Misura di allo-reattività e studio in vitro di procedure di allo-deplezione per il trapianto

di cellule staminali ematopoietiche

DottorandaElisa Piscianz

TutoreDr. Marco Rabusin

Dottorato di RicercaMEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA

DELLO SVILUPPO E DELL’EDUCAZIONE, PERINATOLOGIA

direttore: prof . A. Ventura

XXIV Ciclo – I Anno - 2009

Trapianto di cellule staminali ematopoietiche (HSCT)

• Ricorso a donatori non compatibili (mismatched, aploidentici)• Aumento della possibilità di trapianti, ma...

Obiettivi dello studio

Valutare la possibilità di controllare entrambi gli eventi con un’unica strategia integrata

Rischio infezioni

GVHD

Mettendo a punto condizioni sensibili, specifiche, ripetibili e attuabili per test MLR per la selezione di linfociti alloreattivi (selective allodepletion)

1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro

2. Selezione e caratterizzazione delle cellule allo-reattive

3. Potenziamento/selezione della risposta anti-virale

Come…

Fb CD40L

• Monociti + GM-CSF/IL-4

1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro

CD19+7gg: 3.8%15 gg: 22.9%21gg: 55.3%28gg: 74.2%

CD80+, HLA DR+

• Fibroblasti + IFN-gamma, irradiati + CD28

• Linfociti B attivati ed espansi

analisi citometrica

• IFN-gamma (o CD134)• CD69, CD25, HLA DR a 24 ore• proliferazione a 3 giorni (CFDA-SE)

IFN-gamma a 3 e a 10 ore

1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro

Antigeni di attivazione a 24 ore

CD69 CD25HLA DR

1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro

Proliferazione a 3 giorni

1. Confronto di metodiche per misurare l’allo-reattività in vitro

2. Selezione e caratterizzazione delle cellule allo-reattive

• Su coppie di donatori mismatched• MLR Prima e dopo deplezione

• Selezione con biglie

- IFN-gamma a 18 ore

- CD134 a 2 giorni

- CD25 e CD71 a 4 giorni

• possibilità di amplificare le cellule virus-specifiche

3. Potenziamento/selezione della risposta anti-virale

• possibilità di selezionare le cellule responder contro l’antigene pp65 del CMV (MacKinnon)