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Taller de Licenciatura
EFECTO DEL REGIMEN TÉRMICO Y FENOTIPO SOBRE LA GERMINACIÓN DE LAS SEMILLAS DE GLANDULARIA SPP E INDUCCIÓN DE POLIPLOIDÍA A
TRAVÉS DE COLCHICINA
Alumna: Carla Leiva Pizarro.
Quillota,Chile 2008
Pontificia Universidad Católica de Valparaíso Fundación Isabel Caces de Brown Estación Experimental La Palma
Casilla 4-D, Quillota-Chile Teléfonos 56-32-274501- 56-33-310524
Fax 56-32-274570, 56-33-313222 http://www.agronomia.ucv.cl
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Dedicado a mis padres Y hermana
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Agradecimientos Agradezco principalmente a las personas que me dieron la vida: Eugenio Leiva Romero y Rebeca Pizarro Brito. Padre, crecí viendo tu esfuerzo, pasión, valentía, y principalmente tu amor incondicional a las tierras, esas que te provocaron penas y tantas alegrías. Me siento orgullosa de ti y de lo que has logrado, dedico este trabajo especialmente a ti, el hombre más importante en mi vida, por haberme heredado esta hermosa labor. Mamita, gracias por tu apoyo incondicional, por tu amor, paciencia y principalmente gracias por ser tú. Hoy supero una etapa en mi vida y es gracias a ti porque ocupaste las palabras adecuadas un día para decirme 0 lucha y sigue adelante, yo siempre te apoyaré*. A ti hermana, mi alma gemela, por estar siempre a mi lado, por entregarme alegría, confianza, cariño y por sobre todo por ser mi gran amiga, mi confidente. Muchas gracias nanito! A mi tía Julita, es imposible agradecer en tan pocas palabras todo lo bello y sincero que has sabido compartir y entregar a mi familia. A mi gran compañera y amiga Magdalena Céspedes, por ser mi pilar en estos años de universidad, por entregarme su confianza, alegría y apoyo. Y por último a las personas que participaron directamente en la realización de este trabajo, Loreto, por haberme ayudado constantemente en este escrito, por su tiempo y entusiasmo y por la entrega desinteresada de sus conocimientos. A mi profesora guía Gabriela Verdugo, por su apoyo y buena disposición. También agradezco a Cristina por ayudarme constantemente en la realización de este escrito.Muchas gracias a todos ustedes!
Índice Resumen Summary
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1. Introducción 1 2. Revisión bibliográfica 3 2.1. Descripción del género 3 2.1.1 Distribución 4 2.1.2. Germinación de semillas de glandularia 4 2.1.3 Citogenética de glandularia spp 5 2.2. Germinación 6 2.2.1 Efecto de las temperaturas 6 2.2.2 Efecto de las temperaturas fluctuantes 8 2.3 Poliploidia 10 2.3.1 Métodos de inducción 11 2.3.2 Colchicina 12 2.3.3 La colchicina: dosis y efectos 12 2.3.4 Métodos para medir poliploidia 14 3. Materiales y métodos 15 3.1 Ubicación del ensayo 15 3.2 Material experimental 15 3.3 Tratamientos 15 3.3.1 Desinfección 15 3.3.2 Tratamientos de germinación con temperaturas fluctuantes. 16 3.3.2.1 Indices de germinación 16 3.3.2.2 Curvas de germinación 17 3.3.3 Inducción de poliploidia a través de la aplicación de colchicina a semillas
germinadas de Glandularia spp. y descripción de un ejemplar poliploide. 18 3.4 Diseño Experimental 19 4. Resultados y discusión 21 4.1 Efecto de las temperaturas fluctuantes y ecotipo en la germinación de
Glandularia spp 21 4.1.1 Curvas de germinación 24 4.2 Sobrevivencia de semillas germinadas tratadas con colchicina 27 4.3 Caracterización morfoanatómica de planta poliploide 29 5. Conclusiones 31 6. Literatura citada
Resumen
Glandularia spp es una especie nativa que posee características morfológicas llamativas para el uso ornamental, destacando la diversidad de sus colores y la abundante y prolongada floración, pero con un bajo porcentaje de germinación de sus semillas.
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Para la introducción de esta especie al mercado es importante conservar y mejorar el germoplasma para así obtener variedades con mayor valor comercial; siendo una de las técnicas más utilizadas la duplicación del material genético o poliploidización a través de colchicina. En este estudio se evaluó la influencia del régimen térmico y el fenotipo en la geminación de las semillas de glandularia, además se determinó el efecto de las dosis y tiempo de exposición a colchicina en semillas germinadas. Se caracterizó morfoanatómicamente una planta poliploide. La investigación se realizó en la Facultad de Agronomía de la Pontificia Universidad Católica de Valparaíso. El primer ensayo fue llevado a cabo en el Laboratorio de Fitogenética, donde se expusieron las semillas a diferentes regimenes térmicos (20ºC ; 26ºC/14ºC y 18ºC/12ºC), en dos fenotipos: blanco y rosado. En el segundo ensayo las semillas germinadas fueron puestas en papel empapado con colchicina a distintas concentraciones (0.01,0.05 y 0.1%) y tiempos: tres y seis horas. Los resultados del primer ensayo indican que la interacción de la temperatura y el fenotipo influyen en la germinación de las semillas de Glandularia spp.y que el tiempo medio de germinación es de 27 días, con una germinación variable. En el segundo ensayo la sobrevivencia de las semillas germinadas expuestas a colchicina fue de 13,5%, debido al efecto tóxico. Finalmente se concluyó que la interacción del rango térmico y el fenotipo es fundamental en la germinación de glandularia, por lo que es importante conocer la procedencia de cada especie de este género cuando se quiera someter a un régimen térmico determinado. Por otro lado, la planta poliploide evaluada presentó un mayor tamaño de hojas y flores.
Summary Glandularia spp is a native species with good morphological characteristics for ornamental use. The plant stands out for the diversity of colors and the abundant and extended flowering period, but it has a low percentage of seed germination. For the introduction of this species into the markets, it is important to preserve and improve germplasm in order to obtain varieties with greater commercial value; with the
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replication of genetic material, also known as polyploidization through the colchicine, being one of the most used techniques. In this work the influence of the thermal regime and phenotype on the germination of Glandularia seeds was evaluated. Furthermore, the effect of doses and exposure to colchicine on germinated seeds was determined, and a polyploid plant was morpho-anatomically characterized. The study was carried out at the Faculty of Agricultural Sciences of Pontificia Universidad Catolica de Valparaiso. The first trial was made in the plant genetics laboratory, where the seeds were exposed to different thermal regimes (20ºC; 26ºC/14ºC and 18ºC/12ºC) in two phenotypes: white and pink. In the second trial the germinated seeds were placed on a paper soaked with colchicine at different concentrations (0.01, 0.05 and 0.1%) and times (three and six hours). The results from the first trial indicate that the temperature and phenotype interaction has an influence on the Glandularia spp. seeds germination and that the average time for germination is 27 days, with a variable germination. In the second trial the survival of the germinated seeds exposed to colchicine was 13.5%, due to the toxic effect of colchicine. In addition, the evaluated polyploid plant presented a larger size in leaves and flowers. In conclusion, the interaction between thermal range and phenotype is fundamental on the Glandularia germination, which is why it is important to know the origin of each species of this genus when being subjected to a particular thermal regime. In addition, the evaluated polyploid plant presented a larger size of leafs and flowers.
1. Introducción
Chile es un país muy diverso en climas, altitudes y latitudes; por lo cual ha desarrollado
una gran diversidad de plantas nativas que se caracterizan por su variedad en formas y
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colores susceptibles de emplear en diversos usos, sea como flor cortada, planta de
maceta, paisajismo, etc.
Dentro de las variadas especies nativas, se puede mencionar el género Glandularia
perteneciente a la familia de las Verbenaceae, que comprende alrededor de 50 especies
que se distribuyen en las regiones templadas y subtropicales de América del Norte y de
América del Sur (Botta, 1993). Se caracteriza por poseer flores con colores muy
llamativos y en general características morfológicas que la hacen ser una especie muy
interesante en jardinería, paisajismo y en la que se pueden generar cultivares.
Según Cubrero (1999) una de las formas de generar variación y con ello posibilidades
para seleccionar nuevos genotipos con valor ornamental patentables es la poliploidización
inducida. El aumento del nivel de ploidía suele producir gigantismo, aumento de tamaño
de órganos como las flores e intensificación de colores.
La inducción artificial de poliploidia puede ser realizada a través de varios métodos pero el
más usado es la colchicina, que es una sustancia soluble en agua y recomendada en
bajas concentraciones por su alta toxicidad. Escandón et al., (2005) afirman que este
alcaloide ha sido aplicado durante los últimos treinta años, en muchas especies como
bananas, uvas, papa, arándanos, algodón y varias especies ornamentales, obteniendo
excelentes resultados.
Otro punto de gran importancia en la introducción de especies nativas al mercado es el
completo conocimiento de las formas de multiplicación de las especies, ya que para
satisfacer la demanda del comprador, éstas deben permanecer en oferta el mayor tiempo
posible. En el caso de Glandularia spp., la propagación se puede realizar por esquejes o
semillas, pero estudios realizados en Argentina y en la Pontificia Universidad Católica de
Valparaíso, Chile, han demostrado su lenta y dificultosa germinación.
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De acuerdo a lo expuesto anteriormente, en el presente estudio se comprobará el efecto
que podría tener el fenotipo y régimen térmico en la germinación de las semillas y se
evaluará el efecto que tendría la colchicina en bajas dosis en Glandularia spp.
Objetivo general:
• Determinar la influencia de las condiciones térmicas y fenotipo en la germinación
de semillas y establecer una dosis adecuada de colchicina para la producción de
poliploides en Glandularia.
Objetivos específicos:
• Definir los requerimientos térmicos para aumentar el porcentaje de geminación en
semillas de Glandularia spp.
• Evaluar la influencia del fenotipo en la germinación de las semillas
• Determinar el tiempo medio de germinación, índice de sincronización y velocidad
de germinación en Glandularia spp.
• Definir dosis de colchicina que permitan sobrevivencia de semillas germinadas.
• Evaluar las características fenológicas de una planta poliploide.
2. Revisión Bibliográfica
2.1 Descripción del género
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La mayoría de las Glandularias son herbáceas perennes con yemas de renuevo cerca del
nivel del suelo, sus órganos aéreos mueren durante la época más fría y las ramas son
ascendentes o bien decumbentes, con o sin raíces adventicias (Botta, 1993).
Los tallos son rastreros de hasta 50 cm, cubiertos de tricomas (Riedman y Aldunate,
2001), tienen forma tetragonal, con columnas de colénquima y esclerénquima en los
ángulos, separados por parénquima cortical continuo (Botta, 1993).
Riedman y Aldunate (2001) afirman que las hojas son partidas, verdes cenicientas y
opuestas. Por otra parte, Botta, (1993) agrega que estas poseen un pecíolo breve y poco
diferenciado de la lámina. Esta lámina puede ser entera o dividida en forma irregular o
regular, desde tri- lobada, pinnatilobada hasta pinnatífida y bipinnatífida; glabra o
pubescente.
Las flores son hermafroditas, zigomorfas (Navas, 1973), primaverales, tubulares;
aparecen dispuestas en cabezuelas apretadas de 2-4 cm de diámetro y con una
diversidad de colores como: amarillo, rosa, lila, blanco, púrpura o azul. El fruto está
formado por dos a cuatro nuececitas que maduran durante el verano (Riedman y
Aldunate, 2001).
Se destacan por ser excelentes cubresuelos, de floración abundante y prolongada,
además, se usan como plantas en macetas, balcones o jardines (Riedman y Aldunate,
2001).
2.1.1 Distribución
Se distribuye en las regiones templadas y subtropicales de América del Norte y América
del Sur. Es frecuente en lugares abiertos: campos graminosos o praderas en bordes de
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caminos, laderas de cerros, margen de la selva o de los bosques, llegando hasta
aproximadamente los 2000 m.s.n. (Botta, 1993).
Existen 40 especies nativas en América, de las cuales 11 especies y seis variedades se
encuentran en Chile (Navas, 1973); desde la II a la IX Región (Riedman y Aldunate,
2001).
2.1.2 Germinación de semillas de glandularia
La propagación por semillas es lenta y dificultosa (San Martino y Beeskow, 2006), estos
autores realizaron ensayos de germinación en Glandularia araucana, Glandularia
aurantiaca y Glandularia macrosperma, las semillas fueron sembradas en oscuridad con
una temperatura que se mantuvo entre 22 ºC y 25ºC Los mericarpos fueron sometidos a
los siguientes tratamientos: escarificación mecánica, despunte, escarificación y lavado,
escarificación y remojado, despunte y lavado, despunte y remojado. Los porcentajes de
germinación no superaron el 12,2%.
G. macrosperma tuvo una respuesta germinativa más baja (4,4%) que las otras dos
especies y no se observaron diferencias entre los valores de germinación de G.
aurantiaca (11,9%) y G. araucana (12,2%). Estos autores afirman que estos valores no se
pueden tomar como referencia del potencial germinativo de la especie, ya que las semillas
no fueron sometidas a ninguna prueba de viabilidad y además se trató un número bajo de
semillas.
Por otro lado en la Facultad de Agronomía de la Pontificia Universidad Católica de
Valparaíso, se realizaron una serie de ensayos durante los años 2005 y 2006, donde las
semillas de Glandularia fueron sometidas a una serie de tratamientos químicos y físicos:
agua caliente, nitrato de potasio (KNO3), ácido sulfúrico, ácido giberélico, etileno y
escarificación, sin obtener resultados satisfactorios. Recientemente (marzo 2007), se
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realizaron ensayos con temperaturas fluctuantes (20/10ºC), obteniendo resultados
aproximados a un 40% de germinación. (Verdugo, 2007)*
Este bajo porcentaje de germinación puede estar explicado por la morfología de las
semillas. Estudios realizados por Maekawa y Carpenter (1991) en semillas de Verbena x
híbrida, especie perteneciente a la misma familia de Glandularia, señalan que la entrada
de agua a las semillas esta influenciada por la naturaleza y la morfología de la testa,
ingresando principalmente por la zona del hilum y del micrópilo, donde la testa es más
delgada. Además, afirman que el aumento de las paredes del hilum en presencia de agua
libre en el medio, se puede relacionar con la reducida germinación.
2.1.3 Citogenética de glandularia spp
En Norteamérica, las especies de Glandularia están representadas por entidades tetra y
hexaploides, no habiéndose encontrado entidades diploides (Lewis y Oliver, 1961).
Lewis y Oliver (1961) afirman que en Sudamérica, estas especies están representadas
casi exclusivamente por entidades diploides, con número básico de cromosomas x =5; y
que es en donde la variabilidad genética es mucho mayor, ya que es una consecuencia
del conservatismo evolutivo propio de los poliploides.
*Verdugo, G. 2007.Ingeniera Agrónomo Msc. Comunicación personal.
2.2 Germinación
La germinación está definida como un proceso que se inicia con la absorción de agua por
parte de la semilla deshidratada, etapa también conocido como imbibición y termina
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cuando una parte de ésta se extiende y atraviesa las estructuras que la rodean, es decir la
aparición de la radícula (Matilla, 2000)
Este proceso incluye una serie de actividades tanto anabólicas como catabólicas,
incluyendo respiración, síntesis de proteínas y movilización de reservas (Desai, 1997).
Fisiológicamente, la germinación comienza con las etapas iniciales de reactivación
bioquímica y termina con la emergencia de la radícula (Hartmann y Kester, 1995).
Morfológicamente y para el estudio de semillas y propagación de plantas, la definición
debe incluir la producción de una plántula normal (Hartmann y Kester, 1995).
Desde el punto de vista agronómico y ecológico ha de considerarse, que la semilla está
situada en el suelo o sustrato. Por ello, es muy importante distinguir entre germinación y
nascencia, dada la gran influencia que en ésta última tienen los factores edáficos. Se
considera, por tanto, que la germinación termina cuando las plántulas se han desarrollado
lo suficiente para emerger del terreno (Besnier, 1989).
2.2.1 Efecto de las temperaturas
La temperatura, es tal vez el factor ambiental más importante en el proceso de la
germinación (Hartmann y Kester, 1995), ya que regula el flujo de oxígeno disponible para
el embrión (The Enciclopedia of Seeds Science, Technology an Uses, 2006) e influye
sobre las enzimas que regulan la velocidad de las reacciones bioquímicas que ocurren en
la semilla después de la imbibición (Universidad Politécnica de Valencia, 2003).
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La actividad de cada enzima tiene lugar entre un máximo y un mínimo de temperatura,
existiendo un óptimo intermedio. Por ello, las semillas sólo germinan dentro de un cierto
rango de temperaturas. Si las temperaturas no se encuentran dentro del rango requerido,
la semilla no germinará, aunque se encuentre en condiciones favorables (Universidad
Politecnica de Valencia, 2003).
Los rangos de temperaturas dentro de la germinación varían considerablemente entre las
especies, variedades y origen geográfico de éstas (The Enciclopedia of Seeds Science,
Technology and Uses, 2006).
En el caso de semillas provenientes de climas tropicales, la Universidad Politécnica de
Valencia (2003) afirma que éstas suelen germinar mejor a temperaturas elevadas,
superiores a 25ºC.
Sin embargo, las semillas de especies de zonas frías germinan mejor a temperaturas
bajas, entre 5ºC y 15ºC y en la región mediterránea, las temperaturas más adecuadas
para la germinación son entre 15ºC y 20ºC (Universidad Politécnica de Valencia, 2003).
AOSA (2000) recomienda para Glandularia X hybrida, especie proveniente de climas
templados y subtropicales, un rango de temperatura que va de 20ºC a 30ºC, con una
temperatura óptima de 20ºC.
2.2.2 Efecto de las temperaturas fluctuantes
14
Las semillas de muchas especies requieren temperaturas fluctuantes para una óptima
germinación (Copeland y Mc Donald, 2001) y desarrollo de plantas (Hartmann y Kester,
1995).
Esta condición suele ser más frecuente en especies silvetres, como por ejemplo, las
semillas de muchos árboles y hierbas nativas germinan mucho mejor en condiciones de
temperaturas fluctuantes; ya que la mayoría de éstas germinan sobre o cerca de la
superficie del suelo en ausencia de la vegetación circundante, donde las temperaturas
fluctuantes son comunes (Copeland y Mc Donald, 2001).
Aunque no se conoce con certeza la razón de los efectos de éstas en el proceso, el efecto
más comúnmente citado es su influencia sobre los pasos secuenciales de germinación
(Copeland y Mc Donald, 2001).
Las temperaturas fluctuantes crean un cambio en el equilibrio promotor-inhibidor,
disminuyendo las hormonas inhibidoras durante las bajas temperaturas y aumentando las
promotoras con las altas, conduciendo así a la germinación (Copeland y Mc Donald,
2001).
Por otra parte, Mayer y Poljakoff-Mayber (1983), agregan que en la naturaleza la
exposición de las semillas a temperaturas fluctuantes induce a una contracción de las
capas externas, produciendo así, una contracción a bajas temperaturas y expansión en
las altas, logrando finalmente el quiebre de la testa y el ingreso del agua necesaria para la
germinación.
Guenni et al. (1999) estudiaron el efecto de las temperaturas fluctuantes sobre el grado de
rompimiento de la dureza seminal de la leguminosa forrajera tropical Stylosonthes
hamaca. Estas semillas fueron sometidas a temperaturas diarias constantes (63º C) y
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fluctuantes (25ºC -63ºC) por un período de más de tres meses. Los resultados obtenidos
fueron una reducción significativa del porcentaje de semillas duras, alcanzando un 64 y
82% de germinación. Lo que evidenció una vez más, el papel fundamental que ejercen las
fluctuaciones naturales de las temperatura del suelo durante el período seco,
constituyendo entonces el factor clave para incrementar la germinación.
Hernández (2004) rompió la inhibición de la germinación de las semillas de Capsicum
annuum por las temperaturas fluctuantes de 20-35ºC. Este autor afirma que la luz y la
temperatura fluctuante interactúan de manera positiva para aumentar la capacidad de
germinación de dicha especie.
Jansen van Vuuren y Lubbe (2000), sometieron las semillas de Verbena x hybrida,
especie perteneciente a la familia de Glandularia, a temperaturas constantes y
temperaturas fluctuantes en condiciones de oscuridad, con el fin de evaluar la tasa y el
porcentaje final de germinación. Estos autores concluyeron que las temperaturas
fluctuantes presentaron mejores resultados en la germinación que las temperaturas
constantes, afirmando que se debía al pequeño tamaño de la semilla y su sensibilidad
frente a la humedad. Finalmente recomendaron que la semilla de Verbena x hybrida, en
condiciones de laboratorio debe ser germinada en oscuridad, sin agua libre y con
temperaturas fluctuantes de 28ºC de día y 14ºC de noche, para así obtener un 80 % de
germinación.
Sin embargo, no en todas las especies las temperaturas fluctuantes han dado buenos
resultados (Azócar, 2006). Estudios realizados por Bewley (1985) demostraron que al
exponer semillas de Sysimbrium officinale a temperaturas fluctuantes y luego a
temperaturas contantes, la germinación final se vio reducida
2.3 Poliploidía
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Un organismo monoploide tiene solamente un complemento del juego básico de
cromosomas de la especie; un diploide tiene dos juegos, un triploide tres juegos
completos, un tetrapolide cuatro, un pentaploide cinco, un hexaploide seis, así
sucesivamente (Allard, 1967).
Los diploides se consideran como un cuerpo o célula somática, donde hay generalmente
dos cromosomas de una clase, uno de cada progenitor. Los gametos femeninos y
masculinos, en condición haploide, se unen para formar cigotos diploides En algunos
casos, la reducción de cromosomas falla en ambos gametos y los cigotos resultantes de
esta unión pueden contener el doble del número somático de cromosomas,
desarrollándose así un tejido tetraploide (Elliot, 1964).
Brauer (1969) define plantas poliploides como aquellas con un número de cromosomas
mayor que el número normal diploide.
Los efectos morfológicos y fisiológicos de la polipliodía varían en los distintos materiales
(Allard, 1967). Las plantas con número bajo de cromosomas es más probable que
respondan bien a la duplicación que aquellas plantas con número alto de cromosomas,
así como también es más probable tener éxito con plantas autógamas que alógamas
(Elliot, 1964).
Un efecto morfológico de la poliploidía es aumentar el tamaño de las porciones
vegetativas de la planta, haciendo que sean más frondosos y algo más vigorosos que sus
correspondientes diploides (Allard, 1967). Fisiológicamente, en cuanto al comportamiento
reproductivo libera la reserva de variabilidad más lentamente que uno diploide, y esto es a
causa de la herencia tetrásomica (Grant, 1989).
Por otra parte, Nohra et al. (2006), comprobaron el efecto de la poliploidia en la expresión
fenotípica de una planta, para lo cual caracterizaron el cariotipo de cinco ecotipos de la
uchuva (Physalis peruviana): tres silvestres, con dotación cromosomica de 2n=24 y dos
17
nativos, 2n=32 y 2n=48. Es así como los ecotipos nativos presentaron variaciones en las
características morfológicas y anatómicas como: mayor altura de plantas, área foliar,
número de estomas, número de cloroplastos, diámetro del fruto y peso seco del fruto.
Estos autores afirman que estas características son un reflejo del nivel de ploidía.
2.3.1 Métodos de inducción
La poliploidia es de gran importancia en los programas de mejoramiento de plantas, ya
que permite expresar una gran diversidad genética (The Enciclopedia of Seeds Science,
Technology and Uses, 2006). Es por esta razón, que los fitotécnicos se interesaron en la
inducción de poliploides como método de mejoramiento. Uno de los primeros métodos
para la obtención de poliploides fue el método de gemelos. En una baja proporción de
semillas en germinación, ocasionalmente se encuentran embriones dobles que producen
plantas heteroploides. También varios investigadores utilizaron tratamientos térmicos y
mediante regeneración de nuevos brotes del tejido calloso, se han logrado inducir cierto
número de sectores con doble número de cromosomas en especies e híbridos de tabaco
(Elliot, 1964).
También se ha experimentado con diferentes sustancias químicas, incluyendo algunas
drogas y otras sustancias tan simples como el gas hilarante, NO2 (Elliot, 1964).
Ninguno de los procedimientos anteriores era muy satisfactorio. No fue si no hasta la
aplicación práctica de la técnica de la colchicina propuesta por Blakeslee y Avery y por
Nebel en 1937, que abrió el camino para la producción de poliploides en cantidades
virtualmente ilimitadas (Elliot, 1964).
2.3.2 Colchicina
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La colchicina es un alcaloide (C22 H25 NO6 ) extraído de las semillas o los bulbos del
azafrán de otoño o azafrán de prado (Colchicum autumnale), es altamente tóxico para los
animales y es usado en los cultivos de plantas para inducir poliploidia (The Enciclopedia
of Seeds Science, Technology and Uses, 2006). Esta sustancia, inhibe en la mitosis, el
mecanismo del huso y propicia la formación de células con el doble o más del doble del
número de cromosomas (Elliot, 1964), impidiendo la formación del huso acromático, de
modo que los cromosomas no se separan en la anafase, formándose así una célula que
mantiene el doble del número de cromosoma de la célula original (Brauer, 1969).
Muchas plantas pueden soportar concentraciones bajas de este alcaloide, sin que resulte
tóxico, además es una sustancia soluble en agua, lo que favorece su uso en varios
programas de investigación (Brauer, 1969).
2.3.3 La colchicina: dosis y efectos
La colchicina como agente inductor de duplicación cromósomica, no depende sólo de su
efecto antimitostático sobre el tejido meristemático, sino que está en función de la
concentración empleada y el tiempo de penetración en el tejido (Imery-Buiza y Cequea-
Ruíz, 2001).
Rose et al. (2000), aplicaron este alcaloide en brotes de hibridos de Syringa vulgaris x
Syringa, realizando tres tratamientos, el primero con tres concentraciones (0.025;1.25;2.5
mM) por uno, dos o tres días, no obteniéndose tetraploides. En un segundo experimento
se agitaron los brotes en 0.25 mM de colchicina por uno o dos días, los resultados fueron
sólo un tetraploide y por último se utilizaron cuatro concentraciones de 0.05 a 0.20 mM
por uno o dos días, dando como resultado 11 tetraploides, de los cuales cinco provienen
de la concentración de 0,05 mM por dos días.
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Imery-Buiza y Cequea-Ruíz, (2001) analizaron las características cromósomicas de
plantas de Aloe vera inducida mediante la inmersión completa de rizomas en solución de
colchicina, obteniendo mayor eficiencia en la duplicación del número de cromosomas con
una dosis de 0,15% durante 24 horas.
Thao et al. (2003), obtuvieron tetraploides de plantas de Alocasia (2n=28), sumergiendo
los brotes apicales en distintas concentraciones de colchicina (0,01; 0,05; 0,1 %) y
tiempos 24, 48 y 72 horas. El resultado fue de seis plantas tetraploides, cuatro de ellas
provenientes de la inmersión en 0,01% de colchicina durante 24 horas.
Las diferencias fenotípicas observadas entre plantas diploides y las plantas tetraploides,
son el mayor diámetro y forma más ovalada de las hojas en éstas últimas.
Escandón et al. (2005) realizaron tratamientos antimitóticos en base a distintas
concentraciones de colchicina en segmentos nodales de Scoparia montevidiensis (planta
nativa de Argentina con un interesante potencial ornamental). Las concentraciones de
colchicina usadas fueron: 0,01-0,05% por 24 y 48 horas. Se obtuvieron cuatro
tetraploides, dos de estos provenientes de 0,01% de colchicina por 24 horas y los restante
de las concentraciones: 0,01 y 0,05% por 48 horas.
Las características morfoanatómicas de las plantas poliploides comparada con los
controles fueron, mayor diámetro de los tallos y mayor tamaño de flores y hojas.
Astudillo (2005) preparó dos soluciones de colchicina 0,05 y 0,1% y las utilizó en plantas
de Leucocoryne. Estas concentraciones las aplicó durante la prefloración durante 12
horas. Los resultados obtenidos fueron, una duplicación total o parcial del número de
cromosomas utilizando ambas concentraciones, no resultando tóxicas para las plantas.
20
2.3.4 Métodos para medir la poliploidía
Los tejidos u órganos poliploides se pueden identificar a través de diferentes métodos:
relación entre ploidia y número de cloroplastos por célula estomática, diámetro y número
de poros en el polen, morfología, conteo de cromosomas y citometría de flujo (Ollitrault-
Sammrcelli, 1999; Cubrero,1999 y Cramer,1999).
Ollitrault-Sammrcelli et al. (1999) afirman que la técnica más rápida y directa es la
citometria de flujo, que consiste en medir la cantidad de DNA en los núcleos y
compararlos con los niveles de ploidia del testigo.
3. Materiales y métodos
3.1 Ubicación del ensayo
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Las pruebas de laboratorio se llevaron a cabo en el Laboratorio de Fitogenética y Flores
de la Facultad de Agronomía perteneciente a la Pontificia Universidad Católica de
Valparaíso ubicada en la Comuna de Quillota (32º 52` latitud Sur, 71º 15` longitud Oeste).
Las mediciones en el campo se realizaron en invernaderos pertenecientes a la misma
Universidad.
3.2 Material experimental
Se usaron semillas de dos fenotipos de Glandularia spp., una de color blanco y otra
rosada, recolectadas de plantas mantenidas en cultivo por tres años.
3.3 Tratamientos
3.3.1 Desinfección
Los materiales de vidrio, incluyendo las placas con el papel absorbente, fueron
autoclavadas a 121ºC durante 10 minutos.
Las semillas fueron sumergidas en hipoclorito de sodio al 4% durante cinco minutos y
enjuagadas tres veces durante un minuto, para posteriormente sembrarlas. Dicho
procedimiento fue realizado en cámara de flujo laminar.
3.3.2 Ensayo 1: Tratamientos de germinación con temperaturas fluctuantes.
Se realizaron los siguientes tratamientos:
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- T0: Temperatura constante 20ºC, semillas color blanco y rosado
- T1: Temperaturas fluctuantes de 26ºC/14ºC, semillas color blanco y rosado
- T2: Temperaturas fluctuantes de 18ºC/12ºC, semillas color blanco y rosado
Las plantas en tratamiento fueron ingresados a una cámara de germinación con
fotoperiodos 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad, estas últimas coincidieron con las
bajas temperaturas (12ºC y 14ºC)
Se consideró semilla germinada a toda aquella semilla con radícula visible.
3.3.2.1 Indices de germinación
Con los resultados obtenidos se calcularon los siguientes índices de germinación,
propuestos por Marli (2006).
Tiempo medio de germinación ( t ):
t = ∑ ni ti / ∑ ni
Donde:
ti : Tiempo que transcurre de la siembra a la primera germinación.
ni: Número de semillas germinadas en el ti
Coeficiente de velocidad (CV)
CV = 100(A1 +A2 +A3 +A4+……….A)/ (A1 T1 +A2 T2 +A3 T3 +……AX TX )
Donde:
23
AX: número de semillas germinadas en el primer día, segundo día, hasta el último día (x)
TX: número de días transcurridos de la siembra a la germinación observada.
Sincronización de la germinación (Z)
Z = ∑ Cn i / N ; N = ∑ ni(∑ ni – 1)/2
Donde:
Cn i: Sumatoria de las semillas germinadas en el tiempo i.
3.3.2.2 Curvas de germinación
Los resultados de germinación son difíciles de comparar y analizar, pero al realizar un
ajuste por regresión lineal simple en las curvas de germinación con un número mínimo de
parámetros biológicamente importantes, puede analizarse satisfactoriamente. (De la
Cuadra, 1999). La ecuación que se ajusta a muchas curvas de germinación observada es:
p = A [1-exp{-k(t- t0 )}] ; Mobayen (1980) y De la Cuadra (1999)
Donde:
p: porcentaje de germinación en el tiempo (t)
A: porcentaje final de germinación
t0: tiempo estimado de la germinación de la primera semilla
k : medida de la extensión en la población del tiempo de germinación.
3.3.3 Ensayo 2: Inducción de poliploidía a través de la aplicación de colchicina a semillas
germinadas de Glandularia spp. y descripción de un ejemplar poliploide.
Tratamiento de poliploidización en semillas germinadas
24
Las semillas germinadas (con radícula visible), fueron colocadas en papel empapado con
colchicina a distintas concentraciones de 0,01. 0,05 y 0,1% por dos tiempos de
exposición, tres y seis horas.
Posteriormente cada semilla fue trasplantada a una bandeja speedling y dejado en un
invernadero. Se observó diariamente la emergencia y sobrevivencia de las semillas
tratadas.
Caracterización morfoanatómica de una planta poliploide
Se caracterizó una planta poliploide proveniente de los ensayos realizados por Mena
(2006), donde evaluó los efectos de las dosis y tiempos de exposición a la colchicina de
microestacas de plantas de Glandularia spp. Obteniendo mayor sobreviviencia y
enraizamiento con una dosis 0,01% de colchicina por 24 horas.
El resultado del ensayo fue una planta poliploide por 30 accesiones que recibieron el
tratamiento, lo que se determinó a través del conteo directo de cromosomas (Calvo, 2007)
(Figura 1).
Figura 1. Cariotipo Tetraploide 4n=20, correspondiente a accesiones tratadas con
colchicina al 0,01% por 24 h. (Calvo, 2007)
25
Para evaluar el efecto morfoanatómico de la duplicación de cromosomas se evaluó un
ejemplar tetraploide versus seis plantas no poliploides (diploides), analizando: largo y
ancho de las hojas, diámetro del tallo floral, distancia entrenudos, diámetro de la
inflorescencia, largo del tubo polínico y largo de sépalos.
3.4 Diseño Experimental
En ambos ensayos, previo al análisis de varianza se analizaron los datos de cada una de
las variables mediante un test de normalidad, en caso de no ser significativos se aplicaron
transformaciones.
El ensayo 1 fue analizado mediante un modelo Factorial con un Diseño completamente al
azar. En las variables se realizó un análisis de varianza de dos vías y se aplicó una
separación de medias utilizando el test de Tukey en los casos en que se encontraron
diferencias significativas.
Factor 1: Temperaturas fluctuante (tres niveles)
Factor 2: Fenotipo (dos niveles)
La unidad experimental la constituyó una placa petri con 20 semillas y se establecieron
cinco repeticiones.
En el ensayo 2, donde se evaluó la sobrevivencia de las semillas tratadas con
colchicina,se analizaron los resultados usando el estadístico Chi cuadrado con un 5% de
significancia, ya que se trató una variable con respuesta dicotómica (semilla viva o
muerta), en la caracterización de la planta poliploide, las variables morfológicas fueron
analizadas mediante un Diseño Completamente al Azar (DCA), realizándose separación
de medias a través de Tukey.
Para los análisis estadísticos se uso el SPSS versión 14.0 y MINITAB 13.2
26
4. Resultados y discusión
4.1 Efecto de las temperaturas y ecotipo en la germinación de Glandularia spp.
La germinación de Glandularia spp depende de los dos factores analizados: temperaturas
fluctuantes y ecotipo. Siendo significativa la interacción de éstas (Cuadro1).
27
Cuadro1. Efecto de las temperaturas y ecotipo en el porcentaje de germinación de Glandularia spp
Fenotipo
Temperatura Blancas Rosadas
Germinación (%)
20ºC 20 b* 39 a b 26ºC/14ºC 62 a 23 b 18ºC/12ºC 22 b 67 a
*Medias con igual letra no presentan diferencias significativas según Andeva (p ≤ 0,05). The Enciclopedia of Seeds Science, Technology and Uses (2006) afirma que los rangos
de temperaturas dentro de la germinación varían considerablemente entre las especies,
variedades y origen geográfico de éstas.
La semillas de Glandularia spp fueron recolectadas de plantas mantenidas en un cultivo
por tres años en el jardín nativo de la Facultad de Agronomía, como estas plantas fueron
compradas en un vivero, el verdadero origen es desconocido, pero al ver los resultados se
puede inferir que el fenotipo rosado proviene de zonas costeras, ya que en estos lugares
hay una influencia oceánica que da origen a un régimen térmico moderado con poca
amplitud térmica tanto diaria (frío de noche y calor de día) como anual, es decir una
menor oscilación térmica. (Dirección Metereológica de Chile, 2008), lo que está
representado por la mínima diferencia de temperaturas usadas: 18ºC de día y 12ºC de
noche.
El fenotipo blanco respondió mejor a un rango más amplio de temperatura, por lo que este
fenotipo está asociado a lugares con una fuerte oscilación térmica: zonas desérticas,
precordillera, interior, etc.
Es importante mencionar, que los resultados obtenidos no coincidieron con la
recomendación de AOSA (2002), que afirma que la temperatura óptima para la
germinación de glandularia es 20ºC, sin mencionar los requerimientos específicos para
28
esta especie, como: origen, temperaturas fluctuantes y material genético que según
Herrera (1995), está estrechamente relacionado con la respuesta a la germinación.
Con respecto a los valores del coeficiente de velocidad (Cuadro 2), al realizar el análisis
estadístico sólo resultaron ser significativos para el factor temperatura y de estos
resultados se puede inferir que la velocidad de germinación está directamente relacionada
con la temperatura, ya que estos valores fueron mayores en los tratamientos que se
usaron temperaturas iguales o mayores a 20ºC.
Cuadro 2. Efecto de la temperatura en el coeficiente de velocidad en la germinación de Glandularia spp
*Medias con igual letra no presentan diferencias significativas según Andeva (p ≤ 0,05). Según Bewley (1982), las temperaturas altas (dentro de los límites de la actividad
biológica) aumentan la rapidez con que el agua penetra en las semillas y favorecen la
disolución temprana de solutos, lo que acelera diversos procesos enzimáticos que en
muchos casos, provocan una emergencia más pronta de la radícula.
En el Cuadro 3 se puede observar que no hay diferencias significativas de los tiempos
medios de germinación entre los tratamientos, por lo que se puede afirmar que el tiempo
medio de germinación de Glandularia spp varía de 20 a 33 días.
Los resultados de los valores de Z indicados en el Cuadro 4, señalan que no existe
diferencia significativa en los índices de sincronización obtenidos en cada tratamiento.
Marli y Garcia (2006) afirman que los valores de Z están en el rango de cero a uno y que
cuando Z =1, la germinación de las semillas ocurre al mismo tiempo, por lo que se puede
Temperaturas Coeficiente de
velocidad
20ºC 0,03731 a 26ºC/14ºC 0,03738 a 18ºC/12ºC 0,02557 b
29
decir que la germinación de las semillas de glandularia ocurre más bien de una manera
dispersa, ya que los valores se acercaron mas a cero que a uno.
Cuadro 3. Efecto de la temperatura y fenotipo en el tiempo medio de germinación (días) de Glandularia spp.
Fenotipo Temperatura Blancas Rosadas
Tiempo medio de germinación
20ºC 33,01 ns 23,05
26ºC/14ºC 27,06 27,28 18ºC/12ºC 20,51 20,27
*Medias con igual letra no presentan diferencias significativas según Andeva (p ≤ 0,05).
Cuadro 4. Índice de sincronización (Z) de la germinación de Glandularia spp.
Fenotipo Temperatura Blancas Rosadas
Índice de sincronización (Z)
20ºC 0,19 ns 0,27
26ºC/14ºC 0,30 0,14 18ºC/12ºC 0,14 0,28
*Medias con igual letra no presentan diferencias significativas según Andeva(p ≤ 0,05).
4.1.1Curvas de germinación
Las curvas de germinación (Anexo 1) fueron ajustadas por regresión lineal simple (Figura
1) según la ecuación p = A [1-exp{-k(t- t0 )}] (Mobayen,1980 y De la Cuadra,1999) y los
valores de los parámetros porcentaje final de germinación (A), tiempo estimado de
germinación de la primera semilla (t0 ), extensión en la población del tiempo de
germinación (k) y velocidad de germinación de la mitad del total de semillas que germinen
(1/tA/2) se presentan en la Cuadro 5.
30
Cuado 5.Efecto de ecotipo y temperatura sobre los valores parámetros A (%), t0 (d), k (d-1)
y 1/t0/2 que caracterizan la curva de germinación (k)
(*)Los datos fueron analizados estadísticamente en cada columna de forma independiente
(ns) no existen diferencias significativas (p > 0,05)
Los mayores porcentajes finales de germinación alcanzados (A), fueron en el ecotipo
blanco y temperaturas de 26ºC/14ºC y ecotipo rosado y temperaturas fluctuantes de
18ºC/12ºC (Figura 1), siendo éste último casi tres veces mayor que el valor de A , en el
ecotipo blanco con las mismas temperaturas. Por lo que se puede afirmar que a
condiciones de temperatura 18ºC/12ºC la germinación es diferenciada en los ecotipos de
Glandularia spp.
Con respecto al tiempo estimado de la germinación de la primera semilla difiere
considerablemente con lo indicado por la AOSA (2002), que informa que debe transcurrir
ocho días para empezar a observar semillas con la aparición de la radícula, aunque en el
ecotipo rosado a 20ºC se calculó un t0 de 9,16 días, acercándose considerablemente a lo
consultado en la literatura, el valor promedio de los tratamientos fue de 16,3 días.
Los valores k en general fueron muy bajos, lo que se traduce en un largo tiempo
transcurrido entre la primera y última germinación siendo desventajoso, ya que los lotes
presentan una desuniformidad en su emergencia. Cabe mencionar que el fenotipo de
flores blancas y temperaturas fluctuantes de 18ºC/12ºC, se escapó considerablemente de
Ecotipo y temperatura A (%) t0 K 1/tA/2
Blancas 20ºC 25 a 14,6 a 0,05 a 0,03 ns Rosadas 20ºC 42 a b 9,16 a 0,08 a 0,05 Blancas 26ºC/14ºC 62 b 14,1 a 0,10 a 0,04 Rosadass 26ºC/14ºC 23 a 12,7 a 0,10 a 0,05 Blancas 18ºC/12ºC 23 a 30,3 b 0,20 b 0,02 Rosadas18ºC/12ºC 67 b 16,9 a b 0,09 a 0,04
31
los valores de K obtenidos en los otros tratamientos, por lo tanto, este lote de semillas
posee una mayor concentración en la germinación de las semillas tratadas.
0
10
20
30
40
50
60
70
13 17 20 21 22 27 30 34 37 41
Tiempo, t (días)
Ger
min
ació
n, p
Curva 1Curva 2Curva 3Curva 4Curva 5Curva 6
FIGURA 1. Curvas de germinación descritas por el modelo exponencial p = A [1-exp{-
k(t- t0 )}] para el porcentaje de germinación influenciados por ecotipo y temperatura.
Curva 1 fenotipo blanco 20ºC : p = 23 [1-exp{-0.1021(t- 12.77)}] Curva 2 fenotipo rosado 20ºC : p = 42 [1-exp{-0.08(t- 9.16)}]
32
Curva 3 fenotipo blanco 26ºC/14ºC : p = 62 [1-exp{-0.1045(t- 14.16 )}] Curva 4 fenotipo rosado 26ºC/14ºC : p = 23 [1-exp{-0.1021(t- 12.77)}] Curva 5 fenotipo blanco 18ºC/12ºC : p = 23 [1-exp{-0.202(t- 30.35)}] Curva 6 fenotipo rosado18ºC/12ºC : p = 67 [1-exp{-0.0928(t- 16.94 )}]
La velocidad de germinación del 50% de las semillas (1/tA/2) tendió a ser igual en la
germinación de las semillas tratadas.
Los resultados de este ensayo, en términos generales indican que Glandularia spp.
germinada a temperaturas de 12ºC a 26ºC, presentó un porcentaje de germinación
promedio de 40%, con un valor mínimo de 23% y un máximo de 67%, estos resultados
superan a los presentados por San Martino y Beeskow (2006), que sólo obtuvieron un
máximo de 12% en especies pertenecientes a este género.
4.2 Sobrevivencia de semillas germinadas tratadas con colchicina
De las 480 semillas germinadas de Glandularia spp tratadas con las distintas
concentraciones de colchicina, se observó sobrevivencia de sólo 65 semillas, un 13,5% de
las semillas tratadas.
Este bajo porcentaje es una respuesta esperada ya que en otros estudios realizados,
donde se aplicó similares dosis de este alcaloide no superaron el 40 % de sobrevivencia.
Portuluppi et al (1995), sumergieron semillas germinadas de Habranthus martinezii en
0,02%, 0,05% y 0,1% de colchicina y la sobrevivencia total de las semillas fue de un 35%.
Así también Sartor et al. (2004), trataron 150 semillas de Paspalum plicatulum en 0.1% de
colchicina logrando sobrevivir sólo el 8% de estas, acercándose notablemente a los
resultados obtenidos en este estudio.
33
Estos últimos autores afirman que la baja sobrevivencia está explicada por la sensibilidad
a repiques y trasplantes de la especies usadas, y además el estrés ocasionado por la
exposición a la colchicina y el alto grado de toxicidad que ésta presenta.
Con respecto a la sobrevivencia según el tiempo de exposición (Cuadro 6), los resultados
obtenidos no coinciden con los reportados por Portuluppi et al (1995), Rose et al. (2000) y
Thao et al. (2003), que a mayor tiempo de exposición de colchicina en semillas, plántulas,
brotes, callos embriogénicos, la sobrevivencia fue menor; esto puede deberse a que el
máximo tiempo usado en este ensayo (seis horas) es bajo con respecto de los tiempos
usados por los autores citados, 24, 48 y 72 horas.
Cuadro 6. Porcentaje de semillas que sobrevivieron a las dosis (0,01;0.,5 y 0,1%) y tiempos (3 y 6 horas) de exposición a colchicina.
(ns) No existen diferencias significativas (p > 0,05)
(s) Existen diferencias significativas (p ≤ 0,05)
Al comparar los tratamientos entre sí (Cuadro 6), se puede afirmar que al sumergir las
semillas en 0.05 % de colchicina y con un tiempo de exposición de tres horas, la
sobrevivencia alcanzada fue la menor.
Infiriéndose además que los porcentajes de sobrevivencia de las semillas en las dosis y
tiempos estudiados no siguen un patrón como en los ensayos de Mena (2007), Thao et al.
Dosis
3 horas
6horas
Porcentaje de sobrevivencia (%) 0,01 13,8 ns 19 ns 0,05 5 s 9,09 ns 0,1 9,4 ns 18,2 ns
34
(2003), que trataron explantes, y la muerte de éstas se incrementó a medida que se
aumentaban las dosis del alcaloide.
4.3 Caracterización morfoanatómica de planta poliploide
La planta poliploide de Glandularia spp obtenida de los ensayos realizados por Mena
(2007), presentó una notable diferencia morfológica al compararla con otras seis plantas
no poliploides (Cuadro 7).
Cuadro 7.Comparación morfológica entre una planta poliploide y seis diploides
(*)Los datos fueron analizados estadísticamente en cada columna de forma independiente
(ns) no existen diferencias significativas
*Medias con igual letra no presentan diferencias significativas según Andeva (p ≤ 0,05
Hoja Tallo Floral Inflorescencia Corola
Plantas Largo Ancho DiámetroDist. Entrenud Diámetro Largo tubo
Largo sépalos
Medición (mm)
Poliploide 15,9 a 12,3 a 1,4ns 7,3ns 17,5 a 15,0 a 9,3 a
Diploide1 9,9 b 9,00 ab 1,0 7,1 12,3 b 11,6 b 7,3 b
Diploide2 10,6 b 9,02 ab 0,9 3,9 14,3 b 11,9 b 7,7 b
Diploide3 7,8 b 8,6 b 1,1 6,0 13,3 b 12,2 b 7,2 b
Diploide4 8,3 b 8,7 b 1,0 7,0 11,6 b 12,6 a b 6,5 b
Diploide5 10,2 b 9,2 ab 1,2 7,6 12,6 b 10,6 b 7,0 b
Diploide6 8,3 b 8,3 b 0,9 3,7 12,3 b 11,2 b 6,8 b
35
Al analizar estadísticamente los resultados, se puede decir que el largo de la hoja, largo
de sépalos y el diámetro de la inflorescencia son mayores que los medidos en las plantas
diploides (Figura 2). Con respecto al ancho de las hojas, el tetraploide es igual al diploide
uno y diploide dos y el largo del tubo polínico del poliploide no presenta una gran
diferencia con el largo del diploide cuatro. El tallo floral no presento diferencias
significativas.Varios autores han informado en diferentes especies que el incremento de
ploidia se manifiesta en plantas más frondosos, de mayor altura, peso seco, área foliar y
mayor tamaño de flores (Allard, 1967; Escandón et a,. 2005 y Mensah et al, 2007) lo que
apoya los resultados obtenidos en este estudio.
Figura 2 Glandularia spp poliploide comparada con plantas diploides; izquierda: diploide, Derecha: poliploide
36
5. Conclusiones
La interacción del rango térmico y el fenotipo es fundamental en la germinación de
semillas de glandularia, por lo que es importante conocer la procedencia de cada especie
de este género cuando se quiera someter a un régimen térmico determinado.
A pesar de la influencia del tratamiento térmico y fenotipo, no se detecta diferencia en el
tiempo medio de germinación, el cual estuvo entre los 20 y 33 días. El índice de
sincronización tampoco es influenciado por las temperaturas y fenotipo y sus valores son
más bien bajos, presentando una germinación variable.
La velocidad de germinación es incrementada cuando se incluyen temperaturas de 20ºC o
más, por lo que las temperaturas influyen directamente en este índice, no así el fenotipo
tratado.
La sobrevivencia de las semillas tratadas con colchicina fue baja, alcanzando sólo un
13,5%.
La plodía en plantas de glandularia provoca mayor tamaño de hoja (largo) y mayor
tamaño de flor, la aplicación no modificó la expresión de los tallos.
37
6. Literatura citada Allard, R. 1967. Principios de la mejora genética de las plantas. 498 p. Omega S.A., Barcelona, España. Association Of Official Seed Analysts. 2002. Rules for Testing seeds. Contribution N° 32. 89. Astudillo, L. 2005. Inducción de poliploidia en plantas del género Leucocoryne. 52p. Taller de Licenciatura Ingeniero Agrónomo. Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, Facultad de Agronomia. Quillota, Chile Azócar, M.P. 2006. Caracterización de la germinación y de la dormancia de las malezas acuñaticas Alisma plantago-aquatica L, Cyperus diffomis L.y Shoenoplectus mucronatus L. y su respuesta a la temperatura y luz. 53 p. Tesis Ingeniero Agrónomo.Pontificia Universidad Católica de Chile, Facultad de Agronomia. Santiago, Chile. Besnier, F. 1989. Semillas: biología y tecnología. 697 p. Mundiprensa, Madrid, España Bewley, J. 1982. Physiology and biochemistry of seeds in relation to germination. 375 p. Springer, Berlin, Germany. Botta, SM. 1993. Notas en el género Glandularia (Vervenaceae-Varevenoideae). III. Estudio taxonómico de las especies patagónicas. Paraodiana 8(1):9-36
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40
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ANEXOS
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Anexo 1. Curvas de germinación
0
10
20
30
40
50
60
70
13 17 20 21 22 27 30 34 37 41
Tirmpo, t (días)
Ger
min
ació
n (%
) CurvaCurvaCurvaCurvaCurvaCurva
Curva 1 fenotipo blanco 20ºC Curva 2 fenotipo rosado 20ºC Curva 3 fenotipo blanco 26ºC/14ºC
43
Curva 4 fenotipo rosado 26ºC/14ºC Curva 5 fenotipo blanco 18ºC/12ºC Curva 6 fenotipo rosado 18ºC/12ºC