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上 海 市 医 学 会 医 学 病 毒 学
分 会 及 上 海 市 微 生 物 学 会
20 1 5 年 年 会
上海市医学会医学病毒学分会 主办
上海市微生物学会 协办
复旦大学附属华山医院感染科
复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室
承办
2015年7月4日
1
2015年 7月 4日上海医学会病毒学年会日程
Session 1 开 幕 式 主持人：张继明
时 间 内 容
8:00-8:20
复旦大学附属华山医 副院长 毛颖教授致辞
上海市微生物学会 理事长 戚中田教授致辞
中华医学会医学病毒学分会 主任委员 袁正宏教授致辞
中国科学院院士 闻玉梅教授致辞
主题报告
Session 2 （报告时间 25分钟，讨论时间 5分钟） 主持人：缪晓辉 张欣欣
8:20-8:50 袁正宏 第 15届国际肝炎肝病会议快讯 复旦大学上海医学院
8:50-9:20 戚中田 埃博拉病毒---病原学与检测 第二军医大学
9:20-9:50 姜世勃 抗 MERS 病毒疫苗和药物的研发 复旦大学上海医学院
9:50-10:20 茶歇（合影）
Session 3 （报告时间 15分钟，讨论时间 5分钟） 主持人： 郭晓奎 谢幼华
10:20-10:40 蔡启良 EB病毒持续性感染的机制 复旦大学上海医学院
10:40-11:00 陈 则 新生流感病毒暨疫苗研究 上海生物制品研究所
11:00-11:20 瞿涤 细菌生物膜形成的机制 复旦大学上海医学院
11:20-11:40 钟劲Hepatitis C virus cell culture model – aremaining challenge after ten years
中科院巴斯德研究所
Session 4 卫星报告（报告时间 15分钟，讨论时间 5分钟）
报告 1 主持人：张继明
11:40-12:00 徐文胜2015APASL指南更新要点-APASL会议速递
长征医院
报告 2 主持人：陆志檬
12:00-12:20 黄玉仙NAs经治患者走向”停药”梦想-慢性乙肝经治的研究进展
复旦大学附属华山医院
12:20-13:00 午餐（医院教授食堂 8号楼二楼）
报告 3 主持人：张欣欣
2
13:10-13:30 许洁 抗 HBc-IgM检测在诊断急性乙肝中的意义 上海交通大学附属第三人
民医院
论文报告
Session 5 （报告时间 7分钟，讨论时间 3分钟） 主持人： 潘卫 王讯
时 间 报告人 内 容 工作单位
13:30-13:40 张咏梅乙肝病毒核心蛋白 P5T变异增强 HBV病毒复制的作用研究
复旦大学附属华山医院
13:40-13:50 韩悦二代测序方法分析 HBV 准种与拉米夫定治疗疗效
的相关性上海交大附属瑞金医院
13:50-14:00 陈瑞栋HBx 蛋白拮抗 APOBEC3G 对 HBV 抑制作用的
机制研究复旦大学上海医学院
14:00-14:10 宋志刚新型重组柯萨奇 A6病毒的发现鉴定及流行病学研究
上海市公共卫生临床中心
14:10-14:20 丁翠玲 snoRNA113-1抑制肝细胞肿瘤发生 第二军医大学
14:20-14:30 虞莹Calpain在病毒性心肌炎心脏炎症损伤中的作用及其可能机制
复旦大学附属中山医院
14:30-14:50 茶 歇
Session 6 （报告时间 7分钟，讨论时间 3分钟） 主持人： 童舒平 任浩
14:50-15:00 王洪斌Reciprocal Regulation between Enterovirus71 and the NLRP3 Inflammasome 巴斯德所
15:00-15:10 卢丽娟2006-2011年上海地区住院腹泻儿童腺病毒流行病学特点和其基因型别研究
复旦大学附属儿科医院
15:10-15:20 李大鹏
Immunization with a single recombinanthepatitis C virus envelope protein elicitspan-genotypic neutralizing antibodies inmacaques and confers protection against viralchallenge in mice
巴斯德所
15:20-15:30 李晓菲The mechanisms of Hyporesponsiveness toHepatitis B vaccine in B10.S Mice 复旦大学上海医学院
15:30-15:40 袁小凌替比夫定在正常小鼠体内免疫调节机制研
究
上海交大附属第三人民医
院
15:50-16:00 杨玉颖上海市 2011～2012 年风疹病毒基因特征分
析上海市疾病预防控制中心
Session 7 优秀论文评选及颁奖 主持人：主委及全体副主委
16:00-16:15 宣布论文获奖名单并颁发获奖证书
16:15-16:25 总 结 谢幼华
3
目录 （排序不分先后）
1.P gene-Derived Proteins of Newcastle Disease Virus Down-Regulate Phosphorylated STAT1 To Block IFN-I
Signaling-----Xusheng Qiu, Xiufan Liu, Chan Ding P6
2.H7N9流感病毒分子致病机理研究 刘芹防，周斌，马文君 P7
3. 二代测序方法分析HBV准种与拉米夫定治疗疗效的相关性 韩悦,龚玲, 张欣欣 P8
4. 聚乙二醇干扰素延长治疗e抗原阳性慢性乙型肝炎患者持续应答的预测指标 陈洁,于德敏,张欣欣 P9
5. 慢性乙型肝炎病毒感染状态并不影响汉族人群外周循环中人5型腺病毒中和抗体的滴度
黄道.于德敏,张欣欣 P10
6. 重组乙型肝炎病毒包膜蛋白糖基化突变株腺病毒的建立 朱明玉,于德敏,张欣欣 P11
7. Immunization with a single recombinant hepatitis C virus envelope protein elicits pan-genotypic neutralizing
antibodies in macaques and confers protection against viral challenge in mice.
Dapeng Li, Jin Zhong,Zhong Huang P12
8. Reciprocal Regulation between Enterovirus 71 and the NLRP3 Inflammasome. Hongbin Wang P13
9. 2006-2011年上海地区住院腹泻儿童腺病毒流行病学特点及其基因型别研 卢丽娟,钟华清,徐锦 P14
10. 荧光恒温扩增技术检测脑脊液中单纯疱疹病毒 1型 RNA方法的建立 曹凌峰,苏犁云,徐锦 P15
11. 核仁小分子 RNA SNORD113-1 抑制肝细胞癌肿瘤发生 许刚,杨芳,戚中田 P16
11. LncRNA-GAS5抑制丙型肝炎病毒感染的机制研究 钱汐晶,朱勇喆,戚中田 P17
12. 肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性和基因组学研究 高晶,秦金红,郭晓奎 P18
13. 柯萨奇病毒 B3对 wisp-2表达的影响 刘桂剑,葛均波,陈瑞珍 P19
15. miRNA-125b在自然史不同时期慢性乙型肝炎患者血清中的表达水平及与 HBV复制水平的相关性研究
李发红,周璞,张继明 P20
16. 恩替卡韦部分应答的 HBeAg阳性慢性乙型肝炎体外及临床观察 李新艳,李发红,张继明 P21
17. A comparison of telbivudine and entecavir in the treatment of HBeAg-positive patients: a prospective cohort
study in China. Yao Zhang, Xun Qi,Jiming Zhang. P22
18. 上海市 2011～2012年风疹病毒基因特征分析 杨玉颖,李崇山,孙晓冬 P23
19. PhoP-PhoQ 双组分信号转导系统调控志贺菌生物学功能的研究 林志伟,蔡霞,瞿涤 P24
20. 表皮葡萄球菌磷酸盐转运相关蛋白 PhoU生物学功能的研究 王小飞,韩海燕,瞿涤 P25
21. Constitutive activation of IL-13/STAT6 contributes to KSHV-associated PEL cell proliferation and survival
王冲,蔡启良 P26
22. 铜绿假单胞菌噬菌体D204的生物学特性和基因组学研究徐彬,郭晓奎,秦金红 P27
4
23.Inoculation of quadrivalent vaccine in school-aged children
is an effective way to prevent Influenza in Shanghai. Baihui Zhao, Mei Zeng, Xi Zhang P28
24. Calpain在柯萨奇病毒 B3感染导致心肌纤维化中的作用及机制研究 李明辉,虞勇,陈瑞珍 P29
25. Immunization with a single recombinant hepatitis C virus envelope protein elicits pan-genotypic neutralizing
antibodies in macaques and confers protection against viral challenge in mice.
Dapeng Li, Jin Zhong, Zhong Huang. P30
26.2012-2013年上海地区致手足口病肠道病毒型别的研究 徐梦华,苏犁云,徐锦 P31
27. Hepatitis B core protein sensitizes hepatocytes to tumor necrosis factor-induced apoptosis by suppression of
the phosphorylation of mitogen-activated protein kinase kinase. Baosen Jia, Ke Lan, Qiang Deng. P32
28. Overt and occult hepatitis B virus infection among pregnant women: proportions and phylogenetic analysis
Yingjie Zheng, Dechuan Kong, Dongming Zheng. P33
29.Molecular characterization of overt and occult hepatitis B virus infection among pregnant women in Anqing
ZHENG Dongming, BU Yichang, ZHENG Yingjie. P34
30.浦东新区腹泻患者气单胞菌流行特征及耐药性和毒力基因研究 王闻卿,朱林英,郑英杰. P35
31.Epidemiological Characterizations of Injury Cases in Tangqiao Community Health Service Centers in
Shanghai. Bian Hong-yi, Gao Hong-ji, Yingjie Zheng. P36
32.2013年浦东新区塘桥社区居民减寿人年数分析 卞宏毅,郑英杰. P37
33. 2013年上海市浦东新区塘桥社区居民寿命表及去死因寿命表分析 卞宏毅,郑英杰. P38
34. 巨细胞病毒母婴传播的研究进展 罗业飞, 熊海燕，郑英杰. P39
35. HBx蛋白拮抗 APOBEC3G对 HBV抑制作用的机制研究 陈瑞栋,赵雪,谢幼华 P40
36. 应用 SILAC和 LC-MS/MS技术定量分析 HBV对 Huh-7外体蛋白组分的影响陈瑞栋，赵雪，谢幼华 P41
37. 肠道病毒交叉反应的机制及其意义探讨 丁莹莹,高彩霞,潘卫 P42
38. 新型免疫球蛋白结合分子 AL插入突变体的体外分子进化研究 冯娇娇,丁莹莹,潘卫 P43
39. HIV-1 Tat：艾滋病治疗性疫苗的希望与挑战 潘卫,廖文婷,王锦红 P45
40. 融合抑制剂 Enfuvirtide使针对 HIV-1 gp41 NHR的非中和抗体变为中和抗体：提示了一种新型的 HIV
治疗性疫苗策略 王茜,毕稳稳,,陆路,姜世勃 P46
41. Characterization of co-occurring mutation in a LMV-resistant HBV isolate that promote viral replication
Yongmei Zhang, Haitao Guo, Jiming Zhang P47
42. 慢性乙型肝炎病毒基因型 C2的复制能力弱于基因型 B2主要与较低的 ENII/CP活性相关
秦艳丽,童舒平,张继明 P48
43.CVB3-VP1通过上调 miRNA21抑制了 PDCD4的表达 虞勇,邹云增,陈瑞珍 P49
5
44. 高迁移率族蛋白 B1通过晚期糖基化终末受体促进科萨奇病毒 B3所致病毒性心肌炎心脏炎症损伤
虞莹,虞勇,陈瑞珍 P50
45.The mechanisms of Hyporesponsiveness to Hepatitis B vaccine in B10.S Mice
Xiaofei Li, Jing Xu,Di Qu P51
46.新型重组 CA6病毒的发现鉴定和流行病学特征的研究 宋志刚,袁正宏,胡芸文 P53
47.miR-548j通过靶向 ZBTB11下调 CHB患者 I型 IFN产生 鱼康康,李宁 P54
48. Serum microRNA-29 levels correlate with disease progression in patients with chronic hepatitis B virus
infection Chong Huang,Ning Li P55
6
1. P gene-Derived Proteins of Newcastle Disease Virus Down-Regulate Phosphorylated
STAT1 To Block IFN-I Signaling
Xusheng Qiu1, Qiang Fu1,2, Daxin Peng2, Shengqing Yu1, Yuan Zhan1, Chunchun Meng1, Cuiping Song1, YingjieSun1, Lei Tan1, Shunlin Hu2, Xiaoquan Wang2, Xiaowen Liu2, Xiufan Liu2 and Chan Ding1
1Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, P. R.China；2key Laboratory of Animal Infectious Diseases, Yangzhou University, Yangzhou 225009，P. R. China通讯作者： Chan Ding [email protected]； Xiufan Liu [email protected]
Background
The signal transducer and activator of transcription (STAT) family proteins are critical mediators ofinterferon (IFN) signaling, which regulates both innate and antiviral immunity. To bypass the IFNantiviral system, paramyxoviruses have developed a ability to efficiently inactivate of STATproteins. For Newcastle disease virus, V protein, has been reconsidered to be an effector proteindegrading STAT1. However, detailed mechanism has never been explored.
Methods and Results
To figure out the detailed mechanism of IFN antagonism of NDV, the expression level and state ofSTAT1 protein was deeply analyzed after infection of NDV or transfection of P/V/Wprotein-expressing plasmids. Experiments were repeated in A549, Vero and HeLa cells with threeNDV strains, including LaSota (with a genomic RNA of 15,186 nt), ZJ1 (15,192 nt) and 9a5b(15,198 nt). To confirmed our findings, the reverse genetics system was used to introduce a stopcodon exactly following the editing site of the V gene of virulent NDV strain ZJ1, and consequentlya V-deficient genotype VII NDV strain was recovered. Our results demonstrated thatIFN-I-stimulated phosphorylation of STAT1 is the prerequisite for V protein-involved STAT1degradation. IFN-α induced phosphorylated STAT1 rather than the unphosphorylated proteins weretargeted for ubiquitin-mediated proteasome degradation in NDV-infected cells. The V-deficientrecombinant NDV lost the ability to degrade phospho-STAT1 and induced higher expression levelof IFN-responsive genes in infected cells, suggesting that the C-terminal domain of V protein wascritical element for effective function of IFN antagonsim. It was further demonstrated that not onlyV protein but also P and W protein as well targeted phosphorylated STAT1 for degradation,suggesting the function of P/V/W protein of NDV need to be reconsidered.
Conclusion
In summary, we have shown in this study that IFN-α induced phosphorylated STAT1 rather than theunphosphorylated proteins were targeted for ubiquitin-mediated proteasome degradation inNDV-infected cells; therefore, we speculate that NDV antagonized IFN signaling more elaborateand economical. The C-terminal domain of V protein was critical for effective degradation ofphospho-STAT1, and further studies are needed to identify compensatory function of P and Wprotein. The mechanisms described here for Newcastle disease added to the detailed strategies forparamyxoviruses to evade IFN.
7
2. H7N9流感病毒分子致病机理研究
刘芹防1，3* 周斌2，马文君3，David E. Wentworth2, Juergen A. Richt3
1中国农业科学院上海兽医研究所，上海动物流行病学中心，上海，中国
2Virology, J. Craig Venter Institute, Rockville, MD 20850, USA
3College of Veterinary Medicine, Kansas State University, KS, 66506, USA
通讯作者：刘芹防 [email protected]
目的：H7N9病毒已经造成超过300人感染，严重威胁着公共卫生安全。虽然目前尚没有人传人的情况存在，
但是由于流感病毒的变异速度快，此病毒株仍具有引起大流行潜力。序列分析结果显示，此次感染人的
H7N9病毒是完全来自于禽类，不含有其他哺乳动物流感病毒的基因。关于此病毒可以直接跨种属传播的
机制尚不清楚，而且此病毒是否会继续感染流感病毒的中间宿主（猪）并进一步适应哺乳动物尚不清楚。
方法：利用反向遗传技术拯救了A /Anhui/ 1/2013（H7N9，含有HA-226L，PB2-627K）野生毒株与两个突
变毒株（rAnhui -HA-L226Q，含有HA-226Q）与（rAnhui-PB2-K627E，含有PB2-627E）。利用猪动物模型
对这个三株病毒的致病性，传播特性与对中间宿主的适应性进行研究。
结果：A /Anhui/ 1/2013（H7N9）野生毒株与两个突变毒株（rAnhui -HA-226Q）与（rAnhui-PB2-627E）都
可以感染猪，并在其肺脏中复制，引起明显的肺脏病变，但是通过鼻腔排毒能力有限。野生H7N9毒株可
以通过接触传播给同居猪，但是rAnhui-HA-226Q不能通过接触传播。对猪肺脏中的病毒进行基因组测序，
结果显示H7N9病毒已经发生了适应哺乳动物的点突变，如PB2-T271A, PB2-D701N, HA-V195I, 与
PB2-E627K等。
结论：HA-226L位点在H7N9致病性与传播特性上起着重要的作用；H7N9病毒可以感染猪并引起肺脏病变，
而且病毒迅速发生适应哺乳动物的突变，说明此病毒存在感染中间宿主猪并进一步适应哺乳动物的可能。
8
3. 二代测序方法分析 HBV准种与拉米夫定治疗疗效的相关性
韩悦 1,2,龚玲 1, 张欣欣 1,2
1.上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科临床病毒研究室;
2. 上海交通大学医学院附属瑞金医院中法生命科学与基因研究中心
*通讯作者: 张欣欣 [email protected]
目的:本课题组早期通过分子克隆结合测序的方法研究发现乙型肝炎病毒逆转录酶区的异质性可以作
为核苷类药物抗病毒疗效的预测指标 1, 2，并且建立了一套基于二代测序技术对乙肝病毒准种特性进行生物
学分析的技术平台 3。本研究旨在深度分析乙肝病毒准种与核苷类药物疗效之间的关系。
方法:对 35例随访至少 48周的拉米夫定治疗患者的外周血乙肝病毒准种进行深度测序。其中 16例患
者应答，19例部分应答。抽样时间点包括治疗基线和治疗 4周。应用前期发表的技术方法 3对逆转录酶区
分三段，每段约 400碱基对，进行深度测序。对上述结果采用与本课题组早期一致的生物信息学方法 1,2
对各应答小组基线和 4周以及治疗早期的进化模式进行分析比较。
结果: 基线标本中，乙肝病毒逆转录酶区前两段准种深度测序复杂度值在不同应答组之间都存在差异
(P < 0.05)，各段准种深度测序异质度值在不同应答组之间都存在差异(P<0.05)；4周标本中，逆转录酶区
第三段复杂度值在不同应答组之间都存在差异 (P < 0.05)，第一段及第三段异质度值在不同应答组之间都
存在差异(P < 0.05)。
结论: 治疗早期乙肝病毒准种深度测序分析显示其在拉米夫定抗病毒治疗不同疗效患者之间存在显
著差异。为乙肝病毒准种研究的临床应用奠定了基础。
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4. 聚乙二醇干扰素延长治疗 e抗原阳性慢性乙型肝炎患者持续应答的预测指标
陈洁 于德敏 张欣欣
上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科临床病毒研究室
1.上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科临床病毒研究室;
2. 上海交通大学医学院附属瑞金医院中法生命科学与基因研究中心
通讯作者: 张欣欣 [email protected]
研究背景：慢性乙型肝炎抗病毒治疗的疗效预测及预防停药复发是近年国内外研究热点，目前对聚乙二醇
干扰素抗病毒治疗48周应答不佳的慢性乙型肝炎患者，其优化治疗方案及疗效预测指标也尚不明确。
研究目的：分析在聚乙二醇干扰素延长抗病毒治疗过程中患者血清HBsAg、HBeAg及乙肝病毒DNA（HBV
DNA）的变化情况，以探寻更好的抗病毒治疗持续应答的预测模型，为48周聚乙二醇干扰素治疗应答不佳
的慢性乙型肝炎患者的优化治疗方案提供依据。
研究方法：本研究纳入 81例聚乙二醇干扰素治疗 48周应答不佳的 HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者，延
长治疗至 96周，其中 58例患者继续采用聚乙二醇干扰素单药治疗，23例患者加用核苷（酸）类似物联合
治疗。在治疗基线、24周、48周、72周、96周及停药随访 72周各时间点检测血清 HBsAg、HBeAg及
HBV DNA水平。
结果：1、在聚乙二醇干扰素延长治疗的 81例患者中有 26例（32.1%）达到持续病毒学应答（停药随访 72
周患者血清 HBV DNA载量低于检测下限 95 IU/ml），而对于聚乙二醇干扰素单药治疗或核苷（酸）类似
物联合治疗的患者间持续病毒学应答率无统计学差异；2、治疗 48周血清 HBsAg小于 1800 IU/ml显示出
对持续病毒学应答的预测价值，此时持续应答的受试者曲线下面积（AUC）为 0.727，联合 72周血清 HBsAg
小于 1500 IU/ml及 HBeAg阴转其持续应答的 AUC值可提高至 0.753。
结论: 对聚乙二醇干扰素治疗 48周应答不佳的慢性乙型肝炎患者，延长聚乙二醇干扰素单药治疗或加用核
苷（酸）类似物联合治疗，可提高这部分患者的持续病毒学应答率；监测治疗 48周血清 HBsAg及 72周
血清 HBsAg和 HBeAg水平能有效预测这部分患者的持续病毒学应答情况。
10
5.慢性乙型肝炎病毒感染状态并不影响汉族人群外周循环中人 5型腺病毒中和抗体的滴度
黄道 1，Marie Hennequi2，Alexei Elvachev3，Thierry Menguy2，Nathalie Silvestre2，于德敏 1，韩悦 1，Geneviève
Inchauspé3，张欣欣 1，朱韧 4
1上海交通大学医学院附属瑞金医院传染科，传染病与呼吸病研究所
2Transgene S.A. Boulevard Gonthier d'Andernach, Parc d'innovation CS80166, 67405 Illkirch-Graffenstaden
Cedex - France
3Transgene S.A. Department of Infectious Diseases, Centre d'Infectiologie-Bâtiment Domilyon, 69007 Lyon,
France
4上海创世杰生物科技有限公司
通讯作者：朱韧 [email protected]
目的：在免疫治疗研究中，腺病毒作为良好的载体工具，能够诱导针对病原体特异性的免疫反应，从而得
到广泛的应用。在某些以腺病毒为载体的疫苗研究中，发现接种者由于体内存有该型腺病毒的中和抗体，
而影响特异的免疫治疗效果。评价待免疫人群中的人 5型腺病毒中和抗体滴度，有助于为将来进行免疫治
疗研发提供指导。
方法：我们选取了上海地区健康人群中 200份成人血浆和慢性乙型肝炎感染人群中的 204份成人血清作为
研究对象，通过化学发光法分别测定人 5型腺病毒中和抗体。
结果：我们发现，在健康人群和慢性乙型肝炎感染人群中，人 5型腺病毒中和抗体滴度没有显著差异。在
全部的研究对象中，人 5型腺病毒中和抗体阴性率与其他类似研究相比，相对较高（<1:20，32.2%）。在
阳性受试者中，抗体滴度较高者（>1:1000）所占的比例很低（4%）。人口学数据（性别、年龄）及是否
感染慢性乙型肝炎对人 5型腺病毒中和抗体水平没有影响。慢性乙型肝炎感染患者的临床血清学检测指标
（谷氨酸氨基转氨酶、门冬氨酸氨基转移酶、乙型肝炎病毒载量）与人 5型腺病毒中和抗体数值在统计学
上没有显著的相关性。
结论：本研究的结果为今后研发人 5型腺病毒为载体的乙型肝炎特异性免疫治疗方案提供了流行病学资料。
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6.重组乙型肝炎病毒包膜蛋白糖基化突变株腺病毒的建立朱明玉 于德敏 陈洁 张欣欣
上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科，上海 200025
1.上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科临床病毒研究室;
2. 上海交通大学医学院附属瑞金医院中法生命科学与基因研究中心
通讯作者: 张欣欣 [email protected]
目的：采用 AdMax 系统在 HEK293细胞中获取表达有 HBV HBsAg 131位氨基酸糖基化突变的 S蛋白的
重组腺病毒，经扩增、纯化、检测后留待后续功能学研究。
方法：以表达包膜蛋白（PreS1-PreS2-S）的 0.8倍 HBV基因组（基因 C型）为模板，用引物 S1和 S2进
行 PCR 扩增得到 2543bp 的 HBsAg 片段，经凝胶电泳后切胶回收。用 AgeI-HF 和 Afl II 酶切
pAdeno-EF1-BGH-MCMV-EGFP-3FLAG载体，切胶回收目的片段。使用无缝克隆试剂盒将 HBsAg片段构
建进载体得到质粒 pAdeno-HBsWT，测序鉴定成功。
在 pAdeno-HBsWT基础上使用引物 131-F和 131-R进行 T131N M133T定点突变, 构建 HBsAg 131位
氨基酸糖基化突变的质粒 pAdeno-HBsN131，转化 TOP10细胞，挑克隆，测序鉴定成功，使用无内毒素大
抽试剂盒（invitrogen），抽取质粒。
将腺病毒骨架质粒分别与目的穿梭质粒 pAdeno-HBsWT及 pAdeno-HBsN131共转染进HEK293细胞中
重组获得病毒，可通过报告基因 eGFP的表达观察转染效率及腺病毒包装情况，并大量扩增后纯化备用。
结果：两种 HBV 重组腺病毒（pAdeno-HBsWT和 pAdeno-HBsN131）均构建成功。HBV 重组腺病毒转导
Huh7 细胞后，细胞上清中可检测到 HBsAg （微粒子化学发光检测技术，Abbott ARCHITEC T I2000）的
表达。
结论：应用 AdMax包装系统可快速有效地构建各种 HBV重组腺病毒，可用于 HBV野毒株和变异株生物
学特性的研究。
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7. Immunization with a single recombinant hepatitis C virus envelope protein elicits pan-genotypic neutralizing
antibodies in macaques and confers protection against viral challenge in mice
Dapeng Li 1, Markus von Schaewen 2, Xuesong Wang 3, Alexander Ploss 2*, Jin Zhong 3*, Zhong Huang 1*
1 Vaccine Research Center, Key Laboratory of Molecular Virology & Immunology, Institut Pasteur of Shanghai, Shanghai
Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China.
2 Department of Molecular Biology, Princeton University, Princeton, New Jersey 08544, USA.
3 Unit of Viral Hepatitis, Key Laboratory of Molecular Virology & Immunology, Institut Pasteur of Shanghai, Shanghai
Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China.
Aim: No vaccine is available for hepatitis C virus (HCV) thus far, which constitutes a global public health issue. Despite
their effectiveness, direct-acting antiviral (DAA) drugs are unaffordable for the majority of HCV-infected individuals.
Therefore, the development of prophylactic HCV vaccines with high efficacy and low cost remains a high priority for the
global control of HCV infection. HCV has a highly heterogeneous RNA genome and can be classified into seven
genotypes. Owing to high genetic variation among genotypes, inducing antibodies capable of neutralizing most, if not all,
of the HCV genotypes by experimental vaccination has been challenging. Our aim is to develop an efficacious,
economical, and broadly protective HCV vaccine to prevent HCV infection.
Methods:We constructed and expressed a soluble form of E2 protein (sE2) derived from HCV strain Con1 was produced
at high levels in stably transfected Drosophila S2 cells, and determined the immunogenicity and capacity of inducing
neutralizing antibodies (NAbs) of sE2 in mice, rabbits and rhesus macaques, as well as in vivo protection in a genetically
humanized mouse model.
Results:The S2 cell derived sE2 protein interacts with the HCV entry factors CD81 and scavenger receptor type B class I
(SR-B1), blocks cell culture-derived HCV (HCVcc) infection, and reacts with known monoclonal broadly NAbs. By
immunization, sE2 induced antibodies in mice, rabbits and rhesus macaques (n=20; four groups, 5 macaques in each
group), neutralizing HCV of all seven genotypes. Additionally, sE2-immunized macaques developed systemic and
intra-hepatic memory T cells specific for E2. Importantly, in a genetically humanized mouse model, active immunization
with sE2 efficiently protected against HCVcc challenge, resulting in drastically reduced bioluminescence signals (n=6 per
group; p<0.0001).
Conclusion: These data above demonstrate that sE2 is a promising HCV vaccine candidate that warrants further
pre-clinical and clinical development.
13
8. Reciprocal Regulation between Enterovirus 71 and the NLRP3 Inflammasome
Hongbin Wang
Institut Pasteur of Shanghai, Chinese Academy of Sciences
Life Science Research Building, 320 Yueyang Road, Xuhui District, 200031
Email:[email protected]
TEL: +86-150 2691 1433
OBJECTIVE:
Enterovirus 71 (EV71) is the major etiological agent of hand, foot, and mouth disease (HFMD) which affects millions of
children and claims hundreds of lives in China each year. This study aims to explore the interaction between EV71 and
the NLRP3 inflammasome, an important immune defense protein complex.
METHODS:
WT and NLRP3 inflammasome deficient C57BL/6 infant mice were infected with EV71. Disease progression and tissue
proinflammatory gene expression were analyzed. Various myeloid cells were infected with EV71; NLRP3 inflammasome
activation and associated mechanism were analyzed. The regulation of EV71 to NLRP3 was also studied.
RESULTS:
After EV71 infection, NLRP3, ASC and Caspase-1 deficient mice exhibited more severe disease than WT. The mice
deficient for NLRP3 inflammasome showed earlier occurrence of disease, stronger paralysis, as well as delayed recovery
than WT animals. EV71 replication in myeloid cells results in the activation of NLRP3 inflammasome and secretion of
IL-1β. Conversely, EV71 counteracts inflammasome activation through cleavage of NLRP3 by viral proteases 2A and 3C,
which cleave NLRP3 protein at the G493-L494 or Q225-G226 junction, respectively. Moreover, EV71 3C interacts with
NLRP3 and inhibits IL-1β secretion when expressed in mammalian cells..
CONCLUSION:
The NLRP3 inflammasome plays a protective role against EV71 infection in vivo.
EV71 replication in myeloid cells induces NLRP3 inflammasome activation.
EV71 antagonizes inflammasome activation through cleavage of NLRP3 by 2A and 3C proteases.
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9. 2006-2011年上海地区住院腹泻儿童腺病毒流行病学特点及其基因型别研究
卢丽娟 钟华清 苏犁云 曹凌峰 徐梦华 董妞妞 董左权 徐锦
复旦大学附属儿科医院临床检验中心 上海 201102
通讯作者： 徐锦 E-mail: [email protected]
地址： 上海市闵行区万源路 399号 7号楼 1楼病毒室
目的 分析上海地区住院腹泻婴幼儿腺病毒的基因型别、流行季节及年龄分布，以了解本地区腺病毒分子
流行病学的动态变化特征。
方法 收集复旦大学附属儿科医院 2006年 1月至 2011年 12月期间的住院腹泻患儿（年龄≤5岁）标本 674
份，采用 RT-PCR的方法检测粪便标本中的星状病毒、轮状病毒、诺如病毒和腺病毒，采用基因测序和进
化树分析的方法确定腺病毒的基因型。
结果 2006-2011年腺病毒性腹泻的流行季节主要在秋冬季，且以 11月份检出率最高（18.8%）。腺病毒性
腹泻儿童年龄集中在 0~12月龄。2006-2011年腺病毒的总检出率为 4.7%（32/674），2006-2011年腺病毒
分别检出 13.4%（11/82）、4.6%（8/174）、3.2%（4/124）、4.1%（3/74）、2.0%（2/100）及 3.3%（4/120）。
腺病毒感染的腹泻儿童中，腺病毒多以与其他腹泻病毒混合感染的形式存在，尤以与轮状病毒混合感染为
主。腺病毒阳性标本的基因型别以 Ad-41型为主，占 50.0%（16/32），其次为 Ad-3型（25.0%，8/32）。
此外，还可见其他多种型别的少量流行。
结论 上海地区住院腹泻婴幼儿中腺病毒流行型别丰富多样，且其在院内感染性腹泻中起一定作用。腺病
毒感染多以与其他腹泻病毒混合感染的形式存在尤以与轮状病毒混合感染为主，提示腺病毒可能更多以与
其他病毒共感染的方式在儿童腹泻中发挥作用。
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10. 荧光恒温扩增技术检测脑脊液中单纯疱疹病毒 1型 RNA方法的建立曹凌峰 苏犁云 董妞妞 徐锦*
复旦大学附属儿科医院检验中心病毒室 上海 201102
联系方式：万源路 399号 7号楼 1楼病毒室 201102
目的 利用荧光恒温扩增（SAT）技术建立一种快速可靠的单纯疱疹病毒 1型(HSV1)的检测方法。
方法 根据 Genbank上获取 HSV-1 开放读码框 US5 区域的 RNA 序列设计扩增引物及优化探针，使用
M-MLV反转录酶及 T7 RNA多聚酶对 HSV-1 RNA 进行核酸扩增，同时利用荧光定量 PCR仪进行实时的
荧光信号收集和检测。收集复旦大学附属儿科医院 2012年 7月~2014年 12月儿童病毒性脑炎或疑似患儿
标本 212例(脑脊液 150例，血浆 62例)，以巢式 PCR+测序为参比方法, 对研究数据进行 Kappa一致性分
析。
结果 SAT技术检测 HSV1 RNA的灵敏度为 100 copies/μl，同时检测人巨细胞病毒、EB病毒、结核
杆菌、人乳头瘤病毒、解脲脲原体、肺炎支原体、沙眼衣原体、柯萨奇病毒 A16型、流感病
毒、肠道病毒 71型、埃克病毒、副流感病毒等 RNA结果均为阴性。SAT-HSV1在 212例临床标
本共检测出 18例HSV-1阳性标本，巢式 PCR检出 16例阳性，经测序证实仍有 12例为阳性结果。SAT-HSV1
与巢式 PCR+测序的 Kappa值为 0.785，其敏感性为 100.0%、特异性 97.0%。
结论 本研究建立的 RNA恒温扩增技术检测脑脊液或血中单纯疱疹病毒 1型的方法具有敏感性高、特异性
强、准确、快速可靠的优点，适用于临床对单纯疱疹性脑炎(HSE)感染早期的快速诊断。
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11. Small nucleolar RNA 113–1 suppresses tumorigenesis in hepatocellular carcinoma
核仁小分子 RNA SNORD113-1 抑制肝细胞癌肿瘤发生
许刚 杨芳 丁翠玲 赵平 任浩 王文 戚中田
单位：上海市第二军医大学，热卫系，微生物教研室
目的：多项研究表明核仁小分子 RNAs（Small nucleolar RNAs: snoRNAs）参与肿瘤的发生发展。而核仁小
分子 RNA SNORD113-1 在肝细胞癌（HCC）肿瘤发生发展中的作用以及其作用机制仍不清楚。本研究旨
在探索 SNORD113-1在肝细胞癌肿瘤发生发展中的作用及其机制,探讨 SNORD113-1作为HCC诊治的靶标
分子，为新的生物标志物或分子靶标用于肝细胞癌的诊治提供实验基础与理论依据。
方法：采用实时定量 PCR技术测定 112例 HCC患者肿瘤组织以及与之配对的非肿瘤组织中 SNORD113-1
的表达水平。利用 HepG2、Huh7细胞和异种移植的裸鼠模型研究 SNORD113-1在 HCC肿瘤形成中的作用。
亚硫酸氢钠测序鉴定 SNORD113-1 基因启动子区域 CpG 的甲基化。采用 cancer pathway reporter 研究
SNORD113-1抑制肿瘤形成的机制。
结果：与非肿瘤组织相比，HCC肿瘤组织中 SNORD113-1的表达显著下调，而其下调水平与患者的不良
预后密切相关。并且肿瘤组织中 SNORD113-1基因启动子区 CpG甲基化水平明显高于邻近的非肿瘤组织。
在 HepG2、Huh7细胞和异种移植裸鼠模型中发现 SNORD113-1能够抑制肿瘤的生长。此外，SNORD113-1
可抑制MAPK/ERK以及 TGF-β通路中 ERK1/2和 SMAD2/3的磷酸化。
结论：SNORD113-1可抑制 HCC的肿瘤发生，有望成为 HCC诊断和治疗的分子靶标。
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12. LncRNA-GAS5抑制丙型肝炎病毒感染的机制研究
钱汐晶，朱勇喆，任浩，赵平，戚中田
单位：上海市第二军医大学，热卫系，微生物教研室
联系方式：[email protected]
目的：研究长链非编码 RNA（Long non-coding RNA）GAS5的抗丙型肝炎病毒（HCV）作用及其作用机
制。
方法：通过高通量 RNA测序分析 Huh7细胞在 HCV感染前后 lncRNA的变化，发现 lncRNA-GAS5在 HCV
感染后表达明显上调，且与病毒感染量呈正相关。通过 lncRNA-GAS5进行瞬时过表达或干扰，发现上调
GAS5水平能够有效抑制 HCV的感染，降低感染 HCV后的病毒 RNA水平；而其下调则促进感染克隆的
增加并具有与对照相比较高的病毒 RNA水平。对其作用抗病毒机制进行深入研究，我们利用单周期 HCV
假病毒颗粒（HCVpp）对 Huh7细胞的入侵并检测 GAS5对其入侵的作用；通过转染病毒 RNA入靶细胞
或 HCV复制子细胞实验，及转染后细胞上清病毒 RNA的抽提，检测 GAS5对 HCV复制、释放的抑制效
果；利用蛋白免疫共沉淀（co-IP）技术分析与 GAS5相互作用的蛋白，并从中挑选出与 HCV感染相关的
蛋白，综合评估 GAS5抑制 HCV感染的靶点和所涉及到的相关机制。
结果：在 Huh7细胞中过表达 GAS5，可显著抑制细胞来源的 HCV （HCVcc）感染靶细胞，下调 GAS5
水平则能促进 HCV的感染。GAS5对不同基因型 HCVpp无明显抑制效果，提示其并非作用于病毒入侵环
节。流式细胞术和免疫印迹结果显示，过表达 GAS5前后靶细胞表面的 HCV受体 CD81、B族 I型清道夫
受体（SR-BI）、紧密连接分子 Claudin-1和 Occludin的表达量无明显变化；在稳定表达 GAS5的 Huh7细
胞系中转染病毒 RNA或者HCV复制子细胞中过表达GAS5能明显降低病毒的拷贝数及病毒相关蛋白的表
达。利用 co-IP技术，将与 GAS5相互作用的蛋白通过免疫沉淀的方法进行富集，通过Western-blot检测鉴
定发现，与对照组相比较，过表达 GAS5可显著拉下 HCV NS3蛋白，提示 GAS5与病毒 NS3蛋白可能存
在相互作用。
结论：LincRNA GAS5具有显著的抗丙型肝炎病毒效果，其作用机制为通过与 HCV非结构蛋白 NS3的相
互作用，干扰 NS3蛋白的活性，阻碍病毒的复制。GAS5在感染中高表达可能涉及宿主对病毒感染的对抗
反应。
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13. 肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性和基因组学研究
高晶 1 徐彬 1 秦金红 2 郭晓奎 2
（1.复旦大学附属妇产科医院，上海 200011；2.上海交通大学医学院，上海 200025）
目的 通过对耐药性肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性和基因组学进行研究，为噬菌体用于肺炎克雷伯菌
感染治疗提供基础。
方法 从不同环境中分离肺炎克雷伯菌噬菌体，利用双层平板法纯化，电镜观察其形态及大小，并分析其
对 pH和温度的稳定性。抽提噬菌体核酸进行测序及分析。
结果 分离得到了一株耐药性肺炎克雷伯菌的噬菌体，电镜确定为有尾噬菌体，头部直径约 70nm，尾长约
80nm，尾宽约 20nm。此株噬菌体在 pH 3～9及 4～50℃的环境下具有较高活性，6分钟吸附率达 90%以上，
潜伏期为 10分钟，爆发期 50分钟，裂解量为 172 pfu/cell。其基因组为环状双链 DNA，全长 47273bp, GC
含量为 48%。
结论 筛选得到了一株对 pH值及温度均稳定的耐药肺炎克雷伯菌烈性噬菌体，为建立耐药性肺炎克雷伯菌
的噬菌体库用于治疗临床多耐药菌的感染提供新的研究思路。
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14. 柯萨奇病毒 B3对 wisp-2表达的影响
刘桂剑 虞莹 虞勇 李明辉 谢烨卿 刘羽曦 刘明 于鹏 葛均波 陈瑞珍
复旦大学附属中山医院
目的：柯萨奇病毒 B组 3型(Coxsackievirus B3,CVB3)属于小 RNA病毒科肠道病毒属,是一种单正链 RNA
病毒。是引起病毒性心肌炎的常见病毒。Wnt-1 inducible signaling pathway protein-2 (WISP-2)又称 CCN5，
是 CCN 家族的成员。在心肌炎症、纤维化等方面发挥作用。但 CVB3对于 wisp-2在心脏组织和细胞上表
达的影响并未阐明。本研究旨在观察心脏组织和细胞感染 CVB3后，wisp-2的表达变化。
方法: 将 3～4周 Balb/c雄性小鼠 12只随机分为正常对照组、病毒组、每组 6只。正常对照组给予腹腔注
射不含病毒的 Eagel's培养液(EMEM);病毒组小鼠腹腔接种 CVB3。病毒注射后第七天，处死小鼠，收集心
脏组织。行 RT-PCR测定心肌组织 CVB3mRNA、wisp-2mRNA的变化。行心脏组织 HE染色，计算病理积
分。行免疫组化，观察 wisp-2蛋白的变化。培养心肌原代细胞、心肌成纤维细胞、心脏微血管内皮细胞，
感染 CVB3后，利用 RT-PCR检测 24、48、72小时，wisp-2mRNA的动态变化。
结果：腹腔注射 CVB3 后，病毒组小鼠心脏病理积分明显高于对照组（P<0.05）。病毒组心脏组织
CVB3mRNA、wisp-2mRNA显著高于对照组（p<0.05）。免疫组化提示，病毒组较对照组 wisp-2蛋白表达
增加。体外研究中，心肌原代细胞感染 CVB3后，CVB3mRNA明显升高，但 wisp-2mRNA表达无明显变
化。心肌成纤维细胞感染 CVB3后，CVB3mRNA、wisp-2mRNA表达均无明显变化。心脏微血管内皮细胞
感染 CVB3后，CVB3mRNA、wisp-2mRNA表达明显升高（p<0.05），且呈时间依赖性，在 72小时，表
达最高。
结论：CVB3感染 7天后可引起小鼠病毒性心肌炎。在病毒性心肌炎小鼠模型中，wisp表达明显增加。在
体外，CVB3可感染心肌原代细胞、心脏微血管内皮细胞，但不易感染成纤维细胞。在心脏微血管内皮细
胞中，CVB3可诱导 wisp-2表达增加。Wisp-2有可能是干预病毒性心肌炎病程的潜在靶点。
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15. miRNA-125b在自然史不同时期慢性乙型肝炎患者血清中的表达水平
及与 HBV复制水平的相关性研究
李发红 周璞 张继明*
复旦大学附属华山医院感染科上海 200040
目的 研究在自然史不同时期慢性乙型肝炎患者血清中miRNA-125b的表达水平，分析血清中miRNA-125b
与 HBV DNA复制水平的相关性。
方法 从我院肝炎门诊收集筛选出 250名在自然史不同时期的慢性乙型肝炎患者，收集血清，检测血清中
HBV DNA水平并通过 real-time PCR方法检测 miRNA-125b的浓度，分析免疫耐受期、免疫激活期、免疫
控制期和再活动期慢性乙型肝炎患者的 miRNA-125b表达水平，以及 miRNA-125b与 HBV DNA 复制水平
的相关性。进一步体外实验中，用阶梯浓度的 miRNA-125b mimic转染稳定复制 HBV的 HepG2.2.15细胞
系，分别用 Southern blot检测细胞内的 HBV DNA复制水平，用Western blot检测细胞内核心蛋白的水平。
结果 慢性乙型肝炎自然史不同时期患者血清中 miRNA-125b水平均明显高于健康对照组（P<0.001），其
中免疫耐受期慢性乙型肝炎患者血清中 miRNA-125b的平均表达水平最高，然后依次为免疫激活期、再活
动期和免疫控制期，并且免疫耐受期患者血清中 miRNA-125b的平均表达水平显著高于免疫控制期患者
（P<0.001）。慢性乙型肝炎患者血清中 miR-125b 水平与血清 HBVDNA 水平呈明显正相关（r=0.425,
P<0.0001），与血清 HBsAg水平（r=0.338, P=0.005）亦显著正相关。体外实验显示：在 HepG2.2.15细胞
系中转染 miRNA-125b mimic能显著提高 HBV复制水平，上调 HBV核心蛋白的表达，并呈现出浓度依赖
性。结论 慢性乙型肝炎患者血清中 miRNA-125b 水平高于健康人，其中免疫耐受期患者血清中
miRNA-125b的平均表达水平最高，显著高于免疫耐受期患者。慢性乙型肝炎患者血清中 miRNA-125b水
平与血清 HBV DNA水平、HBsAg水平呈显著正相关。体外实验结果提示 miRNA-125b能促进 HBV复制。
该实验结果为 HBV复制调控研究提供了新的视角。
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16. 恩替卡韦部分应答的 HBeAg阳性慢性乙型肝炎体外及临床观察李新艳 李发红 刘红艳 秦艳丽 毛日成 张继明*
复旦大学附属华山医院感染科上海 200040
目的：体外研究对恩替卡韦（ETV）出现部分病毒学应答（PVR）的 HBeAg阳性慢性乙型肝炎（CHB）
的临床分离株的药物敏感性，进而评估患者临床及病毒学应答。
方法：纳入恩替卡韦治疗的 69例 HBeAg阳性 CHB患者，其中 13例表现出对 ETV部分应答，测序分析
该 13例患者的 HBVDNA 逆转录酶（RT）区，并选择其中 3例通过转染 Huh7细胞进行体外表型耐药分
析。对 69例患者均采取延长 ETV单药治疗时间，并每隔 4-12周定期随访，比较 144周时部分应答患者及
完全应答患者的 HBeAg阴转率及 HBeAg血清学转换率的差异。
结果： 13例部分应答患者测序结果提示 RT区并未出现基因型耐药，而体外表型分析显示出现 PVR的临
床分离株在体外正常复制，并且对 ETV敏感性与野毒株并无明显差异。所有 PVR患者继续 ETV单药治疗，
通过延长治疗 HBVDNA均继续降低最终至低于监测下限。尽管如此，13例 PVR患者均未出现 HBeAg阴
转，而在完全应答的患者中，HBeAg阴转率及 HBeAg血清学转换率分别为 25.6%(P < 0.001)和 23.2% (P <
0.001)。
结论： 对 ETV出现 PVR的患者并非其 HBV对 ETV敏感性下降，继续 ETV单药治疗更为合理。
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17. A comparison of telbivudine and entecavir in the treatment of HBeAg-positive patients: aprospective cohort study in China
Running title: LdT had higher HBeAg seroconversion rate than ETV.
Yao Zhang1†, Xun Qi1,2,†, Richeng Mao1*, Jiming Zhang1,3*
复旦大学附属华山医院感染科上海 200040
ABSTRACT
There are few studies directly comparing the efficacy of telbivudine (LdT) and entecavir (ETV). Ourprospective cohort study included 196 HBeAg-positive chronic hepatitis B (CHB) patients with an medianfollow-up duration of 172 weeks, 97 treated with LdT and 99 treated with ETV, patients with suboptimalresponse can plus adefovir at 24-48 weeks according to desire, and all patients had adefovir added if viralbreakthrough developed, we aimed to evaluate the long-term efficacy of LdT and ETV. Result showed thatthe 240-week cumulative rate of undetectable HBV DNA and ALT normalization in the two groups were notsignificantly different. Furthermore, viral breakthrough developed in 14% of the LdT group and 2% of theETV group (P = 0.0017). Interestingly, the estimated probability of cumulative HBeAg seroconversion onETV and LdT group was 12% vs. 21% at 48 weeks (P = 0.0405), 15% vs. 38% at 96 weeks (P = 0.0014),24% vs. 50% at 144 weeks (P = 0.0009), 33% vs. 53% at 192 weeks (P = 0.0037), and 36% vs. 53% at 240weeks (P = 0.0049), respectively, suggesting that patients treated with LdT had HBeAg seroconversionsignificantly higher than ETV, similar results could also be found when baseline age, serum ALT levels andHBV DNA level were matched. In conclusion, prolonged LdT treatment provides a significantly higher rateof HBeAg seroconversion and there were more patients experienced viral breakthrough, both LdT and ETVgroups had similar rate of undetectable HBV DNA and ALT normalization in this study.
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18. 上海市 2011～2012年风疹病毒基因特征分析杨玉颖 1, 李崇山 1，唐伟 1 ,王建国 1, 李智 1, 孙晓冬 1
上海市疾病预防控制中心
目的 分析 2011～2012年上海市风疹病毒流行株的分子流行病学特征。
方法 选取 2011～2012年期间血清标本检测结果为麻疹 IgM阴性、风疹 IgM阳性病例相对应的咽拭子标
本进行风疹病毒（Rubella virus，RV）分离，用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription -polymerase chain
reaction，RT-PCR）对细胞培养产物鉴定后扩增病毒 E1基因，扩增产物用于核苷酸序列测定，并进行分子
流行病学分析。
结果 80份咽拭子标本共分离到 42株 RV，获得 36株 RV的 739个核苷酸（nucleotide，nt）（nt8 731～
nt9 469）序列。系统同源性分析表明，36株 RV分离株分别属于两个不同的基因型，7株为 2B基因型，
其他分离株均为 1E基因型，相对于其他国家的 1E基因型，形成一个独立分支。36株 RV分离株大部分的
核苷酸突变为无义突变，氨基酸（amino acid，aa）序列高度保守，所有分离到的 1E基因型 RV在 aa180
位点发生相同突变(亮氨酸→苯丙氨酸)，而 2B基因型以及其它国家的 1E基因型风疹病毒在该位点均未发
生改变。
结论 2011～2012年上海市存在两种基因型风疹病毒流行，1E为优势基因型。继 2011年后再次监测到 2B
基因型 RV，并持续在 2012年存在流行，尚不能证明其来源。aa180位点发生的突变说明该氨基酸(苯丙氨
酸)可能是我国 1E基因型风疹病毒所特有，还应开展进一步研究。
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19. PhoP-PhoQ 双组分信号转导系统调控志贺菌
生物学功能的研究
林志伟 蔡霞 瞿涤
复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海，200032
目的 通过比较志贺菌野生株、PhoP/PhoQ敲除株的细菌表型、基因转录谱的差异，研究志贺菌 PhoP/PhoQ
双组分信号转导系统对下游毒力相关基因的调控机理及其生物学功能，揭示 PhoP/PhoQ对志贺菌毒力的具
体调控机制，为新型抑菌药物的研发奠定一定的理论及实验基础。
方法 利用实验室标准菌株福氏志贺菌 2a 301株，运用同源重组基因敲除技术构建志贺菌 phoP/phoQ基因
敲除突变株以及回复突变株；比较志贺菌野生株、PhoP/PhoQ突变株以及回复突变株在表型以及对外界刺
激耐受能力方面的差异；通过志贺菌 Hela细胞侵袭模型以及豚鼠角膜感染模型比较野生株与 PhoP/PhoQ
突变株毒力方面的差异；利用基因芯片技术比较野生株、突变株以及回复突变株转录谱的差异；寻找与毒
力有关的差异表达基因，利用 EMSA实验等分子生物学技术，研究 PhoP/PhoQ对下游毒力基因的调控机
理。
结果 利用同源重组技术构建福氏志贺菌 Sf301 株 phoP/phoQ 双组分信号转导系统基因敲除株，比较
Sf301、Sf301 ΔphoP/phoQ的生长曲线，发现它们在 LB培养条件下生长能力无明显差异，检测它们对外
界低Mg2+、低 pH和抗菌肽等刺激的耐受能力，发现 Sf301ΔphoP/phoQ的耐受能力均出现减弱现象；利
用 HeLa侵袭实验比较 Sf301与 Sf301ΔphoP/phoQ对 HeLa细胞的侵袭力，结果显示与 Sf301相比，Sf301
ΔphoP/phoQ对 HeLa细胞的侵袭力明显下降，由 2.6×10-3下降到 4.9×10-5；通过豚鼠角结膜感染实验，
观察豚鼠角结膜炎的严重程度，比较 Sf301与 Sf301ΔphoP/phoQ对豚鼠角结膜的侵袭力，结果发现，与
Sf301相比，Sf301ΔphoP/phoQ对豚鼠角膜的感染力明显下降，评分由“＋＋＋”下降为“＋”；利用基
因芯片技术比较Sf301与Sf301ΔphoP/phoQ在对数生长中期、稳定期的转录普的差异，结果发现 icsA(virG)、
shf、virK等毒力相关基因的转录水平出现显著下调。
结论 PhoP-PhoQ双组分信号转导系统对志贺菌毒力以及耐受外界环境压力等方面具有显著的调控作用，
其调控机制可能是通过影响其下游 icsA等相关基因来执行。
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20. 表皮葡萄球菌磷酸盐转运相关蛋白 PhoU生物学功能的研究
王小飞 韩海燕 吴旸 瞿涤
（复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海 20032）
通讯作者：瞿涤 E-mail:[email protected]
目的：通过比较表皮葡萄球菌 SE1457、phoU1敲除株、phoU2敲除株的生物学表型和基因转录谱的差异，
阐明 phoU1和 phoU2在表皮葡萄球菌中对生物膜和持留菌形成的调控作用，为防治生物膜和持留菌耐药
提供理论基础。
方法：利用同源重组技术，构建表皮葡萄球菌 SE1457的 phoU1敲除株（△phoU1）和 phoU2敲除株（△
phoU2）以及△phoU2的回复突变株（△phoU2/pCN51::phoU2）。首先比较敲除株与野生株之间生长及生
化反应间的差异。采用 DAPI-poly-P染色法分析细菌内 poly-P的浓度，检测敲除株与野生株之间磷酸盐代
谢的差别。利用结晶紫染色半定量法和激光共聚焦显微镜直接观察敲除株与野生株间生物膜形成的差别。
通过药物暴露实验，暴露在一定浓度的万古霉素（70ug/ml），阿米卡星（50ug/ml）及左氧氟沙星下（50ug/ml）
下，检测敲除株在对数生长期和稳定期持留菌形成与野生株之间的差别。通过 RNA-SEQ技术比较△phoU1
和△phoU2与野生株间转录谱的差异，寻找差异表达的基因，利用 EMSA等实验技术，筛选受 phoU1和
phoU2调控的基因，完成 phoU1和 phoU2调控生物学表型的网络通路。
结果：△phoU2生长明显弱于野生株，△phoU1的生长与野生株之间无明显差异。DAPI-poly-P染色法观
察到△phoU2中 poly-P含量升高，△phoU1中 poly-P含量与野生株无差别。△phoU2的生物膜形成能力弱
于野生株，在激光共聚焦显微镜下观察△phoU2的形成的生物膜相较于野生株薄且死菌比例升高。药物暴
露实验中，△phoU2在 72h可以完全被杀灭，无持留菌残留。△phoU1与野生株至观测时间 120h均不能
完全被杀灭。Real-time PCR结果显示△phoU1中 Pst操纵子系统中的各基因转录水平与野生株无明显差别，
△phoU2中 PST操纵子系统中的各基因转录水平均有 10倍以上升高，提示 phoU2是 Pst操纵子的负调控
因子。
结论：phoU1在表皮葡萄球菌中的作用尚不明确。phoU2在表皮葡萄球菌中起到功能性基因的作用，负向
调控细菌的生长，生物膜和持留菌的形成，phoU2可以作为研制治疗生物膜和持留菌感染药物的靶向基因。
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21. Constitutive activation of IL-13/STAT6 contributes to KSHV-associated PEL cell
proliferation and survival
王冲 蔡启良
复旦大学基础医学院
Objective: To find out the molecular mechanism leading to this activation of phosphorylated
STAT6 in PEL cells line.
Methods: By using a series of inhibitor against the proteins associated with IL-4 or IL-13
signaling pathway to find out which molecular is usurped by KSHV to activate STAT6.
Results: we demonstrate that STAT6 activation tightly correlates with interleukin-13 (IL-13)
secretion, JAK1/2 tyrosine phosphorylation, and reduced expression of SHP1 due to KSHVinfection. Moreover, pSTAT6c and reduction of SHP1 were also observed in KS patient tissue.Notably, blockade of IL-13 by antibody neutralization dramatically inhibits PEL cell proliferationand survival. Taken together, these results suggest that IL-13/STAT6 signaling is modulated byKSHV to promote host cell proliferation and viral pathogenesis.
Coclusion：STAT6 is a member of signal transducer and activator of transcription (STAT) family,
whose activation is linked to KSHV-associated cancers. The mechanism through which STAT6 ismodulated by KSHV remains unclear. In this study, we demonstrate that constitutive activation ofSTAT6 in KSHV-associated PEL cells, results from interleukin-13 (IL-13) secretion and reducedexpression of SHP1. Importantly, we also found that depletion of IL-13 reduces PEL cell growthand survival. This discovery provides a new insight that IL-13/STAT6 plays an essential role inKSHV pathogenesis.
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22. 铜绿假单胞菌噬菌体 D204的生物学特性和基因组学研究
徐彬 高晶 郭晓奎 秦金红上海交通大学医学院， 上海 200025
目的 针对铜绿假单胞菌多耐药菌的不断出现，寻找高效、广谱的铜绿假单胞菌噬菌体，为多耐药菌的临
床感染治疗提供新的研究思路。
方法 以上海各家医院临床上分离到的多耐药铜绿假单胞菌为宿主菌，从环境污水中分离和鉴定铜绿假单
胞菌噬菌体，利用双层琼脂平板法进行纯化，纯化后观察噬菌斑的特征，采用负染法电镜观察噬菌体的形
态和大小，测定其效价、宿主谱、最佳感染复数、酸碱稳定性和热稳定性，绘制一步生长曲线、吸附曲线
和感染曲线，并抽取噬菌体 DNA进行测序及分析。
结果 分离到一株铜绿假单胞菌噬菌体（命名为 D204），该噬菌体能形成直径为 1-2mm、圆形透明的噬菌
斑，效价为 5.5×109pfu/ml，最佳感染复数为 0.005。D204在 pH4-11及温度 37-50℃环境下具有较高活性，
电镜显示此噬菌体由直径约为 50nm的多面体头部和约 15nm短尾组成。一步生长曲线表明噬菌体在裂解
宿主菌时，潜伏期为 30min，爆发期为 35min，裂解量为 161pfu/cell。吸附曲线显示 6min吸附率达 90%以
上。感染曲线显示当感染复数为 0.1和 1时，对宿主菌生长有抑制作用，在 180min后可完全抑制宿主菌生
长。其基因组为环状双链 DNA，全长为 50609bp，GC含量为 73.9%。预测共有 75个 ORFs，未发现 tRNA
序列。
结论 分离、筛选出的铜绿假单胞菌噬菌体 D204裂解性较强，裂解谱较宽，吸收率较高，潜伏期较短，具
有较大的应用价值，其全基因组测序结果为今后的进一步研究奠定了基础。
28
23. Inoculation of Quadrivalent Vaccine in School-aged Children
is an Effective Way to Prevent Influenza in Shanghai
Baihui Zhao1,2†, Shengying Qin1†, Jian Chen2, Xuelian Yu2, Ye Gao2, Jiaren Shen2,Xiaoqing Cui2, Mei Zeng3*, and Xi Zhang2*
上海交通大学医学院， 上海 200025
Objective: Influenza B can pose a significant burden in Shanghai, the city with the highest
GDP and markedly low vaccination rate in China. In order to give some evidence-based suggestionto policy maker to promote vaccine efficacy during influenza B epidemic season, we did thisretrospective study.
Methods The activities of influenza B were analyzed by year and age group in the past six
seasons. Real-time reverse transcription PCR was used to identify the two lineages of influenza Bviruses. The antigenic characteristics of isolations were evaluated by sequencing and reciprocalhemagglutinin inhibition assay.
Results The average prevalence is the highest (12.52%) in children of 6-17 years old and the
positive percentage peaked earlier or simultaneous in this age group than in other age groups. Onaverage, 44.57% of circulating influenza B isolates belonged to the opposite lineage of the vaccinestrain and both two lineage strains co-circulated in Shanghai. The average percentages of lowreaction B/Victoria and B/Yamagata strains were 18.47% and 40.43% respectively. Reassortmentappeared between different lineages.
Conclusions Inoculation of quadrivalent influenza vaccine in school-age children is an effective
way to prevent influenza during influenza B epidemic season in Shanghai.
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24. Calpain在柯萨奇病毒 B3感染导致心肌纤维化中的作用及机制研究李明辉，虞勇，虞莹，刘桂剑，刘羽曦，陈瑞珍*
复旦大学附属中山医院，上海市心血管病研究所，卫生部病毒性心脏病重点实验室，
上海，200032，*E-mail: [email protected]
目 的： 既往研究发现心肌纤维化在病毒性心肌炎发病及进展过程中可能发挥着比较重要的作用。
Calpain是一类存在于细胞质中的 Ca2+依赖性的半胱氨酸蛋白酶，在心肌组织细胞内组成性表达，近期有
研究发现 calpain在柯萨奇病毒 B3 （Coxsackievirus B3, CVB3）感染导致的心肌炎中差异表达。本研究在
CVB3感染导致心肌炎小鼠模型，观察抑制 calpain活性对心肌组织纤维化程度的影响，继而在体外培养心
肌成纤维细胞，观察 calpain对心肌成纤维细胞增殖和迁移能力的影响，拟初步探讨 calpain在 CVB3感染
导致的心肌组织纤维化中的可能作用及机制。
方 法： Balb/c小鼠 40只，雄性、4周龄、纯种近交系，体重 13-15g，SPF级饲养（复旦大学实验动物
科学部提供）。在标准条件适应 1天后，随机分为四组，以 CVB3单次感染 Balb/c小鼠建立病毒性心肌炎
模型(n=10)，同时设立 calpain抑制剂 ALLN干预组 (n=12) 及其对照组 (n=10)；同期小鼠腹腔无菌注射等
剂量不含病毒的 DMEM 液作为正常对照组 (n=8)。小鼠于第 7天充分麻醉后颈椎脱臼断颈处死，迅速取
出心脏，10%福尔马林固定，经脱水、透明、浸蜡包埋，制做 0.4um厚切片，行组织病理学 HE染色确定
模型的建立；行Mallory染色观察心肌纤维化程度，并通过 Leica成像系统测量总体纤维化面积百分比。
SD大鼠乳鼠，无菌条件下从心肌组织中利用差速贴壁法分离出成纤维细胞。成纤维细胞经纯化后铺板贴
壁，无血清培养 24h同步化，加入含梯度稀释的 ALLN、20% FBS 的细胞培养基培养 24h；同时设无 ALLN
干预的心肌成纤维细胞同条件培养作为对照组；每组设 5个复孔；采用 Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 法检
测不同浓度的药物对成纤维细胞增殖的影响。分组及干预同上，将成纤维细胞接种到 6孔板，采用细胞划
痕损伤实验检测不同浓度药物对成纤维细胞迁移的影响。
结 果：
病毒感染导致心肌炎小鼠心肌组织纤维化程度比正常对照组及药物干预组均明显增加 (P<0.01)；抑制
calpain活性后，心肌纤维化程度显著下降 (P<0.01)。体外培养成纤维细胞中，与正常对照组相比，低浓度
ALLN (0.625μg/ml) 作用于成纤维细胞 24h，即可导致心肌成纤维细胞增殖率显著下降(P<0.001)，且呈药
物浓度依赖性(P<0.05)。抑制 calpain 活性也表现出对成纤维细胞迁移能力的抑制作用，差异有统计学意义
(P<0.001)，亦呈浓度依赖性(P<0.05)。
结 论：
Calpain活性与 CVB3感染导致心肌炎发病过程中心肌纤维化相关；其可能的机制是参与调节心肌成
纤维细胞的增殖、迁移运动等生物学功能。
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25. Immunization with a single recombinant hepatitis C virus envelope protein elicits
pan-genotypic neutralizing antibodies in macaques and confers protection against viral
challenge in mice
Authors: Dapeng Li (1), Markus von Schaewen (2), Xuesong Wang (3), Alexander Ploss (2*), Jin Zhong (3*),
Zhong Huang (1*)
Affiliations:
(1) Vaccine Research Center, Key Laboratory of Molecular Virology & Immunology, Institut Pasteur of Shanghai,
Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China.
(2) Department of Molecular Biology, Princeton University, Princeton, New Jersey 08544, USA.
(3) Unit of Viral Hepatitis, Key Laboratory of Molecular Virology & Immunology, Institut Pasteur of Shanghai,
Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China.
No vaccine is available for hepatitis C virus (HCV) thus far, which constitutes a global public health issue.
Despite their effectiveness, direct-acting antiviral (DAA) drugs are unaffordable for the majority of HCV-infected
individuals. Therefore, the development of prophylactic HCV vaccines with high efficacy and low cost remains a
high priority for the global control of HCV infection. HCV has a highly heterogeneous RNA genome and can be
classified into seven genotypes. Owing to high genetic variation among genotypes, inducing antibodies capable of
neutralizing most, if not all, of the HCV genotypes by experimental vaccination has been challenging. We report
that a single recombinant protein is able to elicit broadly neutralizing antibodies (NAbs) against all seven HCV
genotypes in rodents and non-human primates. A soluble form of E2 protein (sE2) derived from HCV strain Con1
was produced at high levels in stably transfected Drosophila S2 cells. This sE2 protein interacts with the HCV
entry factors CD81 and scavenger receptor type B class I (SR-B1), blocks cell culture-derived HCV (HCVcc)
infection, and reacts with known monoclonal broadly NAbs. By immunization, sE2 induced antibodies in mice,
rabbits and rhesus macaques (n=20; four groups, 5 macaques in each group), neutralizing HCV of all seven
genotypes. Additionally, sE2-immunized macaques developed systemic and intra-hepatic memory T cells specific
for E2. Importantly, in a genetically humanized mouse model, active immunization with sE2 efficiently protected
against HCVcc challenge, resulting in drastically reduced bioluminescence signals (n=6 per group; p<0.0001).
Collectively, these data demonstrate that sE2 is a promising HCV vaccine candidate that warrants further
pre-clinical and clinical development.
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26. 2012-2013年上海地区致手足口病肠道病毒型别的研究
徐梦华 苏犁云 曹凌峰 钟华清 董妞妞 董左权 徐锦*
作者单位：复旦大学附属儿科医院临床检验中心 上海市闵行区万源路 399号，201102
通讯作者：徐锦 E-mail：[email protected]
目 的：
通过分析 2012-2013年上海地区引起 HFMD肠道病毒病原谱，加深对上海地区肠道病毒尤其是非 EV71非
CA16肠道病毒与 HFMD关系的认识，为 HFMD的防治提供科学依据。
方 法：
收集 2012-2013年度复旦大学附属儿科医院住院，临床诊断确诊为 HFMD 患儿粪便标本 480份。通过
RT-PCR方法，采用基于 VP1区保守片段设计的引物扩增目的片段并将阳性产物进行测序。采用MEGA5.0
序列分析软件进行基因序列分析及主要肠道病毒型别系统进化树的绘制。
结果：
1、2012-2013年 HFMD患儿年龄在 3-96个月（29.12±17.41月），男女比为 1.41:1，平均住院天数为 2.96
±1.55天。18.0%的 HFMD患儿出现脑炎、脑膜炎、脑干脑炎等中枢神经系统并发症。2、通过 RT-PCR方
法，2012-2013年 480例 HFMD患儿标本中检出 417例肠道病毒阳性（86.9%），共检到 13种不同型别，
依次包括 CA6（31.9%）、EV71（30.6%）、CA16（8.8%）、CA10（7.5%）、Echo3（0.63%），及 CA2、
C4、CA9各 2例，CA5、CA8、CA12、CA14、CB4各 1例。3、CA6、EV71、CA16、CA10感染全年都
有流行。2012年 9月-2013年 12月，CA6感染呈现明显上升趋势，并维持在较高水平。4、进化树分析显
示，2012-2013年上海地区 EV71株为 C4a基因亚型，CA16属于 B1b基因亚型。上海地区 CA6株属于 F，
CA10株属于 D基因型。5、CA6感染组患儿发病年龄小、住院时间短，中枢神经系统并发症发生率显著
低于 EV71感染组。
结 论：
1、2012-2013年致上海地区 HFMD肠道病毒型别丰富，其中非 EV71非 CA16肠道病毒所占比例有上升趋
势。2、CA6为 2012年 9月-2013年 12月引起 HFMD的最优势毒株。3、CA6相关 HFMD临床症状较轻。
EV71仍为引起重症 HFMD的首要病原。
32
27.Hepatitis B core protein sensitizes hepatocytes to tumor necrosis factor-induced apoptosis
by suppression of the phosphorylation of mitogen-activated protein kinase kinase 7
Baosen Jia,a Minggao Guo,b Gaiyun Li,a Demin Yu,c Xinxin Zhang,c Ke Lan,a# Qiang Denga#
Key Laboratory of Molecular Virology and Immunology, Institut Pasteur of Shanghai, Chinese
Academy of Sciences, Shanghai, China a
Department of General Surgery, Sixth People’s Hospital, Shanghai Jiaotong University School of
Medicine, Shanghai, China b
Department of Infectious Diseases, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of
Medicine, Shanghai, China d
Hepatitis B, which caused by Hepatitis B virus (HBV) infection, remains a major health threat
worldwide. Hepatic injury and regeneration from chronic inflammation is the main driving factor of
liver fibrosis and cirrhosis in chronic hepatitis B. Pro-inflammatory tumor necrosis factor (TNF)-α
has been implicated as a major inducer of liver cell death during viral hepatitis. Here, we report that
in hepatoma cell lines and in primary mouse and human hepatocytes, expression of hepatitis B core
(HBc) protein made cells susceptible to TNF-α-induced apoptosis. We found that receptor of
activated protein kinase C (RACK) 1 interacted with HBc by tandem affinity purification and mass
spectrometry. RACK1 was recently reported as a scaffold protein that facilitates the
phosphorylation of mitogen-activated protein kinase kinase 7 (MKK7) by its upstream activators.
Our study showed that HBc abrogated the interaction between MKK7 and RACK1 by
competitively binding to RACK1, thereby downregulating TNF-α-induced phosphorylation of
MKK7 and the activation of c-Jun N-terminal kinase. In line with this finding, specific knockdown
of MKK7 increased the sensitivity of hepatocytes to TNF-α-induced apoptosis, while
overexpression of RACK1 counteracted the pro-apoptotic activity of HBc. Capsid particle
formation was not obligatory for HBc pro-apoptotic activity, as analyzed using an
assembly-defective HBc mutant. In conclusion, the expression of HBc sensitized hepatocytes to
TNF-α-induced apoptosis by disrupting the interaction between MKK7 and RACK1. Our study is
thus a first indication of the pathogenic effects of HBc in liver injury during hepatitis B.
33
28.Overt and occult hepatitis B virus infection among pregnant women: proportions and
phylogenetic analysis
Yingjie Zheng, Dechuan Kong, Yichang Bu, Haiyan Xiong, Dongming Zheng
Department of Public Health Microbiology, School of Public Health, Fudan University, Shanghai
200032, China.
This work was supported by National Natural Science Foundation General Program (81373065) and
Innovation Program of Shanghai Municipal Education Commission (14ZZ015)
Objective The proportions and phylogeny of both overt and occult hepatitis B virus (HBV)
infection were studied among pregnant women.
Methods We performed a prospective study which had recruited continuously the hospitalized
pregnant women during the year of 2012-2013. Blood samples were detected in parallel with (1)
HBV surface antigen (HBsAg) by using Roche® quantitative electrochemiluminescence
immunoassay, and (2) HBV S gene by using nested polymerase chain reaction. The analysis of
maternal demographics and HBV sequences were performed.
Results Among 1130 pregnant women, the proportions of overall, overt and occult (or
HBsAg-negative) HBV infection were 16.6% (187/1130), 8.4% (95/1130) and 8.9% (92/1035)
respectively. 117 out of the 136 identified HBV strains were with genotype B and available for
further analysis: compared with the overt strains, the occult strains had higher mutation rates. Five
amino acid sites (G44E, T126A, Q129R, W156L and F200Y) with statistical significance were
identified. In addition, we found one occult strains with an insert mutation between the 123th and
124th amino acids, and three occult strains with stop codon mutation at the 35th amino acid.
Conclusion Pregnant women with occult HBV infection, routinely screened as non-HBV cases, are
roughly the same as those overt, which may pose a potential risk for mother-to-infant transmission.
Several occult HBV-specific mutations were identified and may be linked with its occurrence.
Keywords pregnant women; occult hepatitis B virus infection; phylogenetic analysi
34
29.Molecular characterization of overt and occult hepatitis B virus infection among pregnant
women in Anqing
ZHENG Dongming1, LIU Haiyan2, XIONG Haiyan1, WANG Yan3, HU Anqun2, BU Yichang1,
ZHENG Yingjie1
1Department of Public Health Microbiology, School of Public Health, Fudan University, Shanghai
200032, China; 2 Department of Clinical Laboratory, Anqing City Hospital, Anqing 246003, Anhui
Province, China; 3 Department of Gynaecology and Obstetrics, Anqing 246003, Anhui Province,
China
Correspondence to Professor Yingjie Zheng (Email: [email protected])
Objective: To explore the prevalence and characteristics of both overt and occult HBV infection
among pregnant women in Anqing City, Anhui Province.
Methods: A cross-sectional study was conducted among 155 pregnant women who had been
recruited continuously from June 1, 2014 to June 31, 2014 in Anqing City Hospital. Blood samples
were collected and detected with HBV surface antigen (HBsAg) by using Enzyme linked
immunosorbent assay (ELISA) and electrochemiluminescence immunoassay. Nested polymerase
chain reaction and sequencing of HBV S gene were also performed in all samples. Phylogenetic
analysis was performed using MEGA6.0 software.
Results: Among 155 pregnant women, HBV prevalence was 18.06% (28/155).The proportions of
overt and occult HBV infection were 10.32%（16/155）and 8.63% (12/139) respectively. HBV
strains were identified in 20 patients, 8 overt strains and 12 OBI strains. All of the identified HBV
strains were genotype B except for 1 OBI strain was serotype ayw1, the rest of the HBV strains
were serotype adw2.
Conclusions: Pregnant women are of high HBsAg and occult HBV infection prevalence in Anqing
City, Anhui Province. However the molecular characteristics of overt HBV and OBI strains need
further clarification.
Keywords: occult hepatitis B virus infection; overt hepatitis B virus infection; pregnancy women;
phylogenetic analysis
35
30. 浦东新区腹泻患者气单胞菌流行特征及耐药性和毒力基因研究
王闻卿 1,2, 朱林英 2, 郝莉鹏 2, 傅慧琴 2, 苏靖华 2, 郑英杰 1
1复旦大学公共卫生学院卫生微生物学教研室；2上海市浦东新区疾病预防控制中心
通讯作者：郑英杰，博士 /教授；复旦大学公共卫生学院卫生微生物学教研室 上海 20032 (email:
[email protected]; 电话: 021-54237052)；研究方向：分子微生物学与人群健康。
目的：了解上海市浦东新区腹泻患者气单胞菌流行特征及耐药性和毒力基因特征。
方法：2012年 1—12月，选取浦东新区 12家医院作为腹泻监测点，对符合病例定义的病例采样粪便样本
进行 13种腹泻病原体检测。对分离到的气单胞菌进行抗生素耐药性，以及毒力基因检测。
结果：2533例腹泻患者样本中，检出气单胞菌 101株，阳性率为 4.0%。检出 3种气单胞菌，以维隆气单
胞菌温和生物变种为主，占 52.5%；44株气单胞菌与其他病原体存在混合感染。夏季为高发季节，20岁以
上人群普遍易感，主要为农民、工人、干部职员和退休人员。临床症状以水样便为主，仅少数患者出现呕
吐、发热症状。
对阿莫西林/克拉维酸、四环素耐药率分别为 42.6%、36.6%，对氨基糖甙类，第 3代、4代头孢菌素类、
碳青霉烯类、氟喹诺酮类、磺胺类、氯霉素类抗生素高度敏感。95.0%的气单胞菌携带毒力基因，分别为
hlyA(5.9%)、aerA(6.9%)、act(67.3%)、alt(42.6%)、ast(13.9%)。
结论：浦东新区腹泻患者中气单胞菌阳性率较高，并存在较高比例的混合感染。氟喹诺酮类，氨基糖甙类，
磺胺类，第 3代、4代头孢菌素类，以及碳青霉烯类抗生素对气单胞菌具有良好的抗菌作用。绝大多数气
单胞菌都携带毒力基因，不同气单胞菌毒力基因分布存在差异性。
关键词：气单胞菌；腹泻；耐药；毒力基因
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31. Epidemiological Characterizations of Injury Cases in Tangqiao Community Health Service
Centers in Shanghai
Bian Hong-yi1, Xia Jin-jin1, Liu Tian-wei1, Li Ning1 ,Song Zhi-hao1, Gao Hong-ji1, Yingjie
Zheng2
1Department of Health Prevention of Tangqiao Community Health Center, Shanghai 200127, China;
2Department of Public Health Microbiology, School of Public Health, Fudan University, Shanghai
200032, China.
Correspondence to Professor Yingjie Zheng (Email: [email protected])
Objective: To describe the patterns of injuries in residents in Tangqiao community Pudong District
of Shanghai, and to provide evidence for developing relevant intervention programs.
Methods: Local residents (including census register population in this area, floating population, and
other provinces and cities population) who sought medical care for injury for the first time in
Tangqiao health service centers from 1 January 2013 to 31 December 2014 were enrolled in this
present study. Descriptive analysis was performed on injury pattern and health outcomes in this
group.
Results: During 2013-2014, a total of 263 cases of injury cases were reported, 124 were men
(47.1%) and 139 were women (52.9%). The injuries occurring locations ranking the first to the third
are home (46.8%), public living place (14.4%) and street or highway (11.8) and the industrial and
construction sites (11.8%). The housework (36.5%) ranked the first in activity type of injury
occuring, then followed by leisure activities (28.5%), and the paid work (20.5%). Speaking of
injury area, the lower limbs ranked the first (47.91%), upper limbs and body was 30.8%, 18.63%
respectively. The causes of the injuries are mainly: fall (62%) and sharp instrument injury (16.7%),
blunt injury (8.7%).
Conclusion: Fall is the leading cause of injuries among residents. Comprehensive preventive
measures should be implemented to effectively reduce injuries occurred among the seniors.
Key words: injury; fall; community health service center
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32. 2013年浦东新区塘桥社区居民减寿人年数分析
卞宏毅 1，郑英杰 2
1塘桥社区卫生服务中心 预防保健科；2复旦大学公共卫生学院卫生微生物学教研室
通讯作者：郑英杰，博士 /教授；复旦大学公共卫生学院卫生微生物学教研室 上海 20032 (email:
[email protected]; 电话: 021-54237052)；研究方向：分子微生物学与人群健康。
目的：了解浦东新区塘桥社区居民减寿人年数（potential years of life lost,PYLL）情况，为进一步开展针对
社区的健康教育和干预提供依据。
方法：基于浦东新区塘桥社区上海户籍人口 2013年死因监测资料，采用 ICD-10编码并进行死因分类，在
EXCEL软件中录入并进行统计分析。
结果：2013年塘桥社区上海户籍总人口粗死亡率为 819.33／105，其中男性、女性粗死亡率分别为 893.77
／10５、746.24／10５，0～1岁有 2名男婴死亡。男性 PYLL前五位分别是肿瘤疾病、循环系统疾病、起
源于围产期疾病、呼吸系统疾病、损伤和中毒，女性 PYLL排名前五位分别是肿瘤疾病、循环系统疾病、
损伤和中毒、呼吸系统疾病以及内分泌疾病。
结论：循环系统疾病和肿瘤疾病为本社区主要死因，应重点进行健康教育、加强防治；此外，损伤和中毒
的防治也需加强。
关键词：死因；潜在减寿年数
38
33. 2013年上海市浦东新区塘桥社区居民寿命表及去死因寿命表分析
卞宏毅 1，郑英杰 2
1塘桥社区卫生服务中心 预防保健科；2复旦大学公共卫生学院卫生微生物学教研室
通讯作者：郑英杰，博士 /教授；复旦大学公共卫生学院卫生微生物学教研室 上海 20032 (email:
[email protected]; 电话: 021-54237052)；研究方向：分子微生物学与人群健康。
目的：分析 2013 年上海市浦东新区塘桥社区户籍居民平均寿命及耗损平均寿命的主要疾病。
方法：按照人民卫生出版社第七版《卫生统计学》简略现时寿命表和去死因寿命表的编制方法对 2013年
上海市浦东新区塘桥社区户籍人口的死亡数进行编制。结果：2013 年上海市浦东新区塘桥社区户籍居民
平均寿命为 82.8岁(男性 80岁，女性为 85.7岁)。男性和女性去循环系统疾病的期望寿命排在第一位，分
别是 85.66岁和 92.68岁，增加率分别为 7.07%和 8.15%；排名第二的是去肿瘤期望寿命，男性去肿瘤期望
寿命达到 83.87岁，女性达到 88.01岁，差值和增加率分别为 3.87岁和 2.31岁以及 4.84%和 2.7%，差值和
增加率均是男性高于女性；男性去某疾病期望寿命排名三、四、五位的分别是去呼吸系统疾病、去损伤和
中毒、去起源于围产期疾病，女性去某疾病期望寿命排在第三、四、五位分别是去呼吸系统疾病、去内分
泌病、去损伤和中毒。
结论：为了进一步延长本社区居民平均寿命, 控制慢性非传染性疾病是关键, 而提倡健康的生活方式是最
重要的措施。
关键词：死因；寿命表；去死因寿命表；平均寿命
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34. 巨细胞病毒母婴传播的研究进展
罗业飞, 熊海燕，郑英杰
1 复旦大学公共卫生学院卫生微生物学教研室
通讯作者：郑英杰，博士/教授；复旦大学公共卫生学院卫生微生物学教研室 上海 20032
(email: [email protected]; 电话: 021-54237052)；
目的：本综述通过总结国内外相关文献，对巨细胞病毒母婴传播的现状、危险因素、药物治疗和疫苗等方
面进行总结。
方法：采用关键词（巨细胞病毒、母婴传播、危险因素、治疗、疫苗等）对 PubMed、CNKI等主要文献库
进行检索，获取全文进行归纳总结。
结果：巨细胞病毒母婴传播途径主要有宫内传播、生产时传播和出生后母乳喂养传播。已有研究报告的巨
细胞病毒母婴传播率从 14.2%到 52.4%不等，孕妇初次感染巨细胞病毒、新生儿早产或重症监护、社会经
济地位低为危险因素。对孕妇进行知识卫生宣教、卫生行为养成有利于降低母婴传播率。目前还没有临床
药物可以用于妊娠期治疗，也没有疫苗获得使用许可。
结论：巨细胞病毒母婴传播率较高，部分危险因素得到认识，目前仍缺乏安全有效的临床药物和疫苗进行
干预，可以采取一些公共卫生措施降低传播率。
关键词：巨细胞病毒；母婴传播；病毒感染；危险因素
40
35. HBx蛋白拮抗 APOBEC3G对 HBV抑制作用的机制研究
陈瑞栋，赵雪，刘晶，谢幼华*
*单位：复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室地址：上海市东安路 131号治道楼 403 电话：021-54237972
目的：APOBEC3G（A3G）是针对逆转录病毒和乙型肝炎病毒（HBV）的重要宿主限制因子。我们在之前的研究中发现 HBV编码的 HBx蛋白与 A3G存在相互作用，因此我们进一步研究了两者之间是否存在功能上的相关性。
方法：通过在 Huh7细胞中共转染 HBx和 APOBEC3（A3）家族中成员的过表达质粒，研究 HBx对 A3家族成员蛋白水平的影响，利用 qPCR方法研究 HBx对 A3G的转录水平的影响。通过免疫共沉淀 His-A3G与泛素蛋白，观察 HBx过表达时的 A3G泛素化水平变化。应用分步离心法分离外体，观察过表达 HBx时，A3G以及部分外体标志蛋白在细胞和外体中的变化。在反式互补 HBx及 A3G过表达时，利用核酸杂交检测了缺失 HBx的 HBV基因组复制情况变化。
结果：利用上述方法，我们发现 HBx与 A3G有相互作用，并且选择性下调 A3家族中 A3G蛋白水平，而对 A3G基因转录没有影响，也不影响 A3G泛素化水平，即 HBx并非通过蛋白酶体降解途径下调 A3G表达。我们观察到 HBx过表达时，细胞裂解液中 A3G蛋白水平下降的同时，细胞分泌的外体中 A3G蛋白水平有所升高，HBV复制水平较未反式互补 HBx时有所升高。
结论：上述结果表明 HBx能够特异性下调 A3G蛋白水平，该作用与蛋白酶体相关的蛋白降解途径无关，而可能是通过增加 A3G经外体外排实现。这一研究揭示了 HBV拮抗宿主细胞抗病毒机制的新途径。
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36. 应用 SILAC和 LC-MS/MS技术定量分析 HBV对 Huh-7外体蛋白组分的影响陈瑞栋，赵雪，谢幼华，刘晶*
*单位：复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室地址：上海市东安路 131号治道楼 403 电话：021-54237972
目的：乙型肝炎病毒（HBV）感染会引起急性或慢性肝炎，慢性肝炎可能进而发展成肝硬化和肝癌。包括肝细胞在内的多种细胞都能分泌外体，而外体蛋白组分在一定程度上反映了细胞的生理变化，而之前的研
究表明 HBV病毒颗粒的组装及外排与外体生成和分泌途径有密切联系。因此我们推测 HBV病毒在宿主细胞内的复制、组装和分泌过程有可能影响肝细胞外体的形成、造成外体蛋白组分的变化。为证实该假设，
我们以蛋白质组学方法对HBV基因组及HBx基因转染对Huh7细胞外体蛋白组分的影响进行了定量分析。
方法：利用稳定同位素标记技术（SILAC）对 Huh7细胞进行氨基酸标记，随后转染 HBx过表达质粒、1.1倍体野生型 HBV基因组质粒或 HBx突变缺失的 1.1倍体 HBV基因组质粒。通过分步离心法分离纯化转染细胞培养上清的外体，与转染空载体的未标记细胞上清纯化得到的外体 1:1混合后，进行液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）分析，利用MaxQuant软件鉴定和定量外体中的蛋白组分，并对得到的结果进行生物信息学分析。
结果：定量蛋白质组学分析表明，HBx、野生型 HBV、缺失 HBx表达的突变 HBV转染 Huh-7均可导致细胞外体成分发生特定的改变，而通过比较 HBx与空载体、野生型 HBV与缺失 HBx的突变 HBV转染导致的外体蛋白变化，我们发现单一过表达 HBx造成的外体成分改变与 HBV转染基础上的低水平 HBx表达造成的改变不尽相同。利用蛋白免疫印迹对乙肝患者病人血清中分离的部分外体蛋白进行检测，验证了上述
体外蛋白质组学方法获得的结果。
结论：HBx表达以及 HBV基因组转染可对肝细胞分泌外体中的蛋白组分造成特定的改变，提示外体可能是 HBV与宿主相互作用的一种新的机制，上述改变的生物学意义值得进深入研究。
42
37. 肠道病毒交叉反应的机制及其意义探讨
丁莹莹 高彩霞 冯娇娇 王丽丽 潘卫
中国人民解放军第二军医大学病原生物学教研室
目的：EV71相关肠病毒能引起人群普遍感染，是手足口病(HFMD)的主要病原体。该类病毒种类繁多、感
染频繁。三种人群（正常成人，非手足口病门诊儿童，重症手足口病儿童）抗-EV71抗体反应检测显示，
人体抗-EV71体液免疫反应主要针对衣壳蛋白 VP1，尤其以肠病毒交叉反应表位为主；同时以交叉表位为
核心构成了 EV71 VP1三种主要抗原，N抗原（1-60），核心抗原（45-58），C抗原（41-297），不包
含交叉表位的抗原几乎没有反应性；故提出假设：交叉表位为 EV71 VP1主要反应表位，中和表位为次要
反应表位。本研究通过构建肠病毒交叉感染的小鼠模型并应用 ELISA等方法验证此假说，探讨肠道病毒交
叉反应产生的机制以及交叉反应抗体对中和抗体产生的影响。
方法：多种不同肠道病毒 VP1 (CA16 VP1, CB3 VP1, CA5 VP1, CA10 VP1, CA6 VP1, HPV VP1, HRV
VP1 )蛋白交叉免疫 BALB/C小鼠，同时设 EV71 VP1蛋白免疫对照组，无关蛋白免疫对照组和弗氏佐剂
佐剂免疫对照组。ELISA方法分析 EV71 VP1各抗原成分体液免疫反应特征及交叉表位抗体产生动态，再
用 EV71灭活病毒疫苗攻击产生交叉抗体的小鼠模型，通过测定中和抗体效价等方法比较无交叉反应组和
预先交叉反应组小鼠组中和抗体水平及交叉抗体与中和抗体持续时间。
结果：多种不同肠道病毒 VP1交叉免疫小鼠可诱导产生交叉抗体，随着交叉反应的增多，EV71 VP11-60
的反应性开始超过 VP161-297，表明随着交叉反应的增加，交叉表位 VP145-58的反应性被激发，VP11-60抗
原性的权重超过 VP161-297。EV71 VP1免疫对照组六次免疫始终未产生交叉表位抗体。
结论：人群中肠病毒的交叉反应是由不同肠道病毒交叉感染形成，预先存在的交叉反应可能对机体中和抗
体产生一定的影响，帮助肠病毒逃避宿主体液免疫反应。该研究将更深入的了解机体对肠病毒体液免疫反
应的特点及规律，丰富对其免疫保护、免疫致病和免疫逃逸机制的认识，并为新型肠病毒疫苗的研发提供
基础免疫学数据。
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38. 新型免疫球蛋白结合分子 AL插入突变体的体外分子进化研究
冯娇娇，丁莹莹，曹明媚，潘卫
第二军医大学病原生物学教研室
本室应用噬菌体展示体外亲和筛选的进化方法获得了由 SpAA 结构域和 PpL B3 结构域串联而成的非天
然存在的新型抗体结合分子 AL(Novel evolved Ig-binding molecules AL，NEIBM AL，以下简称为 AL)，
AL能够与人和哺乳动物的各类抗体 Fab段的 VH3重链和κ轻链同时结合，形成新的抗体结合模式。AL
中，SpAA 结构域与 VH3结合活性远远低于 PpL B3与κ轻链结合的活性。对 AL的 SpA中 A结构域螺
旋Ⅱ上的第 27位和第 34位氨基酸同时进行分子进化研究获得与人 IgG和人 IgM抗体结合活性明显增强
的 AL(VV) 分子。然而，研究表明，AL(VV)主要通过增强 SpAA中 VH3结合界面的稳定性实现结合活性
的提高，其结合位点并未增加。
目的：构建 AL 和 AL(VV)插入突变体噬菌体展示文库，应用人 IgM进行分子进化筛选，获得结合活性增
强的突变体，为病原体特异性抗体检测、抗体纯化和抗体吸附治疗的进一步改进提供研究基础。
方法：
1. 构建 AL 和 AL(VV)插入突变体噬菌体展示文库
2.插入突变体噬菌体展示文库的体外进化亲和筛选
3.3. 高结合活性插入突变体分子的原核表达、纯化及结合特性的分析
4.抗-HIV ELISA临床血清学检测
结果：
构建成功的 4个插入突变体噬菌体展示文库：库 A3、库 A5、库 A7和库 V3的库容依次为 3.2×106 、2.04
×106 、 1.8×106和 3.1×106；滴度依次为 2.3×1012 、2.1×1012 、1.9×1012和 2.2×1012(TU/ml)，
能够满足后续的实验要求；由于库 A9的库容量(0.9×105)一直不达标故弃用。
库 A3经过四轮常规分子进化筛选达到进化完全，挑取噬菌体 ELISA结果中最高 OD值的单克隆测序，获
得插入突变体 ALI37-KTS；库 V3经过三轮常规分子进化筛选达到进化完全，挑高 OD值单克隆测序测序，
获得插入突变体 AL(VV)I37-KNQ；库 A5经过五轮常规分子进化筛选达到进化完全，并未出现高结合活性
插入突变体分子；库 A7经过五轮常规分子进化筛选达到进化完全，挑取噬菌体 ELISA结果中最高 OD值
的单克隆测序，获得插入突变体 ALI37-LTHQIST(在本次研究中并未进行深入研究)。库 A3和库 V3经过
竞争性筛选后，挑取噬菌体 ELISA 结果中最高 OD 值的单克隆测序，在库 A3 中获得插入突变体
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ALI37-TNQ，库 V3中获得插入突变体 AL(VV)I37-NDD。库 A3和库 V3经过混合型筛选后，挑取噬菌体
ELISA结果中最高 OD值的单克隆测序，在库 A3中获得插入突变体 ALI37-NNN，库 V3中获得插入突变
体 AL(VV)I37-NTQ。
将这六种插入突变体分子克隆到原核表达载体 pET-32a(+)中，成功的构建了重组原核表达质粒
pET32a-ALI37-KTS 、 pET32a-ALI37-TNQ 、 pET32a-ALI37-NNN 、 pET32a-AL(VV)I37-KNQ 、
pET32a-AL(VV)I37-NDD、 pET32a-AL(VV)I37-NTQ以及 pET32a-AL 和 pET32a-AL(VV)，大量诱导表
达后得到八种纯度>90%的蛋白，八种蛋白浓度分别为 8.47、7.23、6.7、5.4、7.8、5.33、5.75、4.3(mg/mL)。
蛋白 ELISA检测结果显示 ALI37-KTS、ALI37-TNQ、ALI37-NNN与人 IgG 和人 IgM的结合活性均高于
AL，AL(VV)I37-KNQ、AL(VV)I37-NDD、AL(VV)I37-NTQ与人 IgG和人 IgM的结合活性均高于 AL(VV)。
库 A3筛选得到的三种插入突变体进行相互之间的竞争性 ELISA，结合活性的高低表现为：ALI37-NNN 最
高，其次是 ALI37-TNQ，最低的为 ALI37-KTS，与 ELISA结果相同。SPR检测的结果：亲和力最强的
为 AL（VV）I37-NTQ ，其次是 AL（VV）I37-NDD ，最低的为 AL（VV）I37-KNQ ，亲和力均高于 AL(VV)。
八种蛋白 AL、AL(VV)、ALI37-KTS、ALI37-TNQ、ALI37-NNN、AL(VV)I37-KNQ、 AL(VV)I37-NDD和
AL(VV)I37-NTQ 辣根过氧化物酶（HRP）标记后获得 HRP-AL、HRP-AL(VV)、HRP-ALI37-KTS、
HRP-ALI37-TNQ 、 HRP-ALI37-NNN 、 HRP-AL(VV)I37-KNQ 、 HRP-AL(VV)I37-NDD 和
HRP-AL(VV)I37-NTQ。用 ELISA方法比较其与人 IgM和 IgG的结合活性，结果显示 HRP-ALI37-KTS、
HRP-ALI37-TNQ 、 HRP-ALI37-NNN 的 结 合 能 力 均 高 于 HRP-AL ， HRP-AL(VV)I37-KNQ 和
HRP-AL(VV)I37-NTQ与人 IgM和 IgG的结合活性明显高于 HRP-AL(VV)。进而，我们用这 8种酶标二抗
对 40份抗-HIV阳性临床血清标本和 40份正常献血员血清标本进行抗-HIV ELISA检测显示：8种酶标二
抗对40份抗-HCV阴性正常献血员血清标本的检出效果相当；在3种AL插入突变体中，仅HRP-ALI37-NNN
对 40份抗-HIV阳性临床血清标本的检出效果明显好于 HRP-AL，显示出明显的统计学差异（P<0.001）；
在 3种 AL(VV)插入 突变体中，HRP-AL(VV)I37-KNQ和 HRP-AL(VV)I37-NTQ对 40份抗-HIV阳性临床
血清标本的检出效果明显好于 HRP-AL(VV)，显示出明显的统计学差异（P<0.001）。
结论：
本研究成功进行了对 NEIBM AL分子的体外分子进化改造，获得了与人 IgM和 IgG结合活性明显提高的
AL、 AL(VV) 6 种插入突变体分子， ALI37-KTS、 ALI37-TNQ、 ALI37-NNN、 AL(VV)I37-KNQ、
AL(VV)I37-NDD 和 AL(VV)I37-NTQ 。 其 中 ， HRP-ALI37-NNN 、 HRP-AL(VV)I37-KNQ 和
HRP-AL(VV)I37-NTQ能明显提高抗-HIV ELISA的检测效果，显示出明确的应用前景。本研究同时也提供
了一个应用分子进化手段改进蛋白分子功能的成功范例。
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39. HIV-1 Tat：艾滋病治疗性疫苗的希望与挑战
潘卫，廖文婷，陈秋莉，吴昊，李岚，曹洁，张华群，钱宝华，柴逸峰，王锦红
第二军医大学病原生物学教研室
北京佑安医院传染病中心
目的：了解 HIV-1 Tat在细胞和活体水平对生物代谢的影响、机体抗-HIV Tat的抗体反应特点及 HIV Tat
的免疫原性特点，为研发 HIV Tat为靶点的治疗性疫苗提供基础。
方法：应用 UHPLC-TOF/MS和 GC-MS进行代谢组学分析；应用 NEIBM-ELISA方法进行抗-HIV Tat的
抗体反应特点研究；对 HIV-1 Tat 免疫原进行设计改造，应用动物免疫、抗体效价、中和活性测定分析经
改造的 HIV Tat的免疫原性。
结果：HIV-1 Tat处理在细胞和小鼠活体水平产生了系统的代谢组学改变，涉及到脂代谢、糖代谢、氨基酸
代谢、磷酸代谢、三羧酸循环等多种代谢通路，进一步证实了 HIV-1 Tat的“病毒毒素样”效应。发现 HIV
感染人群中抗-HIV-1 Tat阳性率仅有 12.9%，首次发现存在两种抗-HIV-1 Tat的抗体反应类型，天然的抗
体反应非常脆弱，不能在体内长久维持。发现缺失 N端序列可以明显增强 C端的免疫原性。
结论：HIV-1 Tat对细胞和机体的代谢具有“病毒毒素”样的作用，丰富了 HIV的致病机制，增加了 HIV-1
Tat作为重要治疗性疫苗靶点的理据；HIV感染者存在两种不同的抗-HIV-1 Tat抗体反应，整体水平低下，
给治疗性疫苗的研发带来挑战；对 Tat的分子改造可以改变其免疫原性，有利于开发新型高效疫苗。
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40. 融合抑制剂 Enfuvirtide使针对 HIV-1 gp41 NHR的非中和抗体变为中和抗体：提示了一种新型的 HIV
治疗性疫苗策略
王茜1§ 毕稳稳1§ 朱小洁1 李浩洋1 于飞1 陆路1* 姜世勃1, 2*
1复旦大学医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室，上海市200032；2 Lindsley F. KimballResearch Institute, New York Blood Central, New York, NY10065, USA）§同等贡献
目的：研发 HIV疫苗的主要障碍之一是 HIV包膜糖蛋白不能诱导出具有中和活性的抗体。本文主要研究针
对 HIV-1 gp41 NHR免疫原所产生的抗体是否具有中和活性以及其与靶向 gp41的融合抑制剂 T20联合使
用是否具有协同效应。
方法：设计来源于 HIV-1 gp41上 NHR区的免疫原 N63，构建 N63表达载体并表达纯化 N63蛋白。用高
纯度 N63蛋白免疫小鼠和兔子后制备其血清，通过亲和层析获得相应 Anti-N63 IgG。在 HIV-1 Env所介导
的细胞融合抑制实验、HIV-1实验室适应株 IIIB（X4）和 Bal (R5) , 抗药毒株以及不同类型的 HIV毒株上
检测单独使用 anti-N63 IgG以及 anti-N63 IgG和 Enfuvirtide （T20）联合使用的抗病毒活性。
结果：细胞融合抑制实验结果显示，单独的 Anti-N63 IgG不具有抑制 HIV-1Env所介导的细胞融合活性，
但其与 T20联合使用后其对 HIV-1的抑制活性高达 88%。在病毒抑制试验上也获得了类似的结果，单独
使用的 Anti-N63 IgG在高达 3000nM的浓度下，对不同的 HIV-1活性株均未显示明显的抑制活性；但当其
与 T20联合使用后对 HIV-1IIIB（B，X4）和 HIV-1Bal（B，R5）均显示较强的抑制活性，尤其是对 T20
药物的抗性株抑制活性显著提高。其 IC50分别约为 73，89和 140nM，协同系数 CI为 0.16-0.26，这些
结果表明两者联合使用表现出强协同抑制效应：不仅使 N63作为免疫原所产生的针对 gp41 的非中和抗体
具有了中和活性，同时显著提高了 T20药物本身的抗病毒效果（提高了 3-8倍）。同时，我们也检测了一
系列不同亚型的 HIV临床毒株，结果显示 Anti-N63 IgG与 T20联合使用后对 HIV不同亚型（A，B，C，
D，A/E，F及 O）的毒株也均表现出明显的协同抑制效应，其协同系数 CI为 0.14-0.26。
结论：以上结果暗示了作用于融合阶段的 T20可使针对 HIV融合过程的一些非中和抗体变为中和抗体，
从而提示了一种新型的 HIV治疗性疫苗策略：在使用 T20药物的病人体内利用来源于 HIV-1 gp41上 NHR
功能区的免疫原（如 N63）作为疫苗，诱导出容易产生针对免疫原的特异性抗体，再与 T20药物发生协同
作用，结果使非中和抗体具有了中和活性，又增强了 T20药物的疗效；更重要的是由于作用靶点不同，该
策略还将对 T20抗性株有较好的疗效。因此该策略为 HIV治疗性疫苗的设计提供了新的思路和方法。
（联系作者：姜世勃，Email: [email protected]，陆路，Email：[email protected]）
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41. Characterization of co-occurring mutation in a LMV-resistant HBV isolate that promote
viral replication
Yongmei Zhang1, Jing Li1, Dawei Cai2, Ran Yan2, Yijun Zhang1, Haoxiang Zhu1, Hongyan Liu1, Yaoyue Kang1,
Jinyu Wang1, Yanli Qin1, Richeng Mao1, Haitao Guo2*, Jiming Zhang1, 3*
1 Department of Infectious Diseases, Huashan Hospital, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai,
China 2 Department of Microbiology and Immunology, Indiana University School of Medicine, 635 Barnhill
Drive, Indianapolis, Indiana, 46202, United States of America 3 Key Laboratory of Medical Molecular Virology
(MOH & MOE), Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai, China
Abstract
Hepatitis B virus replicates through an RNA intermediate. The lack of proofreading capacity of the viral DNA
polymerase, coupled with the high rate of HBV replication, result in the potential for mutations to be generated
within the entire genome. Under the pressure created by the nucleoside/nucleotide analogues, viruses with
resistance mutations are selected. However, replication fitness of the drug resistant mutants is markedly reduced
compared with the wild-type. Compensatory mutations which restore the viral replication capacity have been
reported under the continuously selection of lamivudine therapy, including rtL80V/I, rtL82M, rtV173L and
rtV207I, mostly in RT region. We here performed the study to demonstrate that the accelerated capsid assembly
resulted from the HBcAg mutations is also one of the important viral strategies which contribute to overcome the
antiviral drug pressure. We cloned the complete HBV genomes from the sera of CHB patients. The
transcomplement experiment showed that the enhanced viral replication results from the mutations in core protein.
The site mutagenesis was further performed, which revealed that the P5T mutation of core protein resulted in the
accelerated capsid assembly and the enhanced viral replication. The N-terminal of core peotein has been validated
to be an important domain in maintaining the stability of HBcAg dimer. We therefore performed the protein
structural analysis by using PyMOL software, which indicated that HBc AA5 was located at the interface of the
HBc dimer, which might affect the structural stability of the dimer. Our study also demonstrated that HBc P5T
mutation was significantly higher in acute on chronic liver failure (ACLF) patients than that of CHB patients.
Taken together, our study elucidated the correlation between P5T mutation and the high HBV replication. Further
study on the potential effect on HBV capsid assembly by P5T mutation is under investigation.
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42. 慢性乙型肝炎病毒基因型 C2的复制能力弱于基因型 B2主要与较低的 ENII/CP活性相关
秦艳丽，赵卫峰，周学士，贾昊迪，汪婷，宗莉，李菁，杨飞飞，张咏梅，
于洁，毛日成，童舒平，张继明
复旦大学附属华山医院
复旦大学上海医学院
感染 HBV基因型 C的患者与感染基因型 B的患者相比，HBeAg血清学转换时间发生晚，且更容易进展为
终末期肝病和肝细胞肝癌。我们前期体外转染实验发现 HBV基因型 B2复制能力强于基因型 C2，相应的
3.5kb RNA的转录水平也强于基因型 C2。3.5kb RNA主要参与 HBV的复制，其转录受 HBV核心启动子
的调控并进一步被 HBV的两种增强子（ ENI和 ENII）放大。本实验中我们首先通过构建荧光素酶报告质
粒，比较了 HBV的不同转录调节元件的活性，发现 HBV基因型 C2的 ENII/CP的转录活性显著弱于基因
型 B2。进一步从 Genbank库下载了 453条 HBV基因型 B2和 525条 HBV 基因型 C2 的全基因组序列，
比对结果发现，这两种基因型 ENII/CP 的核苷酸序列相对保守一致，且其中四个核苷酸位点
nt1633/1635/1636/1652（P1）具有基因型特异性。我们进一步在 HBV基因型 B2和 C2双体中置换相应
的 ENII/CP和 P1区域的核苷酸序列，结果发现当 B2基因型的 ENII/CP或 P1区域置换为相应 C2基因型
后其复制能力、转录水平和核心蛋白表达能力也显著下降，相反的 C2基因型置换后其复制能力、转录水
平和核心蛋白表达能力显著上升。HBV基因型 C的低复制能力可能导致较晚的免疫清除，感染后期启动
子区的突变使病毒的复制能力增强，进而导致肝细胞肝癌的发生。
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43. CVB3-VP1通过上调 miRNA21抑制了 PDCD4的表达
虞勇，虞莹，王兴冈，刘桂剑，邹云增，陈瑞珍*
复旦大学附属中山医院，卫生部病毒性心脏病重点实验室，上海，200032
Email: [email protected]
病毒性心肌炎（viral myocarditis,VMC）是心血管系统常见病，柯萨奇 B3病毒（CVB3）感染是其常见的
病因。最近的研究表明，CVB3感染造成的心肌微血管内皮细胞（myocardiac microvascular endothelial
cells，MMVECs）损伤是病毒性心肌炎发病的重要前驱环节，有研究表明 CVB3的 VP1蛋白（CVB3-VP1）
在 CVB3诱导的 MMVECs损伤中起了关键性作用，抑癌基因 Programmed cell death4（PDCD4）在 CVB3
感染的 MMVECs中不仅参与 AP-1介导的 MMVECs凋亡，还可能参与了心肌炎后的心肌纤维化进程。
CVB3感染的 MMVECs中 PDCD4的表达模式及其可能的调控机制目前还不清楚。为了探讨 CVB3-VP1
对 PDCD4表达可能的调控机制，本研究应用Western Blot、实时荧光定量 PCR方法检测了 CVB3感染
的体外培养的 MMVECs，与正常对照组相比，CVB3感染组 MMVECs中 VP-1mRNA和 VP-1蛋白表达
显著上升（P<0.01），PDCD4mRNA和蛋白表达显著下调（P<0.01）；构建 CVB3-VP1过表达载体转染
MMVECs，发现 CVB3-VP1的过表达明显下调 PDCD4蛋白表达（P<0.01）；与正常对照组相比，MMVECs
上过表达 CVB3-VP1同时诱导了 DNA甲基转移酶 DNMT1、DNMT3B的表达（P<0.05）；进一步的焦磷
酸测序分析未发现 CVB3-VP1过表达对 PDCD4启动子甲基化状态的改变（与正常对照组比较，P>0.05）；
qPCR方法检测发现 CVB3-VP1过表达上调了 miRNA21的表达（与正常对照组比较，P<0.05）。应用
RNAi方法抑制 CVB3-VP1的表达，WB结果显示 VP1的表达抑制下调而 PDCD4的表达上调（与对照组
比较，P<0.05）。以往的研究证实 PDCD4是 miRNA21的下游靶基因，我们先前的研究也提示 CVB3能
诱导 MMVECs中 miRNA21表达上调并靶向抑制 PDCD4的表达。本研究发现，CVB3-VP1对 PDCD4
的表达抑制不涉及其启动子区甲基化，而是通过上调 miRNA21的表达靶向抑制了 PDCD4的表达。
关键词：CVB3-VP1，miRNA21，PDCD4，MMVECs
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44. 高迁移率族蛋白 B1通过晚期糖基化终末受体促进科萨奇病毒 B3所致病毒性心肌炎心脏炎症损伤
虞莹 虞勇 刘桂剑 刘羽曦 陈瑞珍
复旦大学附属中山医院心内科
卫生部病毒性心脏病重点实验室
上海市心血管病研究所
【目的】 观察胞外高迁移率族蛋白 B1 (HMGB1) 在科萨奇病毒 B3 (CVB3) 所致病毒性心肌炎心脏炎症
损伤中的作用及机制。
【方法】以 CVB3感染 BALB/c 小鼠建立病毒性心肌炎模型，并利用 HMGB1 抑制剂丙酮酸乙酯 (EP) 于
病毒感染前干预，作如下分组：对照组 (n=8)，EP组(n=8)，病毒组 (n=8)，病毒+EP组 (n=8)。感染期
间每天记录各组小鼠死亡情况，评估心肌组织及血清中 HMGB1 表达及分布，利用 HE 染色评估心肌炎
症浸润程度，测定各组小鼠心脏中炎症因子 IFN-γ、IL-17 水平，及 HMGB1 主要受体 toll 样受体 4
(TLR4)、晚期糖基化终末受体 (RAGE)。
【结果】 (1) HMGB1 抑制剂 EP 能明显降低心肌炎小鼠心脏中 HMGB1 表达，有效抑制 CVB3 所致
HMGB1从心肌组织的胞核易位至胞浆、胞外，并且能显著减少血清中 HMGB1 水平。 (2) 与病毒组相比，
病毒+EP 组小鼠死亡率下降，心肌组织炎症浸润面积减少，同时炎症因子 IFN-γ、IL-17 水平也有不同程
度的下降。 (3) 与病毒组相比，病毒+EP 组心脏中 RAGE 表达显著下降，而 TLR4 受体没有明显改变。
【结论】胞外 HMGB1 可能通过 RAGE 受体上调炎症因子 IFN-γ、IL-17 水平，增加病毒性心肌炎小鼠
心脏炎症损伤，促进病毒性心肌炎发生。
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45. The mechanisms of Hyporesponsiveness to Hepatitis B vaccine inB10.S Mice
Xiaofei Li, Jing Xu, Zhihui Lv, Jing Wang, Shuhui Sun, Wei Zhu, Bin Wang, Rui He, Di Qu*
Key Laboratory of Medical Molecular Virology of MOE and MOH, Shanghai Medical College of Fudan
University, Shanghai, ChinaRm 1103, Zhidao Building, No.131 Dongan Rd, Xuhui District, Shanghai, China, 200032
Aims：
Immunization with hepatitis B vaccine is the most effective means of preventing HBV
infection. However, after hepatitis B vaccination in accordance with WTO recommendations, there
are still 5-10% of normal vaccinees have antibody titers below the protection threshold (100mIU /
ml), which is called hepatitis B vaccine low / non response. Hepatitis B vaccine low / non
responders are still at risk of HBV infection. Therefore, it is very important to improve the hepatitis
B vaccine efficacy in low / non-responders. The studies of the mechanisms of low response to
hepatitis B vaccine will shed light on the exploration of enhancing the immune response to hepatitis
B vaccine. But so far, the studies of the mechanisms are mostly focus on the humoral immune
response, the molecular and cellular mechanisms need further studies. In the present study, C57BL /
10J (B10, H-2b, good responder) and B10.S-H2S / SgMcdJ (B10.S, H-2s, low responder) mice
were used as animal models to further study the molecular and cellular mechanisms of low response
to hepatitis B vaccine.
Methods:
We observed the low response to HBsAg in B10.S mice at different levels, including the anti
-HBs level, HBsAg-specific plasma cells, Th cells and APC cellular level, as well as the interaction
of APCs and Th cells. ELISA and ECLIA (electrochemiluminescence immunoassay) assays were
used to detected the serum level of anti-HBs in B10 and B10.S mice; the number of HBsAg specific
plasma cells in both spleens and the bone marrows of B10 and B10.S mice were examined by B cell
ELISpot assay. We next examined the effects of HBsAg specific Th cells on low response to
Hepatitis B vaccine in B10.S mice, the number of HBsAg specific Th cell subsets was analyzed by
flow cytometry; we took PD-1 receptor and Treg cells as examples to study the effects of inhibiting
factors on low response to Hepatitis B vaccine in B10.S mice. To test the role of APCs in the low
response to hepatitis B vaccine in B10.S mice, the expression of CD40, CD80, CD86 and CCR7 on
draining lymph nodes of B10 and B10.S mice were examined by flow cytometry three days after
priming with HBsAg. To further study the activation of HBsAg-specific CD4+T cells by APCs, the
CD4+T cells from F1 hybrid mice were sorted (MACS) and co-cultured with BMDCs from B10,
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B10.S or F1 mice, the proliferation of CD4+ T cells were determined by flow cytometry.
Additionally, we also compared the amino acid sequence and the structures of MHCII molecules in
B10 and B10.S mice; and finally we predicted the Th epitopes of HBsAg for B10 and B10.S mice
using Rankpep software.
Results:
We found the significant lower level of anti-HBs in B10.S mice both after priming and boosting
of three different doses (0.25μg, 0.5μg and 1μg / dose) of hepatitis B vaccine (P < 0.01). The
number of HBsAg specific IgG secreting B cells in both spleens and bone marrows of B10.S mice
were 11.53 ± 8.24 and 72.65 ± 10.28 respectively, significantly lower than that in B10 mice, 197.67
± 33.56 and 172.01 ± 48.50 respectively (P = 0.007, P = 0.005). The ratios of CD4+ IL-2 + (P =
0.004), CD4+ IL-4+ (P <0.001), CD4+ IFN-γ+ (P <0.001), CD4+ TNF-α+ (P = 0.019) and CD4+
IL-17+ (P = 0.032) cells in B10.S CD4+ T cells and the ratio of CD4+ CD25+ Foxp3+ T cells
(P=0.036) in B10.S spleens were much lower than that in B10 mice; the (PD-1 + cells) / (PD-1- cells)
ratio in CD4+ IL-2+ and CD4+ IFN-γ+ double positive T cells in B10.S mice spleens was
significantly lower than that in B10 mice (P=0.005, P < 0.001). Moreover, the expression (MIF) of
CD40, CD86 and CCR7 was significantly lower than that in LNDCs from B10 mice (P < 0.001, P =
0.003, P = 0.001), the proliferation index of CD4+T cells in B10.S co-culture was much lower than
that in B10 mice. We also found there was a 23 amino acids deletion in the N-terminal of I-As
molecules and the addition of PreS1 and PreS2 will significantly increase the immunogenicity of
hepatitis B vaccine.
Conclusions:
In summary, in this study, we have explored the mechanisms of low response to hepatitis B
vaccine in B10.S mice and found the low level maturation and migration activities of antigen
presenting cells (DCs); the defective activation of HBsAg-specific Th cells by antigen presenting
cells; the low response of HBsAg-specific Th and plasma cells, resulting in the low levels of anti
-HBs in serum. These findings will shed light on the exploration of enhancing the immune response
to hepatitis B vaccine.
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46. 新型重组 CA6 病毒的发现鉴定和流行病学特征的研究
宋志刚 1，管文彩 1，冯晓博 2，俞慧菊 2，张晓玲 1，孟哲峰 1，姚志荣 2，袁正宏 1，3 胡芸文 1，3
1，复旦大学附属上海市公共卫生临床中心 2，上海交通大学附属新华医院；
3，复旦大学医学分子病毒重点实验室；
通讯作者：胡芸文 e-mail: [email protected]. 袁正宏 e-mail: [email protected]
目的：柯萨奇病毒A6（CVA6）已逐渐成为导致儿童手足口病的主要病原体之一，深入了解上海地区CVA6病
毒分子流行病学与生物学特性对手足口病诊治和防控工作具有重要意义。
方法：本研究在2012年1月至2013年9月期间，共收集手足口病患者626例，采集咽拭子、粪便、疱疹拭子
和血清标本共1251份，收集患者临床和流行病学数据；利用snRT-PCR联合DNA测序的方法对肠道病毒进行
基因分型，通过Simplot软件和GARD软件对随机选14个CVA6代表株的全基因组序列进行重组分析，再利用
双重RT-PCR监测临床重组CVA6毒株；然后根据VP1、2C和3D基因序列利用MEGA5进化树软件构建系统进化树
进行病毒的基因型和重组验证。在此基础上对CVA6野生型毒株和重组毒株的温度敏感性、细胞嗜性及复制
动力学等生物学特性进行比较研究。
结果：2012 年 1 月至 2013 年 9 月期间的 626 例手足口病患者中，609 例确诊了病毒血清型，最多的是 CVA6，
共 292 例（46.6%）；其次依次为 EV71（181，28.9%），CA16（96，15.3%），其他病毒（34，5.4%）。为
解释 CVA6 的高位流行现象，我们对代表株进行了全基因测序，发现 CVA6 毒株中除了与往年已流行的野生
型外，部分病人感染的是国际上未曾报道过的新型重组毒株。针对这一重组突变，设计双重 PCR 对本研究
中所有CVA6阳性标本进行回顾性检测，发现野生型和新重组型分别为228株（占78.08%），64株（占21.92%）。
CVA6 重组株在 2012 年 11 月出现，随后在 CVA6 阳性病例中的比率逐月上升，在 2013 年 7 月份达到最高，
占 CVA6 阳性病例的 58.8%。基于全基因重组分析，我们发现重组型 CVA6 的 2C 基因与 CVA4 病毒株高度同
源，分子进化树分析确认重组株是 CVA6 和 CVA4 的嵌合体。时钟进化分析也证实了新型重组型 CVA6 病毒
最新出现于 2012 年，并迅速在人群中传播流行，成为独特的一个分支。临床数据分析发现，与野生型 CVA6
毒株感染导致的典型手足口病临床表现不同，重组型病毒的主要皮疹分布在上肢、下肢和躯干前部，具有
广泛性皮疹的特征，五个以上部位出现皮疹的几率显著高于野生型 CVA6 毒株（P值为 0.022）。进一步的
生物学特性研究发现，CVA6 病毒重组株在 33.5 度下比野生株复制能力强，对 RD 细胞敏感，而在 HEP2、
MRC5 与 KB 细胞上病毒无增值；生长动力曲线显示，CVA6 病毒的增值速度比 EV71 和 CA16 的速度快。
结论：本研究发现在上海地区自 2012 年起 CVA6 病毒成为手足口病主要病原体至一，流行期间出现新重组
型 CVA6 病毒，其非结构蛋白 2C 基因可能来自柯萨奇 A4 型病毒；该病毒与野生型 CVA6 病毒相比，易发生
泛发性皮疹，在低温下复制能力更强，可能是与疫情的暴发流行原因之一。因此，进一步深入研究其生物
学特性和免疫保护等特征对手足口病的防治工作有重要的意义。
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47. miR-548j 通过靶向 ZBTB11 下调 CHB 患者 I 型 IFN 产生
鱼康康 李宁
复旦大学附属华山医院感染科
目的 通过分析HBV感染者与正常人外周血中miRNA表达谱的差异，筛选鉴定出与HBV感染后患者I型 IFN
下调相关的 miRNA，并证明 miRNA 对慢乙肝患者 I型 IFN 的调控及其机制。
方法 收集健康对照者（30 例）、慢性乙型肝炎患者（30 例）及乙型肝炎肝衰竭患者（30 例）的外周血，
应用高通量芯片检测各组的 miRNA 表达谱。根据 qPCR 等方法鉴定出表达差异显著的目标 miRNA，并进一步
通过敲降及过表达目标 miRNA，明确其对 I型 IFN 的调控作用。然后通过生物信息学分析确定目标 miRNA
的候选靶基因，最终通过报告基因实验证实目标 miRNA 的靶基因。
结果 芯片分析及 qPCR 结果显示 miR-548j 在慢乙肝组表达显著高于正常对照组。通过敲降及过表达
miR-548j 我们发现 I型 IFN 表能够相应地显著上调或下调。随后通过生物信息学分析，我们发现 ZBTB11,
NR3C2 等是 miR-548j 的潜在靶基因，最后通过报告基因实验我们证实 miR-548j 能够直接靶向 ZBTB11。
结论 慢乙肝患者 miRNA 表达谱与正常人存在明显差异，其中 miR-548j 能够调控慢乙肝患者 I型 IFN 的产
生，且其作用靶标为 ZBTB11。
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48. Serum microRNA-29 levels correlate with disease progression in patients with chronic
hepatitis B virus infection
Chong Huang Ning Li
复旦大学附属华山医院感染科上海 200040
ABSTRACTOBJECTIVE: To investigate the role of serum microRNA-29 (miR-29) as a biomarker for the prediction of diseaseprogression in patients with chronic hepatitis B virus (HBV) infection.
METHODS: Using real-time quantitative polymerase chain reaction assay, serum miR-29a, miR-29b and miR-29clevels were measured in patients with chronic HBV infection, and the correlation between serum miR-29 levels and theparticipants’ liver biochemistry, fibrotic stage and necroinflammation grade were also evaluated.
RESULTS: Altogether 91 patients with chronic HBV infection were divided by fibrotic stage into S0/1 (no or mildfibrosis), S2/3 (progressive fibrosis) and S4 (cirrhosis) subgroups, and 12 healthy individuals were also included in thestudy. Serum miR-29a and miR-29c in S0–3 were significantly higher than those in S4 patients (P < 0.001); however,the difference between S0/1 and S2/3 patients was not significant. MiR-29b levels were higher in S0/1 patients than inother patient groups, but did not differ between S2/3and S4 patients. At fibrotic stages of S0/1 and S2/3, patients withno or mild liver inflammation (G0/1) tended to express higher miR-29 levels than those with advanced inflammation(G2–4) (P > 0.05). MiR-29a–c showed significant correlation with alanine transaminase levels (P < 0.05 for miR-29a,miR-29b and miR-29c) in S0–3 patients. The expression of miR-29 was highest in immune-tolerant patients (P <0.001).
CONCLUSIONS: Serum miR-29 levels are negatively correlated with liver fibrotic stages andnecroinflammation grades in patients with chronic HBV infection. miR-29 appears to be a novel biomarker forpredicting disease progression in these patients.
