Secuenciacin de SangerRafael Moreno Novales
Que es la secuenciacin?Significado: La determinacin de la
secuencia de nucletidos de una molcula de DNA especfica.Dos tipos:
Qumico y Enzimtico Que es la secuenciacin de Sanger?Mtodo enzimtico
de terminacin de cadena, secuenciacin didesoxsi. 1970Esta basado en
el proceso de la replicacin y elongacin del del DNA
Frederick Sanger1918 - 2013Pierce, Genetica un enfoque
conceptual, 2010, editorial panamericana.pag. 524
Nucleotidos que carecen del grupo OH en el C 3Durante la
replicacin, la adicin de un ddNTP en la cadena produce que el
proceso se detenga (al no formarse en enlace fosfodiester).
http://pendientedemigracion.ucm.es/info/genetica/AVG/practicas/secuencia/Secuencia.htm#MetDideoxiPierce,
Genetica un enfoque conceptual, 2010, editorial panamericana.pag.
524Sntesis de una nueva hebra de DNA a partir de una molde,
iniciando de un primer, utilizando un DNA pol y finalizando con la
incorporacin de un nucletido terminador (didesoxinucleotidos).Para
que un segmento sea secuenciado, primero tiene que ser amplificado
por PCR.Las copias del DNA se aslan y se dividen en 4
partes.Pierce, Genetica un enfoque conceptual, 2010, editorial
panamericana.pag. 524CaractersticasEs necesario:El ADN molde que se
desea secuenciar. (monocatenario).Primer (de la regin que se quiere
secuenciar). ADN pol - para replicar el ADN.Didesoxidonucleotidos
(terminadores ddNTP) Marcados con un
fluorocromoDesoxiribonucleotidos trifosafato dATP, dCTP, dGTP y
dTTP).uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/47%20SECUENCIACIN%20DNA.pdf
+ primer primer primer primer
Pierce, Genetica un enfoque conceptual, 2010, editorial
panamericana.pag. 526Poliacrilamida, por electroforesis en
gel.Cuatro reacciones con ddNTPs diferentes que permiten la
sintesis de distintos fragmentos con una terminacion
especifica.
Estos fragmentos se separan por electroforesis y comparando los
tamanos, se puede determinar la secuencia del
templado.http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/secuenciacion_acidos_nucleicos.pdfType
a quote here. Johnny Appleseed
Pierce, Genetica un enfoque conceptual, 2010, editorial
panamericana.pag. 527Type a quote here. Johnny Appleseed
http://pendientedemigracion.ucm.es/info/genetica/AVG/practicas/secuencia/Secuencia.htm#MetDideoxi-En
el mtodo automtico en vez de radiactividad se utiliza fluorescencia
-La deteccin del tipo de fluorescencia correspondiente a cada
reaccin se lleva a cabo al mismo tiempo que la electroforesis.-Es
posible leer al mismo tiempo los ADNs de nueva sntesis producto de
las cuatro mezclas de
reaccin.http://pendientedemigracion.ucm.es/info/genetica/AVG/practicas/secuencia/Secuencia.htm#MetDideoxiGRACIAS
