i

PEMANFAATAN METODE KLT-

SPEKTROFOTODENSITOMETRI UNTUK

MENENTUKAN SIDIK JARI KROMATOGRAFI

EKSTRAK ETANOL HERBA SELEDRI

(Apium graveolens Linn.)

Skripsi

I NYOMAN GDE WAISNAWA

1108505016

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2015

iii

iv

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena atas

berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul

“Pemanfaatan Metode KLT-Spektrofotodensitometri untuk Menentukan

Sidik Jari Kromatografi Ekstrak Etanol Herba Seledri (Apium graveolens

Linn.)” tepat pada waktunya.

Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan dari

berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan

terima kasih kepada:

1. Drs. I Nyoman Kadjeng Widjaja, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing I

yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,

bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan Skripsi ini.

2. Luh Putu Mirah Kusuma Dewi S.F., M.Sc., Apt. selaku dosen

pembimbing II yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi,

semangat, bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan Skripsi ini.

3. Ir. Anak Agung Gde Raka Dalem, M.Sc. (Hons), selaku Dekan Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

v

4. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana.

5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA

Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis

selama penyusunan Skripsi ini.

6. I Made Gara, selaku ayah tercinta yang telah mengasuh dan membesarkan

penulis, membimbing, memberikan doa, cinta, dan motivasi kepada

penulis, kakak kandung penulis yaitu Ni Putu Raka Hermayanti dan Ni

Made Rai Juniariani, serta keluarga besar di Desa Peliatan, Kecamatan

Ubud, Kabupaten Gianyar yang selalu memberikan motivasi dan

dukungan dalam penyusunan Skripsi ini.

7. Putera Sampoerna Foundation dan Astro Kasih yang telah memberikan

kepercayaan dan kesempatan untuk menerima beasiswa, serta memberikan

motivasi dan dukungan kepada penulis selama mengikuti pendidikan di

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana.

8. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2011 (Lumiere Onze

Vauquelin) yang selalu menemani di saat suka maupun duka, Tim Riset

Wirasuta 2014/2015, serta teman seperjuangan dan staf Laboratorium

Forensik Sains dan Kriminologi Universitas Udayana yang saya

banggakan atas semangat dan motivasinya kepada penulis dalam

penyusunan Skripsi ini.

vi

9. Seluruh rekan seperjuangan organisasi dan komunitas: Himafarma Unud,

BEM FMIPA Unud, Sampoerna Foundation Scholars Club Bali, Earth

Hour Denpasar, dan IGers Bali, serta teman-teman KKN-PPM Unud

Periode IX Desa Bunutin yang telah memberikan dukungan mental dan

semangat kepada penulis dalam berbagai hal.

10. Seluruh mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2010, 2012, dan 2013 yang

memberikan semangat dan dukungan dalam pembuatan skripsi ini.

11. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan

Skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.

Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat

membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis

berharap semoga Skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang

memerlukan.

Bukit Jimbaran, Juli 2015

Penulis

vii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL .................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ......................................................................... ii

KATA PENGANTAR ................................................................................. iii

DAFTAR ISI ................................................................................................ vi

DAFTAR TABEL ........................................................................................ ix

DAFTAR GAMBAR ................................................................................... x

DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................ xii

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ................................................... xiii

ABSTRAK. .................................................................................................. xiv

ABSTRACT ................................................................................................. xv

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................. 1

1.1 Latar Belakang .......................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah ..................................................................... 4

1.3 Tujuan Penelitian ...................................................................... 4

1.4 Manfaat Penelitian .................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................ 5

2.1 Herba Seledri.................................................................. ........... 5

2.1.1. Klasifikasi Herba Seledri ..................................... ........... 5

2.1.2. Deskripsi Herba Seledri ................................................... 5

2.1.3. Kandungan Kimia Herba Seledri ..................................... 6

2.1.4. Manfaat Herba Seledri ..................................................... 6

viii

2.2 Apiin (Apigenin 7-O-apioglukosida) ......................................... 7

2.3 Metode Ekstraksi ...................................................................... 8

2.4 Kromatografi Sidik Jari (Fingerprint) ....................................... 8

2.5 KLT-Spektrofotodensitometri ................................................... 11

2.6 Analisis Fungsi Korelasi Silang ................................................ 16

2.7 Analisis Data dengan Fungsi Kosinus ...................................... 16

BAB III METODE PENELITIAN .............................................................. 18

3.1 Rancangan Penelitian ............................................................... 18

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ................................................... 18

3.3 Bahan dan Peralatan Penelitian ................................................ 19

3.3.1 Bahan Penelitian ...... ...................................................... 19

3.3.2 Alat Penelitian ................................................................ 19

3.4 Prosedur Penelitian ................................................................... 19

3.4.1 Pengumpulan, Determinasi, dan Preparasi Sampel......... 19

3.4.2 Penetapan Susut Pengeringan ........................................ 20

3.4.3 Metode Ekstraksi ............................................................ 21

3.4.4 Identifikasi Senyawa Apiin dan Pemilihan Fase Gerak . 21

3.4.5 Pemilihan Volume Penotolan ......................................... 22

3.4.6 Pemanfaatan KLT-Spektrofotodensitometri dalam

Penentuan Sidik Jari Kromatografi Ekstrak Etanol

Herba Seledri ................................................................... 24

3.4.7 Analisis Fungsi Korelasi Silang ..................................... 25

3.4.8 Analisis Data dengan Fungsi Kosinus ........................... 25

ix

3.5 Skema Kerja Penelitian ............................................................ 26

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 27

4.1 Pengambilan Sampel Herba Seledri ......................................... 27

4.2 Determinasi Jenis Tanaman ...................................................... 27

4.3 Penetapan Susut Pengeringan ................................................... 28

4.4 Ekstraksi Sampel Herba Seledri ............................................... 29

4.5 Identifikasi Senyawa Apiin dan Pemilihan Fase Gerak ............ 30

4.6 Pemilihan Volume Penotolan ................................................... 36

4.7 Pemanfaatan KLT-Spektrofotodensitometri dalam Penentuan

Sidik Jari Kromatografi Ekstrak Etanol Herba Seledri ............. 38

4.8 Analisis Data ............................................................................. 44

4.8.1 Analisis Fungsi Korelasi Silang ...................................... 44

4.8.2 Analisis Fungsi Kosinus .................................................. 45

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ....................................................... 48

5.1 Kesimpulan ............................................................................... 48

5.2 Saran ......................................................................................... 49

DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 50

LAMPIRAN ................................................................................................. 54

x

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 4.1 Hasil Susut Pengeringan Serbuk Herba Seledri .......................... 28

Tabel 4.2 Perbandingan Warna Ekstrak Etanol Herba Seledri dari Tiga

Daerah .......................................................................................... 30

Tabel 4.3 Nilai Rs dan Tf yang Dihasilkan oleh Senyawa Penanda Apiin

pada Kedua Sistem Fase Gerak ................................................... 35

Tabel 4.4 Nilai Rs dan Tf yang Dihasilkan oleh Senyawa Penanda Apiin

pada Kromatogram Sistem Fase Gerak II .................................... 38

Tabel 4.5 Nilai Fungsi Korelasi Silang (r) Spektrum Apiin ........................ 44

Tabel 4.6 Nilai AUC Ekstrak Etanol Herba Seledri dari Tiga Daerah pada

Tiap Nilai Rf ................................................................................ 46

Tabel 4.7 Nilai Kosinus Sampel Ekstrak Etanol Herba Seledri ................... 46

xi

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Herba Seledri dari Daerah Pancasari Buleleng Bali ............. 6

Gambar 2.2 Struktur Kimia Apiin ............................................................ 7

Gambar 2.3 Profil KLT Ekstrak Etil Asetat dari Tiga Buah-buahan

Umbelifera............................................................................. 9

Gambar 2.4 Profil Sidik Jari HPTLC Ekstrak Etil Asetat dari Tiga

Buah-buahan Umbelifera ...................................................... 10

Gambar 2.5 Perhitungan Resolusi (Rs) ..................................................... 14

Gambar 2.5 Perhitungan Tailing Factor (Tf) ........................................... 14

Gambar 2.6 Sketsa Sudut di Antara Dua Vektor ..................................... 16

Gambar 3.1 Skema Kerja Penelitian Secara Umum ................................. 26

Gambar 4.1 Ekstrak Etanol Herba Seledri ............................................... 29

Gambar 4.2 Identitas KLT-Spektrofotodensitometri Ekstrak Etanol

Herba Seledri Daerah Pancasari dengan Fase Gerak

Toluene P : Butanol P : Asam Asetat P : Air (2 : 2 : 1 : 5

v/v) ....................................................................................... 31

Gambar 4.3 Spektrum Puncak Kromatogram dari Flavonoid................... 32

Gambar 4.4 Identitas KLT-Spektrofotodensitometri Ekstrak Etanol

Herba Seledri Daerah Pancasari dengan Fase Gerak

Kloroform : Metanol : Air (70 : 30 : 6,52 v/v) ..................... 33

Gambar 4.5 Spektrum Puncak Kromatogram dari Flavonoid................... 34

xii

Gambar 4.6 Puncak Kromatogram Sampel Ekstrak Etanol Herba Seledri

dengan Fase Gerak Kloroform : Metanol : Air (70 : 30 : 6,5

V/V) pada Panjang Gelombang 210 nm .............................. 37

Gambar 4.7 Pengamatan Bercak Kromatogram Sampel Ekstrak Etanol

Herba Seledri dari 3 Daerah .................................................. 39

Gambar 4.8 Pola Puncak Kromatogram Sampel Ekstrak Etanol Herba

Seledri pada Panjang Gelombang 210 nm ........................... 40

Gambar 4.9 Spektrum pada Tiap Puncak Kromatogram Ekstrak Etanol

Herba Seledri ........................................................................ 41

Gambar 4.10 Pola Puncak Kromatogram Sampel Ekstrak Etanol Herba

Seledri pada Panjang Gelombang Maksimum 338 nm ........ 42

Gambar 4.11 Spektrum Puncak Mayor Kromatogram Ekstrak Etanol

Herba Seledri ........................................................................ 43

Gambar 4.12 Perbandingan Bentuk Spektrum Apiin dari Tiga Daerah .... 44

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman Seledri ........................................ 54

Lampiran 2. Perbandingan Spektrum Apiin pada Pustaka dengan Hasil

Penelitian ................................................................................. 56

Lampiran 3. Skema Pembuatan Pereaksi Sitroborat .................................... 57

xiv

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH

AUC : Area Under Curve

C : Korelasi Kosinus

DAD : Diode Array Detector

GC : Gas Chromatography

FHI : Farmakope Herbal Indonesia

HPLC : High Performance Liquid Chromatography

mdpl : meter di atas permukaan laut

MS : Mass Spectrophotometry

r : Korelasi Spektrum

Rf : Retardation Factor

Rs : Resolusi

Tf : Tailing Factor

TLC : Thin Layer Chromatography

UV : Ultraviolet

WHO : World Health Organization

xv

ABSTRAK

Herba seledri (Apium graveolens Linn.) memiliki aktivitas sebagai

antimikroba, antihipertensi, antioksidan, antiketombe, antidepresan, dan anti-

inflamasi. Tanaman sebagai bahan baku obat herbal dapat mengandung banyak

senyawa kimia. Kandungan senyawa kimia penanda dapat digunakan sebagai

salah satu parameter dalam standardisasi bahan baku obat herbal. WHO telah

menetapkan sidik jari kromatografi sebagai metode standardisasi obat herbal.

Penelitian ini bertujuan memanfaatkan metode KLT-spektrofotodensitometri

untuk menentukan sidik jari kromatografi ekstrak etanol herba seledri serta

melihat variasi sidik jari kromatografi ekstrak etanol herba seledri dari 3 daerah di

Indonesia.

Sampel herba seledri diperoleh dari Pangalengan (Jawa Barat),

Pandanrejo (Jawa Timur), dan Pancasari (Bali). Serbuk herba seledri diekstraksi

dengan etanol 96% menggunakan bantuan ultrasonik. Ekstrak etanol ditotolkan

sebanyak 4 µL pada fase diam silika gel 60 GF254 menggunakan Linomat 5

(CAMAG), dan dielusi dengan fase gerak kloroform : metanol : air (70 : 30 : 6,5

v/v). Bercak diamati dengan TLC Visualizer (CAMAG) di bawah sinar putih, UV

254, UV 366. Kromatogram dipindai dengan TLC Scanner 4 (CAMAG) pada

panjang gelombang 210 nm dan 338 nm. Spektrum tiap puncak dipindai pada

panjang gelombang 200-400 nm.

Senyawa penanda apiin memiliki Rf 0,47, berfluoresensi hijau

kekuningan pada UV 366 nm setelah disemprot dengan pereaksi sitroborat. Apiin

memberikan panjang gelombang maksimum spektrum UV pada 270 nm dan 338

nm. Kromatogram pada panjang gelombang maksimum 338 nm mempunyai 4

puncak mayor yaitu pada Rf 0,47; 0,70; 0,78; dan 0,88. Hasil analisis korelasi

silang yaitu r = 0,99 menunjukkan spektrum senyawa penanda apiin pada ketiga

sampel identik. Hasil analisis fungsi kosinus yaitu C = 92,29 menunjukkan ketiga

sampel memiliki pola puncak kromatogram yang bervariasi.

Kata kunci: Seledri, Apium graveolens, standardisasi, kromatografi sidik jari

fitokimia, KLT-spektrofotodensitometri, fungsi kosinus

xvi

ABSTRACT

Celery herbs (Apium graveolens Linn.) has activity as an antimicrobial,

antihypertensive, antioxidant, anti-dandruff, antidepressants, and anti-

inflammatory. Plants as raw material contain many chemical compounds. The

marker compounds are one of the parameters for herbal medicines

standardization. WHO has defined a chromatography fingerprint as

standardization method for herbal medicines. This study using TLC-

spectrophotodensitometry for determining chromatography fingerprint of ethanol

extract of celery herbs and for determining its chromatography fingerprint

variation in 3 different areas.

Celery herbs obtained from Pangalengan (West Java), Pandanrejo (East

Java), and Pancasari (Bali). Celery herbs powders extracted using an ultrasonic.

Ethanol extract spotted 4 µL on silica gel 60 GF254 as a stationary phase using

Linomat 5 (CAMAG). Then eluted with chloroform : methanol : water (70 : 30 :

6,5 v/v) as a mobile phase. Spots scanned with TLC Visualizer (CAMAG) at

white light, UV 254, UV 366. Chromatogram scanned using TLC Scanner 4

(CAMAG) at 210 nm and 338 nm. Spectrum then scanned at 200 - 400 nm.

Apiin as a marker has Rf 0,47 and give fluorescent yellowish green at UV

366 nm after sprayed with boric-citric acid. Apiin has maximum wavelength each

at 270 nm and 338 nm. Chromatogram at 338 nm has 4 major peaks, in Rf 0,47;

0,70; 0,78; and 0,88. Results of the cross-correlation analysis r = 0,99 indicates

that apiin spectrum in 3 samples are identic. Results of the cosine function

analysis C = 92,29 indicates that 3 samples of celery herbs have varying

chromatographic fingerprints.

Keywords: Celery, Apium graveolens, standardization, phytochemical chromatographic

fingerprints, TLC-spectrophotodensitometry, cosine function