Диагностика мутаций в гене CYP21A2, ассоциированных с развитием ВДКН

Д.Ю. Ключников

биолог лаборатории иммунологического типирования

ГБУЗ «МЦ Династия», г. Самара

4 сентября 2017, г.Санкт-Петербург

1

Врожденная дисфункция коры

надпочечников (адреногенитальный синдром) - группа наследственных аутосомно-рецессивных заболеваний, в основе которых дефект одного из ферментов или транспортных белков, участвующих в биосинтезе кортизола

2

Формы ВДКН

3

Формы % случаев OMIM Ген Ферменты

Дефицит 21-гидроксилазы 90-95% 201910 CYP21A2 P450c21

Дефицит 11β-гидроксилазы 5% 202010 CYP11B1 P450c11β

Дефицит 3β-гидроксистероиддегидрогеназы

Очень редко 201810 HSD3B2 3βHSD II

Дефицит 17α-гидроксилазы Очень редко 202110 CYP17A1 P450c17

Липоидная форма Очень редко 201710 STAR StAR P450scc

Метаболический путь

4

Холестерин

Альдостерон Кортизол Андрогены

АКТГ

17-ОН прогестерон

2 1 - г и д р о к с и л а з а 2 1 - г и д р о к с и л а з а

Область 6p21.3 содержащая ген в структуре RCCX элементов

Choi et al, 2016 / doi:10.6065/apem.2016.21.1.1.

5

Частота встречаемости мутаций в гене CYP21A2

6

P30L, A/C655G, Del8bp, I172N, V236E, V281L, Q318X, R356W, P453S Остальные 200-250 мутаций

Локализация мутаций в гене

7

Мутации в гене CYP21A2 и активность фермента

Группа А Группа B Группа C

Фенотип Сольтеряющая форма

1:11800-21800

Простая вирильная форма

1:11800-21800

Неклассическая форма 1:1000

Активность фермента in vitro

0%–1% 1%–10% 20%–60%

Мутации Gene deletion/conversion

I172N P30L

Del 8 bp V281L

E6 cluster P453S

F306+t

L307insT

Q318X

R356W

8

Тест-системы Intifica

1. P30L (CYP21A*8, rs9378251)

2. A/C655G (CYP21A*9, rs6467)

3. Del8bp (CYP21A*10, rs387906510)

4. Q318X (CYP21A*17, rs7755898)

5. P453S (CYP21A*19, rs6445)

9

Этапы проведения анализа

Выделение геномной ДНК

Предварительная ПЦР, разведение

продукта

RT-PCR

10

Предварительная ПЦР

11

Анализ результатов Del8bp (CYP21A*10, rs387906510)

12

Температура

плавления дуплекса,

°С

Аллель

58- 63 Аллель дикого типа

W (GAGACTAC)

43-49 Мутантная аллель M

(del)

Анализ результатов CYP21A2*17 (Q318X, rs7755898)

13

60±2°С W (C) 46±2°С M (T)

Наши результаты

№ Мутация Локализация Частота, % n=388

1 P30L (CYP21A*8, rs9378251) 1 экзон 0

2 A/C655G (CYP21A*9, rs6467) 2 интрон 18,5

3 Del8bp (CYP21A*10, rs387906510) 3 экзон 0

4 I172N (CYP21A*11, rs6475) 4 экзон 0

5 V236E (CYP21A*12, rs6476) 6 экзон 0

6 V281L (CYP21A*15, rs6471) 7 экзон 6,4

7 Q318X (CYP21A*17, rs7755898) 8 экзон 3,6

8 R356W (CYP21A*18, rs7769409) 8 экзон 0

9 P453S (CYP21A*19, rs6445) 10 экзон 0,2

14

Выявленные мутации

15

A/C655G V281L Q318X P453S

Частота, % n=388 18,5 6,4 3,6 0,2

Локализация 2 интрон 7 экзон 8 экзон 10 экзон

Группа А C А C

Форма Сольтеряющая Неклассическая Сольтеряющая Неклассическая

Активность фермента in vitro

0-1% 20%–60% 0-1% 20%–60%

OMIM 613815.0006 613815.0002 613815.0020 613815.0010

Спасибо за внимание

+7 (846) 956-44-55 /dklyuchnikov@cordbank.ru

16