7/27/2019 Passive Diffusion Technique for Concentration of Short Chain Volatile Fatty Acids From Seawater

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A P P L I E D AND ENVIRONMENTAL M I C R O B I O L O G Y , O c t . 1 9 8 5 , p . 1 1 1 2 - 1 1 1 40 0 9 9 - 2 2 4 0 / 8 5 / 1 0 1 1 1 2 - 0 3 $ 0 2 . 0 0 / 0C o p y r i g h t ) 1 9 8 5 , A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y

P a s s i v e D i f f u s i o n T e c h n i q u e f o r C o n c e n t r a t i o n o f S h o r t - C h a i nV o l a t i l e F a t t y A c i d s f r o m S e a w a t e r tJOHN J . MOLONGOSKI* AND C R A I G D . TAYLOR

D e p a r t m e n t o f B i o l o g y , Woods H o l e O c e a n o g r a p h i c I n s t i t u t i o n , Woods H o l e , M a s s a c h u s e t t s 0 2 5 4 3R e c e i v e d 2 1 M a r c h 1 9 8 5 / A c c e p t e d 1 7 J u l y 1 9 8 5

A d i f f u s i o n c h a m b e r i s d e s c r i b e d w h i c h c o n c e n t r a t e s s h o r t - c h a i n , v o l a t i l e f a t t y a c i d s from s e a w a t e r w h i l es i m u l t a n e o u s l y s e p a r a t i n g t h e m f r o m i n t e r f e r i n g s a l t s . The p r o c e d u r e r e l i e s o n t h e p a s s i v e d i f f u s i o n o f v o l a t i l ec o m p o u n d s f r o m a c i d i f i e d s e a w a t e r s a m p l e s a n d t h e i r s u b s e q u e n t a b s o r p t i o n o n t o a b a s e - i m p r e g n a t e d f i l t e r .T h e m e t h o d i s s i m p l e , e f f i c i e n t , a n d a d a p t a b l e t o m o s t c o m m o n l y u s e d methods o f v o l a t i l e a c i d a n a l y s i s .D e s p i t e t h e em erg ence o f numerous t e c h n i q u e s f o r t h ed e t e r m i n a t i o n o f v o l a t i l e f a t t y a c i d s ( V F A s ) ( 1 , 3 , 4 , 6 , 9 ) , t h eq u a n t i f i c a t i o n o f t h e s e c o m p o u n d s i n m a r i n e s y s t e m s r e -m a i n s d i f f i c u l t ( 8 ) . I n p a r t b e c a u s e o f m e t h o d o l o g i c a l a n da n a l y t i c a l c o n s t r a i n t s , m e a s u r e d c o n c e nt r a t i o ns o f VFAs i nv a r i o u s a n o x i c m a r i n e pore w a t e r s h a v e b e e n f o u n d t o varyw i d e l y ( i . e . , 1 . 0 t o 1 0 , 0 0 0 p . M f o r a c e t i c a c i d ) ( 2 , 5 , 7 , 8 ) . T h ed e t e c t i o n o f VFAs i n s a l i n e e n v i r o n m e n t s i s h i n d e r e d b o t hb y t h e i r r e l a t i v e l y l o w c o n c e n t r a t i o n s i n t h e s e h a b i t a t s a n db y t h e presence o f l a r g e amounts o f s a l t , w h i c h i n t e r f e r e sw i t h most a n a l y t i c a l p r o c e d u r e s .Vacuum d i s t i l l a t i o n p r o c e d u r e s h a v e r e c e n t l y b e e n u s e df o r t h e r e m o v a l o f s a l t f r o m m a r i n e s a m p l e s b e f o r e VFAa n a l y s i s ( 1 0 , 1 1 ) . Vacuum d i s t i l l a t i o n h a s p r o v e d t o b e d i r e c ta n d e f f i c i e n t , b u t i t i s g e n e r a l l y l i m i t e d t o s m a l l s a m p l e s i z e sa n d i s n o t a p p l i c a b l e t o t h e r a p i d p r o c e s s i n g o f m anys a m p l e s . W e d e s c r i b e a n a l t e r n a t i v e p a s s i v e d i s t i l l a t i o np r o c e d u r e w h i c h c o n c e n t r a t e s v o l a t i l e c o m p o u n d s s u c h a sa c e t i c a c i d f r o m s e a w a t e r w h i l e s i m u l t a n e o u s l y s e p a r a t i n gt h e m f r o m i n t e r f e r i n g s a l t s .O u r m e t h o d r e l i e s on t h e p a s s i v e d i f f u s i o n o f v o l a t i l ec o m p o u n d s f r o m a n a c i d i f i e d s e a w a t e r s a m p l e a n d t h e i r

s u b s e q u e n t a b s o r p t i o n o n t o a b a s e - i m p r e g n a t e d f i l t e r . Thed i s t i l l a t i o n i s c o n d u c t e d i n d i f f u s i o n c h a m b e r s ( F i g . 1 ) con-s i s t i n g o f a 1 - i n . ( 2 . 5 4 - c m ) - t h i c k s o l i d p i e c e o f p o l y v i n y lc h l o r i d e ( 4 - i n . [ c a . 1 0 c m ] o u t s i d e d i a m e t e r ) w h i c h wasm a c h i n e d t o f o r m a s a m p l e r e s e r v o i r o f l a r g e s u r f a c e - t o -v o l u m e r a t i o . E a c h c h a m b e r ca n h o l d up t o 1 0 m l o f s a m p l e .A s h a r p e n e d c e n t e r p o s t ( P ) a l l o w s a p o t a s s i u m h y d r o x i d e -i m p r e g n a t e d f i l t e r ( F ) t o b e s u s p e n d e d a b o v e t h e seawaters a m p l e . When t h e f i l t e r i s i n p l a c e , t h e s a m p l e i s a c i d i f i e d t opH 1 . 0 or l e s s , a n d t h e c h a m b e r i s i m m e d i a t e l y s e a l e d b yc l a m p i n g a 3 / 8 - i n . ( c a . 0 . 9 5 - c m ) p o l y v i n y l c h l o r i d e l i d ( L )a g a i n s t a r e c e s s e d 0r i n g ( O R ) l o c a t e d a r o u n d t h e c h a m b e rr i m . E a c h c h a m b e r can b e l o a d e d s u c h t ha t t h e s a m p l e a n da c i d d o n o t m i x u n t i l t h e c h a m b e r i s s e a l e d , p r e v e n t i n g t h el o s s o f a ny v o l a t i l e a c i d compound t o t h e a t m o s p h e r e . Thes e a l e d c h a m b e r s a re t h e n s t a c k e d u p r i g h t i n m u l t i p l e s o f f o u ri n s t a i n l e s s s t e e l p r es s es a n d i n c u b a t e d a t 5 5 C w i t h g e n t l em i x i n g on a r o t a r y s h a k e r ( i n c u b a t i o n temperatures e x c e e d -i n g 6 0 C w i l l cause s o f t e n i n g or m e l t i n g o f t h e p o l y v i n y lc h l o r i d e c h a m b e r s ) .D u r i n g i n c u b a t i o n , V F A s c o n t a i n e d i n t h e a c i d i f i e d sea-w a t e r s a m p l e ( S ) d i f f u s e out o f s o l u t i o n ( a r r o w s i n F i g . 1 ) anda re a b s o r b e d onto t h e f i l t e r ( F ) , w h e r e t h e y a r e t r a p p e d as

* C o r r e s p o n d i n g a u t h o r .t W o o d s Hole O c e a n o g r a p h i c I n s t i t u t i o n c o n t r i b u t i o n no . 5 8 4 9 .

t h e i r p o t a s s i u m s a l t s . A f t e r d i f f u s i o n i s c o m p l e t e , t h e c h a m -b e r s are o p e n e d , a n d t h e f i l t e r s are r e m o v e d , d r i e d a t 6 0 C ,a n d s t o r e d d e s i c c a t e d o v e r N a O H f o r s u b s e q u e n t V FAa n a l y s i s .A t i m e course o f t h e v o l a t i l i z a t i o n a n d recovery o f a c e t i ca c i d b y t h e p a s s i v e d i s t i l l a t i o n t e c h n i q u e i s s h o w n i n F i g . 2 .[ U - ' 4 C ] s o d i u m a c e t a t e ( 2 , u C i / m l ) w a s a d d e d t o s e a w a t e rp r e v i o u s l y f i l t e r e d t h r o u g h a M i l l i p o r e - t y p e GS m e m b r a n ef i l t e r ( 0 . 2 2 p . m pore s i z e ) t o y i e l d a f i n a l c o n c e n t r a t i o n o fr a d i o l a b e l e d a c e t a t e o f 0 . 3 p u M . R ep l i c a t e 5 - m l s a m p l e s o ft h e r a d i o l a b e l e d s e a w a t e r w e r e a d d e d t o a s e r i e s o f d i f f u s i o nc h a m b e r s . Whatman 2 . 4 - c m G F / F g l a s s f i b e r f i l t e r s , precom-b u s t e d a t 5 0 0 C a n d t h e n w e t t e d w i t h 2 5 0 , u l o f 0 . 5 N aqueousp o t a s s i u m h y d r o x i d e ( e q u i v a l e n t t o 1 2 5 , u m o l o f KOH), w e reu s e d as t r a p p i n g f i l t e r s . H a l f o f t h e s e a w a t e r s a m p l e s w er ea m e n d e d w i t h 2 5 0 p . l o f a b s o l u t e m e t h a n o l ; t h e o t h e r h a l fr e c e i v e d no m e t h a n o l a d d i t i o n . E a c h s a m p l e was t h e n a c i d -i f i e d w i t h 0 . 5 m l o f 1 8 N H 2 S O 4 , s e a l e d , a n d i n c u b a t e d a sd e s c r ib e d a b o v e . D u p l i c a t e c h a m b e r s w e r e o p e n e d a t t h ei n d i c a t e d t i m e s , a n d t h e f i l t e r s a n d s a m p l e r e s e r v o i r s w e r ea s s a y e d f o r r a d i o a c t i v i t y b y l i q u i d s c i n t i l l a t i o n s p e c t r o m e -t r y .T h e r a d i o l a b e l e d a c e t a t e c o n t a i n e d i n t h e m e t h a n o l -a m e n d e d s e a w a t e r s a m p l e s was q u a n t i t a t i v e l y r e c o v e r e d ont h e t r a p p i n g f i l t e r a f t e r 1 2 h o f i n c u b a t i o n (K OH/MeOHf i l t e r s ; F i g . 2 ) . L e s s t h a n 1% o f t h e a d d e d l a b e l r e m a i n e d i ns o l u t i o n a f t e r 1 2 h (KOH/MeOH r e s e r v o i r s ) . When m e t h a n o lwas n o t a d d e d t o t h e s e a w a t e r s a m p l e s , t h e recovery o f[ 1 4 C ] a c e t a t e o n t h e f i l t e r s was n o t c o m p l e t e e v e n a f t e r 4 5 h( F i g . 2 , KOH f i l t e r s ) . L a b e l n o t r e c o v e r e d on t h e f i l t e r sr e m a i n e d i n s o l u t i o n ( F i g . 2 , KOH r e s e r v o i r ) .T h u s , t h e a d d i t i o n o f m e t h a n o l t o t h e seawater s a m p l e sg r e a t l y a c c e l e r a t e d t h e k i n e t i c s o f a c e t a t e recovery on t h ef i l t e r s . T h i s e n h a n c e m e n t was p r i m a r i l y t h e r e s u l t o f i n -c r e a s e d v o l a t i l i z a t i o n o f a c e t a t e i n t o t h e d i f f u s i o n c h a m b e ra t m o s p h e r e ( T a b l e 1 ) . M e t h a n o l ca n b e a d d e d d i r e c t l y t o t h es e a w a t e r s a m p l e s a s i n F i g . 2 or b y w e t t i n g t h e t r a p p i n g f i l t e rw i t h m e t h a n o l i c r a t h e r t h a n aqueous K O H . We f o u n d t h et w o m e t h o d s gave s i m i l a r r e s u l t s ( T a b l e 1 ) . The d a t a i n T a b l e1 a l s o s h o w t h e c o nc e nt r at i o n o f p o t a s s i u m h y d r o x i d e re -q u i r e d f o r o p t i m a l recovery o f a c e t i c a c i d t o b e 0 . 5 N .R e c o v e r y o f [ 1 4 C ] a c e t i c a c i d f r o m seawater b y t h e p a s s i v ed i s t i l l a t i o n t e c h n i q u e was c o n s t a n t over a range o f s i x o r d e r so f m a g n i t u d e o f a d d e d a c e t a t e ( T a b l e 2 ) . I n a d d i t i o n , t h ep r o c e d u r e was a p p l i c a b l e f o r t h e t r a p p i n g o f V F A s o t h e rt h a n a c e t i c a c i d . N e a r l y q u a n t i t a t i v e r ec o v e r y was o b t a i n e df o r f o r m i c , p r o p i o n i c , a n d b u t y r i c a c i d s ( T a b l e 3 ) . R e c o v e r y

1 1 1 2

V o l . 5 0 , N o . 4

7/27/2019 Passive Diffusion Technique for Concentration of Short Chain Volatile Fatty Acids From Seawater

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N O T E S 1 1 1 3

L

FIG. 1 . A p p a r a t u s f o r p a s s i v e d i f f u s i o n o f v o l a t i l e a c i d com-p o u n d s from s e a w a t e r s a m p l e s .

o f a l e s s v o l a t i l e c o m p o u n d , l a c t i c a c i d , w a s n o t q u a n t i t a t i v e ,however ( T a b l e 3 ) .A n e x p e r i m e n t was a l s o p e r f o r m e d w i t h n o n v o l a t i l e[ " 4 C ] g l u c o s e as t r a c e r t o v e r i f y t h a t t h e recovery o f 1 4 C o nt h e t r a p p i n g f i l t e r was t h e r e s u l t o f v o l a t i l i z a t i o t l a n d d i f f u -s i o n and n o t o f a e r o s o l t r a n s p o r t o f s a m p l e o n t o t h e f i l t e r . Ass h o w n , e s s e n t i a l l y none o f t h e [ ' 4 C ] g l u c o s e ( 0 . 2 % or l e s s )a p p e a r e d on t h e f i l t e r s ; r a t h e r , t h e l a b e l r e m a i n e d q u a n t i t a -t i v e l y i n s o l u t i o n ( T a b l e 3 ) .T he p a s s i v e d i f f u s i o n t e c h n i q u e i s a s i m p l e a n d e f f i c i e n tmethod f o r d e s a l t i n g a n d c o n c e n t r a t i n g V F A s f r o m s e a w a -t e r . Once t h e c h a m b e r s a re c o n s t r u c t e d , t h e p r o c e d u r e i si n e x p e n s i v e t o do a n d p r a c t i c a l f o r us e a t s e a , a n d i t r e s u l t si n a s p a c e - c o n s e r v i n g , e a s i l y s t o r a b l e p r o d u c t ( i . e . , d e s i c -

10 080

10 07 5

' b1b..

50

2 50

10 0

75

50

25

00 8 1 6 2 4 3 2 40 48

T / M E ( h o u r s /F I G . 2 . Time course o f v o l a t i l i z a t i o n a n d recovery o f [ ' 4 C ] a c e t i ca c i d f r o m s e a w a t e r b y p a s s i v e d i f f u s i o n t e c h n i q u e . F i n a l c o n c e n t r a -t i o n o f [ " 4 C ] a c e t i c a c i d ( 2 , u C i / m l ) was 0 . 3 , u M . A 5 - m l s a m p l e o f' I C - l a b e l e d s e a w a t e r was i n c u b a t e d w i t h s h a k i n g f o r 24 h a t 5 5 C .D a t a were d e r i v e d from t w o s e p a r a t e e x p e r i m e n t s : c l o s e d s y m b o l s ,e x p e r i m e n t 1 ; open s y m b o l s , e x p e r i m e n t 2 . S y m b o l s : * a nd O , t o t a l

recovery, KOH t r a p a l o n e ; 0 and 0 , t o t a l r e c o v e r y with KOHt r a p p l u s s e a w a t e r s a m p l e amended w i t h m e t h a n o l ; 0 a nd 0,s e a w a t e r s a m p l e s n o t amended w i t h m e t h a n o l ; Aa nd A, seawaters a m p l e s amended w i t h m e t h a n o l .

T A B L E 1 . E f f e c t o f m e t h a n o l a n d p o t as s i u m h y d r o x i d ec o n c e n t r a t i o n o n t h e r e c o v e r y o f [ 1 4 C ] a c e t i c a c i d b y t h e p a s s i v ed i f f u s i o n t e c h n i q u e a[ ' 4 C ] a c e t a t e ( % )

KOH c o n c n ( N ) T r a p p e d o n R e m a i n i n g i n R e c o v e r e df i l t e r s o l u t i o n

0 . 1 0 ( M e t h a n o l i c 5 5 . 2 0 . 4 4 2 . 4 0 . 4 9 7 . 6 0 . 7f i l t e r )0 . 2 5 ( M e t h a n o l i c 8 8 . 8 9 . 0 8 . 8 8 . 7 9 7 . 6 0 . 3f i l t e r )0 . 4 0 ( M e t h a n o l i c 9 7 . 4 0 . 6 0 . 9 3 0 . 2 9 8 . 3 0 . 4f i l t e r )0 . 5 0 ( M e t h a n o l i c 9 7 . 5 0 . 6 0 . 4 9 0 . 1 9 8 . 0 0 . 7f i l t e r )0 . 5 0 ( A q u e o u s 6 9 . 2 4 . 6 3 0 . 9 4 . 0 1 0 0 . 1 0 . 8f i l t e r )0 . 5 0 ( A q u e o u s 9 8 . 7 2 . 2 0 . 5 8 0 . 1 9 9 . 2 2 . 2f i l t e r ; M e O Hi n s a m p l e )None 0 1 0 0 . 7 1 . 0 b 1 0 0 . 7 1 . 0None (MeOH i n 0 9 1 . 6 + 3 . 5 b . c 9 1 . 6 3 . 5s a m p l e )aThe p e r c e n t r e c o v e r i e s r e p o r t e d a r e t h e m e a n v a l u e s o f d u p l i c a t e d e t e r -m i n a t i o n s 1 s t a n d a r d e r r o r . F i n a l c o n c e n t r a t i o n o f [ 1 4 C ] a c e t i c a c i d ( 2

, u C i / m l ) w a s 0 . 3 F . M . S a m p l e s ( 5 m l ) w e r e i nc u b at e d w i th s h ak i ng f o r 2 4 h a t5 5 C .b F u r t h e r i n c u b a t i o n i n e i t h e r t h e a b s e n c e o r p r es e nc e o r M e O H r e s u l t e d i nn o a d d i t i o n a l l o s s o f [ 4 C ] a c e t i c a c i d f r o m s o l u t i o n , i n d i c a t i n g t h a t e q u i l i b r i u mb e t w e e n t h e s a m p l e r e s e r v o i r a n d c h a m b e r h e a d s p a c e h a d b e e n a t t a i n e d b y2 4 h .c L o s s o f r a d i o a c t i v i t y f r o m s o l u t i o n w a s l i k e l y t h e c o n s e q u e n c e o f e n -h a n c e m e n t o f t h e e q u i l i b r i u m p a r t i t i o n i n g o f [ 1 4 C ] a c e t i c a c i d i n t o t h eh e a d s p a c e b y M e O H. V o l a t i l i z e d a c e t a t e w a s l o s t t o t h e a t m o s p h e r e w h e n t h ec h a m b e r s w e r e o p e n e d .

c a t e d g l a s s f i b e r f i l t e r s ) . M u l t i p l e s a m p l e s c a n b e p r o c e s s e ds i m u l t a n e o u s l y , d e p e n d i n g o n t h e n u m b e r o f c h a m b e r s a v a i l -a b l e . T h e t i m e r e q u i r e d f o r t h e r e c o v e r y o f VFAs c a n b er e d u c e d f u r t h e r i f d e s i r e d b y r a i s i n g t h e s a m p l e i n c u b a t i o nt e m p e r a t u r e . As n o t e d p r e v i o u s l y , h o w e v e r , t h a t w o u l dn e c e s s i t a t e c o n s t r u c t i n g t h e c h a m b e r s f r o m a m o r e h e a t -s t a b l e m a t e r i a l .T h e p r i m a r y a d v a n t a g e o f t h i s t e c h n i q u e i s i t s p o t e n t i a l f o ro n e - s t e p s a m p l e c o n c e n t r a t i o n . A l t h o u g h t h e e x p e r i m e n t sd e s c r i b e d a b o v e u s e d a 5 - m l s a m p l e s i z e , w e q u a n t i t a t i v e l yr e c o v e r e d 1 4 C - l a b e l e d VFAs f r o m 1 0 - m l s a m p l e s a s w e l l .T h e r e s u l t i n g f i l t e r c a n b e r e s o l v a t e d i n a minimum v o l u m e( i . e . , 0 . 1 t o 0 . 2 m l ) , r e s u l t i n g i n a t h e o r e t i c a l 5 0 - t o 1 0 0 - f o l d

T A B L E 2 . E f f e c t o f a c e t i c a c i d c o n c e n t r a t i o n o n r e c o v e r y b y t h ep a s s i v e d i f f u s i o n t e c h n i q u e aA c e t a t e [ 1 4 C ] a c e t a t e ( % )c o n c n T r a p p e d o n Rem ainingReord( A L M ) f i l t e r i n s o l u t i o n R e c o v e r e d

1 0 , 0 0 0 9 6 . 4 1 . 7 3 . 3 1 . 5 9 9 . 7 0 . 21 , 0 0 0 9 8 . 2 0 . 2 3 . 0 3 . 4 1 0 1 . 2 3 . 11 0 0 9 6 . 9 0 . 5 1 . 1 0 . 7 9 8 . 0 0 . 21 0 9 7 . 7 0 . 3 0 . 5 1 0 . 7 9 8 . 2 0 . 41 9 7 . 5 2 . 9 2 . 7 3 . 0 9 7 . 2 0 . 0 70 . 3 0 9 7 . 4 0 . 4 0 . 5 5 0 . 1 9 8 . 0 0 . 3a T h e p e r c e n t r e c o v e r i e s r e p o r t e d a r e t h e me an v a l u e s o f d u p l i c a t e d e t e r -m i n a t i o n s _ 1 s t a n d a r d e r r o r . F i n a l c o n c e n t r a t i o n o f [ ] 4 C j a c e t i c a c i d ( 2. C i / m l ) a d d e d was 0 . 3 , u M . N o n r a d i o a c t i v e a c e t i c a c i d w a s a d d e d t o y i e l d t h ef i n a l c o n c e n t r a t i o n s s h o w n . S a m p l e s ( 5 m l ) were i n c u b a t e d 2 4 h w i t h s h a k i n ga t 5 5 0 C .

OR S .C

L

TOTAL RECOVERYI - - w--_-------

V O L . 5 0 , 1 9 8 5

7/27/2019 Passive Diffusion Technique for Concentration of Short Chain Volatile Fatty Acids From Seawater

3/3

A P P L . E N V I R O N . M I C R O B I O L .T A B L E 3 . R e c o v e r y o f " 4 C - c o m p o u n d s b y t h e p a s s i v e d i f f u s i o nt e c h n i q u e a

1 4 C ( % )4 C - c o m p o u n d T r a p p e d o n R e m a i n i n g i n

f i l t e r s o l u t i o n R e c o v e r e dF o r m i c a c i d 9 6 . 2 0 . 9 5 0 . 7 0 . 2 9 6 . 9 0 . 7 5A c e t i c a c i d 9 7 . 4 0 . 4 0 . 5 5 0 . 1 9 8 . 0 0 . 3P r o p i o n i c a c i d 9 8 . 2 0 . 2 8 0 . 9 3 0 . 5 3 9 9 . 1 0 . 2 1B u t y r i c a c i d 9 5 . 9 1 . 8 2 . 7 1 . 3 9 8 . 6 0 . 5 0L a c t i c a c i d 2 0 . 4 4 . 6 8 3 . 0 t 2 . 1 1 0 3 . 4 2 . 5G l u c o s e 0 . 2 0 . 0 1 1 0 0 . 4 1 . 0 7 1 0 0 . 6 1 . 0 8

a T h e p e r c e n t r e c o v e r i e s r e p o r t e d a r e t h e m e a n v a l u e s o f d u p l i c a t e d e t e r -m i n a t i o n s 1 s t a n d a r d e r r o r . F i n a l c o n c e n t r a t i o n o f e a c h r a d i o l a b e l e dc o m p o u n d a d d e d ( 2 . C S i / m l ) w a s 0 . 3 p L M . S a m p l e s ( 5 m l ) w e r e i n c u b a t e d 2 4 hw i t h s h a k i n g a t 5 5 C .

s a m p l e c o n c e n t r a t i o n . D e p e n d i n g o n t h e s e n s i t i v i t y o f t h ea n a l y t i c a l p r o c e d u r e u s e d f o r t h e d e t e c t i o n o f VFAs ( i . e . ,g as o r h i g h - p r e s s u r e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ) , a l o w e r l i m i t o fd e t e c t a b i l i t y o f 1 , u M o r l e s s o f V FA c a n b e o b t a i n e d .B e c a u s e t h e VFAs a r e c o n c e n t r a t e d o n a g l a s s f i b e r f i l t e r ,t h e t e c h n i q u e i s e a s i l y a d a p t a b l e t o m o s t c o m m o n l y u s e dm e t h o d s o f V FA d e t e r m i n a t i o n ( e . g . , a c i d i f i c a t i o n a n d d i r e c ta n a l y s i s b y g a s c h r o m a t o g r a p h y o r e s t e r i f i c a t i o n a n d d e t e c -t i o n b y h i g h - p r e s s u r e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ) . T h e t e c h n i q u ei s now b e i n g u s e d t o m e a s u r e m i c r o b i a l l y p r o d u c e d VFAs i na n a e r o b i c m a r i n e w a t e r c o l u m n s .

T h i s w o r k was s u p p o r t e d b y n a t i o n a l S c i e n c e F o u n d a t i o n g r a n t sO C E 7 9 - 1 9 2 6 4 a n d O C E 8 2 - 1 0 4 2 0 .

LITERATURE CITED1 . A n s b a e k , J . , a n d T . H . B l a c k b u r n . 1 9 8 0 . A m e t h o d f o r t h ea n a l y s i s o f a c e t a t e t u r n o v e r i n a c o a s t a l m a r i n e s e d i m e n t .M i c r o b . E c o l . 5 : 2 5 3 - 2 6 4 .2 . B a r c e l o n a , M. J . 1 9 8 0 . D i s s o l v e d o r g a n i c c a r b o n a n d v o l a t i l ef a t t y a c i d s i n m a r i n e s e d i m e n t p o r e w a t e r s . G e o c h i m .C o s m o c h i m . A c t a 4 4 : 1 9 7 7 - 1 9 8 4 .3 . B a r c e l o n a , M. J . , H . M. L i l j e s t r a n d , a n d J . J . M o r g a n . 1 9 8 0 .

D e t e r m i na t i on o f l o w m o l e c u l a r w e i g h t v o l a t i l e f a t t y a c i d s i na q u eo u s s am p l e s . A n a l. C h e m . 5 2 : 3 2 1 - 3 2 5 .4 . B e t h g e , P . O . , a n d K . L i i e d s t r o m . 1 9 7 4 . D e t e r m i n a t o n o f o r g a n i ca c i d s o f l o w r e l a t i v e m o l e c u l a r m a s s ( C 1 - C 4 ) i n d i l u t e s o l u t i o n .A n a l y s t ( L o n d o n ) 9 9 : 1 3 7 - 1 4 2 .5 . C h r i s t e n s e n , D . , a n d T . H . B l a c k b u r n . 1 9 8 2 . T u r n o v e r o f ' 4 C -l a b e l l e d a c e t a t e i n m a r i n e s e d i m e n t s . M a r . B i o l . 7 1 : 1 1 3 - 1 1 9 .6 . H o r d U k , K . A . , a n d T . E . C a p p e n b e r g . 1 9 8 3 . Q u a n t i t a t i v eh i g h - p r e s s u r e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y - f l u o r e s c e n c e d e t e r m i n a -t i o n o f s o m e i m p o r t a n t l o w e r f a t t y a c i d s i n l a k e s e d i m e n t s .A p p l . E n v i r o n . M i c r o b i o l . 4 6 : 3 6 1 - 3 6 9 .7 . M i l l e r , D . , C . M. B r o w n , T . H . P e a r s o n , a n d S . 0 . S t a n l e y . 1 9 7 9 .Some b i o l o g i c a l l y i m p o r t a n t l o w m o l e c u l a r w e i g h t o r g a n i c a c i d si n t h e s e d i me n t s o f L o c h E i l . M a r . B i o l . 5 0 : 3 7 5 - 3 8 3 .8 . P a r k e s , R . J . , a n d J . T a y l o r . 1 9 8 3 . A n a l y s i s o f v o l a t i l e f a t t ya c i d s b y i o n - e x c l u s i o n c h r o m a t o g r a p h y , w i t h s p e c i a l r e f e r e n c et o m a r i n e p o r e w a t e r . M a r . B i o l . 7 7 : 1 1 3 - 1 1 8 .9 . S a n s o n e , F . J . , a n d C . S . M a r t e n s . 1 9 8 1 . D e t e r m i n a t i o n o fv o l a t i l e f a t t y a c i d t u r n o v e r r a t e s i n o r g a n i c - r i c h m a r i n e s e d i -m e n t s . M a r . Chem. 1 0 : 2 2 3 - 2 4 7 .1 0 . S o r e n s e n , J . , D . C h r i s t e n s e n , a n d B . B . J 0 r g e n s e n . 1 9 8 1 . V o l a t i l ef a t t y a c i d s a n d h y d r o g e n a s s u b s t r a t e s f o r s u l f a t e - r e d u c i n gb a c t e r i a i n a n a e r o b i c m a r i n e s e d i m e n t . A p p l . E n v i r o n . M i c r o -b i o l . 4 2 : 5 - 1 1 .1 1 . T y l e r , J . E . , a n d G . H . D i b d i n . 1 9 7 5 . G a s c h r o m a t o g r a p h y o fv o l a t i l e f a t t y a c i d s . M e t h o d i n v o l v i n g s e p a r a t i o n f r o m b i o l o g i c a lm a t e r i a l b y vacuum d i s t i l l a t i o n . J . C h r o m a t o g r . 1 0 5 : 7 1 - 7 7 .

1 1 1 4 N O T E S