Upload
rizkyockta
View
54
Download
2
Embed Size (px)
DESCRIPTION
DNA rekombinan
Citation preview
REPLIKASI
KULIAH BLOK 1.1DRA.ETI YERIZEL,MS
DNA
Blok Pembangun DNADNA merupakan struktur yang dibangun oleh KH (pentosa), fosfat dan suatu basa dlam bentuk polimer dan berkombinasi membentuk helix ganda.
Blok pembangun DNA adalah “5-carbon sugar deoxyribose” yang saling dihubungkan oleh ikatan fosfodiester sehingga terbentuk dua untai ganda dengan tulang punggungnya dibentuk dari ikatan KH-fosfat pada bagian luar helix.
DNAKedua strand dari helix saling merupakan komplemeternya masing-masing. Masing-masing strand mempunyai “template” yang dapat mereplikasikan komplemennya masing-masing.
Setiap pentosa-nya juga terikat pada salah satu dari keempat basa yang terdiri dari adenine (A), guanine (G), cytosine (C) atau thymine (T).
REPLIKASI DNA
Replikasi DNA
Proses perbanyakan DNA DNA ------ 2 DNA
Replikasi melibatkan suatu mekanisme yang integrated dari beberapa enzim dan protein
DNA polimerase I, II dan III dan RNA polimerase
Aturan Dasar Replikasi 1. Replikasi adalah: suatu proses yang
semiconcervative, satu arah 2. Replikasi mempunyai arah: Bermula pada suatu titik pada
kromosom, berlangsung ke kedua arah, two growing point or “fork’. Pergerakan kedua fork menjauh menghasilkan suatu bentuk gelembung
3. Replikasi bermula pada suatu titik pada kromosom. Mungkin ada beberapa titik pemula, dan beberapa fork, replikasi secara keseluruhan berlangsung lebih cepat
Replikasi 4. Replikasi dari kedua strand berlangsung dengan
pemasukan NTP dengan arah 5’-3’
5. Pada single strand tidak berlangsung secara simultan, dengan satu DNA polimerase. Replikasi secara “short discontinous pulse
Animal cell = 1000 nucleotida Prokaryot cell = 1000 – 2000 nucleotida
6. Replikasi pada tingkat “short fragmen” dimulai dengan terbentuknya “short Segmen” dari RNA sebagai primer untuk DNA polimerase, kekosongn atau gap yang terjadi diisi oleh DNA (Okazaki Fragmen)
REPLIKASI INVIVOMEMBUTUHKAN BANYAK ENZIM
Penemu mesin PCRPOLYMERASE CHAIN REACTION (PCR)PERTAMA KALI DITEMUKAN OLEH;KARY MULLIS TAHUN 1985
MENDAPAT HADIAH NOBEL TAHUN 1994
PCR Suatu teknik atau metode invitro untuk
perbanyakan (replikasi) DNA secara enzimatik tanpa menggunakan sel hidup atau organisme
Dengan teknik PCR,maka: Dapat menghasilkan DNA dalam jumlah
besar Waktu singkat
Replikasi dengan PCRtahap. Denaturasi
Tahap 2.Anaeling
64°C
Tahap Perpanjangan rantai
72°C
Akhir Siklus ke 1
Target replikasi,Siklus yg diulang
No. of No. Amplicon Cycles Copies of target 2 43 84 165 326 6420 1,048,57630 1,073,741,
824
RT PCR