrollo.de.Sistemas.de.Cultivos.Multitróficos”.para.el.periodo.2008-2011..(www.acuiculturaintegrada.com)La.experiencia.se.realizó.durante.el.periodo.junio.2009.-.julio.2010,.en.colaboración.con.la.empresa.Azucarera.de.Guadalfeo.S.L,.empresa.acuícola.que.se.dedica.al.engorde.en.jaulas.de.doradas.(Sparus aurata).y.lubinas.(Dicentrarchus labrax).frente.a.las.costas.de.la.Caleta.de.Salobreña,.por.caracterizarse.como.una.instalación.acuícola.con.características.típicamente.mediterráneas..Por.otra.parte,.en.la.planta.de.Azucarera.de.Guadalfeo.se.han.detectado.grandes.cantidades.de.mejillón.(Mytilus sp.),.que.coloniza.sus.redes.hasta.el.punto.de.au-mentar.en.toneladas.su.peso.en.muy.poco.tiempo..Este.molusco.junto.a.otras.especies.marinas.hace.imprescindible.el.cambio.de.redes.con.una.periodicidad.relativamente.corta,.haciendo.que.la.empresa.se.plantease.la.utilización.de.la.semilla.presente.en.sus.aguas.como.un.cultivo.complementario.al.hasta.ahora.desarrollado..Por.todo.ello,.y.con.el.objeto.de.demostrar.la.viabilidad.de.los.cultivos.multitróficos.en.la.zona,.se.desarrolló.una.iniciativa.de.cultivo.en.el.que.se.complementase.el.cultivo.de.peces.con.mejillón;.especie.con.buenas.condiciones.para.su.cultivo.en.la.zona.surmediterránea,.potenciando.de.esta.forma.una.posible.contribución.a.la.diversificación.del.sector.acuícola.en.Andalucía.

Material y MétodosA.inicios.del.2009.se.hizo.una.caracterización.ambiental.previa.del.emplazamiento.de.esta.experiencia..Asimismo,.se.desarrolló.el.diseño.y.planificación.de. la.experiencia;.de.modo.que.se.consideraron. las.características.ambientales.de. la.zona.de.estudio,. las.campañas.ambientales.realizadas,.los.estudios.de.cultivos.multitróficos.relacionados.y.las.consideraciones.que.desde.la.empresa.colaboradora.se.transmitió.al.equipo.del.proyecto.Para.la.preparación.de.las.experiencias.se.desarrollaron.una.serie.de.trabajos.relacionados.con.la.recolección.y.estabulación.de.semilla,.preparación.de.los.sistemas.de.cultivo,.adecuación.y.su.posterior.fondeo..Para.el.desarrollo.de.la.experiencia.se.dispusieron.dos.zonas.de.cultivo.de.mejillón,.uno.integrado.en.la.instalación.acuícola.y.otro.control.fuera.de.la.influencia.de.la.instalación..De.este.modo,.se.pretende.ver.la.complementariedad.de.especies.de.cultivo.y.la.repercusión.en.los.crecimientos.y.tiempos.para.alcanzar.la.talla.comercial..Para.ello,.se.dispuso.de.una.de.las.jaulas.de.gravedad.de.la.instalación.de.cultivo,.de.10.metros.de.diámetro.y.sujeta.al.entramado.del.polígono.de.cultivo.por.6.puntos.de.unión,.a.una.profundidad.de.20.m.a.24.m..En.dicha.jaula.se.colgaron.tres.cuerdas.de.semilla.de.mejillón,.iniciando.el.cultivo.a.6.metros.de.profundidad.hasta.los.12.metros..Con.respecto.a.la.experiencia.en.la.zona.de.cultivo.control,.se. instaló. una. estructura. a. poniente. de. la. instalación. acuícola,. y. que. dista. 1. km. de. la. instalación. acuícola,. formada. por. dos. boyas.incompresibles.de.600.litros.sumergidas.a.5.metros.de.profundidad.y.unidas.por.una.cuerda.de.8.metros.de.la.cual.se.suspenden.las.tres.cuerdas.de.cultivo.de.mejillón..La.profundidad.de.inicio.de.cultivo.se.mantuvo.en.6.metros.hasta.los.12.metros.La.siembra.y.encordado.de.semilla.de.mejillón.se.desarrolló.con.dos.tamaños.iniciales.diferenciados,.una.densidad.de.1kg/m.y.6.metros.de.longitud.de.cuerda..Para.ello.se.tamizó.la.mejilla.recolectada,.con.el.objeto.de.obtener.lotes.de.semilla.lo.menos.dispersos.posible..

Resultados y DiscusiónCon.toda.la.información.analizada.se.puede.concluir.que.se.ha.identificado.que.especies.como.el.mejillón,.asociados.al.cultivo.en.jaulas.de.peces,.es.una.opción.muy.interesante.y.recomendable.como.iniciativa.que.combine.especies.de.diferentes.niveles.tróficos..De.hecho,.no.se.han.observado.interferencias.negativas.entre.las.especies.sino.al.contrario,.de.manera.natural.el.mejillón.ha.estado.presente.en.la.instalación.colonizando.cabos,.boyas,.estachas,.jaulas,.etc....Los.sistemas.que.podrían.ser.más.recomendables.para.extrapolar.esta.experiencia.a.una.escala.piloto.o.en.un.futuro.industrial.son.los.denominados.long-lines.por.su.reconocido.uso.en.el.cultivo.de.moluscos..El.sistema.empleado.en.la.experiencia.no.sería.extrapolable.a.la.empresa.por.las.limitaciones.de.espacio.y.operatividad.del.cultivo.sus-pendido.en.jaula.de.gravedad.Por.otra.parte,.las.pruebas.realizadas.con.dos.tallas.de.semilla.diferente,.proveniente.de.la.propia.instalación,.muestran.que.ambas.han.tenido.un.crecimiento.adecuado.tanto.en.la.instalación.acuícola.como.en.la.zona.control..Teniendo.en.cuenta.que.se.considera.tamaño.co-mercial.del.mejillón.a.partir.de.los.70.milímetros.y.que.se.ha.superado.este.tamaño.comercial.en.ambas.zonas.de.estudio.en.un.período.de.un.año,.existen.evidencias.probadas.en.esta.experiencia.piloto,.del.buen.desarrollo.del.cultivo.de.mejillón.en.la.zona.mediterránea.andaluza.Todo.ello,.unido.a.los.valores.de.índice.de.condición.pueden.concluir.que.si.bien.los.cultivos.de.moluscos.en.mar.abierto,.y.en.estructuras.como.long-lines,.bateas,.fondeos,.etc....son.una.opción.interesante.para.una.empresa.acuícola,.el.hecho.de.combinarlo.con.jaulas.de.pe-ces,.a.parte.de.interesante.puede.ser.recomendable.por.la.diversificación.de.especies.que.proporciona.a.la.empresa,.el.aprovechamiento.de.los.nutrientes.generados.en.las.jaulas.por.los.moluscos,.etc..

BibliografíaChopin.T..2006..Integrated.multi-trophic.aquaculture..What.it.is,.and.why.you.should.care.and.don’t.confuse.it.with.polyculture.Northern.Aquaculture,.Vol.12,.No.4,.July/August.2006,.pg.4.

AgradecimientosA.la.empresa.colaboradora,.Azucarera.de.Guadalfeo.S.L.

Posible papel mediador del factor de necrosis tumoral alfa en la acción de la hormona luteinizante sobre la ovulación en la trucha común (Salmo trutta)D..Crespo.y.J..V..PlanasDepartamento de Fisiología e Inmunología, Facultad de Biología, Universidad de Barcelona e Instituto de Biomedicina de la Universidad de Barcelona (IBUB), Avenida Diagonal 643, 08028 Barcelona. [email protected]

AbstractEl.objetivo.de.este.trabajo.ha.sido.investigar.el.papel.que.desempeña.el.factor.de.necrosis.tumoral.α.(TNFα).sobre.la.función.ovárica.y,.concretamente,.su.posible.papel.mediador.sobre.los.efectos.de.LH.en.la.trucha.común.(Salmo trutta)..Hemos.investigado.los.efectos.de.LH.de.salmón.(sLH).en.folículos.preovulatorios.y.hemos.observado.que.sLH.estimula.la.contracción.del.folículo.(FC).y.que.éste.efecto.es.bloqueado.por.indometacina.(un.inhibidor.de.la.síntesis.de.prostaglandinas).y.por.TAPI-I.(un.inhibidor.de.TACE/ADAM17.que.bloquea.la.secreción.de.TNFα)..Además,.sLH.estimula.la.expresión.de.tnfα,.tace/adam17.y.de.cox-1.and.cox-2,.al.igual.que.la.producción.de.PGF2α..TNFα.recombinante.de.trucha.induce.resultados.similares.a.los.obtenidos.utilizando.sLH.sobre.la.FC,.producción.de.PGF2α.y.actividad.colagenolítica..En.vista.de.estos.resultados,.proponemos.que.TNFα.es.un.potencial.mediador.de.los.efectos.de.LH.en.el.ovario.y.que.puede.estar.implicado.en.el.control.de.la.ovulación.en.peces.

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Reproducción

JustificaciónLa.ovulación,.que.es.provocada.por.un.aumento.de.la.hormona.luteinizante.(LH),.es.un.proceso.complejo.que.conduce.a.la.liberación.del.óvulo.maduro.del.folículo.ovárico..Varios.eventos.preparatorios.debe.ocurrir.antes.de.la.expulsión.del.ovocito.como.la.contracción.del.folículo.(FC),.la.separación.del.folículo.y.la.ruptura.del.folículo..En.mamíferos,.está.bien.documentada.la.implicación.del.pico.de.produc-ción.de.la.hormona.luteinizante.(LH).durante.el.período.preovulatorio..LH.inicia.una.cascada.de.eventos.en.el.ovario.que.culminan.en.la.ruptura.del.folículo.y.la.liberación.de.ovocitos.(Richards,.2001).que.implican.la.producción.de.prostaglandinas.y.la.expresión.de.meta-lloproteinasas.de.matriz.(Duffy.y.Stouffer,.2003;.Jo.et al.,.2004)..Un.sólido.conjunto.de.evidencias.ha.surgido.en.las.dos.últimas.décadas.sugiriendo.que.las.citoquinas.podrían.ser.posibles.mediadores.de.los.efectos.de.LH.(Brännström.et al.,.1995;.Terranova.y.Rice,.1997)..En.peces,.se.sabe.muy.poco.hasta.la.fecha.sobre.los.efectos.específicos.de.LH.en.el.proceso.ovulatorio..Del.mismo.modo,.la.naturaleza.de.los.factores.reguladores.que.provocan.la.ruptura.del.folículo.y.el.control.de.la.ovulación.(Ogiwara.et.al.,.2005).y.la.participación.de.las.citoquinas.como.mediadores.en.estos.procesos.(Crespo.et.al.,.2010).no.está.bien.documentada..En.línea.con.la.idea.de.que.la.ovulación.es.un.proceso.inflamatorio,.como.en.mamíferos,.es.importante.estudiar.los.mecanismos.implicados.en.el.control.de.la.ovulación.durante.el.período.preovulatorio.en.peces.teleósteos..En.concreto,.en.este.estudio.se.ha.puesto.a.prueba.la.hipótesis.de.que.la.citoquina.pro-inflamatoria.factor.de.necrosis.tumoral.α.(TNFα).puede.afectar.la.función.ovárica.y.actuar.como.mediador.de.los.efectos.de.LH.en.los.folículos.preovulatorios.de.trucha.común.(Salmo trutta).

Material y MétodosPara.los.experimentos.de.FC,.los.folículos.preovulatorios.fueron.pinchados.con.una.aguja.hipodérmica.de.calibre.25.y.se.incubaron.en.so-lución.salina.equilibrada.de.Hank.(HBSS).que.contiene.0,2%.de.BSA.(HBSS-BSA).en.placas.de.cultivo.de.6.pocillos.(10.folículos/4.ml).en.la.presencia.de.los.compuestos.de.prueba.durante.16.horas.a.15°C.bajo.condiciones.de.agitación.(100.rpm)..La.FC.se.determinó.midiendo.el.peso.de.los.10.folículos.en.cada.replicado.después.del.periodo.la.incubación,.como.se.ha.descrito.y.validado.según.Goetz.y.Bradley,.1994..Como.resultado.de.la.contracción.se.produce.la.expulsión.del.vitelo.a.través.del.sitio.de.punción,.una.disminución.del.peso.del.folículo.in-dica.un.aumento.en.la.FC..También.fueron.retirados.y.almacenados.a.-20ºC.hasta.su.uso.los.medio.de.cultivo.a.la.finalización.del.período.de.incubación.para.determinar.mediante.inmunoensayo.enzimático.los.niveles.de.producción.de.prostaglandinas.in vitro.(prostaglandina.F2α,.PGF2α)..Para.recoger.tejido.ovárico.para.posteriores.extracciones.de.ARN.y.determinación.de.la.actividad.gelatinasa/colagenasa,.los.folículos.preovulatorios.de.cada.uno.de.un.total.de.tres.a.cinco.hembras.fueron.incubados.(20.folículos/5.ml,.por.triplicado).en.HBSS-BSA.en.la.ausencia.o.presencia.de.los.compuestos.testados,.a.15ºC.durante.16.h.con.agitación.suave.(100.rpm)..Tras.el.periodo.de.incubación.los.folículos.fueron.retirados,.rápidamente.congelados.en.nitrógeno.líquido.y.almacenados.a.-80ºC.hasta.su.uso.

Resultados y DiscusiónEn.el.presente.estudio.hemos.examinado.los.efectos.in vitro.de.LH.purificada.de.salmón.(sLH).en.folículos.obtenidos.del.ovario.de.truchas.preovulatorias.y.hemos.demostrado.que.sLH.significativamente.incrementa.la.FC.y.que.este.efecto.es.bloqueado.por.la.indometacina.(un.inhibidor.de.la.síntesis.de.prostaglandinas).y.TAPI-1.(un.inhibidor.de.la.enzima.convertidora.de.TNFα,.que.bloquea.la.secreción.de.TNFα)..Además,.el.tratamiento.con.sLH.aumentó.la.expresión.de.tnfα,.tace/adam17,.cox-1.y.cox-2.en.folículos.de.truchas,.así.como.la.producción.de.PGF2α.en.el.medio.de.cultivo..Además,.el.tratamiento.con.sLH.incrementó.la.actividad.gelatinasa/colagenasa.de.los.folículos..También.utilizamos.una.plataforma.de.microarrays.específica.de.salmónidos.(GEO.GPL10706).y.observamos.que.sLH.induce.la.expresión.de.genes.que.se.sabe.participan.en.procesos.inflamatorios,.proteolíticos.y.de.remodelación.tisular..Con.el.fin.de.estudiar.más.a.fondo.la.posible.participación.de.TNFα.como.mediador.de.los.efectos.de.LH.en.el.ovario.la.trucha,.se.incubaron.folículos.preovulatorios.en.presencia.de.TNFα.recombinante.de.trucha.(rtTNFα)..En.primer.lugar,.rtTNFα.causó.un.aumento.significativo.en.la.FC.y.la.indometacina.bloqueó.este.efecto,.lo.que.sugiere.una.posible.implicación.de.las.prostaglandinas.en.acción.de.rtTNFα..En.segundo.lugar,.rtTNFα.estimula.la.expresión.de.cox-1.y.cox-2..En.tercer.lugar,.rtTNFα.estimula.la.producción.in vitro.de.PGF2α..En.cuarto.lugar,.rtTNFα.estimula.la.actividad.gelatinasa/colagenasa..Del.mismo.modo,.PGF2α.estimula.directamente.FC,.lo.que.confirma.los.resultados.de.otros.estudios,.así.como.la.actividad.gelatinasa/colagenasa..En.vista.de.estos.resultados,.proponemos.que.el.TNFα.puede.ser.un.posible.mediador.de.los.efectos.de.LH.en.el.proceso.ovulatorio.en.la.trucha,.probablemente.a.través.de.su.estimulación.de.la.producción.de.PGF2α..En.concreto,.TNFα.podría.tener.un.papel.importante.en.la.biomecánica.del.debilitamiento.del.folículo,.la.ruptura.del.ovario.y.la.expulsión.de.oocitos.durante.la.ovulación.en.teleósteos.

BibliografíaBrännström,.M.,.N..Bonello,.L.J..Wang.y.R.J..Norman..1995..Effects.of.tumour.necrosis.factor.alpha.(TNF.alpha).on.ovulation.in.the.rat.ovary..Reproduction, Fertility and Development.7(1):.67-73.Crespo,.D.,.E..Bonnet,.N..Roher,.S.A..MacKenzie,.A..Krasnov,.F.W..Goetz,.J..Bobe.y.J.V..Planas..2010..Cellular.and.molecular.evidence.for.a.role.of.tumor.necrosis.factor.alpha.in.the.ovulatory.mechanism.of.trout..Reproductive Biology and Endocrinology.12;8:.34.Duffy,.D.M..y.R.L..Stouffer..2003..Luteinizing.hormone.acts.directly.at.granulosa.cells.to.stimulate.periovulatory.processes:.modulation.of.luteinizing.hormone.effects.by.prostaglandins..Endocrine.22(3):.249-56.Goetz,.F.W..y.J.A..Bradley..1994..Stimulation.of.in.vitro.ovulation.and.contraction.of.brook.trout.(Salvelinus fontinalis).follicles.by.adrenaline.through.alpha-adrenoreceptors..Journal of Reproduction and Fertility.100(2):.381-385.Jo,.M.,.L.E..Thomas,.S.E..Wheeler.y.T.E..Curry..2004..Membrane.type.1-matrix.metalloproteinase.(MMP)-associated.MMP-2.activation.increases.in.the.rat.ovary.in.response.to.an.ovulatory.dose.of.human.chorionic.gonadotropin. Biology of Reproduction.70:.1024-1032.Ogiwara,.K.,.N..Takano,.M..Shinohara,.M..Murakami.y.T..Takahashi..2005..Gelatinase.A.and.membrane-type.matrix.metalloproteinas-es.1.and.2.are.responsible. for. follicle. rupture.during.ovulation. in. the.medada..Proceedings of the National Academy of Sciences USA.102(24):8442-7.Richards,.J.S..2001..Perspective:.the.ovarian.follicle--a.perspective.in.2001..Endocrinology.142(6):.2184-93.Terranova,.P.F..y.V.M..Rice..1997..Review:.cytokine.involvement.in.ovarian.processes..American Journal of Reproductive Immunology.37(1):.50-63.

BibliografíaAgradecemos.la.ayuda.del.Sr..Antonino.Clemente.(Piscifactoria.de.Bagà,.Barcelona;.Generalitat.de.Catalunya)..Este.estudio.está.financia-do.por.los.proyectos.AGL2009-07006.y.CSD2007-0002.a.JVP.


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Producción de gonadotropinas recombinantes de lenguado Senegalés (Solea senegalensis) para el control de la reproducciónS..Verdura1,.F..Chauvigné1,.Mª.J..Mazón2,.S..Zanuy2,.A..Gómez2.y.J..Cerdà1

1Laboratorio Institut de Recerca i Tecnologia Agroalimentàries (IRTA)-Institut de Ciències del Mar (CSIC), 08003 Barcelona, [email protected] de Acuicultura de Torre la Sal (CSIC), 12595 Ribera de Cabanes, Castellón

AbstractThe.aquaculture.of.Senegalese.sole.is.hampered.by.the.absence.of.methods.to.control.reproduction,.particularly.of.male.fish.reared.in.captivity..Teleost. reproduction. is. regulated.by. the.pituitary.gonadotropins. follicle-stimulating.hormone. (Fsh).and. luteinizing.hormone.(Lh),.but.the.mode.of.action.of.these.hormones.during.Senegalese.sole.spermatogenesis.is.poorly.known..Here,.we.aimed.at.producing.Senegalese. sole. single-chain. recombinant. Fsh. (rFshsc). and. Lh. (rLhsc).. The. cDNAs. encoding. the. recombinant. gonadotropins. were.introduced.into.Chinese.hamster.ovary.(CHO).cells,.and.stably.expressing.clones.were.selected.for.their.production.efficiency..The.rFshsc.and.rLhsc.were.found.to.be.glycosylated.when.released.in.the.culture.medium..Transactivation.assays.using.Senegalese.sole.gonadotropin.receptors.indicated.that.rFshsc.and.rLhsc.are.active.on.their.cognate.receptors.but.also.some.cross.reaction.is.observed..This.preliminary.study.demonstrates.that.CHO.cells.are.useful.systems.for.producing.functional.recombinant.gonadotropins,.and.offers.new.tools.for.the.aquaculture.of.Senegalese.sole.and.the.investigation.of.its.reproductive.endocrinology.

JustificaciónLa. acuicultura. del. lenguado. Senegalés. está. limitada. por. la. imposibilidad. de. controlar. la. reproducción,. particularmente. de. los.machos.criados.en.cautividad,. los.cuales.muestran.una.calidad.del.semen.variable.y.bajas. tasas.de. fertilización..El. lenguado.posee.una.espermatogénesis.semi-cística.cuyo.control.hormonal.es.desconocido..En. teleósteos. las.principales.hormonas.responsables.de.la.gametogénesis.y.la.maduración.sexual.son.las.gonadotropinas,.la.hormona.estimulante.del.folículo.(Fsh).y.la.hormona.luteinizante.(Lh)..Ambas.hormonas.están.compuestas.de.una.subunidad.α.y.una.subunidad.β.específica.para.cada.hormona.(Fshβ.o.Lhβ),.y.ejercen.su. acción. sobre. las. gónadas. a. través. de. receptores. específicos. (Fshr. y. Lhcgr).. Recientemente. hemos. clonado. los. ADNc. de. las. tres.subunidades.de.las.gonadotropinas.de.lenguado.(Cerdà.et al.,.2008),.así.como.sus.receptores.(Chauvigné.et al.,.2010),.lo.cual.permite.el.desarrollo.de.métodos.biotecnológicos.para.el.estudio.y.el.control.de.la.espermatogénesis.en.el.lenguado..En.este.trabajo.se.describe.la.producción.de.Fsh.y.Lh.recombinantes.de.cadena.única.de.lenguado.en.una.línea.celular.de.mamífero.

Material y MétodosSe.transfectaron.células.derivadas.de.ovario.de.hámster.chino.(CHO).con.el.plásmido.pcDNA3.conteniendo.construcciones.en.fase.de.las.subunidades.α.y.β.de.la.Fsh.y.Lh.de.lenguado.sintetizadas.in.vitro..Estas.construcciones.contienen.la.subunidad.β.de.cada.gonadotropina,.una.cola.de.6.histidinas,.el.péptido.C-terminal.(CTP).de.la.hormona.coriónica.humana,.y.la.subunidad.α.(Fig.1A)..Mediante.tratamiento.con.antibiótico.y.ensayos.de.luciferasa.en.células.de.riñón.embrionario.humano.(HEK293).que.expresaban.los.receptores.de.gonadotropinas.de.lubina,.se.seleccionaron.varios.clones.CHO.que.expresaban.de.forma.estable.la.rFshsc.o.rLhsc.de.forma.funcional..Para.la.obtención.y.purificación.de.las.hormonas.recombinantes.los.clones.CHO.se.cultivaron.en.frascos.de.225.cm2.a.29ºC.durante.8-9.días,.seguido.de.cromatografía.de.afinidad.por.niquel.del.medio.de.cultivo..La.producción.de.rFshsc.y.rLhsc.glicosiladas.se.determinó.mediante.Western.blot.en.presencia.o.ausencia.de.PNGase.F,.utilizando.anticuerpos.contra.la.Fsh.y.Lh.de.lubina..La.determinación.de.la.actividad.de.la.rFshsc.y.rLhsc.se.evaluó.en.células.HEK293.que.expresaban.de.forma.transitoria.el.Fshr.o.el.Lhcgr.de.lenguado.

Figura 14(A).Esquema.de.las.construcciones.de.las.hormonas.de.cadena.única..(B-C).Western.blots.del.medio.de.cultivo.de.células.CHO.control.o.transfectadas.con.las.construcciones.de.rFshsc.(B).o.rLhsc.(C)..Carriles:.1,.medio.de.cultivo.intacto;.2,.fracción.eluida.durante.la.carga.de.la.columna.de.cromatografía;.3,.eluido.final.de.la.columna;.4,.eluido.concentrado;.5,.rFshsc.de.lubina;.6,.rFshsc.o.rLhsc.de.lenguado.deglicosiladas;.7,.rLhsc.de.lubina..Flecha:.hormonas.glicosiladas;.cabeza.de.flecha:.hormonas.deglicosiladas..A.la.izquierda.se.indican.los.marcadores.de.peso.molecular.(kDa)..(D-E).Activación.del.Fshr.(D).y.Lhcgr.(E).de.lenguado.en.células.HEK293.con.diluciones.del.eluido.concentrado.conteniendo.rFshsc.y.rLhsc.de.lenguado.

Resultados y DiscusiónEl.análisis.por.Western.blot.demuestra.que. las.células.CHO.pueden.producir. cantidades.suficientes.de. rFshsc. y. rLhsc.de. lenguado.glicosiladas.(Fig..1B.y.C),.las.cuales.activan.de.forma.dosis-dependiente.sus.correspondientes.receptores.específicos.(Fig..1D.y.E)..La.rLhsc.es.capaz.de.activar.también.el.Fshr.de.lenguado.pero.con.menos.potencia.que.la.rFshsc,.lo.que.corrobora.observaciones.anteriores.(Chauvigné.et al.,.2010)..Asimismo,.el.Lhcgr.de.lenguado.parece.activarse.con.rFshsc.(Fig..1E),.aunque.esta.observación.debe.confirmarse.en.próximos.estudios.empleando.dosis.controladas.de.rFshsc..En.conjunto,.estos.resultados.indican.que.las.células.CHO.son.adecuadas.para. la. producción. masiva. de. gonadotropinas. recombinantes. funcionales. de. lenguado. Senegalés.. Estas. hormonas. serán. útiles. para.descifrar.la.regulación.endocrina.de.la.espermatogénesis.en.el.lenguado,.así.como.para.el.control.de.la.diferenciación.y.maduración.sexual.de.esta.especie.en.acuicultura.

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Reproducción

BibliografíaCerdà,.J.,.F..Chauvigné,.M.J..Agulleiro,.E..Marin,.S..Halm,.G..Martínez-Rodríguez.y.F..Prat..2008..Molecular.cloning.of.Senegalese.sole.(Solea.senegalensis). follicle-stimulating.hormone.and. luteinizing.hormone.subunits.and.expression.pattern.during.spermatogenesis..Gen..Comp..Endocrinol..156:470-481.Chauvigné,.F.,.A..Tingaud-Sequeira,.M.J..Agulleiro,.M..Calusinska,.A..Gómez,.R.N..Finn.y.J..Cerdà..2010..Functional.and.evolutionary.analysis.of.flatfish.gonadotropin.receptors.reveals.cladal-.and.lineage-level.divergence.of.the.teleost.glycoprotein.receptor.family..Biol..Reprod..82:1088-1102.

AgradecimientosFinanciado.por.la.Fundación.Ramón.Areces..F.C..está.contratado.en.el.Subprograma.Juan.de.la.Cierva.(MICINN).

Etograma de la reproducción del Lenguado senegalés (Solea senegalensis) (Kaup 1858)I..Carazo1,.I..Martin2,.O..Cherenguini2,.N.J..Duncan1

1IRTA-Sant Carles de la Rápita, Tarragona, Spain. *email: [email protected] Español de Oceanografía (IEO), Barrio de Corbanera, Santander, Spain

Abstract In.the.present.study,.videos.of.Senegalese.sole.(Solea senegalensis).were.analysed.and.described.to.make.a.comprehensive.ethogram.for.sole.behaviour..The.ethogram.was.used.to.describe.and.quantify.the.types.of.behaviours.observed.in.association.with.and.before.spawning.and.during.the.peak.half.hour.of.daily.activity. in. two.typical.groups.of.sole,.wild.fish.that.spawn.successfully.and.G1.fish.that.spawn.unfertilised.eggs..Two.types.of.behaviour,.1).swimming.after.each.other.in.the.period.before.spawning.and.2).the.synchronised.swim.of.two.fish.(male.and.female).to.the.surface.to.spawn,.were.observed.to.only.be.associated.with.the.successful.spawning.by.wild.fish..The.behavioural.profile.from.the.peak.of.activity.when.wild.fish.spawned.was.significantly.different.(P<0.05).from.profiles.from.wild.fish.that.did.not.spawn.and.from.G1.fish.that.spawned.unfertilised.eggs..The.principal.difference.in.the.profiles.was.the.presence.of.swimming.after.each.other.when.wild.fish.spawned.and.the.absence.of.these.behaviours.when.wild.fish.did.not.spawn.and.when.G1.fish.that.spawned.unfertilised.eggs..The.swimming.after.each.other.was.principally.an.action.of.males.in.a.kind.of.competition.before.one.male.became.close.to.the.spawning.female..The.action.of.swimming.after.each.other.appears.to.be.an.essential.behaviour.for.successful.spawning,.which.could.be.use.as.an.indicator.that.predicts.successfully.spawning.

JustificaciónEl.cultivo.del.lenguado.se.encuentra.limitado.por.la.reproducción.debido.a.que.la.generación.F1.de.cultivo.presenta.puestas.irregulares.y.aparentemente.sin. fecundación..En.comparación,. lenguados.salvajes.mantenidos.en.cautividad. tienen.puestas. regulares.de.buena.calidad..Se.ha.observado.la.ausencia.de.comportamiento.reproductivo.en.la.generación.G1..La.descripción.de.los.comportamientos.y.los.pasos.del.cortejo.de.individuos.que.presentan.puestas.fertilizadas.así.como.la.valoración.de.los.comportamientos.previos.a.este.proceso,.es.un.paso.clave.para.descubrir.en.qué.aspectos.falla.la.reproducción.de.la.G1,.y.proponer.soluciones.

Materiales y MétodosEn. el. presente. trabajo. ha. sido. estudiar. el. comportamiento. de. dos. stocks. de. Lenguados. (Solea senegalensis).. Un. grupo. de. peces.salvajes.estabulados.en.cautividad.y.otro.grupo,.generación.G1,.nacida.y.criada.en.cautividad..La.actividad. fue.grabada.con.cámaras.sumergibles.y.con.iluminación.roja.de.baja.intensidad.durante.la.noche..El.sistema.fue.instalado.en.el.IEO.Santander,.se.estabularon.29.animales.en.tanques.de.14m3.con.una.distribución.de.14.hembras.y.15.machos..El.grupo.de.animales.salvajes.presentaba.puestas.frecuentes,. fertilizadas.y.de.alta.calidad. (>100ml.de.huevos.flotantes.con.más.de.75%.de. fertilización)..El.grupo.de.animales.G1. fue.estabulado. en. idénticas. condiciones. y. presentaba. liberaciones. espontáneas. de. huevos. no. fertilizados.. Para. desarrollar. el. etograma.(listado.de.comportamientos).se.utilizaron.las.grabaciones.en.video.y.basándolo.en.observaciones.y.descripciones,.se.descompusieron.las.interacciones.complejas.(comportamientos).de.los.lenguados.a.acciones.que.forman.el.etograma.y.que.son.específicas,.precisas.y.sin.ambigüedad.para.el.observador..Se.utilizo.el.etograma.para.identificar.y.cuantificar.los.tipos.de.comportamiento.de.los.lenguados.en.el.periodo.antes.de.la.puesta.y.durante.media.hora.en.el.pico.de.mayor.actividad.diario.de.los.diferentes.grupos.de.lenguados..Se.comparó.(prueba.de.β2).los.perfiles.de.comportamientos.registrados.durante.en.medio.hora.del.pico.de.actividad.de.5.noches.de.los.salvajes.con.puestas,.5.noches.de.salvajes.sin.puestas.y.5.noches.de.los.lenguados.G1.con.puestas..

Resultados y DiscusiónEl.etograma.incorporo.todos.los.comportamientos.observados.de.los.lenguados.(etograma.no.incluido.por.cuestiones.de.es-pacio).e.incluyó.comportamientos.observados.frecuentemente.e.inclusive.solo.durante.el.cortejo..Comportamientos.frecuen-tes. en. el. cortejo,. fueron:. Q. =. quieto. cuando. el. lenguado. se.mantiene. quieto. y. sin. interacción. con. otras. lenguados;. Qa. =.quieto.con.acciones.sobre.el.lenguado.de.otra.lenguadoN.=.nadar.sin.interacción.con.otras.lenguados,.T.=.temblor.un.acción.del.lenguado.para.esconderse.en.un.el.substrato.(pro-bablemente.un.reflejo).o.rechazar.a.otro.lenguado,.Natación.en.compañía.dividido.en:.Ns.=.nadar.siguiendo.a.otro.lenguado.y.Nsp.=.nadar.seguido.por.otro.lenguado.Ac.=.apoyar.la.cabeza.sobre.otro.lenguado..Comportamiento.que.solo.se.observo.asociado.con.el.cortejo.fue.la.natación.de.dos.lenguados.en.paralelo.hacia.la.superficie.para.la.freza..Solo.se.observó.este.comportamiento.en.el.grupo.de.lenguados.salvajes.en.noches.de.puesta..No.se.observo.este.comportamiento.en.los.lenguados.G1.en.noches.de.puestas.sin.fecundación..Además,.los.perfiles.de.comportamientos.del.pico.de.media.hora.de.actividad.fueron.significativamente.diferen-tes.(p<0.05).(Figura.1).

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Figura 14Perfiles. de. comportamientos. de. lenguados. (solea.senegalensis). salvajes. durante. días. de. puesta,. días. sin. puesta. y.lenguados.G1.en.días.con.puesta.no.fertilizada


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Reproducción

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Hubo.diferencias.entre.salvajes.en.noches.con.puestas,.salvajes.en.noches.sin.puestas.y.G1.noches.con.puestas,.pero.no.hubo.diferencias.entre.salvajes.noches.sin.puestas.y.G1.noches.con.puestas..La.diferencia.principal.fue.la.presencia.de.natación.en.compañía.(N.siguiendo.+. N. seguido. por). en. el. pico. de. actividad. de. un. noches. de. salvajes. con. puesta. comparado. a. la. ausencia. de. este. comportamiento. en.las.noches.de.salvajes.sin.puestas.y.G1.con.puestas..Los.comportamientos.de.natación.en.compañía.se.producen.entre.los.machos.y.parecen.ser.parte.de.una.competición.entre.machos.previos.al.acercamiento.a.la.hembra.para.la.puesta..La.ausencia.de.esta.actividad.en.salvajes.durante.las.noches.sin.puesta.e.inclusive.en.noches.con.puestas.sin.fecundación.de.lenguados.G1.indica.la.enorme.importancia.de.esta.actividad.en.el.éxito.de.la.puesta.para.futuras.investigaciones.en.el.problema.y.para.predecir.la.puesta.exitosa.de.un.grupo.de.lenguados..En.conclusión.se.observó.que.comportamiento.de.nadar.siguiendo.a.otro.lenguado.y.nadar.seguido.por.otro.lenguado.son.comportamientos.asociados.con.una.puesta.exitosa.

AgradecimientosEste.trabajo.no.podría.haber.sido.realizado.sin.la.colaboración.del.IEO.y.su.personal.de.soporte..Así.como.el.personal.de.soporte.y.los.recursos.del.IRTA.Sant.Carles.de.la.Ràpita..El.estudio.fue.financiado.por.Ministerio.de.Agricultura,.Pesca.y.Alimentación.(MAPA)-JACUMAR.Project.Lenguado.y.Instituto.Nacional.de.Investigación.y.Tecnología.Agraria.y.Alimentarías.(INIA)-FEDER.Project.RTA2005-00113..

Uso de la pirosecuenciaciónpara aumentar los recursos genómicos de labase de datos de rodaballo (Scophthalmusmaximus) en gónadas y cerebroL..Ribas1*,.B.G..Pardo2,.C..Fernández2,.J.A..Álvarez-Dios3,A..Gómez-Tato3,..J..Planas4,.P..Martínez2y.F..Piferrer1

1Depto. Recursos Marinos Renovables. Instituto de Ciencias del Mar, CSIC, 08003, Barcelona, Spain. *Email: [email protected]. Genética. Universidad de Santiago de Compostela, 27002, Lugo, Spain3Depto. Matemática Aplicada, Universidad de Santiago de Compostela, 15781, Santiago de Compostela, Spain4Depto. Fisiología, Facultad de Biología, Universidad de Barcelona, Spain

Abstract Turbot.(Scophthalmusmaximus).exhibits.a.marked.sexual.growth.dimorphism.in.favor.of.females.and.thus.aquaculture.is.interested.in.producing.female.populations..Therefore.it.is.important.to.understand.the.process.of.sex.differentiation.in.fish..Last.years,.the.application.of.new.sequencing.technologies.has.provided.an. increase.of.database.resources.for.non-model.species..Here,.we.present.a.454.FLX.Titanium.run.of.turbot.gonadal-.and.brain-derived.RNA.at.different.stages.of.development..More.than.one.million.filtered.sequences.with.and.average.length.of.286.base.pairs.(bp).were.obtained..The.assembly.of.these.sequences.generated.65.472.contigs.with.a.mean.length.of.625,9bp..Almost.half.of.these.contigs.were.annotated.by.using.several.public.resources..In.addition,.a.pilot.oligo-based.microarray.was.built.to.study.turbot.transcriptome.during.gonadal.development..Together,.these.strategies.will.allow.us.to.look.in.more.detail.to.the.genes.involved.in.fish.sex.differentiation..

Justificación En. los. últimos. años. las. nuevas. tecnologías. en. secuenciación. han. permitido. el. estudio. del. genoma. y. el. transcriptoma. de. animales.no.modelo(Vera.et al.,.2008)..La.extensa. información.en.secuencias.de.DNA.obtenida.gracias.a. la.pirosecuenciaciónpermite.estudiar.mecanismos. biológicos. con. un. detalle. antes. no. alcanzado.. El. rodaballo. presenta. un. claro. dimorfismo. sexual. en. animales. adultos,.pudiendo. llegara. ser. las. hembras. casi. el. doble. de. grandes. que. los. machos. (Devauchelleet al.,. 1988).. Esto. afecta. directamente. a. la.acuicultura,. interesada. en. la. obtención. de. un. mayor. número. de. hembras. durante. la. producción. de. los. cultivos. de. esta. especie.. El.conocimiento.y.compresión.de.los.procesos.implicados.en.la.diferenciación.sexual.del.rodaballo.permitirá.alterar.las.proporciones.finales.de.machos.para.la.mejoría.de.la.eficiencia.de.la.producción.piscícola..

Material y Métodos Un.total.de.30.rodaballos.en.diferentes.estadíos.del.desarrollo.gonadal.fueron.usados.para.este.experimento..Los.estadíos.de.diferenciación.y.maduración.gonadal.estaban.comprendidos.entre.90.días.y.3.años.después.de.la.fertilización..Los.rodaballos.fueron.obtenidos.a.través.del. Cluster. Gallego. de. Acuicultura.. Las. gónadas. y. los. cerebros. (junto. con. la. hipófisis). de. los. animales. reproductores. se. extrajeron.cuidadosamente.y.se.congelaron. rápidamente.en.nitrógeno. líquido..Se.extrajo.el.RNA. individualmente.y.se.hizo.una.mezcla.con. las.muestras.de.manera.proporcional.para.obtener.un.mayor.número.de.genes.implicados.en.la.diferenciación.gonadal.(70%.gónadas-30%.cerebros-hipófisis)..La.secuenciación.se.hizo.en.el.Parque.Científico.de.Barcelona.y.se.utilizó.un.placa.y.cuarto.(2.¼.PTP.regiones).en.un.secuenciador.454.FLX.Titanium.de.Roche..Antes.de.la.carrera.el.RNA.se.normalizó.(Evrogen).para.aumentar.la.probabilidad.de.obtener.nuevos.genes.y.disminuir.la.representación.de.los.tránscritos.abundantes..Para.la.preparación.de.la.librería.y.el.emulsionado.de.secuenciación.se.siguieron.los.protocoles.de.la.casa.comercial.(Roche)..El.ensamblaje.de.las.secuencias.se.hizo.mediante.MIRA.V3.2.y.para.la.anotación.se.utilizó.el.programa.AutoFact,.que.permite.usar.las.bases.de.datos.públicas:.UniRef90,.KEGG,.PFam..Para.el.estudio.de.la.expresión.génica.se.diseñaron.los.oligos.y.se.imprimieron.las.plataformas.siguiendo.los.procedimientos.de.la.casa.comercial,.AgilentBiotechnologies..Los.microarrays.se.hibridaron.con.el.mismo.RNA.usado.para.la.carrera.de.454.y.se.usaron.dos.chips.como.estudio.de.un.replicado.técnico..

Resultados y Discusión Gracias.a.la.técnica.de.pirosecuenciación.se.obtuvieron.un.total.de.1.191.866.secuencias.filtradas.procedentes.del.eje.cerebro-hipófisis-gonada.de.rodaballo..Estas.secuencias.se.ensamblaron.en.65.472.contigs..Los.resultados.estadísticos.de.la.carrera.se.muestran.en.la.Tabla.1..La.mitad.de.estos.contigstuvieron.un.tamaño.de.más.de.750.pb.y.un.25%.un.tamaño.de.1.217.pb..La.cobertura.de.la.carrera.fue.óptima.ya.que.cada.contig.tuvo.como.promedio.una.secuenciaciónde.4.6.veces,.con.una.desviación.de.11.7..Casi.la.mitad.de.los.contigs.se.pudieron.anotar.(23.686)..Se.identificaron.más.de.1.500.secuencias.con.una.función.directa.o.indirectamente.relacionada.con.el.sistema.reproductivo..La.mayoría.de.estos.genes.se.secuenciaron.en.rodaballo.por.primera.vez.incrementando.así.la.base.de.datos.de.rodaballo..La.hibridación.del.microarray.de.filtrado.generó.una.alta.expresión.en.un.75%.de.los.oligos.imprimidos.en.la.plataforma..La.implantación.de.las.técnicas.de.secuenciación.ha.sido.muy.beneficiosa.para.la.genómica.de.las.especies.de.cultivo.en.la.acuicultura..Tal.y.como.se.muestra.en.este.estudio,.una.sola.carrera.de.454.FLX.Titanium.ha.generado.un.incremento.de.miles.de.secuencias.disponibles.en.las.bases.de.datos.de.rodaballo..Esto.ha.permitido.identificar.un.número.substancial.de.genes.implicados.en.la.reproducción.y.en.otras. categorías. funcionales.. Esta. lista. de. genes. puede. verse. incrementada. con. una. mejora. futura. de. la. anotación,. donde. mayores.esfuerzos.son.todavía.requeridos.(Koskiet al.,.2005)..Poder.clasificar.los.genes.obtenidos.por.su.función.transcriptómica.y.estudiar.su.expresión.génica.es.sin.duda.fundamental.para.extraer.el.máximo.rendimiento.de.la.pirosecuenciación..El.descubrimiento.de.nuevos.genes.relacionados.con.la.diferenciación.gonadal.del.rodaballo.y.con.el.funcionamiento.del.eje.hipofisario-gonadal.permitirá.entender.mejor.los.mecanismos.implicados.en.la.reproducción..Este.conocimiento.contribuirá.a.la.base.científica.necesaria.para.poder.controlar.la.reproducción.del.rodaballo.en.cautividad,.por.ejemplo,.mediante.el.aumento.del.número.de.hembras.


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Identificación de un periodo fotosensible a la luz continua para reducir la precocidad en machos juveniles de lubina (Dicentrarchus labrax) R..Rodríguez1,.A..Felip1,.V..Cerqueira2,.E..Hala3,.S..Zanuy1.y.M..Carrillo1

1Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC), Instituto de Acuicultura de Torre de la Sal, 12595 Ribera de Cabanes, Castellón, Spain. E-mail: [email protected] Federal de Santa Catarina CCA, Departamento de Aqüicultura, CP, Centro de Ciencias Agrarias-Departamento de Aqüicultura, Caixa Postal 474, Florianópolis 88040.900, Santa Catarina, Brasil3Agricultural University of Tirana Faculty of Agriculture and Environment Department of Animal Production Kamez, Tirana, Albania

AbstractThe. objective. of. this. study. was. to. identify. a. photolabile. period. (PP). to. continuous. light. (LL). exposure. by. analyzing. the. levels. of.11-ketotestosterone. (11-KT),. the. rates. of. testicular. maturation. and. spermiation. in. juveniles. male. sea. bass.. Two. trials. (T1,. T2). were.organized:.T1;.LL.all.year.round.(G1LL);.LL.during.August-September.(G2LL),.LL.September-October.(G3LL),.LL.October-November.(G4LL),.in.otherwise.simulated.natural.photoperiod.(SNP),.respectively.and.SNP.all.the.time.(G5SNP)..G2LL.was.the.most.efficient.treatment.to.reduce. early. puberty.. Thus,. the. period. August-September. was. re-screened. to. refine. the. location. of. the. PP. and. six. treatments. were.organized.in.T2:.LL.all.the.time.(G1LL);.LL.during.August-September.(G2AS),.LL.during.August.(G3AA);.LL.from.15August.to.15September.(G415AS),.LL.during.September.(G5SS).in.otherwise.SNP,.respectively.and.SNP.all.year.round.(G6SNP)..Our.results.demonstrate.that.the.G5SS.(September).was.the.most.effective.treatment.to.reduce.the.levels.of.11-KT,.the.rates.of.advanced.stages.of.maturation.and.the.rates.of.spermiating.males.and.consequently.early.puberty.in.male.sea.bass..

JustificaciónBajo.condiciones.de.cultivo.intensivo,.la.proporción.de.machos.respecto.a.de.hembras.en.la.lubina.suele.ser.de.3:1..De.estos.machos,.entre.un.20-30%.maduran.prematuramente.al.primer.año.de.vida.(Carrillo.et al.,.1995)..Se.sabe.que.el.régimen.de.luz.bajo.el.cual.están.los.animales.es.una.herramienta.eficaz.para.reducir.la.maduración.precoz.en.esta.especie..Estudios.previos.han.demostrado.que.la.luz.continua.(LL).aplicada.durante.todo.el.año.(Begtashi.et al.,.2004).o.durante.la.pregametogénesis.(4.meses).o.gametogénesis.(6.meses).(Felip.et al.,.2008).es.capaz.de.reducir.la.precocidad.en.los.machos.de.lubina.a.menos.de.un.3%..Sin.embargo,.periodos.largos.de.LL.provocan.estrés.en.los.peces,.que.los.hace.más.vulnerables.a.enfermedades.(M..Carrillo,.comunicación.personal)..Por.ello,.es.preciso.encontrar.periodos.fotosensibles.de.menor.duración.que.reduzcan.la.precocidad.y.preserven.el.bienestar.de.los.animales..Felip.et al..(2008).vieron.que.en.lubina.había.un.periodo.fotosensible,.entre.Agosto.y.Noviembre,.donde.incidir.para.reducir.la.precocidad..El.presente.estudio.pretende.rastrear.este.periodo.fotosensible.para.acotar.el.intervalo.de.tiempo.sugerido.por.estos.autores.y.reducir.la.precocidad.en.esta.especie.

Materiales y MétodosDistintos.tratamientos.de.LL.se.aplicaron.a.machos.juveniles.de.lubina.coincidiendo.con.la.etapa.de.pregametogénesis..Se.realizaron.dos.experimentos:.Experimento.1,.cuatrocientos.peces.con.un.peso.medio.de.4,5.g.distribuidos.en.5.tanques.de.2000-l.y.bajo.los.siguientes.regímenes.de.luz:.LL.constante.durante.toda.la.experiencia.o.control.negativo.(G1LL),.LL.desde.1.Agosto.hasta.30.Septiembre.(G2AS),.LL.desde.1.Septiembre.hasta.30.Octubre.(G3SO),.LL.desde.1.Octubre.hasta.30.Noviembre.(G4ON).y.fotoperiodo.natural.simulado.o.control.positivo.(SNP);.Experimento.2,.Tres.mil.peces.con.un.peso.medio.de.4,0.g,.distribuidos.en.12.tanques.de.2000-l.cada.uno,.a.los.que.se.aplicaron.seis.regímenes.fotoperiódicos.por.duplicado:.LL.o.control.negativo.(G1LL),.LL.desde.1.Agosto.hasta.30.Septiembre.(G2AS),.LL.desde.1.Agosto.hasta.30.Agosto.(G3AA),.LL.desde.15.Agosto.hasta.15.Septiembre.(G415AS),.LL.desde.1.Septiembre.hasta.30.Septiembre.(G5SS).y.SNP.(G6SNP)..Los.animales.se.muestrearon.mensualmente.y.previa.anestesia.se.procedió.a.tomar.los.valores.de.longitud.y.de.peso.y.se.efectuó.un.masaje.abdominal.para.estimar.la.tasa.total.de.espermiación..Durante.los.meses.de.Febrero.y.Marzo.se.sacrificaron.entre.16-20.peces/grupo.y.experimento,.a.los.cuales.se.les.extrajo.muestras.de.sangre.para.determinar.los.niveles.plasmáticos.de.11-KT.y.las.gónadas.para.calcular.el.índice.gonadosomático.(IGS).y.analizar.su.estado.de.desarrollo.gonadal.mediante.técnicas.histológicas.convencionales..

Resultados y discusiónEn.el.T1,.después.del.tratamiento.G1LL,.el.G2AS.fue.el.grupo.que.registró.los.valores.más.bajos.en.porcentaje.de.fluyentes.(4,34%),.individuos.en.estados.avanzados. IV.y.V. (2,70%),. IGS. (0,09%).y.11-KT.(0,46.ng/ml)..Los.valores.más.altos.se.registraron.en.el.SNP.(Tabla.1)..Estos.resultados.demuestran.que.el.intervalo.Agosto-Septiembre,.es.el.más.sensible.a.la.LL,.por.lo.cual.se.eligió.este.periodo.para.realizar.

O-042

Bibliografía Devauchelle.N.,.J.C..Alexandre,.N..Lecorre.y.Y..Letty..1988..Spawing.of.turbot.(Scophthalmusmaximus).in.captivity..Aquaculture.69:.159-184.Koski,. L.B.,. M.W.. Gray,. B.F.. Lang. yG.. Burger.. 2005.. AutoFACT:. An. (Auto)under-barmatic. (F)under-barunctional. (A)under-barnnotation. and. (C)under-barlassification.(T)under-barool»..BMC Bioinformatics.6:151.Vera,.J.,.C.Wheat,.H..Fescemyer,.M..Frilander,.D.Crawford,.I.Hanski.y.J.Marden.et. .. 2008.. Rapid. transcriptome. characterization. for. a. nonmodel. organism.using.454.pyrosequencing..Molecular Ecology.17:.1636-1647.

AgradecimientosEsta. investigación. ha. sido. posible. gracias. a. la. financiación. del. proyecto.Consolider.Aquagenomics.(CDS2007-002).otorgada.a.FP.

Resultados de la carrera 454 de rodaballo

Parámetros Valores

Regiones.PTP. 2.1/4Total.secuenciasfiltradas 1.191.866Total.megabases.(Mb) 341,2Tamaño.total.en.contigs.(Mb) 41Número.de.contigs 65.472Número.de.contigs>500.bp 32.612N25 1.217N50 748N75 482Promedio.de.los.contigs.(bp) 625,9Mediana.de.los.contigs.(bp) 499Moda.de.los.contigs.(bp) 365Contigmásllargo.(bp) 5000Contigmáscorto.(bp) 40


Xxxxxxxxx y Xxxxxxxxx

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el.T2..En.el.T2,.el.grupo.más.afectado.por.la.LL.fue.el.G1LL,.seguido.del.G2AS..Sin.embargo,.dentro.del.periodo.Agosto-Septiembre,.el.régimen.de.LL,.más.sensible.fue.el.G5SS.cuyo.porcentaje.de.individuos.en.estados.avanzados.IV.y.V.(10,70%),.IGS.(0,05%).y.niveles.de.11-KT.(0,43.ng/ml).fueron.los.más.bajos.respecto.al.SNP.que.registró.los.valores.más.altos..El.resto.de.los.grupos.mostraron.valores.similares.o.algo.más.elevados.que. los.del.grupo.G5SS.(Tabla.1)..Estos.resultados.demuestran.que.existe.un.periodo. fotosensible.en.Septiembre,.donde.los.principales.indicadores.de.maduración.evaluados.se.ven.notablemente.disminuidos.con.respecto.al.SNP..Por.otro.lado,.los.niveles.bajos.de.11-KT.observados.en.los.grupos.más.sensibles.a.LL,.apoyan.la.hipótesis.de.que.la.LL.tiene.un.efecto.inhibitorio.sobre.la.11-KT,.hormona.clave.en.el.proceso.de.la.maduración.gonadal.en.peces.(Miura.et al..1991).

Tabla 14Porcentaje total de machos fluyentes y en estados avanzados IV y V durante Febrero y Marzo, índice gonadosomático (IGS) y niveles plasmáticos de 11-KT en Febrero, de los distintos grupos experimentales (Experimentos 1 y 2). Letras diferentes indican diferencias significativas entre grupos (P<0,05)

IndicadoresMaduración

sexual

GRUPOS

EXPERIMENTO 1 EXPERIMENTO 2

G1LL G2AS G3SO G4ON G5SNP G1LL G2AS G5SS G415AS G3AA G6SNP

% fluyentes 0,00b 4,34b 2,17ab 6,47a 16,7a 0,00a 0,60ab 1,50ab 1,80ab 1,10ab 6,60ab

% estado IV y V 2,50 2,7.b 18,42b 28,95ab 30,43a 0,00 17,20 10,70 12,50 22,70 26,10

% IGS 0,05±0,01b 0,09±0,01b 0,24±0,11a 0,22±0,08b 0,69±0,24a 0,03±0,02a 0,04±0,03ab 0,05±0,01ab 0,04±0,02a 0,09±0,01b 0,05±0,01a

11-KT (ng/ml) 0,71±0,08ab 0,46±0,05b 1,10±0,18a 0,95±0,11a 1,05±0,2a 0,34±0,06b 0,33±0,12b 0,43±0,14b 0,59±0,16ab 0,65±0,04ab 0,98±0,18a

Bibliografía Begtashi.I.,.L..Rodríguez,.G..Molés,.S..Zanuy.y.M..Carrillo..2004..Long-term.exposure.to.continuous.light.inhibits.precocity.in.juvenile.male.European.sea.bass.(Dicentrarchus labrax,.L.)..I..Morphological.aspects..Aquaculture.241:.539–559.Carrillo.M.,.S..Zanuy,.F..Prat,.J..Cerdá,.J..Ramos,.E..Mañanós.y.N..Bromage..1995..Sea.bass.(Dicentrarchus labrax)..En:.Bromage,.NR,.Roberts.RJ.(eds).Broodstock Management and Egg and Larval Quality..Blackwell.Science,.Oxford,.UK..138–168.Felip.A.,.S..Zanuy,.B..Muriach,.JM..Cerdá-Reverter.y.M..Carrillo..2008..Reduction.of.sexual.maturation.in.male.Dicentrarchus labrax.by.continuous.light.both.before.and.during.gametogenesis..Aquaculture.275:.347–355..Miura. T.,. K.. Yamauchi,. H.. Takahashi. y. Y.. Nagahama.. 1991.. Hormonal. induction. of. all. stages. of. spermatogenesis. in. vitro. in. the. male.Japanese.eel.(Anguilla japonica)..Proc. Natl. Acad. Sci..USA.88:.5774–5778.

AgradecimientosFinanciado.por.el.proyecto.de.la.UE.No..Q5R5-2002-01801.(PUBERTIMING);.MICINN.(AGL2006-04672).y.CONSOLIDER.(CSD2007-002).y.GV.(PROMETEO/2010/003)..R.R..disfrutó.de.una.beca.del.MICINN..

La relación entre crecimiento y diferenciación sexual en la lubina (Dicentrarchus labrax) y su aplicación en acuiculturaN..Díaz1,.L..Ribas1.y.F..Piferrer1.1 Institut de Ciències del Mar, CSIC, Barcelona. [email protected]

Abstract Sexual.growth.dimorphism.in.favor.of.females.is.predominant.in.fishes..The.European.sea.bass.is.a.gonochoristic.species.with.a.polygenic.sex.determination.influenced.by.temperature..However,.the.relationship.between.growth.and.sex.differentiation,.especially.in.the.absence.of.temperature.effects,.is.still.unclear..Studies.with.other.several.gonochoristic.species.have.shown.an.association.between.early.growth.and.final.sex,.but.the.details.of.such.relationship.is.still.unknown..Our.current.research.attempts.to.clarify.the.molecular.basis.of.the.association.between.growth.and.sex.differentiation.in.this.economically.important.species.for.which.the.control.of.sex.ratios.in.aquaculture.is.very.important..

Justificación La.lubina.(Dicentrarchus labrax).es.una.especie.gonocorista.con.una.determinación.del.sexo.poligénica.(Vandeputte.et.al.,.2007).influida.por.la.temperatura.(Piferrer.et.al.,.2005)..Temperaturas.4ºC.por.encima.del.rango.natural,.provocan.una.masculinización.de.~50%.de.las.hembras.genéticas..Sin.embargo,.el.mecanismo.que.une.temperatura,.crecimiento.y.sexo.fenotípico.final.permanece.sin.conocerse..Como.sucede.en.muchas.otras.especies.de.peces,.el.dimorfismo.sexual.por.crecimiento.está.presente.en.la.lubina,.siendo.las.hembras.el.sexo.de.mayor.tamaño.(incremento.fecundidad;.Parker.et.al.1992),.Tabla.1.

Tabla 14Dimorfismo.sexual.de.crecimiento.(SGD,.según.las.siglas.en.inglés).en.la.lubina,.representado.por.las.diferencias.en.peso.(g).a.favor.de.las.hembras..SGD.=.Sm/Sh,.Sm.es.el.tamaño.de.los.machos.y.Sh.el.de.las.hembras.

Edad (meses) SGD Referencias

10 0.60,.0.74,.0.91.(machos.inmaduros,.maduros,.fluyentes,.respectivamente) Papadaki.et.al.,.2005

10 0.89 Pavlidis.et.al.,.2000

11 0.64 Blázquez.et.al.,.1999

12 0.73 Navarro-Martín.et.al.,.2009c

15 0.83 Blázquez.et.al.,.1999

33 0.75 Saillant.et.al.,.2001

45 0.69 Saillant.et.al.,.2001

11 0.85 Díaz,.Ribas.y.Piferrer,.sin.publicar

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54

Reproducción

Material y MétodosSe.llevaron.a.cabo.dos.experimentos.para.estudiar.la.relación.entre.el.crecimiento.temprano.y.la.diferenciación.en.peces.con.la.lubina.como.modelo..En.el.experimento.1.se.buscó.examinar.los.efectos.de.la.alteración.de.las.tasas.de.crecimiento.en.tres.puntos.claves.de.la.diferenciación.sexual.(8-12.cm.de.longitud.estándar,.SL).sin.separación.previa.por.tallas..Se.formaron.4.grupos.experimentales:.R,.grupo.control.siempre.alimentado.ad libitum,.y.L1,.L2.y.L3.grupos.que.padecieron.una.restricción.de.la.dieta,.al.inicio,.a.la.mitad.y.al.final.del.periodo.de.diferenciación.sexual,.respectivamente.(Fig.1)..Por.otro.lado,.en.el.experimento.2.se.buscó.examinar.dichos.efectos.tras.una.criba.por.talla,.dónde.los.peces.fueron.divididos.en.3.grupos.experimentales.según.su.tasa.de.crecimiento.(rápido,.R;.medio,.M.y.lento,.L;.Fig.1)..La.ingesta.fue.monitorizada.y.las.dosis.ajustadas.semanalmente.para.el.control.de.las.tasas.de.crecimiento..Se.realizaron.biometrías.periódicas,.así.como.extracción.de.muestras.para.el.posterior.análisis.hormonal,.de.expresión.génica.mediante.microarray.e.histológico.(estado.de.maduración.gónada).

Figura 14Diseño.experimental.de. la.relación.de.crecimiento. y. diferenciación. sexual.. Izquierda,.experimento. 1. de. restricción. de. dieta;. Derecha,.experimento.2.con.distintas.tasas.de.crecimiento.

Resultados y Discusión Los.resultados.del.Experimento.1.muestran.cómo.la.proporción.final.de.sexos.de.la.población.no.se.vio.afectada.(60-69%.de.machos).por.el.crecimiento.durante.el.periodo.de.diferenciación.sexual.a.pesar.de.existir.diferencias.significativas.(P<0.05).en.talla.y.peso.entre.los.grupos..Por.otro.lado,.al.partir.de.una.población.cribada.por.talla.a.edad.temprana.(Experimento.2).se.observó.que.la.proporción.de.sexos.estaba.totalmente.decidida.antes.de.la.formación.de.los.grupos.(diferencias.entre.los.grupos.R.y.L)..Así.mismo,.resultados.preliminares.del.análisis.de.la.expresión.génica.por.microarray.entre.machos.a.tiempo.2.(final.del.experimento;.gónadas.diferenciadas.en.testículo).mostraron.cómo.genes.de.importancia.crucial.en.reproducción.están.diferencialmente.expresados.según.la.tasa.de.crecimiento,.como.sucede. con. la. hormona. anti-Mülleriana,.el. factor. de. transcripción.dmrt1. o. la. enzima. esteroidogénica.aromatasa. (cyp19a).. Podemos.concluir.que.la.proporción.de.sexos.de.la.población.se.establece.mucho.antes.de.los.primeros.signos.visibles.de.la.diferenciación.sexual.en.lubina.y.que.no.están.afectados.de.forma.significativa.por.la.tasa.de.crecimiento.durante.dicho.periodo,.aunque.es.observable.a.nivel.de.expresión..

Bibliografía Blázquez.M.,.M..Carrillo,.S..Zanuy.y.F..Piferrer..1999..Sex.ratios.in.offspring.of.sex-reversed.sea.bass.and.the.relationship.between.growth.and.sex.differentiation..Journal Fish Biology..55:.916-930.Navarro-Martín.L.,.M..Blázquez,.J..Viñas,.S..Joly.y.F..Piferrer..2009c..Balancing.the.effects.of.rearing.at.low.temperature.during.early.development.on.sex.ratios,.growth.and.maturation.in.the.European.sea.bass.(Dicentrarchus labrax)..Aquaculture..296:.347-358..Papadaki.M.,.F..Piferrer,.S..Zanuy,.E..Maingot,.P..Divanach.y.CC..Mylonas..2005..Growth,.sex.differentiation.and.gonad.and.plasma.levels.of.sex.steroids.in.male-.and.female-dominant.populations.of.Dicentrarchus labrax.obtained.through.repeated.size.grading..Journal Fish Biology..66:.938-956.Parker.GA..1992..The.evolution.of.sexual.size.dimorphism.in.fish..Journal Fish Biology..41(B):.1-20.Pavlidis. M.,. G.. Koumoundouros,. A.. Sterioti,. S.. Somarakis,. P.. Divanach. y. M.. Kentouri.. 2000.. Evidence. of. temperature-dependent. sex.determination.in.the.European.sea.bass.(Dicentrarchus labrax)..Journal of Experimental Zoology..287:.225-232.Piferrer.F.,.M..Blázquez,.L..Navarro-Martín.y.A..González..2005..Genetic,.endocrine,.and.environmental.components.of.sex.determination.and.differentiation.in.the.European.sea.bass.(Dicentrarchus labrax.L.)..General and Comparative Endocrinology..142:.102-110.Saillant.E.,.A..Fostier,.B..Menua,.P..Haffrayd.y.B..Chatain..2001..Sexual.growth.dimorphism.in.sea.bass.Dicentrarchus labrax..Aquaculture..202:.371-387.Vandeputte.M.,.M..Dupont-Nivet,.H..Chavanne.y.B..Chatain..2007..A.polygenic.hypothesis.for.sex.determination.in.the.European.sea.bass.(Dicentrarchus labrax)..Genetic..176:.1049-1057.

AgradecimientosEsta. investigación.ha.sido.financiada.gracias.a.una.beca.FPI. (BES-2007-14273).del.Ministerio.Español.de.Ciencia.otorgada.a.N.D..así.como.a.los.proyectos.SexGene.(AGL2006-01359).y.Consolider.Aquagenomics.(CDS2007-002).concedidos.a.F.P..También.dar.las.gracias.a.M..Blázquez,.J..Viñas,.L..Navarro.y.S..Joly.por.su.inestimable.ayuda.en.diferentes.aspectos.de.este.trabajo..

Efectos de la restricción calórica sobre el inicio de la pubertad y la calidad del esperma en la lubina europea (Dicentrarchus labrax)S..Escobar1,.M..Salah2,.A..Felip1,.S..Zanuy1.y.M..Carrillo1*.1Instituto de Acuicultura Torre de la Sal, Consejo Superior de Investigaciones Científicas. 12595 Ribera de Cabanes, Castellón. Spain. E-mail: [email protected] Fishfarm, 11 Bis Rue Cheikh Mohamed Naifer 2036, Sokra Tunisie

AbstractThis.study.reports.the.effects.induced.by.a.long.fasting.protocol.on.the.reproductive.performance.of.male.sea.bass.during.the.first.re-productive.season..Two.different.treatments.of.food.deprivation.were.carried.out.from.July.to.March,.one.feed.1/4.and.1/8.of.the.ration.given.to.the.control.group..Both.restricted.feed.regimes.resulted.in.a.deep.impact.over.the.weight,.length.and.growth.rate.indexes..Both.restricted.and.controls.had.similar.gonadosomatic.index.values.in.November..Moreover,.the.histological.analysis.revealed.the.presence.of.a.high.number.of.death.cell.bodies.in.testis.of.animals.kept.under.both.restricted.feed.regimes..Furthermore,.we.evaluated.the.sperm.quality.along.the.reproductive.season.and.it.was.shown.that.a.long-term.fasting.affects.sperm.quality.parameters.such.as,.density.and.quantity.although.no.differences.were.observed.in.motility..Additionally,.no.statically.differences.in.11KT.plasma.levels.were.observed.among.experimental.groups..Our.study.evidences.that.a.shortage.on.energy.store.is.not.enough.to.abolish.partially.or.totally.the.puberty.onset.of.prepubertal.male.sea.bass.

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Reproducción

JustificaciónLa.lubina.Europea.Dicentrarchus labrax es.una.de.las.especies.marinas.que.más.se.cultiva.de.forma.intensiva.en.Europa,.particularmente.en.las.costas.Mediterráneas..No.obstante,.el.control.de.la.pubertad.precoz.de.los.machos.sigue.siendo.un.reto.para.las.empresas.acuí-colas..En.condiciones.naturales.el.macho.de.lubina.alcanza.la.pubertad.al.segundo.año.de.vida.y.la.hembra.al.tercero.(Carrillo.et al.,.1995)..Sin.embargo,.bajo.condiciones.de.cultivo.intensivo,.donde.las.proporciones.de.sexo.son.de.3:1.a.favor.de.los.machos,.el.20-30%.de.estos.machos.maduran.durante.el.primer.año.de.vida.afectando.al.crecimiento.somático.durante.el.segundo.año.(Felip.et al.,.2006)..En.peces.cultivados.la.pubertad.adelantada.(precocidad).es.uno.de.los.principales.problemas.que.afronta.la.industria.(Taranger.et al.,.2009)..Hay.evidencias.en.varias.especies.que.demuestran.que.la.pubertad.precoz.impide.que.se.alcance.la.talla.comercial.a.su.debido.tiempo.e.incrementa.la.sensibilidad.a.enfermedades,.traduciéndose.en.una.baja.rentabilidad.del.producto..Una.solución.posible.sería.tener.la.capacidad.de.eliminar.la.precocidad.o.inducir.un.retraso.temporal.en.su.aparición.(Carrillo.et.al.,.2009)..El.tamaño.y.estado.nutricional.de.los.peces.es.uno.de.los.desencadenantes.cruciales.de.la.pubertad.de.manera.que.los.individuos.deben.alcanzar.una.talla.y.un.acúmulo.de.reservas.mínimo.para.que.este.proceso.se.inicie..En.la.lubina,.la.ingesta.máxima.de.alimento.se.realiza.entre.Septiembre-Noviembre,.mientras.que.los.valores.mínimos.se.registran.durante.el.periodo.de.reproducción.(Diciembre-Marzo).(Zanuy.y.Carrillo,.1985)..Dado.el.gran.papel.que.puede.ejercer.el.estado.nutricional.sobre.la.capacidad.reproductiva.del.individuo,.este.estudio.pretende.valorar.los.efectos.de.la.restricción.calórica.sobre.el.inicio.y.desarrollo.de.la.gametogénesis.en.machos.pre-púberes.de.lubina..

Material y MétodosTrescientos.machos.prepúberes.de.lubina.(127,64.±.0,5.g,.21,74.±.0,03.cm).se.distribuyeron.en.seis.tanques.de.500-l,.bajo.condiciones.naturales. de. temperatura. y. fotoperiodo,. desde. Julio. a. Marzo.. Éstos. se. mantuvieron. a. tres. regímenes. diferentes. de. alimentación:. a.saciedad.aparente.(control;.C).o.restringido.1/4.y.1/8.de.la.ración.del.control.(1/4C.y.1/8C)..Los.peces.se.pesaron.y.midieron.mensualmente.y. se. calculó. el. factor. de. condición. (FC),. la. tasa. instantánea. de. crecimiento. en. peso. y. talla,. y. algunos. índices. corporales. como. el.gonadosomático.(IGS),.hepatosomático.(IHS),.de.grasa.perisvisceral.(IGVS).y.de.carcasa.(IC)..Se.extrajo.sangre.y.gónadas.para.análisis.hormonales.e.histológicos,.respectivamente..El.número.de.cuerpos.apoptóticos.se.determinó.en.12.superficies.estándar.de.50m2,.en.secciones.testiculares.de.3.m.de.espesor,.por.animal.y.en.32.ejemplares.del.mes.de.Noviembre..La.calidad.del.esperma.se.determinó.entre.Diciembre-Marzo.mediante.un.sistema.computerizado.(Integrated.Semen.Analysis.System,.PROISER.R+D,.Buñol,.Valencia,.Spain).usado.previamente.en.esta.especie.(Felip.et al.,.2006).

Resultados y Discusión Los.resultados.demuestran.que.en.machos.prepúberes.de.lubina.la.restricción.calórica.reduce.significativamente.el.crecimiento.en.peso.y.talla,.así.como.los.índices.asociados.a.ellos.y.a.los.niveles.de.grasa.perisvisceral..Los.efectos.fueron.más.drásticos.en.aquellos.animales.mantenidos.a.1/8C.(resultados.no.mostrados)..Sin.embargo,.aunque.la.tendencia.del.IGS.de.1/4C.y.1/8C.fue.la.de.mostrar.valores.más.bajos.que.en.los.controles.(1/4C=0.54%;.1/8C=0.45%;.C=0.7%),.los.parámetros.relacionados.con.la.calidad.del.esperma,.como.la.concen-tración.y.el.volumen.del.mismo,.difirieron.significativamente.según.el.régimen.alimenticio.que.por.otra.parte,.no.afectó.a.la.motilidad.espermática.(resultados.no.mostrados)..Además,.los.animales.sometidos.a.restricción.calórica.exhibieron.un.incremento.de.la.apoptosis.testicular.(Fig..1A)..Ello.estuvo.relacionado.directamente.con.el.número.de.células.germinales.producidas,.sugiriendo.por.tanto.que.la.restricción.calórica.no.inhibe.la.pubertad,.pero.disminuye.la.densidad.espermática.(Fig..1B)..Además,.los.tratamientos.alteraron.los.pa-trones.del.ciclo.madurativo,.tanto.en.su.amplitud.como.en.su.duración,.mostrando.un.retraso.en.la.aparición.del.volumen.espermático.máximo.que.fue.más.elevado.y.duradero.en.los.grupos.experimentales.(Fig..1C)..

Figura 1..Nº.de.cuerpos.apoptóticos.(A).y.evolución.de.la.concentración.(B).y.volumen.del.esperma.(C).en.machos.prepúberes.de.lubina.mantenidos.a.restricción.calórica.(1/4C.y.1/8C).y.a.saciedad.aparente.(C).de.Julio.a.Marzo.durante.el.periodo.reproductivo..Diferentes.letras.indican.diferencias.significativas.(P.<.0,05).a.lo.largo.del.tiempo.para.un.mismo.grupo.

BibliografíaCarrillo.M.,.S..Zanuy,.F..Prat,.J..Cerdá,.E..Mañanós.y.N..Bromage..1995..Sea.bass.(Dicentrarchus labrax)..En:.Bromage.NR,.Roberts.RJ.(eds).Broostock Management and Egg and Larval Quality..Blackwell.Science,.Oxford,.UK..138–168.Carrillo.M.,.S..Zanuy,.A..Felip,.M.J..Bayarri,.G.Molés.A..Gómez..2009..Hormonal.and.environmental.control.of.puberty.in.perciform.fish..The.Case.of.Sea.Bass..Trends in Comparative Endocrinology and Neurobiology: Annals of the New York Academic of Sciences..1163:.49–59..Felip.A.,.S..Zanuy.y.M..Carrillo,.M..2006..Comparative.analysis.of.growth.performance.and.sperm.motility.between.precocious.and.non-precocious.males.in.the.European.sea.bass.(Dicentrarchus labrax.L.)..Aquaculture 256.(1-4):.570-578.Taranger,.G.L.,.M..Carrillo,.R.W..Schulz.,.P..Fontaine,.S..Zanuy,.A..Felip,.F.A..Weltzien,.S..Dufour,.Ø..Karlsen,.B..Norberg,.E..Andersson.y.T..Hansen..2009..Control.of.puberty.in.farmed.fish..Gen..Comp..Endocrinol..165:.483-515Zanuy,.S..y.M..Carrillo..1985..Annual.cycles.of.growth,.feeding.rate,.gross.conversion.efficiency.and.hematocrit.levels.of.sea.bass.(Dicen-trarchus labrax L.).adapted.to.two.different.osmotic.media..Aquaculture.44:.11-25.

AgradecimientosProyecto.Europeo.LIFECYCLE.(FP7-222719-1).y.Generalitat.Valenciana.(PROMETEO/2010/003)..S.E..disfrutó.de.una.beca.JAE-Predoc.CSIC.y.M.S..disfrutó.de.una.beca.CIHEAM..


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Reproducción

Efectos de la castración y administración de esteroides sexuales sobre la regulación del sistema kisspeptina en el hipotálamo de lubinas adultas (Dicentrarchus labrax L.)M.V..Alvarado,.G..Molés,.M..Carrillo.y.A..Felip.Instituto Acuicultura Torre de la Sal (IATS), Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC), Ribera de Cabanes, 12595, Castellón. e-mail: [email protected]

AbstractThe.existente.of.two.different.kiss.and.gpr54.genes,.whose.products.probably.play.a.critical.role.in.the.regulation.of.the.gonadotropic.axis,.has.been.reported.in.sea.bass.(Dicentrarchus labrax L.)..To.test.the.hypothesis.that.sex.steroids.regulate.kiss/gpr54.gene.expression,.we.analyzed.their.expression.in.adult.males.and.females.of.sea.bass.according.to.the.following.experimental.desing..In.the.case.of.males.three.groups.were.organized.as.follows:gonad-intact.fish.containing.empty.silastic.implants.(sham-control),.castrated.fish.with.either.testoterone.containing.(GXT).or.empty.(GX).silactic.implants..In.the.case.of.females,.three.groups.were.established.including:.gonad-intact.fish.containing.empty.silastic. implants. (sham-control),.castrated.fish. implanted.with.either.estradiol-17beta.containing. (OVXE2).or.empty. (OVX).silastic.implants..Blood,.brain.and.pituitary.samples.were.periodically.collected.after.sex.steroid.replacement.for.hormonal.and.molecular.analysis..The.participation.of.sexual.steroids.in.the.feedback.control.of.the.kisspeptin.and.GnRH/gonadotropin.systems.are.discussed.

Justificacion Se.sabe.que.la.lubina.europea.(Dicentrarchus labrax.L.).posee.dos.genes.kiss.(kiss1,.kiss2).y.dos.gpr54.(gpr54-1b,.gpr54-2b).(Carrillo.et.al.,.2009;.Felip.et.al.,.2009)..Como.se.ha.descrito.en.mamíferos,.el.papel.de.estos.genes.puedes.ser.también.crítico.en.la.regulación.del.eje.gonadotropo.en.peces..Con.el.objetivo.de.investigar.la.función.que.tienen.los.esteroides.sexuales.sobre.la.regulación.del.sistema.kisspeptina.y. GnRH/gonadotrofinas. en. el. cerebro. de. machos. y. hembras. adultos. de. lubina,. se. llevaron. a. cabo. dos. experimentos. independientes.basados.en.tratamientos.de.castración.y.administración.de.implantes.de.testosterona.en.machos.y.de.17beta-estradiol.en.el.caso.de.las.hembras..Con.esta.finalidad,.se.realizaron.análisis.hormonales.y.moleculares.para.descifrar.los.mecanismos.de.retroalimentación.negativa.y/o.positiva.de.los.esteroides.sexuales.en.el.control.de.estos.sistemas.neuroendocrinos.en.lubina..

Material y MétodosDurante. la. recrudescencia. gonadal. temprana. de. la. lubina. (índice. gonadosomático,. IGS<0,07%. en. machos. y.<0,77%. en. hembras). se.llevaron.a.cabo.dos.experimentos.independientes.en.machos.(Experimento.1).y.hembras.(Experimento.2)..Experimento.1:.se.establecieron.3.grupos.(16-17.peces/grupo;.152.37±0.58g.y.23.6±9.07cm).que.se.distribuyeron.de.la.siguiente.manera;.machos.intactos.(con.gónada).e. implantes.vacíos. (sin.esteroides).que.se.considero.como.grupo.control. (Sham),.machos.gonadectomizados.que.se. implantaron.con.implantes.que.contenían.testosterona.(GXT).o.con.implantes.vacíos.(GX)..Experimento.2:.Se.establecieron.igualmente.3.grupos.(16.peces/grupo;.1034,67±114,35g.y.41,57±1,59cm).que.se.distribuyeron.de.la.siguiente.manera;.hembras.intactas.(con.gónada).y.con.implantes.sin.esteroides.grupo.control.(Sham),.hembras.ovariectomizadas.con.implantes.que.contenían.17β-estradiol.(OVXE2).o.con.implantes.vacíos.(OVX)..Todos.los.tratamientos.de.cirugía.e.implantación.se.llevaron.a.cabo.previa.anestesia.de.los.animales..La.extracción.de.las.gónadas.se.llevo.a.cabo.mediante.una.incisión.abdominal.(4-5cm).y.se.suturo.usando.hilo.de.seda..Los.implantes.(0,1mg/g.pez).se.administraron.intraperitonealmente,.15.o.20.días.después.de.la.cirugía,.a.través.de.una.incisión.en.la.piel.y.el.músculo.(2-3cm).(Fig..1A-B)..El.día.de.la.implantación.se.considero.como.el.punto.de.inicio.de.cada.experimento.(día.0).tras.el.cual.los.animales.se.muestrearon.periódicamente..Se. obtuvieron. muestras. de. plasma. que. se. almacenaron. -20ºC. para. posteriores. análisis. de. esteroides. sexuales. en. machos. (T,. E2. y.11-Ketosterona,.11-KT).y.hembras.(E2.y.T)..De.forma.paralela.se.realizaron.sacrificios.con.el.objetivo.de.extraer.muestras.de.hipotálamo.e.hipófisis,.que.se.almacenaron.a.-80ºC,.para.posteriores.análisis.de.expresión.génica.mediante.PCR.a.tiempo.real.de.los.genes.kiss y.gpr54.en.el.hipotálamo.y.de.las.subunidades.beta.de.las.gonadotrofinas.(fsh.y.lh).en.la.hipófisis.

Resultados y DiscusiónLos.resultados.del.exp.1.muestran.que. los.niveles.plasmáticos.de.T.en.machos.GXT.eran.7.veces.superiores.a. los.registrados.en.el.grupo.sham-control,.mientras.que.en.los.machos.GX.se.redujeron.a.la.mitad.respecto.al.grupo.sham-control..En.cuanto.a.la.expresión.hipotalámica.de.las.kisspeptinas,.no.se.encontraron.diferencias.estadísticamente.significativas.en.la.expresión.del.kiss2.entre.los.machos.GX.y.los.controles.(sham)..Sin.embargo,.la.expresión.del.kiss2 fue.notablemente.inferior.en.los.machos.GXT.(Fig..1C)..Estos.resultados.sugieren.una.regulación.a.la.baja.del.kiss2.en.el.hipotálamo..Los.niveles.de.expresión.kiss1.no.mostraron.diferencias.significativas.entre.grupos..A.nivel.de.receptores,.no.se.detectaron.diferencias.significativas.del.gpr54-2b y.gpr54-1b.entre.grupos.experimentales.(datos.no.mostrados)..A.nivel.de.pituitaria,.la.expresión.de.las.subunidad.beta.de.la.fsh.fue.significativa.inferior.en.los.machos.GXT,.mientras.que.la.expresión.de.la.subunidad.beta.de.la.lh.fue.similar.en.todos.grupos.experimentales..En.el.experimento.2,.los.resultados.mostraron.que.los.niveles.plasmáticos.de.E2.en.las.hembras.del.grupo.OVXE2.eran.5.veces.superiores.a.los.detectados.en.el.grupo.control,.mientras.que.en.las.hembras.OVX.dichos.niveles.eran.similares.a.los.del.control..Actualmente.se.están.llevando.a.cabo.loa.análisis.moleculares.para.conocer.el.efecto.de.la.ovariectomia.y.el.remplazamiento.con.E2.sobre.la.expresión.del.sistema.kisspeptina.en.el.hipotálamo.de.hembras.de.lubina..Todos.estos.resultados.nos.permitirán.dilucidar.los.mecanismos.de.retroaliemtación.negativa/positiva.que.ejercen.los.esteroides.sexuales.sobre.los.sistemas.kisspeptinas.y.GnRH/gonadotrofinas.en.peces.y.compararlos.con.aquellos.descritos.en.otros.vertebrados.(Shibata.et.al.,.2007;.Hellqvist.et.al.,.2008).

Figura 14(A).Tamaño.de.los.implantes.administrados.a.las.lubinas.adultas.(blancos.con.esteroides,.grises.vacíos)..(B).Imagen.ventral. de. un. individuo. GXT.. (C). Efectos. de. la. gonadectomia. y. el. reemplazamiento. con. T. sobre. la. expresión. de. kiss1/kiss2.determinados.por.qRT-PCR.

BibliografíaCarrillo,.M.,.S..Zanuy,.A..Felip,.M.J.Bayarri,.G..Molés..y.A..Gómez..2009..Hormonal.and.environmental.control.of.puberty.in.perciform.fish..The.case.of.sea.bass..Trends in Comparative Endocrinology amd Neurobiology: Annals of the New York Academic of Sciences..1163:.49-59..

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A B C


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Felip,.A.,.S..Zanuy,.R..Pineda,.L..Pinilla,.M..Carrillo,.M..Tena-Sempere.y.A..Gómez..2009..Evidence.of. two.distinct.KiSS genes. in.non-placental.vertebrates.that.encode.kisspeptins.with.different.gonadotropin-releasing.activites.in.fish.and.mammals..Molecular and Cellular Endocrinology..312:.61-71..Hellqvist,.A.,.M..Schmitz.y.B..Borg..2008..Effects.of.castration.and.androgen-treatment.on.the.expression.of.fshβ.and.lhβ.in.the.three.spine.stickleback,.gasterosteus.aculeatus-Feedback.differences.mediating.the.photoperiodic.maturation.response?..General and Comparative Endocrinology.158:.178-182.Shibata,.M.,.R.L.Friedman,.S..Ramaswamy.y.M..Plant..2007..Evidence.that.down.regulation.of.hypothalamic.KISS-1.expression.is.involved.in. the. negative. feedback. action. of. testosterone. to. regulate. luteinising. hormone. secretion. in. the. adult. male. rhesus. monkey. (Macaca mulatta)..Journal of Neuroendocrinology.19:.432-438.

AgradecimientosTrabajo.financiado.por.AGL2009-11086.(MICINN).a.A.F..M.V.A.disfruto.de.una.beca.FPI.(MICINN).

Bases moleculares del inicio de la pubertad en machos de lubina M..Blázquez,.B..Crespo,.P..Medina,.A..Gómez.y.S..ZanuyInstituto de Acuicultura Torre de la Sal, Consejo Superior de Investigaciones Científicas, 12595 Ribera de Cabanes, CastellónE-mail: [email protected]; [email protected]

Abstract Pubertal. development. in. males. starts. with. the. onset. of. spermatogenesis. that. implies. the. division. of. primary. spermatogonia. and.their. subsequent. entry. into. meiosis.. The. knowledge. of. the. mechanisms. involved. in. the. regulation. of. this. process. is. very. important.in.order. to.exert.a.fine.control.over. it.. The.present.study. is.aimed.at. the.characterization.of. the.expression.of.genes. involved. in. the.onset.of.spermatogenesis.in.the.European.sea.bass..The.study.is.focused.on.the.first.stages.of.the.process.including.the.appearance.of. spermatocytes. and. thus. the. first. meiotic. divisions.. The. results. show. that. 11-ketotestosterone. is. a. good. indicator. of. the. stage. of.gonadal.maturation.in.this.species.with.higher.levels.in.spermatogenic.males.(stage.II).than.in.resting.males.(stage.I)..In.addition,.the.transcriptomic.study.using.a.sea.bass.specific.microarray.resulted. in.a.number.of.genes.differentially.expressed.during.the.onset.of.spermatogenesis..Among.those,.genes.involved.in.cell-cycle.progression,.microtubule.assembly.during.meiosis.or.retinoic.acid.signaling.pathway,.indicating.that.they.can.be.used.as.potential.molecular.markers.for.the.onset.of.spermatogenesis.in.sea.bass.

Justificación La.lubina.europea.(Dicentrarchus labrax).es.una.de.las.especies.de.mayor.relevancia.para.la.acuicultura.mediterránea.y.la.segunda.de.mayor.producción.en.España,.siendo.el.tercer.productor.mundial.de.esta.especie..Uno.de.los.cuellos.de.botella.en.su.producción.es.la.gran.cantidad.de.machos.que.aparecen.en.cautividad.(95-99%).lo.que.supone.un.problema.para.las.empresas.del.sector.puesto.que.es.el.sexo.que.presenta.un.menor.crecimiento..Además,.en.cultivos.intensivos,.alrededor.del.30%.de.estos.machos.maduran.precozmente.antes.de.alcanzar.el.tamaño.comercial.(Zanuy.et al.,.2001)..La.pubertad.lleva.asociados.problemas.entre.los.que.destaca.una.ralentización.del.crecimiento.que.disminuye.los.beneficios.de.las.empresas.dedicadas.a.su.cultivo..El.objetivo.del.presente.trabajo.es.profundizar.en.el.conocimiento.de.las.bases.moleculares.que.determinan.el.inicio.de.la.pubertad.en.esta.especie..Para.ello.se.han.utilizado.herramientas.histológicas,. bioquímicas. y. genómicas. que. nos. permiten. aumentar. los. conocimientos. básicos. de. este. proceso. con. el. fin. de. poder.manipularlo.y.aumentar.los.beneficios.de.su.producción..

Material y MétodosSe. partió. de. una. población. de. lubinas. de. 1. año. y. medio. de. edad,. encaminadas. a. su. primera. maduración. sexual,. mantenidas. bajo.condiciones.naturales.de.fotoperiodo.y.temperatura..Entre.Agosto.y.Octubre.se.muestrearon.periódicamente.incluyendo.el.inicio.de.la.primera.maduración.sexual.de.los.machos..Se.tomaron.muestras.de.sangre.para.el.análisis.de.esteroides.sexuales.y.de.gónadas.para.estudios.histológicos.y.de.expresión.génica..El.estado.de.desarrollo.testicular.se.determinó.según.Begtashi.et al.,.(2004)..Se.establecieron.dos.grupos:.1).machos.en.estado.I,.o.individuos.en.reposo.y.por.tanto.previo.al.inicio.de.la.pubertad.y.2).machos.en.estado.II.o.individuos.al.inicio.de.la.espermatogénesis..En.el.plasma.sanguíneo.se.midió.11-ketotestosterona.(11-KT).por.EIA..El.RNA.total.de.los.testículos.se.extrajo.con.un.kit.de.purificación.en.columnas.(Pure.link;.Invitrogen).y.su.cantidad.y.calidad.se.determinó.con.el.Bioanalyzer.2100.de.Agilent..Solo.se.usaron.los.RNAs.con.valores.de.RIN.comprendidos.entre.9.1.y.10..De.cada.estado.se.hicieron.tres.replicados.biológicos.que.en.el.estado.I.estaban.compuestos.cada.uno.por.una.mezcla.de.cinco.individuos.y.en.el.caso.del.estado.II.por.una.mezcla.de.cuatro.individuos..Las.muestras.se.amplificaron,.marcaron.con.Cy3-dUTP.e.hibridaron.en.un.microarray.que.contenía.secuencias.únicas.de.lubina.(sondas.de.60-mer).previamente.desarrollado,.validado.y.accesible.a.través.de.la.base.de.datos.pública.GEO.(número.GPL13443)..Los.resultados.obtenidos.se.analizaron.con.el.programa.GeneSpring.versión.10..Se.escogieron.diez.genes.representativos.cuya.expresión.diferencial.entre.los.estados.gonadales.era.dos.veces.superior,.tanto.en.sentido.positivo.como.negativo.y.se.validaron.por.PCR.a.tiempo.real..Se.diseñaron.cebadores.específicos.y.se.determinaron.las.curvas.de.amplificación.y.sus.eficiencias..Las.diferencias.estadísticas.de.niveles.hormonales.y.de.expresión.génica.se.determinaron.con.una.t.de.student.(diferencias.significativas.para.P.<.0.01).

Resultados y Discusión La.histología.nos.permitió.utilizar.poblaciones.puras.de.machos.en.estado.I.y.en.estado.II,.eliminando.los.estadios.de.transición.(Figura.1a)..Los.resultados.de.11-KT.complementaron.a.los.histológicos.siendo.sus.niveles.superiores.en.el.estado.II.que.en.el.estado.I.(Figura.1b).

Figura 14a).Desarrollo.histológico.y.b).niveles.plasmáticos.de.11-KT.en.machos.de.lubina.

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Reproducción

El.estudio.transcriptómico.identificó.309.genes.expresados.diferencialmente.entre.ambos.estados;.152.presentaban.mayor.expresión.(>.2).en.el.estado.II.y.157.menor.expresión.(<.2).en.el.estado.II..De.éstos.se.seleccionaron.diez,.englobados.según.su.categoría.funcional..Su.expresión.se.validó.por.PCR.a.tiempo.real.comprobándo.que.el.signo.de.los.cambios.se.mantenía.igual.con.ambos.métodos..La.mayor.parte.de.los.genes.estaban.relacionados.con.divisiones.celulares.y.meiosis..En.ese.sentido,.la.expresión.de.pcna.aumenta.al.inicio.de.la.espermatogénesis,.de.acuerdo.con.su.relevancia.en.procesos.de.proliferación.celular..Destaca.el.aumento.en.la.expresión.de.genes.codificantes.de.proteínas.de.centrómero,.necesarios.para.la.progresión.de.la.meiosis..También.se.ve.afectada.la.ruta.de.señalización.del.ácido.retinoico.(RA),.como.es.el.caso.del.cyp26.que.codifica.la.enzima.que.degrada.e.inactiva.al.RA..En.mamíferos.el.RA.está.involucrado.en.el.desarrollo.de.las.células.germinales.y.en.el.inicio.de.la.meiosis.(Bowles.y.Koopman,.2007),.aunque.en.peces.no.existen.trabajos.al.respecto..Otros.genes.como.aqp2,.asociado.a.la.progresión.de.la.espermatogénesis.en.mamíferos.(Huang.et al.,.2006).o.sgII,.involucrado.en.la.secreción.de.gonadotropinas.en.la.carpa.dorada.(Blázquez.et al.,.1998).aparecen.también.afectados..Este.es.el.primer.trabajo.en.lubina.en.el.que.se.usa.la.transcriptómica.para.el.estudio.de.la.espermatogénesis..Los.resultados.ayudarán.a.comprender.el.proceso.y.podrán.ser.aplicados.para.su.control.

Bibliografía Begtashi,.I.,.L..Rodríguez,.G..Molés,.S..Zanuy.y.M..Carrillo..2004..Long-term.exposure.to.continuous.light.inhibits.precocity.in.juvenile.male.European.sea.bass.(Dicentrarchus labrax,.L.)..I..Morphological.aspects..Aquaculture.241:.539-559.Blázquez,. M.,. P.T.. Bosma,. J.P.. Chang,. K.. Docherty. y. V.L.. Trudeau.. 1998.. g-aminobutyric. acid. up-regulates. the. expression. of. a. novel.secretogranin-II.messenger.ribonucleic.acid.in.the.goldfish.pituitary..Endocrinology.139.(12):.4870-4880.Bowles,.J..y.P..Koopman..2007..Retinoic.acid,.meiosis.and.germ.cell.fate.in.mammals..Development.134:.3401-3411..Huang,.H.F.,.R.H..He,.C.C..Sun,.Y..Zhang,.y.Q.X..Meng..2006..Function.of.aquaporins.in.female.and.male.reproductive.systems..Human.reproduction.update.12(6):.785-795.Zanuy,.S.,.M..Carrillo,.A..Felip,.L..Rodríguez,.M..Blázquez,.J..Ramos.y.F..Piferrer..2001..Genetic,.hormonal.and.environmental.approaches.for.the.control.of.reproduction.in.the.European.sea.bass.(Dicentrarchus labrax.L.)..Aquaculture.202:.187-203.

AgradecimientosEste.estudio.ha.sido.subvencionado.por. los.proyectos.Prometeo. (REPROBASS;.PROMETEO/2010/003).y.Consolider. (AQUAGENOMICS;.CSD2007-00002).a.Silvia.Zanuy.y.un.proyecto.Intramural.del.CSIC.(200930I037).a.Mercedes.Blázquez.

El sistema kisspeptina en peces: Avances en la caracterización molecular y fisiológica de los genes kiss/gpr54 en la lubina, Dicentrarchus labraxA..Felip,.F..Espigares,.S..Escobar,.M.V..Alvarado,.S..Zanuy,.M..Carrillo.y.A..GómezInstituto de Acuicultura de Torre de la Sal (IATS), Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC), Ribera de Cabanes, 12595, Castellón. e-mail: [email protected]

Abstract Kisspeptin.and.its.receptor.Gpr54.play.an.important.role.in.mammalian.reproduction..To.date,.up.to.three.distinct.kiss and.four.gpr54 genes.have.been.identified.in.vertebrates..In.fish,.the.kiss1and/or.kiss2 and.their.cognate.kisspeptin.receptors.(gpr54-1b.and/or.gpr54-2b).have.been.characterized.in.a.number.of.teleosts.including,.Beloniformes,.Cypriniformes,.Mugiliforms,.Pleuronectiforms,.Tetraodontiforms,.Gasterosteiforms.and.other.Perciforms.such.as.sea.bass..From.them,.only.the.medaka,.zebrafish,.goldfish.and.sea.bass.have.two.kiss.and.two.gpr54.genes.whereas.other.fish.possess.one.form.of.ligand.and.receptor..Because.these.genes.possess.conserved.structural.organization,.it.is.suggested.that.these.genes.originated.from.a.common.ancentral.form..Phylogenetic.and.synteny.analyses.support.this.hypothesis..Evidence.exits.this.neuroendrocrine.system.plays.a.relevant.role.in.fish.reproduction..Presently.studies.in.sea.bass.include.the.characterization.of.this.system.in.the.brain.and.the.ligand-receptor.interactions.as.well.as.quantitative.monitoring.of.kiss/gpr54.gene.expression.patterns.under.different.environmental/physiological.conditions..

JustificaciónLa. identificación. del. sistema. kisspeptina. en. mamíferos. ha. sido. un. hallazgo. relevante. en. el. campo. de. la. neuroendocrinología. de.vertebrados.. Los. componentes. de. este. sistema,. los. genes. Kiss. y. Gpr54,. están. implicados. en. la. regulación. del. eje. gonadotropo. y. el.control. de. la. pubertad. en. mamíferos,. aunque. también. se. les. ha. relacionado. con. otras. funciones. fisiológicas. vitales. (Tena-Sempere,.2010)..Su.caracterización.en.peces.ha.supuesto.el.esfuerzo.de.varios.grupos.de.investigación.en.los.últimos.siete.años,.demostrándose.la.existencia.del.mencionado.sistema.en.teleósteos.y.su.implicación.en.la.reproducción.(Carrillo.et al.,.2009;.Zohar.et al.,.2010)..En.la.actualidad.se.han.descrito. tres.genes.distintos.que.codifican.para. las.kisspeptinas.y.cuatro.que.codifican.para. los.receptores.Gpr54.en.vertebrados..Ciertas.especies.como.la.medaka,.el.pez.cebra,.el.carpín.dorado.y.la.lubina.poseen.dos.genes.kiss.(kiss1,.kiss2).y.dos.gpr54.(gpr54-1b,.gpr54-2b)..Sin.embargo,.otras.como.la.tilapia,.el.lenguado,.el.fletán,.el.jurel,.la.anguila.o.el.atún,.sólo.poseen.el.par.kiss2/gpr54-2b..Estudios.filogenéticos.y.de.sintenía.muestran.la.compleja.historia.evolutiva.de.este.sistema,.cuya.aparición.se.remonta.a.más.de.600.millones.de.años..En.la.lubina,.una.especie.de.interés.en.acuicultura,.la.clonación.de.las.kisspeptinas.y.sus.receptores.ha.permitido.realizar.estudios.sobre.los.patrones.de.expresión.tisular,.el.análisis.funcional. in vivo.de.los.péptidos.kiss1.y.kiss2.asi.como.la.determinación.de.las.interacciones.ligando-receptor.in vitro,.contribuyendo.significativamente.a.la.caracterización.molecular.de.los.sistemas.kisspeptina.en.esta.especie.(Felip.et al.,.2009,.2011)..Asimismo,.estudios.neuroanatómicos.y.de.expresión.génica.bajo.distintas.condiciones.experimentales,.intentan.dilucidar.los.mecanismos.de.control.que.regulan.este.sistema.en.peces..

Material y MétodosLas.secuencias.de. los.genes.kiss/gpr54.disponibles.en.diferentes.bases.de.datos.de.vertebrados. (Ensembl.Genome.Browser,.http://www.ensembl.orgy. NCBI,. http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). se. han. utilizado. como. información. de. referencia. para. amplificar. y. clonar. los.componentes.de. los.sistemas.kisspeptina.en. la. lubina. (Felip.et al.,. 2009,.2011)..Se.han. realizado.análisis. filogenéticos. y.de.sintenía.que.han.ayudado.a.esclarecer.la.posible.historia.evolutiva.de.este.sistema.en.vertebrados..Asimismo,.los.análisis.del.tipo.RT-PCR.han.determinado.los.patrones.de.expresión.de.estos.genes.en.diferentes.tejidos.en.machos.y.hembras.de.lubina..

Resultados y DiscusiónEl. número. de. especies. de. teleósteos. en. las. que. se. ha. identificado. algun. componente. del. sistema. kisspeptina. ha. incrementado.considerablemente.desde.el.2004. (Fig..1A)..Los.estudios.actuales.han.demostrado.que.pueden.coexistir.hasta. tres.genes.kiss. y. tres.gpr54.en.el.caso.de.anfibios.y.dos.en.el.caso.de.los.genomas.de.peces..Aunque.el.par.kiss2/gpr54-2b.se.ha.encontrado.comúnmente.en.teleósteos,.los.genes.kiss1.y.gpr54-1b.también.se.han.encontrado.en.un.número.reducido.de.peces..Los.análisis.de.sintenia.demuestran.que.en.una.misma.especie,.estos.genes.están.localizados.en.cromosomas.distintos.pero.en.regiones.cromosómicas.conservadas.entre.vertebrados..La.expresión.de.estos.genes.en.el.cerebro.y.en.la.gónada.(Fig..1B).y.la.capacidad.de.las.kisspeptinas,.principalmente.de.kiss2,.para.estimular.la.liberación.de.gonadotrofinas.en.la.lubina.(Fig..1C).sitúan.a.este.sistema.como.un.elemento.clave.de.la.regulación.neuroendocrina.de.la.reproducción.de.peces.(Carrillo.et al.,.2009;.Felip.et al.,.2009,.2011;.Zohar.et al.,.2010).

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Figura 14Caracterización. de. los. sistemas. kisspeptina. en. teleósteos.. (A). Número. de. especies. de. peces. en. las. que. se. han.identificado.las.distintas.formas.de.los.genes.kiss.y.gpr54..(B).Análisis.de.expresión.tisular.mediante.RT-PCR.de.los.genes.kiss.y.gpr54 en.machos.y.hembras.adultos.de.lubina..Uniformidad.de.los.RNAs.evaluada.con.el.gen.ef1α..C-.control.negativo.de.las.PCR.usando.agua.estéril.como.molde. (C).Efecto.de.la.administración.intramuscular.de.los.péptidos.kiss1.y.kiss2.de.lubina.sobre.la.secreción.de.la.hormona.luteinizante.(LH).2h.después.de.la.inyección.en.machos.juveniles.y.adultos.de.lubina..*P<0,05.

BibliografíaCarrillo,.M.,.S..Zanuy,.A..Felip,.M.J..Bayarri,.G..Molés.y.A..Gómez..2009..Hormonal.and.environmental.control.of.puberty.in.perciform.fish..The.case.of.sea.bass. Trends in Comparative Endocrinology and Neurobiology: Annals of the New York Academic of Sciences..1163:.49-59.Felip,.A.,.S..Zanuy,.R..Pineda,.L..Pinilla,.M..Carrillo,.M..Tena-Sempere.y.A..Gómez..2009..Evidences.for.two.distinct.KiSS.genes.in.non-placental.vertebrales.that.codes.kisspeptins.with.different.gonadotropin-releasing.activities.in.fish.and.mammals..Molecular and Cellular Endocrinology..312:.61-71.Felip,.A.,.F..Espigares,.S..Zanuy.y.A..Gómez..2011..Isolation.and.characterization.of.two.kisspeptin.receptors.in.a.teleost.fish.with.differential.selectivity.of.their.cognate.ligands..Biology of Reproduction..(enviado)..Tena-Sempere,.M..2010..Roles.of.kisspeptins.in.the.control.of.hypothalamic-gonadotropic.function:.Focus.on.sexual.differentiation.and.puberty.onset..En:.Pediatric Neuroendocrinology Endocr. Dev. Basel..S..Loche,.M..Cappa,.L..Ghizzoni,.M..Maghnie.y.M.O..Savage.(Eds,),.Karger:.vol.17,.52-62..Zohar,.Y.,.J.A..Muñoz-Cueto,.A..Elizur.y.O..Kah..2010..Neuroendocrinology.of.reproduction.in.teleost.fish..General Comparative Endocrinology..165:.438-455.

AgradecimientosEste.trabajo.fue.financiado.por.los.proyectos.GV06/268.y.PROMETEO/2010/003.de.la.Generalitat.Valenciana,.LIFECYCLE.(FP7222719).de.la.Comunidad.Europea.y.AGL2009-11086.del.MICINN..

Producción de esperma de anguila europea (Anguilla anguilla) bajo tres regímenes térmicos y tres tratamientos hormonales.V..Gallego1,.I..Mazzeo1,.P..Carneiro2,.M.C..Vílchez1,.R..Baeza1,.D.S..Peñaranda1,.R..Barrera3,.L..Pérez1.y.J.F..Asturiano1

1Grupo de Acuicultura y Biodiversidad. Instituto de Ciencia y Tecnología Animal. Universitat Politècnica de València. Camino de Vera s/n, 46022, Valencia. E-mail: [email protected] Tabuleiros Costeiros. Av. Beira Mar 3250, 49025-040 Aracaju, Brasil3Valenciana de Acuicultura, S.A. Playa de Puzol, 46530, Puzol, Valencia

AbstractThe.European.eel.(A. anguilla).is.a.teleost.fish.with.a.peculiar.life.cycle.that.in.the.last.years.has.suffered.a.dramatic.reduction.on.stocks..Breeding.in.captivity.is.considered.an.alternative,.but.obtaining.high.quality.sperm.seems.basic.on.this.regard..The.main.objective.of.this.study.was.to.assess.three.thermal.regime.and.three.hormonal.treatments.on.the.induction.of.maturation.of.European.eel.males..The.results.of.this.study.showed.that.both.the.thermal.regimes.as.the.hormonal.treatments.affected.significantly.the.sperm.production.and.quality.parameters,.as.motility,.density.and.percentage.of.spermating.males..The.best.results.were.obtained.applying.a.constant.thermal.regime.of.20.ºC.and.a.hormonal.weekly.treatment.with.recombinant.human.chorionic.gonadotropin.(hCGr).

JustificaciónLa.anguila.europea.(A. anguilla).es.un.pez.teleósteo.que.presenta.un.ciclo.de.vida.peculiar.y.una.amplia.distribución..Pero.en.las.últimas.décadas. sus. poblaciones. naturales. han. sufrido. una. dramática. reducción. aparentemente. como. consecuencia. de. la. sobrepesca,. la.contaminación.y.la.reducción.de.su.hábitat.La.reproducción.en.cautividad.continúa.sin.solución.y.la.obtención.de.esperma.de.alta.calidad.durante.un.elevado.número.de.semanas.es.un.objetivo.indispensable.para.poder.establecer.futuros.programas.de.cría.El.método.de. inducción.hormonal.más.utilizado.para. la.maduración.testicular.y. la.espermiación.ha.sido. la.administración.de.hCG.a.machos.mantenidos.bajo.una.temperatura.constante.de.20.ºC,.pero.a.pesar.de.la.obtención.de.buenos.resultados,.el.número.de.semanas.con.esperma.de.alta.calidad.ha.sido.limitado.(p.ej..Asturiano.et al.,.2005)..Con.el.objetivo.de.incrementar.tanto.la.calidad.del.esperma.como.el.tiempo.de.producción.del.mismo,.se.evaluaron.los.efectos.de.3.regímenes.de.temperatura.y.de.3.tratamientos.hormonales.(una.vez.elegida.la.mejor.temperatura).en.el.proceso.de.maduración.gonadal.de.las.anguilas.

Material y MétodosExperimento.1..Efecto.del.régimen.térmico..317.machos.adultos.(100±2.g).fueron.distribuidos.en.3.acuarios.de.200.L.bajo.tres.regímenes.térmicos:.T10:.10.ºC.por.6.semanas,.15.ºC.las.siguientes.3.semanas.y.20.ºC.las.6.últimas;.T15:.15.ºC.por.6.semanas.y.20.ºC.las.9.últimas;.y.T20:.20.ºC.constantes..La.maduración.se.indujo.con.inyecciones.semanales.de.gonadotropina.coriónica.humana.(hCG,.1.5.UI/g).Experimento.2..Efecto.del.tratamiento.hormonal..Una.vez.determinado.el.mejor.régimen.térmico,.62.machos.adultos.(80±2.g).fueron.distribuidos.en.3.acuarios.de.200.L.a.20.ºC.bajo. tres. tratamientos.hormonales:.hCG. (Argent Chemical Laboratories,.USA);.hCGr. (hCG.recombinante;. Ovitrelle.. Madrid). y. PMSG. (gonadotropina. sérica. de. yegua. preñada;. Sincropart,. Lab. CEVA,. Barcelona),. todos. ellos.suministrados.semanalmente.a.razón.de.1.5.UI/g.

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Las.muestras.de.esperma.de.ambos.experimentos.fueron.recogidas.mediante.masaje.abdominal..Cada.semana.se.registró.el.porcentaje.de.machos.espermiantes,.el.volumen.de.esperma.y.su.motilidad.(mediante.un.software.de.evaluación.espermática:.ISAS®.(Proiser.R+D,.S.L.;.Paterna,.España).

Resultados y DiscusiónEn.relación.con.el.efecto.del.régimen.térmico. (experimento.1),. los.machos.de.T10.y.T15.comenzaron.a.producir.esperma.más.tarde.que.los.de.T20.(fig..1A)..Este.retraso.en.la.espermiación,.además.del.menor.porcentaje.de.machos.espermiantes,.fue.resultado.de.un.desarrollo.gonadal. tardío.como.consecuencia.de. las.menores.temperaturas.a. las.que.fueron.sometidos.estos.animales,.al. igual.que.ocurre.en.las.hembras.de.esta.especie.(Mazzeo.et.al.,.2011)..Los.machos.de.T20.presentaron.un.mayor.volumen.de.esperma.(fig..1B).y.una.mayor.motilidad.que.los.de.T10.y.T15.(fig..1A),.con.diferencias.significativas.en.varias.semanas..

Figura 14Parámetros. seminales. bajo. diferentes. regímenes. de. temperatura. (A,. Motilidad;. B,. Volumen). y. bajo. distintos. tratamientos.hormonales. (C,. Motilidad;. D,. Volumen).. Datos:. Media. ±. SEM.. Letras. distintas. indican. diferencias. significativas. entre. regímenes/tratamientos.en.cada.semana.de.tratamiento.

En.relación.con.el.efecto.del.tratamiento.hormonal.(experimento.2),.los.machos.tratados.con.PMSG,.presentaron.menores.volúmenes.(fig..1D),.un.menor.porcentaje.de.machos.espermiantes,.y.comenzaron.a.producir.esperma.un.mes.más.tarde.que.los.tratados.con.hCG.o.hCGr..Los.machos.tratados.con.hCGr.presentaron.una.mayor.motilidad.durante.buena.parte.del.tratamiento.(fig..1C).y.un.periodo.de.espermiación.especialmente.largo.Los.resultados.de.este.trabajo.indican.que.tanto.el.régimen.térmico.como.el.tratamiento.hormonal.empleados.durante.la.maduración.gonadal. de. machos. de. anguila. europea. afectan. significativamente. a. parámetros. relacionados. con. la. producción. de. esperma. (%. de.espermiantes,.volumen,.tiempo.de.espermiación).y.su.calidad.(motilidad),.así.como.en.otros.parámetros.relacionados.con.la.cinética.del.esperma.(datos.no.mostrados).Los. mejores. resultados. se. consiguieron. aplicando. un. régimen. térmico. constante. de. 20. ºC. y. un. tratamiento. hormonal. basado. en.gonadotropina.coriónica.humana.recombinante.(hCGr).

BibliografíaAsturiano,.J.F.,.L..Pérez,.D.L..Garzón,.D.S..Peñaranda,.F..Marco-Jiménez,.S..Martínez-Llorens,.A..Tomás.y.M..Jover..2005..Effect.of.different.methods.for.the.induction.of.spermiation.on.semen.quality.in.European.eel..Aquaculture Research..36:.1480-1487.Mazzeo,. I.,.Peñaranda,.D.S.,.Gallego,.V.,.Nourizadeh-Lillabadi,.R.,.Tveiten,.H.,.Weltzien,.F.A.,.Asturiano,.J.F..y.Pérez,.L..2011..Effect.of.thermal.regime.on.the.expression.of.sex-related.genes.in.female.European.eel..9th International Symposium on Reproductive Biology of Fish..Kochin.(India)..Book.of.abstracts..Pp.:.36-37.

AgradecimientosProyecto. financiado. la. Unión. Europea. (7th. Framework. Programme;. Grant. Agreement. No.. 245257,. Proyecto. Pro-Eel). y. la. Generalitat.Valenciana.(ACOMP/2011/229)..D.S.P..y.P.C.F.C..disfrutan.de.becas.postdoctorales.de.la.UPV.(CE-01-10).y.EMBRAPA,.respectivamente..I.M..y.V.G..disfrutan.de.becas.predoctorales.de.la.Generalitat.Valenciana.y.el.MICINN,.respectivamente..Los.peces.fueron.suministrados.por.Valenciana.de.Acuicultura.(Puzol,.Valencia).

Efecto del régimen térmico en la vitelogénesis de la anguila europea (Anguilla anguilla)M.C..Vílchez,.I..Mazzeo,.R..Baeza,.V..Gallego,.D.S..Peñaranda,.J.F..Asturiano,.L..PérezGrupo de Acuicultura y Biodiversidad. Instituto de Ciencia y Tecnología Animal. Universitat Politécnica de València. Camino de Vera s/n, 46022, Valencia. E-mail: [email protected]

Abstract Eel.migration.probably.includes.a.long.travel.at.low.temperatures.and.a.final.maturation.at.18-20.ºC..In.captivity,.maturation.has.been.obtained.only.by.chronic.administration.of.hormones,.like.carp.pituitary.extract.(CPE)..In.the.present.work,.a.combination.between.envi-ronmental.and.hormonal.treatments.and.its.effects.on.eel.maturation.was.tested..Three.thermal.regimes.(2.variables.starting.at.10.ºC.(T10).or.at.15.ºC.(T15).followed.by.a.later.increase.to.18.ºC,.and.one.constant.at.18.ºC.(T18).were.combined.with.weekly.injections.of.CPE..High.constant.temperature.accelerated.the.development.from.mid-vitellogenic.stages,.but.temperatures.around.15.ºC.did.not.inhibit.the.first.vitellogenic.steps..The.mantainance.during.4.weeks.at.a.given.temperature.is.not.sufficient.to.overcome.the.effect.of.the.thermope-riod.experienced.previously.on.the.ovarian.development.

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JustificaciónLa.temperatura.del.agua.afecta.a.la.maduración.y.puesta.de.los.peces,.pero.también.a.la.vitelogénesis.de.las.hembras.de.peces.(Clark.et.al.,.2006)..La.ruta.migratoria.de.la.anguila.europea.ha.sido.recientemente.descubierta,.y.se.produce.a.profundidades.elevadas.(300-600.m),.y.temperaturas.entre.10-12.ºC.(Aarestrup.et.al.,.2009),.mientras.que.el.área.de.puesta.se.encuentra.a.mayor.temperatura,.en.torno.a.18-20.ºC..Puede.suponerse.así.que.la.vitelogénesis.de.esta.especie.se.produce.a.temperaturas.menores.que.la.ovulación..En.cautividad,.las.hembras.de.anguila.sólo.maduran.con.tratamientos.hormonales.crónicos,.como.inyecciones.semanales.de.extracto.de.hipófisis.de.carpa.(CPE).o.salmón..En.el.presente.trabajo.se.estudió.el.efecto.de.3.regímenes.térmicos.(2.variables.y.uno.constante).en.la.vitelogénesis.de.la.anguila.europea.inducida.con.inyecciones.semanales.de.CPE..

Material y MétodosUn.grupo.de.120.hembras.salvajes.de.anguila.(847±28.g).capturadas.durante.su.migración.reproductiva.en.la.Albufera.de.Valencia,.se.aclimataron.a.agua.de.mar.en.semioscuridad.y.se.sometieron.a.diferentes.regímenes.térmicos.durante.12.semanas.(Figura.1)..Además.recibieron.inyecciones.semanales.de.CPE.(20.mg/kg)..A.su.llegada.8.anguilas.no.tratadas.se.sacrificaron.como.grupo.control.de.agua.dulce..Se.sacrificaron.7-8.anguilas.de.cada.grupo.sin.tratar.con.CPE,.tras.2.semanas.en.agua.de.mar.y.7.días.a.10,.15.o.20.ºC.(semana.0),.y.tras.4,.8.y.12.semanas.de.tratamiento.con.CPE..Se.tomaron.muestras.de.sangre.y.de.gónada.para.su.procesado.histológico..La.vitelo-genina.plasmática.se.midió.con.un.ELISA.específico.(Burzawa-Gérard.et.al.,.1991)..

Resultados y DiscusiónEl.termoperíodo.afectó.a.la.velocidad.de.desarrollo.ovárico,.en.general.más.rápida.a.temperaturas.elevadas..Así,.en.la.semana.12.de.tratamiento.el.mayor.desarrollo.ovárico.se.encontró.en.las.hembras.mantenidas.a.18.ºC.(T18;.Fig..1B)..Los.grupos.T10.y.T15.permane-cieron.a.la.misma.temperatura.(15.ºC).entre.las.semanas.4ª.y.8ª..Sin.embargo,.el.grado.de.desarrollo.gonadal.fue.mayor.en.el.grupo.T15,.con.predominio.de.hembras.en.vitelogénesis.media.frente.al.predominio.de.vitelogénesis.inicial.en.T10..Lo.mismo.ocurrió.con.los.grupos.T15.y.T18.durante.las.semanas.8ª.a.12ª,.cuando.permanecieron.ambos.a.18.ºC,.pero.el.T18.presentó.un.mayor.desarrollo.ovárico..Así,.parece.que.el.mantenimiento.a.una.temperatura.concreta.durante.4.semanas.no.elimina.el.efecto.del.termoperíodo.experimentado.previamente..El.IGS.aumentó.progresivamente.a.lo.largo.del.tratamiento.(Fig..1C)..

Figura 14A..Regímenes.térmicos..B..Estados.de.desarrollo.ovárico..C..Evolución.del.IGS..C..Evolución.de.los.niveles.plasmáticos.de.vitelogenina..PV:.previtelogenesis;.EV:.vitelogénesis. inicial;.MV:.vitelogénesis.media;.LV:.vitelogénesis.final;.NM:.migración.nuclear..Datos:.Media.±.SEM..Letras.minúsculas.distintas.indican.diferencias.significativas.entre.regímenes/tratamientos.en.cada.semana.de.tratamiento..Letras.mayúsculas.indican.diferencias.entre.las.distintas.semanas.de.tratamiento..

Desde. la.semana.8ª.el. IGS. fue.menor.en. los.grupos.mantenidos.a.menores. temperaturas..El.grupo.T10.presentó.menor.desarrollo.ovárico.e. IGS.en.la.semana.8ª,.pero.el.nivel.plasmático.de.vitelogenina.fue.similar.al.de.los.otros.grupos,. lo.que.sugiere.una.menor.captación.de.vitelogenina.por.los.oocitos.en.este.grupo..En.la.12ª.semana.de.tratamiento.el.nivel.de.vitelogenina,.el.IGS.y.el.desarrollo.gonadal.fueron.mayores.en.el.grupo.T18..Parece.que.las.primeras.etapas.de.la.vitelogénesis.pueden.producirse.a.diferentes.temperatu-ras,.mientras.que.la.temperatura.afecta.más.a.la.velocidad.en.la.que.se.produce.el.desarrollo.desde.las.fases.medias.de.la.vitelogenesis,.lo.que.confirma.resultados.previos.(Perez.et.al..2011)..Es.necesario.estudiar.en.un.futuro.el.efecto.del.termoperíodo.y.de.la.velocidad.de.desarrollo.gonadal.sobre.la.calidad.final.de.los.gametos..

BibliografíaAarestrup,.K.,.Økland,.F.,.Hansen,.M.M.,.Righton,.D.,.Gargan,.P.,.Castonguay,.M.,.Bernatchez,.L.,.Howey,.P.,.Sparholt,.H.,.Pedersen,.M.I.,.McKinley,.R.S..2009..Oceanic.spawning.migration.of.the.European.Eel.(Anguilla anguilla)..Science 325.(5948):.1660..Burzawa-Gérard,.E.,.Nath,.P.,.Baloche,.S.,.Peyon,.P..1991..ELISA.(enzyme.linked.immunosorbent.assay).for.vitellogenin.and.vitellus.in.the.eel.(Anguilla anguilla L.).and.in.the.Indian.major.carp.(Labeo rohita)..4th.Int..Symp..Reproductive.Physiology,.Norwich,.7–12.July..Clark,.R.W.,.Henderson-Arzapalo,.A.,.Sullivan,.C.V..2005..Disparate.effects.of.constant.and.annually-cycling.daylenght.and.water.tempera-ture.on.reproductive.migration.of.striped.bass.(Morone saxatilis)..Aquaculture.249:.497-513.Pérez,.L.,.Peñaranda,.D.S.,.Dufour,.S.,.Baloche,.S.,.Palstra,.A.P.,.Van.Den.Thillart,.G.E.E.J.M.,.J.F..Asturiano..2011. Influence.of.tempera-ture.regime.on.endocrine.parameters.and.vitellogenesis.during.experimental.maturation.of.European.eel. (Anguilla anguilla). females..General and Comparative Endocrinology..En.prensa.

AgradecimientosFinanciado. por. el. 7º. Programa. Marco. de. la. Unión. Europea. (grant. agreement. 245257,. proyecto. Pro-Eel). y. la. Generalitat. Valenciana.(ACOMP/2011/229)..I.M..and.V.G..tienen.becas.predoctorales.de.la.Generalitat.Valenciana.y.del.MICINN,.respectivamente..D.S.P..tiene.una.beca.posdoctoral.de.la.UPV.(CE-01-10).


62

Reproducción

Efecto de GABA, epinefrina e iones K+ en la fijación de larvas de mejillón (Mytilus galloprovincialis)C..Sánchez-Lazo.e.I..Martínez-PitaIFAPA Centro Agua del Pino. Carretera Punta Umbría-Cartaya Km. 3.8. CP 21495, Huelva, Spain. [email protected]

Abstract Herein.we.present.a. laboratory.study.on.the.effect.of.neuroactive.compounds.on. larval.settlement.of.mussel.Mytilus galloprovincialis..Competent. hatchery-reared. larvae. were. exposed. to. seawater. at. different. concentrations. of. γ-aminobutiric. acid. (GABA),. epinephrine.and.K+.in.the.form.of.KCl.and.K2SO4..GABA.induced.settlement.at.10-5M,.but.displayed.acute.toxic.effects..At.10-4M,.epinephrine.induced.high.settlement.(>90%).and.did.not.affect.larval.mortality..Peak.settlement.response.to.KCl.was.higher.(100%).than.that.achieved.with.K2SO4.(>49%)..KCl.and.epinephrine.were.both.effective.inducers.with.minimal.toxic.effects;.however,.KCl.is.a.cheaper.and.easily.available.chemical,.and.therefore.it.may.potentially.be.of.interest.for.mussel.hatcheries..

JustificaciónEl.cultivo.de.mejillón.es.una.actividad.productiva.con.amplia.presencia.mundial,.y.se.encuentra.en.expansión.en.numerosos.países..La.especie.Mytilus galloprovincialis.se.cultiva.principalmente.en.China,.Galicia.y. las.costas.del.norte.del.Mediterráneo..Su.producción.en.Europa.depende.exclusivamente.de.la.recolección.de.juveniles.(semilla).del.medio.natural,.que,.sin.embargo,.no.siempre.satisface.las.necesidades.de.los.productores..Los.criaderos.de.bivalvos.reducen.la.dependencia.de.semilla.salvaje.y.proporcionan.oportunidades.para.la.mejora.genética.de.las.especies.de.interés.comercial..Sin.embargo,.existe.un.“cuello.de.botella”.en.la.producción.artificial.de.semilla.de.mejillón.asociado.con.una.fijación.poco.eficiente.(<30%).e.impredecible.de.las.larvas.(Young,.Alfaro.y.Robertson,.en.prensa)..En.este.estudio.se.investigó.el.efecto.de.ácido.β-aminobutírico.(GABA),.epinefrina.e.iones.potasio.(K+).en.forma.de.KCl.y.K2SO4.sobre.la.fijación.de.larvas.competentes.del.mejillón.M..galloprovincialis..Nuestro.objetivo.fue.ampliar.conocimientos.sobre.los.mecanismos.bioquímicos.implicados.en.este.proceso.y.analizar.su.posible.aplicación.en.acuicultura.

Material y MétodosEn.la.primavera.de.2011.se.obtuvieron.varias.puestas.inducidas.de.mejillones.(M. galloprovincialis).adultos.provenientes.del.medio.natural..Las.larvas.resultantes.se.cultivaron.en.circuito.cerrado.a.22±1ºC,.y.se.alimentaron.ad libitum.con.una.mezcla.de.microalgas..Los.cambios.de.agua.de.los.cultivos.se.realizaron.cada.3-4.días..Las.larvas.tenían.una.edad.de.20-22.días.en.el.momento.en.que.se.analizaron.los.ensayos..Para.cada.sustancia.ensayada.se.prepararon.una.o.varias.soluciones.madre..A.partir.de.éstas,.se.realizaron.diferentes.diluciones.en.placas.Petri.de.5cm.de.diámetro.(para.mantener.la.concentración.de.K+,.las.concentraciones.ensayadas.de.KCl.fueron.el.doble.de.las.de.K2SO4)..Para.cada.tratamiento.se.dispusieron.8.placas.(réplicas)..Finalmente.se.añadieron.20-30.larvas.a.cada.placa..Las.placas.se.mantuvieron.en.oscuridad.durante.48±3h.a.22±1ºC..Al.cabo.de.este.tiempo.se.analizaron.la.fijación.y.la.mortalidad.de.cada.placa.bajo.la.lupa..Para.analizar.la.fijación.se.ejerció.sobre.cada.larva.un.suave.flujo.de.agua.con.una.micropipeta;.las.larvas.que.se.mantuvieron.adheridas.al.sustrato.se.consideraron.fijadas..Para.analizar.la.mortalidad.se.consideraron.vivas.aquellas.larvas.en.las.que.se.detectó.movimiento.

Resultados y DiscusiónTabla 14Fijación y mortalidad de larvas de M. galloprovincialis expuestas a diferentes concentraciones de GABA, epinefrina, KCl y K

2SO

4. Los

datos corresponden a medias ± desviación estándar (SD) de 8 réplicas. Para cada sustancia, las letras indican diferencias significativas en fijación y los símbolos indican diferencias significativas en mortalidad (ANOVA de una vía y test post-hoc de Tukey, p<0.05)

SUSTANCIA CONCENTRACIÓN FIJACIÓN ± SD (%) MORTALIDAD ± SD (%)

GABA

0 21.7.±.9.4ª 6.0.±.6.3*

10-6M 16.2.±.3.8ª 21.6.±.8.3+

10-5M 59.3.±.9.4b 67.0.±.7.3#

10-4M 84.7.±.5.7c 84.0.±.3.6$

10-3M 98.8.±.2.2d 83.6.±.8.5$

Epinefrina

0 15.7.±.4.5ª 1.9.±.2.9*

10-6M 13.2.±.5.3ª 0.8.±.2.1*

10-5M 57.0.±.12.5b 0.0.±.0.0*

10-4M 94.6.±.2.0c 2.5.±.2.7*

10-3M 100.0.±.0.0d 87.8.±.8.5+

KCl

0 18.6.±.9.0ª 0.0.±.0.0*

10mM 16.7.±.7.6ª 0.0.±.0.0*

20mM 100.0.±.0.0b 7.1.±.6.7+

30mM 100.0.±.0.0b 34.6.±.7.2#

40mM 100.0.±.0.0b 81.9.±.9.8$

K2SO4

0 15.5.±.4.6ª 1.3.±.1.8*

5mM 32.6.±.11.9b 30.4.±.8.8+

10mM 60.0.±.9.0c,d 41.5.±.13.6+,#

15mM 46.4.±.8.1c 35.3.±.13.2+,#

20mM 69.7.±.5.1d 49.0.±.18.1#

O-050


63

Economía

Este. trabajo. amplía. otros. que. han. tratado. el. efecto. de. sustancias. neuroactivas. sobre. la. metamorfosis. y. fijación. de. larvas. de. M. galloprovincialis.(e.g..García-Lavandeira.et al.,.2005).Los.resultados.obtenidos.en.el.presente.estudio.se.muestran.en.la.tabla.1..Todas.las.sustancias.indujeron.la.fijación.en.alguna.de.las.concentraciones.ensayadas..GABA.y.epinefrina.indujeron.la.fijación.de.manera.similar;.sin.embargo,.la.toxicidad.de.GABA.fue.mayor..K2SO4.fue.menos.eficiente.que.KCl.en.inducir.la.fijación,.y.además.provocó.mortalidades.mayores.en.las.concentraciones.más.pequeñas.de.K+..Estos. resultados. refuerzan. el. potencial. interés. que. el. uso. de. sustancias. neuroactivas. como. el. KCl. (inductor. eficaz. y. barato). podría.suponer.para.la.producción.de.semilla.de.mejillón.en.criadero..

BibliografíaGarcía-Lavandeira,.M.,.A..Silva,.M..Abad,.A.J..Pazos,.J.L..Sánchez.y.M.L..Pérez-Parallé..2005..Effects.of.GABA.and.epinephrine.on.the.settlement.and.metamorphosis.of.the.larvae.of.four.species.of.bivalve.molluscs..Journal of Experimental Marine Biology and Ecology.316:.149-156.Young,.T.,.A.C..Alfaro.y.J..Robertson..En.prensa..Effect.of.neuroactive.compounds.on.the.settlement.of.mussel.(Perna canaliculus).larvae..Aquaculture..

AgradecimientosEste.trabajo.se.ha.subvencionado.con.el.Subprograma.de.Formación.de.Personal.Investigador.en.Agroalimentación.en.los.Centros.de.Investigación.INIA-CCAA.(Gobierno.de.España).y.con.el.proyecto.“Viabilidad.del.cultivo.de.mejillón.(Mytilus galloprovincialis).a.partir.de.semilla.producida.en.criadero”..

Actitudes y percepciones del consumidor sobre los productos pesqueros procedentes de la acuicultura. Un estudio cualitativoC..Escobar,.J.M..GilCREDA–UPC–IRTA. Parc Mediterrani de la Tecnologia. Edifici ESAB. C/ Esteve Terrades 8, 08660, CastelldefelS. [email protected]

AbstractNuestro.trabajo.se.centra.en.las.percepciones.y.actitudes.del.consumidor.hacia.los.productos.pesqueros,.enfatizando.en.las.relacionadas.con.los.productos.procedentes.de.la.acuicultura..Para.ello,.se.han.realizado.dos.reuniones.de.grupo.con.consumidores.del.área.metro-politana.de.Barcelona,.diferenciándolos.según.su.frecuencia.de.consumo.de.productos.pesqueros..Los.resultados.muestran.unas.per-cepciones.positivas.sobre.el.consumo.de.estos.productos,.existiendo.una.confrontación.de.opiniones.respecto.a.la.producción.acuícola..Los.principales.inconvenientes.declarados.de.este.tipo.de.producciones.se.centran.en.el.tipo.de.alimentación.que.reciben.los.animales,.su.sabor.y.la.comparativa.con.las.granjas.de.pollos..Por.otro.lado,.los.aspectos.positivos.señalan.un.mayor.control.y.un.menor.precio.Palabras clave:.Actitudes.del.consumidor,.Acuicultura,.Análisis.cualitativo.

JustificaciónEn.Cataluña,.la.demanda.de.productos.pesqueros.en.el.hogar.experimenta,.en.los.últimos.años,.un.crecimiento.continuado.(DAAM,.2010)..Por.otra.parte,.la.oferta.experimenta.una.reducción.en.cuanto.a.las.capturas.pesqueras.(DAAM,.2009)..Considerando.esta.perspectiva,.la.acuicultura.presenta.un.gran.potencial.para.provisionar.los.mercados.catalanes..La.producción.acuícola.catalana.se.encuentra.en.crecimiento..No.obstante,.el.peso.de.la.acuicultura.en.el.consumo.doméstico.es.todavía.reducido..Concretamente,.en.España,.la.acuicul-tura.representa.en.el.2009.el.9,5%.del.consumo.total.per.cápita.(FEAP)..Uno.de.los.retos.a.los.que.se.enfrenta.la.acuicultura.catalana.y.europea.es.comunicar.y.promocionar.la.imagen.de.un.sector,.que.considera.fundamental.una.producción.respetuosa.con.el.medio.am-biente.(COM2009.162.final)..Por.este.motivo,.se.hace.necesario.conocer.cuáles.son.las.percepciones.del.consumidor.en.Cataluña.hacia.la.acuicultura..De.esta.manera,.y.tomando.como.centro.de.interés.el.consumidor,.se.realiza.un.estudio.exploratorio.para.determinar.el.comportamiento.de.compra.y.las.motivaciones.del.consumidor..A.su.vez.se.determinan.las.actitudes,.percepciones.y.el.conocimiento.del.consumidor.hacia.los.productos.pesqueros.y.hacia.la.acuicultura..

Material y MétodosNuestro.trabajo.aborda.los.objetivos.planteados.a.partir.de.una.investigación.cualitativa,.implementada.mediante.dos.Reuniones.de.grupo.(Focus groups).a.consumidores.objetivo..Los.grupos.se.segmentaron.según.la.frecuencia.de.consumo.semanal.de.productos.pesqueros,.con.el.objetivo.de.diferenciar.actitudes.y.comportamientos.como.resultado.de.un.diferente.grado.de.conocimiento.del.producto..De.esta.manera,.en.el.primer.grupo,.el.consumo.de.productos.pesqueros.es.de.hasta.tres.veces.a.la.semana,.lo.que.consideraríamos.como.un.consumo.moderado;.mientras.que,.en.el.segundo.grupo,.el.consumo.asciende.a.un.mínimo.de.cinco.veces.a.la.semana..Los.componen-tes.de.las.Reuniones.de.grupo.fueron.seleccionados.aleatoriamente,.cumpliendo.el.criterio.de.ser.los.responsables.de.la.compra.y.de.la.elaboración.de.productos.pesqueros.en.el.hogar..Esta.selección.resultó.en.una.participación.compuesta.íntegramente.por.mujeres..Las.reuniones.se.celebraron.en.la.ciudad.de.Barcelona,.con.8.consumidoras.de.su.área.metropolitana.por.cada.grupo..Las.reuniones.fueron.llevadas.a.cabo.según.los.procedimientos.estándar.de.este.tipo.de.investigación.(Morgan.et.al..1993;.Morgan,.1998a,b)..En.ambos.casos.se.utilizó.una.sala.de.reuniones.con.equipamiento.de.grabación.audiovisual..La.duración.de.las.reuniones.fue.de.una.hora..Previo.a.su.reali-zación,.se.diseñó.una.guía.de.los.temas.a.tratar,.en.concordancia.con.los.objetivos.del.estudio..Los.temas.analizados.fueron.planteados.de.lo.más.general.a.lo.más.específico..Las.grabaciones.recogidas.fueron.transcritas.textualmente..Posteriormente,.se.revisó.la.información.con.el.objetivo.de.identificar.tendencias.y.patrones.entre.las.consumidoras..El.análisis.de.resultados.se.realizó.mediante.codificación.y.la.clasificación.de.los.contenidos,.utilizando.el.marco.organizativo.de.la.guía.de.discusión.y.las.tendencias.y.patrones.observados..Los.temas.emergentes.fueron.identificados.de.un.listado.de.respuestas.más.frecuentes..Para.el.análisis.de.contenidos.se.utilizó.el.programa.de.software.NVivo.7.(NVivo,.2006).

Resultados y DiscusiónEl.consumidor.manifiesta.aspectos.positivos.respecto.al.consumo.de.productos.pesqueros,.destacando.especialmente.su.sabor.y.su.contribución.a.una.alimentación.sana.y.equilibrada..En.el.grupo.de.consumo.moderado,.también.surgen.algunos.aspectos.negativos,.aunque.creen.que.deberían.aumentar.su.frecuencia.de.consumo.La.compra.en.pescadería,.mayoritaria.en.el.grupo.de.consumo.elevado,.se.asocia.a.la.confianza.en.el.vendedor,.y.a.un.producto.fresco.y.de.calidad..No.obstante,.los.centros.comerciales.son.preferidos.por.su.conveniencia,.a.pesar.de.que.la.confianza.en.el.vendedor.es.menor,.principalmente.a.causa.de.la.rotación.del.personal.y.a.su.menor.profesionalización..El.etiquetado.de.los.productos.pesqueros.se.asocia.mayoritariamente.al.origen.del.producto..Respecto.a.éste,.existe.interés.en.su.conocimiento,.manifestando.una.preferencia.por.el.producto.local..Sin.embargo,.el.aspecto.del.etiquetado.es.sugerido.por.los.investigadores.en.ambos.grupos.

O-052


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Economía

La.acuicultura.se.menciona.espontáneamente.en.el.grupo.de.consumo.elevado..Las.participantes.conocen.el.concepto,.diferenciando.algunas.sus.productos.de.los.de.la.pesca.extractiva..Por.otro.lado,.las.consumidoras.de.frecuencia.moderada,.a.pesar.de.declarar.co-nocer.en.qué.consiste,.muestran.una.mayor.inseguridad..Las.actitudes.hacia.la.acuicultura.están.divididas.en.ambos.grupos..Las.par-tidarias.destacan.un.mayor.control.y.un.menor.precio;.mientras.que.las.contrarias.destacan.la.alimentación.que.reciben,.su.sabor.y.la.comparativa.con.las.granjas.de.pollos..En.algunos.casos.las.opiniones.negativas.están.vinculadas.a.una.idealización.del.pescado.que.vive.en.el.mar: “el natural”, “el de verdad”..No.obstante,.a.pesar.de.los.aspectos.positivos.señalados.parece.haber.una.generalización.hacia.una.preferencia.por.el.producto.procedente.de.la.pesca.extractiva,.sobre.todo.por.su.mejor.sabor..Sin.embargo,.esta.preferencia.vendría.condicionada.por.el.precio.y.por.el.origen.del.producto..Cuando.la.acuicultura.se.presenta.como.una.producción.local,.se.refuerzan.las.actitudes.positivas.hacia.ésta..De.todos.modos,.y.especialmente.para.el.grupo.de.consumo.moderado,.esta.combinación.de.atributos.no.debería.suponer.un.incremento.en.el.precio.del.producto.final.

BibliografíaCOM2009.162.finalDAAM..2010..Departament.d’Agricultura,.Ramaderia,.Pesca,.Alimentació.i.Medi.Natural..Estadísticas.de.consumo.en.el.hogar.DAAM..2009..Departament.d’Agricultura,.Ramaderia,.Pesca,.Alimentació.i.Medi.Natural..Estadísticas.pesqueras.FEAP.en.Presentación.Máster.Interuniversitario.Oficial.de.Acuicultura.(UaB,.UPC.y.UB)..2010.Morgan,.D.L..1998a..The focus group guidebook. Focus Group Kit 1..Thousand.Oaks:.Sage.Publications.Inc.Morgan,.D.L.1998b..Planning focus groups. Focus Group Kit 2..Thousand.Oaks:.Sage.Publications.Inc.Morgan,.D..y.Krueger,.R.A..1993..When to use focus groups and why..In.D..Morgan.(Ed.),.Successful focus groups: Advancing the state of the art.(pp..3−19)..Newbury.Park,.CA.and.London:.Sage.Publications.NVivo..2006..Qualitative data analysis software..QSR.International.Pty.Ltd..

Agradecimientos (350 palabras)Este.proyecto.ha.sido.financiado.a.través.Plan.de.Dinamización.del.Clúster.Acuícola.de.Catalunya,.AqüiCAT,.liderado.por.el.IRTA.i.ACC1Ó.

Planificación y reflexión socioeconómica para el desarrollo de la acuicultura en el País VascoD..Mendiola.y.I..Galparsoro.AZTI-TTecnalia. Unidad de Investigación Marina, Herrera Kaia, portualdea z/g, Pasaia, Gipuzkoa. e-mail: [email protected]

Abstract During.the.last.years,.the.global.production.from.Basque.capture.fisheries.reaches.210.190,00.Tm;.however,.most.of.the.exploited.fishing.areas.and.commercial.species.have.already.reached.their.maximum.potential..Reductions.in.the.commercial.landings.signify.a.dramatic.change.in.the.populations.of.some.of.the.most.popular.local.fish.species..Local.fishing.production.in.the.Basque.region.has.decreased.from.91.451.Tm.to.65.956.Tm,.between.2001.and.2010..Fish.food.consumption.volume.in.the.Basque.area.has.reached.65.002.Tm.in.2010,.corresponding.to.a.per capita.consumption.rate.of.31,3.kg/per/year..This.highlights.the.importance.of.the.fish.as.food,.to.the.Basque.so-ciety..Although.aquaculture.is.developing.in.almost.all.regions.of.Europe,.this.has.not.occurred.in.the.Basque.Country..During.the.last.years,.the.Basque.Government.has.decided.to.promote.aquaculture.with.the.aim.of.creating.a.sustainable.and.complementary.activity.to.the.fishing.sector.operating.within.the.region.

JustificaciónFish.consumption.volumes.in.the.Basque.Country.are.supposed.to.be.highly.dependent.on.the.current.fish.importation.volumes.(67.797.Tm.in.2010),.which.mainly.comprises.of.pelagic.and.demersal.species..Further,.the.local.seafood.processing.industry.also.exports.high.volumes.(119.985.Tm).of.previously.imported.fish..Aquaculture.industry.has.historically.been.a.marginal.activity.in.the.Basque.Country.where.it.represents.just.1.2%.of.the.total.fishing.production. of. the. region.. The. two. only. marine. aquaculture. companies. have. either. liquidated. or. filed. for. bankruptcy;. resulting. in. a.presumed.57%.reduction.of.(direct).employment.in.the.sector.with.more.than.50.workers.becoming.unemployed..The.Basque.Country.is.in.an.excellent.position.to.capitalize.on.aquaculture.opportunities..The.region,.located.within.close.proximity.to.many.major.Spanish.markets,.has.endemic.abundance.of.natural.and.agricultural.resources,.and.boasts.a.dedicated.network.of.techno-logical.specialists,.infrastructures.and.fishing.enterprises.

Material y Métodos Below.is.the.schematic.process.of.activities.and.contents.developed.within.the.framework.of.the.Draft.Regional.Aquaculture.Plan.

O-053

Fig 14Basic. scheme. of. the. general.conducted.process.for.the.development.of.the.Aquaculture.Plan.


65

Economía

Resultados y Discusión The.low.development.of.the.Basque.aquaculture.industry.has.mainly.been.as.a.result.of.the.following.factors:.(i.).high.competition.of.coastal.space. (conservation,. tourism,.navigation,.population.establishment.and.so.on);. (ii.).high.energetic.oceanographic.and.meteorological.conditions.(not.suitable.for.floating.systems);. (iii.). low.water.quality.conditions. in.estuarine.areas;. (iv.).strong.cultural. tradition.of. the.commercial. fishing. and. maritime. sectors;. (v.). profitability. of. the. ongoing. fishing. product. export. and. import. operations;. lack. of. RTD.resources.in.the.field.of.aquaculture;.and.(vi.).market.competition..The.contents.of.this.study.describe.state.of.the.art.developments,.regulatory.considerations,.market.and.RTD.tendencies.and.strategies,.SWOT. analysis,. technological. planning. (species,. systems),. local. resources. (stakeholders. for. investment,. research. or. education. in.aquaculture. developments),. ICZM. studies. based. on. specific. proposals. and. so. on.. Each. of. the. contents. and. recommendations. of. the.Basque.Regional.Plan.represents.the.outcomes.of.a.fluid.series.of.transparent.meetings,.interviews.and.consensus.activities.carried.out.between.the.main.stakeholders.from.the.region.and.the.Public.Administration..Furthermore,.it.includes.a.proposal.of.22.strategic.specific.actions.and.12.different.tentative.coastal.locations.for.installing.aquaculture.production.farms..

Currently,.the.operative.context.of.the.Draft.Aquaculture.Plan.remains.integrated.within.the.Basque.Country.Fisheries.Strategic.Plan.2009-20013.and.the.priority.axis.of.the.European Fisheries Fund.(EFF).programme..Those.commercial.farming.proposals.that.don’t.fulfill.the.minimum.guarantees.(i.).to.conserve.natural.resources;.(ii.).to.economically.sustain.company.activities;.or.(iii.).to.make.compatible.its.activity.with.coastal.integrity,.wont.be.subject.to.financial.support.from.the.regional.public.funds..

Bibliografía Mendiola,.D.,.Puente,.E.,.Galparsoro,.I.,.del.Campo,.A.,.Liria,.P.,.Bald,.J.,.Castro,.R.,.Uriarte,.A.,.Motos,.L..2010..EAE-ko.Akuikulturarako.Plan.Zuzentzailea.2009-2013,.Plan.Director.de.Acuicultura.de.la.Comunidad.Autónoma.Vasca.. Informe.Técnico.de.AZTI-Tecnalia.para.Dpto..Agricultura,.Pesca.y.Alimentación.del.Gobierno.Vasco..176pp+.anex..

Agradecimientos A.los.equipos.de.(i.).Departamento.de.Medio.Ambiente,.Planificación.Territorial,.Agricultura.y.Pesca.del.Gobierno.Vasco;.(ii.).Sección.Or-denación.de.la.Acuicultura.de.la.Consejería.de.Agricultura,.Ganadería,.Pesca.y.Alimentación.del.Gobierno.de.Canarias y.(iii.).Consellería.de.Pesca,.Marisqueo.e.Acuicultura,.Dirección.Xeral.Recursos.Mariños.de.Galicia,.los.cuales.asesoraron.a.AZTI.Tecnalia.durante.el.desarrollo.de.este.estudio;.principalmente.gracias.a.D..Fernando.Otero.y.al.equipo.de.Dña..Teodora.Antúnez.

Fig 24Some.specific.proposals.for.the.location. of. new. and/or. transformed.aquaculture.farm.in.the.coastal.region.of.the.Basque.Country..

Análisis conceptual de la viabilidad socioeconómica del uso de sistemas longline para el engorde sumergido en mar abierto de moluscos bivalvos en el País VascoD..Mendiola1,.M..Andrés2,.S..Riesco2,.P..Liria1,.M.Gonzalez1

1AZTI-Tecnalia. Unidad de Investigación Marina, Herrera Kaia, portualdea z/g, Pasaia, Gipuzkoa2AZTI-Tecnalia. Unidad de Investigación Alimentaria, Astondo Bidea, Edificio 609 - Parque Tecnológico de Bizkaia - 48160 Derioe-mail: [email protected]

Abstract This.project.is.focused.on.the.assessment.of.a.technical.and.socioeconomic.feasibility.study.for.installing.submerged.longline.systems.in. the.offshore.waters.of. the.Bay.of.Biscay..A.comprehensive.data.set.on. the.most. important.physical,.geomorphic,.human.use,.and.ecological.considerations.for.selecting.an.appropriate.site.for.developing.open.ocean.shellfish.farming.activities.in.the.region.have.been.

O-054


66

Economía

studied..Initially,.primary.production,.in.the.region,.is.expected.to.be.abundant,.heterogeneous.and.variable.between.different.seasons.(Irigoien,.2006)..Several.substantial.areas.of.flat.sand.bottom.totaling.700Ha,.have.been.successfully. identified..The. temperatures.at.the.region.are.well.within.the.appropriate.physiological.ranges..The.region.is.well.known.for.high.energy.sea.conditions,.and.therefore.presents.structural.and.operational.challenges..Those.conditions,.however,.are.not.unlike.conditions.in.other.countries,.where.mussel.longlines.have.been.in.operation,.without.damage.from.sea.conditions..Therefore,.it.is.likely.feasible.that.a.longline.system.can.be.built.to.withstand.ocean.conditions.in.the.Bay.of.Biscay.but.additional.insitu.investigations.are.required..

Justificación En.contextos.de.crisis,.las.actividades.de.acuicultura.en.otros.países.han.servido.de.motor.para.la.revitalización.de.algunos.sectores.y. comunidades. pesqueras. (e.g.. Earll,. 1880;. Solemdal. et al.,. 1984;. NRC,. 2008).. La. ostra. plana. (Ostrea edulis),. el. mejillón. (Mytilus galloprovincialis.).y.la.almeja.fina.(Ruditapes sp).son.especies.autóctonas.del.País.Vasco..Su.distribución.abarca.diferentes.áreas.dentro.del.Urdaibai.ó.Plentzia.(entre.otras),.comprendiendo.a.su.vez,.diferentes.denominaciones.ambientales.de.uso.y.explotación..Con.precios.promedio.en.lonja.de.7.a.0,5.β/kg,.la.rentabilidad.de.la.ostra,.la.almeja.ó.el.mejillón.se.justifica.por.su.alta.aceptación.y.volumen.de.consumo.alimentario..El.precio.doméstico.de.estos.productos.puede.alcanzar.valores.de.entre.20.y.60β/kg,.según.época.del.año.(FROM,.2008)..Francia.es.el.principal.mercado.para.la.ostra.y.la.almeja.en.Europa.con.valores.de.consumo.anual.promedio.superiores.a.las.125.000.t.por.especie..El.valor.de.consumo.doméstico.per capita.de.ostra.y.almeja.en.el.País.Vasco.es.de.0.31.y.0.67.Kg/año,.respectivamente.(FROM,.2007);.pero.actualmente,.todo.el.producto.consumido.es.de.importación..Ante.estas.y.otras.consideraciones,.la.propuesta.de.este.proyecto,.comprende.testar.la.viabilidad.de.engordar.ostra,.mejillón.y/o.almeja.en.zonas.expuestas.de.mar.abierto.(6-8.millas.de.la.costa.vasca).mediante.el.uso.de.sistemas.artesanales.sumergidos.“longline”.Los. beneficios. del. presente. proyecto. son:. 1.. Posibilidad. de. crear. una. nueva. actividad. extractiva. complementaria. con. rendimiento.económico. estacional. para. el. sector. pesquero. del. Pais. Vasco;. 2.. Diversificar. en. especies. la. actividad. extractiva. y. minimizar. riesgos.económicos.derivados.de.la.variación.anual.de.los.recursos.o.la.sobreexplotación;.3..Aportar.nueva.materias.primas.para.las.industrias.alimentarias.de.la.región;.4..Aportar.sistema.de.depuración.de.almeja.y.ostra.en.áreas.de.repoblación.con.categoría.C;.5..Generar.nuevos.productos.alimentarios.

Material y Métodos Entre.noviembre.2009.y.diciembre.2010,.AZTI.realizó.series.de.reuniones.con.empresas.del.sector.pesca.artesanal.y.agentes.usuarios.de.dispositivos.sumergidos.longline.de.diferentes.partes.del.mundo..Se.trataron.de.entender.aspectos.referentes.a.requisitos.logísticos,.herramientas.y.método.de.producción,.costes.y.grado.de.satisfacción.y/o.beneficios.económicos.derivados.de.las.prácticas.de.producción.en.mar.abierto.de.cada.caso..A.su.vez,.se.realizaron.reuniones.de.contraste.con.grupos.científicos..Se.realizaron.series.de.reuniones.con. patrones. del. sector. artesanal. del. País. Vasco,. para. definir. problemas. técnicos. y. no. técnicos. relacionados. con. la. idoneidad. de.ubicaciones,.las.herramientas.necesarias,.los.roles.de.explotación,.opciones.de.reconversión,.conflictos.de.usuarios,.etc..Durante.esta.fase,.se.identificaron.todas.las.necesidades.sobre.herramientas.y.procedimientos.operativos.y.se.encuestó.a.los.patrones,.en.relación.a.la.actividad.propuesta..Se.realizó.un.modelo.de.negocio.preliminar.orientativo.para.entender.los.detalles.de.coste,.producción.y.rentabilidad.económica.asociados.a.la.explotación.de.este.tipo.de.actividad.en.el.País.Vasco.(Hoagland,.2003)..A.continuación,.se.recabó.información.con.los.aspectos.relacionados.con.la.producción.y.el.mercado.de.las.especies..La.información.recabada.pretendió.ser.una.orientación.al.escenario.de.tendencias.(desde.el.mercado.a.la.cadena.de.valor)..Para.la.selección.de.zonas.marinas.adecuadas.se.tuvieron.en.cuenta.diversos.factores.medioambientales,.socioeconómicos.y/o.técnicos.con.carácter.de.aplicación.normativo.en.el.País.Vasco..La.información.recabada. se. organizó. en. formato. geográfico. y. se. representó. cartográficamente. utilizando. Sistemas. de. Información. Geográfica. (GIS;.ArcView.3)..Finalmente,.se.utilizó.el.software.de.simulación.AquaFE.Ocean.Engineering./.UNH,.para.el.estudio.de.diseño.de.estructuras..

Resultados y Discusión Los.resultados.de.este.proyecto.han. indicado.que.existen.oportunidades,.para. la.construcción.y. rendimiento.productivo.de.sistemas.sumergidos.longline.en.el.mar.abierto.del.País.Vasco..Se.identifica.una.clara.predisposición.de.la.flota.pesquera.y.las.empresas.del.sector.local.a.participar.e.invertir.en.actividades.de.producción.acuícola.ligadas.a.la.utilización.de.sistemas.sumergidos.longline..Principalmente,.existen.nichos.de.mercado.(local.e.internacional).y.oportunidades.de.producción.y.comercialización.para.las.especies.de.cultivo.en.longline (Ej..Mejillón.y.ostra).que.propongan.características.nutricionales.diferenciales..Existen.varias.opciones.y.formulas.de.comercialización.utilizables.para.diversificar.la.oferta.en.la.gama.de.productos.con.base.en.mejillón.y.ostra.A priori,. se. han. identificado. 2. ubicaciones. CAPV. apropiadas. normativa. y. técnicamente. para. la. instalación. y. operación. de. sistemas.sumergidos. longline.. Sus. características. son. (i.). cercanas. a. puertos. comerciales;. (ii.). bajo. hidro-dinamismo;. (iii.). tipología. de. fondos.arenoso. llanos;. y. (iv.). normativa. no. excluyente.. Dichas. ubicaciones. se. encuentran. frente. a. las. localidades. de. Mendexa. y. Elantxobe.(Bizkaia).en.la.posición.batimétrica.de.los.50m..Sin.embargo,.no.se.ha.recabado.información.biológica.suficiente.(SPM,.POM,.clorofilas.y.ausencia.de.parásitos,.principalmente).para.valorar.el.potencial.real.de.crecimiento.y.supervivencia.de.las.especies.

Figura 14Rango.de.temperatura.superficial.máxima.y.mí-nima.del.agua.del.mar.frente.a.las.costas.vascas.

En. colaboración. con. varias. empresas. vascas,. AZTI. ha.participado. en. el. desarrollo. del. concepto. de. ingeniería.que. podría. prevenir. la. integridad. de. la. estructura. de.cultivo. frente. a. las. condiciones. océano-meteorológicas.de. la. zona.. Tras. la. realización. de. esta. primera. fase. de.análisis.conceptual,.se.recomienda.realizar.pruebas.piloto.de. producción. en. mar. abierto. donde. se. validen. insitu;. (i.).el. prototipo. de. instalación. propuesta;. (ii.). la. idoneidad.bio-fisica.de. la.zona;. (iii.).el. rendimiento.metabólico.y. los.perfiles. nutricionales. de. las. especies. cultivadas;. (iv.). la.evaluación.de.los.impactos.ambientales;.y.(v.).la.viabilidad.económica..La.consecución.de.estos.objetivos.revelará.las.oportunidades.de.transferencia.al.sector.de.dicho.actividad..


67

Economía

Consumers’ preference for mussel consumption in Catalonia: A choice experiment approachC..Escobar1,.Z..Kallas1,.J.M..Gil1.1CREDA–UPC–IRTA. Parc Mediterrani de la Tecnologia. Edifici ESAB. C/ Esteve Terrades 8, 08660, Castelldefels. [email protected]

AbstractIn.this.paper.we.analyze.consumers’.preferences.for.mussels.in.Catalonia.by.means.of.a.Choice.Experiment.(CE)..Data.used.are.obtained.from.a.structured.questionnaire.applied.to.233.mussel.consumers..Results.show.that.consumers’.preferences.for.mussels.are.highly.heterogeneous..However,.a.main.trend.has.been.shown.which.describes.the.relative.importance.of.the.main.attributes.of.the.product..Keywords:.Heterogeneity.preferences,.Mussel,.Conditional.logit.model

Justification One.of.the.main.produced.seafood.products.in.Catalonia.is.the.mussel..In.2008.its.production.concentrated.53.0%.of.the.volume.of.fish.farmed.products,.and.20.2%.of.its.value,.which.amounts.to.3,646.thousand.Euros.(DAAM,.2008)..Mussel.production.in.Catalonia.is.mainly.located. in. the. Ebro. Delta,. differentiated. under. the. name. of. “mussels. from. the. Ebro. Delta”.. However,. consumers. in. Catalonia. seem.not.to.be.very.aware.of.this.origin.label..Catalonia.is.mainly.a.mussel.exporter..Nevertheless,.export.data.show.a.slight.decrease.since.2004,.after.a.long.growing.period..In.2010,.the.yearly.reduction.of.mussel.exports.was.of.-5.5%.(DATACOMEX,.2010)..Mussel.household.consumption.per.capita.also.shows.a.continuous.diminishing.trend..Since.2004.it.diminished.in.-16.9%.(DAAM,.2010)..Mussels.can.be.found.in.several.presentation.formats.in.Catalonia,.being.the.most.common.a.fresh.product,.whether.loose.in.bulk.or.in.a.string.bag..However,. other. presentations. are. being. introduced. such. as. frozen. mussels. without. valves,. pre-cooked. vacuum. packaged. mussels,.amongst.others..These.newly.forms.of.presentation.have.also.been.introduced.in.other.countries.such.as.France.(Girard.S..et al..2003)..In.this.environment,.it.becomes.necessary.to.explore.consumer’s.preferences.and.heterogeneity.towards.mussels.in.Catalonia..With.this.purpose,.our.work.considers.the.following.attributes.and.their.levels:.(1).Mussels’.presentation,.considering.fresh.mussels.loose.in.bulk.and.in.string.bags,.and.frozen.mussels.without.valves,.(2).Mussels’.origin,.which.will.help.to.determine.the.necessity.of.promoting.the.regional.label.for.product.differentiation..For.this.attribute.three.origins.(attribute.levels).were.chosen,.including.Catalonia,.Galicia.and.Holland,.as.a.foreign.origin;.and.(3).Mussels’.production.system,.which.will.allow.to.assess.promoting.a.farmed.product.as.a.desirable.attribute.for.the.consumer.or.not.

MethodologyThe. CE. belongs. to. the. stated. preference.type. of. methods. and. is. based. on. the.creation. of. a. hypothetical. market. for. the.analyzed. goods. and. services.. Individuals.are. asked. which. product. they. would. buy.from. a. set. of. competitive. products. at.different. prices.. The. application. of. the. CE.implies. the. presentation. to. “subjects”. of.an. array. of. “choice. sets”. representing.different. possible. states. of. the. good. of.interest..Subjects.are.asked.to.choose.the.“alternative”. that. they. consider. the. best.within. each. choice. set.. An. example. of. a.choice.set.can.be.seen.in.Figure.1.The. conceptual. foundations. of. CE. rely. on.Lancaster’s. Theory. of. Value. (Lancaster,.1966),.which.proposes.that.utilities.for.goods.can.be.decomposed.into.separable.utilities.for. their. characteristics. or. attributes,.and. Random. Utility. Theory. (Thurstone,.1927)..Consumers’.heterogeneity.was.also.analyzed. and. included. in. the. Model. in.terms.of.interaction.between.the.attributes.and.respondents’.social economic.variables..In.our.work,.the.variables.included.are:.gender,.age,.household.social.class,.place.of.birth.and.purchase.frequency..Since.one.of. the.attributes. is.a.monetary.one.(price),. it. is.possible.to.determine. its.“implicit.price”.for.each.attribute..A.questionnaire.was.designed.and.233.mussels’.consumers.were.interviewed..To.make.the.analysis.affordable,.an.orthogonal.fractional.factorial.design.was.carried.out.which.considered.only.all.attributes’.main.effects..This.enabled.to.reduce.the.number.of.choice.sets.to.9.(Dawes.and.Corrigan,.1974).

O-056

Figure 14Example.of.a.choice.set.

Bibliografía Earll,.R..E..1880..A.report.on.the.history.and.present.conditions.of.the.shore.cod.fisheries.of.Cape.Ann,.Mass.,.together.with.notes.on.the.natural.variability.and.artificial.propagation.of.the.species,.pp..685-740..In.Report.of.the.Commissioner.for.1878..US.Commission.of.Fish.and.Fisheries,.Washington,.DC..FROM..2009..Estudio.sobre.Hábitos.de.Compra,.Conservación.y.Consumo.de.los.Productos.Pesqueros.en.la.Población.Española.Ministerio.de.Agricultura,.Pesca.y.Alimentación.de.España..Secretaria General de Pesca Marítima..Langan,.R..2007..Results.of.Environmental.Monitoring.at.an.Experimental.Offshore.farm.in.the.Gulf.of.Maine:.Environmental.Conditions.After.Seven.Years.of.Multi-species.Farming..In:.Open Ocean Aquaculture- Moving Forward,.C.S..Lee.and.P.J..O’.Bryen.eds..Oceanic.Institute.2007:.pp.57-60..Solemdal,. P.,. Dahl,. E.,. Danielssen,. D.. S.,. and. Moksness,. E.. 1984.. The. cod. hatchery. in. Flødevigen. e. background. and. realities.. In. The Propagation of Cod, Gadus morhua.L.,.pp..17-45..Ed..By.E..Dahl,.D..S..Danielssen,.E..Moksness,.and.P..Solemdal..Flødevigen.Rapportserie,.1.

Agradecimientos Los.autores.de.este.estudio.agradecen,.encarecidamente,.la.colaboración.prestada.por.la.empresa.ITSASKORDA.S.L,.los.patrones.de.las.Cofradías.de.Hondarribia,.Bermeo,.Pasaia.y.Lekeitio,.así.como.a.nuestros.colegas.y.amigos.Richard.Langan.y.Michael.Chambers.de.la.Universidad.de.New.Hampshire.(USA);.sin.su.colaboración.y.aportaciones.este.primer.estudio.conceptual.no.habría.sido.posible.


68

Calidad

Results and Discussion In.order.to.evaluate.the.heterogeneity.of.consumers’.preferences.we.estimate.a.specific.Conditional.logit.model.for.each.socio.economic.variable..Overall,.the.model.is.highly.significant.and.the.goodness.of.fit.is.acceptable..Results.show.that.all.parameters.are.statistically.significant,. indicating.that.the.attributes.and.levels.considered.in.our.experiment.are.significant.determinants.of.consumer’s.welfare..For.the.economic.interpretation.of.the.models.obtained,.the.Implicit.Prices.(IP).have.been.calculated..Results.obtained.show.that.mussel.preference.is.highly.heterogeneous..However,.a.general.trend.might.be.elicited.from.the.global.sample.results..Table.1.shows.the.average.IP.obtained.for.the.global.sample.

Table 1..Implicit.prices.for.the.global.sample

Results.show.a.stronger.preference. for.product.presentation,. followed.by. the.origin.and. the.method.of.production..For.presentation,.consumers.prefer.a.fresh.product,.loose.in.bulk.or.in.a.string.bag..Frozen.mussels.show.a.negative.willingness.to.pay..The.preferred.origin.is.Catalonia..Nevertheless,.mussels.from.Galicia.are.also.positively.valued..The.contrary.occurs.for.mussels.from.Dutch.origin..The.preferred.production.method.is.the.extractive.fishing,.as.it.obtained.positive.and.significant.willingness.to.pay..When.the.production.method.is.not.indicated.in.the.label,.or.when.the.mussel.is.been.produced.by.aquaculture,.implicit.prices.show.negative..These.results.could.be.explained.by.the.unawareness.of.the.consumer.about.mussels’.production..We.might.also.take.into.consideration.that.press.releases.about.red.tides.and.other.causes.for.temporary.closures.of.mussel.harvesting,.could.cause.a.negative.connotation.in.the.consumers.mind.towards.mussel.production..All.in.all,.fresh.mussel.from.Catalonia.and.obtained.by.extractive.fishing.is.the.preferred.product.

References DAAM..2010.and.2008..Departament.d’Agricultura,.Ramaderia,.Pesca,.Alimentació.i.Medi.Natural..Household.compsumtion.statistics.and.Extractive.Fishing.and.Aquaculture.Statistics.DATACOMEX..2010..External.trade.Statistics..Spanish.Ministry.of.Industry,.Tourism.and.Trade.Dawes.R..and.Corrigan.B..1974..Linear.models.in.decision.making..Psychological Bulletin..81(2):.95-99..Girard.S..and.Mariojouls.C..2003..French.consumption.of.oysters.and.mussels.analysed.within.the.European.market..Aquaculture Economics & Management..7(5-6):.319–333.Lancaster.K.J..1966..A.new.approach.to.consumer.theory..Journal of Political Economy..74(2):.132–157.McFadden.D..1974..Conditional logit analysis of qualitative choice behavior.. In.Zarembka,.P.. (ed),.Frontiers. in.econometrics..New.York:.Academic.Press..Thurstone,.L..1927..A.law.of.comparative.judgement..Psychological Review..34:.273–286.

Acknowledgements This.project.has.been.funded.by.the.Cluster.Plan.to.Promote.Aquaculture.of.Catalonia,.AqüiCAT,.led.by.IRTA.and.ACC1Ó.

O-058Criterios de calidad de agua para acuicultura basados en la protección del ecosistemaI..Jubany1,.J..Hurtado2,.F..Alsina2,.M..Montlleó3,.V..Martí1,.X..Martínez-Lladó1.y.M..Rovira1

1Fundació CTM Centre Tecnològic. Área de Tecnología Ambiental. Av. Bases de Manresa, 1. 08242 Manresa. [email protected] 2Litoral Consult. Marina Seca. Port Fòrum. 08913 Barcelona. [email protected] 3Barcelona Regional. C/ 60, 25-27- Edificio Z, 2º piso. Sector A. Zona Franca. 08040 Barcelona

AbstractOptimization.of.water.quality.is.central.in.the.field.of.aquiculture.in.order.to.protect.animal.welfare.and.product.quality..This.is.especially.important.for.the.design.and.optimization.of.life.support.systems.where.wastewater.is.treated.and.reused.in.the.system..The.objective.of.this.work.is.to.determine.water.quality.guidelines.for.the.aquiculture.field.in.order.to.protect.the.animal.welfare.avoiding.overtreatment.of.water.in.the.LSS.using.risk.assessment.tools..Both.freshwater.and.salt.water.ecosystems.are.considered.together.with.the.specific.case.of.coral.reefs..This.work.was.originally.performed.for.the.optimization.of.aquarium.systems.and.has.been.adapted.for.aquiculture.

JustificaciónLa.calidad.del.agua.es.fundamental.en.el.campo.de.la.acuicultura.para.la.obtención.de.un.producto.de.calidad..Además,.desde.el.punto.de.vista.del.bienestar.animal.y.de.la.sostenibilidad.del.sistema.de.tratamiento.de.agua,.la.optimización.de.la.calidad.del.agua.indica.una.gestión.correcta.y.optimizada.del.sistema.productivo..Este.punto.es.especialmente.de.interés.en.los.sistemas.de.acuicultura.con.recircu-lación.de.agua.en.los.que.el.correcto.funcionamiento.del.sistema.de.soporte.vital.(filtración,.eliminación.de.nutrientes,.desinfección,.etc.).condiciona.el.bienestar.del.animal.y.la.calidad.final.del.producto.

Attributes levels IP

Catalonia 1.64.(1.33;.1.99)

Galicia 0.52.(0.24;.0.79)

Holland -2.16.(-2.56;.-1.76)

Fresh.loose.in.bulk 1.66.(1.31;.2.01)

Fresh.in.a.string.bag 1.61.(1.31;.1.98)

Frozen.without.valves -3.27.(-3.89;.-2.81)

Extractive.fishing 0.78.(0.49;.1.14)

Aquaculture -0.37.(-0.63;.-0.11)

Not.indicated -0.41.(-0.71;.-0.16)


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Calidad

Comparación de la incidencia de malformaciones morfológicas y esqueléticas entre rodaballos (Scophthlamus maximus L.) diploides y triploidesJ..Hernández-Urcera1,.E..Torres2,.S..Magadán1,.J.D..Barreiro3,.A..Barrerio-Lois3,.R..Cal1,.J..Rotllant2

1Centro Oceanográfico de Vigo, (IEO-Vigo), Subida a Radio Faro, 50, CP 36390, Vigo, Pontevedra email: [email protected] de Investigaciones Marinas (IIM-CSIC), Vigo, Pontevedra3Servicio de Diagnóstico por Imagen HVU. Rof Codina, Lugo

AbstractTriploid.fish.are.sterile.and.can.be.grown.to.the.desired.size.without.the.problems.related.to.reproduction..This.is.an.interesting.option.for.the.marketing.of.large.fish..Triploidy.in.some.species.is.associated.with.morphological.and.skeletal.deformations.causing.changes.in. the.appearance.of. the.fish.and. therefore.also. in. their.commercial. value..This.study.compared. the. incidence.of.morphological.and.

Este.trabajo.tiene.por.objetivo.la.determinación.de.unos.niveles.guía.de.contaminantes.para.ecosistemas.de.producción.acuícola.con.sistemas.de.recirculación.de.agua,.utilizando.para.ello.la.metodología.de.análisis.de.riesgo.en.ecosistemas.Originariamente,.el.trabajo.que.se.muestra.se.realizó.para.el.campo.de.la.acuariofília.y.los.resultados.se.han.revisado.para.su.aplicación.en.la.acuicultura,.al.considerarse.sistemas.de.soporte.vital.similares..Concretamente,.se.muestran.los.resultados.para.ecosistemas.de.agua.salada.tipo.océano.(genérico).y.tipo.arrecife.coralino.(sensible).y.para.ecosistemas.de.agua.dulce.(continental).

Material y MétodosSe.han.utilizado.dos.métodos.para.la.determinación.de.los.niveles.guía.de.los.contaminantes:.análisis.de.riesgos.y.revisión.de.guías.de.calidad.de.agua.La.metodología.de.análisis.de.riesgos.para.ecosistemas.basada.en.la.“Technical.Guidance.on.Risk.Assessment”.(TGD).(EC,.2003).tiene.como.objetivo.determinar.la.concentración.de.no.efecto.(Predicted.No-Effect.Concentration,.PNEC).a.partir.de.datos.toxicológicos.espe-cíficos.(NOEC,.L(E)C50,.etc.).para.cada.uno.de.los.contaminantes.de.interés.y.para.cada.una.de.las.especies.de.organismos.de.interés..La.fórmula.utilizada.es.la.Ecuación.(1).

PNEC.=.[dato.toxicológico]./.AF.(1)Donde.AF.es.un.factor.de.extrapolación.(1-1000).según.TGD.(EC,.2003)..Esta.metodología.se.ha.utilizado.básicamente.para.el.ecosistema.de.arrecife.coralino,.el.más.sensible.Por.otro.lado,.la.revisión.de.guías.de.calidad.de.agua.existentes.para.ecosistemas.de.agua.dulce.y.de.agua.salada.se.ha.llevado.a.cabo.vista.de.la.complejidad.de.algunos.de.los.ecosistemas.estudiados.y.la.falta.de.datos.experimentales.de.toxicidad..Concretamente,.se.han.revisado.las.guías.de.calidad.del.agua.de.la.USEPA.(USEPA,.2009).y.de.Australia.y.de.Nueva.Zelanda.(ANZECC,.2000)..Para.la.elaboración.de.los.criterios.de.calidad,.en.este.trabajo.se.han.utilizado.los.valores.más.conservativos.de.las.guías.revisadas,.considerando.una.pro-tección.del.95.%.del.ecosistema.como.criterio.general.

Resultados y DiscusiónLos.contaminantes.de.interés.se.han.escogido.a.partir.del.estudio.de.las.posibles.fuentes.de.contaminación.en.los.sistemas.considerados..Así,.se.ha.estimado.que.la.contaminación.de.las.aguas.puede.proceder.o.bien.del.agua.de.entrada.(metales,.pesticidas,.fármacos,.hidro-carburos,.etc.),.del.propio.sistema.de.tratamiento.de.aguas.o.sistemas.de.soporte.vital.(subproductos.de.la.desinfección,.ozono,.cloro,.etc.).y.del.propio.ecosistema.(materia.orgánica,.nutrientes,.etc.).La.Tabla.1.muestra.algunos.de.los.resultados.obtenidos.en.este.proyecto.en.cuanto.a.valores.guía.de.contaminantes.de.interés..No.se.muestran.para.todos.los.contaminantes.estudiados.debido.a.problemas.de.espacio.en.este.resumen.

Tabla 14Valores guía de algunos contaminantes de interés.

BibliografíaUSEPA..2009..National.Recommended.Water.Quality.Criteria..United.States.Environmental.Protection.AgencyEC..2003..Technical.Guidance.Document.on.Risk..Part.II,.European.Communities:.European.Commission.Joint.Research.Center.ANZECC..2000..Australian.and.New.Zeeland.guidelines.for.fresh.and.marine.water.quality..National.water.quality.management.strategy..Australian.and.New.Zeeland.Environment.and.Conservation.Council.

AgradecimientosEste.proyecto.ha.estado.cofinanciado.por.FEDER.en.el.marco.del.“Programa.Operatiu.de.Catalunya.2007-2013”.

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Contaminante(µg/L)

Ecosistema agua salada

Ecosistema arrecife coralino

Ecosistema agua dulce

Arsénico 36 24

Cadmio 0,7 9,4 0,13

Zinc 15 10 8,0

Benceno 500 10

Naftaleno 50 2,4

Aldrin 1,3 3,0

Endosulfan 0,005 0,1 0,005

Tributilestaño.(como.Sn) 0,006 0,073 0,00008

Diclofenaco 14,5

Sulfametoxazole . 0,027


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Calidad

skeletal.malformations.in.two.groups.of.triploid.turbot.and.diploid.controls.at.6.and.12.months.of.age..Morphological.alterations.were.determined.from.measurements.on.external.photographs.of.the.upper.side.of.the.fish,.and.skeleton.alterations.were.studied.through.X-ray.photographs..The.incidences.of.morphological.and.skeletal.malformations.were.not.significantly.different.(p>0.05).between.ploidy.in.either.of.the.two.groups.analyzed..These.results.suggest.that.triploidy.per se.does.not.induce.malformations.in.turbot,.although,.it.is.possible.that.in.some.cases.the.induction.treatment.can.cause.these.effects.

JustificaciónLa. producción. de. peces. triploides. en. muchas. especies. acuícolas. es. de. gran. interés. debido. a. la. esterilidad. que. normalmente. lleva.asociada,.ya.que.previene.una.disminución.de.la.cantidad.y.la.calidad.de.la.carne.que.se.produce.durante.los.ciclos.de.reproducción,.especialmente.para.aquellas.especies.en.las.cuales.la.maduración.sexual.tiene.lugar.antes.de.la.obtención.de.la.talla.comercial.óptima.(Felip.et al.,.1999)..Este.es.el.caso.del.rodaballo.(Scophthalmus maximus) en el que machos.y.hembras.maduran.sexualmente.antes.de.alcanzar.los.2.Kg.de.peso..El.método.para.inducir.triploidia.en.rodaballo,.fue.desarrollado.por.Piferrer.et al..(2000;2003).y.los.efectos.sobre.su.crecimiento.y.desarrollo.sexual.descritos.por.Cal.et al..(2006)..Pero.la.inducción.de.la.triploidía.en.peces.de.diferentes.especies.ha.sido.frecuentemente.asociada.con.una.alta.incidencia.de.alteraciones.morfológicas.y.esqueléticas..El.objetivo.de.este.trabajo.ha.sido.comparar.la.incidencia.de.malformaciones.morfológicas.y.esquelética.entre.rodaballos.diploides.y.triploides.

Material y MétodosCada.uno.de.los.rodaballos.triploides.(Piferrer.et al.,.2000,.2003).(n=20,.51.±.10.g).y.sus.correspondientes.controles.diploides.(n=20,.59.±.7.8.g).de.6.meses.de.edad,.fueron.fotografiados.(su.cara.superior).y.las.fotografías.fueron.analizadas.utilizando.un.software.de.análisis.de.imagen.tpsDig1..Se.midieron.8.parámetros.morfométricos.(Fig..1),.y.a.partir.de.estos.se.calcularon.8.proporciones.corporales:.SL/BW,.SL/HL,.TL/BW,.TL/HL,.HL/UJL,.HL/LJL,.HL/IOL.y.HL/OL.Las.posibles.alteraciones.esqueléticas.se.analizaron.sobre.radiografías. (44.kv,.25.mAs.y.104.ms),.utilizando.un.software.de.análisis.de.archivos.DICOM.(k-Pacs,.v.1.0.1)..Se.midió.la.longitud.estándar.(S).y.el.ancho.corporal.(BW),y.se.cuantificó.el.número.de.vértebras.abdominales.y.caudales.y.los.radios.de.las.aletas.dorsal.y.anal..También.se.determinó.la.desviación.de.la.espina.vertebral.(SA).(ángulo.formado.por.la.línea.de.union.de.las.últimas.8.vértebras.de.la.espina.vertebral.y.la.tangente.de.la.curva.formada.por.la.espina.en.las.primeras.vertebras).(Fig..1)..Este.estudio.se.realizó.por.segunda.vez.en.peces.diploides.(n=10,.543.±.90.g).y.triploides.(n=10,.471.±.68.g).de.la.misma.familia.a.los.12.meses.de.edad..En.todos.los.casos,.la.triploidia.de.los.peces.fue.confirmada.determinando.el.tamaño.del.eje.mayor.de.los.eritrocitos.(Piferrer.et al.,.2003)..Los.resultados.se.analizaron.utilizando.el.test.de.“t”.Student.

Figura 14(A). Parámetros. morfológicos:. (TL). longitud. total;. (SL). longitud. estándar;. (BW). ancho. corporal;. (HL). longitud. de. la.cabeza;. (UJL). longitud. de. la. mandíbula. superior;. (LJ). longitud. de. la. mandíbula. inferior;. (OL). longitud. ocular;. (IOL). longitud.interocular..(B) Parámetros.esqueléticos:.(AV).vértebras.abdominals;.(CV).vertebras.caudales;.(DF).radios.aleta.dorsal;.(AF).radios.leta.anal;.(SA).ángulo.espinal.

Resultados y Discusión Aunque.en.varios.estudios.se.ha.sugerido.que.la.inducción.a.la.triploidía.origina.deformidades.corporales.en.especies.como.la.lubina,.el.besugo.rojo,.la.trucha.y.el.salmón.(Piferrer.et al.,.2009),.en.este.estudio.no.se.observaron.alteraciones.morfológicas.en.los.rodaballos.y.ninguna.de.las.proporciones.corporales.mostraron.diferencias.significativas.entre.ploidías.a.los.6.o.a.los.12.meses.de.edad.(p>0.05)..Las.radiografías.mostraron.una.frecuencia.de.peces.con.anomalías.esqueléticas.del.30.±.14.%.y.37.±.6.%.a.los.6.meses.de.edad,.y.del.28.±.10.%.y.26.±.8.%.a.los.12.meses.de.edad.en.los.grupos.control.y.triploide.respectivamente..El.tipo.de.alteraciones.esqueléticas.fue.similar.en. ambas. ploidías. y. en. ambos. grupos.. Las. observadas. con. mayor. frecuencia. fueron. fusiones. de. vértebras. abdominales. posteriores.(vértebras.11-12),.flexión/torsión.de.vértebras.caudales.posteriores.y. fusiones.de.vértebras.caudales.posteriores..Las.diferencias.no.fueron.significativas.ni.entre.ploidías.ni.entre.grupos.de.edad.(p>0.05)..Estos.resultados.indican.que.la.triploidía per se.en.el.rodaballo.no.afecta.a.la.morfología.corporal.ni.a.las.características.esqueléticas,.aunque.no.se.descarta.que.el.proceso.de.inducción.de.la.misma.pueda.causar.estos.efectos.

BibliografíaCal,.R.M.,.Vidal,.S.,.Gómez,.C.,.Alvarez-Blázquez,.B.,.Martínez,.P..y.Piferrer,.F..2006..Growth.and.gonadal.development. in.diploid.and.triploid.turbot.(Scophthalmus maximus)..Aquaculture.251,.99-108.Felip,.A.,.Zanuy,.S.,.Carrillo,.M..y.Piferrer,.F..1999..Growth.and.gonadal.development.in.triploid.sea.bass.(Dicentrarchus labrax.L.).during.the.first.two.years.of.age..Aquaculture.173,.389-399.Piferrer,.F.,.Beaumont,.A.,.Falguière,.J.C.,.Flajshans,.M.,.Haffray,.P..y.Colombo,.L..2009..Polyploid.fish.and.shellfish:.production,.biology.and.applications.to.aquaculture.for.performance.improvement.and.genetic.containment,.Aquaculture 293:125–156.Piferrer,.F.,.Cal,.R.M.,.Álvarez-Blázquez,.B.,.Sánchez,.L..y.Martínez,.P..2000..Induction.of.triploidy.in.the.turbot.(Scophthalmus maximus):.I..Ploidy.determination.and.the.effects.of.cold.shocks..Aquaculture.188,.79-90.Piferrer,.F.,.Cal,.R.M.,.Gómez,.C.,.Bouza,.B..y.Martínez,.P..2003..Induction.of.triploidy.in.the.turbot.(Scophthalmus maximus):.II..Effects.of.cold.shock.timing.and.induction.of.triploidy.in.a.large.volume.eggs..Aquaculture.220,.821-831.


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Calidad

Combinación de agua refrigerada con bajas concentraciones de dióxido de carbono como método de aturdimiento para mejorar el bienestar durante el sacrificio dorada (Sparus aurata)R..Ginés,.D..Gil.y.P..CastroUniversidad de Las Palmas de Gran Canaria & Instituto Canario de Ciencias Marinas, Trasmontaña s/n, 35413, Arucas, Las Palmas de Gran Canaria. Canary Islands. Spain. [email protected]

AbstractStunning.effect.on.the.stress.response.related.to.fish.welfare.of.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata).was.evaluated.following.two.methods.of.slaughter:.immersion.in.slurry.ice.(SI),.and.stunning.with.cold.seawater.plus.carbon.dioxide.narcosis.followed.of.SI.immersion.(CD+SI)..To.establish.stunning.conditions.for.CD+SI.method,.three.water.temperatures.(13,.7.and.4.°C).and.different.levels.of.CO2.were.tested,.founding.that.7.°C.combined.with.45-50.mg/l..of.CO2.accomplishes.the.model..According.to.a. tailored.visual.evoked.responses. (VER).scheme,.aversive.symptoms.were.minimized..The.CO2.narcotic.effect.combined.with.the.previous.body.cooling.improved.traditional.SI.slaughter.method.related.to.fish.welfare..

JustificaciónEl.bienestar.animal.se.posiciona.como.un.objetivo.de.interés.prioritario..Así,.el.panel.de.Sanidad.y.Bienestar.Animal.de.la.EFSA.(European.Food.Safety.Authority).recomienda.el.desarrollo.urgente.de.los.métodos.de.aturdimiento.comercial.para.inducir.la.inconsciencia.inmediata.en.la.lubina.(Dicentrarchux labrax).y.dorada.(Sparus aurata)..El.método.habitual.para.el.sacrificio.es.la.inmersión.en.una.mezcla.de.hielo.y.agua.donde.los.peces.mueren.por.una.combinación.de.asfixia.e.hipotermia..De.ahí.que.no.sea.considerado.como.un.método.que.garantice.las. condiciones. de. bienestar. animal. (Van. de. Vis.et al.,. 2003).. Además,. en. vista. de. los. vigorosos. movimientos. observados. durante. el.proceso,.este.aumento.del.estrés.tendría.implicaciones.sobre.la.calidad.del.producto.(Roth.et al.,.2007)..Un.método.de.sacrificio.óptimo.debe.producir.un.estado.de. inconsciencia.antes.de. la.muerte,.en.ausencia.de.cualquier.sentimiento.de.agitación,.dolor.o.pánico.(Van.de.Vis.et al.,.2003)..En.este.sentido,.se.ha.sugerido.que.el.dióxido.de.carbono.añadido.al.agua.de.mar.refrigerada. proporciona. un. efecto. narcótico. (Robb.et al.,. 2000).. Por. ello,. el. objetivo. del. presente. estudio. fue. establecer. las. mejores.condiciones. de. equilibrio. entre. la. temperatura. y. la. concentración. de. dióxido. de. carbono. que. proporcione. un. estado. apropiado. de.aturdimiento.previo.al.sacrificio.

Material y MétodosEjemplares. de. dorada. de. tamaño. comercial. procedentes. del. stock. del. Instituto. Canario. de. Ciencias. Marinas. (ICCM). fueron. utilizados.para.determinar.el.efecto.combinado.de.la.temperatura.y.la.concentración.de.CO2.sobre.el.comportamiento.previo.y.hasta.completar.su.aturdimiento..Grupos.de.6.individuos.se.introdujeron.en.un.acuario.de.240.l.(120x38x52),.previamente.preparado.para.testar.las.condiciones.de.aturdimiento..Una.vez.completado.el.proceso.los.peces.pasaron.a.un.tanque.de.recuperación.y.posteriormente.a.su.tanque.de.origen..En.el.medio.de.sacrificio.hubo.un.control.continuo.del.pH,.temperatura.y.concentraciones.de.oxígeno.y.dióxido.de.carbono..Se.testaron.tres.temperaturas.(13,.7.y.4.°C).combinadas.con.distintas.concentraciones.de.dióxido.de.carbono.(0,.45±3,.65±3.y.85±3.mg.de.CO2/l)Para.evaluar.la.agresividad.del.medio.así.como.el.nivel.de.inconsciencia.del.pescado,.se.evaluaron.las.respuestas.de.los.peces.atendiendo.a.los.siguientes.parámetros:.frecuencia.opercular.(el.número.de.aperturas.operculares.durante.diez.segundos.en.intervalos.de.un.minuto),.equilibrio.(pérdida.de.la.posición.normal.de.natación),.vertical.(la.pérdida.total.de.equilibrio.en.la.que.la.zona.ventral.del.cuerpo.queda.dirigida.hacia.la.superficie.del.agua),.sensibilidad.(no.manifestar.intención.de.escape.al.presionar.el.pedúnculo.caudal),.manejo.(falta.de.movimiento.cuando.el.pez.es.sacado.del.agua).y.agresividad.(movimientos.generados.tras.entrar.en.contacto.con.el.medio.de.sacrificio)..

Resultados y Discusión En.ninguna.de. las.pruebas.realizadas.se.registraron.bajas.entre. los. individuos.utilizados..Cuando. las.respuestas.se.evaluaron.como.agresivas,.los.peces.se.pasaron.rápidamente.al.tanque.de.recuperación..Los.resultados.mostraron.que.con.una.temperatura.de.13.ºC.eran. necesarias. altas. concentraciones. de. CO2. para. alcanzar. el. estado. de. aturdimiento,. condiciones. que. desde. el. punto. de. vista. del.bienestar.no.son.aconsejables.ya.que.los.ejemplares.mostraron.una.manifiesta.aversión..Con.la.aplicación.de.una.temperatura.del.agua.alrededor.de.7.ºC.acompañada.de.una.concentración.de.45±3.mg.de.CO2/l.fue.suficiente.para.asegurar.el.aturdimiento.en.un.tiempo.de.entre.6.y.8.minutos..Bajando.la.temperatura.hasta.los.4.ºC,.en.el.mismo.rango.de.concentración.de.dióxido.de.carbono,.no.se.mejoraron.los.resultados.encontrados.a.7.ºC,.ni.en.relación.al.comportamiento.ni.en.el.tiempo.hasta.lograr.el.aturdimiento..Erikson.et al..(2006).constataron.que.la.concentración.de.dióxido.de.carbono.entre.65-257.mg/l.y.temperaturas.entre.-0,7.y.3,3.º.C.garantizan.el.aturdimiento.en.salmón.(Salmo salar)..En.la.dorada,.el.dióxido.de.carbono.se.ha.utilizado.en.concentraciones.de.saturación.como.método.de.sacrificio.(Giuffrifa.et al.,.2007),.aunque.el.pescado.mostró.violentos.movimientos.de.aversión.previos.a.la.muerte..Esta.reacción.negativa.se.podría.evitar.moderando.la.concentración.de.dióxido.de.carbono.combinada.con.una.baja.temperatura.del.agua.

BibliografíaErikson,.U.,.Hultmann,.L..and.Steen,.J.E..2006..Live.chilling.of.Atlantic.salmon.(Salmo salar).combined.with.mild.carbon.dioxide.anaesthesia.I..Establishing.a.method.for.large-scale.processing.of.farmed.fish..Aquaculture..252,.183-198.Giuffrida,.A.,.Pennisi,.L.,.Ziino,.G.,.Fortino,.L.,.Valvo, G.,.Marino,.S..and.Panebianco,.A..2007..Influence.of.slaughtering.method.on.some.aspects.of.gilthead.seabream.and.smoked.Rainbow.trout.quality..Veterinary.Research.Communications..31,.437-446.Robb,.D..H..F.,.Wotton,.S..B.,.Mckisstry,.J..L.,.Sørensen,.N..K..and.Kestin,.S..C..2000..Comercial.slaughter.methods.used.on.Atlantic.salmon:.determination.of.the.onset.of.brain.failure.by.electroencephalography..The.Veterinary.Record..147,.298-303.Roth,.B.,.Imsland,.A.,.Gunnarsson,.S.,.Foss,.A..and.Schelvis,.R..2007..Slaughter.quality.and.rigor.contraction.in.farmed.turbot.(Scophthalmus maximus);.a.comparison.between.different.stunning.methods..Aquaculture..272,.754-761.Van.de.Vis,.H.,.Kestin,.S.,.Robb,.D.,.Oehlenschläger,.J.,.Lambooij,.B.,.Münkner,.W.,.Kuhlmann,.H.,.Kloosterboer,.K.,.Tejeda,.M.,.Huidobro,.A.,.Ottera,.H.,.Roth,.B.,.Sørensen,.N.,.Akse,.L.,.Byrne,.H..and.Nesvadba,.P..2003.. Is.humane.slaughter.of.fish.possible. for. industry?..Aquaculture.Research..34,.211-220.

AgradecimientosEste.trabajo.ha.sido.financiado.por.los.“Planes.Nacionales.de.Acuicultura.(JACUMAR)”

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Calidad

Characterization of several members of the calpain system in Gilthead sea bream (Sparus aurata): nutritional regulationC..Salmerón1,.D..García.de.la.Serrana2,.V..Jiménez-Amilburu1,.I..Navarro1,.I.A..Johnston2,.J..Gutiérrez1,.E..Capilla1

1Department of Physiology and Immunology, School of Biology, University of Barcelona, 08028, Barcelona. e-mail: [email protected] and Evolutionary Genomics Laboratory, Scottish Oceans Institute, School of Biology, University of St Andrews, Fife KY16 8LB, St Andrews, Scotland, UK

AbstractMyofibrils.disruption,.caused.by.an.increase.on.the.activity.of.endogenous.enzymes.such.as.calpains,.affects.muscle.integrity.and.meat.quality..In.this.study,.the.full-length.cDNA.of.calpain.1.(CAPN1),.calpain.3.(CAPN3),.calpain.small.subunit.(CAPNs).and.calpastatin.(the.calpain.inhibitor,.CAST).from.sea.bream.white.skeletal.muscle.were.obtained..All.the.sequences.showed.between.61.to.87%.amino.acid.identity.with.calpain.members.previously.described.in.fish..In.a.tissue.screening,.CAPN3.was.muscle.specific.whereas.CAPN1,.CAPNs.and.CAST.tend.to.be.ubiquitously.expressed..A.study.with.sea.bream.fed.four.experimental.diets.containing.different.percentages.in.protein.(44-36%).and.carbohydrates.(7-34%).for.three.months,.was.performed..We.observed.that.a.reduction.in.dietary.protein.content.diminished.growth.but.increased.muscle.texture.and.elasticity,.which.correlated.with.a.significant.decrease.in.CAPN1.expression..In.a.post mortem.experiment,.we.observed.significant.changes.in.pH,.color,.lightness.and.muscle.texture.throughout.time..In.summary,.our.data.suggests.that.calpains.can.be.used.as.markers.for.fish.meat.tenderness.

IntroductionDuring.the.last.decades,.the.activity.of.muscle.endogenous.proteases.has.received.a.great.deal.of.attention.due.to.their.role.in.muscle.protein.turnover.and.growth.as.well.as.in.post mortem.proteolysis.and.their.impact.on.muscle.texture..Two.well.characterized.proteolytic.systems.are.known.to.hydrolyze.myofibrillar.proteins,.the.calpains.and.the.cathepstins.(lysosomal.proteases)..All.available.evidences.indicate.that.the.structural.changes.that.take.place.during.the.post mortem.storage.of.meat.are.caused.by.muscle.proteases,.especially.members.of.these.two.families.(Nagaraj.et al.,.2005).Calpains.belong.to.a.superfamily.of.calcium-activated.cytoplasmic.proteinases.formed.by.catalytic.subunit.members.(CAPN),.regulatory.subunit.members.(CAPNs),.and.inhibitors.or.calpastatins.(CAST)..CAPN1.has.been.associated.with.differences.in.tenderness.in.bovine.meat.(Page.et al.,.2004)..A.fasting.experiment.in.rainbow.trout.(Oncorhynchus mykiss).for.35.days.showed.an.increase.in.CAPN1,.CAPN2.and.CAST.gene.expression.and.calpain.catalytic.activity,.suggesting.a.potential. role. for.calpains. in.protein.mobilization.as.an.energy.source.under.these.conditions.(Salem.et al.,.2005a)..Also,.the.same.group.analyzed.two.CAST.isoforms,.which.gene.expression.had.been.reported.to.be.higher.in.strains.with.faster.growth.rate.and.firmer.fillet.(Salem.et al.,.2005b),.suggesting.a.potential.use.of.the.CAST.gene.as.a.tool.to.monitor.fish.muscle.growth.and.tenderness..In.a.sea.bream.post mortem.study,.the.presence.and.activity.of.CAPN.and.CAST.were.detected.in.the.refrigerated.muscle.specimens.after.14.days,.supporting.the.idea.that.during.ice.storage,.muscle-degrading.enzymes.preserve.their.activity.(Caballero.et al.,.2009).The.aim.of.this.study.was.to.determine.the.association.between.calpains.expression.and.muscle.texture.according.to.diet,.and.to.analyze.meat.quality.in.different.post-mortem.stages.in.sea.bream.

Material and MethodsThe. full-length. cDNA. of. CAPN1,. CAPN3,. CAPNs. and. CAST. from. gilthead. sea. bream. white. skeletal. muscle. was. obtained. by. reverse.transcription.(RT).-.polymerase.chain.reaction.(PCR).and.rapid.amplification.of.cDNA.ends.(RACE).-.PCR..Qualitative.PCR.(PCR).was.used.for.tissue.screening.Four.groups.of.approximately.100.healthy.sea.breams.per.triplicate.were.maintained.in.IRTA.facilities.(St..Carles.de.la.Ràpita,.Spain).and.fed.with.experimental.diets.containing.different.percentages.in.protein/carbohydrate.(44/7,.44/15,.40/28.and.36/34,.respectively).and.16%.lipid.for.3.months..The.day.of.experiment,.3.fish.per.tank.(n=9).were.anesthetized.with.MS-222.and.sacrificed.by.medullar.section..Body.morphometrics.were.measured.and.samples.of.white.muscle.were.immediately.dissected,.flash-frozen.in.liquid.nitrogen.and.stored.at.-80ºC..Muscle.colour.was.measured.using.a.portable.CR400.Chroma.Meter.(Konica.Minolta)..Muscle.texture.samples.were.maintained.in.ice.until.texture.analysis.was.performed.with.a.texturometer.coupled.to.a.Mini.Kramer.HSP/MKO5.(ESAB,.Castelldefels,.Spain)..For.calpains.expression.experiments,.1.mg.of.total.RNA.was.used.for.RT-PCR.and.quantitative.real-time.PCR.(qPCR)..For.the.post mortem.experiment,.64.healthy.sea.breams.were.used..Fishes.were.sacrificed.by.immersion.in.a.3:2.ice-water.mixture.and.were.stored.on.ice.at.4ºC.for.0h,.3h,.6h,.12h,.24h,.72h.and.144h..Eight.fish.per.condition.were.used.to.determine.muscle.pH,.water.content,.colour.and.texture..Statistic.analysis.was.performed.by.the.Statistical.Package.SPSS.

Results and DiscussionThe.full-length.sequences.of.CAPN1,.CAPN3,.CAPNs.and.CAST.identified.by.means.of.RT-PCR.and.RACE-PCR.from.white.skeletal.muscle.of.gilthead.sea.bream.showed.between.61.to.87%.amino.acid.identity.with.the.corresponding.members.previously.described.in.fish..The.characterization.of.sea.bream.calpains.demonstrated.that.they.contain.the.EF-hands.important.for.calcium.activation,.and.the.expected.triad.of.catalytic.residues.needed.for.activity..Qualitative.transcript.expression.analysis.in.a.tissue.screening.showed.that.CAPN3.is.muscle.specific,.whereas.CAPN1,.CAPNs.and.CAST.are.more.ubiquitously.expressed.as.in.mammals.(Macqueen.et al.,.2010).A.decrease.in.dietary.protein.content.from.44.to.36%.diminished.growth.but.increased.muscle.texture.and.elasticity.in.sea.bream.fed.for.three.months.the.different.experimental.diets,.which.is.in.correlation.with.a.significant.decrease.in.CAPN1.mRNA.expression.in.muscle,.whereas.CAPN3.remained.unaffected..Muscle.pH.and.color.changed.shortly.after.animal.death.in.the.post mortem.experiment,.and.a.significant.decrease.in.muscle.texture.and.elasticity.was.observed.throughout.time.These.studies.are.towards.defining.potential.markers.of.meat.tenderness.among.these.molecules.that.might.contribute.to.improve.flesh.quality.in.the.aquaculture.product.

ReferencesCaballero,.M.J.,.M..Betancor,.J.C..Escrig,.D..Montero,.A..Espinosa.de.los.Monteros,.P..Castro,.R..Ginés.and.M..Izquierdo..2009..Post mortem.changes.produced.in.the.muscle.of.sea.bream.(Sparus aurata).during.ice.storage..Aquaculture.291:.210-216.Macqueen,.D.J.,.L..Meischke,.S..Manthri,.A..Anwar,.C..Solberg.and.I.A..Johnston..2010..Characterisation.of.capn1,.capn2-like,.capn3.and.capn11.genes.in.Atlantic.halibut.(Hippoglossus hippoglossus.L.):.Transcriptional.regulation.across.tissues.and.in.skeletal.muscle.at.distinct.nutritional.states..Gene.453:.45-58.Nagaraj,.N.S..and.K..Santhanam..Effects.of.muscle.proteases,.endogenous.protease.inhibitor.and.myofibril.fragmentation.on.post mortem.aging.of.goat.meat..Journal of Food Biochemistry.30:.269-291.

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Page,.B.T.,.E..Casas,.R.L..Quaas,.R.M..Thallman,.T.L..Wheeler,.S.D..Shackelford,.M..Koohmaraie,.S.N..White,.G.L..Bennet,.J.W..Keele,.M.E.,.Dikeman,.T.P..Smith..2004..Association.of.markers.in.the.bovine.CAPN1.gene.with.meat.tenderness.in.large.crossbred.populations.that.sample.influential.industry.sires..Journal of Animal Science 82:.3474-3481.Salem,.M.,.J..Nath,.E..Rexroad,.J..Killefer.and.J..Yao..2005a..Identification.and.molecular.characterization.of.the.rainbow.trout.calpains.(Capn1.and.Capn2):.their.expression.in.muscle.wasting.during.starvation..Comparative Biochemistry and Physiology, Part B.140:.63-71.Salem.M.,.Y..Jianbo,.C.E..Rexroad,.P.B..Kenney,.K..Semmens,.J..Killefer.and.J..Nath..2005b..Characterization.of.calpastatin.gene.in.fish:.Its.potential.role.in.muscle.growth.and.fillet.quality..Comparative Biochemistry and Physiology, Part B.141:.488-497.

AcknowledgementsSupported. by. funds. from. the. MICINN. (AGL2009-12427),. the. “Xarxa. de. Referència. de. Recerca. i. Desenvolupament. en. Aqüicultura.(Generalitat.de.Catalunya).and.the.European.Union.(EU-FP7.222719).

Efecto de la inclusión de aceites vegetales en la dieta sobre el almacenamiento en hielo de la dorada (Sparus aurata) A..Álvareza,.B..García-Garcíaa,.R..Fontanillasb,.M.D..Hernándeza*

aIMIDA-Acuicultura. Consejería de Agricultura y Agua de la Región de Murcia. Apdo. 65. 30740. San Pedro del Pinatar. Murcia. Spain.*e-mail: [email protected] Aquaculture Research Center, ARC, Stavanger, Norway

AbstractFarmed.gilthead.seabream.were.fed.one.of.two.diets.containing.100%.of.fish.oil.or.75%.vegetable.oil.blend.(50/50.mixture.of.soybean.and.rapeseed.oil).in.order.to.study.the.effect.of.dietary.oil.source.on.quality.during.storage.of.each.dietary.group.(F:.fish.oil;.and.V:.vegetal.oil)..Whole.ungutted.fish.were.stored.in.refrigeration.for.0,.7,.14.and.21.days..Physical-chemical.analyses.(FAs,.flesh.color,.WHC,.pH.and.TBARS).were.performed.to.determine.the.spoilage.in.fishes..FAs’s.quantities.of.the.day.21.were.lower.than.those.of.the.day.0.in.both.dietary.groups..The.changes.produced.of.WHC.and.L*.during.the.first.week.were.related.to.the.post-mortem.decrease.of.pH..The.water.loss.was.more.pronounced.in.the.group.V..This.group.had.also.higher.values.of.redness.(a*).than.the.group.fed.fish.oil.diet..A.loss.of.intensity.of.color.was.observed.with.the.time.in.both.dietary.groups..Lipid.oxidation.was.more.pronounced.in.fish.fed.fish.oil.diet.

JustificaciónLas. investigaciones.en. torno.al.uso.de.aceites.vegetales.como. fuente.alternativa.de. lípidos.en. las.dietas.de.peces.han. ido.cobrando.mayor.importancia.en.los.últimos.años..La.composición.de.ácidos.grasos.que.confiere.al.pescado.sus.propiedades.beneficiosas,.como.son.los.ácidos.grasos.poliinsaturados.(PUFAs).de.cadena.larga.de.la.serie.n-3,.puede.verse.comprometida.por.la.elevada.relación.n-6/n-3.característica.de.estos.aceites..Dado.que.el.pescado.puede.llegar.a.pasar.algún.tiempo.almacenado.antes.de.su.consumo,.la.estabilidad.de.estas.propiedades.durante.el.almacenamiento.es.casi.tan.importante.como.la.composición.nutricional.del.producto.final..Las.variaciones.en.el.perfil.de.ácidos.grasos.provocadas.tanto.por.la.composición.de.la.dieta.como.por.el.almacenamiento,.así.como.el.efecto.combinado.de.ambos,.pueden.a.su.vez.provocar.cambios.en.los.parámetros.de.calidad..Por.todo.ello,.el.objetivo.del.presente.trabajo.fue.evaluar.el.efecto.de.la.sustitución.parcial.del.aceite.de.pescado.de.la.dieta.por.aceites.vegetales.sobre.el.deterioro.de.la.dorada.durante.su.almacenamiento.en.hielo.

Material y métodosSe.utilizaron.doradas.con.un.peso.inicial.de.197.2±14.1g,.las.cuales.fueron.alimentadas.hasta.alcanzar.el.tamaño.comercial.(425.7±42.0.g),.con.dos.dietas:.una.con.aceite.de.pescado.como.única.fuente.de.lípidos.(dieta.P).y.otra.con.un.75%.del.aceite.de.pescado.sustituido.por.una.mezcla.de.aceites.vegetales.(50%.aceite.de.colza.y.50%.aceite.de.soja).(dieta.V)..Los.animales.fueron.almacenados.enteros.y.sin.eviscerar.en.refrigeración.con.hielo.durante.0,.7,.14.y.21.días..En.estos.puntos.de.muestreo.se.realizaron.análisis.físico-químicos.del.músculo.(Perfil.de.Ácidos.Grasos;.Color;.Capacidad.de.Retención.de.Agua.(CRA);.pH;.Sustancias.Reactivas.con.el.Ácido.Tiobarbitúrico.(TBARS)).para.determinar.el.grado.de.deterioro.del.pescado.

Resultados y discusiónSe.observaron.diferencias.significativas.en. la.cantidad.de.ácidos.grasos. (g/100g.de.grasa).provocadas.tanto.por. la.dieta.como.por.el.tiempo.de.almacenamiento..Los.ácidos.grasos.de.la.serie.n-6.fueron.más.abundantes.en.el.grupo.V,.por.lo.que.la.relación.n-3/n-6.fue.más.de.dos.veces.superior.en.el.grupo.F.(p<0.001)..Tras.21.días.se.observó.un.descenso.de.los.ácidos.grasos.para.ambas.dietas,.siendo.las.diferencias.entre.éstas.las.mismas.que.las.observadas.el.día.0..Se.observó.una.interacción.dieta-tiempo.que.indicaba.la.distinta.evolución.con.el.almacenamiento.en.cada.uno.de.los.grupos.dietarios..La.tendencia.con.el.tiempo.del.parámetro.a*,.hacia.valores.más.próximos.a.cero,.mostró.una.pérdida.de.intensidad.de.color.en.ambos.grupos.(Tabla.1)..Los.valores.de.este.parámetro.fueron.superiores.en.el.grupo.V.durante.todo.el.almacenamiento..Según.Christiansen.et al..(1993).la.deposición.de.carotenoides.puede.estar.relacionada.con.la.variación.en.el.tipo.y.cantidad.de.PUFAs..Durante.los.primeros.días.de.almacenamiento.la.desnaturalización.de.las.proteínas.musculares,.debida.al.descenso.post mortem.del.pH,.provocó.la.disminución.de.la.capacidad.del.músculo.de.enlazar.agua..La.reducción.del.contenido.de.agua.provocó.el. incremento.posterior.de.la.CRA,.que.fue.mayor.en.el.grupo.V..Este.efecto.ha.sido.descrito.durante.el.envejecimiento.de.la.carne.como.efecto.“leaking.out”.(Moeseke.y.De.Smet,.1999)..Los.cambios.en.la.conformación.de.las.proteínas.resultan.además.en.un.cambio.en.la.reflexión.de.la.luz.incidente.en.el.músculo,.de.manera.que.la.diferencia.de.L*.entre.los.días.0.y.7.pudo.deberse.al.incremento.de.este.parámetro.tras.pocas.horas.después.del.sacrificio..Los.valores.de.TBARS.en.el.grupo.V.fueron.menores.a.los.del.grupo.F.durante.todo.el.almacenamiento..Resultados.similares.con.este.tipo.de.dietas.han.sido.atribuidos.a.un.mayor.contenido.de.sustancias.antioxidantes.en.los.aceites.vegetales.(Regost.et al.,.2004)..

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ReferenciasChristiansen,.R.,.R.,.Waagbø,.y.O.J.,.Torrissen..1993..Effects.of.polyunsaturated.fatty.acids.and.vitamin.E.on.flesh.pigmentation.in.Atlantic.salmon.(Salmo salar)..En:.Fish nutrition in practice..S.J..Kaushik.y.P..Luquet.(Eds.):.339-343.Moeseke,.W.V..y.S.,.De.Smet..1999..Effect.of.time.of.deboning.and.sample.size.on.drip.loss.of.pork..Meat Science..52:.151-156.Regost,.C.,.J.V.,.Jakobsen,.y.A.M.B..Røra..2004..Flesh.quality.of.raw.and.smoked.fillets.of.Atlantic.salmon.as.influenced.by.dietary.oil.sources.and.frozen.storage..Food Research International..37:259-271.

AgradecimientosLos. autores. de. este. trabajo. agradecen. a. la. Junta. Nacional. Asesora. de. Cultivos. Marinos. (JACUMAR). la. financiación. de. este. estudio.mediante.el.proyecto.“Caracterización.de.la.calidad.del.pescado.de.crianza”.(2008-2011).

Tabla 1:.Cambios de los parámetros físico-químicos de calidad en el músculo de dorada durante el almacenamiento en hielo para cada una de las dietas experimentales.

Dieta Día L* a* b* CRA. pH TBARS.

P d0 37.09±0.62 0.38±0.29 -3.52±0.46 89.66±0.21 6.04±0.16 0.45±0.07d7 43.72±0.70 0.34±0.50 -3.46±0.60 91.67±1.31 6.28±0.05 0.30±0.06d14 41.29±0.53 -0.22±0.20 -4.66±0.36 90.61±0.92 6.38±0.09 0.24±0.10d21 41.84±0.70 .0.04±0.29 -4.05±0.31 91.89±0.39 6.32±0.03 0.48±0.04

V d0 36.84±1.16 1.00±0.15 -1.75±0.56 89.36±0.74 6.13±0.10 0.28±0.07d7 40.50±0.84 0.51±0.44 -4.28±0.68 92.47±0.54 6.26±0.13 0.15±0.01d14 42.69±0.78 0.29±0.25 -4.10±0.54 94.03±0.63 6.35±0.05 0.20±0.03d21 42.07±0.18 0.13±0.53 -3.50±1.04 93.51±0.61 6.39±0.04 0.16±0.07

Día *** ** *** *** *** ***Dieta ns * * *** ns ***Día.x.Dieta *** ns ** ** ns ***

Valores.medios.de.cuatro.muestras±desviación.estándar.

L*:.Luminosidad;.a*.y.b*:.Parámetros.Cromáticos;.CRA:.Capacidad.de.Retención.de.Agua.(%);.TBARS:.Sustancias.Reactivas.con.el.Ácido.Tiobarbitúrico.(mg.MDA/kg)..

***:.p<0.001;.**:.p<0.01;.*:.p<0.05;.ns:.no.significativo.

O-063Efecto de la sustitución de las harinas de pescado por harinas vegetales en la dieta del besugo Pagellus bogaraveo sobre sus características sensoriales L..Rincón1,.J.B..Peleteiro2,.A..Claret3,.L..Guerrero3,.R..Ginés1

1Universidad de Las Palmas de Gran Canaria & Instituto Canario de Ciencias Marinas, Trasmontaña s/n, 35413 Arucas (Las Palmas de Gran Canaria), [email protected] Cabo Estay. Vigo (Pontevedra)3IRTA, Finca Camps i Armet, 17121 Monells, Girona

Abstract Blackspot.seabream.has.a.high.commercial.value.and.excellent.palatability,.being.an.interesting.new.specie.in.aquaculture.production..Two. experimental. diets. were. formulated. with. 10%. of. lipids. and. different. fish. meal. percentage:. 100%. of. fishmeal. and. 50%. fishmeal.and.50%.vegetable.meal..They.were.compared.to.a.standard.commercial.diet.with.22%.of.lipid.content.in.order.to.determine.how.these.different.diets.affect. the.sensory.characteristics.of.blackspot.seabream..Fillets. from.fish. fed.with.commercial. control.diet.showed.a.greater.intensity.of.seafood.flavour..No.significant.differences.were.detected.for.the.other.attributes..Multivariate.analysis.showed.that.both.seafood.flavour.and.aftertaste.were.the.attributes.with.a.higher.responsibility.in.the.sensory.differentiation..

Justificación El. consumo. de. pescado. se. ha. ido. incrementando. cada. año. debido. a. varios. factores;. entre. ellos. están. una. mayor. preocupación. del.consumidor.por.aquello.que.ingiere.en.su.dieta.y.su.salud,.por.lo.cual.la.acuicultura.se.manifiesta.como.una.necesidad.para.conseguir.mantener.la.oferta.de.pescado..Por.lo.tanto,.cada.vez.mas,.se.hace.necesaria.la.producción.de.nuevas.especies..El.besugo.es.una.especie.de.alto.valor.comercial.con.gran.interés.debido.a.su.excelente.palatabilidad.y.su.consumo.tradicional.en.los.mercados..A.este.respecto,.se.han.realizado.trabajos.probando.diferentes.dietas.con.diferentes.nieles.de.inclusión.de.lípidos,.proteínas,.y.con.diferentes.sustituciones.con.aceites.vegetales. (Figueiredo-Silva et al., 2010).pero.no.se.han.realizado.estudios.de.cómo.esas.diferentes.dietas.con.diferentes.aceites.de.pescado.o.vegetales.pueden.afectar.a.las.características.organolépticas.del.besugo.de.crianza.El.objetivo.de.este.trabajo.ha.sido.el.de.comparar.como.afectan.las.distintas.dietas.a.las.características.organolépticas.del.besugo.y.ver.si.puede.haber.alguna.diferencia.que.pudiese.ser.apreciada.por.el.consumidor.de.forma.positiva.de.manera.que.la.aceptación.del.mismo.hacia.este.nuevo.producto. fuera.mayor..Previamente.se.realizaron.pruebas.sensoriales.encontrándose.diferencias.entre. los.besugos.salvajes.y.los.cultivados.y.en.esta.segunda.fase.se.han.probado.distintas.dietas.en.los.besugos.de.cultivo.

Material y Métodos Se.han.usado.besugos.criados.en.el. IEO.de.Vigo.en. jaulas.de.engorde.consistentes.en.bateas.para.el.cultivo.de.mejillón.que.se.han.reconvertido.para.tal.fin..Los.besugos.fueron.engordados.con.tres.dietas.diferentes.hasta.la.talla.comercial.(entre.350.y.450.g.de.peso);.una.dieta.control.comercial.estándar.en.la.que.el.contenido.en.lípidos.es.del.22%.de.los.cuales.el.80%.es.de.aceite.de.pescado.frente.a.otras.dos.dietas.experimentales,.en.las.que.se.redujo.el.contenido.en.lípidos.al.10%.siendo.en.una.de.las.dietas.el.contenido.en.harinas.de.un.100%.de.harina.de.pescado.y.en.la.otra.las.harinas.son.de.un.50%.harina.de.pescado.y.el.otro.50%.de.harinas.vegetales.


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Una. vez. sacrificados. los. peces. se. enviaron. enteros. y. sin. eviscerar. a. los. centros. de. investigación. donde. se. realizaron. las. pruebas.sensoriales. (IRTA.e. ICCM).simultáneamente..Un. total.de.10.evaluadores.por.panel. realizaron.cuatro.sesiones.de.análisis..De.ambos.filetes.de.cada.besugo.(sin.retirar.la.piel),.sólo.se.aprovecharon.los.lomos.de.los.cuales.se.cortaron.tres.porciones.rectangulares.de.3.cm.de.anchura.y.3.cm.de.longitud.aproximadamente..Estas.fueron.cocinadas.en.cajas.de.aluminio.con.su.tapa.en.un.horno.de.convección.a.115.°C.durante.10.minutos.siendo.inmediatamente.ofrecidas.a.los.jueces.del.panel.para.su.evaluación..Para.el.análisis.sensorial.cada.juez.recibió.4.piezas.en.cada.sesión.de.cata..Las.evaluaciones.se.llevaron.a.cabo.en.un.laboratorio.diseñado.para.la.analítica.sensorial..

Resultados y Discusión Mediante.el.análisis.univariante.se.han.encontrado.diferencias.significativas.en.el.flavour.a.marisco,.presentando.una.mayor.intensidad.aquellos.besugos.alimentados.con.la.dieta.control..Si.bien.esta.dieta.es. la.que.tenía.un.mayor.porcentaje.de. lípidos,.el.bajo.nivel.de.engrasamiento.de.esta.especie.hace.que.no.se.vean.enmascarados.otros.atributos.importantes.para.definir.la.aceptación.del.producto..También.los.filetes.de.los.peces.alimentados.con.la.dieta.control.mantuvieron.durante.un.menor.tiempo.el.gusto.residual.tras.su.deglución,.aunque.las.diferencias.no.llegaron.a.ser.significativas..

Figura 14Correlación.entre.PC1.y.PC2.según.la.importancia.de.cada.atributo..Las.elipses.marcan.los.límites.entre.el.50.y.el.100%.de.la.varianza.explicada.

Con.el.análisis.factorial.se.concretó.que.fueron.tanto.el.flavour.a.marisco.así.como.la.persistencia.del.gusto.residual.dos.de.los.atributos.responsables.de.la.mayor.parte.de.la.variación.(Figura.1)..Junto.a.estos,.las.texturas.referidas.a.la.jugosidad.y.la.gomosidad.del.filete.podrían.considerarse.como.los.atributos.más.definitorios.de.las.diferencias.entre.las.dietas..

Bibliografía Figueiredo-Silva,. A.. C.,. Corraze,G.,. Rema,P.,. Sanchez-Gurmaches,. J.,. Gutiérrez.,. J.,. Valente,. L.M.P.. Blackspot. seabream. (Pagellus.bogaraveo).lipogenic.and.glycolytic.pathways.appear.to.be.more.related.to.dietary.protein.level.than.dietary.starch.type..2009..Aquaculture,.291,.101–110.

Agradecimientos Los. autores. de. este. trabajo. agradecen. a. la. Junta. Nacional. Asesora. de. Cultivos. Marinos. (JACUMAR). la. financiación. de. este. estudio.mediante.el.proyecto.“Caracterización.de.la.calidad.del.pescado.de.crianza”.(2008-2011).

O-064Efecto del tipo de conservación sobre la calidad del filete de corvina (Argyrosomus regius) cultivadaM.I..Sáez1,.A..Martínez-Prados1,.S..García-Mesa2,.M.D..Suárez1,.T.F..Martínez1,.M..Saavedra3,.S..Cárdenas3

1Departamento de Biología Aplicada, Universidad de Almería. Almería2Departamento de Biología Animal, Universidad de Granada. Granada3 Centro IFAPA El Toruño. El Puerto de Santa María, Cádiz. E-mail: [email protected]

Abstract The.aim.of.this.work.was.to.study.the.conservation.of.meagre.(Argyrosomus regius).fillet.during.cold.storage.under.three.preservation.procedures.(packed.fillets.(R),.packed.in.modified.atmospheres.(R-MA).and.vacuum-packed.(RV)).for.a.period.fifteen.days,.by.measuring.textural,.color,.and.microbiological.parameters..For. this.purpose,. thirty-six.meagres.were.kept.on. ice.at.4.°.C.on.2,.5,.8,.12,.14.and.16.postmortem days..The.conservation.strategy.had.influence.on.the.firmness..During.the.first.12.days.the.values.were.higher.in.R-V.compared.to.R.and.R-AM,.from.this.moment,.the.R-V.values.were.equal.to.those.of.R-AM.and.superior.to.R.in.storage..As.for.the.evolution.of.microbial.counts.(log.cfu/g),.was.similar.in.R.and.R-AM,.these.being.significantly.higher.than.the.R-V.during.the.16.days.of.storage..The.limited.preservative.effect.of.packaging.in.modified.atmospheres.in.our.experimental.conditions.might.be.due.to.the.low.concentration.of.CO2.

JustificaciónLa.corvina.(Argyrosomus regius).es.la.cuarta.especie.en.importancia.de.la.acuicultura.marina.de.peces.en.España.con.una.producción.de.3.250.t.en.2010.(APROMAR,.2011)..El.principal.freno.es.la.comercialización,.ya.que.no.es.una.especie.conocida.de.forma.generalizada.en.los.mercados..Sus.características.organolépticas.ponen.de.manifiesto.que.la.corvina.de.crianza.desarrolla.unas.cantidades.inusualmente.bajas.de.grasa.mesentérica.y.muscular.en.comparación.con.otras.especies,.y.que.admite.un.periodo.de.conservación.largo,.en.condiciones.de.refrigeración,.sin.verse.afectadas.sus.características.(Hernández.et al.,.2009)


76

Calidad

La.textura.del.pescado.es.una.importante.característica.sensorial.que.influye.decisivamente.en.la.aceptabilidad.del.producto..Disminuye.rápidamente.durante.el.almacenamiento.en.frío.después.de.la.muerte.a.causa.de.la.fragmentación.parcial.de.las.moléculas.y.relajación.de. la.estructura. (Ladrat.et al.,. 2003)..Debido.al.ablandamiento.se.produce.un.deterioro.de. la.calidad,.por. lo.que.es.muy. importante.el.conocimiento.de. los.procesos.por. los.que.se.produce.y.el.desarrollo.de.métodos.para.prevenirlo..Las.tecnologías.de.envasado.en.atmósfera.protectora.o.al.vacío.permiten.un.cierto.control.sobre.las.reacciones.químicas,.enzimáticas.y.microbianas.responsables.del.deterioro.de.los.alimentos.durante.su.almacenamiento.y.comercialización.(García-Iglesias.et al.,.2006)..Este.hecho.puede.suponer.un.gran.incremento.de.la.competitividad.por.la.mayor.permanencia.del.pescado.fresco.en.los.puntos.de.venta,.así.como.por.la.posibilidad.de.ampliar.los.mercados.a.zonas.a.las.que.sin.esta.tecnología.resultaría.imposible..Además,.permite.ofrecer.al.consumidor.el.pescado.fresco.en.unidades.de.consumo.atractivas,.cómodas.y.listas.para.cocinar.

Material y MétodosSe.han.utilizado.36.corvinas.(400-500g).procedentes.de.las.instalaciones.del.Centro.IFAPA.El Toruño.(El.Puerto.de.Santa.María.(Cádiz),.que.fueron.sacrificadas.y.trasladadas.a.la.planta.de.transformados.de.productos.de.acuicultura.“Esteros.de.Canela”.(Ayamonte,.Huelva).donde.se.evisceraron.y.filetearon.de.forma.mecánica.y.se.envasaron.en.bandejas.de.polipropileno..En.el.laboratorio.se.mantuvieron.refrigeradas.en.cámara.fría.a.4ºC.envasadas.en.diferentes.condiciones:.R.(en.bandejas),.R-V.(al.vacío).y.R-AM.(en.bandejas.con.atmósferas.modificadas)..Se. tomaron.4.filetes.de.cada. tratamiento. los.días.2,.5,.8,.12,.14.y.16.después.del.sacrificio.y.se.utilizaron.para. la.determinación.del.análisis.del.perfil.de.textura.(TPA),.color,.pH,.capacidad.de.retención.de.agua.(C.R.A.).y.el.recuento.total.de.bacterias.aerobias.mesófilas.y.psicotrópicas..

Resultados y DiscusiónDurante. el. almacenamiento. se. ha. producido. una. reducción. significativa. de. la. firmeza. de. los. filetes,. que. ha. sido. más. rápida. que. la.observada.por.Hernández.et al..(2009),.debido.posiblemente.al.diferente.tamaño.de.las.corvinas..Sin.embargo,.los.valores.son.similares.a.los.obtenidos.en.filetes.de.dorada.del.mismo.tamaño.(Ayala.et al.,.2010)..La.conservación.ha.influido.sobre.este.parámetro,.durante.los.12.primeros.días.después.del.sacrificio,.los.valores.de.firmeza.fueron.superiores.en.los.filetes.envasados.al.vacío.frente.a.los.refrigerados.o.envasados.con.atmósferas.modificadas..A.partir.de.este.momento.los.valores.de.R-V.se.han.igualado.a.los.de.R-AM,.mostrando.ambos.tratamientos.valores.superiores.a.los.de.R.En.cuanto.a. la.evolución.de. la.carga.microbiana.de. los.filetes. (expresada.en. log.ufc/g. tejido). fue.similar.en.R.y.R-AM,.siendo.éstas.significativamente.superiores.a.los.de.R-V.durante.los.16.días.de.almacenamiento..El.límite.de.recuento.de.estos.microorganismos.para.el.pescado.destinado.al.consumo.humano.es.de.7.log.ufc/g.según.el.ICMSF.(1986)..En.nuestro.ensayo,.este.valor.se.observó.a.los.7.días.de.almacenamiento.para.R.y.R-AM,.y.a.los.9.para.R-V..En.el.estudio.anteriormente.citado.para.la.misma.especie,.la.aparición.de.este.valor.se.retrasó.hasta.los.11.días,.posiblemente.debido.a.que.los.a.los.filetes.se.les.había.eliminado.la.piel.previamente.al.almacenamiento,.siendo.ésta.una.importante.fuente.de.contaminación.El.limitado.efecto.conservador.de.las.atmósferas.modificadas.se.ha.debido.posiblemente.a.la.baja.concentración.de.CO2.en.las.bandejas,.ya.que.concentraciones.demasiado.altas.pueden.repercutir.negativamente.en. la.capacidad.de.retención.de.agua.del.músculo. (Davis,.1993),.que.en.nuestras.condiciones.no.ha.tenido.lugar..Posteriores.ensayos.en.los.que.se.combinen.diferentes.concentraciones.de.CO2.permitirán.ajustar.las.cantidades.adecuadas.para.alargar.la.vida.útil.de.los.filetes.de.esta.especie.

BibliografíaAPROMAR,.2011..La Acuicultura Marina de Peces en España 2011. Edición especial 25 Aniversario APROMAR..Ministerio.de.Medio.Ambiente,.Medio.Rural.y.Marino.y.Fondo.Europeo.de.la.Pesca..Disponible.en.la.web:.http://www.apromar.es/Informes/informe%202011/Informe-APROMAR-2011.pdf.Ayala.M.D.,.Abdel.I.,.Santaella.M.,.Martínez.C.,.Periago.M..J.,.Gil.F.,.Blanco.A.,.López-Albors.O.,.2010..Muscle.tissue.structural.changes.and.texture.development.in.sea.bream,.Sparus aurata.L.,.during.post-mortem.storage..Food Science and Technology.43,.465–475.Davis. H.K.,. 1993.. Fish.. En:. R.. T.. Parry.. Principles and Applications of Modified Atmospheres Packaging of Food. Blackie. Academic. &.Professional,.Glasgow..Pp.229-268..García-Iglesias.E.,.Gago.L.,.Fernández-Nuevo.J.L.,. 2006..Tecnologías.de.envasado.en.atmósfera.protectora..En:. Informe de vigilancia tecnológica..Colección.coordinada.por:.Fundación.para.el.conocimiento.CEIM..http://www.madrimasd.org/informacionidi/biblioteca/publicacion/doc/vt/vt3_tecnologias_de_envasado_en_atmosfera_protectora.pdfHernández. M.D.,. López. M.B.,. Álvarez. A.,. Ferrandini. E.,. García-García. B.,. Garrido. M.D.,. 2008.. Sensory,. physical,. chemicals,. and.microbiological.changes.in.aquacultured.meagre.(Argyrosomus regius).fillets.during.ice.storage..Food Chem..114:.237-345.ICMSF,.1986.. International.Commission.of.Microbiological.Specifications. for.Foods..Sampling.plants. for.fish.and.shellfish..En:. ICMSF. Microorganisms in food. Sampling for microbiological análisis: Principles and scientific applications..2:.181-196..Ladrat.C.,.Verrez-Bagnis.V.,.Nöel.J.,.Fleurence,.J.,.2003..In.Vitro.proteolysis.of.myofibrillar.and.sarcoplasmic.proteins.of.white.muscle.of.sea.bass.(Dicentrarchus labrax L.):.Effects.od.cathepsins.B,.D.and.L..Food Chem..81:.517-525.

AgradecimientosEn. primer. lugar. queremos. manifestar. nuestro. mayor. agradecimiento. a. Ángel. Carro. de. la. Empresa. Esteros de Canela (Ayamonte,.Huelva).por.su.inestimable.ayuda.en.la.transformación.de.las.corvinas..También.agradecemos.al.personal.del.Centro.IFAPA.El Toruño.su.colaboración.en.el.muestreo.de.las.corvinas.en.los.estanques.de.engorde.del.centro..Este.trabajo.se.ha.realizado.con.la.participación.de.M.I..Sáez.que.ha.recibido.una.beca.predoctoral.de.la.Universidad.de.Almería.

O-065Conocimiento objetivo y subjetivo de los consumidores españoles sobre el pescado A..Claret1,.L..Guerrero1,.A..Grau2,.I..Martínez3,.L..Rincón4,.E..Aguirre5,.M.D..Hernández6,.J..B..Peleteiro7.y.C..Rodríguez-Rodríguez8

1IRTA,.Finca.Camps.i.Armet,.17121.Monells.(Girona),.e-mail:[email protected];.2LIMIA;.3IEO.Santander;.4ICCM-ULPGC;.5AGAPA;.6IMIDA;.7IEO.Vigo.y.8CEP

Abstract Product.knowledge.has.been.recognised.as.an. important. factor. influencing.consumer.decision.making..The.aim.of. this.study.was.to.assess.Spanish.consumers’.knowledge.about.fish.as.well.as.their.relationship.with.certain.socio-demographic.characteristics..Objective.and.subjective.knowledge.were.measured.by.means.of.5.and.4.items.respectively..Overall.results.revealed.the.existence.of.a.certain.lack.of.knowledge.about.fish,.although.some.differences.were.observed.depending.on.gender,.age,.education.level,.region.of.residence.and.growing.up.region.(coastal.or.interior)..A.positive.relationship.between.objective.and.subjective.knowledge.was.also.detected.


77

Calidad

JustificaciónEspaña.es.uno.de.los.países.de.la.EU.con.un.mayor.consumo.de.pescado,.aunque.éste.se.encuentra.en.el.límite.inferior.de.la.cantidad.recomendada.por.las.autoridades.alimentarias.y.nutricionales..Para.mantener.e.incluso.incrementar.el.consumo.de.pescado.entre.los.consumidores.españoles.es.necesario.abordar. los. factores.que. inciden.en.su.comportamiento. y.decisión.de.compra.desde.distintas.perspectivas..De.acuerdo.con.Alba.&.Hutchinson.(1987).y.Guerrero.(2011).la.cultura.y.el.conocimiento,.tanto.objetivo.como.subjetivo,.que.los.consumidores.poseen.sobre.un.producto.son.factores.clave.que.condicionan.su.comportamiento.El.objetivo.principal.de.este.trabajo.fue.analizar.el.grado.de.conocimiento.objetivo.y.subjetivo.de.los.consumidores.españoles.sobre.el.pescado,.así.como.estudiar.la.influencia.de.algunas.características.socio-demográficas.sobre.éste.

Material y MétodosSe.seleccionaron.un.total.de.919.consumidores.de.9.Comunidades.Autónomas.(CCAA).españolas:.Andalucía.(n=101),.Asturias.(n=101),.Islas.Baleares.(n=98),.Islas.Canarias.(n=101),.Cantabria.(n=103),.Cataluña.(n=103),.Galicia.(n=104),.Madrid.(n=104).y.Murcia.(n=104)..El.reclutamiento.se.realizó.mediante.un.muestreo.probabilístico.por.cuotas.en.función.del.género.(mínimo.un.33,3%.de.hombres).y.de.la.edad..La.muestra.final.estuvo.compuesta.por.319.hombres,.599.mujeres,.149.participantes.con.edades.comprendidas.entre.18.y.25.años,.216.entre.26.y.35,.206.entre.36.y.45,.166.entre.46.y.55,.127.entre.56.y.65.y.54.entre.66.y.70.años.de.edad..Los.participantes.cumplimentaron.un.cuestionario.con.varias.preguntas.sobre.hábitos.alimenticios,.características.socio-demográficas,.creencias.y.actitud.general.así.como.conocimiento.objetivo.y.subjetivo.sobre.el.pescado.en.general.(Pieniak.et.al..2007)..El.conocimiento.objetivo.se.valoró.mediante.5.ítems.en.los.que.los.participantes.debían.indicar.si.las.afirmaciones.mostradas.eran.ciertas,.falsas.o.si.desconocían.la.respuesta..El.conocimiento.subjetivo.se.cuantificó.mediante.4.ítems.valorados.en.una.escala.de.Likert.de.7.puntos.desde.“Totalmente.en.desacuerdo”.hasta.“Totalmente.de.acuerdo”..El.análisis.estadístico.de. la. información.obtenida.se.realizó.mediante.análisis.de. la.varianza.y.análisis. factorial.de.correspondencias.simple..Todos.ellos.se.efectuaron.con.el.programa.estadístico.XLSTAT.(Addisoft,.Francia).

Resultados y DiscusiónConocimiento objetivoLos.resultados.generales.obtenidos.indicaron.la.existencia.de.un.cierto.desconocimiento.sobre.el.pescado.(Mediaaciertos=2,2),.(Mediafallos=1,5),.(MediaNS/NC=1,7).aunque.se.observaron.ciertas.diferencias.en.función.del.género,.la.edad,.el.nivel.educativo.y.la.Comunidad.Autónoma.de.los.consumidores.(Figura.1)..Así,.los.participantes.de.mayor.edad,.con.estudios.universitarios.y.procedentes.de.Galicia,.fundamentalmente,.fueron.los.que.presentaron.un.mayor.conocimiento.objetivo.sobre.el.pescado..Al.mismo.tiempo,.los.participantes.hombres,.jóvenes,.con.estudios.básicos.procedentes.de.Canarias,.principalmente,.fueron.los.que.mostraron.poseer.un.menor.conocimiento.objetivo..Por.otro.lado,.los.participantes.hombres.con.estudios.básicos.y.de.menor.edad.fueron.los.que.un.afirmaron.desconocer.la.respuesta.correcta.para.un.mayor.número.de.ítems.(Figura.2)..

Conocimiento subjetivoEn. general,. los. participantes. mostraron. un. conocimiento. subjetivo. medio. (Media=4,2). aunque. se. observaron. diferencias. según. la.Comunidad.Autónoma,.la.edad.y.por.el.hecho.de.haber.crecido.en.una.zona.de.costa.o.interior..En.este.sentido,.los.consumidores.de.mayor.edad.muestreados.en.Madrid.y.que.crecieron.en.una.zona.de.costa.fueron.los.que.consideraron.tener.un.mayor.conocimiento.sobre.pescado.frente.a.los.más.jóvenes.muestreados.en.Asturias.y.que.crecieron.en.una.zona.de.interior.Existe.una.relación.positiva.entre.el.conocimiento.que.los.consumidores.españoles.creen.tener.sobre.el.pescado.(conocimiento.subjetivo).y.el.que.realmente.tienen.(conocimiento.objetivo).

BibliografíaAlba,.J..W.,.&.Hutchinson,.J..W..(1987)..Dimensions.of.consumer.expertise..Journal of Consumer Research,.13(4),.411–454.Guerrero.L.,.Claret.A.,.Chaya.C.,.Fernández-Ruiz.V.,.Romero.E..&.Viejo.J..(2011).Los.consumidores.y.la.cultura.del.aceite.de.oliva..Congreso Internacional. 5ª edición. Beyond Extra Virgin..Córdoba,.España.Pieniak.Z.,.Verbeke.W.,.Scholderer.J.,.Brunsø.K..&.Olsen.S.O..(2007).European.consumers’.use.of.and.trust.in.information.sources.about.fish. Food Quality and Preference: 18(8),.1050-1063.

AgradecimientosLos. autores. de. este. trabajo. agradecen. a. la. Junta. Nacional. Asesora. de. Cultivos. Marinos. (JACUMAR). la. financiación. de. este. estudio.mediante.el.proyecto.“Caracterización.de.la.calidad.del.pescado.de.crianza”.(2008-2011).

Figura 14Análisis.factorial.de.correspondencias.para.el.número.de.respuestas.acertadas.en.el.

conocimiento.objetivo

Figura 24Análisis.factorial.de.correspondencias.para.el.número.de.

respuestas.NS/NC.en.el.conocimiento.objetivo


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Tecnología de la producción

O-066Cultivo larvario de atún rojo (Thunnus thynnus) en el Centro Oceanográfico de Murcia (IEO)A..Ortega1,.M..Seoka2,.A..Belmonte3,.J.R..Prieto1,.J..Viguri1.y.F..de.la.Gándara1

1Centro Oceanográfico de Murcia, Instituto Español de Oceanografía (IEO), Ctra. de la Azohía s/n, 30860, Puerto de Mazarrón (Murcia).e-mail: [email protected] del Mediterráneo, S.A., Carretera de la Palma Km 7, Paraje la Estrella, Cartagena , Murcia2Universidad Politécnica de Cartagena. Paseo Alfonso XIII, Cartagena , Murcia

AbstractIn.the.frame.of.the.SELFDOTT.project.(From.capture.based.to.SELF-sustained.aquaculture.and.Domestication.Of.bluefin.tuna,.Thunnus thynnus). captive-reared. Atlantic. bluefin. tuna. housed. in. captivity. for. 4. years. in. El. Gorguel. (Cartagena,. Spain). have. produced. massive.spawning,. during. the. natural. spawning. period. for. this. species. in. the. Mediterranean. Sea. (June-July). since. 2009.. Egg. collection. was.accomplished.by.placing.a.special.curtain.around.the.perimeter.of.the.cage.and.with.collection.taking.place.at.night.and.at.sunrise.using.nets.from.the.surface.of.the.water..Larval.rearings.were.done.using.pseudogreenwater.technique..The.survival.was.of.73.days.in.2009.and.110.days.in.2010..In.2011.several.thousand.one.month.old.fingerlings.have.been.produced.being.transported.to.floating.cages.

JustificaciónA.finales.de.la.década.de.los.90.se.inicia.la.actividad.conocida.como.engrase.de.atún.rojo,.que.consiste.en.capturar.ejemplares.vivos.en.las.áreas.de.puesta.del.Mediterráneo,.transportarlos.a.jaulas.flotantes.ubicadas.cerca.de.la.costa,.alimentarlos.con.pescado.graso.durante.un.periodo.aproximado.de.6.meses,.y.finalmente.sacrificarlos.y.enviarlos.al.mercado,.fundamentalmente.el.japonés.en.donde.alcanzar.un.precio.muy.elevado..Pero.la.puesta.en.marcha.de.un.plan.de.recuperación.de.la.especie.por.parte.del.ICCAT,.uno.de.cuyos.principales.hitos. es. una. drástica. reducción. de. las. cuotas. de. pesca,. está. haciendo. peligrar. la. viabilidad. de. este. tipo. de. acuicultura.. El. proyecto.SELFDOTT,.cofinanciado.por.el.7º.Programa.Marco.de.la.Comisión.Europea.se.puso.en.marcha.en.Enero.de.2008,.con.el.objetivo.de.sentar.las.bases.para.producir.atún.rojo.mediante.técnicas.de.acuicultura.integral,.lo.que.permitirá.producir.atunes.de.un.modo.independiente.de.las.poblaciones.naturales..Se.presentan.en.este.trabajo.los.resultados.sobre.cultivo.larvario.obtenidos.en.el.citado.proyecto,.en.las.instalaciones.del.IEO.en.Mazarrón.

Material y MétodosDesde. Enero. de. 2008. se. mantiene. un. stock. de. alrededor. de. 30. reproductores. de. atún. rojo. frente. a. El. Gorguel. (Cartagena),. en. una.concesión.del.Grupo.Ricardo.Fuentes.e.Hijos..Estos.reproductores.se.encuentran.ubicados.en.una.jaula.circular.de.25.m.de.diámetro.y.20.m.de.profundidad.y.alimentados.una.vez.al.día,.a.saciedad,.principalmente.con.estornino.(Scomber japonicus).y.caballa.(Scomber scombrus).. Para. la. recogida. de. huevos,. se. dispuso. una. cortina. que. rodea. totalmente. la. parte. superior. de. la. jaula. hasta. los. 6. m. de.profundidad.(De.la.Gándara.et.al.,.2009)..Los.huevos.son.recogidos.en.superficie.con.un.salabre.provisto.de.malla.de.500.µm..Un.total.de.1.3.millones.de.huevos.fertilizados.fueron.trasladados.a.las.instalaciones.del.IEO.en.Mazarron.para.proceder.a.su.cultivo.larvario..Los.huevos.fueron.directamente.estabulados.en.tanques.de.5.y.40.m3.a.una.densidad.de.10.huevos/litro.y.a.una.temperatura.que.osciló.entre.22.y.27ºC..El.fotoperiodo.utilizado.fue.de.16.horas.de.luz.y.8.horas.de.oscuridad..

Resultados y DiscusiónLas.larvas.nacieron.tras.un.periodo.de.incubación.que.osciló.entre.26.y.34.horas.en.función.de.la.temperatura..Dos.o.tres.días.después.de.la.eclosión.comenzó.la.alimentación.exógena..La.estrategia.de.alimentación.larvaria.consistió.en.rotífero.y.artemia.enriquecidos.con.productos.comerciales.(Origreen.-.Skretting),.larvas.de.dorada.(Sparus aurata).recién.eclosionadas.y.alimentación.artificial.desarrollada.por.el.Skretting.Aquaculture.Research.Centre.(SARC)..Los.atunes.fueron.mantenidos.en.los.tanques.de.cultivo.larvario.hasta.los.22-25.días.de.vida,.momento.en.que.fueron.contados.y.estabulados.en.los.tanques.en.los.que.se.desarrolló.el.destete..En.este.momento.los.atunes.pesaban.entre.0.1.y.0.3.gramos,.y.la.supervivencia.media.obtenida.fue.de.alrededor.del.1.4%.(oscilando.entre.el.0.15.y.el.2.7%)..Los.atunes.fueron.destetados.durante.un.periodo.de.siete.a.diez.días.con.una.supervivencia.media.del.20%..Finalmente.se.produjeron.unos.3000.atunes.de.3-5.gramos.de.peso.medio.y.unos.40.días.de.vida,.una.parte.de.los.cuales.fueron.estabulados.en.tanques.y.otros.fueron.trasladados.a.jaulas.para.su.engorde..Se.espera.que.un.buen.número.de.ellos.alcance.el.estado.adulto.tras.un.mínimo.de.cuatro.años.y.pueda.reproducirse,.consiguiendo.por.tanto.cerrar.el.ciclo.biológico.de.esta.especie.en.cautividad..En.la.figura.1.se.muestran.fotografías.de.varios.estadíos.del.desarrollo.larvario.de.esta.especie,.en.cautividad..Es.importante.reseñar.los.avances.que.se.han.ido.obteniendo.a.lo.largo.de.los.tres.años.de.cultivo.larvario:.los.cultivos.realizados.en.la.Planta.de.Cultivos.Marinos.del.IEO.en.Mazarrón.obtuvieron.una.supervivencia.de.73.días.en.2009.(30.g.de.peso.y.14.cm.de.longitud.furcal).y.110.días.(100.g.de.peso.y.20.cm.de.longitud.furcal).en.2010..A.primeros.de.septiembre.de.2011,.los.ejemplares.mantenidos.en.las.jaulas.tienen.un.peso.medio.de.alrededor.de.250.gramos..

Figura 14Desarrollo.larvario.de.atún.rojo.en.cautividad..A:.huevo.embrionado,.B:.larva.recién.eclosionada,.C:.larva.de.23.días,.D:.juvenil.de.43.días,.con.9.g.de.peso.y.10.cm.de.longitud.furcal

BibliografíaDe.la.Gándara,.F.,.A..Ortega,.A..Belmonte,.C.C..Mylonas,.D..Coves,.C.R..Bridges,.J.R..Prieto,.J..Viguri..2009.Reproducción.del.atún.rojo.Thunnus thynnus.en.jaulas.flotantes..Obtención.de.puestas.masivas.mediante.implantes.hormonales..Libro de resúmenes del XII Congreso Nacional de Acuicultura..Madrid.Noviembre.de.2009:.542-543.

AgradecimientosLos.autores.desean.expresar.su.agradecimiento.a.todo.el.personal.técnico.del.Centro.Oceanográfico.de.Murcia.por.su.inestimable.ayuda..Este.trabajo.ha.sido.llevado.a.cabo.con.el.soporte.financiero.de.la.UE,.Proyecto.SELFDOTT..El.Dr..Seoka.participa.en.virtud.de.un.Convenio.firmado.por.la.Comunidad.Autónoma.de.la.Región.de.Murcia,.la.Universidad.Politécnica.de.Cartagena.y.las.entidades.financieras.Caja.Mar,.Caja.Murcia,.Caja.Mediterráneo.y.la.Caixa.


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O-067Desarrollo de ritmos diarios de actividad y comportamiento alimentario en larvas de lenguado (Solea senegalensis, Kaup) expuestas a diferentes regímenes de luz y espectrosB..Blanco-Vives1*,.M..Aliaga-Guerrero2,.J.P..Cañavate3,.G..García-Mateos4,.J.A..Muñoz-Cueto2,5,.F..J..Sánchez-Vázquez1

1 Departamento de Fisiología, Facultad de Biología, Universidad de Murcia. España. e-mail: [email protected] Departamento de Biología, Facultad de Ciencias del Mar, Universidad de Cádiz, España3 IFAPA Centro El Toruno, Cádiz, España4 Departamento de Informática y Sistemas, Facultad de Informática, Universidad de Murcia, España5 CACYTMAR, Institutos de Investigación. Campus Universitario de Puerto Real. Puerto Real, España

Abstract Light.plays.a.key.role.in.the.development.of.biological.rhythms.in.fish..The.aim.of.this.study.was.to.investigate.the.impact.of.different.photoperiod.regimes.and.white,.blue.and.red.light.on.the.activity.rhythms.and.foraging.behavior.of.Solea senegalensis.larvae.up.to.40.days. post-hatching. (DPH).. To. this. end,. eggs. were. collected. immediately. after. spawning. during. the. night. and. exposed. to. continuous.white.light.(LL),.continuous.darkness.(DD),.or.light-dark.(LD).12L:12D.cycles.of.white.(LDW),.blue.(LDB,.βpeak=463nm).or.red.light.(LDR,.βpeak=685nm)..A.filming.scenario.was.designed.to.video.record.activity.rhythms.during.day.and.nighttimes.using.infrared.lights..The.development.of.sole. larvae. is. tightly.controlled.by. light.characteristics,.underlining. the. importance.of. the.natural.underwater.photo-environment.(LD.cycles.of.blue.wavelengths).for.the.normal.onset.of.the.rhythmic.behavior.of.fish.larvae.during.early.ontogenesis..These.findings.should.be.considered.when.designing.rearing.protocols.for.larvae.in.aquaculture..

JustificaciónEn. la.naturaleza,. las.características.espectrales.de. la. luz.bajo.el.agua.están.determinadas.por.una.combinación.de. la. luz.natural. y.las.propiedades.ópticas.de.los.efectos.agua.(Jerlov,.1968)..Blanco-Vives.et.al..(2010).estudió.que.el.espectro.de.luz,.la.intensidad.y.el.fotoperiodo. tienen. una. gran. influencia. en. términos. de. crecimiento,. el. desarrollo,. malformaciones,. la. supervivencia. de. las. larvas. de.lenguado..El.objetivo.de.este. trabajo. fue. investigar.el.comportamiento.de.alimentación.y. los. ritmos.de.actividad.diaria.de. las. larvas.de.lenguado.expuestas.a.diferentes.espectros.de.luz.y.fotoperíodo..Con.este.fin,.hemos.construido.un.sistema.de.grabación.de.vídeo./.análisis.que.nos.permitió.cuantificar.con.precisión.de.1-40.DPH.(days.post-hatching).la.distribución.y.los.patrones.de.comportamiento.(patrones.modales.de.acción,.MAP).

Material y MétodosHuevos.de.lenguado.fueron.recogidos.inmediatamente.después.de.la.puesta,.durante.la.noche,.y.expuestos.a.luz.blanca.continua.(LL),.oscuridad.continua.(DD),.o.ciclos.de.Luz-Oscuridad.(LD).12L:.12D.de.luz.blanca.(LDW),.azul. (LDB,.βpeak.=.463nm).o.roja. (LDR,.βpeak.=.685nm)..Fue.diseñado.un.escenario.de.filmación.de. vídeo.para. registrar. los. ritmos.de.actividad.durante.el.día. y.durante. la.noche.(utilizando.luces.infrarrojas)..La.técnica.de.Altman.(1974).se.aplicó.para.recopilar.información.de.larvas.elegidas.al.azar.durante.dos.minutos.(5.larvas.por.cada.punto.de.muestreo.y.tratamiento)..Se.realizaron.observaciones.del.comportamiento.larvario.cada.dos.días.a.mitad.de.la.fase.de.luz.(ML).y.de.oscuridad.(MD).

Resultados y DiscusiónLos.resultados.revelaron.que.los.ritmos.de.actividad.bajo.LDB.y.LDW.cambia.de.diurno.a.nocturno.en.el.día.09/10.DPH,.coincidiendo.con.el.inicio.de.la.metamorfosis..En.LDR.las.larvas.se.mantuvieron.nocturnas.durante.todo.el.período.experimental,.mientras.que.en.LL.y.en.DD.no.se.presentó.ningún.ritmo..Además,.las.larvas.expuestas.a.LDB.y.LDW.tuvieron.el.mayor.éxito.de.captura.de.presa.(LDB.82,6.±.2,0%;.LDW.75,1.±.1,3%).y.de.tasa.de.ataque.(LDB.54,3.±.1,9%;.LDW.46,9.±.3,0%).durante.la.fase.de.luz.(ML).hasta.el.9.DPH..Durante.la.metamorfosis,.el.ataque.y.el.éxito.de.captura.en.estas.condiciones.de.luz.fue.más.alto.durante.la.fase.de.oscuridad.(MD),.mostrando.el.mismo.patrón.de.comportamiento.nocturno.que.larvas.bajo.LDR.

Figura 1..Actogramas.representativos.de.la.actividad.de.las.larvas.de.lenguado.(Solea senegalensis).bajo.fotoperíodo.12L:.12D.(LD).de.A).LDB,.B).LDW,.C).LDR,.y.D).LL.y.e).DD.

Nuestro.estudio.revela.por.primera.vez.la.existencia.de.patrones.rítmicos.diarios.de.comportamiento.en.larvas.de.lenguado.bajo.diferentes.condiciones.de.iluminación,.y.demuestra.que.el.desarrollo.temprano.de.huevos.y.larvas.se.ve.muy.afectado.por.las.características.de.la.luz.(fotoperíodo.y.espectro)..Dado.que.unas.condiciones.del.medio.ambiente.inapropiadas.ponen.gravemente.en.peligro.el.bienestar.de.las.larvas.de.peces.y.afectan.negativamente.a.su.supervivencia,.los.ciclos.de.luz./.oscuridad.de.longitudes.de.onda.azules.parecen.ser.las.condiciones.óptimas.y.un.requisito.indispensable.para.el.correcto.desarrollo.del.reloj.biológico.y.el.comportamiento.de.las.larvas.de.lenguado..

BibliografíaAltman.J.(1974).Observational.study.of.behaviour:.sampling.methods..Behaviour.91:.449–459.Blanco-Vives.B,.Villamizar.N,.Ramos.J,.Bayarri.MJ,.Chereguini.O,.Sánchez-Vázquez.FJ.(2010).Effect.of.daily.thermo-.and.photo-cycles.of.different.light.. spectrum.on.the.development.of.Senegal.sole.(Solea senegalensis).larvae..Aquaculture.306:.137-145.Jerlov.NG.(1968).Optical.Oceanography..Elsevier..Amsterdam,.pp..194.

AgradecimientosEste. trabajo. ha. sido. financiado. por. el. proyecto. de. investigación. del. MICINN. “CRONOSOLEA”. AGL2010-22139-C03. de. F.J.. Sánchez-.Vázquez..Los.autores.quieren.agradecer.la.colaboración.prestada.a.A.J..Martín-Robles,.P..Herrera-Pérez.y.Abdeslam.El.M’Rabet.

Zeitgeber Time (h)Zeitgeber Time (h)


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Tamaño de presa optimo en la primera alimentación de las larvas de la merluza europea, Merluccius merlucciusJ..Iglesias,.M.J..Lago,.J..Otero,.F.J..Sánchez.y.R..CalInstituto Español de Oceanografía. Centro Oceanográfico de Vigo. Apdo. 1552, 36200 Vigo

AbstractTo.find.out.the.kind.of.prey.selected.by.hake.larvae.at.first.feeding,.three.experiments.were.developed.at.7,.8.and.9.days.after.hatching,.when.yolk.sac.was.consumed..They.were.carried.out.in.nine.1.5.L.flasks.with.30.larvae.L-1..Brachionus plicatilis.were.added.at.3.ind.mL-1in.the.first.three.containers,.in.the.next.three.Artemia franciscana.naulii.at.3.ind.mL-1.and.in.the.last.three.a.mixture.of.A. franciscana.(1.5.ind.mL-1).and.B. plicatilis.(1.5.ind.mL-1).were.used..Temperature.was.14ºC.and.salinity.35.‰..Three.hours.later,.twenty.larvae.were.sampled.from.each.flask.and.its.stomach.content.was.examined.to.estimate.the.number.of.full.stomachs.and.the.type.of.prey.consumed..In.the.three.experiments.(7,.8.and.9.dph).larvae.selected.preferentially.artemia.than.rotífer.(31%.vs.23%;.20%.vs.13%.and.50%.vs.35%,.respectively)..Percentage. of. larvae. with. ingested. prey. was. higher. (51%). when. both. prey. (rotifer+artemia). were. added. together.. As. conclusion,. to.optimized.the.first.feeding.of.hake.larvae.at.days.7.and.8.after.hatching.it.is.recommended.to.use.a.mix.of.rotífer.and.artemia.but.from.day.9.on,.artemia.can.be.used.as.the.only.prey..There.are.not.previous.data.comparing.different.preys.at.first.feeding.

JustificaciónPara.iniciar.el.cultivo.larvario.de.una.especie.es.necesario.determinar.el.tamaño.óptimo.de.la.presa.suministrada..Este.tamaño.depende.del.tamaño.de.apertura.de.la.boca.de.la.larva,.así.como.de.su.comportamiento.predador..Algunas.especies,.como.el.rodaballo.(Psetta maxima).o.la.lubina.(Dicentrarchus labrax).consumen.presas.de.tamaño.pequeño.(150.mµ).y.se.alimentan.comúnmente.con.el.rotífero.Brachionus plicatilis..Sin.embargo,.otras.especies.que.poseen.una.apertura.de.boca.mayor,.como.el.lenguado.común.(Solea solea).o.el.salmón.(Salmo salar).se.alimentan.con.una.presa.de.mayor.tamaño.(>400.mµ),.como.los.nauplios.de.artemia.o.dietas.artificiales.(Appelbaum,.1985;.Bremigan.y.Stein.1994)..El.objetivo.de.este.trabajo.consistió.en.conocer.al.inicio.de.la.alimentación.exógena,.cuando.las.larvas.ya.han.consumido.su.saco.vitelino,.cual.es.el.tipo.y.tamaño.de.presa.más.adecuado.para.iniciar.el.cultivo.larvario.de.la.merluza,.utilizando.para.ello.rotífero.y.nauplios.de.artemia.

Material y MétodosLas.larvas.utilizadas.proceden.de.una.puesta.espontánea.obtenida.en.el.IEO..Los.huevos.fueron.recogidos.en.un.colector.de.500.micras.y.se.incubaron.en.un.tanque.de.120.litros.a.temperatura.de.14.±.0.5ºC.y.salinidad.de.35‰..A.los.4.días.se.produjo.la.eclosión.y.las.larvas.se.mantuvieron.en.el.mismo.tanque.hasta.el.consumo.del.saco.vitelino,.que.tiene.lugar.7.días.después.de.la.eclosión.(7.dpe)..Con.el.fin.de.averiguar.el.tipo.de.presa.seleccionado.por.las.larvas.de.merluza.al.inicio.de.la.alimentación.exógena,.se.diseñaron.tres.experimentos.con.larvas.mantenidas.en.inanición.de.7,.8.y.9.días.de.vida..En.cada.uno.se.utilizaron.9.vasos.de.1,5.L.con.45.larvas.(densidad.30.larvas.L-1)..A.tres.de.ellos.se.les.añadió.como.presa.rotífero.Brachionus plicatilis.(3.rot.mL-1);.a.otros.tres.nauplios.de.Artemia franciscana.(3.art.mL-1).y.a.los.tres.restantes.una.mezcla.de.rotífero.(1.5.ind.mL-1).y.artemia.(1.5.ind.mL-1)..La.temperatura.y.la.salinidad.fueron.las.mismas.que.durante.la.incubación..A.las.tres.horas.del.comienzo.de.los.experimentos.se.examinó.el.contenido.estomacal.de.20.larvas.de.cada.vaso,.determinando.la.cantidad.y.el.tipo.de.presa.ingerida.

Resultados y DiscusiónSe.ha.comprobado.que.las.larvas.de.merluza.cultivadas.a.14ºC.comienzan.a.alimentarse.el.día.7.de.vida..En.los.tres.experimentos.(a.los.7,.8.y.9.días.después.de.la.eclosión),.las.larvas.seleccionan.preferentemente.a.la.artemia.frente.al.rotífero.(31.vs.23%.;.20.vs.13%.y.50.vs.35%,.respectivamente)..Utilizando.la.mezcla.de.ambas.presas.(rotífero+artemia).el.número.de.larvas.que.aparecen.con.presas.ingeridas.se.incrementa.en.todos.los.casos.(34%,.48%.y.51%.a.los.7,.8.y.9.días.dpe.respectivamente).(Figura.1).

Figura 14Primera.alimentación.de.larvas.de.merluza.utilizando.rotífero,.artemia.y.mezcla.de.ambas.presas. (Rot+Art).a. los.7,.8.y.9.días. tras. la.eclosión.

Estos.resultados.indican.que.para.iniciar.la.alimentación.exógena.en.el.cultivo.larvario.de.la.merluza.europea,.a.días.7.y.8.de.vida.se.recomienda.suministrar.mezcla.de.rotífero.y.artemia,.pero.si.se.inicia.a.día.9.ya.se.puede. suministrar. solamente. artemia.. Bjelland. y. Skiftesvick. (2006).utilizan.como.primera.alimentación.de.merluza.europea.una.mezcla.de.rotífero.y.nauplios.de.copépodos;.Bustos.y.Landaeta.(2005).y.Bustos.et al..(2007),. trabajando. con. larvas. de. merluza. austral. suministran. rotíferos.y. microalgas.. Estos. autores. también. utilizan. nauplios. de. artemia. a.partir. del. día. 10. pero. en. ningún. caso. como. primera. alimentación.. En.este.trabajo.se.aportan. los.primeros.resultados.comparando.el.uso.de.diferentes.presas.como.primera.alimentación.

BibliografíaAppelbaum.S..1985..Rearing.of.dover.sole,.Solea solea.L..trough.its.larval.stages.using.Artemia.and.artificial.diets..Aquaculture.49.(3-4):.209-221.Bjelland,.R..M..y.A..B..Skiftesvik..2006..Larval.development.in.European.hake.(Merluccius merluccius.L.).reared.in.a.semi-intensive.culture.system..Aquaculture Research.37:.1117-1129.Bremingan. M.. T.. y. R.. A.. Stein. 1994.. Gape-dependent. larval. foraging. and. zooplankton. size:. Implications. for. fish. recruitment. across.systems..Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences.51.(4):.913-922Bustos.C..A..y.M..F..Landaeta..2005..Desarrollo.de.huevos.y.larvas.tempranas.de.la.merluza.del.sur,.Merluccius australis,.cultivados.bajo.condiciones.de.laboratorio..Gayana.69(2):.402-408,.Bustos.C..A.,.M..F..Landaeta,.E,.Bay-Schmith.R.Lewis.y.X..Moraga..2007..Effects.of.temperature.and.lipid.droplet.adherence.on.mortality.of.hatchery-reared.southern.hake.Merluccius australis.larvae..Aquaculture.270:535-540.Iglesias. J.,. M.. J.. Lago,. F.. J.. Sánchez. y. R.. Cal.. 2010.. Capture,. transport. and. acclimatation. to. captivity. of. European. hake,. Merluccius merluccius.L.:.preliminary.data.on.feeding.and.growth..Aquaculture Research.41:.607-609.

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Establecimiento de la capacidad mínima de carga óptima en el cultivo de juveniles de corvina Argyrosomus regius (Asso, 1801)A.F..Millán-Cubillo1,2,.I..Ruiz-Jarabo1,.J.A..Martos-Sitcha1,.S..Cárdenas2.y.J.M..Mancera1

1Dpto. Biología, Facultad de Ciencias del Mar y Ambientales, Universidad de Cádiz, 11510 Puerto Real, Cádiz. [email protected]. Producción, Centro IFAPA El Toruño, 11500 El Pto. Santa María, Cádiz

AbstractThe.objective.of.this.study.is.to.analyze.the.influence.of.stocking.density.on.growth.and.stress.system.in.juvenile.of.meagre.(Argyrosomus regius,.Asso.1801)..Two.hundred.specimens.were.distributed.in.8.tanks.(250.liters.volume).in.IFAPA.Centro.El.Toruño.(El.Puerto.de.Santa.Maria,.Cádiz).and.manteined.during.40.days..Four.different.stocking.densities.were.tested:.3.g/L.(low.density,.LD),.7.g/L.(medium.density,.MD),. 10. g/L. (high. density,. HD). and. 13. g/L. (extra. density,. ED).. The. results. showed. a. better. growth. and. feed. utilization. in. specimens.maintained.at.higher.stocking.densities.(ED>HD).respect.to.group.under.lower.stocking.densities.(MD>LD)..Culture.of.juvenile.A. regius at.higher.stocking.densities.ensures.a.better.growth.as.well.as.use.of.space.and. facilities,.while. lower.stocking.densities.negatively.affected.individuals,.with.a.decrease.of.energy.reserves,.food.utilization.and.therefore.a.lower.growth..These.results.could.be.caused.by.high.cortisol.levels.found.in.the.specimens.kept.at.lower.stocking.densities.(LD.and.MD),.indicating.an.activated.stress.system.with.the.consequent.negative.impact.on.energy.metabolism.and.growth.

JustificaciónEl.cultivo.de.corvina.Argyrosomus regius.(Asso,.1801) se.ha.desarrollado.como.una.opción.de.futuro.de.la.acuicultura.mediterránea..En.la.actualidad.es.la.especie.con.mayor.potencial.de.desarrollo.por.su.rápido.crecimiento.y.es.una.seria.opción.para.la.diversificación.de.la.acuicultura.(Cárdenas,.2011)..El.objetivo.de.este.trabajo.es.analizar.las.modificaciones.fisiológicas.de.ejemplares.juveniles.de.A. regius.sometidos.a.diferentes.densidades.de.cultivo,.así.como.determinar.su.capacidad.mínima.de.carga.óptima.

Material y MétodosEl. experimento. se. realizó. en. las. instalaciones. del. Centro. IFAPA.El Toruño. (El. Puerto. de. Santa. María,. Cádiz). (marzo-mayo. 2010). con.juveniles.de.corvina.procedentes.de.una.puesta.obtenida.mediante.inducción.hormonal.con.GnRH.del.stock.de.reproductores.del.Centro..Se.utilizó.un.ciclo.natural.de.luz,.en.condiciones.controladas.de.Tª.(18,6.–.21,9.ºC).y.salinidad.(31,7.±.3,6.ppt),.y.circulación.de.agua.en.flujo.continuo..La.Figura.1.muestra.el.esquema.experimental.mantenido.durante.40.días.

Se.realizaron.diversos.muestreos.biométricos.para.la.evaluación.del.crecimiento(.t.=.0,.12,.27.y.40.días);.determinándose.los.siguientes.índices. biométricos:. Tasa. específica. de. crecimiento. (SGR),. Tasa.específica.de.alimentación.(SFR),.Ganancia.en.peso.(WG),.Factor.de.conversión. de. alimento. (FCR),. Índice. de. condición. (K). y. Eficiencia.alimentaria.(FER)..Al.día.40.se.realizó.un.muestreo.(10.individuos.por.tratamiento).y.se.obtuvieron.muestras.de.plasma,.hígado.y.músculo.para.análisis.de.metabolitos.que.se.almacenaron.a.-80ºC.hasta.su.posterior.análisis.

Resultados y DiscusiónLos.resultados.mostraron.un.mayor.crecimiento.y.mejor.utilización.del.alimento.en.aquellos.individuos.mantenidos.a.mayor.densidad.(DS>DA).respecto.a.los.mantenidos.a.menor.densidad.de.cultivo.(DM>DB).(Tabla.1)..Estos.últimos.presentan.altos.niveles.plasmáticos.de.cortisol.y.de.glucosa,.lo.que.indica.una.activación.del.sistema.de.estrés.(Tabla.2)..Este.hecho.afecta.negativamente.al.metabolismo.ener-gético.de.los.especímenes.originando.un.menor.crecimiento.de.los.mismos..La.relación.lineal.inversa.obtenida.entre.densidad.de.cultivo.y.niveles.plasmáticos.de.triglicéridos.sugieren.que.en.densidades.bajas.los.especímenes.están.demandando.un.consumo.energético.mayor.que.podría.estar.propiciado.por.el.cortisol,.que.presenta.altos.niveles.en.estas.bajas.densidades.de.cultivo.y.que.estimula.los.procesos.catabólicos.del.animal.(Wendelaar.Bonga,.1997;.Barton,.2002).

PARÁMETRO DB DM DA DS

SGR (%/día) 0,21.±.0,08 0,24.±.0,02 0,42.±.0,02 0,54.±.0,13

FCR 2,35.±.0,94 1,87.±.0,18 1,25.±.0,16 0,89.±.0,24

FER (%) 46,25.±.18,56 53,71.±.5,25 80,96.±.10,24 116,64.±.31,15

METABOLITOS DB DM DA DS

CORTISOL (ng/mL) 32,71.±.4,60a

15,84.±.4,63b

3,12.±.0,89c

2,87.±.0,53c

GLUCOSA (mM) 7,56.±.0,88a

6,24.±.0,54ab

6,33.±.0,68ab

3,96.±.0,49b

TRIGLICéRIDOS (mM) 3,35.±.0,19a

3,07.±.0,24a

3,03.±.0,15a

2,28.±.0,15b

Diferentes.letras.en.la.columna.indican.diferencias.estadísticamente.significativas.(P<0.05).

La.corvina.A. regius.es.una.especie.gregaria.con.un.comportamiento.de.formación.de.cardúmenes.que.les.da.una.sensación.de.seguridad..Sin.embargo,.en.las.condiciones.experimentales.de.baja.densidad.los.especímenes.se.ven.incapacitados.para.formar.estos.cardúmenes.y.podrían.estar.sometidos.a.una.situación.de.estrés.crónico.con.el.consiguiente.incremento.en.los.niveles.plasmáticos.de.cortisol.La.densidad.es.un.factor.limitante.en.el.cultivo.de.juveniles.de.A. regius,.sugiriéndose.el.empleo.de.una.densidad.inicial.de.cultivo.igual.o.superior.a.13.g/L,.pero.nunca.inferior..Esto.permitiría.un.mayor.rendimiento.en.el.cultivo.así.como.una.optimización.de.las.instalaciones.

BibliografíaBarton.B.A..(2002).Stress.in.Fishes:.a.diversity.of.responses.with.particular.reference.to.changes.in.circulating.costicosteroids..Integrative and Comparative Biology 42,.517-525.Cárdenas.S..(2011).Crianza.de.la.Corvina.(Argyrosomus regius)..Serie.Cuadernos.de.Acuicultura.nº3..Fundación.OESA.y.CSIC..Madrid..100.páginas.(ISBN:.978-84-00-09291-7).Wendelaar.Bonga.S.E..(1997).The.stress.response.in.fish..Physiological Reviews 7,.591–625.0

O-069

Figura 14Diseño.experimental.utilizado

Tabla 14Valores. obtenidos. para. la. Tasa. Es-pecífica.de.Crecimiento.(SGR),.Factor.de.Con-versión. (FCR). y. Eficiencia. Alimentaria. (FER)..Los.valores. representan. las.medias.±.desvia-ciones.típicas.(n.=.20).

Tabla 24Niveles. de. cortisol. y. metabolitos.plasmáticos.en.ejemplares.de.A.regius.cultiva-dos.a.diferentes.densidades.de.cultivo..Los.va-lores.representan.las.medias.±.errores.típicos.(n.=.10).


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Estado actual y avances en el cultivo de Jurel dentón Pseudocaranx dentex en CanariasJ..Roo1,.A..Mesa1,.C..Hernández-Cruz1,.R..Guirao2,.J..A..Socorro1,.D..Schuchardt1.y.H..Fernández-Palacios1

1Grupo de Investigación en Acuicultura (ICCM&ULPGC), PO Box 56, E-35200 Telde, Las Palmas, Islas Canarias. [email protected]. C/Palangre,s/n, nave 1, Castillo del Romeral. San Bartolome de Tirajana, Las Palmas

Abstract The.present.work,.describes. the.advances.related.with.broodstock.maintenance,. reproduction.and.first. larval. rearing.experiences.of.Pseudocaranx.dentex.stock.in.the.Instituto.Canario.de.Ciencias.Marinas..Forty.fish.captured.in.a.commercial.off-shore.fish.farm,.were.transferred.to.on.land.facilities,.acclimatation.to.tanks.and.inert.food.was.successfully.carried.out,.with.100%.survival.after.1.year..Fish.with.an.initial.weight.(4,15kg).were.followed.and.sampled.to.determine.individual.growth.in.weight,.size.and.maturity.stage.during.the.last.four.years..After.the.third.year.(2010),.fish.mature.in.captivity.but.natural.spawn.were.not.obtained..However,.in.2011.viable.spawns.were.obtained.by.means.of.hormonal.injection..First.larval.rearing.trials.including.mesocosm.and.intensive.systems.were.applied..Also.different.experiences.to.identify.the.correct.feeding.sequences,.showed.that.better.results.are.obtained.when.Artemia.feeding.phase.was.reduce..In.addition.first.studies.of.its.nutritional.requirements.concluded.that.increasing.N-3.HUFA.levels.in.microdiets.with.DHA.levels.around.4%.(dw).help.to.improve.larval.survival.at.weaning.phase.

JustificaciónEl.Jurel.dentón (Pseudocaranx dentex) es.un teleósteo.marino.de.la.familia.de.los.Carángidos. Esta.especie,.que.puede.alcanzar.un.peso.máximo.de.20kg.está.considerada.como.uno.de.los.Carángidos.que.alcanza.mayores.precios.en.el.mercado.(15-20β/kg).(Watanabe.y.Vassallo-Agius,.2003)..La.época.de.reproducción.abarca.un.amplio.periodo.(Mayo-Noviembre).con.un.rango.de.temperaturas.de.21-23ºC.en.las.aguas.Canarias.(Guirao.et al.,.2007;.2009)..Las.experiencias.de.cría.se.han.restringido.a.las.realizadas.en.Australia,.Japón,.Portugal.(Madeira).y.España.(Canarias)..En.el.caso.de.Canarias,.los.resultados.de.las.experiencias.previas.desde.el.año.2007-2011,.han.permitido.la.creación.un.stock.de.reproductores.de.esta.especie.y.la.obtención.de.puestas.viables.por.primera.vez.en.Junio.2011..En.cuanto.al.engorde.de.esta.especie,.las.experiencias.llevadas.a.cabo.en.Canarias,.han.reflejado.que.P. Dentex.manifiesta.una.mejor.adaptación.al.engorde.en.jaulas.que.en.tanques.(Roo.et al.,.2007)..En.el.presente.trabajo.se.describe.el.estado.actual.del.cultivo.de.esta.especie.y.los.avances.realizados.en.diferentes.aspectos.de.su.cultivo.con.vistas.a.una.producción.comercial.del.mismo.

Material y MétodosLa.captura.de. los.ejemplares.reproductores.sigue.la.metodología.descrita.por.Guirao.et al.,. (2009)..Así,.se.capturaron.25.ejemplares.de.P. dentex,.que.se.mantuvieron.en.2.tanques.de.10m3.de.capacidad..Se.determinó.la.longitud.estándar.(LS),.peso.total.(PT).y.factor.de.condición.FC.=.(PT/LS3)*100.así.como.el.estado.de.maduración.mediante.biopsia.gonadal..Durante.los.años.2010/2011,.los.peces.fueron.sometidos.a.tratamiento.hormonal.(LHRH,.Sigma-Aldrich).por.inyección.(20µg/kg.vivo),.para.promover.la.liberación.de.la.puesta..Con.respecto.a.las.experiencias.de.cría.larvaria,.estas.se.han.desarrollado.tanto.en.sistemas.de.cría. intensivo.como.Mesocosmos.(semi-intensivo),.de.acuerdo.a.la.metodología.descrita.por.Roo.et al.,(2010)..Evaluando.aspectos.relativos.a.la.secuencia.alimentaria.durante.la. fase.de.destete,.así. como. los. requerimientos.nutricionales.en.esta.etapa..Durante. las.experiencias.de.cría. larvaria,. se. realizaron.muestreos.periódicos.cada.5.días,.evaluando.la.evolución.morfométrica.de.Longitud.total.(LT).y.el.peso.fresco.(PF).de.un.total.de.30.larvas.por.tanque..Determinando.la.supervivencia.final.por.conteo.individual.de.los.juveniles.supervivientes..Durante.la.fase.de.preengorde,.un.total.de.5000.ejemplares.se.mantuvieron.en.2.tanques.de.10m3,.alimentándose.con.piensos.comerciales,.para.establecer.las.pautas.de.alimentación.y.evolución.en.condiciones.de.cria.intensiva..

Resultados y DiscusiónLa.supervivencia.de.los.reproductores.fue.del.100%.desde.el.momento.de.la.captura..Los.ejemplares.incrementaron.su.peso.medio.en.1,1kg.desde.su.captura,.igualmente.el.FC.se.incrementó.desde.1,6.a.1,96.(Tabla.1)..Desde.la.captura,.se.ha.observado.la.maduración.efectiva.de. los.ejemplares.machos.y.hembras,.detectando.presencia.de.machos.maduros.100%. individuos.y.gónadas. femeninas.con.oocitos.mayores.de.500.micras.en.el.40.%.de.las.hembras..En.la.anualidad.2011,.se.han.obtenido.un.total.de.4.Millones.de.huevos,.con.un.porcentaje.de.fertilización.del.98%.consiguiendo.una.tasa.de.eclosión.de.un.53%.Los.resultados.obtenidos.con.el.uso.de.sistemas.de.cultivo.Mesocosmos.han.permitido.la.producción.controlada.de.más.25.000.juveniles.

O-070

Figura 14Evolución.del.crecimiento.de.las.larvas.de.Jurel.denton.

Tabla 14Parámetros.determinados.28/07/2008 16/07/2009 10/05/2010 25/05/2011

PT(Kg) 3,77±1,16 4,37±1,20 4,96±1,20 4,91±0,82

TL 60,94±6,01 62,94±5,99 62,86±4,93 64,19±2,77

FC 1,62±0,19 1,71±0,12 1,96±0,16 1,85±0,20

Macho/hembra 10/15 10/15 10/15 10/15


83


El cultivo de la anguila europea (Anguilla anguilla) como herramienta para la conservación de las poblaciones naturales de esta especieE..Gisbert1,.K.B..Andree1,.L..Zamora2,.J..Rodon3,.A..Serrat3.y.R..Allué3.1IRTA, Centre de Sant Carles de la Ràpita (IRTA-SCR), Crta. Poble Nou del Delta km 5.5, 43540-Sant Carles de la Ràpita, [email protected] d’Ecologia Aquàtica, Facultat de Ciències, Campus de Montilivi s/n, UdG, 17071-Girona3Departament d’Agricultura, Ramaderia, Pesca, Alimentació i Medi Natural; Direcció General de Pesca i Afers Marítims; Generalitat de Catalunya.

Abstract In.this.communication.we.summarize.different.activities.developed.under.the.Magament.Plan.for.the.European.Eel.in.Calatonia.(Spain).during. 2007-2011. that. were. related. to. restocking. Catalan. rivers. with. wild. eels. grown. in. captivity.. Data. is. shown. about. the. rearing.procedures.conducted.during.this.period,.as.well.as.results.regarding.eels’.growth.and.survival,.and.their.tagging.for.monitoring.their.dispersal,.survival.and.growth.once.they.were.released.in.the.wild..

Justificación Dado.el.elevado.valor.gastronómico.de.la.anguila,.este.animal.es.sobreexplotado.durante.todas.las.fases.de.su.ciclo.biológico..Este.hecho,.sumado.a.alteraciones.en.su.hábitat,.y.a.otros.factores,.han.originado.que.la.situación.de.las.poblaciones.de.anguila.europea.se.pueda.considerar.por.debajo.del.umbral.biológico.que.asegure.su.conservación.(Dekker,.2004)..Varios.estudios.han.cuantificado.que.del.total.de.angulas.que.llegan.a.las.costas.europeas,.sólo.un.10%.continúan.su.migración.natural.hacia.ambientes.continentales,.mientras.que.el.90%.restante.son.capturadas.para.su.exportación.(60%.al.sudeste.asiático.yun.10%.a.los.mercados.europeos),.consumo.directo.(20%).o.fines.repoblacionales.(10%)..En.junio.del.2008,.esta.especie.fue.incluida.en.el.Anexo.B.del.convenio.CITES.después.de.un.descenso.del.99%.en.sus.capturas.durante.las.últimas.décadas..Además,.el.Reglamento.(CE).1100/2007.del.Consejo,.por.el.que.se.establecen.medidas.para. la. recuperación. de. la. anguila. europea,. estableció. un. plan. de. actuación. para. su. gestión. sostenible. y. recuperación,. mediante. la.ejecución.de.medidas.que.aseguren.a.largo.plazo.la.recuperación.de.la.especie.(Segarra.et.al.,.2007).Dentro.del.amplio.rango.de.medidas.contempladas.por.el.citado.plan,.se.incluyen.actuaciones.destinadas.a.repoblar.las.distintas.cuencas.fluviales.con.animales.capturados.del.medio..Desde.el.año.1996,.la.Generalitat.de.Cataluña.ha.ido.realizando.repoblaciones.de.anguila.en.las.diferentes.cuencas.fluviales.catalanas,.si.bien.hasta.la.actualidad.los.animales.eran.liberados.en.forma.de.angula.(250-350.mg)..Esta.estrategia.no.garantiza.el.éxito.a.nivel.repoblacional.dado.que.los.animales.liberados.pueden.sufrir.una.elevada.mortalidad.derivada.de.una.fuerte.depredación,.o.una.mala.adaptación.a.las.nuevas.condiciones.ambientales,.situación.derivada.de.una.mala.manipulación.y.mantenimiento.en.cautividad.antes.de.ser.liberadas.(Gisbert,.2010)..Por.todo.ello,.se.decidió.a.partir.del.2007.realizar.dichas.actuaciones.con.animales.de.talla.mayor.previamente.engordados.en.instalaciones.de.acuicultura..La.presente.comunicación.resume.los.resultados.llevados.a.cabo.durante.el.periodo.2007-2011.sobre.el.engorde.de.la.anguila.con.fines.repoblacionales,.considerándose.también.los.pros.y.los.contras.de.dicha.actividad.

Resultados y Discusión Entre. el. periodo. 2007-2011. se. han. engordado. en. las. instalaciones. del. IRTA-SCR. 4. lotes. de. anguila. europea. (3-5. kg/lote). desde. el.estadio.de.desarrollo.de.angula.(250.mg).hasta.los.de.anguila.amarilla.y.anguila.plateada..Los.peces.(5-10%.de.las.capturas).fueron.subministrados.por.pescadores.de.Gerona.y.Tarragona.y.fueron.engordados.en.condiciones.controladas.hasta.su.liberación..A.grandes.rasgos,.a.continuación.se.describe.el.proceso.de.engorde.de.los.animales.

O-071

de.75.días.de.edad.con.un.peso.medio.de.4,3g.(Figura.1)..En.cuanto.al.protocolo.de.destete.más.adecuado.cuando.se.utilizan.sistemas.de.cultivo. intensivo,.se.ha.determinado.que.los.tratamientos.que.incluyen.Artemia.en.la.secuencia.alimentaria,.mejoran.la.eficiencia.del.proceso.de.destete.cuando.se.usan.dietas.comerciales..Sin.embargo,.el.protocolo.de.destete.para.el.Jurel.dentón.puede.realizarse.en.ausencia.de.Artemia.cuando.se.usan.microdietas.específicas.con.elevados.niveles.de.n-3.HUFA.(Mesa.et al.,.2011a;.Poster.565)..En.este.sentido,. las.dietas.testadas.con.diferentes.niveles.de.DHA.indican.que.una.dieta.de.destete.para. jurel.debería. incluir.niveles.de.DHA.en.torno.al.4%.superiores.a.los.normalmente.presentes.en.las.dietas.comerciales(Mesa.et al.,.2011b;.Poster.566)..Estos.resultados.concuerdan.con.los.descritos.por.Takeuchi.et al..(1996),.quien.obtuvo.una.mayor.supervivencia.en.aquellos.tratamientos.alimentados.con.Artemia.con.mayores.niveles.de.n-3.HUFA..Respecto.a.la.fase.de.pre-engorde.(45-75dpe),.cabe.mencionar.que.los.datos.actuales.hasta.los.75.días.de.edad,.indican.que.el.jurel.se.puede.engordar.en.densidades.relativamente.altas,.alcanzando.un.SGR.de.12,5%..Finalmente,.y.de.acuerdo.a.los.resultados.obtenidos.por.Roo.et al.,.2007,.parece.indicar.que.el.cultivo.en.jaulas.el.sistema.más.apropiado.para.esta.especie,.si.bien.existen.otras.alternativas,.poco.utilizadas.en.nuestro.país,.como.es.el.“marine.ranching”.cultivo.tipo.rancho.marino,.que.consiste.en.la.suelta.de.alevines.y.posterior.recaptura,.ampliamente.utilizado.en.Japón.que.ha.dado.muy.buenos.resultados.con.esta.especie,.y.que.podría.ser.un.sistema.de.cultivo.complementario.a.los.sistemas.de.engorde.en.jaulas..

BibliografíaGuirao,.R.,.Socorro,.J.,.Reyes,.T..Y.Roo,.J..(2007).Estudio.del.desarrollo.gonadal.del.Jurel.dentón.(Pseudocaranx dentex).asociado.a.jaulas.de.engorde.de.peces.en.aguas.de.Canarias..Boletín.Instituto.Español.de.Oceanografía.21,.253-264.Mesa-Rodríguez,.A.,.Hernández-Cruz,.C.M.,.Fernandez.Palacios,.H.,.Roo,.F.J..(2011ª)..Evaluación.de.diferentes.secuencia.alimentarias,.durante.la.fase.de.destete.de.las.larvas.de.Jurel.dentón.Pseudocaranxs dentex.Actas.XIII.CNA.Mesa-Rodríguez,.A.,.Hernández-Cruz,.C.M.,.Fernandez.Palacios,.H.,.Roo,.F.J.. (2011b)..Determinación.de. los.niveles.óptimos.de.DHA.durante.el.destete.del.Jurel.dentón.Pseudocaranx dentex..Actas.XIII.CNA.Roo,.F..J.,.Socorro,.J.,.Guirao,.R.,.Reyes,.T.,.Hernández-Cruz,.C.M.,.Fernández-Palacios,.H.,.Izquierdo,.M.S..2007..Primeras.experiencias.de.engorde.de.jurel.dentón.(Pseudocaranx dentex).en.tanques.y.jaulas.flotantes,.en.Canarias..Boletín.Instituto.Español.de.Oceanografía.21,.183-188.Takeuchi,.T.,.R..Masuda,.Y..Ishizaki,.T..Watanabe,.M..Kanematsu,.K..Imaizumi.and.K..Tsukamoto..(1996)..Determination.of.the.requirement.of.larval.striped.jack.for.eicosapentanoic.acid.and.docosahexanoic.acid.using.enriched.artemia.nauplii..Fisheries.Science.62(5),.760-765.Watanabe,.T..y.Vassallo-Agius.R..(2003)..Broodstock.nutrition.research.on.marine.finfish.in.Japan..Aquaculture..227:.35–61.

AgradecimientosEste.trabajo.se.enmarca.dentro.del.proyecto.“Mejora de las técnicas de cría de larvas de Seriola rivoliana: Determinación de requerimientos de ácidos grasos esenciales en su etapa larvaria y optimización de la secuencia alimentaria (METCSER),.financiado.por.el.Gobierno.de.Canarias.2011/2013..Los.autores.expresan.su.agradecimiento.a.la.ACIISI.del.Gobierno.de.Canarias,.al.Ministerio.de.Ciencia.e.Innovación.y.al.Fondo.Social.Europeo.por.la.financiación.obtenida.para.la.contratación.del.Doctor.Javier.Roo:Ref:.MEC-PTA2008-1653-I.Igualmente.expresar. nuestro. más. sincero. agradecimiento. al. personal. técnicos. de. la. empresa. Canexmar. S.L. por. su. inestimable. contribución. al.desarrollo.de.este.estudio.


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Evaluación hidrodinámica de un tanque acuícola tipo multivórticeI..Masaló.y.J..OcaDepartamento de Ingeniería Agroalimentaria y Biotecnología de la Universitat Politècnica de Catalunya. Av. Canal Olímpic 15, 08860 Castell-defels (Barcelona) e-mail: [email protected]

Abstract Evaluation.of.a.multivortex.tank.with.different.configurations.(using.baffles,.and.simple.or.double.water.inlet).is.presented..Multivortex.tank.combine.advantages.of.circular.and.rectangular.tanks.creating.rotating.flow.cells..Water.is.injected.tangentially.to.the.wall.and.out-lets.are.placed.in.the.centre.of.each.cell..Comparison.between.different.configurations.was.made.using.the.tank.resistance.coefficient.(Ct).and.coefficient.of.uniformity.(DU50)..Ct.has.to.be.determined.experimentally.and.allows.adjusting.water.velocities.inside.the.tank..Lower.Ct.indicates.lower.water.resistance.to.flow,.and.the.higher.the.DU50,.the.better.the.homogeneity.inside.the.tank..When.baffles.were.placed.higher.velocities.were.achieved,.as.a.result.Ct.decreased.and.the.values.were.very.close.to.those.obtained.in.a.circular.tank.with.the.same.cell.dimensions..Comparing.simple.and.double.water.inlet,.differences.in.the.Ct.values.were.observed.when.baffles.were.used.(lower.Ct.with.double.water.inlet)..

JustificaciónUnas. condiciones. homogéneas. de. calidad. del. agua. y. unas. velocidades. óptimas. para. la. especie. de. cultivo. dentro. de. un. tanque. son.esenciales.para.favorecer.el.crecimiento.y.el.bienestar.de.los.peces..Estas.características.son.más.fáciles.de.conseguir.en.los.tanques.circulares,.que.sin.embargo.presentan.un.manejo.más.complicado.que.los.rectangulares..En.la.última.década.se.han.realizado.diferen-tes.estudios.para.combinar.las.ventajas.de.los.tanques.circulares.y.rectangulares.(Watten.et.al,.2000;.Oca.y.Masaló,.2007a).mediante.la.utilización.de.los.tanques.llamados.multivórtice..En.estos.tanques.se.crean.células.de.flujo.rotacional.mediante.la.inyección.del.agua.tangencialmente.a.la.pared.longitudinal.y.emplazando.la.salida.en.el.centro.de.cada.una.de.las.células.Oca.y.Masaló.(2007a).utilizaron.el.coeficiente.de.resistencia.de.tanque.(Ct).para.evaluar.tanques.con.flujo.rotacional.(rectangulares.y.circulares)..El.Ct.es.útil.para.evaluar.la.resistencia.de.la.circulación.del.agua.en.cada.célula.de.flujo.rotacional,.y.permite.ajustar.las.velocidades.a.las.necesidades.del.cultivo.(Ecuación.1)..Este.coeficiente.es.característico.de.cada.tanque.y.debe.determinarse.experimen-talmente..Los.mismos.autores.(Oca.y.Masaló,.2007b).introdujeron.el.coeficiente.de.uniformidad.(DU50,.Ecuación.2).para.evaluar.el.nivel.de.homogeneidad.de.las.velocidades.en.tanques.circulares..

Q caudal; V2 y V

1 velocidad entrada y velocidad media en la célula, respectivamente; A área mojada; V

50 velocidad media del 50% del área

con menores valores.El.objetivo.del.presente.trabajo.es.evaluar.la.influencia.de.las.configuraciones.de.entrada.de.agua.(simple.o.doble).y.de.la.utilización.de.deflectores.en.el.Ct.y.el.DU50.de.un.tanque.multivórtice..

O-072

El. engorde. de. la. angula. hasta. los. 5-10. g. se. realiza. en. tanques. de. 2m3. a. baja. densidad. (2-3. kg/m3). en. circuito. cerrado. (sistema. de.recirculación.IRTAmarTM),.en.agua.dulce.(2100.µS/cm).y.a.una.temperatura.que.oscila.entre.los.18.ºC.(invierno-primavera).a.los.21ºC.(verano-otoño)..En.condiciones.de.cultivo.comerciales.y.superintensivas. la. temperatura.de.cultivo.oscila.entre. los.25-26ºC. (Pérez.et.al.,.2004)..Durante.un.periodo.inicial.de.una.semana,.los.animales.son.aclimatados.(1-1.5ºC/día).y.desparasitados.(baños.alternos.de.formol.100.ppm.al.37%.de.1.h.de.duración.durante.4.días)..La.condición.inicial.de.los.animales.es.de.extrema.importancia.para.su.buena.adaptación.a.condiciones.de.cautividad.y.posterior.crecimiento..Posteriormente.y.durante.un.periodo.aproximado.de.2.a.3.meses.las.anguilas.se.alimentan.ad libitum.y.a.partes.iguales.con.huevas.de.merluza.y.bacalao.(según.disponibilidad).y.nauplios.de.Artemia.congelados..El.hecho.de.utilizar.huevas.ha.supuesto.en.algunos.casos.la.transmisión.de.un.parásito.monogenea.(Gyrodactylus anguillae).que.causó.importantes.pérdidas.en.un.lote.(40-50%)..El.tratamiento.por.balneación.de.los.peces.con.un.producto.antihelmíntico.(MebendazoleTM,.1.mg/L.durante.24.h).permitió.controlar.dichas.infecciones.parasitarias,.si.bien.el.uso.de.este.tipo.de.alimento.se.ha.reducido.también.para.evitar.la.transmisión.de.parásitos.a.través.de.la.dieta..Al.final.de.segundo.mes.de.engorde.(0.7-1.5.g),.las.angulas.ya.metamorfoseadas.en.angulones.son.adaptadas.a.piensos.en.forma.de.migas.(55%.proteínas.y.20%.lípidos).con.los.que.se.alimentan.hasta.los.5-10.g.cuando.los.animales.son.transferidos.a.tanques.exteriores.de.volumen.comprendido.entre.los.2.y.10.m3.(circuito.abierto,.rango.Tª.anual:.9-28ºC).engordándose.determinados.lotes.hasta.los.150-200.g.en.18-20.meses..En.condiciones.normales.los.animales.son.liberados.a.los.9.meses.de.engorde.cuando.tienen.una.talla.inferior.a.los.12.cm..La.supervivencia.global.del.citado.proceso.oscila.entre.el.40.y.70%.según.los.lotes.Previa.a.la.repoblación,.se.procedió.a.la.identificación.de.los.individuos.mediante.dos.tipos.de.marca..En.aquellos.ejemplares.con.una.talla.inferior.a.200.mm.(aprox..30.g).se.implantó.una.marca.de.tipo.Coded Wire Tag.(NMT,.USA).en.la.musculatura.dorsal,.al.inicio.de.la.aleta.dorsal,.reconocible.mediante.un.detector.de.metales..Los.ejemplares.con.una.talla.superior.fueron.marcados.mediante.la.inserción.en.la.zona.intraperitoneal.de.una.marca.del.tipo.PIT-tag.(Biomark,.USA).las.cuales.permiten.la.identificación.individual.al.tener.un.código.alfanumérico.único..En.2011.se.marcaron.un.total.de.1000.ejemplares.con.el.primer.tipo.de.marcas.y.300.ejemplares.con.el.segundo..Una.vez.realizada.su.liberación,.se.realiza.un.seguimiento.de.su.supervivencia.en.la.subcuenca.objeto.de.estudio.mediante.recapturas.(actividad.en.curso)..A.partir.de.la.información.obtenida,.se.espera.poder.estimar.la.movilidad.de.los.ejemplares.y.la.tasa.de.supervivencia.aparente,. información.que.será.de.gran.utilidad.para.mejorar. la.gestión.de. las.poblaciones.naturales.de.esta.especie.en.peligro.de.extinción.y.contribuir.a.la.recuperación.de.éstas..

BibliografíaDekker,.W..2004..Slipping.through.our.hands..Population.dynamics.of.the.European.eel..Tesis Doctoral. Universiteit van Amsterdam,.188.p.Gisbert,.E..2010..La. reintroducció.de. l’anguila:.Conservació.de. les.poblacions.d’anguila.en. les.conques.fluvials.catalanes..RuralCat. -.Dossier Tècnic.40:.24-26.Pérez,.L.,.R..Barrera,.J.F..Asturiano,.M..Jover..2004..Producción.de.anguilas:.pasado,.presente.y.futuro. Revista AquaTic.20:.51-78.Segarra,. I., J..Rodon,.J..Ylla. y.R..Allué..2007..Plan.de.Gestión.de. la.Anguila.Europea.-.Cataluña..Dept. Agricultura, Ramaderia, Pesca, Alimentació i Medi Natural; Generalitat de Catalunya,.174.p.

Agradecimientos Este.trabajo.ha.sido.financiado.por.la.Generalitat.de.Cataluña.a.través.del.proyecto.IFOP-443RCAT0256.y.el.Plan.de.Gestión.de.la.Anguila.Europea.–.Cataluña..Los.autores.expresan.su.agradecimiento.al.personal.técnico.del.IRTA-SCR.por.su.valuosa.labor.en.el.cultivo.de.los.animales,.y.a.R..Barrera.(Valenciana.de.Acuicultura.S.A.).por.sus.inestimables.recomendaciones.en.momentos.puntuales.del.cultivo.


85

Genética

Efecto del ácido retinoico (AR) sobre la expresión génica de sus receptores nucleares y de genes implicados en su síntesis y degradación en larvas de lenguado senegalés (Solea senegalensis)A..Boglino1,.M..Manchado2,.D.M..Power3,.M.J..Darias1.y.E..Gisbert1

1IRTA, Centre de Sant Carles de la Ràpita (IRTA-SCR), Crta. Poble Nou del Delta km 5.5, 43540-Sant Carles de la Rápita, Tarragona.e-mail: [email protected], Centro El Toruño, Camino Tiro de Pichón s/n, 11500 El Puerto de Santa María, Cádiz3CCMAR, CIMAR-Laboratório Associado, Universidade do Algarve, 8005-139 Faro, Portugal

Abstract Retinoic.acid.(RA).is.a.potent.morphogenetic.nutrient.that.plays.an.essential.role.in.the.processes.of.morphogenesis,.skeletogenesis.and.pigmentation.of.fishes.by.activating.the.expression.of.over.500.genes..However,.still.little.is.known.about.the.transcriptional.cascades.mediated.by.RA.in.flatfish.species..Therefore,.the.aim.of.this.study.was.to.evaluate.the.effects.of.RA.during.the.larval.development.and.metamorphosis.of.Senegalese.sole.and.to.determine.the.transcriptional.responses.of.genes.involved.in.RA.metabolism.and.action..In.a.first.experiment,.pre-metamorphic.larvae.(7.days.after.hatching,.dah).were.treated.with.an.inhibitor.of.RA.synthesis.(DEAB).until.the.end.of.metamorphosis.(20dah)..In.a.second.experiment,.post-metamorphic.larvae.pretreated.for.3.days.with.DEAB.and.DMSO.(solvent.of.DEAB).were.subdivided.into.three.additional.tanks.to.which.all-trans.RA.(ATRA).and.TTNPB.(rar.agonist).were.added..In.each.experiment,.samples.were.taken.at.different.times.to.quantify.the.expression.of.genes.involved.in.RA.synthesis.(rdh10a, raldh2),.degradation.(cyP26a1),.metabolism.(rbp1, rbp4, crabp1a),.mediators.of.its.action.(retinoic.acid.nuclear.receptors,.rarα1, rarα2, rarγ, rxrα, rxrβ1, rxrβ2, rorβ, rarres3).and.other.RA-related.pathways.(thrαa, thrαb, thrβ)..

Material y MétodosLos.experimentos.se.llevaron.a.cabo.con.un.tanque.rectangular.de.4*1.m.(Q=1600l/h;.V2=0.56m/s),.donde.se.dispusieron.4.entradas.tan-genciales.en.la.pared.longitudinal.para.crear.4.células.de.flujo.rotacional..Las.salidas.de.agua.se.emplazaron.en.el.centro.de.cada.célula.del.modo.que.se.indica.en.la.Figura.1..Se.midieron.las.velocidades.en.una.malla.de.10*10.cm.en.una.célula.de.flujo.rotacional.intermedia.con.un.velocímetro.acústico.de.efecto.Doppler.(Sontek)..

Resultados y Discusión

Figura 14Mapa.de.velocidades.(Q=1600l/h).

La.utilización.de.deflectores.contribuyó.a.aumentar.las.velocidades,.reduciendo.en.un.30-35%.el.Ct.en.todas.las.configuraciones..Esta.disminución.del.30-35%.del.Ct.representa.un.incremento.de.la.velocidad.media.(V1).del.20-24%..Cuando.se.utilizaron.deflectores.no.se.apreciaron.diferencias.sensibles.en.el.DU50.respecto.a.cuando.no.se.utilizaron.(DU50=.75-80.%.en.todos.los.casos).En.la.comparación.de.entrada.simple.versus.entrada.doble.sólo.se.encontraron.diferencias.cuando.se.emplazaron.deflectores,.observán-dose.un.menor.Ct.con.una.entrada.doble.(15%.menor).Los.valores.de.Ct.obtenidos.con.deflectores.son.similares.a.los.obtenidos.con.un.tanque.circular.de.1.m.de.diámetro.(resultados.no.pu-blicados),.por.lo.tanto.las.velocidades.medias.(V1).conseguidas.en.un.tanque.multivórtice.con.deflectores.son.muy.próximas.a.las.de.un.tanque.circular.con.una.célula.de.flujo.rotacional.del.mismo.diámetro.

BibliografíaOca,.J.,.Masaló,.I. (2007a).Design.criteria.for.rotating.flow.cells.in.rectangular.aquaculture.tanks..Aquacultural.Engineering.36,.pp.36-44Oca,.J.,.Masaló,.I..(2007b).Use.of.the.“Tank.Resistance.Coefficient”.to.evaluate.modifications.of.water.inlet.devices.in.rotating.flow.tanks..Aquaculture.Europe.2007,.“Competing.claims”.Istanbul,.Turkey..October,.24-27..Pp.395-396Watten,.B..J.;.Honeyfield,.D..C.,.Schwartz,.M..F..(2000).Hydraulic.characteristics.of.a.rectangular.mixed-cell.rearing.unit..Aquacultural.Engineering.24,.pp.59-73

AgradecimientosEl.presente.trabajo.ha.sido.financiado.por.el.Ministerio.de.Ciencia.e.Innovación.AGL2009-11655/ACU.

O-073


86

Genética

Inmunohistoquímica de la capacidad de respuesta inmune durante la ontogenia de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss)P..Santana,.L..MercadoLaboratorio de Genética e Inmunología Molecular (GIM), Instituto de Biología, Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, 2373223, Valparaíso, Chile, [email protected]

AbstractAlthough.it.is.believed.that.fish.larvae.depend.fundamentally.on.their.innate.defense.mechanisms,.the.ontogeny.of.the.innate.immunity.of.salmonids.is.poorly.understood..In.this.work.we.used.mono-specific.polyclonal.antibodies.against.IL-8,.IL-8R,.TNF-a.and.IL-1B,.central.

O-074

Growth,.survival.and.eye.migration.were.not.neither.affected.by.the. inhibition.of. the.synthesis.of.RA.by.DEAB.nor.by.the.subsequent.addition.of.ATRA..The.expression.of.raldh2, rbp1.and.4,.crabp1a, rxrα, rxrβ1, rxrβ2, rarα1, rarα2, rarγ, rorβ, thrαa, thrαb, thrβ.genes.did.not.showed.significant.differences.at.8.days.after.treatment.(14dah).between.larvae.from.the.control.group.and.from.the.10µM.DEAB.group..In.contrast,.rarres3.and.rdh10a.genes.increased.their.transcript.levels.(2.3.and.17.6.times,.respectively).and.cyP26a1.gene.reduced.its.level.of.messenger.in.larvae.treated.with.DEAB.(3.3.times.decrease)..The.second.experiment.confirmed.these.findings.by.observing.a.major.activation.of.cyP26a1.gene.after.24h.and.48h.of.bath.with.RA.or.TTNPB.(142.and.121.times.at.24.h,.respectively)..The.expression.of. rdh10a.and. rarres3.genes.was.down-regulated. in. larvae.treated.with.RA,.whereas. raldh2.gene.expression.was.not.affected.by.RA..Contrary. to. other. studies. in. zebrafish,. our. data. indicate. that. this. gene. is. not. regulated. at. transcriptional. level. by. RA. in. Senegalese.sole..In situ.hybridization.results.revealed.that.transcripts.of.cyP26a1, raldh2, rarres3.and.rdh10a.genes.were.detected.in.the.gills.and.in.the.cells.of.the.periphery.of.the.buccopharyngeal.cavity,.which.are.the.first.tissues.in.contact.with.the.water.containing.RA.and.the.most.exposed.to.a.stimulation.of.the.expression.of.genes.sensitive.to.RA..In.addition,.the.expression.of.those.genes.was.also.detected.in.chondrocytes..Rarres3.gene.expression.has.also.been.detected.in.the.brain.and.raldh2.gene.expression.in.muscle..The.expression.of.rarres3.and.cyP26a1.genes.appeared.as.a.nuclear.signal,.which.is.linked.to.the.function.of.the.proteins.that.they.encode.for..The.changes.observed.in.the.expression.of.rdh10a.and.cyP26a1,.involved.in.the.synthesis.and.degradation.of.RA.respectively,.suggest.they.are.the.main.genes.regulating.the.cellular.RA.homeostasis.in.Senegalese.sole.larvae.

Justificación La.nutrición.larvaria.es.uno.de.los.factores.clave.que.afecta.los.procesos.de.morfogénesis,.esqueletogénesis.y.pigmentación.en.peces.y,.entre.los.distintos.nutrientes.considerados,.el.contenido.de.vitamina.A.en.la.dieta.y.su.metabolito.bioactivo,.el.acido.retinoico.(AR),.han.sido.descritos.como.potentes.nutrientes.morfogenéticos.(Balmer.y.Blomhoff,.2002;.Fernández.y.Gisbert,.2001)..El.AR.media.su.acción.a.través.de.los.receptores.nucleares.rars.y.rxrs,.que.a.su.vez.regulan.la.transcripción.de.centenares.de.genes..Además,.los.rxrs.pueden.formar.heterodímeros.con.receptores.de.hormonas.tiroideas.e.inducir.la.diferenciación.y.proliferación.celular.durante.los.procesos.de.morfogénesis.y.remodelación.tisular.durante.la.metamorfosis..Sin.embargo,.todavía.faltan.conocimientos.sobre.la.implicación.del.AR.en.los.mecanismos.de.regulación.de.las.cascadas.de.transcripción.y.las.vías.moleculares.que.llevan.a.estos.cambios.fisiológicos.en.el.lenguado..Por.eso,.en.este.estudio.se.propone.investigar.el.efecto.de.la.inhibición.de.la.síntesis.del.AR.y.de.su.rescate.sobre.el.desarrollo.larvario.y. la.expresión.de.génica.de.receptores.nucleares.del.AR.y.de.genes.implicados.en.su.síntesis.y.degradación,.en.el. lenguado.senegalés.(Solea senegalensis)..

Material & Métodos Experimento.1:. las.larvas.de.lenguado.(6-20.días.post.de.la.eclosión.(dpe)).se.trataron.por.balneación.con.dosis.crecientes.de.DEAB.(4-diethyl.amino-benzaldehyde:.0.1,.1.y.10µM)..A.los.20dpe,.las.larvas.control.y.de.10.µM.DEAB.se.trataron.con.1µM.de.ATRA.(all-trans.AR)..Se.determinó.el.crecimiento,.la.supervivencia.y.el.progreso.de.la.metamorfosis,.así.como.la.cuantificación.de.la.expresión.de.los.siguientes.genes:.retinol.deshidrogenasa.10a.(rdh10a),.retinaldehido.deshidrogenasa.2.(raldh2),.retinol.binding.protein.1.and.4.(rbp1, 4),.cellular.retinoic.acid.binding.protein.1a.(crabp1a),.citocromo.P26a1.(cyP26a1),.receptores.nucleares.a.los.retinoides.(rxrα, β1, β2, rarα1, α2, γ, rorβ y.rarres3).y.receptores.de.las.hormonas.tiroideas.(thrαa, αb, β)..Para.normalización.se.usaron.los.genes.ubiquitina.(ub52).y.gapdh2.y.se.aplicó.el.método.2ΔΔCt.(Infante.et al.,.2008)..Experimento.2:. las. larvas.metamórficas. (17dpe).se. trataron.durante.3.días.con.10µM.DEAB.y. las. larvas.control.con.DMSO.(dimethyl.sulfoxide)..Posteriormente,. las. larvas.se.dividieron.en. tres. tanques.y.se. les.añadió.1µM.ATRA.y.25nM.TTNPB. (agonista.de. rars).y.se.tomaron.muestras.para.la.cuantificación.y.localización.tisular.de.la.expresión.génica.(q-PCR.e.hibridación.in situ,.respectivamente).a.las.24.y.48h..Según.los.resultados.del.experimento.1,.se.analizaron.los.genes.cyP26a1, raldh2, rarres3 y rdh10a.

Resultados & Discusión El.crecimiento,.la.supervivencia.y.la.metamorfosis.larvaria.del.lenguado.no.se.vio.afectada.ni.por.el.DEAB,.inhibidor.de.la.síntesis.del.AR,.ni.por.sus.agonistas.ATRA.o.TTNPB..A.los.14dpe,.la.expresión.de.los.genes.raldh2, rbp y rbp4, crabp1a, rxrα, rxrβ1, rxrβ2, rarα1, rarα2, rarγ, rorβ, thrαa, thrαb, thrβ.no.varió.significativamente.entre.las.larvas.del.grupo.control.y.las.del.grupo.10µM.DEAB..Por.el.contrario,.la.expresión.de.cyP26a1.disminuyó.la.de.rdh10a y rarres3.aumentó.en.las.larvas.tratadas.con.10µM.DEAB..Los.tratamientos.con.AR.y.TTNPB.estimularon.la.expresión.de.cyP26a1,.gen. implicado.en.la.degradación.del.AR,.y.redujeron.la.expresión.de.raldh2 y radh10a,.genes.implicados.en.la.síntesis.del.AR,.y.del.receptor.nuclear.rarres3.en.larvas.post-metamórficas..La.expresión.de.estos.cuatro.genes.se.localizó.en.las.branquias.y.células.de.la.periferia.de.la.cavidad.bucofaríngea,.que.son.los.primeros.tejidos.en.contacto.con.el.agua.que.contiene.el.AR.y,.por.tanto,.los.más.expuestos.a.la.estimulación.de.la.expresión.de.los.genes.sensibles.al.AR..Además,.sus.expresiones.se.detectaron.en.los.condrocitos,.la.de.rarres3.también.se.observó.en.el.cerebro.y.la.de.raldh2.en.el.músculo..Los.resultados.muestran.que,.pese.a.su.desarrollo.temprano,.las.larvas.de.lenguado.son.capaces.de.regular.a.nivel.molecular.los.niveles.de.AR.en.los.tejidos.y.modular.los.efectos.de.este.potente.nutriente.morfogenético..

BibliografíaBalmer,.J..E..y.R..Blomhoff..2002..Gene.expression.regulation.by.retinoic.acid..Journal of Lipid Research.43:.1773-1808.Fernández,.I..y.E..Gisbert..2011..The.effect.of.vitamin.A.on.flatfish.development.and.skeletogenesis:.A.review..Aquaculture.315:.34–48.Infante,.C.,.M.P..Matsuoka,.E..Asensio,.J.P..Cañavate,.M.,.Reith.y.M..Manchado..2008..Selection.of.housekeeping.genes.for.gene.expression.studies.in.larvae.from.flatfish.using.real-time.PCR..BMC Molecular Biology.9:.28,.1-12.

Agradecimientos El. trabajo.en. IFAPA-El.Toruño.fue.financiado.por.AQUAGENET.(SOE2/P1/E287;. INTERREG.IVB.SUDOE)..La.estancia.en.el.CCMAR.fue.financiada. por. LarvaNet. COST. action. FA0801.. A.. Boglino. está. financiada. por. el. MICINN. (AGL2008-03897-C04-01/ACU).. Los. autores.agradecen.el.equipo.técnico.del.IFAPA-El.Toruño.para.su.ayuda.en.el.cultivo.larvario.y.análisis.moleculares.y.a.la.unidad.de.“Endocrinología.molecular.comparada”.del.CCMAR.por.su.asistencia.técnica..


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Genética

O-075Análisis de segregación de las deformidades de lordosis, opérculo y fusión de vértebras en dorada (Sparus aurata, L.) para la búsqueda de QTLsS..Rodríguez,.JM..Afonso,.A..Navarro,.I..Lee,.M..Soula,.D..Negrín.y.M.J..ZamoranoUniversidad de Las Palmas de Gran Canaria. Instituto Universitario de Sanidad Animal y Seguridad Alimentaria (IUSA). Instituto Canario de Ciencias Marinas (ICCM). Grupo de Investigación en Acuicultura (GIA). División de Acuicultura y Genética Marina. C/ Trasmontaña, s/n. 35416. Arucas. Las Palmas. E-mail: [email protected]

Abstract:The.segregation.for.lordosis,.fused.vertebrae.and.operculum.deformities.in.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata, L).is.studied..A.total.of.12,355.fish.(6-28g).from.a.design.mating.(normal.vs.deformity).were.analyzed..Normal.and.deformed.fish.were.separated.according.their.deformities..For.statistical.analysis,.a.general.log.lineal.model.was.realized..Phenotypic.analysis.revealed.a.high.and.significant.deformity.

markers.of.immune.activation,.to.assess.their.expression.at.protein.level.by.immunohistochemistry.in.10.to.33.days.post-hatching.rainbow.trout.larvae.yolk.sacs,.stimulated.and.not.stimulated.with.1ug/ml.LPS.from.Pseudomonas aeuruginosa.Preliminary.analysis.shows.responsiveness.of.these.by.LPS,.which.is.reflected.in.the.expression.of.these.cytokines.at.skin,.gills,.gut.and.kidney.level,.primarily,.noting.also.the.same.tendency.to.different.days.post-hatching.

JustificaciónEn.acuicultura.la.etapa.de.alevinaje.en.salmónidos.se.ha.visto.afectada.por.altas.mortalidades,.lo.que.en.gran.parte.se.debe.a.patógenos.oportunistas. como. el. virus. IPN,. bacterias. del. género.Vibrio,.Flavobacterium,.Aeromonas. y. el. hongo.Saprolegnia sp.. Estos. factores. en.conjunto.con.las.altas.densidades.de.peces,.calidad.de.agua,.entre.otros.debilitan.su.inmunidad.generando.importantes.enfermedades,.una.baja.producción.y.finalmente.grandes.pérdidas.económicas.Por.su.parte,. las.empresas.salmonicultoras.y. la. industria.productora.de.alimentos.para.peces,. invierten.grandes.recursos.en.el.uso.de. métodos. inmunoprofilácticos. tales. como. la. vacunación. e. inmunoestimulación. a. modo. de. prevenir. y. controlar. enfermedades.. Sin.embargo,.para.evaluar.los.distintos.métodos.a.utilizar,.es.necesario.conocer.y.entender.la.ontogenia.del.sistema.inmune.en.salmónidos..Es.así.que.el.presente.estudio.tiene.como.principal.objetivo.evaluar.la.capacidad.de.respuesta.inmune.en.alevines..Para.lo.cual.se.propuso.utilizar.como.marcadores.inmunológicos.a.IL-8,.IL-8R,.TNFa.e.IL-1B,.moléculas.cuya.expresión.ha.sido.descrita.en.etapas.tempranas.de.otros.peces..Estos.marcadores.fueron.detectados.por.inmunohistoquímica,.gracias.a.la.generación.de.anticuerpos.policlonales.anti-epítoes,.purificados.por.inmunoafinidad..

Material y MétodosAlevines de peces. Los alevines.de.trucha.arcoiris.fueron.obtenidos.en.la.piscicultura.Estero.Derrumbe.en.Puerto.Montt.(Chile),.con.10,.13,.16,.19.y.33.días.post-eclosión..Ensayo experimental. Se.trabajó.con.un.grupo.control.no.tratado.y.un.grupo.desafiado.con.LPS..El.grupo.desafiado.se.trató.con.1,0.µg/ml.de.LPS.de.Pseudomona aeruginosa..Para.ambos.grupos.se.recolectaron.alevines.cada.2,.4.y.8h..Inmunohistoquímica. Los.alevines.fueron.fijados.en.solución.de.Bouin.(71%.solución.ácido.pícrico,.24%.formaldehído.y.5%.ácido.acético),.luego.deshidratados.y.llevados.a.xilol.antes.del.emparafinado..Los.bloques.de.parafina.con.los.alevines.incluidos.fueron.seccionados.en.planos.parasagitales.de.5µm.y.en. forma.seriada..Se.comenzó.con.el.desparafinado.de. los.cortes.histológicos.con.una.batería.de.neo-clear.y.alcoholes.en.gradiente.descendente.(100%,.96%.y.70%)..Una.vez.hidratados.la.peroxidasa.endógena.fue.bloqueada.con.una.solución.metanol/peróxido.de.hidrógeno.(9:1).v/v,.dos.veces.durante.20.minutos..El.bloqueo.se.realizó.en.BSA.5%.en.PBS,.por.30.minutos..Las.secciones.se.incubaron.en.el.primer.anticuerpo,.IgG.de.ratón.anti-epítope.de.cada.una.de.las.moléculas.en.estudio,.a.temperatura.ambiente.por.una.hora..El.segundo.anticuerpo.utilizado.fue.IgG.de.cabra.anti. IgG.de.ratón-biotinilado,.durante.1.hora..El.ensayo.fue.revelado.utilizando.el.complejo.avidina-estreptavidina.peroxidasa.durante.1.hora.y.posteriormente.incubado.en.una.solución.Tris-HCl.0,05M.pH.7.5,.50mg.DAB.y.50µl.de.H2O2,.por.3.minutos.en.oscuridad..La.tinción.de.contraste.fue.hematoxilina.y.finalmente.los.cortes.fueron.deshidratados.con.una.batería.de.alcoholes.en.gradiente.ascendente.(70%,.96%.y.100%.v/v),.neoclear.y.neomunt.

Resultados y DiscusiónEn.todas.las.muestras.de.larvas.con.saco.analizadas,.se.pudo.identificar.el.desarrollo.de.dos.órganos.linfohematopoyeticos,.bazo.y.riñón.cefálico.además.de.las.barreras.expuestas.a.la.entrada.de.patógenos.de.peces.que.son.las.branquias,.el.intestino.y.la.piel..El.análisis.inmunohistoquímico.permitió.evidenciar.la.capacidad.de.respuesta.inmune.durante.el.desarrollo.ontogénico.de.trucha.arcoíris,.destacando.el.aumento.de.la.inmunodetección.del.receptor.de.IL8.(IL8R),.en.piel,.intestino,.branquias.y.riñón,.lo.cual.se.evidencia.desde.el.día.10.post-eclosión..Al.igual.que.su.receptor.el.incremento.de.IL-8.en.larva.desafiadas.se.observa.en.los.mismo.tejidos.y.en.los.mismos.tiempos.post-eclosión..La.citoquina.pro-inflamatoria.TNFα,.se.observó.a.los.10.días.post-eclosión.en.piel.y.branquias,.y.desde.los.13.días.en.adelante.su.incremento.es.mejor.detectado.en.intestino.y.riñón,.tendencia.que.también.fue.observada.para.IL1β..Estos.resultados.pueden.sugerir.que.durante.las.etapas.de.desarrollo.temprano,.las.larvas.con.saco.tienen.capacidad.de.respuesta.frente.a.PAMPs,.lo.que.se.observa.en.la.expresión.de.citoquinas.proinflamatorias.en.los.principales.sitios.de.contacto.con.patógenos.y.órganos.linfohematopoyeticos..

AgradecimientosProyecto.de.Investigación.Asociativa.PIA17.11.Dirección.de.Investigación,.Vicerrectoría.de.Investigación.y.Estudios.Avanzados..Pontificia.Universidad. Católica. de. Valparaíso,. Chile.. PS. es. becaria. de. doctorado. Comisión. Nacional. de. Investigación. Científica. y. Tecnológica.(CONICYT),.Gobiernos.de.Chile.

BibliografíaGuttvik.A.,.Paulsena.B.,.Dalmo.R..A.,.et.al..(2002)..Oral.administration.of.lipopolysaccharide.to.Atlantic.salmon.(Salmo.salar.L.).fry..Uptake,.distribution,.influence.on.growth.and.immune.stimulation..Aquaculture;.214(1-4):35-53.Magnadóttir.B.,.Lange.S.,.Steinarsson.A..and.Gudmundsdóttir.S..(2004).The.ontogenic.development.of.innate.immune.parameters.of.cod.(Gadus morhua L.)..Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology;.139:217-24.Magnadóttir.B.,.Lange.S.,.Gudmundsdottir.S.,.Bøgwald.J..and.Dalmo.R.A..(2005).Ontogeny.of.humoral.immune.parameters.in.fish..Fish & Shellfish Immunology;.19:429-439.Oehlers.S.H.B.,.Flores.M.V.,.Hall.C.J.,.et.al..(2010)..Expression.of.zebrafish.cxcl8.(interleukin-8).and.its.receptors.during.development.and.in.response.to.immune.stimulation..Developmental and comparative immunology;.34(3):352-9.Seppola.M.,.Johnsen.H.,.Mennen.S.,.Myrnes.B..and.Tveiten.H..(2009)..Maternal.transfer.and.transcriptional.onset.of.immune.genes.during.ontogenesis.in.Atlantic.cod..Developmental and Comparative Immunology;.33:1205–1211.


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Genética

percentage.in.the.descendants.when.one.of.the.parents.was.deformed..Thus,.the.incidence.had.been.up.to.21.59%,.9.67%.and.6.77%.in.the.NormalxLordotic,.NormalxFused.Vertebrae.and.NormalxOperculum.deformity.mating,.respectively..In.addition,.the.number.of.deformed.fish. in.each.mating.was.positively.correlated.with. the.same.deformity.showed.by. their.parents..These.data.suggest. the.possibility.of.genetic.determination.in.the.incidence.of.deformity.for.lordosis.and.fused.vertebrae,.not.so.for.operculum..The.confirmation.of.these.results.by.QTLs.detection.would.make.possible.to.include.deformity.as.trait.in.breeder`s.selection.programs.

JustificaciónLa.dorada.(Sparus aurata.L.).es.la.especie.marina.más.relevante.de.la.acuicultura.mediterránea.cuyo.cultivo.aún.tiene.condicionantes.importantes,.como.es.la.elevada.incidencia.de.malformaciones.que.repercute.negativamente.en.la.producción.y.comercialización..Las.malformaciones. han. sido. extensamente. estudiadas. en. peces. desde. el. punto. de. vista. medioambiental. aunque. se. ha. prestado. poca.atención.a.los.condicionantes.genéticos.de.las.mismas.(Afonso.et al.,.2000;.Astorga,.2005;.Afonso.y.Roo,.2007;.Castro.et al.,.2008)..La.publicación.del.mapa.genético.de.dorada.y.la.existencia.de.programas.de.selección.genética.para.dicha.especie,.abren.la.posibilidad.de.la.búsqueda.de.Quantitative Trait Loci.(QTL).para.las.deformidades.que.son.económicamente.relevantes.para.el.sector.industrial..En.el.presente.estudio.se.realizó.un.análisis.de.segregación.(F1).para.las.deformidades.de.lordosis.(L),.fusión.de.vértebras.(FV).y.opérculo.(O),.utilizando.reproductores.de.dorada.que.presentaban.dichas.malformaciones.

Material y MétodosSe.planificaron.cruces.por.triplicado.entre.individuos.normales.y.deformes.de.tres.tipos:.Normal.por.Lordosis.(NxL),.Normal.por.Opérculo.(NxO).y.Normal.por.Fusión.de.Vértebras.(NxFV),.así.como.un.cruce.control.mediante.puesta.masal.con.reproductores.del.Instituto.Canario.de.Ciencias.Marinas.(ICCM)..El.cultivo.de.peces.se.llevó.a.cabo.como.describe.Hernández-Cruz.(1993).Una.vez.que.los.peces.alcanzaron.el.peso.idóneo.para.la.fácil.detección.visual.de.las.deformidades.(6-28.gramos),.se.cribaron.manualmente..Se.evaluaron.un.total.de.12.355.peces.que.se.clasificaron.como.normales.o.deformes..Se.mantuvieron.en.engorde.todos.los.deformes.y.una.proporción.igual.de.normales..El.resto.fue.sacrificado.y.se.tomó.una.muestra.al.azar.de.643.peces.procedentes.de.todos.los.cruces,.que.habían.sido.cribados.como.no.deformes,.para.realizar.un.análisis.radiográfico.y.comprobar.la.ausencia.de.deformidad..El.tratamiento.estadístico.de.los.datos,.se.realizó.mediante.análisis.loglineal.general.(SPSS,.v18).

Resultados y DiscusiónLos. resultados. del. análisis. mostraron. que. de. los. 12.355. peces. evaluados,. 1.131. fueron. deformes. (un. 9,15%).. El. análisis. de. familias.como.factor. (figura.1).muestra.que. las. familias.de. lordóticos.y. fusión.de.vértebras.poseen.mayor. incidencia.de.dichas.deformidades.en.su.descendencia.(10%.y.22%.para.FV.y.L,.respectivamente),.lo.que.concuerda.con.Astorga.(2005),.no.así.para.el.cruce.de.opérculo.(Castro.et al.,. 2008)..En.el. cruce.control,.hay.un.exceso.de.normales..Podemos.decir.que.existe.una.asociación.significativa. familiar.para.la.lordosis.y.fusión.de.vertebras.(Afonso.et al.,.2000;.Astorga,.2005). El.efecto.tanque.detectado.para.la.deformidad.de.opérculo.(figura.1),.con.un.exceso.de.normales.en.dos.de.ellos,.puede.ser.explicado.por.la.capacidad.de.recuperación.de.esta.deformidad.en.el.desarrollo.(Georgakopoulou.et al.,.2007)..El.análisis.radiográfico.de.peces.aparentemente.normales.mostró.la.existencia.de.deformidades.esqueléticas.subyacentes.(Astorga,.2005.y.Roo.et al.,.2010),.y.la.asociación.entre.lordosis.y.ausencia.de.vejiga.natatoria..Los.resultados.del.estudio.sugieren.la.posible.existencia.de.determinación.genética.en.la.aparición.de.lordosis.y.fusión.de.vertebras.en.dorada,.no.así.para.opérculo..El.retrocruzamiento.en.el.diseño.de.la.búsqueda.de.QTLs.confirmará.los.resultados.hallados.en.el.análisis.de.segregación.realizado.en.este.trabajo.

+Z,.valores.≥.1,96.→Significativo.por.exceso..–Z,.valores.≤.-1,96.→.Significativo.por.defecto..Mix*.contiene.1/3L,.1/3FV,.1/3O

Figura 14Representación.de.la.significación.de.deformidades.según.tipo.de.cruce.y.tanque.o.familia.

BibliografíaAfonso,.J.M.,.Montero,.D.,.Robaina,.L.,.Astorga,.N.,.Izquierdo,.M.S.,.Gines,.R.,.2000..Association.of.a.lordosis–scoliosis–kyphosis.deformity.in.gilthead.seabream.(Sparus aurata).with.family.structure..Fish.Physiol..Biochem..22,.159–163.Afonso,.J.M.,.Roo,.F.J,.2007.. In:.Espinosa,.J.. (Ed.),.Anomalías.morfológicas.en.peces.cultivados:.heredabilidad.y.selección..Genética.y.Genómica.en.Acuicultura.Publicaciones.Consejo.Superior.de.Investigaciones.Científicas,.Madrid,.pp..213–240.Astorga.Contreras,.N..2005..Estudio.genético.de.las.deformidades.esqueléticas.de.columna.en.dorada.(Sparus aurata,.L.).en.condiciones.de.cultivo.intensivo..Ph..D..Thesis..ULPGC..Spain.Castro,.J.,.A..Pino-Querido,.M..Hermida,.D..Chavarrías,.R..Romero,.L.A..García-Cortés,.M.A..Toro,.P..Martínez,.2008..Heritability.of.skeleton.abnormalities.(lordosis,.lack.of.operculum).in.gilthead.seabream.(Sparus aurata).supported.by.microsatellite.family.data..Aquaculture.279;.18–22.Georgakopoulou. E.,. Sfakianakis. D.G.,. Kouttouki. S.,. Divanach. P.,. Kentouri. M.,. Koumoundouros. G.. 2007.. The. influence. of. temperature.during.early.life.on.phenotypic.expression.at.later.ontogenetic.stages.in.sea.bass..Journal.of.Fish.Biology,.70:.278-291.Hernández-Cruz,.C.M..1993..Mejora.de.las.técnicas.de.cultivo.larvario.de.dorada.(Sparus aurata L..1758).Tesis.doctoral..Universidad.de.la.Laguna..Tenerife..España..Roo,.J.,.Socorro,.J.,.Izquierdo,.M.S..2010..Effect.of.rearing.techniques.on.skeletal.deformities.and.osteological.development.in.red.porgy.Pagrus pagrus.(Lineaus,.1978).larvae..J..Appl..Ichthyol..26,.372-376.

AgradecimientosEste.trabajo.ha.sido.financiado.por.el.Ministerio.de.Ciencia.e.Innovación.(AGL2008-04842/ACU)


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Genética

Microsatélites polimórficos en promotores de genes relacionados con el eje somatotrópico (crecimiento) en la dorada Sparus aurata L. YJ..Borrell.1,.JA..Sánchez1,.E..Vázquez1,.J..Asturiano2.y.G..Blanco1

1Grupo Genética Acuícola. Dpto Biología Funcional. Universidad de Oviedo. Calle Julián Clavería s/n. 33007, Oviedo. [email protected] 2Grupo de Acuicultura y Biodiversidad. Instituto de Ciencia y Tecnología Animal. Universidad Politécnica de Valencia. Camino de Vera s/n. 46022, Valencia

Abstract Seabream.(Sparus aurata.L.).is.a.species.with.great.relevance.for.European.aquaculture.and.one.example.of.the.implementation.of.the.genomic.revolution..The.genes.of. the.somatotropic.axis.can.be.a.good.target.since.they.have.usually.showed.significant.associations.between.genetic.polymorphisms.and.phenotypic.growth.rates..It.has.been.suggested.that.repeats.could.influence.transcription.of.these.genes..This.study.analyzed.the.polymorphism.of.three.microsatellites.inserted.in.the.5’UTR.region.of.the.Prolactin,.Growth Hormone.and.Myogenin.genes.with.the.aim.of.reveal.a.possible.association.between.polymorphisms.and.fitness.traits..We.found.dependence.between.growth.rate.and.the.alleles.types.in.the.microsatellite.saMGpCA*.(long.alleles.more.growth)..Also.there.is.dependence.between.growth.rates.and.saPROpCA*.(short.alleles.fastest.growing)..For.the.microsatellite.saGHpCA.we.did.not.find.such.relationships..These.results.sug-gest.that.microsatellites.inserted.in.promoters.of.genes.associated.with.somatotropic.axis.could.be.considered.as.useful.genetic.markers.for.growth.selection.programs.in.the.S. aurata.

Justificación La.dorada.(Sparus aurata.L.).es.una.especie.con.una.relevancia.económica.considerable.para.la.acuicultura.europea.y.uno.de.los.mejores.ejemplos.de.la.aplicación.de.la.reciente.revolución.genómica.a.la.acuicultura..En.esta.especie.se.ha.priorizado.la.búsqueda.e.identifica-ción.de.genes.potencialmente.relacionados.con.el.crecimiento..Los.genes.del.eje.somatotrópico.son.un.blanco.(ó.diana).muy.interesante.ya.que.en.ellos.se.han.encontrado.habitualmente.asociaciones.significativas.entre.los.polimorfismos.genéticos.y.la.tasa.de.crecimiento.fenotípica.(De.Santis.y.Jerry,.2007)..Particularmente.interesante.es.la.presencia.de.microsatélites.insertados.en.regiones.que.regulan.la.expresión.de.genes.del.eje.somatotrópico.en.los.espáridos..Almuly.et al..(2005).reportaron.un.microsatélite.tipo.dinucleótido.CA/GT.en.la.región.proximal.del.promotor.de.la.Hormona del Crecimiento.en.dorada.que.muestra.polimorfismo.en.poblaciones.en.cultivo.y.reportaron.una.asociación.entre.los.alelos.de.250.y.254.pares.de.bases.con.el.crecimiento..Así.mismo,.en.el.promotor.del.gen.Prolactina.aparecen.repeticiones.de.este.dinucleótido.que.se.ha.demostrado.que.pueden.estar.asociadas.al.crecimiento.y.adaptación.a.agua.dulce.en.tilapias.(Streelman.y.Kocher,.2002).(este.gen.fue.secuenciado.en.doradas.por.Astola.et al..(2003))..Se.ha.sugerido.que.esta.influencia.podría.de-berse.a.que.las.repeticiones.tienen.un.rol.modulador.negativo.sobre.la.transcripción.de.estos.genes.como.ocurre.en.otras.especies.(Li.et al., 2004)..En.este.estudio.se.analizó.el.polimorfismo.de.estos.dos.microsatélites.y.de.otro.microsatélite.(saMGpCA*),.del.mismo.tipo,.insertado.en.la.región.5ÚTR.del.gen.de.la.Miogenina.(Codina.et al.,.2008).con.el.objetivo.de.estudiar.una.posible.asociación.entre.el.poli-morfismo.de.estos.loci.microsatélites.y.el.crecimiento.en.dorada,.aspectos.no.analizados.previamente.en.esta.especie.

Material y Métodos Se.estudiaron.271. individuos.de.dos.años.de.edad. (Borrell.et al..2007;.2011),.con.registros.de.peso. (g).en.el.año.2004. (W0604),.2005.(W0605),.y.peso.y.talla.(cm).en.el.año.2006.(W0606)/(L0606)..Las.tasas.de.crecimiento.específicas.fueron.estimadas.utilizando.la.fórmula.SGR =.100.x.((ln.W1-lnW0)/t).(%W/día).(Boyer.et al., 1994)..Así.se.estimaron.SGR1.(2004-2005),.SGR2.(2005-2006).y.SGRTot.(2004-2006)..Los.microsatélites.saGHpCA,.saPROpCA*.y.saMGpCA*.(Borrell.et al.,.2011).fueron.amplificados.y.los.individuos.genotipados.utilizando.el.equipo.de.secuenciación.automático.OpenGeneTM.de.Visible.Genetics.(Ontario)..Las.variables.de.crecimiento.se.agruparon.en.rangos.utilizando.la.media.y.+/-.una.desviación.típica.(3.grupos)..Los.alelos.de.cada.microsatélite.fueron.clasificados.también.en.3.grupos.(alelos.cortos,.medio.y.largos)..El.programa.SPSS.15.0.fue.utilizado.para.hacer.pruebas.de.contingencia.(asociación).entre.las.variables.(tamaño.de.los.alelos.vs.tasas.de.crecimiento).

Resultados y Discusión La.Tabla.1.muestra.los.resultados.de.crecimiento.obtenidos.en.esta.población.de.dorada..Se.obtuvieron.14.alelos.(238-270.pbs).para.saGHpCA,.20.alelos.(197-241.pbs).para.saPROpCA*.y.8.alelos.(175-257.pbs).para.saMGpCA*..Se.encontró.una.asociación.significativa.en-tre.el.tipo.de.alelo.del.microsatélite.saMGpCA*.(c2=6.10.P=0.047).y.SGR1.mostrando.los.individuos.portadores.de.alelos.largos.un.mayor.crecimiento,.al.igual.que.en.el.caso.del.microsatélite.saPROpCA*.donde.los.individuos.con.alelos.cortos.muestran.una.mayor.tasa.decre-cimiento.SGR2.(c

2=26.87.P=0.001)..Sin.embargo.no.se.encontró.ninguna.asociación.entre.los.tamaños.de.los.alelos.del.locus.microsatélite.saGHpCA.y.ninguna.de.las.tasas.de.crecimiento..(P>0.05).

Tabla 14Parámetros de crecimiento en una población de dorada S.aurata.

Eficacia Biológica Peso (g) Longitud (cm) Tasa específica de crecimiento (%W/día)

W0604 W0605 W0606 L0606 SGR1 SGR2 SGRTot

Media (n) 825.38.(218)

1276.57.(238)

1456.00.(107)

37.24.(107)

0.1191.(199)

0.0366.(107)

0.0783.(92)

Desv. Típ. 70.67 143.01 183.56 1.69 0.0250 0.0217 0.0145

Estos.resultados.sugieren.que.las.repeticiones.tipo.microsatélites.insertadas.en.regiones.5ÚTR.de.genes.relacionados.con.el.eje.so-matotrópico.podrían.ser.considerados.como.marcadores.genéticos.útiles.para.programas.genéticos.de.selección.para.crecimiento.en.la.dorada.S. aurata..

BibliografíaAlmuly,.R.,.Poleg-Danin,.Y.,.Gorshkov,.S.,.Gorshkova,.G.,.Rapoport,.B.,.Soller,.M.,.Kashi,.Y.,.Funkenstein,.B..2005..Characterization.of.the.5´flanking.region.of.the.growth.hormone.gene.of.the.marine.teleost,.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata):.analysis.of.the.polymorphic.microsatellite.in.the.proximal.promoter..Fisheries Science..71:.479-490..Astola,.A.,.Ortiz,.M.,.Calduch-Giner,.J.A.,.Pérez-Sánchez,.J.,.Valdivia,.M.M..2003..Isolation.of.Sparus.aurata.prolactin.gene.and.activity.of.the.cis-acting.regulatory.elements..General and Comparative Endocrinology..134:.57–61.Borrell,.Y.J.,.Carleos,.C.E.,.Asturiano,.J.F.,.Bernardo,.D.,.Vazquez,.E.,.Corral,.N.,.Sanchez,.J.A.,.Blanco,.G..2007..Use.of.microsatellites.and.a.combinatorial.optimization.approach.in.the.acquisition.of.gilthead.sea.bream.(Sparus aurata L).broodstocks.for.hatcheries..Aquaculture..269:.200-210.

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Genética

Seguimiento temporal genético de un programa de acuicultura conservacionista en caballito de mar Hippocampus guttulatus en GaliciaA..López1,.M..Planas2,.M..Vera1,.P..Martínez1.y.C..Bouza1

1Departamento de Xenética. Facultade de Veterinaria. Universidade de Santiago de Compostela. Campus de Lugo. Avenida Carballo Calero s/n. 27002 Lugo. E-mail: [email protected] de Investigaciones Marinas (CSIC), Eduardo Cabello 6, 36208 Vigo

AbstractMonitoring.of.a.captive.breeding.program.for.the.endangered.seahorse.Hippocampus guttulatus.has.been.conducted.since.its.foundation.in.2006.with.conservation.aims..The.founder.broodstock.was.recently.renewed.with.wild.seahorses.from.Galician.populations..Population.and.family.genetic.analyses,.based.on.non-invasive.sampling.of.wild.specimens,.have.been.carried.out.by.means.of.microsatellite.markers.for.the.temporal.genetic.assessment.of.the.renewed.captive.broodstock..Paternity.analysis.of.progenies.obtained.from.wild.and.captive.conditions.allowed.the. identification.of.parents. involved. in.the.matings,.yielding. information.about.the.mating.system.in.the.wild.and.complementing.previous.results.in.captivity.for.this.seahorse.species.

JustificaciónLos.caballitos.de.mar.(Hippocampus.spp.).son.peces.marinos.de.inusual.biología.y.morfología,.incluyendo.cuidado.paterno.extremo.con.incubación.de.huevos.fecundados.en.una.bolsa.presente.únicamente.en.machos..Todas.las.especies.de.caballitos.de.mar,.incluyendo.las.distribuidas.en.el.litoral.español.(Hippocampus guttulatus e.H. hippocampus),.están.incluidas.en.la.lista.de.especies.amenazadas.(http://www.cites.org)..En.el.año.2006.se. inició.un.programa.de.cría.en.cautividad.en.H. guttulatus.con.fines.de. investigación.y.conservación.(http://www.iim.csic.es/proyectohippocampus),. partiendo. de. la. fundación. de. un. stock. de. reproductores. de. poblaciones. naturales. de.Galicia..Un.aspecto.esencial.de.los.programas.conservacionistas.de.cría.en.cautividad.es.evitar.pérdidas.de.diversidad.genética.y.aumento.de.consanguinidad,.mediante.el.cruce.de.individuos.no.emparentados.y.la.incorporación.periódica.de.ejemplares.salvajes..En.este.estudio.se.describe.el.análisis.de.seguimiento.genético.mediante.loci.microsatélite.del.stock.de.reproductores.H. guttulatus.renovado.durante.2010-2011,.como.apoyo.a.la.gestión.del.programa.de.cría.en.cautividad.de.esta.especie.

Material y Métodos Se. recogieron. muestras. no. invasivas. (Planas. et al.,. 2008). para. la. extracción. de. DNA. (López. et al.,. 2009). del. stock. renovado. de.77reproductores.salvajes.y.de.424.descendientes.obtenidos.en.16.puestas.de.machos.preñados,.tanto.en.naturaleza.como.en.cautividad..El.análisis.genético.poblacional.del.stock.renovado,.respecto.al.stock.fundador.(Pardo.et al.,.2007),.se.realizó.en.base.a.13.microsatélites.(Pardo.et al.,.2007;.Galbusera.et al.,.2007;.van.de.Vliet,.Diekmann.y.Serrão,.2009)..Para.estimar.diversidad.genética.(número.de.alelos,.heterocigosis.esperada).y.testar.el.ajuste.al.equilibrio.Hardy-Weinberg.se.utilizó.GenePoP.(http://genepop.curtin.edu.au);.y.el.programa.Arlequin.(http://cmpg.unibe.ch/software/arlequin3/).para.evaluar.la.diferenciación.genética.temporal.en.el.stock..La.asignación.parental.se.realizó.con.el.programa.FAP.(http://www.aqua.stir.ac.uk/rep-gen/downloads)..El.parentesco.(Wang.2002).entre.pares.de.individuos.del.stock.se.estimó.utilizando.SPAGeDi.(http://ebe.ulb.ac.be/ebe/Software.html)..

Resultados y DiscusiónLa.población.salvaje.utilizada.para.renovar.el.stock.de.reproductores.Hippocampus guttulatus.no.presentó.desviaciones.del.equilibrio.Hardy-Weinberg.(HW)..El.análisis.genético.poblacional.del.stock.renovado.respecto.al.stock.fundador.apunta.a.la.ausencia.de.diferenciación.genética.temporal.2008-2010.(F

ST<0,001,.P>0,05),.con.niveles.similares.de.variabilidad.genética.respecto.a.la.población.fundadora.original.

muestreada.en.2008.(Pardo.et al.,.2007;.test.Wilcoxon,.P>0,05),.sugieriendo.estabilidad.temporal.de.la.población.salvaje.analizada,.y.la.prioridad.de.su.conservación..El.parentesco.promedio.en.el.stock.renovado.fue.bajo.(r=0,001),.acorde.a.su.origen.salvaje..Todos.estos.resultados.demuestran.la.adecuación.de.la.población.del.2010-2011.para.renovar.el.stock.fundador.H. guttulatus,.con.objeto.de.continuar.el.programa.conservacionista.de.cría.en.cautividad.de.esta.especie.amenazada.de.caballito.de.mar..El.análisis.de.paternidad.de.los.16.lotes.de.descendientes,.4.procedentes.de.machos.preñados.en.naturaleza,.reveló.finalmente.13.familias.de.hermanos.completos,.al.asignar.a.una.misma.hembra.varias.puestas.consecutivas.de.dos.machos..Estos.resultados,.por.una.parte,.apuntan.a.la.existencia.de.un.patrón.de.apareamiento.genético.monógamo.dentro.de.puesta.en.H. guttulatus.en.naturaleza,.descrito.también.en.otras.especies.de.caballito.de.mar.(Kvarnemo.et al.,.2000;.Wilson.y.Martin-Smith,.2007);.por.otra,.confirman.los.datos.previos.de.monogamia.genética.en.H. guttulatus.dentro.de.puesta.y.entre.puestas.en.la.misma.estación.reproductiva.en.condiciones.de.cautividad.(López.et al.,.2009);.por.último,.han.permitido.detectar.mantenimiento.del.vínculo.de.pareja.desde.naturaleza.a.condiciones.de.cautividad..Estos.datos.permitieron.evaluar.la.contribución.reproductiva.de.los.reproductores.del.stock,.relevante.para.su.gestión.de.cara.al.mantenimiento.de.diversidad.genética.en.el.programa.de.cría.en.cautividad.con.fines.conservacionistas.(Allendorf.y.Luikart,.2007)..

BibliografíaAllendorf.F..W..y.G..Luikart..2007..Conservation and the Genetics of Populations..Blackwell.Publishing..Malden:.664.pp.Galbusera.P..H.,.S..Gillemot,.P..Jouk,.P..R..Teske,.B..Hellemans.y.A..M..J..Volckaert..2007.. Isolation.of.microsatellite.markers.for.the.endangered.Knysna.seahorse.Hippocampus capensis.and.their.use.in.the.detection.of.a.genetic.bottleneck..Molecular Ecology Notes..7:.638-640.Kvarnemo,.C.,.G.. I..Moore,.A..G..Jones,.W..S..Nelson.y.J..C..Avise..2000..Monogamous.pair.bonds.and.mate.switching. in.the.Western.Australian.seahorse.Hippocampus subelongatus..Journal of Evolutionary Biology..13:.882-888.

O-077

Borrell,.Y.J.,.Carleos,.C.E.,.Sanchez,.J.A.,.Vazquez,.E.,.Gallego,.V.,.Asturiano,.J.F.,.Blanco,.G..2011..Heterozygosity-fitness.correlations.in.the.Gilthead.Sea.bream.Sparus aurata.using.microsatellite.loci.from.unknown.and.gene-rich.genomic.locations..Journal of Fish Biology (en prensa).Boyer,.N.J.,.Van.Toever,.W.,.Jansen,.M.E..1994..Effect.of.photoperiodon.growth.of.Arctic.charr.under.commercial.production.conditions..Progressive Fish-Culturist. 56:.44-46.Codina,.M.,.Bian,.Y.,.Gutiérrez,.J.,.Du,.S..2008. Cloning.and.characterization.of.myogenin.from.sea.bream.(Sparus aurata).and.analysis.of.promoter.muscle.specificity. Comparative Biochemistry and Physiology. Part D, Genomics & Proteomics. 3:.128-139.De-Santis,.C.,.Jerry,.D.R..2007..Candidate.growth.genes.in.finfish-Where.should.we.be.looking?.Aquaculture..272:.22-38Li,.Y.C.,.Korol,.A.B.,.Fahima,.T.,.Nevo,.E..2004..Microsatellites.Within.Genes:.Structure,.Function,.and.Evolution..Molecular Biology and Evolution..21:.991–1007.Streelman,.J.T.,.Kocher,.T.D..2002..Microsatellite.variation.associated.with.prolactin.expression.and.growth.of.salt-challenged.tilapia..Physiological Genomics..9: 1-4.


91

Genética

O-078Caracterización molecular y citogenética de la familia de las histonas en las ostras Crassostrea angulata y C. gigas.I..Cross,.C.I..Granada.y.L..Rebordinos1

1Laboratorio de Genética, Facultad de Ciencias del Mar y Ambientales. Pol. Río San Pedro s/n. Puerto Real. CP 11510. Universidad de Cádiz. Cádiz. [email protected]

AbstractA.molecular.and.cytogenetic.study.of.the.H2A,.H2B,.H3.and.H4.histone.genes.in.the.cupped.osyters,.Crassostrea gigas.(Japanese.oyster).and.C. angulata.(Portuguese.oyster).has.been.carried.out..Both.species.have.a.high.commercial.value.both.in.European.and.Asian.markets..During.last.decades,.the.study.of.these.species.has.been.focused.both.on.the.mass.mortality.events,.that.occurs.in.natural.and.cultured.populations.during.summer.months,.and.on.the.taxonomic.status.of.these.cupped.oysters..To.gain.knowledge.about.the.histone.genes.in.oysters,.they.have.been.cloned.and.sequenced..Combining.primers.from.histone.genes,.a.model.of.genomic.organization.of.core.histones.has.been.proposed,.pointing.the.H2B.gene.inverted.in.the.arrangement..H3.and.H4.histone.genes.were.localized.on.the.chromosomes.of.both.cupped.oysters.by.means.of.fluorescence.in situ.hibridization.(FISH).technique..The.position.of.H3.and.H4.genes.in.relation.to.other.multigene.families,.such.as.18S.rDNA.and.5S.rDNA,.were.revealed.using.double.and.triple.colour-FISH..The.cytogenetic.analysis.showed.that.the.three.multigene.families.analysed.were.not.co-localized.in.either.the.Japanese.nor.the.Portuguese.oysters..

JustificaciónLa.ostra.portuguesa.C. angulata.y.la.ostra.del.Pacífico.C. gigas.son.especies.de.un.alto.valor.comercial.especialmente.importantes.en.el.área.SUDOE..Aunque.actualmente.C. gigas.sigue.siendo.una.de.las.especies.marinas.de.mayor.producción.mundial,.la.producción.de.ostra.portuguesa.casi.ha.desaparecido.de.Europa.tras.la.mortalidad.masiva.de.los.años.setenta,.quedando.cierta.producción.solamente.en.Portugal.y.la.costa.Atlántica.española..Aún.así,.C. angulata es.considerada.la.principal.ostra.producida.en.Taiwan.y.una.de.las.principales.de.China..La.ostra.japonesa.sufre.frecuentes.eventos.de.mortalidad.masiva.producida.por.un.herpesvirus.produciendo.la.conocida.“mortalidad.del.verano”.pudiendo.alcanzar.unos.valores.de.hasta.el.70%,.siendo.éste.uno.de.los.puntos.de.mayor.interés.actualmente.en.el.estudio.de.esta.familia..Por.otra.parte,.el.status.taxonómico.de.ambas.especies.ha.presentado.mucho.interés.en.las.últimas.décadas..Su.parecido.morfológico,.su.capacidad.para.hibridar.entre.ellas.y.ciertos.marcadores.moleculares.(López-Flores.et al.,.2010),.indican.que.ambas.taxones.podrían.ser.clasificados.como.la.misma.especie..Sin.embargo,.otros.estudios.genéticos.(Huvet.et al.,.2000;.Leitao.et al.,.2007).y.ciertos.caracteres.morfológicos.(Batista.et al.,.2008).proporcionan.evidencias.en.sentido.contrario..Por.otra.parte,.las.histonas.son.el.principal.componente.de.la.cromatina.eucariota..La.subunidad.repetitiva.de.la.cromatina,.los.nucleosomas,.están.constituidos.por.un.octámero.formando.el.core.(H2A,.H2B,.H3.y.H4).alrededor.del.cual.se.une.el.ADN,.separado.por.un.espaciador.en.el.que.se.encuentra.la.H1..Recientemente,.se.han.identificado.proteínas.histónicas.con.actividad.antibacteriana.en.ostras.(Seo.et al., 2011)..Para.profundizar.en.el.conocimiento.genético.de.ambas.especies,.se.ha.llevado.a.cabo.un.estudio.molecular.y.citogenético.de.las.histonas.en.ambas.especies.de.ostras..

Material y MétodosSe.recogieron.muestras.de.poblaciones.naturales.de.C. angulata.en.Sanlúcar.de.Barrameda.(Cádiz).y.se.obtuvieron.individuos.de.C. gigas.cultivadas.en.piscifactorías.de.Chiclana.y.Conil.(Cádiz)..Para.el.estudio.molecular.se.realizó.la.extracción.de.ADN.siguiendo.el.protocolo.descrito.en.el.kit.FastDNA®.(Q-Biogene)..A.partir.del.ADN.extraído,.se.llevó.a.cabo.una.amplificación.por.PCR.de.los.genes.H3.(Bouilly.et al..2010),.H4,.H2A.y.H2B.usando.para.ello.secuencias.previamente.descritas.en.la.base.de.datos.del.NCBI..Los.productos.de.PCR.purificados.se.clonaron.en.el.vector.de.clonación.pGEM®-T.Easy.(Promega),.y.los.plásmidos.fueron.extraídos.con.el.kit.NucleoSpin®.Plasmid.(Macherey-Nagel)..Los.productos.de.amplificación.clonados.se.secuenciaron.por.la.empresa.Biomedal.S.L.. (Sevilla)..Para.el.estudio.citogenético,.se.usaron.individuos.de.pequeño.tamaño.(2-3.cm).de.ambas.especies..Las.muestras.fueron.tratadas.con.colchicina,.choque.hipotónico.y.una.fijación.en.Carnoy.fresco..La.localización.de.los.genes.H3.y.H4.en.ambas.especies.y.el.estudio.de.su.posición.en.el.genoma.respecto.a.las.familias.multigénicas.ribosómicas.de.ADNr.18S.y.5S.fueron.realizadas.mediante.la.técnica.de.FISH.simple.y.doble.(Cross.et al.,.2005).y.triples.(Carrilho.et al.,.2011).con.modificaciones..

Resultados y DiscusiónLas.amplificaciones.de.los.genes.H3,.H4,.H2A.y.H2B.en.ambas.especies.dieron.productos.de.aprox..210,.316,.240.y.210.pb..Una.vez.clonados.y.secuenciados.se.llevó.a.cabo.una.búsqueda.mediante.BLASTN.en.la.base.de.datos.de.NCBI.obteniéndose.una.elevada.identidad.entres.dichas.secuencias.y.las.descritas.en.otros.moluscos.marinos..Mediante.la.combinación.de.los.diferentes.cebadores.de.los.cuatro.genes,.se.ha.podido.describir.un.modelo.de.organización.genómica.del.cluster.de.las.histonas.en.ostras.en.el.que.la.histona.H2B.se.encuentra.en.posición.invertida.respecto.a.las.demás..En.cuanto.al.estudio.citogenético,.las.hibridaciones.simples.mostraron.una.localización.del.gen.de.la.H3.en.dos.parejas.cromosómicas.de.tamaño.medio.en.posición.subcentromérica.para.ambas.especies.(2n=20)..En.cuanto.al.gen.H4,.la.hibridación.dio.un.patrón.de.localización.idéntico.al.del.H3.y.el.uso.de.la.FISH.doble.permitió.confirmar.la.co-localización.de.ambos.genes.en.ambas.especies..En.C. gigas.ha.sido.descrito.recientemente.(Bouilly.et al.,.2010).la.localización.del.gen.H3,.pero.la.posición.descrita.no.es.coincidente.con.nuestros.resultados.ya.que.los.autores.describen.una.de.las.señales.de.hibridación.en.el.par.cromosómico.10.. La. FISH. doble. para. localizar. el. gen. H4. y. el. ADNr. 18S. (cromosoma. 10). permitió. descartar. la. co-localización. de. ambas. familias.multigénicas..En.el.presente.trabajo.también.se.ha.estudiado.la.relación.en.la.localización.cromosómica.de.la.familia.multigénica.del.

López,.A.,.M..Planas,.A..Vilar,.P..Martínez.y.C..Bouza..2009..Aplicación.de.marcadores.microsatélite.para.el.apoyo.de.la.cría.en.cautividad.del.caballito.de.mar.Hippocampus guttulatus..En:.Actas XII Congreso Nacional de Acuicultura:.338-339.Pardo,. B.. G.,. A.. López,. P.. Martínez. y. C.. Bouza.. 2007.. Novel. microsatellite. loci. in. the. threatened. European. long-snouted. seahorse.(Hippocampus guttulatus).for.genetic.diversity.and.parentage.analysis..Conservation Genetics..8:.1243-1245.Planas,.M.,.A..Chamorro,.P..Quintas.y.A..Vilar..2008..Establishment.and.maintenance.of.threatened.long-snouted.seahorse,.Hippocampus guttulatus,.broodstock.in.captivity..Aquaculture..283:.19-28.van.de.Vliet.M..S.,.O..E..Diekmann.y.E..T..A..Serrão..2009..Highly.polymorphic.microsatellite.markers.for.the.short-snouted.seahorse.(Hippocampus hippocampus),. including. markers. from. a. closely. related. species. the. long-snouted. seahorse. (Hippocampus guttulatus)..Conservation Genetics Resources..1:.93-96.Wang.J..2002..An.estimator.for.pairwise.relatedness.using.molecular.markers..Genetics..160:.1203-1215.Wilson,. A.. B.. y. M.. Martin-Smith.. 2007.. Genetic. monogamy. despite. social. promiscuity. in. the. pot-bellied. seahorse. (Hippocampus abdominalis)..Molecular Ecology..16:.2345-2352.

AgradecimientosEste.estudio.ha.sido.financiado.por.el.Ministerio.de.Ciencia.e.Innovación.(CGL2009-08386).y.Xunta.de.Galicia.(09MDS022402PR).Nuestro.agradecimiento.a.María.López.por.su.apoyo.técnico.


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Genética

ADNr.5S.con.la.familia.de.las.histonas,.confirmando.mediante.FISH.dobles.y.triples.que.no.co-localizan.ninguna.de.ellas..Estos.resultados.coinciden.con.los.descritos.previamente.por.Carrilho.et al..(2011).en.los.bivalvos.Venerupis aurea.y.Tapes rhomboides..Sin.embargo,.en.estudios.previos.llevados.a.cabo.en.Mytilus galloprovincialis.(Eirín-López.et al.,.2004).el.cluster.de.las.histonas.y.el.ADNr.5S.están.ligados..

BibliografíaBatista,.F.M.,.R..Ben-Hamadou,.V.R..Fonseca,.N..Taris,.F..Ruano,.M.A..Reis-Henriques,.y.P..Boudry..2008..Aquatic Living Resources. 21:.31-38.Bouilly,.K.,.R..Chaves,.M..Fernandes.y.H..Guedes-Pinto..2010..Comparative cytogenetics.4(2):.111-121.Carrilho,.J.,.C..Pérez-García,.A..Leitao,.I..Malheiro.y.J.J..Pasantes..2011..Genetica.139:.823-831.Cross,.I.,.E..Díaz,.I..Sánchez.y.L..Rebordinos..2005..Aquaculture.247,.135-144.Eirín-López.J.M.,.M.F..Ruiz,.A.M..González-Tizón,.A..Martínez,.L..Sánchez.y.J..Méndez..2004..Journal of Molecular Evolution..58(2):.131-144.Huvet,.A.,.S..Lapegue,.A..Magoulas.y.P..Boudry..2000..Conservation Genetics..1,.251-262.Leitao,.A.,.R..Chaves,.S..Santos,.H..Guedes-Pinto.y.P..Boudry..2007..Journal of Experimental Marine Biology and Ecology.343,.253-260.López-Flores,.I..C..Ruiz-Rejón,.I..Cross,.L..Rebordinos,.F..Robles,.R..Navajas-Pérez.y.R..de.la.Herrán..2010..Genetica.138.(11-12):.1211-1219..Seo,.J.,.J..Stephenson.y.E.J..Noga..2011..Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology.158,.223-229.

AgradecimientosLas.muestras.de.C. gigas.fueron.obtenidas.de.las.empresas.Amalthea.S.L..(Chiclana,.Cádiz).y.DYDMAR.Acuicultura.S.L..(Conil,.Cádiz)..El.trabajo.ha.sido.financiado.por.el.proyecto.AQUAGENET.del.programa.INTERREG.IVB.SUDOE..Agradecemos.a.Rosa.Vázquez.y.al.personal.de.la.Planta.de.Cultivos.Marinos.de.la.Universidad.de.Cádiz.el.suministro.de.las.microalgas.para.la.alimentación.de.las.ostras.

PÓSTERS


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Acién.F.. P-052,.P-063Arregui.A.P.. P-050Aarab.L.. P-004Abad.M.. P-139,.P-138Abellán.E.. P-023,.P-028,.P-046,.P-048,.P-097Acosta.D.. O-036,.O-034Acosta.F.. O-021,.O-020Acosta.N.G.. P-009Afonso.J.M.. O-075,.P-188,.P-189Aguado-Giménez.F.. O-034,.O-036,.P-015Aguirre.E.. O-065,.P-160,.P-167Agustí.C.. O-023Ahuir-Baraja.A.E.. P-102Al-Amrousi.A.. P-125Alarcón.F.J.. P-052,.P-063,.P-083,.P-100,.P-111Alba.I.. P-033,.P-034Alcázar.M.D.. P-083Alejandro.G.. P-188Alemany.F.. P-025,.P-170Alfaya.J.. P-104Aliaga.V.. O-033,.P-126,.P-127,.P-128Aliaga,.M.. O-067,.P-182Aller.J.M.. O-022Allue.R.. O-071Almaida-Pagán.P.F.. P-077,.P-082Almansa.E.. O-012Almansa.C.. P-176,.P-177Alonso.A.. P-159Alonso.A.L.. P-043Alonso.I.. O-023Alonso.M.C.. O-016Alonso.V.. O-064,.O-063Alsina.F.. O-058Alvarado.M.V.. O-045,.O-047Álvarez.A.. O-062,.P-069,.P-161Alvarez.M.C.. O-016,.P-182Alvarez.P.A.. O-039Álvarez-Blázquez.B.. P-140,.P-143,.P-005Álvarez-Dios,.J.A.. O-041BAlvarez-Torres.D.. O-016Amat.F.. P-020Andree.K.B.. O-071,.O-025,.O-005,.P-031Andreo.D.. O-033,.P-126,.P-127,.P-128Andres.M.. O-054Anger.K.. P-016,.P-019Aranda.J.A.. P-039,.P-059,.P-118,.P-045,.P-117Arias.C.. O-028,.O-024,.P-104Arijo.S.. O-030,.P-100Arinero.L.. O-025Arizcun.M.. P-023,.P-028,.P-046,.P-048,.P-099Armesto.P.. P-157Arnabat.C.. P-116,.P-153Asensio.E.. P-157Asturiano.J.F.. O-076,.O-049,.O-048,.P-146,.P-147Ávila.P.. O-032Ayala.M.D.. P-158,.P-159Azpeleta.C.. P-043,.P-084

Badiola.I.. P-031Baeza.R.. O-049,.O-048,.P-050,.P-146Balcázar.J.L.. O-018Balebona.M.C.. O-031,.P-100,.P-111Ballester.G.F.. P-030Barcia.R.. P-014Barja.Perez.J.L.. P-118,.P-113Barreiro.J.D.. O-059Barreiro-Lois.A.. O-059Barrera.R.. O-048Barroeta.A.. P-086Barros.A.. P-063,.P-083Barroso.F.G.. P-083Baxter.E.J.. P-109Belinchón.M.. O-001Béjar.J.. O-016,.P-182Belmonte.A.. O-033,.O-066,.P-027,.P-126,.P-127,.P-128,.

P-151Beltrán.A.. P-035Beltrán.J.A.. O-064,.O-063

Beltrán.S.. P-181Benedito.Palos.L.. O-004,.O-002,.P-030Blanco.A.. P-158Blanco.B.. O-067,.P-180,.P-182Blanco.E.. P-113Blanco.G.. O-076,.P-185Blasco.J.. O-007,.P-057Blazquez.M.. O-046Boglino.A.. O-073,.P-055Bolaños.A.. P-007,.P-009Boltana.S.. P-106,.P-184Borras.D.. O-005Borrego.J.J.. O-016Borrel.M.. O-004Borrell.Y.J.. O-076Bou.M.. P-080Bou.P. P-153Bouza.C.. O-077Bravo.J.. O-021,.O-020Bruzón.M.A.. P-066,.P-153Burgos.C.. P-129Bulto.P.. P-153

Camacho.J.. P-052Cerón.M.. P-052Caballero.A.. P-092,.P-093Caballero.M.J.. O-021,.P-067Cabas.I.. P-095Cal.R.. O-068,.O-059,.O-024,.O-010,.P-103,.P-158,.

P-159Calderón.J.A.. P-129Calduch-Giner.J.A.. O-002,.O-004Callol.A.. P-108Camacho.J.. P-063,.P-111Campos-Loriz.M.J.. P-152Cano.J.. P-152Cañavate.J.P.. O-067,.P-182Capilla.E.. O-061,.P-080,.P-081Capoccioni.F.. P-147Carazo.I.. O-041A,.P-144Carballeira.C.B.. O-035,.O-034Carballeira.C.. O-036Carballeira.A.. O-036,.O-034,.O-035Carbó.R.. P-175Cárdenas.S.. P-163Cardenete.G.. P-046,.P-048,.P-023Carneiro.P.. O-048Carnicer.O.. P-123Carrasco.J.F.. P-042,.P-071,.P-072,.P-073,.P-076,.P-160Carrasco.C.. O-033,.P-126,.P-127,.P-128Carrasco.N.. O-025,.O-026,.P-075,.P-119Carreras.J.. O-036,.O-034Carretero.F.. P-177Carrillo.M.. O-047,.O-045,.O-044,.O-042Casal.A.. P-012,.P-017,.P-088,.P-089,.P-110,.P-135Casal.T.. P-012,.P-017,.P-135Casanovas.J.. P-116Castanheira.M.F.. P-115Castelló.F.. P-153Castells.J.R.. P-169Castillo.M.. O-005,.P-031Castro.C.. P-018,.P-058,.P-060Castro.F.J.. P-023,.P-046,.P-048Castro.Iglesias.N.. O-019Castro.López.A.M.. P-172Castro.P.. O-060,.P-166Castro-Cunha.M.. P-018,.P-058,.P-060Cañavate.J.P.. P-181Cañavate.P.. P-186Ceballos-Roa.E.. P-152Cejas.J.R.. P-007,.P-009Celades.J.L.. P-175Cerdà.J.. O-038,.O-041,.P-153Cerdá-Reverter.J.M.. O-001,.P-002Cerezo.J.. P-015,.P-021,.P-047,.P-051,.P-076Cerqueira.V.. O-042Cerviño-Otero.A.. P-039,.P-045,.P-059,.P-113,.P-150Cerón.M.C.. P-063,.P-111

96

Chauvigné.F.. O-041,.P-153Chaves.Pozo.E.. P-097,.P-099,.P-137Chereguini.O.. O-041A,.P-096,.P-132,.P-136,.P-144,.P-145Cicotti.E.. P-147Claret.A.. O-065,.P-160,.P-164,.P-167Collado.Sánchez.C.. O-036,.O-034Conceiçao.L.. P-115Conde.de.Felipe.M.. P-094Contreras-Jodar.A.. P-086Cordero.D.. P-173Cordero.M.L.. P-008,.P-029,.P-115,.P-052Costas.D.. P-012,.P-017,.P-041,.P-110,.P-135,.P-088,.

P-089Costoya.N.. P-012,.P-017,.P-088,.P-089,.P-110,.P-135Courtois.de.Vicose.G.. P-004,.P-022,.P-087Cowler.P.P.. O-038Cremades.J.. P-125Crespo.B.. O-046Crespo.D.. O-040Cross.I.. O-078,.P-186Cruz.M.M.. P-155,.P-156Cuesta.A.. P-099,.P-105,.P-107,.P-097,.P-098Curiel.P.. O-020Czerwinski.I.A.. P-124Cánovas-Hernández.V.. P-077Cárdenas.S.. O-069,.O-064,.P-024

De.la.Herrán.R.. P-114Da.Costa.González.F.. P-039,.P-040,.P-045,.P-061,.P-117,.P-118Da.Cruz.Freitas.Junior.J.. P-125Dagá.P.. P-041Dàmaso.E.. P-119,.P-075Darias.M.J.. O-073,.P-055De.Benito.F.. P-154De.Blas.I.. O-027,.O-018De.Costa.J.. P-077,.P-082De.Haro.C.. P-053,.P-056De.Pedro.N.. P-043,.P-049,.P-084De.Jesús.J.V.. P-074De.la.Gándara.F.. O-066,.P-027,.P-151De.la.Iglesia.P.. P-123De.la.Roca.E.. P-029De.la.Uz.S.. P-073,.P-076De.las.Heras.V.. P-129Del.Pozo.A.. P-090Delgado.M.. P-123Delgado.M.J.. P-043,.P-049,.P-084Díaz.N.. O-043,.P-153Dick.J.R.. P-025Dinis.M.T.. P-182Diogène.J.. P-123Domezain.A.. P-033,.P-034,.P-035,.P-037Domingues.P.. P-008Domínguez.A.. P-143Duarte.S.. P-174Dubert.J.. P-113,.P-117,.P-118Duncan.N.. O-041A,.P-044,.P-130,.P-133,.P-134,.P-144,.

P-149,.P-153bis,.P-188,.P-093Duran.CS.O.. P-010Durfort.M.. P-032Durán.Chica.J.. P-141Durruty.C.. P-153

E..Toranzo.A.. O-019El.AAmri.F.. O-021El-Aamri.F.. O-020Elandaloussi.L.. O-025Elgueta.C.A.. P-010Endaloussi.L.. P-075Escobar.C.. O-052Escobar.S.. O-047,.O-044Espigares.F.. O-047Espinosa.J.. P-138,.P-139Esteban.M.A.. P-097,.P-098,.P-099,.P-105,.P-107Estefanell.J.. O-013,.P-011Estévez.A.. P-001,.P-055,.P-092,.P-093Estruch.V.. P-178Fabregat.R.. P-078

Falco.S.L.. O-037,.P-122Fallola.C.. O-006,.P-054,.P-112Feijoo.G.. P-041Felip.A.. O-045,.O-044,.O-042,.O-047Felip.O.. O-007,.P-057Felipe.B.C.. O-012Fernández,.C.. O-041BFernandez.M.. O-039,.P-172,.P-124Fernandez-Palacios.H.. O-070,.O-013,.P-011,.P-085,.P-134,.P-149,.

P-130,.P-133Fernández.Borràs.J.. O-007,.P-057Fernández.C.. P-160Fernández.Monzón.I.. P-006Fernández.Pardo.A.. P-061Fernández.Tajes.J.. P-183Fernández-Cruz.M.L.. O-001,.P-002Fernández-Díaz.C.. P-079Fernández-González.V.. O-034Fernández-Palacios.H.. P-004,.P-022,.P-064,.P-065Fernández-Pardo.A.. P-040,.P-045,.P-142Fernández-Tejedor.M.. O-027,.P-075,.P-123Fernández-Zapata.J.. P-082Fernández-Trujillo.M.A.. O-016Flórez.F.. P-183Font.M.. P-032Fontanillas.R.. O-062,.O-008,.P-038,.P-057,.P-069,.P-070,.

P-077,.P-086,.P-161Forcadell.A.. O-038Fregeneda.J.M.. O-022Fuertes.H.. O-017Furné.M.. P-033,.P-034,.P-035,.P-037Furones.D.. O-025,.O-026,.P-075,.P-119,.P-123Fuste.B.. P-181

G..Barroso.F.. P-053,.P-056Gadea.Perez.M.I.. O-037Gairin.I.. O-034,.O-025,.O-026,.P-075,.P-153bisGairin.J.I.. O-036,.P-044Gallardo.M.A.. O-008,.P-069,.P-070Gallego.J.. P-052Gallego.V.. O-049,.O-048,.P-146,.P-147Gallé.J.P.. P-124Galparsoro.I.. O-053García.I.L.. O-057Garcia-Martinez.P.. P-138García.Alcázar.A.. P-095García.Ayala.A.. P-137,.P-095García.Ceballos-Zúñiga.E.. P-054,.P-112García.Chacón.P.J.. P-172García.de.la.Banda.I.. O-031,.O-029,.O-030García.Estévez.J.M.. O-028,.O-024,.P-104,.P-103García.García.B.. O-062,.P-015,.P-021,.P-038,.P-076,.P-161,.

P-162García.García.N.. O-028,.O-024,.P-103,.P-104García.Garrido.S.. P-008García.Iglesias.M.J.. O-022García.López.M.E.. O-033,.P-126,.P-127,.P-128García-Mateos,.G.. O-067,.P-179García.Martínez.P.. P-139García.Meilán.I.. O-008,.P-069,.P-070García.Soler.C.. P-143García.Vargas.J.F.. P-172García.de.la.serrana.D.. O-061García-Alcázar.A.. P-028,.P-097,.P-099,.P-137García-Cegarra.A.. P-186Garcia-Diez.C.. O-032,.P-120García-Fernández.C.. P-185García-Gallego.M.. P-024,.P-033,.P-035,.P-037García-García.B.. O-036García-García.M.. O-034,.P-137García-Herrero.I.. O-012García-Mesa.S.. P-024,.P-163García-Rosado.E.. O-016García-Martin.O.. P-138,.P-139Garrido.D.. P-008Garrigòs.J.. P-168,.P-171Gil.D.. O-060Gil.M.. O-064,.O-063

97

Gil.Roig.J.M.. O-052Gimenez.G.. O-005,.P-123Ginés.R.. O-060,.P-160,.P-164,.P-167,.P-166Gironés.O.. O-017Gisbert.E.. O-005,.O-071,.O-073,.P-006,.P-031,.P-055,.

P-078Goetz.F.. P-184Golzálvez.F.. O-011Gómez.A.. O-047,.O-041,.P-148Gomez.J.. P-169Gómez.M.. P-096,.P-132,.P-136,.P-144,.P-145Gómez-Tato.A.. O-041BGonzalez.M.. O-054Gonzalez.N.. O-036,.O-034Gonzalez.Villanueva.A.. P-041,.P-110González.Palacios.C.. O-022González-Párraga.M.P.. P-098,.P-105,.P-107González-Riopedre.M.. P-014Gracia.M.P.. P-116Gradillas.G.. P-096Granada.C.I.. O-078Grasso.V.. O-021,.O-020Grau.A.. O-065,.P-160Grove.S.. O-023Guardiola.F.. P-097,.P-098,.P-105,.P-107Guerao.G.. P-032,.P-016,.P-019Guerreiro.I.. P-018,.P-058,.P-060Guerrero.L.. O-065,.P-164,.P-167,.P-160Guerrero.S.. P-125Guerrero.A.. P-042Guil-Guerrero.J.L.. O-011,.P-068Guillen.E.. O-064,.O-063Guinot.D.. P-020Guirao.R.. O-070Gutierrez.Higuero.S.. P-017,.P-135,.P-012Gutiérrez.J.. O-061,.P-080,.P-081,.P-153Gutiérrez.Ortega.J.M.. O-033,.P-126,.P-127,.P-128

Hachero.I.. P-008,.P-052Hala.E.. O-042Halaihel.N.. O-018,.O-017Hamdan.M.. P-003Hernandez-Cruz.C.. O-070,.P-085,.P-130,.P-133,.P-134,.P-149Hernández.A.. P-077Hernández.Contreras.A.. P-038,.P-162Hernández.L.. O-014,.P-181Hernández.M.D.. O-065,.O-062,.P-015,.P-038,.P-069,.P-077,.

P-160,.P-162,.P-161Hernández-Cruz.C.M.. P-064,.P-065Hernández-Urcera.J.. O-024,.O-059,.P-103,.P-158,.P-159Herrera.M.. P-029,.P-052,.P-115.Hidalgo.L.. P-052,.P-053,.P-063,.P-083Hidalgo.M.C.. P-023,.P-035,.P-037,.P-046,.P-048Hispano.C.. P-116,.P-153Hontoria.F.. P-020Huchette.S.. P-087Huntingford.F.. P-184Hurtado.J.. O-058

Ibarz.A.. O-007,.P-057Ibañez.A.J.. O-039Iglesias.R.. O-028,.O-024,.P-103,.P-104Iglesias.J.. O-010,.O-068,.P-017Illán.G.. P-026Infante.Toscano.C.. P-079,.P-157Isern.M.M.. O-023Isorna.E.. P-043Iziga.R.. P-186Izquierdo.M.S.. O-013,.P-011,.P-022,.P-087

Jambrina.M.C.. O-038Jamilena.M.. P-083Jerez.S.. P-007,.P-009Jiménez.E.. P-079Jiménez.G.. P-031Jiménez.R.. P-172Jiménez-Amilburu.V.. O-061,.P-081Johnsson.J.I.. P-049

Jonhston.I.A.. O-061Jordán.M.J.. P-162Jover.M.. O-038,.P-003,.P-047,.P-050,.P-051,.P-074,.

P-154,.P-178Jubany.I.. O-058Jurado.E.. P-121Jönsson.E.. P-049

Karl.B..A.. O-026,.P-055,.P-119Kaushik.S.. P-030

Lacuesta.B.. O-026,.P-093,.P-119Lacuestra.B.. O-025Lago.M.J.. O-068,.O-010Lagos.Rojas.L.E.. O-015Larrán.García.A.. P-026Leal.E.. P-002Leal.J.. P-172Lee.I.. O-075Lema.J.M.. P-041Liarte.S.. P-137Linares.F.. P-005Liria.P.. O-054Llabrés.M.. P-141Lobo.C.. O-031,.O-030,.O-029Lope-Piedrafita.S.. P-086López.C.. O-039López.Fernández.J.R.. P-114López.Luna.J.. P-013López.López.I.. P-121López.Martínez.A.. O-077López.Ruiz.J.. P-071,.P-072López-Albors.O.. P-158,.P-159López-Joven.C.. O-027López-Rodríguez.F.. P-152Lorenzo.A.. P-007,.P-009Louzán.A.. P-040,.P-045,.P-142,.P-150Lozano-Fernández.M.. P-152Lucas.L.M.. O-030Lucas-Sánchez.A.. P-077,.P-082

Macias.J.C.. O-036Macias.Rivero.J.C.. O-034,.O-032,.P-120Macià.G.. P-019Mackenzie.S.. P-106,.P-184Magadán.S.. O-059Magariños.B.. O-019Maíllo.P.. P-153Mancera.J.M.. O-069,.O-029,.O-009,.P-063,.P-131Manchado.M.. O-073,.P-079,.P-186,.P-157,.P-181Maroto.J.. P-014Márquez.L.. P-014Martinez.Garcia.E.. O-036Martinez.Portela.P.. O-077,.P-136Martins.C.. P-115Martos-Sitcha.J.A.. O-069,.P-129Martí.V.. O-058Martín.I.. O-041A,.P-132,.P-136,.P-145,.P-096,.P-144Martín.M.V.. O-012,.P-007Martín.Martín.V.. P-009Martín.Pérez.M.. O-007,.P-057Martínez.I.. O-065Martínez.P.. O-041BMartínez.Patiño.D.. P-040,.P-059Martínez.Pita.I.. O-050,.O-015,.P-131Martínez.R.. P-056Martínez.T.. O-064,.P-024Martínez.T.F.. O-011,.P-068,.P-083,.P-100,.P-163Martínez-Conesa.C.. P-162Martínez-Lladó.X.. O-058Martínez-Llorens.S.. P-003,.P-047,.P-074,.P-050,.P-051Martínez-Patiño.D.. P-039,.P-045,.P-061,.P-118,.P-142,.P-150Martínez-Prados.A.. P-163Martínez-Rodríguez.G.. P-129Marín.M.D.M.. P-154Marín-Juez.R.. O-003Masalo.I.. O-072Massa.F.. O-032

98

Matilla.A.. P-037Mayer.P.. P-178Mazzeo.I.. O-049,.O-048,.P-147,.P-146Mazón.M.J.. O-041,.P-148Maíllo.P.A.. P-116Mañanos.E.. P-132,.P-145Mechaly.A.. P-153Medina.A.. P-027,.O-030,.O-029Medina.P.. O-046.Méndez.J.. P-183Mendiola.D.. O-053,.O-054Mendiola.P.. P-077,.P-082Mercado.L.A.. O-074Merino.R.. P-033,.P-034Merlo.A.. P-186,.P-187Mesa-Rodriguez.A.. O-070,.P-085,.P-064,.P-065Meseguer.J.. P-095,.P-097,.P-098,.P-099,.P-105,.P-107,.P-137Millan.A.F.. O-069,.P-057Millot.S.. P-115Miñano.P.. O-033,.P-126,.P-128Molina.L.. P-004,.P-067Molés.G.. O-045Monroig.O.. P-020,.P-025Montero.F.E.. P-102Montes.J.. P-113Montlleó.M.. O-058Montoya.A.. P-090Moñino.A.. P-047,.P-051Morales.A.E.. P-023,.P-046,.P-048Morata.T.. O-037,.P-122Moreira.M.T.. P-041Moreno.O.. P-101Moreno.P.. O-006Moreno-Ventas.X.. O-030Moriñigo.M.A.. O-031,.O-030,.P-063,.P-100,.P-111Morillo-Velarde.P.S.. P-047,.P-051,.P-015,.P-021Moyano.F.J.. O-009,.P-066,.P-003,.P-014Mulero.V.. P-095,.P-137Muñoz.J.A.. P-182Muñoz.J.L.. P-036Muñoz-Cueto.J.A.. O-067Mylonas.C.C.. P-151

Navarro.A.. O-075,.P-189,.P-188Navarro.G.. O-011,.P-068Navarro.I.. O-061,.P-080,.P-081Navarro.J.C.. P-020,.P-030,.P-025Navas.J.I.. P-114Navas.Antón.J.M.. O-001,.P-002Nebot.A.. P-153Negrín.D.. O-075,.P-189Nisembaum.L.G.. P-043Nolis.P.. P-086Novel.P.. P-182Novelli.B.. P-067Näslund.J.. P-049Nóvoa.S.. P-040,.P-045,.P-059,.P-061,.P-142,.P-039,.P-150Núñez.S.. O-019

Oca.J.. O-072,.P-176,.P-174,.P-177Ojea.J.. P-039,.P-040,.P-045,.P-059,.P-061,.P-117,.

P-142,.P-150Ojeda.J.. O-032,.P-120Oliva.M.. P-172Oliva-Teles.A.M.. P-018,.P-058,.P-060Oliveira.C.. P-182Olmedo.M.. P-005Ordóñez.Grande.B.. O-008,.P-070,.P-069Orós.J.. O-017Ortega.A.. O-066,.P-027,.P-151Ortiz-Delgado.J.B.. O-010,.P-006Otero.J.. O-068,.O-010,.P-017Otero-Ferrer.F.. P-067

Padilla.D.. O-021,.O-020Pardo,.B.G.. O-041BPascual.M.. O-006Pascual.M.C.. P-044

Pastor.E.. P-141Pazos.G.. P-005Peleteiro.J.B.. O-065,.P-005,.P-164,.P-166,.P-140,.P-143Peña.J.B.. P-173Peñaranda.D.S.. O-049,.O-048Pereira.M.. P-108,.P-106Pereiro.E.. P-124Peres.H.. P-018,.P-058,.P-060Perán.A.J.. O-033,.P-127,.P-128,.P-126Pérez.E.. P-160Pérez.F.. P-037Pérez.J.. P-030Pérez.J.J.. O-006Pérez.L.. O-049,.O-048,.P-146,.P-147Pérez.Rial.E.. P-005,.P-140,.P-143Pérez.Sánchez.J.. O-004,.O-002Pérez.Sánchez.T.. O-017,.O-018Pérez-Camacho.A.. P-004Pérez-Jiménez.A.. P-023,.P-046,.P-048,.P-058,.P-060,.P-018Pérez-Ordoyo.G..L.I.. O-022Picón.F.. P-035Piferrer.F.. O-041B,.O-043,.P-153Plana.B.. P-074Planas.J.. O-041BPlanas.J.V.. O-003,.O-040,.P-181Planas.M.. O-077Porta.J.. P-182Porta.J.M.. P-182Portela.S.. P-186,.P-187Power.D.M.. O-073Poza.E.. O-014Pozuelo.I.. P-036Prado.S.. P-113,.P-117,.P-118Prieto.E.. P-131Prieto.J.R.. O-066,.P-151Provincial.L.. O-063,.O-064Pujante.I.M.. O-009Pula.H.J.. O-006,.P-054,.P-112

Querol.P.. P-044,.P-047,.P-050,.P-051Quesada.A.. O-001,.P-002Quintano.J.. P-171

Raga.J.A.. O-023,.P-102Ramilo.A.. O-026Ramos.J.. O-035Ramírez.J.C.. O-006,.P-112Rasines.I.. P-096,.P-136,.P-144,.P-132,.P-145Real.F.. O-021,.O-020Real.N.. P-178Rebordinos.L.. O-078,.P-187,.P-186Redó.J.M.. O-038Reig.L.. P-176,.P-177Reis.D.. O-012Remiro.J.. O-032,.P-120Rey.S.. P-165,.P-184Reyes-López.F.. P-106Rial.D.. P-088,.P-089Ribas.L.. O-041B,.O-043Ribes.E.. P-032Riera.R.. O-012Riesco.S.. O-054Rincón.B.. P-012,.P-017,.P-135Rincón.L.. O-065,.P-164,.P-166,.P-189,.P-167Rincón-Cervera.M.A.. P-068Rivera.L.. P-012,.P-017,.P-088,.P-089,.P-135,.P-110Rocha.F.J.. P-012,.P-135,.P-017Rodenas.M.D.C.. P-095Rodgers.C.. O-025,.P-119Rodiles.A.. P-052,.P-111Rodilla.M.. O-037,.P-122Rodon.J.. O-071Roncales.P.. O-064,.O-063Rodriguez.R.. P-088,.P-089Rodríguez.Barreto.D.. P-007,.P-009Rodríguez.C.. O-012,.P-096,.P-132,.P-136,.P-144,.P-145Rodríguez.C.J.. P-044Rodríguez.E.. O-012

99

Rodríguez.Herrera.S.. O-075Rodríguez.Pablos.R.M.. O-042Rodríguez.Ponce.E.. P-094Rodríguez.Quiroga.J.J.. O-024,.O-028,.P-103,.P-104Rodríguez.Sainz-Rozas.R.. P-121Rodríguez-Rodríguez.C.. O-065,.P-042,.P-071,.P-072,.P-073,.P-076Rodríguez-Rua.A.. P-079Roher.N.. P-184Romero.J.M.. P-034Román.G.. P-138,.P-139Román.L.. O-021,.O-020Roo.F.J.. O-013,.O-070,.P-011,.P-065,.P-065,.P-085,.

P-130,.P-133,.P-134,.P-149Roque.A.. O-027,.O-025,.P-075,.P-092,.P-093,.P-119Rosas.C.. P-008Rosenlund.G.. P-086Rotllant.G.. P-016,.P-019,.P-032Rotllant.J.. O-059Rovira.M.. O-058Rueda.M.. P-056Ruiz.Azcona.P.. P-101Ruiz.Jarabo.de.la.Rocha.I.. O-069,.O-029,.P-131Ruiz-Zarzuela.I.. O-018

Saavedra.C.. P-140,.P-143,.P-173Saavedra.M.. P-163Sabater.C.. P-149Sáez.D.. P-100,.P-111Sáez.M.I.. O-011,.P-024,.P-068,.P-083,.P-100,.P-163Sagristà.N.. P-123Sala.R.. P-086Salah.M.. O-044Salas-Leiton.E.. P-157Salinas.J.M.. P-125Salmerón.C.. O-061,.P-080,.P-081Salord.I.. P-169Salvadó.H.. P-116Salvo.G.A.. P-091Samper.M.. O-012Sanchez.F.J.. O-068,.O-010Sanchez.N.. P-102Sánchez.J.. P-188Sanchez-Jerez.P.. O-034,.O-036Sánchez.Lazo.C.. O-050,.P-131Sánchez.Prado.J.A.. O-076,.P-185Sánchez.Sellero.F.J.. P-156,.P-155Sánchez.Álvarez-Castellanos.I.. O-033,.P-126,.P-127,.P-128Sánchez-Bretaño.A.. P-043Sánchez-García.C.. P-098,.P-107Sánchez-García.N.. O-023Sánchez-Hernández.M.. P-099Sánchez-Lizaso.J.L.. O-036Sánchez-Muros.M.J.. P-053,.P-056,.P-083Sánchez-Vázquez.F.J.. O-067,.P-090,.P-179,.P-182Santana.P.A.. O-074Sanz.A.. P-033,.P-034,.P-035,.P-037Sarasquete.C.. O-010,.P-006Sastre.M.. P-016Schuchardt.D.. O-070,.P-085,.P-130,.P-133,.P-134,.P-149Senabre.T.. O-033,.P-128,.P-127Seoane.R.. P-153Seoka.M.. O-066Serra.R.M.. P-021Serrat.A.. O-071Sexto.A.. P-183Sieiro.M.P.. P-014Silva.A.. P-091Silva.S.. P-138,.P-139Simard.F.. O-032,.P-120Simeó.C.. P-016,.P-019Simoes.S.. O-032,.P-120Skalli.A.. O-005,.P-031,.P-078Soares.E.C.. P-140,.P-143Socorro.J.. O-070,.O-013,.P-011,.P-067Sorroza.L.S.. O-021,.O-020Sosa.B.. P-022Sospedra.J.. P-122Soula.M.. O-075,.P-188,.P-189

Sparagano.O.. P-114Suárez.M.D.. O-011,.P-024,.P-068,.P-083,.P-163Sykes.A.. O-012

Tapia-Paniagua.S.. O-030,.O-029,.O-031Texeira.J.. O-034Tinoco.Pérez.A.B.. P-049Tocher.D.R.. P-025Toldrà.M.. P-165Tomás.A.. P-033,.P-044,.P-050,.P-051,.P-047,.P-074Torrent.F.. P-013Torres.E.. O-059Tort.L.. O-005,.P-106,.P-108,.P-165Trenzado.C.E.. P-023,.P-035,.P-037,.P-046,.P-048,.P-033,.

P-034Tridico.R.. P-106,.P-108

Ureta.M.. P-153Urzúa.A.. P-016

Valdehita.A.. O-001,.P-002Valente.L.. P-005Valentín.J.M.. P-069Vallejo.O.. P-169,.P-168,.P-171Vallés.R.. P-001,.P-092Van.Bergeijk.S.A.. P-181Varela.J.L.. P-027Varó.I.. P-020Vega.J.. O-021,.O-020Velarde.E.. P-084Velasco.R.. P-054Velazco-Vargas.J.. P-003Velez.A.. P-153Vendrell.D.. O-018,.O-017Venegas.E.. P-053Vera.L.M.. P-090Vera.M.. O-077Verdura.S.. O-041Viera.M.. P-004Viera.M.D.P.. P-087,.P-022Viguri.F.J.. O-066,.P-151Vilamizar.N.. P-179Vilar.A.. P-140Villalba.A..Villarroel.M.. P-013Vivas.Y.. P-043,.P-084Vásquez.L.. P-013Vázquez.E.. O-076Vílchez.M.C.. O-048,.O-049,.P-146

Wiik-Nielsen.C.R.. O-023

Yamuza.M.P.. P-066

Zambonino-Infante.J.L.. P-078Zamora.L.. O-071Zamorano.M.J.. O-075,.P-188,.P-189Zanuy.S.. O-047,.O-046,.O-044,.O-042,.O-041,.P-148Zerolo.R.. P-157Zuasti.E.. P-079

Rosselló 303 ático 1, 08037 [email protected] +34 93 221 2955, f +34 93 459 2059

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