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Dra.Luciana R. Meireles J. EkmanLaboratório de Protozoologia
ProtozoáriosIntestinais
IMTSP
PROTOZOÁRIOS (REINO PROTISTA)
Introdução
FILO APICOMPLEXA
Família Eimeriidae Cystoisospora belli (Isospora belli)Cyclospora cayetanensis
Família Cryptosporidiidae Cryptosporidium spp
Família Sarcocystidae Toxoplasma gondiiSarcocystis spp
FILO SARCOMASTIGOPHORASubfilo Sarcodina – Entamoeba histolytica
Subfilo Mastigophora – Giardia duodenalis(Locomoção por pseudópodes ou flagelos)
(Complexo apical)
PARASITA MONOXENOExige apenas uma espécie de hospedeiro para completar seuciclo biológico.
Introdução
PARASITA HETEROXENONecessita passar obrigatoriamente por dois ou mais hospedeirospara que completar seu ciclo biológico. Um deles é o hospedeirodefinitivo (reprodução sexuada), e os demais são consideradoshospedeiros intermediários (reprodução assexuada).
Amebíase
• Agente etiológico: Entamoeba histolytica (patogênica)
– Entamoeba dispar (não patogênica)
– Filo Sarcomastigophora
• Antroponose
• Protozoário monoxeno
• Ciclo de vida inclui 03 formas: trofozoíto pré-cisto cisto
1) Trofozoítos: 10 a 60μm (média 25μm).
– Divisão assexuada por fissão binária simples;
– Contém 01 núcleo com endossomo (também conhecido comocariossomo) central e cromatina periférica;
– Os trofozoítos frequentemente apresentam hemácias semi-digeridas em seu interior.
Fissão binária ou bipartição: processo de reprodução assexuadados organismos unicelulares que consiste na divisão de umacélula em duas, cada uma com o mesmo genoma da "célula-mãe".
Introdução
Fonte: Só biologia
• Ciclo de vida inclui 03 formas:
2) Pré-cistos: são intermediários entre trofozoítos e cistos,com a presença de 01 núcleo.
3) Cistos: são esféricos ou ovais, com tamanho de 10 a 20μm(média de 12μm) e parede cística rígida.
– Apresentam divisão múltipla e podem conter de 01 a04 núcleos.
– Cistos imaturos: apresentam 01 ou 02 núcleos epossuem uma estrutura cilíndrica conhecida comocorpo cromatóide.
Amebíase
Os protozoários do gênero Entamoeba caracterizam-se por terem um núcleocom cariossomo ou endossomo central ou excêntrico e cromatina periféricadisposta em pequenos grânulos situados na face interna da membrana.
Amebíase
FORMAS EVOLUTIVAS
Trofozoíto Pré- cisto Cisto
Fonte: Ferreira et al., 2003
PRÉ-CISTO: o parasita perde seus vacúolos digestivos e elabora umenvoltório.
Amebíase
FORMAS EVOLUTIVAS
Pré- cisto Cisto
CISTO: contém depósito de polissacarídeo (“vacúolo de glicogênio”) eaglomerados de RNA, fortemente corados pela hematoxilina, os corposcromatóides. No cisto, o núcleo divide-se 2 vezes, tornando-setetranucleado.
Fonte: Ferreira et al., 2003
• Habitat da E. histolytica e E.dispar: intestino grosso
• Uma vez ingeridos, os cistos liberam no intestino asformas metacísticas que se transformam em trofozoítosque irão colonizar o epitélio do intestino grosso.
• Trofozoítos multiplicam-se de forma assexuada porfissão binária simples.
• Nas últimas porções do intestino grosso, os trofozoítosdesenvolvem uma membrana cística e são liberados comas fezes para o meio exterior.
• Contaminam a água e os alimentos, atingindo outroshospedeiros.
• Os cistos são as únicas formas que sobrevivem no meioambiente.
Amebíase
• Fatores de virulência da E. histolytica:
– Adesão das amebas às células alvo é a primeira etapa do
processo que leva à erosão do epitélio da mucosa intestinal.
– Todas as amebas apresentam uma molécula de adesão nacélula-alvo denominada Gal/GalNAc (lectina de adesãopassível de inibição por galactose e N-acetil-galactosamina).
– Uma vez aderidas às células do epitélio intestinal, asamebas invasivas desencadeiam um processo de citólise queleva à erosão epitelial, e é através destes locais que o parasitainvade o hospedeiro.
• A amebíase é a quarta causa mais frequente de morte porprotozoários, situando-se depois da Malária, Doença de Chagas eLeishmanioses.
Amebíase
• As formas invasivas (trofozoítos) penetram no epitélio intestinale dividem-se intensamente na submucosa e podem sereventualmente eliminados nas fezes de pacientes com disenteriagrave.
• A Entamoeba histolytica produz ulcerações intensas no epitéliointestinal:
– Há indivíduos que podem desenvolver também amebomasque são lesões pseudotumorais resultantes de necrose,inflamação e edema da mucosa e submucosa do cólon.
• A Entamoeba histolytica pode, eventualmente, atingir outrosórgãos por via hematogênica (amebíase extra-intestinal).
• Aspectos clínicos:
– Amebíase intestinal;
– Amebíase extra-intestinal (fígado, pulmão e cérebro).
Amebíase
• Os indivíduos que ingerem cistos de E. histolytica podem infectar-se ou não. Quandoinfectados, podem tornar-se portadores crônicos assintomáticos ou apresentar disenteria demoderada a grave.
• As síndromes diarréicas e disentéricas correspondem a 90% dos casos de amebíaseintestinal invasiva. Os pacientes apresentam geralmente 03 a 05 evacuaçõesmucossanguinolentas por dia, sem febre. Ocorre dor moderada em cólica precedendo asevacuações.
• Alguns indivíduos podem apresentar colite fulminante de evolução rápida, com 30 ou maisevacuações diárias acompanhadas de cólicas intensas.
Fonte: Ferreira et al., 2003
AMEBÍASE INTESTINAL
• Amebíase extra-intestinal
- Outros órgãos, como o fígado, podem ser
afetados secundariamente por E. histolytica.
- O fígado é atingido através da disseminaçãosistêmica das amebas que ocasionam ochamado abscesso amebiano de fígado ounecrose amebiana de fígado.
- Por contiguidade, o pulmão direito, em geral,é atingido, através do diafragma, a partir delesões hepáticas.
- As lesões pulmonares também apresentamaspecto necrótico e podem ser múltiplas.
- Em casos graves, relativamente raros, océrebro também pode apresentar focosnecróticos.
Amebíase
Diagnóstico laboratorial
• Baseia-se na pesquisa de formas parasitárias (cistosou trofozoítos) em amostras de fezes examinadas aomicroscópio.
- Quando se encontram somente cistos nas fezes deindivíduos assintomáticos ou com diarréia, as amostrasdevem ser referidas como positivas paraE.histolytica/E.dispar.
- Existem várias técnicas de concentração de cistos deprotozoários de uso rotineiro em laboratórios deParasitologia. Estes métodos visam separar os cistos dosdetritos presentes nas fezes.
Amebíase
Diagnóstico laboratorial
• A técnica mais comum, descrita por Faust e colaboradores,baseia-se na centrifugação de uma suspensão de fezes em soluçãode sulfato de zinco de densidade de 1,180.
- Nestas condições, os cistos de protozoários e a maioria dosovos de helmintos flutuam, enquanto que a maior parte dosdetritos se deposita no sedimento.
Amebíase
Fezes
Sulfato de Zinco
Centrifugação
Parasitas(sobrenadante)
Diagnóstico laboratorial
• Os cistos são geralmente corados com solução de Lugol.
• Obtém-se melhor visualização das estruturas internas dos cistose trofozoítos, em exame direto, em amostras coradas comhematoxilina férrica ou tricrômio.
• Atualmente, existem técnicas moleculares para diferenciação decistos de E.histolytica e E.dispar, porém são onerosas e não sãoutilizadas na rotina dos laboratórios clínicos.
Amebíase
Diagnóstico laboratorial
• Testes sorológicos (ELISA): são positivos na maioria dosindivíduos com amebíase intestinal invasiva (75%) eabscesso amebiano (90%).
- Limitações em áreas endêmicas, pois muitos indivíduossaudáveis podem apresentar anticorpos detectáveismeramente em função de infecções prévias.
Amebíase
Cistos
Cistos e Trofozoítos
Cistos
Trofozoítos
Trofozoítos
AmebíaseTransmissão
Parasita monoxeno
Giardíase
• Giardia duodenalis
• 2 sinônimos:
– Giardia intestinalis
– Giardia lamblia
• Filo Sarcomastigophora
• Distribuição mundial;
• Parasita intestinal mais comum em países
desenvolvidos;
• Ásia, África e América Latina:
- 200 milhões de indivíduos sintomáticos
- 500.000 casos novos por ano
Acomete cães, gatos e bovinos
• G.duodenalis é um parasito monoxeno.
• Ciclo vital inclui 02 formas:
1. Trofozoítos:
- Medem de 10 a 20μm, são piriformes e com simetriabilateral;
- Movimentam-se através de 04 pares de flagelos edividem-se de modo assexuado por fissão binária.
- Contêm 02 núcleos, 02 axonemas (feixes de fibraslongitudinais) e 02 corpos parabasais em forma devírgulas, de função desconhecida.
- Na superfície ventral há um disco adesivo ou discosuctorial, principal responsável pela fixação doprotozoário ás células epiteliais do intestino.
giardíase
Núcleos
Disco adesivo
Corpos parabasais
Axonemas
Flagelos
2. Cistos:
• Os cistos são ovalados ou elipsóides e medem cerca de12μm.
• São formas de resistência e suas estruturas internas sãoas mesmas dos trofozoítos, porém duplicadas.
• Habitat: intestino delgado, principalmente o duodeno eas primeiras porções do jejuno.
• O ciclo vital é semelhante ao da Entamoeba histolytica.
giardíase
• Infecta o homem e animais domésticos (zoonose):
- Cães, gatos e bovinos.
Parasitismo
• Aderem à mucosa intestinal (disco adesivo);
• Não há invasão das células;
• Barreira mecânica para absorção de alimentos;
• Adesão provoca lesões com inflamação.
giardíase
Transmissão
• Fecal – oral;
• Ingestão de alimentos e águacontaminados com cistos.
giardíase
• Período de incubação: 1 a 4 semanas (média 7 a 10dias).
Aspectos clínicos• Diarréia (fezes amolecidas) com duração entre 2 a 4
semanas (autolimitada);
• Esteatorréia, desconforto abdominal, náuseas,vômitos, flatulência e perda de peso;
• As infecções prévias por Giardia produzem certograu de proteção contra formas clínicas eminfecções subsequentes. Por isso, em áreasendêmicas, a maioria das infecções sintomáticas emindivíduos imunocompetentes ocorre em criançasou viajantes não-imunes, provenientes de áreas debaixa transmissão.
giardíase
Diagnóstico
• Exame de fezes;
• Pesquisa de cistos:
- Exame de 03 amostras colhidas em dias alternados;
- Eliminação de cistos é intermitente.
- Os cistos são pesquisados com o uso das mesmastécnicas utilizadas para Entamoeba histolytica (Métodode Faust), com coloração de Lugol, tricrômio ouhematoxilina férrica.
giardíase
giardíaseControle
• Difícil
• Grupos A e B circulam entre seres humanos e
animais.
- Austrália: alta proporção de cães infectados
com os grupos A e B →transmissão entre
animais de estimação e o homem.
- 1993: surto no Canadá (veiculação hídrica) =
esquilos como fonte de infecção (Isaac-
Renton et al., 1993).
• Saneamento básico;
• Educação sanitária;
• Filtração da água;
• Lavar bem frutas e verduras.
• Filo Apicomplexa
• Subclasse Coccidia
Coccídeos
- FASE ASSEXUADA = ESQUIZOGONIA ou MEROGONIA
Esporozoíto ESQUIZONTE ou MERONTE (merozoítos)
- FASE SEXUADA = GAMETOGONIA
Merozoíto GAMETÓCITOS Masculino (MICROGAMETÓCITO)
Feminino (MACROGAMETÓCITO)
Fusão dos gametas zigoto OOCISTO
• Ciclo 02 fases reprodutivas:
Ambiente Esporulação oocisto ESPOROGONIA
FASE
SEXUADAFASE
ASSEXUADA
MEIO EXTERNO
Esporogonia
GametogoniaEsquizogonia
Esporozoítos
Trofozoítos
Esquizonte
Merozoítos
Microgametócitos Macrogametócitos
CystoisosporaToxoplasma
Ciclospora
• Agente etiológico: Cryptosporidium sp– Cryptosporidium parvum (potencial zoonótico)– Cryptosporidium hominis
• Distribuição mundial– Freqüente em países em desenvolvimento.
• Pertence ao Filo Apicomplexa e subclasse Coccidia.
Criptosporidiase
• Protozoário intracelular obrigatório:– Seu habitat principal são as células epiteliais do intestino delgado,
mas pode ser encontrado em qualquer segmento do tratodigestivo;
– Particularidades: tem localização extracitoplasmática → faz fusãocom a membrana do enterócito, mas localiza-se fora docitoplasma da célula hospedeira.
– Formas graves em pacientes aidéticos.
• Ciclo vital em um hospedeiro:
– Parasita monoxeno
• Oocistos de C.parvum e C.hominis são esféricos e medem de 2a 4μm e contêm 04 esporozoítos nus.
– São eliminados esporulados → é possível a liberação dosesporozoítos na luz intestinal.
• Fatores de virulência:– Cryptosporidium sp invade as células epiteliais do intestino
delgado, sem atingir as camadas mais profundas damucosa.
– Ocorre mal absorção de nutrientes, com redução deenzimas digestivas como a lactase e a fosfatase alcalina.
– Reduções da absorção de vitamina B12 estão relacionadascom a intensidade da infecção.
Criptosporidiose
FASE
SEXUADAFASE
ASSEXUADA
FEZES
GametogoniaEsquizogonia
Esporozoítos
Trofozoítos
Esquizonte
Merozoítos
Microgametócitos Macrogametócitos
• Transmissão
– Fecal – oral;
– Ingestão de água e alimentos contaminados
com oocistos;
– Água recreacional contaminada.
Criptosporidiase
• Surtos ligados à transmissão por água:– 1993 Milwaukee (EUA): 400 mil pessoas infectadas.
• Parasita permanece viável por meses no ambiente:– Resistentes ao cloro;
– Inativação:
– Altas temperaturas (60°C);
– Congelamento.
Criptosporidiase
• Sintomas
• Imunocompetentes:
– Diarréia aquosa, intermitente ou contínua, dores abdominais
e perda de peso.
– Cryptosporidium é um dos principais responsáveis por
diarreias infantis em crianças de 2 a 5 anos que frequentam
creches.
• Imunodeprimidos:
– Diarréia severa, com várias evacuações;
– Perda de +20L de líquido/dia.
Criptosporidiase
• Diagnóstico laboratorial
• Pesquisa do parasita em fezes:
– Concentração por flutuação em sacarose.
– Visualização pode ser feita:
– Exame a fresco: microscopia convencional
– Material corado pelas técnicas de Ziehl-Neelsen
modificada (Kinyoun), Safranina-azul de metileno,
Auramina e similares.
• Histologia: microscopia óptica, corando-se o material com
hematoxilina-eosina, ou utilizando-se a microscopia eletrônica.
• Métodos imunológicos:
– Pesquisa de anticorpos séricos.
• Técnicas moleculares: PCR (Reação em cadeia pela polimerase).
Criptosporidiase
Auramina
Safranina-azul de metileno
Kinyoun
• Controle
– Saneamento Básico e Educação sanitária;
– Filtração da água;
– Lavar muito bem frutas e verduras;
– Controle da contaminação ambiental com fezes de animaisinfectados.
Criptosporidiase
Ciclosporíase
• Agente etiológico: Cyclospora cayetanensis
• Protozoário intracelular obrigatório
- Filo Apicomplexa, subclasse Coccidia
• Habitat: intestino delgado
• Desenvolve-se em um único hospedeiro (monoxeno)
• Ciclo vital (não está totalmente esclaredido) → semelhante ao doCryptosporidium
• Oocistos eliminados nas fezes na forma não-esporulada:
- Não se sabe ao certo o tempo para esporulação para se tornareminfectantes.
- Condições experimentais: 5 a 11 dias.
- Oocistos esporulados: são esféricos e medem de 8-10μm eapresentam 02 esporocistos com 02 esporozoítos cada um.
• Transmissão: via fecal-oral e água e alimentos contaminados.
• Reservatórios da infecção não foram identificados até omomento → potencial zoonótico desconhecido.
• Aspectos clínicos: quadro de diarréia semelhante ao provocadopelo Cryptosporidium :
– Além da diarréia aquosa pode ocorrer também fadigaprofunda, indigestão, sensação de queimação no estômago,naúseas, dores abdominais, perda de peso e vômitos;
– Doença é autolimitada, mas pode prolongar-se por váriassemanas;
– Em pacientes imunocomprometidos → a infecção pode serprolongada e severa.
Ciclosporíase
• Diagnóstico laboratorial
• Pesquisa de oocistos nas fezes → centrífugo - flutuação
• Visualização em microscopia óptica → material a fresco
• Coloração pelas mesmas técnicas utilizadas paraCryptosporidium:
– Ziehl-Neelsen modificada (Kinyoun)
– Safranina-azul de metileno e auramina
• Detecção de anticorpos séricos
• Técnicas de biologia molecular (PCR)
Ciclosporíase
Oocisto esporulado
Excreção de oocistos não esporulados
Contaminação ambiental
Oocisto nãoesporulado
Zigoto Meronte II Meronte I
EsporozoítoSexuado Assexuado
CiclosporíaseTransmissão
Cystoisosporiase
• Também denominada isosporíase e isosporose.
• Agente: Cystoisospora belli (Isospora belli).
• Todas as espécies de Cystoisospora são intracelularesobrigatórias.
• As infecções entéricas por Cystoisospora belli eramrelativamente raras até o advento das síndromes deimunodeficiência.
• Protozoário do Filo Apicomplexa.
• Completa seu ciclo num só hospedeiro (=monoxeno).
• Estudos de filogenia molecular indicam que os parasitos dogênero Cystoisospora são em termos evolutivos, maispróximos de Toxoplasma e Neospora.
Cystoisosporiase
• Ciclo vital compreende duas fases: uma assexuada e uma sexuada.
- Fase assexuada: esquizogonia
- Fase sexuada: gametogonia
• Forma infectante: oocisto ovalado (20 a 33µm por 10-19µm)
• Oocistos eliminados nas fezes na forma não esporulada (não-infectante).
• Esporulação no meio ambiente: 24-48horas.
• Oocistos: contêm 02 esporocistos, cada um com 04 esporozoítos.
Oocistos de Cystoisospora belli emdiferentes fases de maturação: A, faseinicial, com um só esporoblasto; B,com 2 esporoblastos transformadosem esporocistos; C, oocisto maduro,onde cada esporocisto já formou 4esporozoítos.
• Transmissão
- Ocorre pela ingestão de oocistos presentes em água oualimentos.
• Aspectos clínicos
- Quadro clínico caracterizado por 08 a 10 evacuaçõeslíquidas por dia.
- Indivíduos imunocompetentes: diarréia é autolimitada.
- Na maioria das vezes, a infecção permaneceassintomática.
- Nos demais casos há febre, diarréia, anorexia e cefaléia,com início 7 a 10 dias após a contaminação, com duraçãode 10 dias ou mais.
- A evolução é para a cura espontânea, mesmo semmedicação.
Cystoisosporiase
• Prevenção e controle
- Saneamento básico
- Educação sanitária
- Filtração da água
- Evitar a ingestão de alimentos crus.
• Diagnóstico laboratorial
- Pesquisa de oocistos nas fezes.
- A visualização é feita por:
- Exame a fresco microscopia óptica convencional
- Coloração específica: Ziehl-Neelsen modificada (Kinyoun),safranina-azul de metileno, auramina.
Cystoisosporiase
Oocistos maduros
Oocistos maduros
Oocistos (fezes)
ASSEXUADA
Fertilização
Transmissão
Cystoisosporiase
CryptosporidiumTamanho: 4µm, contendo 4esporozoítos nus.
Cyclospora cayetanensisTamanho: 10µm, contendo 2esporocistos com 2 esporozoítos.
Cystoisospora belliTamanho: 25µm, contendo 2esporocistos com 4 esporozoítos.
Oocistos
Adaptado de Ferreira et al., 2003
Universidade de São Paulo Instituto de Medicina Tropical de São Paulo
Laboratório de Protozoologia
Luciana R. Meireles J. EkmanLaboratório de Protozoologia - IMTSP
PROTOZOÁRIOS APICOMPLEXA DE TRANSMISSÃO ALIMENTAR
TOXOPLASMOSE
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Bradizoítos
Toxoplasmose: antropozoonose
Toxoplasma gondii:
• Hospedeiro definitivo:
- Felídeos (gato doméstico)
• Hospedeiros intermediários:
- Animais de sangue quente, incluindo o HOMEM.
Implicações:
• Saúde pública
• Biodiversidade
Pets
Animais
produção
Animais
silvestres
Animais
aquáticos
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
Toxoplasma gondii:
• Altamente imunogênico
Prevalência:
• Região geográfica (↓ clima frio)
• Padrões culturais (alimentação)
• > 1 bilhão de infectados
• Brasil: 70% população adulta
• Grande São Paulo: 60%
INFECÇÃOCOMUM
DOENÇARARA
Zoonose de importância médica e veterinária.
TOXOPLASMOSE
DISTRIBUIÇÃOMUNDIAL
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
TOXOPLASMOSE
Toxoplasma gondii:
• Intracelular obrigatório;
• Filo Apicomplexa;
• Penetra ativamente na célula hospedeira;
• Parasita qualquer célula de animal de
sangue quente.
Micronemas
Roptrias
Forma de arcoou crescente
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
IFN- Variações pHAumento temperatura
ENDODIOGENIA
Endodiogenia: formam-se 2 indivíduos dentro da célula mãe.
From M. Torbenson
O Cisto é imune a terapia e fica residente nos tecidos por anos, numa localização intracelular, com uma cápsula glicoproteica, o que o torna inatingível a resposta imune.
From M. Torbenson
O Cisto é imune a terapia e fica residente nos tecidos por anos, numa localização intracelular, com uma cápsula glicoproteica, o que o torna inatingível a resposta imune.
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
Aspectos Clínicos Imunocompetente:
• Assintomática 90% casos;• Caráter benigno e autolimitado:
- Imunidade celular e humoral.• Sintomáticos:
- Linfoadenopatia (cadeia cervical):- Febre, dor de garganta, mialgia e cefaléia- Quadros mais graves (sistêmicos):
Pneumonite, hepatite e miocardite
- 2 a 3% desenvolvem a forma ocular: Retinocoroidite (retina coróide) Formas císticas na retina; Erechim (RS):
- 17,7% (Glasner et al., 1992)
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
Retinocoroidite por T.gondii comlesão satélite ativa, comespessamento focal devido acúmulode células inflamatórias (A). Processode cicatrização após 1 mês detratamento (B).
Aspectos Clínicos
Imunocomprometido:
• Síndrome da Imunodeficiência adquirida:- Encefalite (Luft & Remington, 1988);
- 20% de óbitos em pacientes com AIDS (Passos et al., 2000).
• Imunossupressões medicamentosas;
• Transplantes (coração, fígado e medula óssea);
• Imunologicamente imaturos (feto e recém nascido):
- Toxoplasmose congênita
Parasita invade órgãos e tecidos causando formas graves
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
Encefalite necrotizante
Toxoplasmose Congênita Infecção aguda durante a gestação:
• EUA:
- 3000 (Roberts & Frenkel, 1990).
• Brasil:
- 1 criança infectada /1000 nascimentos (Dubey etal.,2012).
• São Paulo :
- 230 a 300 crianças (Guimarães et al., 1993).
• Minas Gerais:
- 15,2% recém – nascidos infectados: bioensaiopositivo para amostras de sangue periférico(Carneiro et al., 2010).
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia5-15% das infecções resultam em aborto8-10% em lesões graves oculares ou do SNC
Toxoplasmose Congênita
Infecção fetal:
• 1o trimestre de gestação
• 3o trimestre da gestação
Dano fetal:
• 1o trimestre da gestação
• 3o trimestre de gestação
• Tétrade de Sabin
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
0
20
40
60
80
12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36
Gilbert et al. 1999
%
Idade gestacional (semana)
Dano Fetal Infecção Fetal
Diagnóstico Clínico: Limitado
Laboratorial:• Diagnóstico Parasitológico:
- Isolamento do agente: Inoculação em camundongos
Cultivo celular
- Detecção morfológica do agente: Microscopia
Colorações específicas
- Detecção de ácidos nucleicos: PCR
• Diagnóstico Histológico
• Diagnóstico Sorológico
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
Diagnóstico Parasitológico Inoculação em camundongos:
• Sangue (camada leucocitária);
• Sedimento da centrifugação:
- Líquido cefalorraquidiano;
- Líquido amniótico;
- Lavado brônquico-alveolar;
• Amostras de carne previamente digeridas.
Inoculação intraperitoneal em camundongossoronegativos:
• Soroconversão do animal;
• Achado de taquizoítos no líquido peritoneal;
• Cistos em cérebro.
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
Método de centrífugo - flutuação em sacarose (A) Coloração de Kinyoun (B)
• Esfregaço das fezes filtradas
Pesquisa de oocistos
Laboratório de Protozoologia
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Pesquisa de Ácidos Nucleicos Reação em cadeia pela polimerase (PCR):
• Detecção de segmentos específicos de ácidos nucléicos após amplificaçãopela PCR:
- Técnica sensível;
- Rotina em muitos laboratórios de diagnóstico;
- Resultado em menos de 48 horas;
- Cuidados especiais para contaminação;
- Amplificação de vários segmentos de DNA de diferentes genes:
SAG1, B1, DNA ribossomal
115 bp
A B
A = Padrão 50 bpB = Controle positivo
• Aplicação em diferentes materiais:
- Líquido amniótico;
- Sangue venoso;
- Líquido cefalorraquidiano;
- Amostras de carne previamente digeridas pela pepsina ou tripsina.
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
Vários testes:• Reação de neutralização;
• Reação de Sabin & Feldman;
• Reação de fixação do complemento;
• Reações de aglutinação:- Hemaglutinação
- Aglutinação em látex
- Aglutinação direta (taquizoítos fixados em formaldeído ou acetona):
MAT
• Reação de imunofluorescência indireta;
• Reações imunoenzimáticas (ELISA):- Exsudato cárneo como material biológico.
IgG do soro
Conjugado anti-IgG
Cromógeno
Antígeno T.gondii
Testes Sorológicos
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
Toxoplasmose: transmissão
FECAL - ORAL
OOCISTOSAlimentos
Água
CONGÊNITA
TAQUIZOÍTOSInfecção
Transplacentária
CARNIVORISMO
CISTOSCarne crua
Embutidos frescos
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
• Água;
• Frutas, legumes e verduras;
• Contato direto fezes:
- Crianças
- Jardinagem
TRANSMISSÃO POR OOCISTOS
INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SÃO PAULO
Laboratório de Protozoologia
FASE
SEXUADA
FASE
ASSEXUADA
MEIO EXTERNO
Esporogonia
GametogoniaEsquizogonia
Fonte: Advances in the life cycle of Toxoplasma gondii (Dubey, 1998)
• ~ 100% eliminam oocistos após ingestão de cistos teciduais;• < 30% eliminam oocistos após ingestão de oocistos ou taquizoítos.
Sorologia x Excreção de Oocistos• Meireles et al.,2008:
– A excreção de oocistos antecede a resposta imune humoral.
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Toxoplasmose em Mamíferos Aquáticos
• Infecção por Toxoplasma gondii:
– >33 espécies de mamíferos marinhos.
– Importante patógeno em mamíferos da costamarinha dos EUA (Califórnia).
• Maioria dos estudos lontras (protegidas):
– Toxoplasma maior causa de mortalidade.
• Encefalite, miocardite, linfoadenite, aborto emorte.
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Laboratório de Protozoologia
• Cepa TipoX 72% infecções em lontras;
• Miller et al.(2008) 2005 a 2008:
– 45 espécies de carnívoros terrestres;
– 1396 invertebrados (bivalves marinhos);
– Cepa tipo X mamíferos (felinos e canídeos) da Costa da Baia de Monterey, CA bivalves marinhos.
– Episódio de chuva no outono 2002 bivalves marinhos (T.gondii) hospedeiros de transporte lontras.
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• Massie et al. (2010)
• Transmissão de oocistos de Toxoplasma porpeixes migratórios (vetores):
• Anchova (Engraulis mordax)
• Sardinhas do Pacífico (Sardinops sagax)
– Exposição experimental:
• PCR
• Bioensaio (infectividade)
– Anchova: oocistos persistem por pelomenos 8hs após exposição;
Formas de Disseminação no Ambiente Marinho
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Laboratório de Protozoologia
Pesquisa de Toxoplasma em Bivalves Marinhos de Santos, SP
• Esmerini et al. (2010):
– Ostras (Crassostrea rhizophorae) e mexilhões (Mytella guyanensis);
– Ostras (n=300) e mexilhões (n=300) comercializadas no mercado depeixe de Santos;
– Bioensaio em camundongos e métodos de detecção molecular;
– Toxoplasma ostras (3,3%)
• Ostras podem filtrar e reter os oocistos da água do mar;
• Ingestão de ostra crua fonte potencial de transmissão deT.gondii.
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Surtos de Transmissão Hídrica no Brasil
• 2001: Santa Isabel do Ivaí, Paraná (de Moura et al., 2006):
– 155 casos confirmados;
– Ingestão de água não filtrada do reservatório municipal de água;
– Amostra de água: bioensaio e PCR;
• Resultado da investigação:
– Reservatório foi fechado e um novo reservatório foi construído;
– Toxoplasmose felina endêmica (Dubey et al., 2004):
• 58 gatos: 49/58 (84,4% ) de soropositividade;
• Bioensaio em gatos: isolamento de T.gondii;
• Cepas do tipo I e tipo III (1ª descrição de genotipagem em gatosdomésticos).
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Surtos de Transmissão Hídrica no Brasil
Density of cases
0,01 – 0,74
0,75 – 1,48
1,49 – 2,22
2,23 – 2,97
Cases1 Case
Served by reservoir A
Concentração de casos na área central abastecida
por um dos reservatórios de água municipal.
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Surto de Toxoplasmose em Santa Maria - RS
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IV Simpósio Brasileiro de Toxoplasmose - RBPT - Brasília-DF, outubro de 2018
Início: abril/2018 Até o final de agosto:
• 1343 casos suspeitos:- 748 confirmados para toxoplasmose aguda- 32 casos apresentaram lesão oftalmológica- 85 gestantes toxoplasmose aguda (3 óbitos fetais, 4 abortos) e21 toxoplasmose congênita.- Amostras de 09 placentas foram positivas na PCR e bioensaiopara T. gondii- Detecção do marcador CCp5A, encontrado em infecção poroocisto, em 78% das amostras testadas (28/36).
• Causa provável do surto: ingestão de oocistos em água.
Investigação de surto de toxoplasmose em Santa Maria/RS, 2018
Surto de Toxoplasmose em São Paulo
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Início março/19: notificação de 3 surtos de toxoplasmose nacidade de São Paulo relacionados a restaurantes.
Os surtos foram registrados em bairros diferentes da cidade deSão Paulo.
• Março/abril: 45 casos confirmados
• Maio/19: 79 casos confirmados (infecção março – abril)
• Causa provável do surto não foi identifica.
• Não foram identificados oocistos ou cistos de T.gondiinas amostras de alimentos analisadas.
COVISA – Coordenadoria de Vigilância em Saúde – Secretaria Municipal de Saúde
TRANSMISSÃO POR CISTOS
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CARNE como Fonte de Infecção
Toxoplasma gondii em animais de produção:
• Perdas econômicas aborto ovelhas e cabras(Buxton,1990; Dubey & Adams,1990);
• Implicação em Saúde Pública CARNE.
• Nos EUA é considerada uma das principais doençastransmitidas por alimentos, atingindo o mesmo nível daSalmonelose e Campilobacteriose (Kijlstra & Jongert, 2008)
• Cistos podem se desenvolver em 6-7 dias após a infecção dohospedeiro intermediário (Dubey et al., 1998).
• Cistos persistem por toda a vida do hospedeiro:
- Variação no número de cistos.
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CARNE como Fonte de Infecção
Fonte: Tenter et al., 2000
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Carne de animais de caça
European Food Safety Authority (EFSA, 2007):
• Cerca de metade dos animais de caça são soropositivos para T.gondii;
• 13 a 39,2% dos cervos caçados são soropositivos (Vikoren et al., 2004;Gaffuri et al., 2006; Gamarra et al., 2008);
• 8% a 38% dos javalis são soropositivos (Antolova et al., 2007);
• 22% dos cangurus são soropositivos:
- Os cangurus são altamente suscetíveis à infecção pelo T.gondii(Canfield et al., 1990);
- Carne de canguru foi atribuída como a causa de surto detoxoplasmose na Austrália em 1994 (Robson et al., 1995).
Surto de toxoplasmose no Canadá foi atribuído à ingestão de carnecrua de renas (McDonald et al., 1990).
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Produtos Cárneos
Presença de cistos viáveis de T.gondii foram detectados emlingüiças frescas de porco comercializadas em Londrina, PR(Dias et al., 2005):• 13/149 (8,7%): linguiças positivas (bioensaio);
• 36/47 (76,6%): amostras de soro de trabalhadores do Serviço deInspeção Municipal de Londrina.
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Leite Ovino e Caprino
Consumo de leite crú e produtos lácteos foram descritos como fonte detransmissão de surtos epidêmicos no homem (Riemann et al., 1975; Sacks etal., 1982; Skinner et al., 1990; Meerburg et al., 2006).
Itália: 3,4% de ovelhas eliminam T.gondii no leite (Fusco et al., 2007).
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Laboratório de Protozoologia
Inativação de cistos de T.gondii
Cistos de T.gondii podem ser inativados por diferentesprocessos:
• Calor (67°C )
• Congelamento (-12°C)
• Irradiação
• Alta pressão
• Acidificação
• NaCl
O tratamento pelo calor é o método mais seguro (Kijlstra &Jongert, 2008).
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Laboratório de Protozoologia
• Evitar o consumo de carne crua ou mal
cozida;
• Cuidado ao manipular as fezes de gatos
(usar luvas);
• Proteger os tanques de areia,
• lavar as mãos antes de manipular os
alimentos;
• Filtrar a água;
• Lavar muito bem frutas e verduras.
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PREVENÇÃO
Vacinas para toxoplasmose
Vacina ideal:
• Prevenção de toxoplasmose congênita;
• Prevenção de cistos teciduais;
• Prevenção da eliminação de oocistos.
NÃO HÁ VACINA PARA USO HUMANO
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Toxovax® (O’Connell et al., 1988):
Cepa S48;
Isolada de material de aborto de um cordeiro na Nova Zelândia;
Mantida em laboratório por sucessivas passagens em camundongos;
Taquizoítos não se diferenciam em bradizoítos (cepa incompleta);
Induz uma pequena infecção em ovelhas (14 dias) antes de ser eliminadopelo sistema imune:
Não induz a formação de cistos teciduais;
Não induz a produção de oocistos.
Confere proteção da transmissão congênita em ovelhas;
Reduz a formação de cistos teciduais;
Desvantagens: tempo de validade reduzido, dificuldade de armazenamento,risco de infecção do manipulador e dificuldade de produção em larga escala.
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SARCOCISTOSE
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Sarcocistose Também conhecida como sarcosporidiose e
sarcosporidíase.
Conhecida há mais de 150 anos como doençainvasiva muscular.
Causada por um protozoário:
• Sarcocystis spp.
• Oocisto assemelha-se ao deCystoisospora.• Oocistos são eliminados esporulados nas fezes:
esporulação ocorre no epitélio intestinal do HD.
• Formas teciduais: lembram atoxoplasmose.
- Maior tamanho do cisto de Toxoplasmacorresponde ao menor tamanho do cistode Sarcocystis (Tuon,2008). http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/Sarcocystosis.htm
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Etiologia
Espécie Hospedeiro Intermediário Hospedeiro Definitivo
S. hominis Boi , homem Primatas, incluindo homem
S. suihominis Porco Primatas, incluindo homem
S.ovifelis Gato Ovelha
S.cruzi Boi, búfalo, bisão Cão
S. neurona Cavalo Gambá
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Doença Muscular Doença Intestinal
Epidemiologia Casos humanos:
• Relato de casos ou série de casos.
Doença cosmopolita, com a maioria dos casos restrita a áreas tropicais esubtropicais, sobretudo nos países em desenvolvimento.
• Animais: relacionada com as condições de controle e manejo (bovinos esuínos) animais têm contato com oocistos.
• Homem: dificuldade de obtenção de dados epidemiológicos:
– Método diagnóstico para pesquisa de cistos: histopatologia.
– Não é determinada a etiologia específica do cisto.
Inquéritos sorológicos demonstram que a sarcocistose é muito maisprevalente do que se imagina:
• Sudeste Asiático e na Malásia: 20% de prevalência (precariedade dascondições higiênicas e sanitárias).
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Epidemiologia Europa:
• Forma intestinal: 10% de prevalência (coproparasitológico positivo).
Brasil:
• Pena et al. (2001): mostraram o alto grau de contaminação da carnecrua com cistos de Sarcocystis, utilizada no preparo de quibe em 25restaurantes de comida árabe de São Paulo.
- Todas as amostras (n=50) foram positivas (microscopia óptica e eletrônica);
- 7 voluntários: 6 excretaram oocistos nas fezes.
Casos de sarcocistose muscular humana são raros:
• Cistos medindo desde 57x45µm até aqueles medindo 5,3cm x 322µm:
- Musculatura esquelética, cardíaca ou da laringe.
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Transmissão Sarcocystis spp:
• Parasitos heteroxenos:
- Hospedeiro definitivo
- Hospedeiro intermediário
Oocistos no ambienteingestão pelo HIIDesporozoítosenterócitoscorrentesanguíneatecidosreprod.assexuadacistos(sarcocistos) = FORMA MUSCULAR
Ingestão de carne com cistos
bradizoítosIDreprod.sexuada oocistos =FORMA DIGESTIVA
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Patogenia Forma intestinal:
• Homem é hospedeiro definitivo.
• Ingestão de carnes cruas ou malcozidas contendo sarcocistos.
• Estágio sexuado do parasita (lâmina própria) = eliminação do parasito nas fezes.
• Período de eliminação: 40 dias ou mais.
• Longo período de eliminação = propagação da infecção = reinfecções humanas.
• Processo inflamatóriodiarréia (gastroenterite aguda).
• Náuseas, vômitos, mal-estar, dor abdominal, diarréia discreta a moderada.
Forma muscular:• Homem é o hospedeiro intermediário.
• Ingestão de oocistos ou esporocistos sarcocistos processo inflamatório dormuscular.
• Sarcocistos: musc.esquelética > musc. cardíaca > cérebro.
• Mialgias, febre, fraqueza e disfunção cardíaca em casos graves.
• Vários casos assintomáticos diagnóstico de autópsia.
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Diagnóstico Hemograma:
• Eosinofilia: discreta a moderada;
• Enzimas musculares: CPK e CK-MB elevadas forma muscular.
Exame parasitológico de fezes:
• Técnicas de centrífugo-flutuação.
- Oocistos (membrana delicada) e esporocitos.
• Exame deve ser feito após 05 a 10 dias daingestão do alimento suspeito (carne) =período para eliminação de oocistos nas fezes.
• Exame seriado: pesquisa em mais de umaamostra.
• Exame direto não pode identificar as espéciesde Sarcocystis.
400Xhttp://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/Sarcocystosis.htm
10 a15µm
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Diagnóstico Exame histopatológico:
• Coloração de PAS: cistos de diversos tamanhos.
• Microscópicos a formações com várioscentímetros de comprimento.
• Interior dos cistos: metrócitos redondos (nãoinfectantes) bradizoítos (infectantes).
Exame macroscópico:
• Estrias brancas correndo paralelamente àsfibras musculares.
• Cisto é envolvido por parede nítida.
Técnicas moleculares:
• Identificação de espécies de Sarcocystis spp.
Estudos sorológicos:
• Disponíveis para pesquisa, mas poucoaplicados na rotina laboratorial convencional.
http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/Sarcocystosis.htm
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Profilaxia
Cozimento da carne com sarcocistos:
• 100C por pelo menos 5 minutos;
Fervura da água para eliminação dos oocistos;
Cuidados básicos de higiene e limpeza dos alimentos;
Eliminação de carcaças e vísceras parasitadas (matadouros);
Europa: alguns países eliminaram a sarcocistose suína peloscuidados higiênicos em suas criações.
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Luciana R. Meireles J. EkmanE-mail: [email protected]