Obrana proti Obrana proti extracelulárním extracelulárním

patogenůmpatogenům

Obrana proti extracelulárním baktériím Obrana proti extracelulárním baktériím a jednobuněčným parazitůma jednobuněčným parazitům

gram-negativní, gram-pozitivní koky, bacily; jednobuněční gram-negativní, gram-pozitivní koky, bacily; jednobuněční parazitéparazité

k jejich eliminaci je nezbytná k jejich eliminaci je nezbytná opsonizaceopsonizace (C3b, lektiny, (C3b, lektiny, protilátky...)protilátky...)

neutrofilní granulocytyneutrofilní granulocyty jsou do místa infekce lákány jsou do místa infekce lákány chemotakticky (C5a, C3a a chemotaktické produkty bakterií) chemotakticky (C5a, C3a a chemotaktické produkty bakterií)

pohlcené bakterie jsou likvidovány mikrobicidními systémy pohlcené bakterie jsou likvidovány mikrobicidními systémy (produkty NADP-H oxidázy, hydrolytické enzymy a baktericidní (produkty NADP-H oxidázy, hydrolytické enzymy a baktericidní látky látky v lysozomech)v lysozomech)

produkce prozánětlivých cytokinů fagocyty (IL-1, IL-6, TNF), produkce prozánětlivých cytokinů fagocyty (IL-1, IL-6, TNF), které indukují zvýšení teploty, metabolickou odpověď které indukují zvýšení teploty, metabolickou odpověď organismu a syntézu proteinů akutní fázeorganismu a syntézu proteinů akutní fáze

FagocytózaFagocytóza

v pozdějších fázích infekce jsou stimulovány antigenně v pozdějších fázích infekce jsou stimulovány antigenně specifické mechanismyspecifické mechanismy

plazmatické buňky produkují nejprve IgM, po izotypovém plazmatické buňky produkují nejprve IgM, po izotypovém přesmyku produkují přesmyku produkují IgG nebo IgAIgG nebo IgA (opsonizace) (opsonizace)

sIgA brání před infekcemi střevními a respiračními sIgA brání před infekcemi střevními a respiračními bakteriemibakteriemi

bakterie s polysacharidovým pouzdrem mohou vyvolat bakterie s polysacharidovým pouzdrem mohou vyvolat T-independentní produkci protilátekT-independentní produkci protilátek IgM IgM (po navázání na (po navázání na bakterii aktivují klasickou cestu komplementu)bakterii aktivují klasickou cestu komplementu)

po infekci přetrvávají IgG, IgA (protektivní účinek) a po infekci přetrvávají IgG, IgA (protektivní účinek) a paměťové paměťové T a B lymfocytyT a B lymfocyty

v obraně proti bakteriálním toxinům se uplatňují v obraně proti bakteriálním toxinům se uplatňují neutralizační protilátkyneutralizační protilátky (Clostridium tetani a (Clostridium tetani a botulinum...)botulinum...)

""nepřímé toxiny"- bakteriální lipopolysacharid nepřímé toxiny"- bakteriální lipopolysacharid (LPS) stimuluje velké množství monocytů k (LPS) stimuluje velké množství monocytů k uvolnění TNF, který může vyvolat septický šokuvolnění TNF, který může vyvolat septický šok

infekcemi extracelulárními bakteriemi jsou infekcemi extracelulárními bakteriemi jsou ohroženi především jedinci s poruchami funkce ohroženi především jedinci s poruchami funkce fagocytů, komplementu a tvorby protilátekfagocytů, komplementu a tvorby protilátek

Obrana proti Obrana proti intracelulárním intracelulárním

patogenůmpatogenům

Obrana proti intracelulárním bakteriím, Obrana proti intracelulárním bakteriím,

plísním a jednobuněčným parazitůmplísním a jednobuněčným parazitům

intracelulární parazitismus je dán schopností intracelulární parazitismus je dán schopností mikroorganismů uniknout mikrobicidním mikroorganismů uniknout mikrobicidním mechanismům fagocytůmechanismům fagocytů

mykobakterie, některé kvasinky a plísněmykobakterie, některé kvasinky a plísně

makrofágymakrofágy, které je pohltily produkují IL-12 , které je pohltily produkují IL-12 →→ diferenciace diferenciace TTHH11, které produkují IFN, které produkují IFN a a membránový TNFmembránový TNF→ aktivace makrofágů a indukce → aktivace makrofágů a indukce iNOSiNOS

Obrana proti intracelulárním patogenůmObrana proti intracelulárním patogenům

plazmatické buňky pod vlivem plazmatické buňky pod vlivem IFNIFN produkují IgG; produkují IgG; imunokomplexy obsahující IgG se váží na Fc imunokomplexy obsahující IgG se váží na Fc receptory makrofágů a tím je stimulujíreceptory makrofágů a tím je stimulují

v obraně proti intacelulárním parazitům, kteří v obraně proti intacelulárním parazitům, kteří unikají unikají z fagolysozómu se uplatňují z fagolysozómu se uplatňují TTCC lymfocyty lymfocyty

infekcemi intracelulárními mikroorganismy jsou infekcemi intracelulárními mikroorganismy jsou ohroženi jedinci s některými poruchami funkcí ohroženi jedinci s některými poruchami funkcí fagocytů fagocytů a s defekty T lymfocytůa s defekty T lymfocytů

Obrana proti intracelulárním patogenůmObrana proti intracelulárním patogenům

Obrana proti virůmObrana proti virům

Obrana proti virůmObrana proti virům interferonyinterferony - v infikovaných bb. je indukována - v infikovaných bb. je indukována

produkce IFNprodukce IFN a IFN a IFN (brání replikaci viru a v (brání replikaci viru a v neinfikovaných bb. navozují tzv. antivirový stav)neinfikovaných bb. navozují tzv. antivirový stav)

NK buňkyNK buňky - ADCC (Antibody-dependent cell- - ADCC (Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) = cytotoxická reakce mediated cytotoxicity) = cytotoxická reakce závislá na protilátkách; rozpozná-li NK lymfocyt závislá na protilátkách; rozpozná-li NK lymfocyt buňku opsonizovanou IgG pomocí svých buňku opsonizovanou IgG pomocí svých stimulačních Fc receptorů CD16 dojde k aktivaci stimulačních Fc receptorů CD16 dojde k aktivaci cytotoxických mechanismů (degranulaci)cytotoxických mechanismů (degranulaci)

infikované makrofágy produkují IL-12 (silný infikované makrofágy produkují IL-12 (silný aktivátor NK bb.)aktivátor NK bb.)

v obraně proti cytopatickým virům se nejvíce v obraně proti cytopatickým virům se nejvíce uplatňují uplatňují protilátkyprotilátky

sIgA na sliznicích blokují adhezi virů (obrana sIgA na sliznicích blokují adhezi virů (obrana proti proti respiračním virům a enterovirům)respiračním virům a enterovirům)

neutralizační protilátky IgG nebo IgM aktivují neutralizační protilátky IgG nebo IgM aktivují klasickou cestu komplementu, který je klasickou cestu komplementu, který je schopný některé viry lyzovatschopný některé viry lyzovat

IgA a IgG vzniklé při virové infekci mají IgA a IgG vzniklé při virové infekci mají preventivní efekt při sekundární infekcipreventivní efekt při sekundární infekci

efektorové efektorové TTCC lymfocytylymfocyty ničí infikované buňky ničí infikované buňky a produkují cytokiny, které inhibují replikaci virůa produkují cytokiny, které inhibují replikaci virů

některé viry se po infekci integrují do některé viry se po infekci integrují do hostitelského genomu, kde perzistují po léta hostitelského genomu, kde perzistují po léta (varicella zoster, EBV, papilomaviry)(varicella zoster, EBV, papilomaviry)

těmito infekcemi jsou ohroženi jedinci s těmito infekcemi jsou ohroženi jedinci s imunodeficity lymfocytů T a s kombinovanými imunodeficity lymfocytů T a s kombinovanými poruchami imunityporuchami imunity

zvýšená náchylnost k herpetickým infekcím u zvýšená náchylnost k herpetickým infekcím u jedinců s dysfunkcí NK bb. jedinců s dysfunkcí NK bb.

Obrana proti virůmObrana proti virům

Obrana proti virůmObrana proti virům

Obrana proti virůmObrana proti virům

Obrana proti Obrana proti mnohobuněčným mnohobuněčným

parazitůmparazitům

Obrana proti mnohobuněčným Obrana proti mnohobuněčným parazitůmparazitům

kontakt kontakt mastocytů, bazofilů a eosinofilůmastocytů, bazofilů a eosinofilů s s antigeny parazitaantigeny parazita

stimulace Tstimulace THH2 pod vlivem IL-4 (mastocyty a další 2 pod vlivem IL-4 (mastocyty a další APC stimulované parazitem)APC stimulované parazitem)

TTHH2 stimulují B lymfocyty s BCR specifickým pro 2 stimulují B lymfocyty s BCR specifickým pro parazitární antigenyparazitární antigeny

pod vlivem IL-4 izotypový přesmyk v pod vlivem IL-4 izotypový přesmyk v IgEIgE

IgE se váží na FcIgE se váží na FcRI mastocytů a bazofilů ("antigenně RI mastocytů a bazofilů ("antigenně specifické receptory")specifické receptory")

navázání multivalentního antigenu ( mnohobuněčného navázání multivalentního antigenu ( mnohobuněčného parazita) pomocí IgE na vysokoafinní Fc receptor pro parazita) pomocí IgE na vysokoafinní Fc receptor pro IgE (FcIgE (FcRI)RI)

agregace několika molekul Fcagregace několika molekul FcRI RI →→ aktivace mastocytuaktivace mastocytu:: iniciace degranulace mastocytu ( fúze iniciace degranulace mastocytu ( fúze

cytoplazmatických granulí s povrchovou membránou cytoplazmatických granulí s povrchovou membránou a uvolnění jejich obsahu) – uvolnění a uvolnění jejich obsahu) – uvolnění histaminuhistaminu……

aktivace metabolismu kyseliny arachidonové aktivace metabolismu kyseliny arachidonové (leukotrien C4, prostaglandin PGD2) - amplifikace (leukotrien C4, prostaglandin PGD2) - amplifikace zánětlivé reakcezánětlivé reakce

zahájení produkce cytokinů (TNF, TGFzahájení produkce cytokinů (TNF, TGF, IL-4,5,6…) , IL-4,5,6…) mastocytemmastocytem

HistaminHistamin způsobuje vasodilataci, zvýšení vaskulární způsobuje vasodilataci, zvýšení vaskulární

permeability, erytém, edém, svědění, kontrakci hladké permeability, erytém, edém, svědění, kontrakci hladké

svaloviny bronchů, zvýšení peristaltiky střev, zvýšení svaloviny bronchů, zvýšení peristaltiky střev, zvýšení

sekrece hlenu slizničními žlázkami v respiračním traktu sekrece hlenu slizničními žlázkami v respiračním traktu

a GITu (napomáhá eliminaci parazita)a GITu (napomáhá eliminaci parazita)

Aktivace mastocytuAktivace mastocytu

v pozdějších stádiích se aktivují v pozdějších stádiích se aktivují TTHH11 a jsou a jsou produkovány produkovány protilátky dalších třídprotilátky dalších tříd

eosinofilyeosinofily fagocytují komplexy parazitárních fagocytují komplexy parazitárních částic s IgE prostřednictvím svých receptorů pro částic s IgE prostřednictvím svých receptorů pro IgEIgE

eosinofilyeosinofily proti parazitům používají extracelulární proti parazitům používají extracelulární baktericidní látky uvolněné z granulí (baktericidní látky uvolněné z granulí (eosinofilní eosinofilní katoinický proteinkatoinický protein, proteázy), proteázy)

Obrana proti mnohobuněčným parazitůmObrana proti mnohobuněčným parazitům

Protinádorová imunitaProtinádorová imunita

Maligní transformaceMaligní transformace porucha regulace buněčného dělení a regulace porucha regulace buněčného dělení a regulace

"sociálního" chování buněk "sociálního" chování buněk nekontrolovatelná proliferace, diseminace do jiných nekontrolovatelná proliferace, diseminace do jiných

tkánítkání mutace v protoonkogenech a antionkogenechmutace v protoonkogenech a antionkogenech

Nádorové buňkyNádorové buňky neomezený růst (ztráta kontaktní inhibice)neomezený růst (ztráta kontaktní inhibice) růst i bez stimulace růstovými faktoryrůst i bez stimulace růstovými faktory nesmrtelnost (nádorové buňky se nedělí jen po nesmrtelnost (nádorové buňky se nedělí jen po

omezený počet generací jako normální buňky)omezený počet generací jako normální buňky) často změněný počet chromosomů i časté často změněný počet chromosomů i časté

chromosomální přestavbychromosomální přestavby TSA ...TSA ...

Nádorové antigenyNádorové antigeny

a) Antigeny specifické pro nádory (TSA)a) Antigeny specifické pro nádory (TSA) Komplexy MHC gp I s abnormálními fragmenty Komplexy MHC gp I s abnormálními fragmenty

buněčných proteinůbuněčných proteinů - chemicky indukované nádory- chemicky indukované nádory - leukémie s chromozomálními translokacemi- leukémie s chromozomálními translokacemi

Komplexy MHC gp s fragmenty proteinů Komplexy MHC gp s fragmenty proteinů onkogenních virůonkogenních virů

- nádory vyvolané viry (EBV, SV40, polyomavirus)- nádory vyvolané viry (EBV, SV40, polyomavirus)

Abnormální formy glykoproteinůAbnormální formy glykoproteinů - sialylace povrchových proteinů nádorových buněk- sialylace povrchových proteinů nádorových buněk

Idiotypy myelomů a lymfomůIdiotypy myelomů a lymfomů - klonotypické TCR a BCR- klonotypické TCR a BCR

b) Antigeny asociované s nádory (TAA)b) Antigeny asociované s nádory (TAA)

nachází se i na normálních buňkáchnachází se i na normálních buňkách odlišnosti v kvantitě, časové či místní expresiodlišnosti v kvantitě, časové či místní expresi pomocné diagnostické markerypomocné diagnostické markery

1) 1) Onkofetální antigenyOnkofetální antigeny na normálních embryonálních bb. a některých nádorových bb.na normálních embryonálních bb. a některých nádorových bb. -fetoprotein-fetoprotein (AFP) - hepatom (AFP) - hepatom karcinoembrionální antigenkarcinoembrionální antigen (CEA) - karcinom tlustého střeva (CEA) - karcinom tlustého střeva

2) 2) Melanomové antigenyMelanomové antigeny MAGE-1, MELAN-AMAGE-1, MELAN-A

3) 3) Antigen HER2/neuAntigen HER2/neu receptor růstového faktoru epiteliálních bb.receptor růstového faktoru epiteliálních bb. karcinom mléčné žlázykarcinom mléčné žlázy

4) 4) EPCAMEPCAM adhezivní molekula epiteliálních bb.adhezivní molekula epiteliálních bb. metastázy karcinomůmetastázy karcinomů

5) 5) Diferenciační antigeny leukemických bb.Diferenciační antigeny leukemických bb. přítomny na normálních bb. vývojové řady přítomny na normálních bb. vývojové řady

leukocytůleukocytů CALLACALLA -akutní lymfoblastické leukémie, (CD10 -akutní lymfoblastické leukémie, (CD10

pre-B bb.)pre-B bb.)

Protinádorové imunitní mechanismyProtinádorové imunitní mechanismy

Imunitní dozorImunitní dozor nádorové buňky běžně vznikají ve tkáních nádorové buňky běžně vznikají ve tkáních

a jsou eliminovány T lymfocyty a jsou eliminovány T lymfocyty (pravděpodobně nesprávná hypotéza)(pravděpodobně nesprávná hypotéza)

Obranná imunitní reakceObranná imunitní reakce

nádorové bb. jsou nádorové bb. jsou slabě imunogenníslabě imunogenní

vzniká, jsou-li nádorové antigeny prezentovány T lymfocytům vzniká, jsou-li nádorové antigeny prezentovány T lymfocytům dendritickými buňkami aktivovanými v zánětlivém prostředídendritickými buňkami aktivovanými v zánětlivém prostředí

jsou-li nádorové buňky rozpoznány, mohou se na obraně jsou-li nádorové buňky rozpoznány, mohou se na obraně podílet podílet nespecifické mechanismynespecifické mechanismy (neutrofilní granulocyty, (neutrofilní granulocyty, makrofágy, NK bb.) i makrofágy, NK bb.) i antigenně specifické mechanismyantigenně specifické mechanismy (protilátky aktivující komplement či zprostředkující ADCC, T(protilátky aktivující komplement či zprostředkující ADCC, THH1 a 1 a TTCC))

s nádorem asociované antigeny jsou zpracovány s nádorem asociované antigeny jsou zpracovány APC a rozpoznány T lymfocyty v komplexu s HLA APC a rozpoznány T lymfocyty v komplexu s HLA I. a II. třídy za poskytnutí kostimulačních signálů I. a II. třídy za poskytnutí kostimulačních signálů

převaha převaha TTHH11 (IFN (IFN,TNF,TNF))

specifická buňkami zprostředkovaná cytotoxická specifická buňkami zprostředkovaná cytotoxická reaktivita - reaktivita - TTCC

jsou aktivovány i Tjsou aktivovány i THH2 2 → podpora B lymfocytů → → podpora B lymfocytů → nádorově nádorově specifické protilátkyspecifické protilátky (podílejí se na (podílejí se na ADCC) ADCC)

nádorové bb. jsou cytotoxicky ničeny nádorové bb. jsou cytotoxicky ničeny NK buňkamiNK buňkami (ADCC) působením perforinů nebo indukcí (ADCC) působením perforinů nebo indukcí apoptózy (FasL)apoptózy (FasL)

Protinádorové imunitní Protinádorové imunitní mechanismymechanismy

Mechanismy odolnosti nádorů vůči Mechanismy odolnosti nádorů vůči imunitnímu systémuimunitnímu systému

vysoká variabilita nádorových bb.vysoká variabilita nádorových bb.

nízká exprese nádorových antigenůnízká exprese nádorových antigenů

sialylacesialylace

nádorové bb. neposkytují kostimulační signály nádorové bb. neposkytují kostimulační signály → → anergie T lymfocytůanergie T lymfocytů

některé protinádorové látky mají stimulační některé protinádorové látky mají stimulační účinkyúčinky

produkce faktorů inaktivujících T lymfocytyprodukce faktorů inaktivujících T lymfocyty

exprese FasL exprese FasL → apoptóza T lymfocytů→ apoptóza T lymfocytů

inhibice funkce či životnosti dendritických bb. inhibice funkce či životnosti dendritických bb. (NO, IL-10, TGF-(NO, IL-10, TGF-))

TransplantaceTransplantace

TransplantaceTransplantace

= přenos tkáně či orgánu= přenos tkáně či orgánu

●● autologní autologní - dárce = příjemce - dárce = příjemce

●● syngennísyngenní - geneticky identický dárce s příjemcem - geneticky identický dárce s příjemcem (identická dvojčata) (identická dvojčata)

● ● alogenníalogenní - geneticky neidentický dárce stejného - geneticky neidentický dárce stejného živočišného druhu živočišného druhu

● ● xenogenníxenogenní - dárce jiného živočišného druhu - dárce jiného živočišného druhu

● ● implantaceimplantace - umělé náhrady tkání - umělé náhrady tkání

Alogenní transplantaceAlogenní transplantace

●● rozdíly dárce-příjemce v MHC gp a vedlejších rozdíly dárce-příjemce v MHC gp a vedlejších histokompatibilních Ag histokompatibilních Ag

●● aloreaktivita T lymfocytůaloreaktivita T lymfocytů - riziko rejekce a reakce - riziko rejekce a reakce štěpu štěpu proti hostiteli (GvH) proti hostiteli (GvH)

●● přímé rozpoznání aloantigenůpřímé rozpoznání aloantigenů - T lymfocyty - T lymfocyty příjemce příjemce rozpoznávají odlišné MHC gp a non-MHC molekuly rozpoznávají odlišné MHC gp a non-MHC molekuly na buňkách dárce na buňkách dárce

●● nepřímé rozpoznání aloantigenůnepřímé rozpoznání aloantigenů – APC pohltí – APC pohltí rozdílné rozdílné MHC gp z buněk dárce a prezentují jejich MHC gp z buněk dárce a prezentují jejich fragmenty fragmenty T lymfocytům T lymfocytům

●● CD8+ T lymfocyty rozeznávají MHC gp I CD8+ T lymfocyty rozeznávají MHC gp I

●● CD4+ T lymfocyty rozeznávají MHCgp II CD4+ T lymfocyty rozeznávají MHCgp II

Předtransplantační vyšetřeníPředtransplantační vyšetření

●● Kompatibilita v ABO systému-Kompatibilita v ABO systému- riziko hyperakutní riziko hyperakutní nebo nebo akcelerované rejekce (= tvorba Ab proti A nebo B akcelerované rejekce (= tvorba Ab proti A nebo B Ag Ag na cévním endotelu štěpu) na cévním endotelu štěpu)

●● HLA typizaceHLA typizace (určování alelických forem MHC gp) (určování alelických forem MHC gp) fenotypizací nebo genotypizací pomocí PCR fenotypizací nebo genotypizací pomocí PCR

●● Cross match- lymfocytotoxický testCross match- lymfocytotoxický test - vyšetření - vyšetření preformovaných Ab preformovaných Ab (po krevních transfúzích, transplantacích, (po krevních transfúzích, transplantacích, opakovaných opakovaných porodech) porodech) ●● Směsný lymfocytární testSměsný lymfocytární test - vyšetření aloreaktivity - vyšetření aloreaktivity

T lymfocytů, sleduje se reaktivita lymfocytů na T lymfocytů, sleduje se reaktivita lymfocytů na alogenní alogenní HLA HLA

HLA typizaceHLA typizace = určení HLA antigenů na povrchu = určení HLA antigenů na povrchu lymfocytůlymfocytůProvádí se při předtransplantačním vyšetření a při Provádí se při předtransplantačním vyšetření a při určení paternityurčení paternity1) Sérologická typizace1) Sérologická typizace• mikrolymfocytotoxický testmikrolymfocytotoxický test

• allospecifická séra ( získaná od vícenásobných rodiček do 6 týdnů po allospecifická séra ( získaná od vícenásobných rodiček do 6 týdnů po porodu, získaná vakcinací dobrovolníků, nebo komerčně připravené porodu, získaná vakcinací dobrovolníků, nebo komerčně připravené sety typizačních sér (monoklonální protilátky))sety typizačních sér (monoklonální protilátky))

• princip princip - inkubace lymfocytů s typizačními séry za přítomnosti - inkubace lymfocytů s typizačními séry za přítomnosti králičího králičího komplementu, poté je přidáno vitální barvivo, které obarví komplementu, poté je přidáno vitální barvivo, které obarví mrtvé buňky mrtvé buňky - buňky nesoucí určité HLA jsou usmrceny cytotoxickými Ab - buňky nesoucí určité HLA jsou usmrceny cytotoxickými Ab proti tomuto Ag, procento mrtvých buněk je mírou toxicity proti tomuto Ag, procento mrtvých buněk je mírou toxicity séra (síly a titru antileukocytárních protilátek) séra (síly a titru antileukocytárních protilátek)

• za pozitivní reakci se považuje více než 10% mrtvých bb.za pozitivní reakci se považuje více než 10% mrtvých bb.

• (sérologickou typizaci lze provádět i pomocí průtokové cytometrie)(sérologickou typizaci lze provádět i pomocí průtokové cytometrie)

2) Molekulárně genetické metody2) Molekulárně genetické metody

2a) PCR-SSP2a) PCR-SSP• = polymerázová řetězová reakce se sekvenčními = polymerázová řetězová reakce se sekvenčními

specifickými primeryspecifickými primery• extrahovaná DNA slouží jako substrát v sadě PCR extrahovaná DNA slouží jako substrát v sadě PCR

reakcíreakcí• každá PCR reakce obsahuje primerový pár specifický každá PCR reakce obsahuje primerový pár specifický

pro určitou alelu (resp. skupinu alel)pro určitou alelu (resp. skupinu alel)• pozitivní a negativní reakce se hodnotí elektroforézoupozitivní a negativní reakce se hodnotí elektroforézou• každá kombinace alel má svůj specifický každá kombinace alel má svůj specifický

elektroforetický obrazelektroforetický obraz

2b) PCR-SSO2b) PCR-SSO• = PCR reakce se sekvenčně specifickými oligonukleotidy= PCR reakce se sekvenčně specifickými oligonukleotidy• namnoží se hypervariabilní úseky genů kódujících HLAnamnoží se hypervariabilní úseky genů kódujících HLA• hybridizace s enzymaticky nebo radioaktivně značenými hybridizace s enzymaticky nebo radioaktivně značenými

DNA sondami specifickými pro jednotlivé alelyDNA sondami specifickými pro jednotlivé alely

2c) PCR- SBT2c) PCR- SBT• = sequencing based typing; sekvenování= sequencing based typing; sekvenování• nejpřesnější metodika HLA typizacenejpřesnější metodika HLA typizace• získáme přesnou sekvenci nukleotidů, kterou porovnáme s získáme přesnou sekvenci nukleotidů, kterou porovnáme s

databází známých sekvencí HLA aleldatabází známých sekvencí HLA alel

Cross-match testCross-match test

●● průkaz preformovaných protilátek průkaz preformovaných protilátek

●● sérum příjemce + lymfocyty dárce + králičí sérum příjemce + lymfocyty dárce + králičí komplement → jsou-li v séru příjemce cytotoxické komplement → jsou-li v séru příjemce cytotoxické Ab proti dárcovským Ab proti dárcovským HLA Ag (tzv. HLA Ag (tzv. aloprotilátky = aloprotilátky = Ab aktivující Ab aktivující komplement) → lýza dárcových lymfocytů. komplement) → lýza dárcových lymfocytů. Vizualizace průnikem barviva Vizualizace průnikem barviva do lyzovaných bb. do lyzovaných bb.

●● p pozitivita testu ozitivita testu = přítomnost preformovaných = přítomnost preformovaných Ab → Ab → riziko riziko hyperakutní rejekce!hyperakutní rejekce! → → kontraindikace kontraindikace transplantace transplantace

•Směsná lymfocytární reakce (MLR)Směsná lymfocytární reakce (MLR)

●● průkaz aloreaktivity T lymfocytů průkaz aloreaktivity T lymfocytů

●● smísí se lymfocyty dárce a příjemce → T smísí se lymfocyty dárce a příjemce → T lymfocyty se po lymfocyty se po rozpoznání alogenních MHC gp aktivují a rozpoznání alogenních MHC gp aktivují a proliferují proliferují

●● hodnotí se množství zabudovaných hodnotí se množství zabudovaných radioaktivních radioaktivních nukleotidů v DNA nukleotidů v DNA

Jednosměrná MLRJednosměrná MLR

●● stanovení reaktivity T lymfocytů příjemce vůči stanovení reaktivity T lymfocytů příjemce vůči buňkám buňkám dárce dárce

●● buňky dárce se ozáří či ošetří cytostatikem, tím buňky dárce se ozáří či ošetří cytostatikem, tím ztratí ztratí schopnost dělení schopnost dělení

Směsná lymfocytární reakce (MLR)Směsná lymfocytární reakce (MLR) jednosměrná jednosměrná

Imunologicky privilegovaná místa a Imunologicky privilegovaná místa a tkánětkáně

• Transpalntace některých tkání nevede k indukci Transpalntace některých tkání nevede k indukci alogenní reaktivity alogenní reaktivity • minimální obsah leukocytů minimální obsah leukocytů • mechanismy bránící rozvoji poškozujícího zánětu mechanismy bránící rozvoji poškozujícího zánětu

• Evolučně významné, ochrana důležitých orgánů Evolučně významné, ochrana důležitých orgánů (mozek, oko, gonády)(mozek, oko, gonády)

• Faktory chránící imunologicky privilegovaná místaFaktory chránící imunologicky privilegovaná místa • izolace od imunitního systému izolace od imunitního systému • preferenční rozvoj Tpreferenční rozvoj THH2 odpovědi, potlačení T2 odpovědi, potlačení THH1 1 • exprese FasLexprese FasL• produkce TGFprodukce TGF

Rejekce (odhojení, odvržení štěpu)Rejekce (odhojení, odvržení štěpu)

Faktory: Faktory:

●● Genetický rozdíl mezi dárcem a příjemcem, Genetický rozdíl mezi dárcem a příjemcem, zejména v zejména v genech kódujících MHC gp (HLA) genech kódujících MHC gp (HLA)

●● Druh tkáně/orgánu - nejsilnější reakce proti Druh tkáně/orgánu - nejsilnější reakce proti vaskularizovaným tkáním obsahujícím hodně APC vaskularizovaným tkáním obsahujícím hodně APC (kůže)(kůže)

●● Aktivita imunitního systému příjemce - Aktivita imunitního systému příjemce - imunodeficitní imunodeficitní příjemce má menší odhojovací reakce; příjemce má menší odhojovací reakce; imunosupresivní imunosupresivní léčba po transplantaci - potlačení rejekce léčba po transplantaci - potlačení rejekce

●● Stav transplantovaného orgánu - délka ischémie, Stav transplantovaného orgánu - délka ischémie, způsob způsob uchování, traumatizace orgánu při odběru uchování, traumatizace orgánu při odběru

Hyperakutní rejekceHyperakutní rejekce

●● minuty až hodiny po transplantaciminuty až hodiny po transplantaci●● imunitní reakce imunitní reakce protilátkového typuprotilátkového typu

mechanismus: mechanismus: ●● vv krvi příjemce jsou přítomny již před transplantací  krvi příjemce jsou přítomny již před transplantací preformovanépreformované nebo nebo přirozenépřirozené Ab (IgM proti Ab (IgM proti sacharidovým Ag) → Ab+Ag štěpu (MHC gp nebo Agg sacharidovým Ag) → Ab+Ag štěpu (MHC gp nebo Agg endotélií) → endotélií) → štěp poškozen aktivovaným štěp poškozen aktivovaným komplementemkomplementem (lýza bb.) (lýza bb.)

●● nna endotelu štěpu: aktivace koagulačních faktorů a a endotelu štěpu: aktivace koagulačních faktorů a destiček, vznik trombů, akumulace neutrofilních destiček, vznik trombů, akumulace neutrofilních granulocytůgranulocytů

prevence:prevence:●● negat. negat. cross matchcross match před transplantací, před transplantací, ABOABO kompatibilita kompatibilita

Akcelerovaná rejekceAkcelerovaná rejekce

●● 3 - 5 dnů po transplantaci3 - 5 dnů po transplantaci

●● vyvolána vyvolána protilátkamiprotilátkami které neaktivují které neaktivují komplement komplement

●● c cytotoxická a zánětliváytotoxická a zánětlivá reakce spuštěna vazbou reakce spuštěna vazbou protilátky na Fc-receptory fagocytů a NK buněk protilátky na Fc-receptory fagocytů a NK buněk

prevence:prevence:●● negat. negat. cross matchcross match před transplantací, před transplantací, ABO ABO kompatibilitakompatibilita

Akutní rejekceAkutní rejekce

●● dny až týdny po transplantaci nebo při přerušení dny až týdny po transplantaci nebo při přerušení imunosupresivní léčby imunosupresivní léčby●● buňkami zprostředkovanábuňkami zprostředkovaná imunitní reakce imunitní reakce

mechanismus: mechanismus: ●● reakcereakce TTHH1 a T1 a TC C buněk buněk příjemce proti Ag tkáně příjemce proti Ag tkáně štěpuštěpu●● i infiltrace okolí malých cév lymfocyty, nfiltrace okolí malých cév lymfocyty, mononukleáry, mononukleáry, granulocyty → destrukce tkáně transplantátu granulocyty → destrukce tkáně transplantátu

Chronická rejekceChronická rejekce

●● od 2. měsíce po transplantaciod 2. měsíce po transplantaci

●● nejčastější příčina selhání štěpunejčastější příčina selhání štěpu

mechanismus není zcela objasněn:mechanismus není zcela objasněn:●● neimunologické faktory (ischémie tkání) a T neimunologické faktory (ischémie tkání) a THH2 2 reakce reakce s produkcí aloprotilátek, patogenetická úloha s produkcí aloprotilátek, patogenetická úloha cytokinů cytokinů a růstových faktorů (T a růstových faktorů (THH3 - TGF 3 - TGF ββ))

●● nahrazování funkční tkáně vazivem, nahrazování funkční tkáně vazivem, poškození poškození endotelu endotelu → → porucha prokrvení štěpu → postupná ztráta jeho porucha prokrvení štěpu → postupná ztráta jeho funkcefunkce

●● dominující nález: poškození cév dominující nález: poškození cév

Transplantace kostní dřeněTransplantace kostní dřeně

●● Odběr kmenových hematopoetických bb.Odběr kmenových hematopoetických bb.

●● MyeloablaceMyeloablace

●● TransplantaceTransplantace

●● EngraftmentEngraftment

●● RejekceRejekce

●● Graft- versus-hostGraft- versus-host

Reakce štěpu proti hostiteli (GvH)Reakce štěpu proti hostiteli (GvH)

●● po transplantaci kostní dřeněpo transplantaci kostní dřeně

●● GvH také po transfúzi krve imunodeficitnímu GvH také po transfúzi krve imunodeficitnímu příjemcipříjemci

●● T lymfocyty ve štěpu kostní dřeně rozeznávají T lymfocyty ve štěpu kostní dřeně rozeznávají tkáňové Ag tkáňové Ag příjemce jako cizorodé (aloreaktivita) příjemce jako cizorodé (aloreaktivita)

Akutní GvHAkutní GvH

●● dny až týdny po transplantaci kmenových bb.dny až týdny po transplantaci kmenových bb.

●● poškození jater, kůže, střevní sliznice poškození jater, kůže, střevní sliznice

●● prevence: vhodný výběr dárce, odstranění T prevence: vhodný výběr dárce, odstranění T lymfocytů lymfocytů ze štěpu a účinná imunosuprese ze štěpu a účinná imunosuprese

Chonická GvHChonická GvH

● měsíce až roky po transplantaci● měsíce až roky po transplantaci

● infiltrace tkání a orgánů T● infiltrace tkání a orgánů THH2 lymfocyty, tvorba 2 lymfocyty, tvorba aloprotilátek aloprotilátek a produkce cytokinů → fibrotizace tkání a produkce cytokinů → fibrotizace tkání

● průběh: připomíná autoimunitní onemocnění: ● průběh: připomíná autoimunitní onemocnění: vaskulitidu, vaskulitidu, sklerodermii, sicca-syndrom sklerodermii, sicca-syndrom

● chronický zánět cév, kůže, vnitřních orgánů nebo ● chronický zánět cév, kůže, vnitřních orgánů nebo žláz, který žláz, který vede k fibrotizaci, poruchám prokrvení a ztrátě vede k fibrotizaci, poruchám prokrvení a ztrátě funkcefunkce

Reakce štěpu proti leukemickým Reakce štěpu proti leukemickým buňkám buňkám ( GvL)( GvL)

●● GvLGvL (graft versus leukemia) – dárcovské T (graft versus leukemia) – dárcovské T lymfocyty reagují proti zbytkovým leukemickým lymfocyty reagují proti zbytkovým leukemickým buňkám příjemce (žádaná reakce)buňkám příjemce (žádaná reakce)

●● mechanismus je shodný s akutní GvH mechanismus je shodný s akutní GvH

●● spojeno i s určitým stupněm GvH (nežádoucí spojeno i s určitým stupněm GvH (nežádoucí reakce)reakce)

Omezení rejekcí a GvHOmezení rejekcí a GvH

●● vhodný výběr dárcevhodný výběr dárce

●● vhodná imunosuprese vhodná imunosuprese

●● omezení GvH – odstranění T lymfocytů ze štěpu, omezení GvH – odstranění T lymfocytů ze štěpu, purifikace kmenových bb. z periferní krve purifikace kmenových bb. z periferní krve

Imunologický vztah Imunologický vztah

matky a plodumatky a plodu

Imunologický vztah matky Imunologický vztah matky a alogenního plodua alogenního plodu

●● buňky plodu mají na povrchu aloantigeny buňky plodu mají na povrchu aloantigeny zděděné po otci zděděné po otci

● ● těhotenství = „semialogenní transplantace“těhotenství = „semialogenní transplantace“

Toleranci plodu matkou umožnují tyto mechanismy:Toleranci plodu matkou umožnují tyto mechanismy:

●● relativní izolace plodurelativní izolace plodu od imunitního systému matky od imunitního systému matky (nedochází k mísení krevních oběhů)(nedochází k mísení krevních oběhů)

●● trofoblast trofoblast - tvoří imunologickou bariéru chránící před - tvoří imunologickou bariéru chránící před aloreaktivními T lymfocyty matky aloreaktivními T lymfocyty matky

- neexprimuje klasické MHC gp, exprimuje - neexprimuje klasické MHC gp, exprimuje neklasické HLA-E a HLA-G neklasické HLA-E a HLA-G

●● přestup malých dávek fetálních antigenů do mateřského přestup malých dávek fetálních antigenů do mateřského oběhu oběhu vyvolá toleranci vyvolá toleranci …utlumení Tutlumení THH11 a posílení a posílení TTHH22 imunitních imunitních

mechanismů v těhotenství mechanismů v těhotenství• „ „ lokální imunosuprese“lokální imunosuprese“

Rh inkompatibilitaRh inkompatibilita

• Komplikací těhotenství: tvorba anti-RhD protilátek Komplikací těhotenství: tvorba anti-RhD protilátek u RhD- matky nesoucí RhD+plod (hemolytická u RhD- matky nesoucí RhD+plod (hemolytická nemoc novorozenců) nemoc novorozenců)

• Fetální erytrocyty pronikají do oběhu matky i Fetální erytrocyty pronikají do oběhu matky i během těhotenství – malé množství, neimunizujíběhem těhotenství – malé množství, neimunizují

• Při porodu nebo při potratu (po 8. týdnu Při porodu nebo při potratu (po 8. týdnu těhotenství) proniknou erytrocyty plodu do těhotenství) proniknou erytrocyty plodu do krevního oběhu matky krevního oběhu matky →→ imunizace, vznik imunizace, vznik anti-anti-RhDRhD protilátek protilátek

• Po porodu se vyšetří Rh faktor narozeného dítěte, Po porodu se vyšetří Rh faktor narozeného dítěte, je-li Rh+, matka dostane do 72 hodin po porodu je-li Rh+, matka dostane do 72 hodin po porodu injekci Rhega (podává se i po potratu)injekci Rhega (podává se i po potratu)

Rh inkompatibilitaRh inkompatibilita

• Rhega = Anti-RhD imunoglobulinRhega = Anti-RhD imunoglobulin, tyto protilátky se , tyto protilátky se váží na RhD Ag, ten se nemůže vázat na BCR a tím váží na RhD Ag, ten se nemůže vázat na BCR a tím aktivovat B lymfocyty, tyto imunokomplexy také aktivovat B lymfocyty, tyto imunokomplexy také aktivně inhibují aktivně inhibují B lymfocyty B lymfocyty

• Nebyla-li po porodu Rhega podána, s každým dalším Nebyla-li po porodu Rhega podána, s každým dalším těhotenstvím stoupá tvorba protilátek anti-D, a tím těhotenstvím stoupá tvorba protilátek anti-D, a tím i riziko poškození plodui riziko poškození plodu

• Během dalších těhotenství, je-li plod Rh+, ničí Během dalších těhotenství, je-li plod Rh+, ničí

matčiny protilátky krvinky plodu, což může vést k matčiny protilátky krvinky plodu, což může vést k úmrtí ploduúmrtí plodu ještě v děloze, nebo k těžké ještě v děloze, nebo k těžké poporodní poporodní chudokrevnostichudokrevnosti ( (anemia neonatorumanemia neonatorum) a ) a žloutence žloutence novorozencenovorozence ( (icterus gravis neonatorumicterus gravis neonatorum))

• U každé těhotné ženy se během I. trimestru vyšetřuje U každé těhotné ženy se během I. trimestru vyšetřuje krev na Rh faktor a přítomnost protilátek, u Rh- žen krev na Rh faktor a přítomnost protilátek, u Rh- žen se provádí vyšetření na protilátky i ve II. a III. se provádí vyšetření na protilátky i ve II. a III. trimestrutrimestru

NASHLEDANOU