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22/03/2017
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CLASES TEÓRICAS:
Viernes de 11:00 a 13:00 hs. (Campus Ntra. Sra. del PILAR)
TRABAJOS PRÁCTICOS:
Martes (INTA Castelar)
Com. A: 09:00 a 11:00 hs.
Com. B: 11:00 a 13:00 hs.
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http://helminto.inta.gob.ar/alumnos.htm
DIRECCIONES ÚTILES:
OBJETIVO:
Determinar la presencia de parásitos adultos o de diferentes
estadios evolutivos.
En PARASITOLOGÍA, el análisis de materia fecal es el exámen
más frecuente, donde se pueden encontrar numerosos
parásitos, y con mayor frecuencia sus huevos.
DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO
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MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO
1. Métodos directos:
Búsqueda de los parásitos, sus huevos, ó sus larvas y posterior
identificación mediante exámenes macroscópicos ó
microscópicos.
Técnicas:
a) Flotación / sedimentación
b) Biológicas (inoculación experimental)
2. Métodos indirectos:
Test serológicos
1. MACROSCÓPICO:
Consistencia, color, sangre, moco, parásitos
EXAMEN DE MATERIA FECAL
2. MICROSCÓPICO:
Cualitativo:
a) Frotis directo
b) Enriquecimiento
(flotación y sedimentación)
Cuantitativo:
McMaster modificado (HPG: huevos por gramo)
http://cdigital.uv.mx/bitstream/123456789/30786/1/MendezManuel.pdf
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TOMA Y REMISIÓN DE MUESTRAS
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L3
L1 L2 L3
10 DIAS
L3 L4 Adultos
Entradas y Salidas: Entran: L3 Salen: Huevos
Día 1
Huevos
Día 21
Ciclo biológico de los nematodes gastrointestinales
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1. Preparar el material necesario para la toma de muestra.
2. Confeccionar protocolo:
• Fecha
• Formulario de antecedentes
• Anamnesis
3. Extracción de muestras
• Establecimiento • Profesional actuante • Material remitido • Explotación • Edad y cantidad de animales
DIAGNÓSTICO DE GASTROENTERITIS VERMINOSA:
Toma y remisión de muestras
• LA MUESTRA DEBE SER INDIVIDUAL
• TOMAR LA MUESTRA RECIENTEMENTE EMITIDA (consultorio: termómetro)
• No mezclar (contaminar) la muestra con ORINA
• Análisis seriado (3 deposiciones de 3 días seguidos)
• Frasco limpio y desengrasado
• Formol al 5%
• Cucharitas plásticas o bajalenguas
Algunas consideraciones de la toma de
muestra de materia fecal
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OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS DE MATERIA FECAL
EXTRACCIÓN DE LA MUESTRA DE MATERIA FECAL
SE REGISTRA LA IDENTIFICACIÓN DEL ANIMAL
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SE IDENTIFICA LA MUESTRA
• NO USAR CONSERVANTES QUÍMICOS (formol)
• ENVÍO en cajas de telgopor REFRIGERADAS
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PARA DIAGNÓSTICO DE HEMOPARÁSITOS.
• Obtención:
Venas marginal de la oreja o yugular.
• Envío:
Anticoagulada (EDTA) y refrigerada.
Para diagnóstico de TRICHOMONIASIS
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Enfermedad parasitaria producida por el protozoario Trichomona foetus.
TRICHOMONIASIS
El toro enfermo (portador asintomático crónico) transmite la enfermedad durante el coito. También puede transmitirse a través del semen congelado.
Pérdidas económicas: • Muerte del embrión (momificados), abortos (1° tercio de la preñez). • INFERTILIDAD.
www.veterinaria.uanl.mxx
• Obtención de prepucio:
- Raspado
- Lavado
- Hisopado • Envío:
Medios de cultivo
www.engormix.com
1- Toros 2- Vacas 3- Fetos abortados
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SARNA Raspado de piel con vaselina
• Garrapatas Formol al 10%
• Piojos
• Miiasis
Ácaros de la sarna
Piojos
Miiasis
Garrapatas
Ácaros productores de la sarna Psoróptica
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SARNA PSORÓPTICA
SARNA PSORÓPTICA
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Técnicas de diagnóstico más empleadas
en el laboratorio de Parasitología
• HPG (recuento de huevos por gramo de materia fecal)
• OPG (recuento de ooquistes por gramo de materia fecal)
• Cultivo de larvas (Técnica de Corticelli-Lai)
• Técnica de flotación de Willis
• Baermann
• Dennis, Stone y Swanson
• Necropsia parasitaria
• Lavado de pasto
MACROSCÓPICO
MICROSCÓPICO
Cualitativo
Directo
Enriquecimiento
Flotación
Sedimentación
Cuantitativo
McMaster modificado (HPG) (ovinos/bovinos)
Parasitómetro
EXÁMEN DE MATERIA FECAL
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Técnica del HPG (Huevos por gramo de materia fecal)
Técnica del HPG
• Muestreo individual
• Método cuantitativo
• Indica el grado de contaminación de las pasturas
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Técnica del HPG: elementos para su realización
Pesar 5 g de materia fecal
Técnica del HPG: metodología
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Técnica del HPG: metodología
1 2
3
Técnica del HPG: metodología
Cámara de McMaster
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Técnica del HPG
Haemonchus, Ostertagia, Trichostrongylus
Cooperia, Bunostomum
Nematodirus
Strongyloides papillosus
Trichuris
Cestodos
Doble membrana
Cámara de aire
Células blastomerales
Huevo de Nematodo Gastrointestinal Indiferenciado
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Técnica del HPG
Nematodirus Cestodos
Trichuris
El número de huevos eliminados en materia fecal depende:
1. Género de parásitos: poseen diferente “potencial biótico”
Haemonchus: 10.000 huevos por día
Ostertagia y Trichostrongylus: 200 a 300 huevos por día
2. Edad de los animales: hasta 15 meses
3. Estado inmunitario de los animales:
• Stress • Desnutrición • Enfermedades concomitantes
Técnica del HPG: interpretación
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¿ Cómo se expresa el valor final del HPG ?
BOVINOS
OVINOS
Lectura de 2 celdillas Lectura de 4 celdillas
N x 14
El número de huevos contados (N) se multiplica por:
N x 7
N x 20 N x 10
2 ml N huevos
70 ml 70 x N / 2: 35 N
5 gramos 35 N
1 gramo 35 N x 1 g / 5 g: 7 N
BOVINOS:
Si se leen 4 celdillas (2 ml) de la Cámara de McMaster
Si se leen 2 celdillas (1 ml) de la Cámara de McMaster
1 ml N huevos
70 ml 70 x N / 1: 70 N
5 gramos 70 N
1 gramo 70 N x 1 g / 5 g: 14 N
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Técnica del OPG (Oooquistes de coccidios por gramo de materia fecal)
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TÉCNICA DE FLOTACIÓN DE WILLIS
Método cualitativo y de concentración
• Principio: recuperación de los huevos y ooquistes por flotación.
• Diagnóstico de huevos de nematodes GI y coccidiosis.
Técnica de flotación de Willis
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1- Triturar 5 g de heces en un mortero con solución salina
sobresaturada.
2- Filtrar con un colador común.
3- Verter el contenido en un tubo de Willis de 20 cc y dejar
reposar 30’.
4- Colocar un portaobjetos encima del tubo.
5- Invertir el portaobjetos y observar al microscopio.
Metodología:
Técnica de flotación de Willis
Metodología:
Técnica de flotación de Willis
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CULTIVO DE LARVAS
(Técnica de Corticelli-Lai)
• Método cualitativo
• Permite diagnosticar los géneros de las L3 infectivas de NGI
• Cámara húmeda
• Placas de Petri
• Duración: 10 días a temperatura ambiente o estufa
Técnica de cultivo de larvas (Corticelli-lai)
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Técnica de cultivo de larvas (Corticelli-lai)
A los 10 días, se invierte la placa de Petri chica,
y por hidrotropismo las L3 se dirigen hacia el agua
Técnica de cultivo de larvas (Corticelli-lai)
Las L3 obtenidas del cultivo se concentran por sedimentación.
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Larva 3 obtenida mediante la Técnica de Corticelli y Lai (coloración con Lugol)
Larva 3 obtenida mediante la Técnica de Corticelli y Lai (coloración con Lugol)
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Estructura de una L3 infectiva de nematodes
gastrointestinales
Clave para identificación de larvas infectantes de
nematodes gastrointestinales de bovinos y ovinos
Strongyloides
papillosus
Bunostomum
Spp.
Trichostrongylus
Ostertagia Haemonchus Cooperia Nematodirus
Oesophagostomum y
Chabertia
http://cnia.inta.gov.ar/helminto/Niec/fig4.htm
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TÉCNICA DE BAERMANN
• MÉTODO CUALITATIVO
• PRINCIPIO:
Por hidrotropismo +, las larvas pasan de las heces hacia el agua.
Características de las larvas de Dictyocaulus spp.:
• Metacromáticas
Azul de metileno
Lila
• Cola corta
• Lazy (perezosas)
Técnica de Baermann
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• En el embudo lleno de agua tibia se coloca una
malla metálica de 150 µm.
• Sobre la misma se distribuye una capa delgada
de materia fecal fresca, de manera que las heces
queden cubiertas por el agua.
• Recoger el sedimento en 24 h (L1).
• Colorear con “azul de metileno” y leer con lupa.
Técnica de Baermann
Metodología:
Técnica de Baermann
Metodología:
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TÉCNICA DE
DENNIS, STONE y SWANSON
Método cualitativo
Principio: recuperación de los huevos por sedimentación
Fasciola hepatica adulta
Huevos de Fasciola hepatica
Técnica de Dennis Stone y Swanson
Fasciola hepatica y Macracanthorynchus hirudinaceus
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1- Triturar 5 g de heces (ovinos) y 10 g (bovinos y equinos)
en un mortero con agua corriente.
2- Filtrar con un colador común.
3- Verter en un vaso cónico y completar con 500 cc de agua.
4- Dejar reposar 10’, sifonar, y completar hasta 500 cc con agua.
5- Repetir el paso anterior por 5’ y luego por 3’.
6- Tomar el sedimento y leer con lupa agregando lugol.
Metodología:
Técnica de Dennis, Stone y Swanson
Metodología:
Técnica de Dennis, Stone y Swanson
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TÉCNICA DE NECROPSIA PARASITARIA
APARATO GASTROINTESTINAL
Es el método más preciso porque nos permite recuperar,
contar e identificar los géneros de parásitos presentes.
Se estudian cada órgano por separado.
NECROPSIA PARASITARIA
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NECROPSIA PARASITARIA: separación de cada uno de los compartimientos
APARATO GASTROINTESTINAL
• Se recupera 1 litro del lavado de cada órgano
• Se adiciona formol al 10%
• Se envía el cuajar “refrigerado” para realizar la técnica
de maceración para diagnóstico de “ostertagiosis inhibida”
NECROPSIA PARASITARIA
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3
1
4
2
NECROPSIA PARASITARIA: lavado del cuajar
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Observación de vermes adultos (Haemonchus placei)
NECROPSIA PARASITARIA: lavado del cuajar
Edema, congestión y petequias de la mucosa del cuajar
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Nódulos de Ostertagia ostertagi en el cuajar de bovino
Lesiones severas (score III) Lesiones leves (score I)
OSTERTAGIOSIS
Ostertagiosis inhibida: “Técnica de maceración del cuajar”
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1 2
3 4
NECROPSIA PARASITARIA: lavado intestinal
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• Se realiza inspección, palpación y cortes.
• Se observa permeabilidad de la vesícula biliar (Fasciolosis crónica).
HÍGADO
NECROPSIA PARASITARIA
Fasciola hepatica: adultos y estadíos juveniles (fasciolómulos)
Quistes hidatídicos: vesícula con líquido a presión
Ejemplar adulto de Fasciola hepatica
HÍGADO
NECROPSIA PARASITARIA
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Dictyocaulus viviparus (bovinos)
Dictyocaulus filaria (ovinos)
PULMÓN
NECROPSIA PARASITARIA
PULMÓN
NECROPSIA PARASITARIA
Dictyocaulus spp.
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TÉCNICA DE LAVADO DE PASTO
1. Recolección de la muestra
2. Lavado
3. Observación y conteo de las larvas
Técnica de “Lavado de pasto”
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Técnica de “Lavado de pasto”: recolección de la muestra
• Se hace temprano en la mañana
• El área elegida se divide en rutas
• Se corta un puñado de pasto con tijera (1 puño)
• Se procede al lavado
• Cada muestra se sumerge en balde con agua y se deja por 24 hs.
• Se extrae el pasto y se deja secar hasta peso constante.
• Se deja sedimentar el agua en el balde por 1 hora.
• Se sifona hasta que queden 2 litros en el balde y se transpasa a
una probeta de 2 litros.
Técnica de “Lavado de pasto”:
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• Se concentran las larvas por sifonación y sedimentación hasta un
volumen de 250 cc.
• 1º centrifugación a 2000 rpm durante 30’ con agua.
• 2º centrifugación a 2000 rpm durante 30’ con Benbrook.
• Se lleva a 2 litros de agua y se procede nuevamente a concentrar por
sifonación y sedimentación.
• Se concentra hasta obtener un volumen de 10 cc.
• Se procede a la lectura.
Técnica de “Lavado de pasto”:
• Se lleva a 1 cc y se toman 3 muestras de 40 µl c/u
• Se colocan en portaobjetos y se agrega lugol
• Se cuentan las L3
• Se promedian los conteos y se calcula el N° L3/kg de pasto seco
Técnica de “Lavado de pasto”: observación y conteo de L3
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Niveles de infección de las pasturas por NGI y potencial de pérdidas productivas en las distintas categorías
Fuente: Steffan P., Fiel C., Ferreyra D.
Niveles de infección de las pasturas por NGI y potencial de pérdidas productivas en las distintas categorías
Fuente: Steffan P., Fiel C., Ferreyra D.