GENETICA BACTERIANAI. MUTACIN Y RECOMBINACION.

II.

TECNICAS DE GENTICA BACTERIANA IN VIVO.

III. TCNICAS DE GENETICAS VACTERIANAS IN VITRO.

IV. EL CROMOSOMA BACTERIANO.

MUTACION Y MUTANTES Determinacin del genotipo y fenotipo.

Aislamiento de mutantes. Seleccionables. No seleccionables.. Replicacin en placa.

Seleccin con penicilina.

Observacin de varios tipos de mutantes

Aqu se observa un medio de cultivo bacteriano que lleva el nombre genrico de antibiograma. Las pastillas blancas representan determinado tipo de antibitico, los halos trasparentes representan la susceptibilidad del organismo al mismo: ms grandes, ms susceptibles.

Mutaciones espontaneas.Bases moleculares de la mutacin. Sustitucin de pares de bases. Mutaciones por desfase. Mutaciones hacia atrs o reversible. Mutaciones debidas a muchos pares de bases. Velocidades de mutacin. Mutaciones en los genomas.

Mutaciones puntuales.

Sustitucin de pares de bases.

Mutacin por desfase.

Son solo mutaciones por desfase si tiene lugar en el marco de lectura de un gen que codifica una protena.

La insercin de una sola base al promotor, no es una mutacin por seleccin.

Mutacin hacia atrs o reversible. Un revrtiente.- cepa en la que se a restaurado el fenotipo silvestre.

De un mismo sitio.revrtiente De un segundo sitio. Mutaciones supresoras.

Mutacin por muchos pares de bases. Deleciones.- son mutaciones donde se ha eliminado un segmento de DNA. inserciones.- debidas a inserciones de secuencias DNA especificas de 700-1400 pb. Translocaciones. Inversiones.

Mutagnesis. Mutgenos qumicos. Radiacin. Radiacin ionizante. Mutaciones que surgen de la reparacin del DNA. Mutagenesis biolgica y dirigida.

Radiacin.

Induccin de dmeros de piramidita. (citosina o timina.) 260 nm letal. Radiacin UV, la lmpara microbiana.

Radiacin ionizante. Radiacin mas potente. Rayos x, rayos csmicos y rayos gamma.

Causan ionizacin del agua. (OH) Los radicales libres, reaccionan e inactivan las macromolculas. Usada para inducir mutaciones en plantas y animales. Penetra fcilmente el vidrio y otros materiales.

Mutagenesis y carcinognesis: el test de Ames. Debe ser mutacin puntual. Uso de cepas bacterianas, que usan casi exclusivamente, vas de reparacin del DNA propensas a error.

Uso de preparaciones enzimticas de hgado para convertir las sustancias qumicas en sus formas activas (y carcinognicos).

Recombinacin gentica.Recombinacin homologa.Deteccin de a recombinacin.

II TCNICAS DE GENETICA BACTERIANA: IN VIVO TRANSFORMACION. TRANSDUCCION. CONJUGACION.

Protena de membrana de unin de DNA.

COMPETENCIA.

CELULA COMPETENTE.

PROTEINAS ESPECIFICAS.

1 auto lisina de pared celular.

Incorporacin solo DNA monocatenario. DNA bicentenario es degradado a cadenas sencillas en el periplasma. Las clulas solo tomas DNA monocatenario.

Nucleasas.

INCORPORACIO DEL DNA. TRANSFORMACION GENETICA. INTEGRACION DEL DNA TRANSFORMANTE.

Gram -

Gram +

TRANSFECCIN.

Transformacin con DNA de virus bacteriano.

TRANSFERENCIA DEL DNA POR ELECTROPORACION.

Transduccin.

Generalizada. Especializada. Conversin fgica.

plsmidos Naturaleza fsica de los plsmidos. Replicacin de los plsmidos Transferencia de plsmidos de clula a clula. Tipos de plsmidos y su significado biolgico. Plsmidos de resistencia.

Naturaleza fsica de los plsmidos. son circulares +.

son lineales -.

Existen en la naturaleza en 1 a 1000 kilopares de bases.

Replicacin de los plsmidos.

Los plsmidos en Gram (-) se replican como los cromosomas.

En Gram (+) se replican por el mecanismo del circulo rodante.

Plsmidos lineales.

Transferencia de plsmidos de clula a clula.

Los plsmidos que gobiernan su propia transferencia de plsmidos se les llama conjugativos.

Tipos de plsmidos y su significado en biologa.

Plsmidos de resistencia.El R100 puede transferirse entres Bacterias entricas de los gneros Escherichia, Klebsiella, Proteus, Salmonella y Shigella, pero no en Bacterias no entricas Pseudomonas

Bacteriocinas. Agentes que inhiben o matan a otras especies estrechamente relacionadas u otras cepas de la misma especie. Son pptidos sintetizados en los ribosomas. El gen por lo general se encuentra en un plsmido o un transportador. Se designan de acuerdo a la especie de la que provienen (colicinas o subtilisinas). Las colicinas matan a las clulas alterando alguna funcin celular critica.

Conjugacin y movilizacin del cromosoma

La formacin de cepas Hfr y movilizacin del cromosoma.

Uso de cepas Hfr y el fenmeno de conjugacin interrumpida.

complementacin.Anlisis de complementacin. Los productos de ambos gneros (A y B) son requeridos para sintetizar triptfano. Cada una de las mutaciones 1, 2 y 3 originan el mismo fenotipo, un requerimiento del triptfano. El anlisis de complementacin indican que las mutaciones 2 y 3 estn en un gen, y que la mutacin 1 esta en otro.

Elementos transponibles.

Secuencias de insercin y transposones.

Transposasa.

Virus especiales.

Mu

Transposones y secuencia de insercin.

Conservativo. Mecanismo de transposicin. Mutagnesis con elementos transponibles. replicativo.

Integrones.

III TECNICAS DE LA GENETICA BACTERIANA: IN VITRO. Enzimas de restriccin. Secuenciacin y sntesis del DNA. Clonacin molecular. Los plsmidos como vectores de clonacin. El bacterifago lambda como vector de clonacin. Amplificacin del DNA: la reaccin en cadena de la polimerasa. Mutagenesis in vitro y dirigida.

Enzimas de restriccin.

Electroforesis en gel.

Mapa fisico.

Southern blot.