SEMINARI DE GENÈTICA MOLECULAR

PCR i SEQÜENCIACIÓ

Luana Da CostaLaia Traveset

Catalina PerellóSaskia Bogaarts

PCR: Reacció en cadena de la polimerasa

Kary B. Mullis al 1986 Fabricar copies de fragments de DNA sense límits Tub d'assaig + font de calor + reactius Limitacions: conèixer seqüènciade part del fragment Procés cíclic : desnaturalització + hibridació + síntesi

PCR: Reacció en cadena de la polimerasa

PCR: Polymerase Chain ReactionReactius necessaris en la PCR: dNTP 2 primers Ions divalents i monovalents Solució amortidora ADN motlle

ADN Polimerasa - Taq Polimerasa Termociclador

http://www.dnalc.org/resources/animations/pcr.html

Aplicacions de la PCRInvestigació:

La PCR permet controlar i detectar fragments d'ADN d'interès. S'utilitza en moltes tècniques de laboratori per la seva rapidesa.

Paleontologia, antropologia biològica i ciències forenses:

augmenta la quantitat de material recuperat a partir de mostres escasses; esdevé possible caracteritzar cadàvers, fòssils o altres restes

Medicina: eina de diagnòstic

-determinar la càrrega vírica existent: l'estadi de la malaltia

-detectar infeccions perilloses en període d'incubació

-diagnòstic de malalties hereditàries

Seqüenciació de DNA.Mètodes i tècniques bioquímiques amb la finalitat de determinar l’ordre dels nucleòtids (A, C, G i T) en un oligonucleòtid de ADN. •Aplicacions: -La seqüència nucleotídica exacta d'un fragment de DNA permet un coneixement més complet de l'estructura i funció d'un gen. -La base molecular de mutacions específiques en un gen poden investigar. -Les seqüències del DNA han revelat regions reguladores comuns a tots els gens. La comparació de seqüències de diferents espècies proveeix estimes de les taxes d'evolució molecular. -Seqüenciació de genomes: estructura del genoma.-

L’any 1977 es varen publicar independentment dos mètodes per la seqüenciació de DNA:

*mètode químic, pels investigadors Maxam i Gilbert *mètode enzimàtic, per Sanger

Els dos varen rebre per això el Nobel de Químca l’any 1980.

Els dos mètodes es basaven en reaccions que es preparaven“manualment”,

i els resultats es “llegien” en gels d’electroforesi.

Mètode de Gilbert i Maxam.

Mètode de Sanger

Seqüenciació automàtica