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1
Pathologies d’actualité en
production avicole
Colibacilloses
Adenovirus
Brachyspira
Brice ROBINEAU CELTIVET ZI de Kergré 22970 PLOUMAGOAR
Pierre Yves MOALIC FINALAB ZI de Bellevue 35220
CHATEAUBOURG
COLIBACILLOSE AVIAIRE
2
• Recrudescence– Dans les élevages de poules pondeuses
– Sur certaines souches de reproducteurs chair
– Sur les poulets de chair à croissance rapide
• Problématique– Reconnaître les souches réellement pathogènes
( APEC : Avian Pathogenic E.Coli ) a potentialitésepticémique
– Préciser leur épidémiologie
• Transmission horizontale
• Transmission verticale
Adam E. Pedrosa University of Georgia – The PoultryInformed Professional Issue 107 July-August 2009
Année 2009 et 2 premiers mois de 2010
Laboratoires
Labofarm ( Loudéac)
Bio Chene Vert ( Chateaubourg )
Trégobio ( Guingamp )
VT Bio ( Secondigny )
Colibacilles aviaires 3459
Colibacilles aviaires 01K1 56
Colibacilles aviaires 02K1 148
Colibacilles aviaires 078K80 886
3
Reproducteurs Production Total
élevage ponte
• Canard 1 5 203 209
• Dinde 1 4 174 179
• Gibier 3
• Pintade 1 1 8 10
• Gallus chair 21 69 345 435
• Gallus ponte 4 2 28 34
( Cas soumis dont les commémoratifs sont correctement renseignés )
COLIBACILLES 078 K80
RECONNAISSANCE DES SOUCHES DE
COLIBACILLES AVIAIRES
PATHOGENES
• Méthodes d’identification phénotypiques
• Méthodes d’identification génotypiques
4
METHODES PHENOTYPIQUES
• SEROTYPAGE
• Sérotypie: mise en évidence des facteurs antigéniques somatique
O, flagellaire H et capsulaire K
• La plupart des souches retrouvées dans des septicémies associées
à de fortes mortalités appartiennent au Sérotype 078K80
Antigène O : LPS Antigène K : capsule
5
METHODES GENOTYPIQUES
• ETUDE DES FACTEURS DE VIRULENCE
• MIGRATION EN CHAMP PULSE ( PFGE)
Facteurs de virulence des
Colibacilles Aviaires• Les adhésines (ou fimbriae)
L’adhésion de la bactérie aux tissus épithéliaux est considéréecomme une étape importante pour l’établissement de l’infection.
- Fimbriae de type 1
- Fimbriae 11 ( ou fimbriae P) : Gène PapC
• L’hémaglutination des érythrocytes
- TSH (thermo sensitive hémagglutinine)
• Résistance au sérum
• Production de colicine
• Hémolysine
• Les systèmes d’acquisition du Fe : sidérophore (aérobactine)
• - Autres mécanismes….
6
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Vandekerchove D et all Vet.Microbiol.2005
Jun 15 ; 108 ( 1-2) : 75 – 87
Virulence – associated traits in avian
Escherichia coli comparison between
isolates from colibacillosis-affected
and clinically healthy layer flocks.
7
Comparaison de souches de colibacilles prélevées sur des troupeauxsains de poules pondeuses ( 15 souches intestinales et 25 souchesextraintestinales ) et des souches prélevées sur des troupeaux depoules pondeuses avec colibacillose ( 20 souches intestinales et 20souches extraintestinales ) .
Facteurs de virulence plus souvent détectés dans les isolats provenantde colibacilloses
Tsh thermo sensitiv hemagglutinin
Iss increased sero survival
iuCa aérobactine
Irp2 yersiniobactine
fyuA récepteur yersiniobactine
ironC Enterobactin siderophore receptor protein
Colicin V production Production de colicine
Conclusion :
Seule la combinaison des facteurs de
virulence : Colicin Production , fyuA et
serum resistance était présente dans les
isolats »pathogènes » comparés aux
isolats d’élevages sans problèmes .
8
TRAVAUX REALISES A PARTIR DE LA
SOUCHOTHEQUE FINALAB
Etude préalable de 5 souches de Coli type 078 K80
isolées de reproducteurs chair et poulets de chair d’une
part et de poules pondeuses d’autres part
Victoria Morrison – Dept of food and environmental
safety – Veterinarian Laboratory Agencies – New Haw
Addleston – Surrey – Grande Bretagne
9
Résultats
0.01-0.01-0.010.000.00astA_consens_10
0.000.000.320.00-0.01sta1_110
1.031.001.021.031.02prob_ihfA_611
0.980.660.960.980.99prob_gapA_611
0.000.970.931.051.04mchF_10
1.031.051.061.071.09iss_10
1.040.961.051.081.08iroN_10
-0.01-0.03-0.01-0.010.00hp_vat_611
-0.020.030.971.041.07hp_tsh_611
-0.01-0.01-0.02-0.010.00hp_toxB_613
0.49-0.01-0.020.08-0.05hp_sigA_611
0.960.680.830.990.95hp_lpfA_611
0.980.910.960.991.01gad_10
NJHGFSubstance
Résultats
Reproducteurs et poulets de chair Reproducteurs et poulets de chair Lien géographiqueLien géographique
0.01-0.01-0.010.000.00astA_consens_10
0.000.000.320.00-0.01sta1_110
1.031.001.021.031.02prob_ihfA_611
0.980.660.960.980.99prob_gapA_611
0.000.970.931.051.04mchF_10
1.031.051.061.071.09iss_10
1.040.961.051.081.08iroN_10
-0.01-0.03-0.01-0.010.00hp_vat_611
-0.020.030.971.041.07hp_tsh_611
-0.01-0.01-0.02-0.010.00hp_toxB_613
0.49-0.01-0.020.08-0.05hp_sigA_611
0.960.680.830.990.95hp_lpfA_611
0.980.910.960.991.01gad_10
NJHGFSubstance
TshTsh = marqueur? = marqueur?
Pondeuses Pondeuses
10
PROUVER LA CLONALITE entre des souches susceptibles d’être liées
épidémiologiquement
Suspicion de transmission verticale des reproducteursvers les
poussins
• L ’idéal : séquençage, organisation de séquences et comparaison
des séquences
• En pratique : comparaison de profils de bandes d’un
échantillonnage du génome couplée à l’étude des facteurs de
virulence
EPIDEMIOLOGIE
- 14 souches E. coli reçues d’un laboratoire
(septicémiques, 078K80, même origine
géographique)
- certaines souches présentent des profils
ATB identiques
- analyses réalisées : Test PCR FV APEC
(11 facteurs de virulence (iss, irp2, iucD, iroN,
ompT, hlyF, astA, papC, tsh, vat, cvi))
11
55544321111111
+ + + + + + + + + + + + + +hémolysine aviairehlyF
+ + + + + + + + + + + + + +gène protéase de la
membrane externe
om
p
T
+ + + + + + + + + + + + + +
gène récepteur du
sidérophore
chalmodélineiroN
+ + + + + + + + + + + + + +facteur de survie dans le
sérumiss
+ + + + + + + - - - - - - -Yersiniobactineirp2
- - - + + + + + + + + + + +Aerobactineiuc
D
- - - - - - - - - - - - - -Toxine thermo stable
enteroaggregative
ast
A
- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepap
C
- - - - - - + + + + + + + +
Hemagglutinine
thermo sensibletsh
- - - - - - - - - - - - - -
Toxine de
vacuolisationvat
- - - + + - + + + + + + + +Plasmide Colicine Vcvi
NMLKJIHGFEDCBADéfinition
Reproducteurs et poulets de chair Reproducteurs et poulets de chair 1 marqueur différent Pondeuses Pondeuses
Analyse
- 5 profils se dégagent : 1 à 5
- Profil 1 représente des souches partageant à la foisun lien géographique et épidémiologique
- 6 souches appartiennent aux profils 3, 4 et 5
- profil 2 : 1 souche intermédiaire
Conclusion
- PCR FV permet de faire un premier tri de souches :
1 cluster dominant
- Poursuivre par une analyse moléculaire plus fine
12
Outils d’analyse moléculaire : analyse en champ pulsé PFGE
(AFSSA Maisons Alfort – Dr Marault )
A
B
C
D
E
F
G
I
J
K
L
M
N
Outils d’analyse moléculaire : analyse en champ pulsé
PFGE
A
B
C
D
E
F
G
I
J
K
L
M
N
Reproducteurs et poulets de chairReproducteurs et poulets de chair
13
A
I
J
K
L
•A et I : moins de 80% de similitude
•A/I et le reste : moins de 70% de similitude
•Les souches J et K : 91% de similitude / profils FV identiques
14
Bilan
555432?1111111Profil PFGE
55544321111111Profil FV
+ + + + + + + + + + + + + +hémolysine aviairehlyF
+ + + + + + + + + + + + + +
gène protéase de la membrane
externe
omp
T
+ + + + + + + + + + + + + +
gène récepteur du sidérophore
chalmodélineiroN
+ + + + + + + + + + + + + +facteur de survie dans le sérumiss
+ + + + + + + - - - - - - -Yersiniobactineirp2
- - - + + + + + + + + + + +AerobactineiucD
- - - - - - - - - - - - - -
Toxine thermo stable
enteroaggregativeastA
- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepapC
- - - - - - + + + + + + + +Hemagglutinine thermo sensibletsh
- - - - - - - - - - - - - -Toxine de vacuolisationvat
- - - + + - + + + + + + + +Plasmide Colicine Vcvi
NMLKJIHGFEDCBADéfinition
Bilan
555432?1111111Profil PFGE
55544321111111Profil FV
+ + + + + + + + + + + + + +hémolysine aviairehlyF
+ + + + + + + + + + + + + +
gène protéase de la membrane
externe
omp
T
+ + + + + + + + + + + + + +
gène récepteur du sidérophore
chalmodélineiroN
+ + + + + + + + + + + + + +facteur de survie dans le sérumiss
+ + + + + + + - - - - - - -Yersiniobactineirp2
- - - + + + + + + + + + + +AerobactineiucD
- - - - - - - - - - - - - -
Toxine thermo stable
enteroaggregativeastA
- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepapC
- - - - - - + + + + + + + +Hemagglutinine thermo sensibletsh
- - - - - - - - - - - - - -Toxine de vacuolisationvat
- - - + + - + + + + + + + +Plasmide Colicine Vcvi
NMLKJIHGFEDCBADéfinition
Cluster
15
Bilan
555432?1111111Profil PFGE
55544321111111Profil FV
+ + + + + + + + + + + + + +hémolysine aviairehlyF
+ + + + + + + + + + + + + +
gène protéase de la membrane
externe
omp
T
+ + + + + + + + + + + + + +
gène récepteur du sidérophore
chalmodélineiroN
+ + + + + + + + + + + + + +facteur de survie dans le sérumiss
+ + + + + + + - - - - - - -Yersiniobactineirp2
- - - + + + + + + + + + + +AerobactineiucD
- - - - - - - - - - - - - -
Toxine thermo stable
enteroaggregativeastA
- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepapC
- - - - - - + + + + + + + +Hemagglutinine thermo sensibletsh
- - - - - - - - - - - - - -Toxine de vacuolisationvat
- - - + + - + + + + + + + +Plasmide Colicine Vcvi
NMLKJIHGFEDCBADéfinition
Souche « intermédiaire »
Bilan
555432?1111111Profil PFGE
55544321111111Profil FV
+ + + + + + + + + + + + + +hémolysine aviairehlyF
+ + + + + + + + + + + + + +
gène protéase de la membrane
externe
omp
T
+ + + + + + + + + + + + + +
gène récepteur du sidérophore
chalmodélineiroN
+ + + + + + + + + + + + + +facteur de survie dans le sérumiss
+ + + + + + + - - - - - - -Yersiniobactineirp2
- - - + + + + + + + + + + +AerobactineiucD
- - - - - - - - - - - - - -
Toxine thermo stable
enteroaggregativeastA
- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepapC
- - - - - - + + + + + + + +Hemagglutinine thermo sensibletsh
- - - - - - - - - - - - - -Toxine de vacuolisationvat
- - - + + - + + + + + + + +Plasmide Colicine Vcvi
NMLKJIHGFEDCBADéfinition
Groupe « hétérogène »
16
Conclusion
• PCR sur facteurs de virulence et PFGEpermettent une approche épidémiologique descolibacilles aviaires
• La transmission verticale dominante estfortement suspectée
• Pour limiter les traitements antibiotiquesl’utilisation de vaccins ou d’autovaccins sur lesreproducteurs est une perspective intéressante
ADENOVIRUS AVIAIRES
17
ADENOVIRUS CHEZ LES
VOLAILLES
• Aviadenovirus• - chicken: FAdV 1-12 (5 species A-E)
• - goose: GAdV 1-3
• - duck: DAdV 2
• - turkey: TAdV 1-2
• Siadenovirus• - turkey: TAdV 3
• pheasant: MSDV
• chicken: AASV
• Atadenovirus• -chicken: EDS (DAdV 1)
Fowl adenovirus (FAdV)
• Inclusion Body Hepatitis (IBH)
1957: Yates & Fry: Premier isolement d’Adenovirus Aviaire
(CELO (Chicken embryo lethal orphan)
1963: Helmboldt & Frazier: Description d’une hépatite àcorps d’inclusion
1973: Winterfield et al.: hepatite chez de jeunes pouletsinduite par une inoculation sous cutanée de virus FaDV
1990 PAKISTAN : Syndrôme d’Hydropéricarde ( HHS )
18
Michael HESS – Université de Vienne – Réunion Couvoirs Dec 2009 -
Chateaubourg
EXPRESSION CLINIQUE
Dépend de la quantité de virus transmis
• transmission verticale : forte quantité
•Transmission horizontale : faible quantité
Association possible avec d’autres virus immunodépresseurs
• Gumboro
•Anémie Infectieuse
Maladie des élevages de reproducteurs bien protégés .
Transmission verticale prépondérante
19
1976: Fadly et al.: Co-infection of adenovirus
with infectious bursal disease virus is of
importance for IBH
1979: Yuasa et al.: Description of chicken
aneamia virus (CAV)
1986: v.Bülow et al.: pathogenicity of certain
avian adenoviruses increase after co-infection
with CAV
ASSOCIATION DES ADENOVIRUS AVEC VIRUS
IMMUNODEPRESSEURS
• Cas clinique - Poulettes futures repros
Mortalité journalière
0
50
100
150
200
250
300
1 3 5 7 9
11
13
15
17
19
21
23
25
27
p3 6810 poulettes
départ
p4 10320 poulettes
départ
20
• Diagnostic histologique : hépatite à inclusion
• Diagnostic sérologique : précipitation en milieugélosé à 8 semaines ; robuste mais peu sensible
– P1 0 + / 15 sérums
– P2 0 + / 15 sérums
– P3 4 + / 15 sérums Mortalité
– P4 6 + / 15 sérums Mortalité
• Pas se diagnostic sérologique de routinepermettant de connaître le statut des troupeauxde reproducteurs
21
HYDRO PERICARDE
Diagnostic histologique
Cliché fourni par Dr Olivier ALBARIC ENV Nantes
22
• Pathologie d’actualité du fait de l’isolement
sanitaire des reproducteurs ne permettant
pas une contamination « naturelle » avant
la ponte
• Risque de contamination des noyaux
génétiques
• Diffusion verticale très importante du fait
de l’absence de vaccination
23
BRACHYSPIRA
• Les Brachyspirae appartiennent au groupe des Spirochetae ,bactéries connues pour leur pouvoir pathogène chez l’homme etl’animal où elles provoquent principalement des affectionsdigestives et génitales.
• Ce sont des bactéries assimilées Gram - , hélicoidales ( L : 8 à 10microns ) , non sporulées , extrémement mobiles ce qui permet deles déceler par examen microscopique où elles apparaissentanimées d’un mouvement ondulatoire continu les faisant traverser lechamp du microscope .
• Chez les volailles les Brachyspirae sont associés à des pathologiesintestinales et appartiennent aux principales espèces suivantes :
• Brachyspira Intermediae
• Bracyspira Pilosicoli
• Bracyspira Innocens
• On peut également isoler Brachyspira Hyodysenteriae plus fréquentchez le porc mais pouvant être associé à des épisodespathologiques chez la poule.
• Brachyspira Alvinipulli et Brachhyspira Murdochii sont deux espècesdécrites chez les volailles mais de pathogénicité discutable.
24
• La transmission horizontale entre différentesespèces est avérée notamment pourBrachyspira Pilosicoli .Brachyspira Intermediaeest connu uniquement chez le porc et la volaillece qui limite la transmission entre ces deuxespèces , de même que pour BrachyspiraHyodysenteriae essentiellement porcin.
• La persistance du germe dans l’environnementest connue . Brachyspira Pilosicoli résisterait210 jours dans des fecès ( Boyé et al 2001 ) .Ceci explique les recontaminations dans desélevages de poules au sol ( Swayne et al 1992 ). La contamination par des eaux stagnantes estpossible car Brachyspira Pilosicoli peut y résister66 jours à 4°C ( Oxberry et all )
Symptomatologie
• Expérimentalement l’infection des poulespondeuses par Brachyspira Intermediaeprovoque une élévation du contenu hydriquedes caecums et une réduction de la productiond’œufs ( Hampson et Mac Laren Avianpathology 19999 – 28 )
• Chez les poules pondeuses les signes d’alertesont une baisse de ponte progressive ainsique la présence de fientes mousseuses ouliquides associée à une odeur fétide . Aprèsquelque temps d’évolution des animaux auxcrêtes rabougries et montrant une prostrationapparaissent dans le troupeau .
25
Fiente caecale mousseuse suspecte de contamination par
Brachyspira
Brachyspira au microscope optique
26
Prevalence de Brachyspira dans
les élevages de pondeuses(Dwar et al, 1989; Stephens & Hampson, 1999; Bano et al, 2005)
28*3134Pathogenic
spirochaetes (%)
28*7268All spirochaetes
(%)
1792950Number of flocks
NetherlandsItalyAustraliaCountry
* = Troupeaux avec entérite
PCR Classique ( ADIAGENE ) détecte le
genre Bracyspira + Typage Pilosicoli
RT PCR ( LABOFARM )
15 écouvillons cloacaux
27
Statistiques Brachyspira
LABOFARM
2009 : 110 Brachytests en France
• 58% positifs
• Brachyspira Intermediae 75%
• Brachyspira Pilosicoli 35%
• Brachyspira Hyodysentariae 7,3%
• Brachyspira 0%
ISA BROWN 2006 - TABLEAU DE BORD
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
1618 2022 242628 3032 343638 4042 4446 485052 5456 586062 6466 687072 7476 7880
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
85
% viabilité
%ponte
170
190
180
160
150
Age en semaines
Poids
de
l'oeuf
en g
08&10 46 800
lundi 9 juin
NomN° de Date Date de Nombre de
28
CONCLUSION
- Prévalence en relation avec nouveaux
modes d’élevages ( élevages de poules
au sol )
- Possible relation avec qualité de l’aliment