Línea 2

Bioquímica y biología molecular de parásitos

Programas

2.1 Caracterización y purificación de enzimas hidrolíticas deE. histolytica.

2.2 Estudios sobre la organización genética de E. histolytica.2.3 Estudios sobre el DNA repetitivo de T. cruzi y Plas-

modium.

Programa 2.1 Caracterización y purificación de enzimashidrolíticas de E. histolytica.

Se trabaja con algunas enzimas proteolíticas y fosfolipá-sicas de E. histolytica, debido a su posible participación enla invasividad y en el efecto citopático de este protozoario.Se caracterizan los factores que afectan su expresión en ami-bas cultivadas.

Con el cultivo masivo de Entamoeba se contará con la bio-

masa necesaria para la purificación por cromatografía de afi-nidad de las enzimas mencionadas, que servirán para futu-ros estudios bioquímicos e inmunológicos.

También se pretende estudiar otros aspectos de la biolo-gía celular y genética de amibas con la colaboración de otrosgrupos de la comunidad científica mexicana.

Proyectos específicos

Caracterización de la actividad fibrolíticade E. histolytica.E. Gómez, A. Alagón y R. López-Revilla1983/P/SIDBQ

Producción masiva de Entamoeba en medio PEHPS-l.

J. Vargas, A. Olvera, S. Said-Fernández y A. Alagón1983/T/SIDBQ

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Purificación y caracterización de las fosfolipasas de E. his-tolytica.J. Vargas, A. Olvera, A. Alagón y S. Said-Fernández1985/P/S/DBQ

Programa 2.2 Estudios sobre la organización genética deE. histolytica.

Entamoeba histolytica es un protozoario de interés cientí-fico no sólo por ser el agente causante de la disentería ami-biana, sino además por sus propiedades biológicas. Mues-tra un gran polimorfismo tanto a nivel morfológico comobioquímico, pues en diferentes cultivos de una misma cepase encuentran variaciones considerables en los niveles deenzima s específicas. Interesa estudiar a fondo el genoma deeste organismo con el propósito de describir algunas de suspropiedades en el nivel de expresión génica. Las nuevas téc-nicas de separación de DNA de alto peso molecular por elec-troforesis en geles de campos eléctricos variables, permitenintentar el mapeo de algunos gene s de Entamoeba a nivel decromosomas, y además investigar posibles rearreglos del ge-noma que ya han sido observados en otros protozoarios. Con

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este propósito se planea la donación de algunos genes deinterés, como aquellos que codifican para fosfolipasa, fibri-nolisina o algunas proteínas de membrana abundantes.

Además, interesa la donación de elementos de DNA re-petitivo, los cuales son de función desconocida, pero pue-den resultar útiles como marcadores de regiones con poten-cial de alta inestabilidad en los cromosomas. Para obtenerestas donas se está comenzando la construcción de biblio-

tecas genómicas y de cDNA de Entamoeba, en colaboracióncon el Instituto Politécnico Nacional. A largo plazo, intere-sa la posibilidad de manipular amibas genética mente pormedio de transformación con DNA exógeno. Pensamos quepor medio de estas técnicas se podrá comprender más afondo el fenómeno de variabilidad fenotípica en las amibas.

Proyectos específicos

Clonación de DNA de elementos repetitivos de E. his-tolytica.J. Cruz, A. Alagón y P.M. Lizardi1986/P/S/DBQ

Clonación y secuenciación de gene s ribosomales de E. his-tolyticaM.L. Esteves-Piña y P.M. Lizardi1987/I/S/DBQ

Aislamiento y caracterización de los cromosomas de E.histolytica.M. Reyes, J. Cruz, M.L. Villarreal, A. Alagón y P.M. Lizardi1986/P/S/DBQ

Clonación y caracterización de genes importantes de E.histolytica.M. Zurita, P.M. Lizardi, A. Alagón e 1. Meza1987/I/S/DBQ

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Programa 2.3 Estudios sobre el DNA repetitivo de T. cruziy Plasmodium.

Se sabe que en el genoma de varias especies de parásitosse encuentra DNA de secuencia repetitiva que representaun porcentaje considerable del DNA del núcleo. La secuen-cia del DNA repetitivo suele ser específica para la especie,lo cual hace que sirva para la identificación taxonómica delorganismo. Recientemente se ha demostrado la detección dediez a treinta células de T. cruzi usando una sonda de DNA

de secuencia repetitiva del núcleo de los parásitos, obteni-do por métodos de clonación en bacterias.

En colaboración con la Dra. Nadia Nogueira y el DI'. An-tonio González, de la Escuela de Medicina de la New YorkUniversity, se continúan algunos estudios sobre la estruc-tura de genes repetitivos de T. cruzi.

En un proyecto iniciado por el Dr. Lizardi en la Rockefe-ller University, fueron secuenciados cuatro elementos deDNA repetitivo de P. falciparum. Estas secuencias mostra-ron hibridación específica para la especie, es decir, no for-man híbridos con DNA de otras especies de plasmodio, comoP. vivax y P. malariae. La utilidad de estas clonas de DNArepetitivo en ensayos diagnósticos de malaria se ha demos-trado en pruebas de hibridación con sangre de monos infec-tados con el parásito. Se continúa este proyecto de investi-gación en el Centro, y además se ha iniciado un proyectoparalelo cuyo fin es aislar y caracterizar clonas de DNA re-petitivo de P. vivax, que es la especie de plasmodio más fre-cuente en focos de infección de paludismo en México. Seespera que para este parásito también se puedan obtener clo-nas de secuencia específica para la especie, con similar apli-cación práctica en ensayos diagnósticos.

Proyectos específicos

Estructura y secuencia de algunos gene s repetitivo s en T.cruz!.

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P.M. Lizardi, A. González y N. Nogueira.1983/P/S/DBQ

Secuencia y localización cromosómica de los elementosde DNA repetitivo de P. falciparum.1. Tusié, A. González y P.M. Lizardi1984/P/S/DBQ

Clonación de DNA de elementos repetitivo s de P. vivaxy P. malariae.1. Tusié, A. Alagón, M.G. Rodríguez y P.M. Lizardi1986/P/S/DBQ

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