Test Progensa PCA3

Pouze pro export z USA.
Všeobecné informace . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 Urené pouití . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
Souhrn a vysvtlení testu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
Principy metody . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
Materiály . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
Poadavky na uchovávání a manipulaci . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
Sbr, transport a uchovávání vzorku . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
Postup testu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15 Poznámky k postupu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
Postupy kontroly kvality . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
Všeobecné informace Progensa PCA3
Všeobecné informace
Urené pouití
Test Progensa PCA3 je amplifikaní test nukleové kyseliny (NAAT) in vitro, který detekuje ribonukleovou kyselinu (RNA) genu . 3 karcinomu prostaty (Prostate Cancer Gene 3, PCA3) ve vzorcích muské moi a generuje skóre PCA3. Skóre PCA3 je ureno pro pouití ve spojení se standardizovaným diagnostickým algoritmem jako pomcka pro diagnózu karcinomu prostaty.
Souhrn a vysvtlení testu
Pouití testování prostatického specifického antigenu (PSA) v séru pi skríningu karcinomu prostaty vedlo k bioptické diagnóze menších a díve nedetekovaných nádor (1), ím vzniklo nové diagnostické dilema: pouze ást mu se zvýšenými hladinami PSA v séru mají detekovatelný karcinom prostaty. Mui s minimáln jednou negativní biopsií mají asto trvale zvýšenou hladinu PSA v séru primárn v dsledku zvtšené prostaty a benigní hyperplazie prostaty (BPH). Ovšem významný podíl mu s mírn zvýšeným sérovým PSA (2,5-4,0 µg/l) má, nebo se u nich vyvine, klinicky významný karcinom prostaty (1). Zatímco biopsie zstává pi detekci karcinomu prostaty zlatým standardem, jsou pro snazší rozhodování o provedení biopsie prostaty nutné pesnjší testy s lepší specificitou.
PCA3 (také známé jaké „PCA3DD3“ nebo „DD3PCA3“) je nekódující prostatická specifická RNA, která je ve vysoké míe exprimována v bukách karcinomu prostaty, se stední 66násobnou up-regulací ve srovnání s okolní benigní tkání (2). Exprese genu PSA je naopak podobná v nádorových i benigních bukách prostaty. Hladiny PSA RNA mohou být proto pouity pro normalizaci mnoství prostatické specifické ribonukleové kyseliny (RNA) ve vzorcích pro molekulární testy. Byla prokázána vhodnost kvantitativního molekulárního testování zaloeného na PCA3 z moových sediment (2) a z plné moi (3).
Test Progensa PCA3 vyuívá plnou mo odebranou po vyšetení per rectum (PR), které zahrnuje ti zmáknutí kadého laloku prostaty. Vyšetení per rectum zpsobí uvolnní bunk prostaty pes prostatické kanálky do moových cest, kde mohou být odebrány v první porci moi. Mo je zpracovávána pidáním média pro pepravu moi (UTM), které zpsobuje lýzu bunk a stabilizuje RNA. Je provedena kvantifikace PCA3 RNA a PSA RNA a na základ pomru PCA3 RNA/PSA RNA je stanoveno skóre PCA3. Krom normalizace signálu PCA3 slouí mení PSA RNA také k potvrzení, e zisk prostatické specifické RNA je dostaující pro generaci platných výsledk. Vyšší skóre PCA3 koreluje s vyšší pravdpodobností pozitivní biopsie prostaty.
Principy metody
Test Progensa PCA3 je tvoen dvma kvantitativními amplifikaními testy nukleové kyseliny. Test Progensa PCA3 kombinuje následující technologie: technologii zachycení cíle za úelem zdokonalení zpracování vzork moi, technologii transkripn mediované amplifikace (TMA) za úelem amplifikace clové RNA a technologii hybridizan protekního testu (HPA) za úelem detekce amplikonu.
Je-li test Progensa PCA3 provádn v laboratoi, jsou molekuly cílové RNA izolovány ze vzork moi pomocí metody zachycení cíle. Oligonukleotidy („zachycené oligonukleotidy“), které jsou komplementární pro sekvenn specifické cílové regiony, jsou ve vzorku moi hybridizovány pro cíle. Pro kadý cíl se pouívá samostatný zachycený oligonukleotid.
Test Progensa PCA3 2 501377CS Rev. 003
Progensa PCA3 Všeobecné informace
Hybridizovaný cíl je poté zachycen na magnetické mikroástice, které jsou separovány ze vzorku moi v magnetickém poli. Promývací kroky se pouívají pro odstranní cizorodých komponent z reakní zkumavky. Magnetická separace a promývací kroky se provádí pomocí systému zachycení cíle.
Amplifikace cíle probíhá pomocí TMA, co je amplifikaní metoda nukleové kyseliny zaloená na transkripci, která vyuívá dva enzymy, reverzní transkriptázu Moloneyho viru myší leukemie (MMLV) a polymerázu T7 RNA. Pro kadý cíl se pouívá unikátní sada primer. Reverzní transkriptáza se pouívá k vytvoení kopie deoxyribonukleové kyseliny (DNA) (obsahující promoní sekvenci pro polymerázu T7 RNA) cílové sekvence. Polymeráza T7 RNA produkuje více kopií RNA amplikonu z kopie DNA templátu.
Detekce je dosaena pomocí HPA vyuívající jednoetzcové chemiluminiscenn znaené sondy nukleové kyseliny, které jsou komplementární k amplikonu. Samostatné sondy se pouívají pro kadý cílový amplikon. Znaené sondy nukleové kyseliny hybridizují specificky s amplikonem. Selekní reagencie rozlišuje mezi hybridizovanými a nehybridizovanými sondami inaktivací znaení na nehybridizovaných sondách. Bhem detekního kroku je chemiluminiscenní signál produkovaný hybridizovanou sondou men pomocí luminometru a je hlášen jako relativní svtelné jednotky (RLU).
PCA3 RNA a PSA RNA jsou kvantifikovány v samostatných zkumavkách a je stanoveno skóre PCA3. Kalibrátory obsahující známé mnoství PCA3 RNA nebo PSA RNA transkriptu jsou obsaeny v kadém cyklu testu a pouívají se k vytvoení standardní kivky. PCA3 a PSA kontroly jsou obsaeny také k verifikaci pesnosti výsledk interpolovaných ze standardní kivky.
Dodávané materiály a reagencie Progensa PCA3
Dodávané materiály a reagencie
Poznámka: Informace o H-vtách a P-vtách, které mohou být spojeny s reagenciemi, naleznete v knihovn bezpenostních list (Safety Data Sheet Library) na adrese www.hologic.com/sds.
Níe jsou uvedeny reagencie a materiály dodávané pro soupravu testu Progensa PCA3/PSA k pouití pi testu Progensa PCA3. Vedle názvu reagencie jsou také uvedeny identifikaní symboly reagencie.
Souprava testu Progensa PCA3, 2 x 100 reakcí, kat. . 302355 (8 krabic)
Souprava Progensa PCA3, 100 reakcí
Chladicí krabice Progensa PCA3 — uchovávejte pi teplot 2C a 8C od píjmu a do doby pouitelnosti oznaené na štítku
Krabice s pokojovou teplotou Progensa PCA3 — uchovávejte pi teplot 15C a 30 C od píjmu a do doby pouitelnosti oznaené na štítku
Symbol Sloka Mnoství
A PCA3 amplifikaní reagencie Neinfekní nukleové kyseliny vysušené v pufrovaném roztoku HEPES obsahujícím <10 % objemového inidla.
1 lahvika
1 lahvika
P Reagencie sondy PCA3 Neinfekní chemiluminiscenní DNA sondy vysušené v sukcinátem pufrovaném roztoku obsahujícím <5 % objemového inidla a <5 % lithium lauryl sulfátu.
1 lahvika
1 x 9,3 ml
1 x 3,3 ml
PR PCA3/PSA rekonstituní roztok sondy Sukcinátem pufrovaný roztok obsahující <5 % lithium lauryl sulfátu.
1 x 12,4 ml
S PCA3/PSA selekní reagencie Borátem pufrovaný roztok obsahující surfaktant (1 % Triton X-100).
1 x 31 ml
TCR PCA3 reagencie zachycující cíl Neinfekní nukleová kyselina v pufrovaném roztoku HEPES obsahující pevnou fázi.
1 x 22 ml
Uzavírací karty 1 balení
Rekonstituní objímky 1 balení
Progensa PCA3 Dodávané materiály a reagencie
Te
st Progensa PCA3 5 501377CS Rev. 003
Souprava kalibrátoru a kontrol Progensa PCA3 — uchovávejte pi teplot 2 C a 8C od píjmu a do doby pouitelnosti oznaené na štítku
Souprava Progensa PSA, 100 reakcí
Chladicí krabice Progensa PSA — uchovávejte pi teplot 2 °C a 8 °C od píjmu a do doby pouitelnosti oznaené na štítku
CAL PCA3 kalibrátor 1 Fosfátem pufrovaný roztok obsahující < 5 % lithium lauryl sulfátu.
1 x 2,0 ml
CAL PCA3 kalibrátory 2-5 Neinfekní PCA3 nukleová kyselina ve fosfátem pufrovaném roztoku obsahujícím <5 % lithium lauryl sulfátu.
4 x 1,7 ml
PC PCA3 pozitivní kontroly Neinfekní PCA3 nukleová kyselina ve fosfátem pufrovaném roztoku obsahujícím <5 % lithium lauryl sulfátu.
2 x 1,7 ml
A PSA amplifikaní reagencie Neinfekní nukleové kyseliny vysušené v pufrovaném roztoku HEPES obsahujícím <10 % objemového inidla.
1 lahvika
1 lahvika
P Reagencie sondy PSA Neinfekní chemiluminiscenní DNA sondy vysušené v sukcinátem pufrovaném roztoku obsahujícím <5 % objemového inidla a <5 % lithium lauryl sulfátu.
1 lahvika
Dodávané materiály a reagencie Progensa PCA3
Krabice s pokojovou teplotou Progensa PSA — uchovávejte pi teplot 15 °C a 30 °C od píjmu a do doby pouitelnosti oznaené na štítku
Souprava kalibrátoru a kontrol Progensa PSA — uchovávejte pi teplot 2 °C a 8 °C od píjmu a do doby pouitelnosti oznaené na štítku
1 x 9,3 ml
1 x 3,3 ml
PR PCA3/PSA rekonstituní roztok sondy Sukcinátem pufrovaný roztok obsahující <5 % lithium lauryl sulfátu.
1 x 12,4 ml
S PCA3/PSA selekní reagencie Borátem pufrovaný roztok obsahující surfaktant (1 % Triton X-100).
1 x 31 ml
TCR PSA reagencie zachycující cíl Neinfekní nukleová kyselina v pufrovaném roztoku HEPES obsahující pevnou fázi.
1 x 22 ml
Uzavírací karty 1 balení
Rekonstituní objímky 1 balení
CAL PSA kalibrátor 1 Fosfátem pufrovaný roztok obsahující < 5 % lithium lauryl sulfátu.
1 x 2,0 ml
CAL PSA kalibrátory 2-5 Neinfekní PSA nukleová kyselina ve fosfátem pufrovaném roztoku obsahujícím <5 % lithium lauryl sulfátu.
4 x 1,7 ml
PC PSA pozitivní kontroly Neinfekní PSA nukleová kyselina ve fosfátem pufrovaném roztoku obsahujícím <5 % lithium lauryl sulfátu.
2 x 1,7 ml
Progensa PCA3 Dodávané materiály a reagencie
Kapaliny testu Aptima — uchovávání pi teplot 15 °C a 30 °C (2 krabice) od píjmu a do doby pouitelnosti oznaené na štítku
Poznámka: Veškeré materiály, které jsou souástí soupravy testu Progensa PCA3, je moné zakoupit také samostatn (viz kapitola Materiály, kde jsou uvedeny podrobnosti).
W Promývací roztok Pufrovaný roztok HEPES obsahující <2 % dodecyl sulfátu sodného.
1 x 402 ml
1 x 402 ml
1 x 24,6 ml
Materiály Progensa PCA3
Poznámka: Informace o H-vtách a P-vtách, které mohou být spojeny s reagenciemi, naleznete v knihovn bezpenostních list (Safety Data Sheet Library) na adrese www.hologic.com/sds.
Poznámka: Materiály dostupné od spolenosti Hologic mají uvedená katalogová ísla.
Potebný materiál, který se dodává zvláš
Volitelné materiály
Kat. .
Luminometr Leader HC+ 104747
Systém zachycení cíle Hologic (Hologic Target Capture System - TCS) 104555
Souprava Aptima Auto Detect 301048
2 opakovací pipetory eppendorf Repeater Plus 105725
Špiky pro opakovací pipetory (2,5 ml, 5,0 ml a 25,0 ml) —
Bu: 2 vícezkumavkové víivé mixéry 102160F 3 cirkulaní vodní lázn 104586F
(62 °C ± 1 °C, 42 °C ± 1 °C, 62 °C ± 1 °C) 3 distanní vloky pro vodní láze 104627
—
Špiky, 1000 µl P1000 105049
Pipetor, eppendorf 20 a 200 µl 105726
Špiky, pipeta 20 a 200 µl —
Blidlo, 5% a 7% (0,7 M a 1,0 M) roztok chlornanu sodného —
Plastový kontejner s velkým uzávrem —
Standardní kontejnery na sbr moi, bez konzervaních látek —
Jednotky deseti zkumavek (Ten Tube Unit - TTU) TU0022
Kazety s deseti špikami (Ten Tip Cassette - TTC) 104578
Kalibraní standard SysCheck 301078
Souprava kalibrátor a kontrol Progensa PCA3 302353
Progensa PCA3 Materiály
Technické panely Progensa PCA3/PSA 302350
Souprava pro ední vzorku Progensa PCA3 302351
Souprava kapalin pro test Aptima 302002C
Jednorázové pipetové špiky s filtrem (1 ml) 10612513 (Tecan)
TECAN Freedom EVO 100/4 900932
—
Varování a bezpenostní opatení Progensa PCA3
Varování a bezpenostní opatení
B. Pouze pro export z USA.
Související s laboratoí
C. Pouívejte pouze dodávané nebo specifikované jednorázové laboratorní materiály.
D. Pouívejte rutinní laboratorní bezpenostní opatení. V urených pracovních prostorech nejezte, nepijte ani nekute. Pi manipulaci se vzorky moi a reagenciemi soupravy pouívejte jednorázové rukavice bez talku, ochranu oí a laboratorní plášt. Po manipulaci se vzorky moi a reagenciemi soupravy si dkladn umyjte ruce.
E. Varování: Drádivé, íravina. Zamezte styku reagencií Auto Detect 1 a Auto Detect 2 s kí, oima a sliznicemi. Pokud se tyto kapaliny dostanou do styku s kí nebo oima, omyjte postienou oblast vodou. Pokud dojde k vylití kapalin, rozete je vodou pedtím, ne je vytete do sucha.
F. Pracovní povrchy, pipetory a jiné vybavení musí být pravideln dekontaminovány pomocí 2,5% a 3,5% (0,35 M a 0,5 M) chlornanu sodného (roztok blidla) (viz Poznámky k postupu).
G. Drazn se doporuuje pouití samostatné poamplifikaní oblasti, aby se minimalizovala kontaminace amplikonu v testu. Tato vyhrazená oblast by mla být mimo preamplifikaní oblast, kde probíhá píprava reagencie, zachycení cíle a amplifikace.
H. Chcete-li zabránit kontaminaci laboratorní oblasti amplikonem, mla by být laboratorní oblast zorganizována v jednosmrném pracovním toku od pípravy reagencie do poamplifikaní oblasti. Vzorky, zaízení a reagencie se nesmí vracet do oblasti, kde byl proveden pedchozí krok. Personál by se neml pohybovat zpt do pedchozí pracovní oblasti bez ádného zabránní kontaminaci.
Související s vzorkem
I. Po pidání moi musí být na zaátku hladina kapaliny v transportní zkumavce pro vzorek moi mezi dvma ernými indikátorovými linkami na štítku zkumavky. Jinak musí být vzorky odmítnuty.
J. Pi peprav vzork dodrujte správné podmínky uchovávání, aby byla zajištna integrita vzorku. Stabilita vzorku nebyla hodnocena za jiných pepravních podmínek ne tch, které jsou doporueny.
K. Data pouitelnosti uvedená na sbrné souprav se vztahují na místo sbru a nikoliv na testovací zaízení. Vzorky odebrané kdykoliv ped datem pouitelnosti sbrné soupravy a penášené a uchovávané v souladu s píbalovou informací, jsou platné pro testování, dokonce i v pípad, e uplynula doba pouitelnosti sbrné zkumavky.
L. Uchovávejte všechny vzorky pi specifikovaných teplotách. Provádní testu me být ovlivnno pouitím nesprávn uchovávaných vzork. Viz Sbr, transport a uchovávání vzorku, kde jsou uvedeny specifické pokyny.
Progensa PCA3 Varování a bezpenostní opatení
Te
M. Vzorky moi mohou být infekní. Pi provádní tohoto testu dodrujte univerzální bezpenostní opatení. Metody správné manipulace a likvidace musí stanovit editel laboratoe. Tento postup by ml provádt pouze adekvátn kvalifikovaný personál, který je vyškolený v pouití testu Progensa PCA3 a adekvátn vyškolený v zacházení s infekními materiály.
N. Bhem manipulace s vzorkem zamezte zkíené kontaminaci. Vzorky moi mohou obsahovat vysoké hladiny cílové RNA. Ujistte se, e nejsou nádoby na vzorky ve vzájemném kontaktu a pouité materiály vyhote, ani byste je penášeli nad otevenými nádobami. Pokud dojde ke kontaktu rukavic se vzorkem moi, vymte je, abyste zabránili zkíené kontaminaci.
Související s testem
O. Nepouívejte tuto soupravu po uplynutí doby pouitelnosti.
P. U soupravy testu Progensa PCA3 nezamujte, nemíchejte ani nekombinujte reagencie testu PCA3 rzných ísel šarí (tj. pro kadý analyt musí být reagencie testu pocházející z chlazené krabice a z krabice s pokojovou teplotou ze stejné šare). Reagencie testu lze pouívat s rznými šaremi kalibraních a kontrolních souprav. Soupravy kapalin pro test Aptima jsou zamnitelné. U souprav reagencií PCA3 a PSA není nutná vzájemná shoda.
Q. Uchovávejte všechny reagencie testu pi uvedených teplotách. Provádní testu me být ovlivnno pouitím nesprávn uchovávaných inidel testu. Viz Poadavky na uchovávání a manipulaci a Poznámky k postupu, kde jsou uvedeny specifické pokyny.
R. Pro deaktivaci testu (viz Postup testu) musí být koncentrace chlornanu sodného minimáln 2,5 % (0,35 M) po zední 1:1 s deaktivaním pufrem. Proto musí být výchozí roztok chlornanu sodného 5% a 7% (0,7 M a 1,0 M), aby se dosáhlo konené koncentrace nutné pro deaktivaci.
S. Je nutné pouít špiky s hydrofobními zátkami. Minimáln dva opakovací pipetory musí být ureny pro pouití s tímto testem: jeden pro pouití v preamplifikaních krocích a jeden pro pouití v poamplifikaních krocích. Jeden mikropipetor musí být vyhrazen výhradn pro pouití pi penosu vzorku, pokud není pouit pístroj TECAN Freedom EVO 100/4. Všechny pipetory se musí pravideln istit podle návodu v ásti Poznámky k postupu.
T. Pi pouití opakovacích pipetor pro pidání reagencie se špikou pipetoru nedotýkejte reakní zkumavky, abyste zabránili penosu z jedné zkumavky do druhé.
U. Adekvátní míchání je nutné pro dosaení pesných výsledk testu. Úplné podrobnosti naleznete v Poznámky k postupu.
V. Pro preamplifikaní, amplifikaní a poamplifikaní kroky testu musí být vyhrazeny samostatné vodní lázn.
W. Nkteré reagencie v této souprav jsou oznaeny symboly rizika a bezpenosti dle Evropské smrnice 1999/45/ES a mlo by se s nimi odpovídajícím zpsobem zacházet. Listy s bezpenostními údaji o materiálu je moné prohlíet na stránce www.hologic.com a jsou k dispozici na vyádání.
Te
Poadavky na uchovávání a manipulaci
A. Informace o skladování reagencií naleznete v Tabulka 1.
B. Neuchovávejte reagencii zachycení cíle pi teplotách pod 15 °C.
C. Reagencie sondy a rekonstituovaná reagencie sondy jsou fotosenzitivní. Chrate tyto reagencie ped nadmrnou expozicí svtlu pi uchovávání a píprav pro pouití.
D. Reagencie nezmrazujte.
E. Reagencie ani kapaliny nepouívejte po uplynutí doby pouitelnosti.
F. Kalibrátory a kontroly PCA3 a PSA testu Progensa jsou lahviky na pouití v jednom cyklu a musí být po pouití zlikvidovány.
G. Zmny fyzikálního vzhledu dodané reagencie mohou znamenat nestabilitu nebo narušení tchto materiál. Pokud jsou zmny fyzikálního vzhledu reagencií viditelné po resuspendaci (nap. jasné zmny barvy reagencie nebo zakalení znamenající mikrobiální kontaminaci), kontaktujte ped pouitím technickou podporu spolenosti Hologic.
H. Rekonstituovanou reagencii vyhote po 30 dnech nebo po uplynutí doby pouitelnosti, dle toho, co nastane díve.
I. Zbylé otevené nebo rekonstituované reagencie je moné pouít v následujících testech, pokud byly uchovávány správn po úvodním pouití. Zbylá reagencie me být smíchána s erstv pipravenou nebo jinou zbylou reagencií stejné šare. Nezamujte, nemíchejte ani nekombinujte reagencie ze souprav s rznými ísly šarí (viz Varování a bezpenostní opatení). ádné souásti smíchaných reagencií nesmí pekraovat skladovací meze otevených nebo rekonstituovaných reagencií. Ujistte se, e byla smíchaná reagencie dkladn promíchána a e byl pipraven dostatený objem reagencie pro celý cyklus testu.
Tabulka 1: Skladování reagencií
Reagencie / kapalina Skladování v neoteveném stavu Stabilita po otevení/rekonstituci (do uplynutí doby pouitelnosti)
Amplifikaní reagencie 2 °C a 8 °C do uplynutí doby pouitelnosti 30 dn pi teplot 2 °C a 8 °C*
Reagencie sondy 2 °C a 8 °C do uplynutí doby pouitelnosti 30 dn pi teplot 2 °C a 8 °C*
Enzymatická reagencie 2 °C a 8 °C do uplynutí doby pouitelnosti 30 dn pi teplot 2 °C a 8 °C*
Reagencie zachycení cíle 15 °C a 30 °C do uplynutí doby pouitelnosti 30 dn pi teplot 15 °C a 30 °C
Amplifikan rekonstituní roztok 2 °C a 30 °C do uplynutí doby pouitelnosti Neuplatuje se (jedno pouití)
Rekonstituní roztok sondy 2 °C a 30 °C do uplynutí doby pouitelnosti Neuplatuje se (jedno pouití)
Enzymatický rekonstituní roztok 2 °C a 30 °C do uplynutí doby pouitelnosti Neuplatuje se (jedno pouití)
Selekní reagencie 2 °C a 30 °C do uplynutí doby pouitelnosti 30 dn pi teplot 15 °C a 30 °C
Kalibrátory 2 °C a 8 °C do uplynutí doby pouitelnosti Neuplatuje se (jeden cyklus testu)
Kontroly 2 °C a 8 °C do uplynutí doby pouitelnosti Neuplatuje se (jeden cyklus testu)
Olejová reagencie 15 °C a 30 °C do uplynutí doby pouitelnosti 30 dn pi teplot 15 °C a 30 °C
Promývací roztok 15 °C a 30 °C do uplynutí doby pouitelnosti 30 dn pi teplot 15 °C a 30 °C
Pufr pro deaktivaní kapalinu 15 °C a 30 °C do uplynutí doby pouitelnosti 28 dn pi teplot 15 °C a 30 °C
* Me se pouívat znovu pro další cykly a tyikrát, za pedpokladu, e celkový as pi pokojové teplot není delší ne 24 hodiny.
Progensa PCA3 Sbr, transport a uchovávání vzorku
Te
Sbr, transport a uchovávání vzorku
Test Progensa PCA3 je navren pro kvantifikaci PCA3 RNA a PSA RNA v první porci moi odebrané po vyšetení per rectum, které zahrnuje ti zmáknutí kadého laloku prostaty. Mo je zpracována pomocí soupravy na pepravu vzork moi Progensa PCA3. Stabilita PCA3 RNA a PSA RNA v erstvé a zpracované moi byla stanovena monitorováním hladin RNA kopií ve vzorcích moi odebraných dle pokyn uvedených níe.
A. Pokyny pro sbr a zpracování vzork moi:
1. Chcete-li zajistit odbr dostateného mnoství moi, me pomoci, kdy pacient vypije vtší mnoství vody (asi 500 ml).
2. Tsn ped odbrem moi provete vyšetení per rectum dle níe uvedeného popisu:
Aplikujte na prostatu dostatený tlak, abyste zamákli povrch asi o 1 cm a to provete u kadého laloku od báze k apexu a ze strany do stedu tak, jak ukazuje Obrázek 1. Na kadý lalok zatlate pesn tikrát. Úelem není provedení masáe prostaty.
Obrázek 1. Správný smr aplikace tlaku na prostatu
3. Po vyšetení per rectum eknte pacientovi, aby odebral první porci moi (asi 20 a 30 ml na zaátku proudu moi) do vhodným zpsobem oznaeného kelímku na sbr moi. Toto musí být první vzorek moi, kterou pacient vymoí po vyšetení per rectum. Pouívejte odbrový kelímek bez jakýchkoliv konzervaních látek. Pokud pacient není schopen zastavit proud moi a vymoí více, ne poadovaných 20 a 30 ml, uschovejte celý tento objem. Pokud není pacient schopen dodat poadovaný objem moi, je k provedení testu Progensa PCA3 nutných alespo 2,5 ml moi. Jinak musí být vzorky odmítnuty.
Poznámka: Velmi vysoké objemy moi mohou sníit koncentrace analyt PCA3 and PSA a zídka mohou vést k neplatnosti vzorku. Proto by se ml pacient pokusit, aby kelímek na sbr moi nenaplnil.
4. Pokud nejsou nezpracované vzorky moi okamit zpracovány, je teba je uchovat pi teplot 2 °C a 8 °C nebo na ledu. Zchlazený a nezpracovaný vzorek moi je teba penést do pepravní zkumavky pro vzorek moi do ty hodin od odbru. Jinak musí být vzorek odmítnut a odebrán nový vzorek. Nezpracované vzorky moi nezmrazujte.
5. Chcete-li zpracovat vzorky moi, tsn uzavete a ptkrát pevrate vzorek moi, aby došlo k resuspendaci bunk. Sejmte uzávr pepravní zkumavky pro vzorek moi a peneste 2,5 ml odebrané moi do zkumavky pomocí dodávané jednorázové pepravní pipety. Jakmile je hladina tekutiny mezi ernými plnicími linkami na štítku pepravní zkumavky pro vzorek moi, znamená to, e byl pidán správný objem moi.
6. Zkumavku na pepravu vzorku moi znovu pevn uzavete a ptkrát ji pevrate, aby se vzorek promíchal. Nyní je vzorek moi povaován za zpracovaný.
Left Lobe Right Lobe
Báze
Apex
Sbr, transport a uchovávání vzorku Progensa PCA3
B. Peprava a uchovávání vzorku ped testováním:
1. Zpracované vzorky moi se musí pepravovat do laboratoe v pepravní zkumavce pro vzorek moi. Mohou být pepravovány pi teplot okolního prostedí (bez ízené teploty) nebo zmrazené. Pepravu zásilky je teba domluvit pedem, aby bylo zajištno, e budou vzorky moi obdreny testovacím centrem do 5 dn od odbru.
Po pijetí zásilky musí laborato ovit datum odbru vzorku na zkumavce. Pokud byly vzorky zaslány pi teplot okolního prostedí a jsou obdreny více ne 5 dn po odbru vzorku, vzorek musí být odmítnut a musí být vyádán nový vzorek. Laborato me uchovávat vzorky pi teplot 2 °C a 8 °C po dobu a 14 dn pedtím, ne bude nutná jejich likvidace. Pokud potebujete delší období, viz Tabulka 2, kde jsou uvedeny povolené doby skladování pi rzných teplotách.
Tabulka 2: Délka uchovávání zpracovaných vzork moi
2. Zpracované vzorky moi mohou podstoupit a pt cykl zmrazení a rozmrazení.
C. Uchovávání vzork po testování:
1. Vzorky musí být po provedení testu uloeny vertikáln ve stojanu.
2. Pepravní zkumavky na vzorky moi by mly být zakryty novou istou plastovou nebo foliovou bariérou, pokud nejsou znovu zakryty neporušenou krytkou.
3. Pokud je teba testované vzorky zmrazit nebo pepravit, odstrate propichovací uzávr a na transportní zkumavky na vzorky moi umístte nový nepropichovací uzávr. Pokud je teba vzorky odeslat pro testování do jiného zaízení, je nutno dodrovat doporuené teploty. Zabrate rozstikování a zkíené kontaminaci.
Poznámka: Vzorky se musí pepravovat v souladu s píslušnými státními a mezinárodními pepravními pedpisy.
Teplota uchovávání Doba
Po obdrení v testovacím centru:
2 °C a 8 °C a 14 dn
−35 °C a −15 °C a 11 msíc**
pi teplot −65 °C nebo niší a 36 msíc**
*as povolený pro pepravu pi teplot okolního prostedí nebo ve zmrazeném stavu. **as povolený po skladování v chladnice.
Progensa PCA3 Postup testu
A. Píprava pracovního místa
1. Nastavte jednu vodní láze na 62 °C ± 1 °C pro preamplifikaci, druhou vodní láze na 42 °C ± 1 °C pro amplifikaci a tetí vodní láze na 62 °C ± 1 °C pro poamplifikaci. Ujistte se, e vodní lázn obsahují dostatek vody (viz Poznámky k postupu). Pokud pouíváte láze/víivku se suchým teplem SB100, pette si aplikaní list lázn/ víivky se suchým teplem SB100 pro test Progensa PCA3 (aplikaní list SB100).
2. Ped zahájením testu otete pracovní povrchy a pipetory 2,5% a 3,5% (0,35 M a 0,5 M) roztokem chlornanu sodného. Roztok chlornanu sodného nechte v kontaktu s povrchy a pipetory po dobu minimáln 1 minuty a pak opláchnte vodou. Roztok chlornanu sodného nenechte zaschnout. Zakryjte pracovní plochu, na ní bude reakce provedena, istým absorpním laboratorním krytem na pracovní desky, který je potaen z jedné strany plastem.
3. Umístte dostatený poet kazet s deseti špikami do systému pro zachycení cíle (TCS). Ujistte se, e je promývací láhev TCS naplnna promývacím roztokem a e je aspirátor pipojen k vakuovému erpadlu. (Viz provozní píruka systému zachycení cíle (Target Capture System Operator’s Manual).)
B. Rekonstituce a píprava reagencie
Rekonstituce reagencie by mla být provedena ped zahájením penosu vzorku.
1. Chcete-li rekonstituovat amplifikaní reagencie, enzymatické reagencie a reagencie sondy, zkombinujte láhve lyofilizované reagencie s rekonstituním roztokem. V pípad uloení v chladnice nechejte rekonstituní roztoky ped pouitím dosáhnout pokojové teploty.
Obrázek 2. Rekonstituní proces
a. Spárujte odpovídající rekonstituní roztok s jeho suchou reagencií. Ovte si, e mají lahviky štítky shodné barvy, aby bylo zajištno správné spárování.
b. Otevete lahviku se suchou reagencií a pevn zasute konec rekonstituní objímky s drákou do otvoru v lahvice (Obrázek 2, krok 1).
c. Otevete odpovídající rekonstituní roztok a umístte uzávr na istý zakrytý pracovní povrch. Drte láhev s roztokem na pracovní desce a pevn zasute druhý konec rekonstituní objímky do otvoru v láhvi (Obrázek 2, krok 2).
d. Sestavené lahve pomalu pevrate. Nechte roztok vytéct z láhve do sklenné lahviky (Obrázek 2, krok 3). Vykejte, a se lyofilizovaná reagencie rozpustí
Postup testu Progensa PCA3
a pak roztokem jemn ve sklenné lahvice míchejte, aby se promíchal. Pi krouení láhví zamezte vzniku pny (Obrázek 2, krok 4).
e. Obrate sestavu a sklote v úhlu 45°, abyste minimalizovali vznik pny (Obrázek 2, krok 5). Nechte veškerou kapalinu natéct zpt do plastové lahve.
f. Sejmte rekonstituní objímku a sklennou lahviku (Obrázek 2, krok 6). g. Znovu uzavete plastovou lahev (Obrázek 2, krok 7). Na všech lahvikách
s rekonstutituovanými reagenciemi zaznamenejte iniciály obsluhy a datum rekonstituce. Ujistte se, e na lahviky reagencie sondy zaznamenáte analyt (PCA3 nebo PSA).
h. Rekonstituní objímku a sklennou lahviku zlikvidujte (Obrázek 2, krok 8).
2. Díve rekonstituované reagencie sondy, amplifikaní a enzymatické reagencie musí ped zahájením testu dosáhnout pokojovou teplotu (15 °C a 30 °C). Pette si Poadavky na uchovávání a manipulaci, pokud smícháváte zbytky reagencií dohromady. Pokud rekonstituovaná amplifikaní reagencie obsahuje precipitát, který se pi pokojové teplot nerozpouští, zahívejte ji v preamplifikaní oblasti pi teplot 62 °C ± 1 °C po dobu 1 a 2 minut. Pokud rekonstituovaná reagencie sondy obsahuje precipitát, který se pi pokojové teplot nevrací do roztoku, zahívejte ho v poamplifikaní oblasti pi teplot 62 °C ± 1 °C po dobu 1 a 2 minut. Po tchto zahívacích krocích mohou být rekonstituované reagencie pouity dokonce i v pípad, e zstává reziduální precipitát. Po resuspendaci promíchejte lahviky jemným pevracením.
C. Píprava stojanu
Opakovací pipetor pouívaný pro zachycení cíle, penos vzork a amplifikaci musí být vyhrazen pro pouití pouze v tchto krocích (viz Varování a bezpenostní opatení).
1. Nastavte jeden stojan pro analyt PCA3 a další stojan pro analyt PSA.
Poznámka: Pokud je poet vzork dostaten nízký, oba analyty je moné testovat v jednom stojanu. Pokud pouíváte pístroj TECAN Freedom EVO 100/4, musí být pro kadý analyt vyhrazeny samostatné stojany. Je moné testovat maximáln dva plné stojany (20 TTU) najednou.
2. Do stojanu() na jednotku deseti zkumavek (TTU) umístte dostatek jednotek TTU pro kalibrátory, kontroly a vzorky pro kadý analyt.
3. Oznate TTU pomocí identifikaního ísla vzorku. Tabulka 3 popisuje zpsob pidání kalibrátor, kontrol a vzork. Spuste PSA kalibrátory na nové TTU.
Poznámka: Kalibrátory by mly být testovány ve tech replikátech a kontroly ve dvou replikátech a musí být testovány ve stejném stojanu jako vzorky. Vzorky je teba testovat v duplikátu. Nenechávejte prázdné reakní zkumavky mezi kalibrátory, kontrolami a vzorky. Pokud pouíváte pístroj TECAN Freedom EVO 100/4, pette si aplikaní list k pístroji TECAN Freedom EVO 100/4 pro test Progensa PCA3 (aplikaní list TECAN Freedom EVO), kde jsou uvedeny další pokyny.
P
Te
Tabulka 3: Píklad nastavení stojanu
D. Verifikace informací o koncentraci
Ovte si u administrátora systému softwaru testu Progensa PCA3, e informace o koncentraci pro šare souprav kalibrátor a kontrol testu Progensa PCA3 a PSA byly zadány. Pro více informací si pette strunou referenní píruku pro test Progensa PCA3 (Quick Reference Guide for Progensa PCA3 Assay) nebo píruku systémového administrátora softwaru testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Software System Administrator’s Manual).
Poznámka: Zadání informací o koncentraci je vyadováno ped prvním pouitím kadé nové šare soupravy kalibrátor a kontrol. Následné cykly vyuívající kalibrátory a kontroly ze stejné šare soupravy nevyadují další opatení.
E. Nastavení editoru pracovního seznamu
Vytvote pracovní seznam cyklu pomocí editoru pracovního seznamu Hologic na poítai, který se nachází v preamplifikaní oblasti. Pro pouití editoru pracovního seznamu si pette strunou referenní píruku (Quick Reference Guide) nebo provozní píruku editoru pracovního seznamu Hologic (Hologic Worklist Editor Operator’s Manual). Pokud pouíváte pístroj TECAN Freedom EVO 100/4, pette si také aplikaní seznam TECAN Freedom EVO, kde jsou uvedeny další pokyny.
F. Píprava vzorku
1. Ped testováním ponechte kalibrátory a kontroly dosáhnout pokojovou teplotu. Promíchejte lahviky jemným pevracením.
2. Ped testováním ponechte vzorky dosáhnout pokojovou teplotu. Vzorky nemíchejte víením. Vzorky je teba míchat obasným jemným pevracením bhem zahívacího období. Viz Poznámky k postupu, kde jsou uvedeny informace o precipitátu, který nepejde do roztoku, a manipulaci se zmrazenými vzorky.
G. Preamplifikace
Preamplifikaní prostedí musí mít teplotu 15 °C a 30 °C. Uskutente cyklus obou stojan paraleln. Pokud pouíváte láze/víivku se suchým teplem SB100, pette si aplikaní list SB100. Pokud pouíváte pístroj TECAN Freedom EVO 100/4, pette si aplikaní list TECAN Freedom EVO, kde jsou uvedeny další pokyny.
Poloha stojanu
4 a 6 Kalibrátor 2 250 7 500
7 a 9 Kalibrátor 3 2 500 75 000
10 a 12 Kalibrátor 4 25 000 750 000
13 a 15 Kalibrátor 5 125 000 3 000 000
16 a 17 Kontrola A 1 250 37 500
18 a 19 Kontrola B 62 500 1 500 000
20 a n Vzorek neznámé neznámé
*Pozitivní kalibrátory a kontroly PCA3 a PSA jsou pidleny dle hodnoty, take aktuální hodnoty kopií/ml pro kalibrátory 2 a 5 a kontroly A a B budou lehce odlišné ne u cílových koncentrací uvedených v tabulce a budou se lišit mezi jednotlivými šaremi. Informace o koncentracích jsou poskytovány na kart v balení lahviek kalibrátor a kontrol a jsou pouity pro kalibraci a stanovení validity cyklu.
Te
1. Reagencii zachycení cíle (TCR) dkladn promíchejte víením nebo pevracením. Za pouití opakovacího pipetoru pidejte do odpovídající reakní zkumavky 100 µl TCR specifického pro analyt.
2. Propíchnte uzávr lahviky kalibrátoru mikropipetorem a pidejte 400 µl kalibrátoru k ádn oznaené reakní zkumavce. Za pouití stejné špiky pipety odeberte pidaný replikát z lahviky pes propíchnutou krytku. Pro kadou lahviku kalibrátoru pouívejte nové pipetové špiky. Opakujte stejný postup pro pidání kontrol a vzork. Zakryjte a uchovejte veškerý zbylý vzorek a ulote ho pi teplot 8 °C nebo niší (viz Sbr, transport a uchovávání vzorku pro více informací) pro pípad, e bude nutné opakování testu.
3. Zakryjte TTU uzavírací kartou(kartami) a stojanem jemn rukou zatepte. Neumísujte do víivky. Stojan inkubujte pi teplot 62 °C ± 1 °C ve vodní lázni po dobu 30 ± 5 minut.
4. Vyjmte stojan z vodní lázn a osušte spodní ásti zkumavek na absorpním materiálu.
5. Ujistte se, e jsou uzavírací karty pevn usazeny. Pokud je to nutné, vymte je za nové uzavírací karty a TTU ádn uzavete.
6. Stojan míchejte víením po dobu 60 sekund ve víivém mixéru pro více zkumavek (viz Poznámky k postupu). Zante s víením do 2 minut od vyjmutí stojanu z vodní lázn.
7. Neodstraujte uzavírací karty a stojan inkubujte pi pokojové teplot po dobu 30 ± 5 minut.
8. Umístte stojan s pedním štítkem smrem dopedu na magnetickou bázi TCS na dobu 5 a 10 minut. Vlote TTC do stojanu.
9. Naplte hadiky rozdlovací erpací stanice naerpáním promývacího roztoku pes rozdlovací potrubí. Naerpejte dostatek kapaliny do systému, aby nebyly v hadice pítomné ádné vzduchové bubliny a všech deset trysek dodávalo stabilní proud kapaliny.
10. Zapnte vakuové erpadlo a odpojte aspiraní potrubí na prvním konektoru mezi aspiraním potrubím a záchytnou láhví. Zkontrolujte, e midlo vakua spluje specifikace zkoušky tsnosti. Hodnotu získáte po 15 sekundách. Znovu pipojte potrubí a zajistte, e midlo vakua spluje specifikace zkoušky tsnosti. Ponechejte vakuové erpadlo zapnuté do dokonení všech krok zachycení cíle a dokud nebude aspiraní potrubí suché.
Viz list specifikací vakua pro systém zachycení cíle na zadní stran provozní píruky systému zachycení cíle (Target Capture System Operator’s Manual) nebo se obrate na technickou podporu spolenosti Hologic, chcete-li získat další informace.
11. Pevn pipojte aspiraní potrubí k první sad špiek. Zanote špiky do první jednotky TTU, a se dotknou povrchu kapaliny. Pi pohybu špiek smrem dol udrujte špiky v kontaktu s povrchem kapaliny, a se špiky dostanou do krátkého kontaktu se dny zkumavek. Jemn poklepejte špikami o dno zkumavek, a dojde k odstranní veškeré kapaliny. Neudrujte špiky v kontaktu se dny zkumavek píliš dlouho a neklepejte špikami rychle, aby nedošlo v záchytném vakuovém prostoru k vytvoení nadmrné pny.
Te
12. Po dokonení aspirace vysute špiky do jejich pvodní kazety. Opakujte aspiraní kroky pro zbývající TTU a pitom pouívejte vyhraenou špiku pro kadou reakní zkumavku.
13. Umístte rozdlovací potrubí nad kadou TTU a za pouití erpadla rozdlovací stanice aplikujte 1,0 ml promývacího roztoku do kadé zkumavky TTU.
14. Zakryjte zkumavky uzavírací kartou a vyjmte stojan z TCS. Jednou promíchejte víením ve víivém mixéru pro více zkumavek. Další informace viz Poznámky k postupu.
15. Stojan umístte na magnetickou bázi TCS na 5 a 10 minut.
16. Aspirujte veškerou kapalinu jako v kroky 11 a krok 12.
17. Po poslední aspiraci vyjmte stojan z báze TCS a vizuáln zkontrolujte zkumavky, abyste se ujistili, e byla aspirována veškerá kapalina a e všechny zkumavky obsahují pelety magnetických ástic. Pokud je viditelná jakákoliv kapalina, umístte stojan zpt na bázi TCS na 2 minuty a opakujte aspiraci pro tuto TTU pomocí stejných špiek pouitých pedtím pro kadou reakní zkumavku. Pokud bude JAKÁKOKLIV peleta magnetické ástice viditelná po dokonení aspirace, zkumavku je moné akceptovat. Pokud nebude viditelná ádná peleta, vzorek je teba testovat znovu. Pokud pi následujícím cyklu stejný vzorek neobsahuje pelety magnetických ástic v tomto kroku, me to znamenat problém se vzorkem. V takovém pípad se doporuuje nový odbr vzorku moi.
H. Amplifikace
Poznámka: Pidání enzymu do reakního stojanu (kroky 6 a krok 7 níe) musí být provedeno maximáln do 90 sekund.
Provete Kroky 6 a 7 na jednom stojanu pedtím, ne to budete opakovat na druhém stojanu. Pokud pouíváte láze/víivku se suchým teplem SB100, pette si aplikaní list SB100. Pokud pouíváte pístroj TECAN Freedom EVO 100/4, pette si aplikaní list TECAN Freedom EVO, kde jsou uvedeny další pokyny.
1. Pomocí opakovacího pipetoru pidejte 75 µl rekonstituované amplifikaní reagencie specifické pro analyt do kadé reakní zkumavky. Všechny reakní smsi ve stojanu by mly mít nyní ervenou barvu.
2. Pomocí opakovacího pipetoru pidejte 200 µl olejové reagencie.
3. Zakryjte zkumavky uzavírací kartou a míchejte víením ve víivém mixéru pro více zkumavek.
4. Stojan inkubujte v preamplifikaní vodní lázni pi teplot 62 °C ± 1 °C po dobu 10 ± 5 minut.
5. Peneste stojan do vodní lázn o teplot 42 °C ± 1 °C na 5 ± 2 minuty.
6. Stojan ponechejte ve vodní lázni a opatrn odstrate uzavírací kartu; za pouití opakovacího pipetoru pidejte 25 µl rekonstituované enzymatické reagencie do kadé reakní smsi. Všechny reakce by mly mít nyní oranovou barvu.
7. Okamit zakryjte všechny zkumavky erstvou uzavírací kartou, vyjmte je z vodní lázn a rychle smíchejte jemným tepáním stojanu v ruce.
Poznámka: Minimalizujte as, kdy je stojan mimo vodní láze, abyste pedešli vychladnutí zkumavek.
8. Stojan inkubujte pi teplot 42 °C ± 1 °C po dobu 60 ± 5 minut.
Te
I. Po amplifikaci
Opakovací pipetor pouívaný pi hybridizaci a selekci musí být vyhrazený pouze na tyto kroky (viz Varování a bezpenostní opatení). Poamplifikaní prostedí vetn detekce musí mít teplotu 15 °C a 30 °C. Pokud pouíváte láze/víivku se suchým teplem SB100, pette si aplikaní list SB100.
1. Hybridizace
a. Vyjmte stojan z preamplifikaní vodní lázn a peneste ho do poamplifikaní oblasti. Pidejte 100 µl rekonstituované reagencie sondy specifické pro analyt za pouití opakovacího pipetoru. Všechny reakní smsi by mly mít nyní lutou barvu.
b. Zakryjte zkumavky uzavírací kartou a míchejte víením ve víivém mixéru pro více zkumavek po dobu 10 sekund, nebo dokud nebude barva uniformní.
c. Inkubujte stojan pi teplot 62 °C ± 1 °C ve vodní lázni po dobu 20 ± 5 minut. d. Vyjmte stojan z vodní lázn a inkubujte pi pokojové teplot po dobu
5 ± 1 minuta.
2. Výbr
a. Opakovacím pipetorem pidejte 250 µl selekní reagencie do kadé zkumavky. Všechny reakce by mly mít nyní rovou barvu.
b. Zakryjte zkumavky uzavírací kartou, míchejte víením po dobu 10 sekund, nebo dokud nebude barva uniformní a stojan inkubujte ve vodní lázni pi teplot 62 °C ± 1 °C po dobu 10 ± 1 minuta.
c. Vyjmte stojan z vodní lázn. Stojan inkubujte pi pokojové teplot po dobu 15 ± 3 minuty.
J. Detekce
Chcete-li pouít luminometr Leader HC+, pette si provozní píruku luminometru Leader HC+ (Leader HC+ Luminometer Operator’s Manual). Chcete-li pouít software testu Progensa PCA3, pette si strunou referenní píruku (Quick Reference Guide) nebo píruku systémového administrátora softwaru testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Software System Administrator’s Manual) a provozní píruku testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Operator's Manual).
1. Pipravte luminometr Leader HC+ umístním jedné prázdné TTU do pozice kazety íslo 1 a jednou provete PROMÝVACÍ protokol.
2. Ujistte se, e jsou pítomny dostatené objemy reagencií Auto Detect 1 a Auto Detect 2 pro dokonení reakcí.
3. Vlote TTU do luminometru dle diagramu v luminometru jako vodítka. Pokud testujete oba analyty (tsn za sebou), vlote nejprve všechny jednotky TTU pro PCA3 a tsn za nimi všechny TTU pro PSA.
4. Pihlaste se do poítae. Kliknte na NEW RUN (Nový cyklus) a zvolte odpovídající protokol testu a koncentrace. Klepnte na NEXT (Další) a zahajte cyklus.
Poznámka: Cyklus musí být dokonen do 2 hodin od konce inkubaního kroku selekce pi teplot 62 °C.
5. Pipravte deaktivaní roztok smícháním stejných objem 5% a 7% (0,7 M a 1,0 M) roztoku chlornanu sodného a pufru pro deaktivaní kapalinu v plastovém kontejneru s velkým uzávrem. Plastový kontejner oznate štítkem a na štítek napište datum exspirace. Deaktivaní kapalina je stabilní po dobu 4 týdn pi pokojové teplot.
6. Po dokonení cyklu vytvoí testový software dv zprávy o cyklu, Raw Run Report (Zpráva nezpracovaného cyklu) a Ratio Report (Zpráva o pomru), v pípad, e se jedná o po sob jdoucí cykly (viz Postupy kontroly kvality a Interpretace výsledk).
7. Po dokonení cyklu vyjmte pouité TTU z luminometru a umístte TTU do kontejneru s deaktivaní kapalinou. Ponechte TTU v kontejneru po dobu alespo 15 minut pedtím, ne je vyhodíte. Metody správné manipulace a likvidace musí stanovit editel laboratoe.
Poznámky k postupu
A. Píprava vzorku
1. Pokud vzorky obsahují suspendované precipitáty, zahívejte je na 37 °C po dobu a 5 minut a pak pokraujte jemným pevracením. V pípad, e se precipitát znovu nerozpouští, ujistte se, e nebrání dodávce vzorku.
2. Zmrazené vzorky musí být rozmraené pi pokojové teplot (15 °C a 30 °C, je moné pouít vodní láze) s obasným pevracením pi rozmrazování, aby se pedešlo vzniku nerozpustné zátky. Promíchejte lahviky jemným pevracením, jakmile se led uvnit lahviky dostaten rozpustil, aby se uvolnil a mohl se voln pohybovat. Zahívejte dále do úplného rozpuštní vzorku a lahviky znovu promíchejte jemným pevracením.
a. Pokud se vytvoí zátka a vzorky budou pipetovány pomocí zaízení TECAN Freedom EVO 100/4, znovu je zmrazte, opakujte pokyny pro rozmrazení a zajistte, e nevznikne ádná zátka. Pokud nejste schopni vznik zátky vylouit, je teba vzorek pipetovat rukou.
b. Pokud se vytvoí zátka a vzorky se pipetují rukou a mikropipetorem, není nutné ádné další opatení, ale ujistte se, e zátka nebrání dodání vzorku.
B. Pipetování kontroly, kalibrátoru a vzorku
1. Objem kalibrátoru, kontroly nebo vzorku pidaných do TTU by ml být 400 µl. Doporuuje se vizuální kontrola objemu pipetovaného do jednotky TTU, aby se zajistil penos správného objemu. Správný objem je nutný pro dosaení pesných výsledk.
2. Ujistte se, e je pipetová špika správn umístna na pipetoru a zkontroluje, e je objem správn nastaven. Doporuuje se vizuální kontrola nastavení objemu na konci kadé TTU (kadých 10 zkumavek). Pi nabírání vzorku uvolujte píst pipety pomalu stabilní rychlostí, abyste zabránili vzniku pny a bublinek.
C. Reagencie
1. V rekonstituním roztoku sondy me dojít bhem uchovávání ke vzniku precipitátu. Zahívejte roztok pi teplot 62 °C ± 1 °C po dobu 1 a 2 minut. Po tomto zahívacím kroku me být rekonstituní roztok sondy pouitý dokonce i v pípad, e zstává reziduální precipitát. Po resuspendaci promíchejte lahviku jemným pevracením.
2. Pi pipetování jiných inidel ne enzymu mite lehce ke stran spodní ásti reakní zkumavky (kde se spodní ást zahýbá smrem ke stranám). Pi pipetování enzymatické reagencie mite do stedu reakní zkumavky. Vizuáln si ovte, e jsou reagencie rozdlovány správn (ádné nadmrné mnoství reagencie po stranách zkumavek a správná barevná zmna).
D. Teplota
1. Kroky zachycení cíle, amplifikace, hybridizace a selekce jsou závislé na teplot. Proto je zásadn dleité, aby se ve vodní lázni udrovala teplota v ureném rozsahu.
2. Pokojová teplota je definována jako 15 °C a 30 °C.
E. Doba
Reakce zachycení cíle, amplifikace, hybridizace a selekce jsou všechny závislé na ase. Dodrujte asy specifikované v Postup testu.
F. Víení
Správné víení je dleité pro úspšné provedení testu Progensa PCA3. Pro reakce s víením nastavte víivý mixer pro více zkumavek na nejniší rychlost, stojan zajistte a zapnte. Pomalu zvyšujte rychlost, dokud kapalina nedosáhne poloviny zkumavky. Míchejte víením po stanovenou dobu 10 sekund nebo dokud nebude barva uniformní. Ped vypnutím víivého mixéru pro více zkumavek nastavte rychlost na nejniší nastavení a stojan vyjmte. Reakní smsi by se nemly nikdy dotýkat uzavíracích karet.
G. Vodní lázn
1. Hladina vody ve vodních lázních musí být udrována na 3,8 a 5,0 cm (1,5 a 2,0 in.), meno od podprné kovové misky (na dn vodní lázn) k vodní hladin. To zajistí správný penos tepla.
2. Chcete-li zabránit zkíené kontaminaci, je teba vodní lázn vyhradit pro specifický krok testu.
H. Dekontaminace
1. Povrchy a pipetory
Laboratorní pracovní povrchy a pipetory musí být pravideln dekontaminovány pomocí 2,5% a 3,5% (0,35 M a 0,5 M) roztoku chlornanu sodného. Roztok chlornanu sodného nechte v kontaktu s povrchy po dobu minimáln 1 minuty a pak opláchnte vodou. Roztok chlornanu sodného nenechte zaschnout. Chlorové roztoky mohou psobit na zaízení a kovu dlkovou korozi. Dkladn opláchnte zaízení vodou, abyste pedešli vzniku koroze.
2. Aspiraní potrubí TCS
Po kadém pouití:
a. Posute rozdlovací potrubí stranou. b. Umístte nové TTC do stojanu na TTC. Zapnte vakuové erpadlo. Pipojte
aspiraní potrubí ke špikám v TTC. Aspirujte jakýkoliv zbývající promývací roztok v plnicím korýtku rozdlovací stanice.
c. Nalijte alespo 100 ml 0,5% a 0,7% (0,07 M a 0,1 M) nebo pokud je to preferováno, tak 2,5% a 3,5% (0,35 M a 0,5 M) roztoku chlornanu sodného do plnicího korýtka. Nasajte veškerý roztok pes aspiraní potrubí.
d. Nalijte alespo 100 ml deoinizované vody do plnicího korýtka. Nasajte veškerou vodu pes aspiraní potrubí.
e. Vysute špiky do jejich originální TTC. f. Ponechejte vakuové erpadlo zapnuté, dokud nebudou hadiky potrubí suché,
aby se zabránilo zptnému toku (asi 3 minuty). g. Povrchy aspiraního potrubí dekontaminujte, jak je popsáno v Jednotka systému
zachycení cíle (TCS).
3. Odpadní kontejner systému zachycení cíle
istte odpadní láhev minimáln jednou týdne, nebo kdy je odpadní láhev z 25% plná, dle toho co je dív.
a. Vypnte vakuové erpadlo a nechejte vyrovnat podtlak. b. Uvolnte díly pro rychlé odpojení mezi odpadní láhví a petékací láhví a mezi
odpadní láhví a aspiraním potrubím. c. Odstrate odpadní láhev z obalu pepadu podtlaku. d. Odstrate uzávr a pozorn pidejte 400 ml 5% a 7% (0,7 M a 1,0 M) roztoku
chlornanu sodného do 4l odpadní láhve.
Poznámka: To je moné provést v digestroi, abyste pedešli uvolnní výpar do laboratoe.
e. Uzavete odpadní láhev a opatrn vite obsahem, dokud nebude zcela promíchán. f. Ponechejte odpadní láhev usadit minimáln 15 minut a pak obsah vyhote
(odpad). g. Vypláchnte odpadní láhev vodou, abyste odstranili zbývající odpad, který je
uvnit. h. Zavete prázdnou odpadní láhev a umístte ji do obalu pepadu podtlaku. Pipojte
díly pro rychlé odpojení k jednotce TCS. Opatrn zlikvidujte ob rukavice.
4. Jednotka systému zachycení cíle (TCS)
Otete povrchy jednotky TCS, aspiraního potrubí a povrch ejekních špiek promývacího pufru papírovými utrkami navlhenými 2,5% a 3,5% (0,35 M a 0,5 M) roztokem chlornanu sodného. Po kroku s roztokem chlornanu sodného pokraujte s oplachem vodou a potom povrchy úpln vysušte papírovými runíky.
5. Stojany
Stojany ponote do 2,5% a 3,5% (0,35 M a 0,5 M) roztoku chlornanu sodného tak, aby byly roztokem pokryty. Stojany nechte ponoené po dobu 10 minut. Delší expozice stojany poškodí. Opláchnte stojany dkladn vodou a pak je úpln osušte papírovými runíky.
I. Kontaminace testu
1. Pokud není provádní testu vnována dostaující pée, me dojít k vniknutí kontaminujících materiál.
2. Jednotky TTU musí být dekontaminovány deaktivaní kapalinou, jak je popsáno v Postup testu. Jednotky TTU nepouívejte opakovan.
3. Provete pravidelnou dekontaminaci zaízení a pracovních povrch, jak je popsáno výše v Dekontaminace.
4. Podobn jako u jiných systém reagencií me nadbytek talku z nkterých rukavic zpsobit kontaminaci otevených zkumavek. Doporuuje se, aby obsluha pouívala rukavice bez talku.
Postupy kontroly kvality Progensa PCA3
Postupy kontroly kvality
A. Platnost cyklu
1. Kalibrátory a kontroly musí být pouívány se všemi testy a na stejném stojanu, jako testované vzorky. Je teba dodret následující kritéria, aby mohl být cyklus povaován za platný:
Prmrná RLU kalibrátoru 2 > mezní hodnota RLU
Kde mezní hodnota RLU = prmrná RLU kalibrátoru 1 + 1,645 smrodatná odchylka kalibrátoru 1 RLU replikát + 1,645 smrodatná odchylka kalibrátoru 2 RLU replikát.
Prmrná interpolovaná výtnost kalibrátoru 5 = 100 ± 30 %
Prmrná interpolovaná výtnost kontroly A = 100 ± 60 %
Prmrná interpolovaná výtnost kontroly B = 100 ± 35 %
2. Software PCA3 automaticky hodnotí výsledky s výše uvedenými kritérii a bude hlásit Run Status (Status cyklu) jako PASS (Splnil), pokud jsou splnna kritéria validity a FAIL (Nesplnil), pokud nejsou splnna kritéria validity.
3. Pokud je Run Status (Status cyklu) oznaen jako FAIL (Nesplnil), všechny výsledky testu ve stejném cyklu jsou pro daný analyt neplatné a nesmí být hlášeny.
4. Pokud je cyklus neplatný, musí být pro daný analyt opakován (viz Interpretace výsledk). Pokud je cyklus platný pro jiný analyt, mohou být takové výsledky pouity pi analýze dat s opakovaným platným cyklem prvního analytu.
B. Validita vzorku
Pi platném cyklu mohou být jednotlivé výsledky vzork povaovány za NEPLATNÉ a budou vyznaeny v Raw Run Report (Zpráva nezpracovaného cyklu) (viz Interpretace výsledk). I kdy mohou být jednotlivé replikáty vzorku platné, vzorek bude neplatný, pokud interpolovaný rozdíl kopií/ml mezi replikáty pesáhne 600 %. Testování vzorku na takový analyt musí být opakováno.
Progensa PCA3 Interpretace výsledk
1. Raw Run Report (Zpráva nezpracovaného cyklu)
Raw Run Report (Zpráva nezpracovaného cyklu) poskytuje informace o validit cyklu (PASS (Splnil) nebo FAIL (Nesplnil); viz Postupy kontroly kvality) a o jednotlivých reakních zkumavkách testovaných pomocí testu Progensa PCA3. Pokud je cyklus neplatný (FAIL (Nesplnil)), všechny zkumavky v takovém cyklu budou oznaeny jako neplatné. Nicmén jednotlivé zkumavky mohou být povaovány za neplatné v rámci platného cyklu (PASS (Splnil)). Pro po sob jdoucí cykly (tzn. analyty PCA3 i PSA byly testovány ve stejném cyklu testu) me být jeden cyklus analytu neplatný, zatímco druhý cyklus analytu me být platný.
Na konci Raw Run Report (Zpráva nezpracovaného cyklu) se nachází souhrn výjimek. Pro po sob jdoucí cykly, kde jsou cykly obou analyt platné, mohou vzorky uvedené v souhrnu výjimek vyadovat opakované testování u jednoho analytu. I kdy me být výsledek skóre PCA3 uveden v souhrnu výjimek, není tento výsledek povaován za hlásitelný a do doby, kdy je provedeno manuální spárování a výsledek je uveden v Ratio Report (Zpráva o pomru). Pokud byl testován pouze jeden analyt nebo pokud je cyklus jednoho analytu neplatný, všechny testované vzorky budou uvedeny v souhrnu výjimek.
2. Ratio Report (Zpráva o pomru)
Software testu generuje automaticky Ratio Report (Zpráva o pomru) pro po sob jdoucí cyklus, kde jsou cykly obou analyt platné. Software vypoítá a uvádí seznam skóre PCA3 vzork v Ratio Report (Zpráva o pomru). Vzorky uvedené v Ratio Report (Zpráva o pomru) nevyadují bu ádné další testování, nebo musí být znovu testovány oba analyty. Vzorky, které nejsou uvedené v Ratio Report (Zpráva o pomru), budou uvedené v kapitole souhrn výjimek Raw Run Report (Zpráva nezpracovaného cyklu).
Ratio Report (Zpráva o pomru) me být také generována po manuálním spárování (viz Manuální párování, kde je uvedeno více informací).
3. QC Report (Zpráva o kontrole kvality)
QC Report (Zpráva o kontrole kvality) uvádí kritéria validity cyklu, piazených a interpolovaných koncentrací a výtnosti kalibrátor a kontrol. Zpráva uvádí také seznam parametr, které definují typarametrovou logistickou kalibraní kivku dávky a odpovdi (3). Pro více informací si pette provozní píruku softwaru testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Software Operator’s Manual).
B. Párování
1. Automatické párování
V po sob jdoucích cyklech, kde jsou cykly obou analyt platné, páruje software automaticky jednotlivé výsledky analytu PCA3 a PSA pro vzorky a stanovuje skóre PCA3 (pokud ho lze vypoítat). Výsledky jsou uvedeny v Ratio Report (Zpráva o pomru) nebo souhrnu výjimek zprávy Raw Run Report (Zpráva nezpracovaného cyklu).
2. Manuální párování
Jakmile jsou testovány analyty PCA3 a PSA v rzných cyklech, software neme automaticky stanovit skóre PCA3. Manuální párování výsledk analytu je nezbytné pro stanovení skóre PCA3 nebo rozsahu skóre PCA3 (viz struná referenní píruka
Interpretace výsledk Progensa PCA3
(Quick Reference Guide) nebo provozní píruka softwaru testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Software Operator's Manual)). Manuální párování me být také vyadováno pro výsledky, které jsou uvedeny v souhrnu výjimek ve zpráv Raw Report (Zpráva nezpracovaného cyklu). Po manuálním spárování bude skóre PCA3 pro spárované vzorky uvedeno v nové Ratio Report (Zpráva o pomru).
C. Interpretace zpráv
1. Skóre PCA3
Poznámka: Pouze skóre PCA3 a rozsah skóre PCA3 uvedené v Ratio Report (Zpráva o pomru) jsou hlásitelné. Výsledky, které se objevují v souhrnu výjimek mohou vyadovat další opatení a nejsou hlásitelné.
Skóre PCA3 je vypoteno jako pomr kopií PCA3 RNA ke kopiím PSA RNA, vynásobeno 1 000. Skóre PCA3 mohou být vypotena pouze pomocí výsledk z platných cykl a vzork. Neplatné cykly a neplatné vzorky musí být pro tento analyt opakovan testovány (viz Opakování testu, kde je uvedeno více informací).
Pokud je hlášené skóre PCA3 pod mezní hodnotou, ml by být výsledek interpretován jako NEGATIVNÍ. Pokud je skóre PCA3 rovno mezní hodnot nebo se nachází nad ní, ml by být výsledek interpretován jako POZITIVNÍ. editel laboratoe stanoví mezní hodnotu (viz Funkní charakteristiky, kde je uvedeno více informací).
Za uritých podmínek je poskytován rozsah skóre PCA3 (>[Vypotené skóre PCA3] nebo <[Vypotené skóre]). Pokud je <[Vypotené skóre PCA3] pod mezní hodnotou, výsledek by ml být interpretován jako NEGATIVNÍ. Pokud je >[Vypotené skóre PCA3] nad mezní hodnotou, výsledek by ml být interpretován jako POZITIVNÍ. Pokud je poadována numerická hodnota, me ední vzorku a opakovaný test generovat skóre PCA3 namísto rozsahu skóre PCA3 (viz Opakování testu - ední vzork s vysokou hodnotou mimo rozsah).
2. Interpretace kód stavu a analýzy
Stavový sloupec u obou zpráv Raw Run Report (Zpráva nezpracovaného cyklu) i Ratio Report (Zpráva o pomru) uvádí informace ve formátu „s:a“. Kódy stavu specifické pro cyklus („s“) jsou uvedeny ped dvojtekou (vlevo) a kódy analýzy specifické pro analyt („a“) jsou uvedeny za dvojtekou (vpravo). Kódy specifické pro analyt jsou uvedeny malým písmem pro výsledky PCA3 a velkým písmem pro výsledky PSA. Kadá zpráva obsahuje popis kód stavu a analýzy, které se objevují v této zpráv. Napíklad kódy mohou ukazovat, zda je výsledek vzorku nebo replikátu platný nebo je mimo rozsah. Viz struná referenní píruka (Quick Reference Guide) nebo provozní píruka softwaru testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Software Operator's Manual), kde je uveden úplný seznam kód stavu a analýzy a další podrobnosti.
Pokud je skóre PCA3 hlášeno ve zpráv Ratio Report (Zpráva o pomru) a neobjeví se ádné kódy stavu nebo analýzy ve stavovém sloupci PCA3 nebo PSA, znamená to, e oba analyty byly dle testu platné a „v rozmezí“. Výsledek vzorku je moné hlásit a nejsou nutná ádná další opatení.
Pokud se kód stavu nebo analýzy objeví v souhrnu výjimek nebo Ratio Report (Zpráva o pomru), me být nezbytné provést nový test (viz Interpretace výsledk v souhrnu výjimek a Interpretace výsledk v Ratio Report (Zpráva o pomru)). Pokud výsledky analytu pocházejí ze samostatných cykl a mají kód(y) analýzy, najdte kombinaci pro oba analyty v Tabulka 4 nebo Tabulka 5, abyste mohli urit, zda jsou nezbytná další opatení.
Poznámka: Pítomnost kódu stavu nebo analýzy neznamená automaticky, e je nutné provedení opakovaného testu.
3. Interpretace výsledk v souhrnu výjimek
Souhrn výjimek nemusí uvádt ádné výjimky. V takovém pípad nejsou nutná ádná opatení.
Pokud souhrn výjimek uvádí vzorek (vzorky) z po sob jdoucích cykl, kde byly oba cykly analytu platné, pette si Tabulka 4, kde jsou uvedeny další pokyny.
Pro jednotlivé cykly analytu si pette Interpretace kód stavu a analýzy. V po sob jdoucích cyklech, kde je jeden cyklus analytu neplatný, provete nové testování neplatného cyklu (viz Opakování testu, kde je uvedeno více informací) a zacházejte s výsledky, jako by byly provedeny individuální cykly pro daný analyt. Bude nutné provedení manuálního spárování.
Vzorek me být oznaen jako neplatný, i kdy mohou být jednotlivé zkumavky (replikáty) oznaené za platné. Kombinovaný výsledek replikát uruje validitu vzorku a velký rozdíl mezi replikáty zpsobí neplatnost vzorku (viz Postupy kontroly kvality, kde je uvedeno více informací).
Tabulka 4: Podmínky souhrnu výjimek testu Progensa PCA3
Výsledek PCA3 (kód analýzy*)
Neplatný** (A, B, E, H nebo I)
-- Ano Opakujte test PSA (viz Opakování testu) a manuáln výsledky spárujte.
Mimo rozsah, nízký (g)
Neplatný (A, B, E, H nebo I)
-- Ano Opakujte test PSA (viz Opakování testu) a manuáln výsledky spárujte.
Neplatný (a, b, e, h nebo i)
V rozmezí (bez kódu)
-- Ano Opakujte test PCA3 (viz Opakování testu) a manuáln výsledky spárujte.
Volitelné
1. Manuáln spárujte pro dosaení výsledku <[Vypotené skóre PCA3] NEBO 2. Naete vzorek v edidle vzorku (viz ední vzork s vysokou hodnotou mimo rozsah), opakujte test PSA a manuáln spárujte výsledky, pokud je poadováno skóre PCA3.
Mimo rozsah, vysoký
Volitelné
1. Manuáln spárujte pro dosaení výsledku >[Vypotené skóre PCA3] NEBO 2. Naete vzorek v edidle vzorku, opakujte test PCA3 a manuáln spárujte výsledky, pokud je poadováno skóre PCA3.
Ne Manuáln spárujte pro dosaení výsledku <[Vypotené skóre PCA3].
*Viz provozní píruka softwaru testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Software Operator's Manual), kde je uveden úplný seznam kód analýzy. **Platí pouze pro neplatné vzorky s platným cyklem. ***Pro hodnoty mimo rozsah je vypotené skóre PCA3 poítáno pomocí hladiny kopií pro nejbliší pozitivní kalibrátor.
Te
4. Interpretace výsledk v Ratio Report (Zpráva o pomru)
Pokud je vzorek uveden v Ratio Report (Zpráva o pomru) se skóre PCA3, je výsledkem hlásitelné skóre PCA3 a nejsou nutná ádná další opatení. Pokud není uvedeno ádné skóre PCA3, vyjádené jako „--“ ve sloupci skóre PCA3, pette si Tabulka 5, kde jsou uvedeny pokyny.
Tabulka 5: Podmínky Ratio Report (Zpráva o pomru) testu Progensa PCA3
Výsledek PCA3 (kód analýzy*)
Skóre PCA3 Ne ádná další opatení; výsledek je moné hlásit.
Neplatný** (a, b, e, h nebo i)
-- Ano Opakujte oba analyty (viz Opakování testu).
(F) -- Ano
Naete vzorek v edidle vzorku (viz ední vzork s vysokou hodnotou mimo rozsah), opakujte test pro oba analyty.
-- Ano Naete vzorek v edidle vzorku, opakujte test pro oba analyty.
Naete vzorek v edidle vzorku, opakujte test pro oba analyty.
Mimo rozsah, nízký (G)
-- Ne Vzorek má nedostatek RNA pro pesnou analýzu. U pacienta musí být odebrán nový vzorek.
*Viz provozní píruka softwaru testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Software Operator's Manual), kde je uveden úplný seznam kód analýzy. **Platí pouze pro neplatné vzorky s platným cyklem. Pokud byly vzorky neplatné, protoe byl neplatný cyklus, výsledky budou uvedeny v souhrnu výjimek (viz Interpretace výsledk v souhrnu výjimek, kde je uvedeno více informací).
1. Pokyny pro opakování testu
a. I kdy není nutné, aby byly oba analyty testovány ve stejném cyklu, musí výsledky obou analyt pocházet ze stejné lahviky vzorku pro hlásitelné skóre PCA3.
b. Všechny neplatné cykly musí být opakovan testovány a všechny neplatné vzorky z platných cykl musí být opakovan testovány.
c. Opakujte test vzorku() pomocí nové sady kalibrátor a kontrol. d. Je nezbytné správné uchovávání zbylých vzork ped opakováním testu (viz Sbr,
transport a uchovávání vzorku, kde je uvedeno více informací). e. Manuální párování analyt PCA3 a PSA me být nutné ke stanovení skóre
PCA3 (viz Manuální párování, kde je uvedeno více informací).
2. ední vzork s vysokou hodnotou mimo rozsah
a. Pokud koncentrace vzorku extrapoluje nad kalibrátor 5 v rozsahu platného cyklu, výsledek je „mimo rozsah, vysoký“ a výsledek bude oznaen kódem analýzy „f“ nebo „F“ ve zpráv o cyklu. Koncentrace bude vyjádena jako >[Koncentrace kalibrátoru 5].
b. Pevrate zpracovaný vzorek moi, aby se ped edním promíchal. Doporuené, ale nevyadované ední, je 1:10 s vyuitím soupravy pro ední vzorku Progensa PCA3. Do vhodné lahviky pidejte 1 800 µl edidla vzorku a 200 µl vzorku; zkumavku uzavete a ptkrát obrate, aby se obsah dkladn promíchal. Faktor ední v pracovním listu cyklu bude „10“. Pokud mají být znovu testovány oba analyty, zdvojnásobte objemy (pouijte 3 600 µl edidla vzorku a 400 µl vzorku). Pette si píbalovou informaci k souprav pro ední vzorku testu Progensa PCA3. Testujte zedný vzorek pomocí testu.
c. Pokud je pi opakovaném testování výsledek vzorku opt vysoký mimo rozsah, bude nutné další ední, dokud nebude výsledek vzorku interpolovat s rozsahem kalibrátor. Další ední úvodního ední 1:10 je moné za pedpokladu, e bylo úvodní ední 1:10 ádn uch

Documents

Test Progensa PCA3