1

MOKRAA

- ekskret, vodena otopina suvinih mineralnih soli, metabolita i organizmu nepotrebnih ili kodljivih sastojaka

- sastav mokrae zdravog ovjeka ovisi o: ishrani

dobi - najvie utjeu na KONSTANTNE klimatskim uvjetima SASTOJKE mokrae fizikoj aktivnosti

- KONSTANTNI ili STALNI sastojci suvine mineralne soli i produkti razgradnje proteina, AK i nukleinskih kiselina

anorganski: NaCl, K, Ca, NH3, PO43-, SO42-, HCO3- organski: ureja, mokrana kiselina, kreatinin, kreatin, hipurna

kiselina

- PRIGODNI sastojci prisutni u mjerljivim koliinama u patolokim stanjima (proteini, krvni pigmenti, eeri, ketonski spojevi, bilirubin, nitriti,...) - normalno prisutni samo u tragovima

- SLUAJNI sastojci lijekovi i njihovi metaboliti, pigmenti, organizmu strani spojevi

- promjene u sastavu mokrae i koliine PRIGODNIH sastojaka: bolesti bubrega

poremeaji u radu srca i smetnje u cirkulaciji krvi poremeaji u radu lijezda s unutarnjim izluivanjem bolesti mokranih puteva primanje lijekova ili organizmu stranih tvari

2

UZIMANJE UZORKA

- srednji mlaz prve jutarnje mokrae, nakon nonog sna, toalete vanjskog spolovila, prije doruka i drugih aktivnosti

- vrijeme od posljednjeg pranjenja mjehura: > 4h, < 8h

- analizu se ne preporua raditi neposredno prije, za vrijeme i neposredno poslije menstruacije niti kod ena s vidljivim vaginalnim iscjetkom

- uzorak se skuplja u istu posudu sa irokim grlom (po mogunosti za jednokratnu upotrebu)

- ako se uzorak prenosi do mjesta obrade, posuda mora biti zatvorena

- pregled uiniti: unutar 30 min (uzorak na 20C) kroz 4 h (uzorak na 4C)

3

RUTINSKI PREGLED MOKRAE

- obuhvaa: organoleptiki pregled (izgled, boja, miris)

mjerenje fizikalno-kemijskih veliina (volumen, relativna volumna masa, pH) kemijsko dokazivanje i polukvantitativno odreivanje prigodnih sastojaka test trakom (proteini, krvni pigment, glukoza, ketonski spojevi, bilirubin, urobilinogen, nitriti) mikroskopski pregled mokranog sedimenta

- u sluaju + nalaza kvantitativno se odreuju: proteini (biuret, pirogalol) glukoza (enzimski)

- rutinski pregled upotpunjuje se specijalnim pretragama: izgled (mikroorganizmi) boja (homogentizinska kiselina, melanogen, lijekovi) miris (NH3 , H2S) proteini (paraproteini, elektroforeza proteina) itd.

4

IZGLED

- bistra i prozirna

- stajanjem (sobna ili via T) izluivanje flokula mukoproteina i epitelnih stanica, na njih se veu kristali teko topivih spojeva mokrani sediment

- mokraa zdravih ljudi moe biti mutna ako je vrlo koncentrirana (urati, oksalati, karbonati, fosfati)

- zamuenje svjee mokrae znak oboljenja (vee koliine staninih elemenata, gnoja ili mikroorganizama)

MIRIS

- nema neugodan miris

- hrana (proteini, enjak, paroge), lijekovi specifian miris

- NH3 , H2S razgradnja organskih sastojaka mokrae infektivni proces u mjehuru i mokranim putevima

- aceton izluivanje ketonskih spojeva - neobian miris mokrae kod novoroenadi metaboliki

poremeaji (npr. fenilketonurija feniloctena kiselina plijesan)

5

BOJA - smee-ukasta, intenzitet ovisi o konc. otopljenih sastojaka - urokrom (Hb), uroeritrin (triptofan), urobilinogen ( urobilin) - promjena boje bolest, prisustvo raznih metabolita, sastojaka hrane i lijekova - prisustvo eritrocita: mutna, crvenkasta, a centrifugiranjem se moe izbistriti i Er dokazati u sedimentu

- prisustvo Hb: bistra, smee-crvena, boja ostaje nakon centrifugiranja

VOLUMEN MOKRAE

- ne odreuje se pri rutinskoj analizi, nego kada se ispituje izluivanje pojedinih sastojaka u 24h urinu

- volumen ovisi o koliini unesene vode i hrane, intenzitetu metabolikih procesa, fizikoj aktivnosti i vodi koja se izluuje znojenjem, fecesom i dahom

- 800-1500 mL (500-2000 mL) u 24h - POLIURIJA izluivanje poveane koliine mokrae (loe

lijeen diabetes melitus: 3-4 L, diabetes insipidus: nedostatak ADH)

- OLIGOURIJA izluivanje manje koliine mokrae - ANURIJA potpuni prestanak izluivanja (zatajenje bubrega)

6

RELATIVNA VOLUMNA MASA (specifina teina mokrae) - ovisi o volumenu mokrae i konc. otopljenih sastojaka - normalno: 1.015-1.025

- zbog velike sposobnosti bubrega da ukoncentrira i razrjeuje mokrau moe se kretati od 1.002 do 1.035 (jedna od najvanijih funkcija bubrega)

- diabetes melitus: koliina mokrae, ali i relativna volumna masa zbog izluivanja glukoze

- diabetes insipidus: vrlo niska relativna volumna masa

- mjerenje: AREOMETAR

- urometar na sobnoj temperaturi - neprecizno

- graduiran od 1.000 do 1.060 na 15C - za svaka 3C iznad ili ispod 15C: 0.001 - 1 g % proteina: 0.003 - 1 g % glukoze: 0.004

TEST TRAKA - impregnirana polielektrolitom i indikatorom (bromtimol plavilo) - boja indikatora se mijenja u ovisnosti o konc. jednovalentnih kationa (Na i K) koji oslobaaju ione vodika iz polimera - ne utjeu neionizirani sastojci mokrae (glukoza, ureja, kreatinin)

7

REAKCIJA MOKRAE - pH = 4.8 - 7.4

- ovisi o odnosu kationa i aniona (naroito dihidrogen- i hidrogen- fosfata)

- mijeana hrana pH = oko 6 - proteinski obrok kisela mokraa (razgradnjom proteina i

AK stvaraju se kisele soli fosfata i sulfata) - biljna hrana slabo alkalna mokraa (razgradnjom

organskih kiselina stvaraju se voda i CO2 karbonati u mokrai)

- infektivna oboljenja uz povienje tjelesne T (razgradnja vlastitih proteina) pH

- poremeaji acidobaznog statusa (npr. povraanje pH) - infekcije mokranih puteva (razgradnja organskih spojeva - ureje) pH

- TEST TRAKA - impregnirana smjesom indikatora (metilno crvenilo i bromtimol plavilo)

- promjena boje u podruju pH 5-9 (naranasto-zeleno-plavo)

- svjea mokraa (stajanjem postaje alkalnija)

8

KEMIJSKE PRETRAGE MOKRAE

- ispituje se da li mokraa sadri sastojke kojih u mokrai zdravih osoba nema ili su prisutne u malim koliinama da ih se ne moe dokazati uobiajenim reakcijama

- za spojeve koji se normalno nalaze u mokrai (urobilinogen), ispituje se da li ih ima vie ili manje nego normalno

KLASINI KEMIJSKI POSTUPCI U EPRUVETI - priprava reagensa (utroak vremena, kemikalija, posua, pribora)

TEST TRAKE - prednosti: stalan sastav reagensa

specifinost za pojedine parametre jednostavnost upotrebe dugi rok trajanja

- nedostaci: nedovoljna osjetljivost za pojedine analite (albumin)

podlonost interferencijama semikvantitativnost

- na ishod reakcije utjeu: VLAGA, SVJETLO i TOPLINA uvati u dobro zatvorenim posudama na suhom i od svjetla zatienom mjestu

9

- u obliku uskih traka od celuloze i prozirne plastike

- na plastinom nosau (8 x 0.5 cm) je vie kvadratia od celuloze impregniranih odgovarajuim reagensima (obino isti ili kemijski vrlo slini onima koji se koriste u klasinim reakcijama u epruveti)

- neki su specifiniji i osjetljiviji (glukoza)

- STUPANJ OSJETLJIVOSTI REAKCIJE konc. traene tvari kod koje je u najmanje 90 od 100 razliitih uzoraka nalaz pozitivan

- polja na test traci: reagens papir iznad papira za upijanje (uklanja suvinu mokrau

spreava lane rezultate) tanka najlonska mreica - napeta preko ta dva sloja (zatiuje od dodira i oneienja, osigurava brzo i

ravnomjerno prodiranje mokrae homogena obojenost polja) i privruje test polja na bijelu foliju

- na nosau su privrena reagencijska polja za svaki parametar sa svim reaktantima koji sudjeluju u reakciji i koji su stabilizirani i suhom obliku

- testna polja su meusobno odvojena i reakcija poinje u trenutku kada reaktanti dou u dodir s mokraom

- ishod kemijske reakcije promjena boje testnog polja iji intenzitet je razmjeran konc. ispitivanog parametra

10

- pretraga mokrae test trakama vrlo je jednostavna: 1) uranjanje u mokrau 2) odstranjivanje suvine mokrae 3) oitavanje nakon 30 do 60 s

- rezultati dobiveni test trakom izraavaju se polukvantitativnom ili rednom ljestvicom:

negativno / 0 1 / + 2 / ++

3 / +++ 4 / ++++

- na spremniku su oznaene i:

konvencionalne jedinice (mg/dL, Erc/L, Lkc/L) SI jedinice (mmol/L, mol/L, g/L, Erc x 106/L, Lkc x

106/L)

11

VIZUALNO OITAVANJE test traka: - usporedna procjena promjene boje test trake s ljestvicom za

usporedbu na mapi koja se nalazi na spremniku test traka - oitava se boja najblia odreenom polju na ljestvici - kako bi se smanjile sustavne pogreke, korisnik se mora

odluiti hoe li oitavanje uvijek izvoditi prema gornjem sljedeem ili donjem prethodnom polju ljestvice

- nemogue je standardizirati - oitani rezultat je podloan nizu pograaka u ovisnosti o: osvjetljenju nestanku boje nakon nekog vremena pod utjecajem

bilirubina, krvi ili lijekova osobnim sposobnostima izvoaa u razlikovanju boja

VIZUALNO OITAVANJE - zamijenjeno INSTRUMENTALNIM OITAVANJEM!

INSTRUMENTALNO OITAVANJE test traka:

- na temelju refleksne fotometrije (reflektometrije)

12

UNIVERZALNA TEST TRAKA

- odreivanje kompletnog kemijskog statusa mokrae relativna volumna masa nitriti pH glukoza ketonska tijela urobilinogen proteini

bilirubin krv (eritrociti/Hb) leukociti

- mogue je otkriti rane simptome triju velikih grupa bolesti: poremeaje metabolizma ugljikohidrata (glukoza,

ketonska tijela) bolesti bubrega i urogenitalnog trakta (nitriti, pH, proteini, krv) hemolitike bolesti i bolesti jetre (urobilinogen, bilirubin)

SPECIJALNE TEST TRAKE - opi pregled (prosijavanje) u sistematskim pregledima - za opi i ciljani pregled u epidemiolokim istraivanjima - rano otkrivanje odreenih patolokih stanja - za vrijeme odreivanja individualne doze antidijabetika - za kontrolu terapije

13

1. PROTEINI

- dnevno 0 100 mg u mokrai (zdravi ljudi) proteini manje Mr i s velikim % UH (mukoproteini, albumini,...)

- PROTEINURIJA - pojava poveane koliine proteina u mokrai

- podjela: 1) FUNKCIONALNE

- kod zdravih osoba nakon viesatnog stajanja, tranja, fizikog rada, kod trudnica

2) ORGANSKE (uslijed bolesti) - prerenalne (bolesti srca, jetre, stanja s groznicom) - renalne (oboljenja bubrega) - postrenalne (oteenja mjehura, prostate i mokranih

puteva ili zbog prisutnosti gnoja, krvi ili vaginalnog iscjetka)

3) PARAPROTEINURIJE - multipli mijelom (Bence - Jones proteinurija)

14

- dokazivanje PROTEINA:

1) TEST TRAKA - impregnirana puferom i indikatorom

PROTEINSKA GREKA INDIKATORA: - pH 3.0 na traci neionizirana forma indikatora HI (uto) i tragovi ioniziranog oblika I (zeleno) - proteini iz mokrae se veu s ioniziranom formom I (preko NH3 skupine na anionske skupine indikatora) ioniziranje HI konc. HI i mijenja se odnos I / HI promjena boje indikatora u prisutnosti proteina (premda se pH odrava na 3.0)

- albumini vrlo intenzivna reakcija (konc. od 0.06 g/L) - globulini slabije reagiraju - paraproteini neznatno

2) TEST KUHANJEM

- T raskida se hidratacijski omota denaturacija, povezivanje u aglomerate zamuenje - kisela sredina (pH oko 5) jer se u alkalnom mediju taloe tercijarni fosfati i karbonati (otope se dodatkom 1-2 kapi octene kiseline, a mute istaloenih proteina se pojaa)

15

3) REAKCIJA SA SULFOSALICILNOM KISELINOM

- sulfosalicilna kiselina raskida hidratacijski omota oko proteinskih molekula oslobaajui polarne skupine i kemijski se za njih vee - ogoljele molekule se povezuju u aglomerate zamuenje ili talog

- vrlo osjetljiva reakcija - djelomino + rezultat (opalescencija): ve kod fiziolokih konc. proteina (oko 0.02 g/L) + nalaz potvrditi drugim reakcijama

2. KRV I HEMOGLOBIN

HEMATURIJA pojava krvi u mokrai - posljedica upalnih procesa u bubrezima ili oteenja bubrenih

stanica djelovanjem mikroorganizama i njihovih toksina, parazita, lijekova, ivenih namirnica, trovanja ivom

- pri oteenju stanica mokranih puteva

HEMOGLOBINURIJA pojava Hb u mokrai - Hb u krvi (hemolitike bolesti, transfuzija inkopatibilne krvi) - uslijed pucanja i razaranja eritrocita u mjehuru - kisela mokraa: metHb (smekasta mokraa) - alkalna mokraa: oksiHb (crvenkasta mokraa)

16

1) KEMIJSKO DOKAZIVANJE

- temelji se na pseudoperoksidativnom djelovanju Hb Hb oksidira kromogene spojeve (aromatske amine i polifenole) u prisustvu H2O2

- mokrau je potrebno promijeati (E se ravnomjerno raspodjele) i prokuhati (inaktivacija peroksidaza iz leukocita)

- reakcija s AMINOPIRINOM: Hb + H2O2 + aminopirin rubazonska kiselina (ljubiasto)

2) TEST TRAKA

- Hb i mioglobin kataliziraju oksidaciju indikatora organskim peroksidom u plavo-zeleni kromogen

- dodatak aktivatora osjetljivost - oksidacija s jodatom uklanja interferenciju askorbinske

kiseline

- Erc se hemoliziraju i Hb stvara tokice na traci dok Hb uzrokuje jednolino obojenje

17

3. LEUKOCITI

- LEUKOCITURIJA znak upalnog procesa u bubregu ili/i infekcije donjih mokranih puteva

- ea u ena (zbog uestalijih infekcija bubrega ili oneienja vaginalnim sekretom)

RV: < 10 L x 106 / L

10-20 L / L sumnja na infekciju > 20 L / L patoloki znak

- dokazivanje LEUKOCITA test trakom: - veinom neutrofilni granulociti

- test traka impregnirana indoksil esterom leukocitne esteraze indoksil

- indoksil + diazonijeva sol ljubiasto obojenje

18

4. GLUKOZA, REDUKTIVNE TVARI

- normalno oko 0.3 mM (50 mg) glukoze (oko 0.2 mmol/L) - ne dokazuje se

- BUBRENI PRAG ZA GLUKOZU: > 10 mmol/L - GLUKOZURIJA - koliina glukoze u mokrai

- posljedica konc. glukoze u krvi - diabetes melitus

- renalni dijabetes - prag za glukozu (poremeaj reapsorpcije u tubulima)

- poslije jaeg obroka glukoza u mokrai - trudnice - smanjena funkcionalna sposobnost bubrega

- dokazivanje GLUKOZE test trakom: - najpouzdanije odreivanje glukoze u mokrai

- GOD-PAP metoda (strogo specifina): glukoza glukoza oksidaza glukonolakton + H2O2

H2O2 + kromogena tvar peroksidaza obojenje

- osjetljivost: 0.7 - 7 mM (moe se dokazati ve i blaga glukozurija jer se smatra da je gornja granica fizioloke glukozurije 0.8 mM)

19

5. KETONSKI SPOJEVI

- u tragovima (zdrave osobe) - acetoctena kiselina, -hidroksimaslana kiselina, aceton

- nastaju razgradnjom masnih kiselina - dugotrajno gladovanje ili esto povraanje (trudnice)

iscrpe se zalihe UH i pojaano se razgrauju masne kiseline - loe lijeen diabetes melitus ( mogunost koritenja

glukoze) pojaano se razgrauju masne kiseline

- dokazivanje KETONSKIH SPOJEVA test trakom: - reakcija po Legalu

u alkalnom Na-nitroprusid + aceton + glicin crveno-ljubiasti acetoctena kiselina kondenzacijski spoj

- -hidroksimaslana kiselina ne reagira

- svjea mokraa (stajanjem acetoctena kiselina aceton) smanjuje se osjetljivost

20

6. une boje: BILIRUBIN, UROBILINOGEN

- hem (Er) niz reakcija bilirubin (u krvi u vrlo malim koliinama vezan na albumine)

- bilirubin - nepotreban i tetan spoj - u jetri se povezuje s glukuronskom kiselinom (konjugirani bilirubin) u crijeva crijevna flora urobilinogen i sterkobilinogen feces

jetra krv bubreg mokraa - mjerljiva koliina urobilinogena u mokrai: 2-20 mol / 24h - razliita oboljenja ili urobilinogena u mokrai pojava bilirubina u mokrai

- dokazivanje BILIRUBINA test trakom: - test traka je impegnirana mjeavinom pufera i stabilne

diazonijeve soli koja s bilirubinom u kiselom daje crveno-ljubiastu azo-boju

- u svjeoj mokrai (stajanjem oksidacija bilirubina biliverdin)

- dokazivanje UROBILINOGENA test trakom: - test traka je impegnirana stabilnom diazonijevom soli koja s

urobilinogenom u kiselom daje crvenu azo-boju - u svjeoj mokrai (stajanjem oksidacija urobilinogena urobilin)

21

7. NITRITI

- neto nitrata, nema nitrita

- nitriti nastaju iz nitrata djelovanje pojedinih bakterija (E.coli, Proteus, Klebsiella,...)

- + nitriti i leukociturija sigurni znak infekcije mokranih puteva

- dokazivanje NITRITA test trakom:

- sulfanilna kiselina + nitriti u kiselom diazobenzen-sulfonska kiselina + -naftilamin crvena azo-boja

22

MIKROSKOPSKI PREGLED MOKRANOG SEDIMENTA

- naroito vrijedna pretraga u sluajevima kada su u mokrai dokazani proteini ili Hb jer se prema sastavu sedimenta mogu donijeti zakljuci o mjestu i vrsti oboljenja mokranih organa

- normalno se stajanjem neto sedimenta istaloi i iz najbistrije mokrae (teko topive tvari, stanini elementi, razne primjese)

- sastojci sedimenta:

1) NEORGANIZIRANI - kristali teko topivih spojeva

2) ORGANIZIRANI - Erc, Lkc - epitelne stanice - cilindri - mikroorganizmi - paraziti i njihova jajaca - spermiji - sluajne primjese (dlaice, vlakanca

kapljice masti, zrnca kroba i dr.)

- uzorak: svjea jutarnja, najkoncentriranija mokraa (mokraa mora biti slabo kisela (pH < 6) i specifine teine > 1.010)

- priprema: volumen mokrae 5 - 12 mL vrijeme centrifugiranja 5 min brzina okretaja do 1500 / min (400 g) koncentracijski faktor 20:1 (10 mL mokrae i 0.5 mL sedimenta)

23

- bojanje vodenom otopinom boja: Toluidinsko plavilo O, Alcian plavilo i pironin B

- na predmetno stakalce se nanosi uvijek isti volumen pripremljenog sedimenta (10-12 L) i pokrije pokrovnicom uvijek iste povrine (18 x 18 mm)

- mikroskopiranje:

pod malim poveanjem (100 x) gruba procjena sadraja sedimenta, pregleda se cijeli preparat ukljuujui i rubove

pod velikim poveanjem (400 x) kvantifikacija prisutnih elemenata u pretraenih 20 vidnih polja

- obilati talozi urata, amorfnih fosfata ili karbonata smetaju, pa ih treba ukloniti (urati zagrijavanjem mokrae na 40C, fosfati 10 %-tna octena kiselina)

- izraavanje staninih elemenata: uobiajeno: po vidnom polju velikog poveanja (400 x) preporuka: u SI jedinicama (stanini element x 106 / L)

- u sedimentu zdravog ovjeka nalazimo: kristale mokrane kiseline

kristale kalcij-oksalata ponekad kristale fosfata (pH > 7) sluzne niti poneku ploastu stanicu poneki leukocit (naroito kod ena)