LP 4 - Diagnosticul in Infectia Cu Herpesvirusuri

DIAGNOSTIC IN INFECTIA CU

HERPESVIRUSURI

• Alfa-herpesvirusuri

• Beta-herpesvirusuri

• Gamma-herpesvirusuri

Subfamilia Herpesvirusuri umane Sediul latentei

Alfaherpesvirinae Herpes simplex 1

(HSV1-facial) -HH1

Herpes simplex 2

(HSV2-genital) - HH2

Virus varicelo-zosterian (VZV) - HH3

Neuroni senzitivi din

rãdãcina posterioarã a nervilor spinali şi nucleii senzitivi ai nervilor cranieni

Betaherpesvirinae Virus citomegalic

(CMV) -HHV5

Virus Herpetic uman 6 - HHV6

Virus Herpetic uman 7- HHV7

Limfocitul T,

monocite, organe solide (plamâni, rinichi) +/- epiteliul glandelor salivare

Gamaherpesvirinae Virus Epstein Barr

(EBV) - HHV4 HHV8 (asociat sarcomului Kaposi)

Limfocitul B,

endoteliu capilar

Diagnostic in infectia cu

ALPHAHERPESVIRUSURI

orientare clinica

leziuni veziculare

HERPES SIMPLEX 1 (HSV1)

HERPES SIMPLEX 2 (HSV2) VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)

GINGIVOSTOMATITA

HERPETICA

HERPES GENITAL

PRODUSE PATOLOGICE

• Lichid vezicular

• Tampon conjunctival

• Tampoane vaginale, lavajul cervico-

vaginal, tampon uretral

Recoltare recomandata in cazul

leziunilor active (50% sanse de izolare virala)

Directii de diagnostic

• Izolare virala – dg de electie

• Diagnostic direct =

– PCR

– Imunofluorescenta directa

• Diagnostic indirect - valoarea testelor

serologice

Sincitiu = celule balonizate, multinucleate

Incluzii acidofile = corpii Cowdry A

Reactia de

Imunofluorescenta

directa test specific, reproductibil, ieftin

• Amprenta se va usca bine:

pp. amprentat direct pe lama

• Imersie in acetona la 2-8°C timp de 10 minute

si uscare.

ID

PP

Reactivii trebuie sa fie la temp.camerei

• Incubare cu anticorp fluorescent (30 min la 37° C)

• Spalare

• Citire la MO in lumina UV

ID

PP

Anticorpi monoclonali marcati cu

ITC fluoreceina sau

rhodamina anti epitopi specifici

de la nivelul anvelopei

-gp C si ICP35 (HSV1) =110-120kd

-polipeptide (HSV2) =78-82kd

•PCR-metoda mai sensibila de

confirmare a dg. de infectie cu HSV

• util mai ales in:

- detectia infectiei in excretia asimptomatica

- evaluarea riscului transmiterii HSV in cupluri

discordante

- eficienta supresiei replicarii virale in terapia

antivirala (encefalita herpetica)

• Serologia singura nu este

considerata ca dg de confirmare

ci se alatura testelor de dg. direct.


BETAHERPESVIRUSURI

CMV


• Izolare virala pe culturi de fibroblaste diploide umane / Shell vials (24h). Dupa 2 zile se poate observa ECP / detecta antigene timpurii prin RIF(pp: lavaj bronhoalveolar; LCR, biopsii tisulare; sange pe anticoagulant, urina

• IF directã pentru detectia atigenelor pp65 din fractia limfocitara

• PCR pentru ADN CMV din sange pe anticoagulant, lichid amniotic

• ELISA de capturã pentru anticorpi anti CMV IgM; ELISA cantitativa pentru evidentierea seroconversiei in anticorpi anti CMV IgG pe probe pereche de ser.

Shell vials

Cell culture

ECP CMV

RIF – evidentierea Ag pp65 cu Ac antipp65

marcati fluorescent

Diagnostic serologic al infectiei

cu CMV la gravide

PRIMA TESTARE


GAMAHERPESVIRUSURI

EBV

•ELISA si IF

•anticorpi anti capsidari IgM (anti VCA,

anti EA)

•anticorpi anti nucleari (anti EBNA)

(pp=ser)

•PCR pentru ADN EBV

• (pp=biopsie tisulara, sânge integral)

Diagnostic in infectia cu virusuri

herpetice


herpesvirusuri

• Alfa-herpesvirusuri

• Beta-herpesvirusuri

• Gamma-herpesvirusuri

HERPESVIRIDAE

• ALPHAHERPESVIRINAE

• HERPES SIMPLEX 1 (HSV1)

• HERPES SIMPLEX 2 (HSV2)

• VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)

• BETAHERPESVIRINAE• CITOMEGALIC (CMV)

• HUMAN HERPESVIRUS 6 (HHV6)

• HUMAN HERPESVIRUS 7 (HHV7)

• GAMAHERPESVIRINAE• EPSTEIN BARR (EBV)

• HUMAN HERPESVIRUS 8 (HHV8)-KAPOSI ASSOCIATED


alfaherpesvirusuri

-

orientare clinica

leziuni veziculare

HSV 1

HSV 2

PRODUSE PATOLOGICE

• Lichid vezicular

• Tampon conjunctival

• Tampoane vaginale, lavajul cervico-

vaginal, tampon uretral

Recoltare recomandata in cazul

leziunilor active (50% sanse de izolare virala)


• Izolare virala – dg de electie

• Diagnostic direct =

– PCR

– Imunofluorescenta directa

• Diagnostic indirect - valoarea testelor

serologice

Izolare virala – diag. de electie

DIAGNOSTIC DE ELECTIE

Izolare virala-HSV 1 si 2: ECP apare la 2-3 zile cu raspandire rapida

-VVZ: ECP apare lent, focalizat cu raspandire in 1-2 saptamani

• HEp2

• HEK

• NCI-H292

• RD

• MR-5

• Culturi primare de rinichi de iepure

• Culturi diploide de fibroblaste

Sincitiu = celule balonizate, multinucleate

Incluzii acidofile = corpii Cowdry A

Sanse crescute de izolare

-in primoinfectie

-in stadii incipiente vs. in cazul aparitiei

crustelor

-in cazul leziunilor veziculare fara

suprainfectie

Diagnostic direct

Reactia de

Imunofluorescenta

directatest specific, reproductibil, ieftin

• Amprenta se va usca bine:

pp. amprentat direct pe lama

• Imersie in acetona la 2-8°C timp de 10 minute

si uscare.

ID

PP

Reactivii trebuie sa fie la temp.camerei

• Incubare cu anticorp fluorescent (30 min la 37° C)

• Spalare

• Citire la MO in lumina UV

ID

PP

Anticorpi monoclonali marcati cu

ITC fluoresceina sau

rhodamina anti epitopi specifici

de la nivelul anvelopei

-gp C si ICP35 (HSV1) =110-120kd

-polipeptide (HSV2) =78-82kd

IFD in celule epiteliale

Celule negative

Testul este

1. pozitiv daca pe lama sunt cel

putin 2 celule fluorescente

2. negativ daca sunt cel putin 20 de

celule fara fluorescenta

3. invalid daca nu sunt cel putin 20

de celule pe lama

•PCR-metoda mai sensibila de

confirmare a dg. de infectie cu HSV

• util mai ales in:

- detectia infectiei in excretia asimptomatica

- evaluarea riscului transmiterii HSV in cupluri

discordante

- eficienta supresiei replicarii virale in terapia

antivirala (encefalita herpetica)

• Serologia singura nu este

considerata ca dg de confirmare

ci se alatura testelor de dg. direct.

Teste serologice specifice

Serologia singura nu este considerata ca dg de confirmare ci se alatura testelor de dg. direct.

Exista mai multe tipuri de teste EIA aprobate de FDA. Se utilizeaza in urmatoarele cazuri:

• In dg de infectie cu HSV-2 sau HSV-1 la pacientii simptomatici ce prezinta culturi virale negative sau care nu au fost testati in momentul evaluarii initiale.

• Identifica infectia acuta sau latenta cu HSV-1 sau HSV-2 la pacientii cu prezentare clinica atipica.

• Se efectueaza la partenerii sexuali ai pacientilor cu dg. confirmat pentru a determina o posibila infectie subclinica sau asimptomatica

• Diagnosticarea femeilor insarcinate asimptomatice cu infectie HSV-2 sau HSV-1 la nivel genital pentru a preveni riscul transmiterii materno-fetale in momentul traversarii canalului de nastere

• Determinarea tipului de HSV pentru semnificatie prognostica. Recurentele sunt mai frecvente in cazul infectiei cu HSV-2 decat cu HSV-1.


betaherpesvirusuri

CMV

Transmiterea materno-fetala a

CMV

Prenatal- malformatii congenitale severe

(microcefalie, retard mental, anomalii

osoase)

Perinatal- “boala cu incluzii citomegalice a

nou-nascutului”( hepatosplenomegalie,

icter, anemie hemolitica)

Postnatal- infectie asimptomatica sau

asemanatoare mononucleozei


• Izolare virala pe culturi de fibroblaste diploide umane. Replicare lenta , ECP apare dupa 14-20 zile (citomegalie si incluzii intranucleare tipice in “ochi de bufnita”). (pp: lavaj bronhoalveolar; LCR, biopsii tisulare; sange pe anticoagulant, urina)

• IF directã pentru detectia atigenelor pp65 din fractia limfocitara

• PCR pentru ADN CMV din sange pe anticoagulant, lichid amniotic

• ELISA de capturã pentru anticorpi anti CMV IgM;ELISA cantitativa pentru evidentierea seroconversiei in anticorpi anti CMV IgG pe probe pereche de ser.

ECP CMV

Diagnostic serologic al infectiei

cu CMV la gravide

PRIMA TESTARE


gamaherpesvirusuri

EBV

EBV

• EIA si IF

• anticorpi anti capsidari IgM (anti VCA)

• anticorpi anti nucleari (anti EBNA)

(pp=ser)

• PCR pentru ADN EBV

(pp=biopsie tisulara, sânge integral)

Precizati tipul de reactie reprezentata in sirurile de godeuri C, D, E si principiul tehnicii.

Pentru ce viroze tehnica aceasta este de electie si ce simptome clinice prezinta

pacientul?

Precizati tipul de reactie si infectiile virale care pot fi

diagnosticate cu aceasta.

Un pacient cu leziuni veziculare in “buchet”

dispuse la nivelul comisurii bucale - se

prezinta pentru diagnostic.

Precizati produsele patologice, reguli de

transport, metode de izolare virala si

tehnica optima de diagnostic rapid

Ce tip de ECP este prezentat in figura urmatoare: Precizati

virusurile care pot determina astfel de modificari

Documents

LP 4 - Diagnosticul in Infectia Cu Herpesvirusuri