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1
Facultad de Medicina Humana y Ciencias de la Salud Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica
“TIEMPO DE DECOCCION DE MANAYUPA “Desmodium molliculum” Y EL CONTENIDO DE
POLIFENOLES”
TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE: QUIMICO FARMACEUTICO
BACHILLER: REYMUNDEZ SUAREZ, Gladys Patricia
LIMA – PERÚ 2016
2
ii
Dedicatoria
Agradezco a mis padres; por su confianza, por
su apoyo incondicional para lograr mis metas
profesionales y porque hoy se cristalizan sus
sueños y anhelos.
3
iii
Agradecimientos
A Dios, mi protector e inspiración, a mi asesor
por inculcarme el espíritu investigador y se
enorme apoyo profesional.
Q.F. Barreto Yaya, Danilo
4
RESUMEN
En el presente trabajo se evaluó el efecto del tiempo de decocción de la
droga “Desmodium molliculum” manayupa sobre el contenido de
polifenoles en el extracto obtenido, con este fin se usó muestras de
manayupa utilizadas por el programa de medicina alternativa de Essalud.
Las muestras se sometieron a diferentes tiempos de decocción 5, 10,
15,20, 25 y 30 minutos en agua destilada. Los resultados se evaluaron
mediante cromatografía en capa fina sobre silicagel y mediante el
contenido de flavonoides totales expresados como equivalentes de
quercetina por método espectrofotométrico.
Los resultados de la cromatografía muestran cambios cualitativos que
sugieren procesos hidroliticos y el análisis espectrofotométrico sugiere
cambios por procesos oxidativos que alcanzan un pico a los 15 minutos
de tratamiento.
Palabras clave: Desmodium molliculum, decocción, polifenoles.
iv
5
v
ABSTRACT
In this paper the effect of time of decoction of the drug "Desmodium
molliculum" manayupa on the polyphenol content in the extract
obtained was evaluated for this purpose manayupa sample of
alternative medicine program from Essalud wereused.
The samples were subjected to different periods of decoction 5, 10, 15,
20, 25 and 30 minutes with distilled water. The results were assessed
by thin layer chromatography on silica gel and by the content of total
flavonoids expressed as equivalents of quercetin by
spectrophotometric method.
The chromatography shows qualitative changes that suggest hydrolytic
processes and the spectrophotometric analysis suggests changes by
oxidative processes reach a peak within 15 minutes of treatment.
Key words: Desmodium molliculum, decoction, polyphenols.
6
vi
ÍNDICE
CARATULA……………….………………………………………….... 1
DEDICATORIA………….……………………………………….……. 2
AGRADECIMIENTO…….……………….…………………………… 3
RESUMEN…….………….…………………………………………… 4
ABSTRACT……………..…………………………………………….. 5
INDICE DE TABLAS…………….…..….………….………………… 6
INDICE DE FIGURAS………….………………….…………………. 8
INTRODUCCION……………………..………………………………. Xi
CAPITULO I: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA………....…. 12
1.1 Descripción de la Realidad Problemática………………..…… 12
1.2 Formulación del Problema……………………………..………. 12
1.2.1 Problema General……………………….…….…………. 12
1.2.2 Problemas Específicos………………….…..…………… 12
1.3 Objetivos de la Investigación…………………..………………. 13
1.3.1 Objetivo General……………………..…………………... 13
1.3.2 Objetivos Específicos……………...…………………….. 13
1.4 Hipótesis de la Investigación………..…………………………. 14
1.4.1 Hipótesis General…………..………………………….… 14
1.4.2 Hipótesis Secundarias…………………..……...……….. 14
1.5 Justificación e Importancia de la Investigación…..……...…. 15
CAPITULO II: MARCO TEORICO………………………………..… 16
2.1 Antecedentes de la Investigación…………………………….. 16
2.1.1 Antecedentes Nacionales………….………….…...…… 16
2.1.2 Antecedentes Internacionales………………………….. 19
2.2 Bases Teóricas……………………………..…………………... 20
i
ii
iii
iv
v
ix
x
7
vii
2.2.1 Generalidades de Manayupa “Desmodium molliculum”……………………………………………………………..
20
2.2.2 Compuestos Polifenolicos…………………………….... 23
. 2.2.2.1. Aspecto Químico de los flavonoides……….... 24
2.2.2.2. Flavonas…………………………...…………… 25
2.2.2.3. Flavanoles……………………...………………. 26
2.2.2.4. Antocianidinas………………………………….. 27
2.2.2.5. Isoflavonoides.………………………………..... 27
2.2.2.6. Flavonoles……………………………………… 29
2.3 Definiciones de Términos Básicos…………………………..... 30
CAPITULO III: METODOLOGIA DE LA INVESTIGACION..……. 33
3.1 Tipo de Investigación…………..………………………………. 33
3.2 Nivel de Investigación……………………...………………….. 33
3.3 Método de Investigación………………………………………. 33
3.4 Diseño de Investigación……..………………………………… 33
3.5 Población y Muestreo de la Investigación…………..………. 33
3.5.1 Población…………………………..……………………. 33
3.5.2 Muestra………………..………………….……………… 33
3.6 Variables e Indicadores………………………..……………… 34
3.7 Procedimiento Técnica e instrumentos de Recolección de Datos……………………………………………………………………
35
3.7.1 Procedimiento…………………………..………………. 35
3.7.2 Técnicas…….…….………..……………………………. 39
3.7.3 Instrumentos..…………………………………………... 40
CAPITULO IV: PRESENTACION, ANALISIS E INTERPRETACION DE RESULTADOS……………………………
42
4.1. Análisis e interpretación de Resultados………………..…… 42
4.1.1 Resultados de la Cromatografía capa fina……..……. 42
8
viii
4.1.2 Resultados Espectrofotométrico………………..…….. 46
DISCUSIÓN……………………………..……….……………………. 40
CONCLUSIONES…..………………………………………………… 41
RECOMENDACIONES…..………………………………………….. 42
REDERENCIAS BIBLIOGRAFICAS………………….…………… 43
ANEXOS……………………….……………………………………… 46
ANEXO 1……..……………………………………………………….. 47
ANEXO 2…………..………………………………………………….. 51
9
ix
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla N°1: Clasificación de Manayupa………..………….................... 18
Tabla N°2: Desarrollo de la Cromatografía capa fina para muestra... 35
Tabla N°3: Desarrollo de la Cromatografía capa fina en la muestra
estándar de trabajo de Manayupa “Desmodium
molliculum”……………………………………………………
36
Tabla N°4: Distancia recorrida por disolvente Rf………………...…… 38
Tabla N°5: Resultados de Análisis Espectrofotométrico…………….. 39
10
x
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura N°1: Manayupa “Desmodium molliculum”…………………………. 19
Figura N°2: Calificación de Flavonoides…………………………………… 20
Figura N°3: Estructura General de los Flavonoides……………………… 20
Figura N°4: Estructura Química de Flavonas…………………………….. 21
Figura N°5: Estructura Química de Flavanoles…………………………… 22
Figura N°6: Estructura Química de Antocianidinas………………………. 23
Figura N°7: Estructura Básica de Isoflavonoides…………………………. 23
Figura N°8: Estructura Química Daidzeina y Genisteina………………… 24
Figura N°9: Estructura Química de Quercitina……………………………. 25
Figura N°10: Hojas y tallos de manayupa “Desmodium molliculum”…….. 30
Figura N°11: Extracción metanolica con resina…………………………….. 31
Figura N°12: Revelador 2-aminoethyl diphenylborinate…………………… 31
Figura N°13: Cromatografía capa fina………………………………………. 32
Figura N°14: Resultados de la Cromatografía capa fina identificación de
isoflavonoides y flavonoides…………………………………..
37
Figura N°15: Variación de la concentración de polifenoles en función al
tiempo…………………………………………………………….
39
11
xi
INTRODUCCIÓN
Desde hace muchos años, las drogas de origen vegetal, o las
preparaciones medicamentosas obtenidas a partir de ellas, han
servido como remedios curativos para el hombre y los animales.
Nuestros antepasados las utilizaban bajo el criterio de la intuición y
la repetición de la experiencia. Actualmente, estos criterios han
sido sustituidos por constantes estudios científicos que pretenden
que el producto a utilizar sea perfectamente conocido en todo sus
aspectos.
La Fitoterapia o tratamiento con las plantas medicinales están
siendo cada vez más aceptada en los diferentes extractos sociales.
A pesar de tener una larga historia de saber popular, ha sido
apreciada por los profesionales de la salud. Contienen principio
activo, que podrían ser los responsables de las propiedades
terapéuticas que se les atribuyen. La decocción se utiliza para
preparar tisana, que precisan de una ebullición mantenida para
liberar sus principios activos. Sin embargo, presenta el
inconveniente de que algunos de los principios activos pueden
degradarse por la acción prolongada del calor.
El daño dependerá de la temperatura que se alcance y su
exposición al mismo. Por lo cual es necesario conocer el tiempo
requerido de decocción. El objetivo de este trabajo de
investigación, es proporcionar información útil sobre el efecto del
tiempo de decocción de manayupa “Desmodium molliculum” en la
calidad del preparado. Se demostrara si disminuye
significativamente el contenido de polifenoles y por tanto la calidad
del preparado al ser sometidos a los tiempos prolongados de
decocción. La metodología empleada consiste en evaluar los
extractos obtenidos mediante la cromatografía en capa fina y por
espectroscopia Uv de barrido.
12
CAPÍTULO I
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1 Descripción de la Realidad Problemática:
En el programa de Essalud se emplea la manayupa
“Desmodium molliculum”, que se utiliza en su programa de
medicina alternativa y tradicional, por sus propiedades
benéficas para la salud que ayudan como un depurativo o
desintoxicante natural.
Las instrucciones para la preparación de la decocción de la
droga no son muy claras, el usuario a veces no entiende
bien las instrucciones de preparación o no saben que es una
decocción y existe el peligro que se someta la droga a
tiempos prolongados de calentamiento lo que tendría como
consecuencia la alteración química de los componentes
activos de la droga.
1.2 Formulación del Problema:
1.2.1. Problema General
¿Cuál es la relación entre el tiempo de decocción de
manayupa y el contenido de polifenoles?
1.2.2. Problemas Específicos
¿Cuál es el efecto de 5 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles?
13
¿Cuál es el efecto de 10 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles?
¿Cuál es el efecto de 15 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles?
¿Cuál es el efecto de 20 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles?
¿Cuál es el efecto de 25 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles?
¿Cuál es el efecto de 30 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles?
1.3 Objetivos de la Investigación:
1.3.1 Objetivo General
Determinar la relación entre el tiempo de decocción
de manayupa “Desmodium molliculum” y el contenido
de polifenoles.
1.3.2 Objetivos Específicos
Determinar el efecto de 5 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles.
14
Determinar el efecto de 10 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles.
Determinar el efecto de 15 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles.
Determinar el efecto de 20 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles.
Determinar el efecto de 25 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles.
Determinar el efecto de 30 min de decocción de
manayupa “Desmodium molliculum” en el contenido
de polifenoles.
1.4 Hipótesis de la Investigación:
1.4.1 Hipótesis General
El tiempo prolongado de decocción de manayupa
“Desmodium molliculum” disminuye significativamente
el contenido de polifenoles.
1.4.2 Hipótesis Secundarias.
A los 5 min de decocción de manayupa “Desmodium
molliculum” disminuye el contenido de polifenoles.
15
A los 10 min de decocción de manayupa “Desmodium
molliculum” disminuye el contenido de polifenoles.
A los 15 min de decocción de manayupa “Desmodium
molliculum” disminuye el contenido de polifenoles.
A los 20 min de decocción de manayupa “Desmodium
molliculum” disminuye el contenido de polifenoles.
A los 25 min de decocción de manayupa “Desmodium
molliculum” disminuye el contenido de polifenoles.
A los 30 min de decocción de manayupa “Desmodium
molliculum” disminuye el contenido de polifenoles.
1.5 Justificación e Importancia de la Investigación
La manayupa “Desmodium molliculum” es un recurso natural que
contiene metabolitos activos como los polifenoles, que según la
bibliografía nacional e internacional son responsables de las
propiedades terapéuticas que se le atribuyen, por esta razón es
conveniente y recomendable para su uso, al realizar un tratamiento
de purificación sanguínea a través de productos naturales, como
un método preventivo y económico para ayudar a combatir
cualquier afección que ya se padezca, aunque también lo son de
intoxicación y reacciones adversas que pueden aparecer si se
emplea en dosis inadecuadas.
16
La finalidad de este trabajo es conocer si hay diferencia entre el
extracto obtenido en el tiempo indicado por el médico y los que se
obtienen luego de tiempos prolongados de decocción, lo que podría
redundar en cambios que pueden afectar la eficacia o incluso la
seguridad del preparado lo cual a su vez puede afectar la salud de
los usuarios.
En cuanto a su efectividad y calidad se beneficiaran en gran parte
la población por falta de ingreso económico con finalidad de brindar
más apoyo a los usuarios que no puede adquirir los fármacos
sintéticos empleados en un centro de salud.
17
CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO
2.1 Antecedentes de la Investigación:
2.1.1. Antecedentes Nacionales:
La investigación realizada por Chang, Artemio, Klinar, Silvia
(2009). En su trabajo de investigación “SCREENING
FITOQUIMICO DE GENTEIANELLA ALBOROSEA,
DESMODIUM SP.Y TIQUILA PARONYCHIOIDES”, se
demostró que las hojas y tallos de manayupa (Desmodium
sp) que se expenden en la ciudad de lima, contienen: grupos
fenólicos libres, taninos, triterpenoides y/o esteroides,
flavonoides y leucoantocianidinas.7
La investigación realizada por Acaro Chuquicaña, Ernesto
(2013). “EFECTO ANTICONCEPTIVO Y POSTCOITAL DEL
EXTRACTO ETANOLICO DE LAS HOJAS DE Desmodium
molliculum (HBK).DC MANAYUPA EN RATAS HEMBRAS
HOLTZMANN, Se demostró que el extracto etanolico de las
hojas de Desmodium molliculum administrado por vía oral
evidencio efecto anticonceptivo y poscoital en ratas hembras
holtzmann. El efecto anticonceptivo y poscoital de
Desmodium molliculum probablemente se deba
principalmente a la acción de los flavonoides con actividad
estrógeno y no estrogenicas a nivel uterino.8
18
La investigación realizada por Lozano R. Nancy, Bonilla R.,
Pablo (2001). “EVALUACION FITOQUIMICA Y ACTIVIDAD
BIOLOGICA DE Desmodium molliculum (H.B.K.) D.C.
(MANAYUPA), se demostró que las partes aéreas de
Desmodium molliculum (H.B.K.) DC procedentes de los
departamentos de Huánuco, Junín y Cajamarca fueron
caracterizadas a partir de los extractos metanólico
revelando la presencia de; aminoácidos, compuestos
fenólicos, taninos, catequicos, esteroides y/o
triterpenoides;flavonoides y leucoantocianidinas.9
En la investigación realizada por Acero Carrión, Bertha,
Millones Sánchez Emanuel (2012). “ACTIVIDAD
ANTIINFLAMATORIA DEL EXTRACTO ETANOLICO DE
Desmodium molliculum EN EL MODELO MURINO DE
ASMA”, se demostró que en un modelo murino de asma,
según los valores de IgE e inflitrado peribronquial y
perivascular en el pulmón y el extracto etanolico de
Desmodium molliculum tiene un efecto en la inflamación
alérgica, efecto similar al obtenido con dexametasona.10
En la investigación realizada por Carrillo G., Aicardi,
Alzadora J., Alvares, Carrillo R., Delfino (2015).” EFECTO
DIURETICO DEL EXTRACTO DE Desmodium molliculum
(MANAYUPA) EN RATAS ALBINAS”, se demostró que el
extracto metanólico de Desmodium molliculum a l dosis de
400mg/Kg. Ejerce un efecto diurético superior en la primera
hora y similar en el promedio total, al de la furosemida;
además, el efecto diurético no fue dosis dependiente. 11
19
2.1.2. Antecedentes Internacionales:
La investigación realizada por Gutiérrez, Dora, Mendoza
Sandra (2008).”PROXIMATE COMPOSITION MINERAL
CONTENT, AND ANTIOXIDANT PROPERTIES OF 14
MEXICAN WEEDS USED AS FODDER”, se demostró que
el alto contenido de componentes fenólicos y la buena
eliminación de radicales libres, Desmodium molliculum,
estas especies naturales representan una fuente de agentes
antioxidantes.12
La investigación realizada por Marcel Koffi Konan,
Mamyrbekova-Bekro (2012).” Quantification of total
phenols and flavonoids of Desmodium adscendens (Sw)
DC. (Papillionaceae and projection of their antioxidant
capacity, se demostró que la planta medicinal de Costa de
Marfil, Desmodium adscendens posee flavonoides en sus
extractos acetato de etilo y n-butanol por TLC. Se determinó
la calidad y se hizo la proyección de la capacidad
antioxidante por el método de espectrometría DPPH.13
La investigación realizada por Hernandez Garcia (2005). En
su trabajo de investigación “EFECTOS DEL
PROCEDIMIENTO SOBRE LA ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE”, se demostró que la cocción causa una
disminución significativamente en el contenido de polifenoles
de las muestras, mostrando una suceptivilidad a los
procesos térmicos, dicha susceptibilidad no solo refiere a
efectos de la temperatura, sino que puede deberse además
a un aumento en su reactividad frente a otros compuestos17.
20
La investigación realizada por Young Beod (2014). En su
trabajo de investigación “THE EFFECTIVE PREPARATION
OF FLAVONOIDS FROM SCUTELLARIA BAICALENSIS
BY DAIAION HP-20 RESIN”, se demostró que el método de
absorción de resina es más eficiente que el método de
absorción con etanol para la extracción de alto
fraccionamiento en flavonoides de S. Baicalensis.18
La investigación realizada por Catalino (2012). En su trabajo
de investigación “CUANTIFICACION DE FLAVONOIDES
EN EL EXTRACTO METANOLICO DE Glycine max”, se
demostró la presencia del estos componentes presentes en
el extracto de la semilla de Glycine max, el cual mostro la
presencia de flavonoides. Se cuantificaron por
espectrofotometría UV-Vis a 258nm., determinando el
contenido de isoflavonas como daidzeina y genissteina.20
2.2 Bases Teóricas
2.2.1 Generalidades de Manayupa “Desmodium molliculum”
Descripción
La manayupa se le conoce popularmente como “pata de
perro”, “pega pega”, en diferentes regiones del Perú. Hierba
pequeña de la familia de las leguminosas de flores; rosadas,
lilas o moradas, hojas; pequeñas, redondeadas, verde
oscuro brillante, algo rugosas.
21
Tabla N°1
Clasificación de la manayupa
Fuente:http://www.botanicalonline.com/col/manapuya1.htm#clasific
acion
Hábitat y distribución
Es una especie endémica del Perú que crece entre 1000-
3200msnm, común de los campos abiertos, abonados,
pastizales y también de las áreas de cultivo. También se le
encuentra en Bolivia y Ecuador.14
Ubicación en el Perú
En el Perú se le encuentra en Cuzco se encuentra a 3300-
3600 y Apurímac 3200-3800msnm.
Bioagricultura
Se propaga vegetativamente por estacas, pues la
producción de semillas es baja y difícil de germinación.
Taxonomía
Reino Plantae
División Angioespermas
Clase Dicotidedoneas
Orden Leguminoseae
Familia Fabaceae
Especie Mollicum (HBK) D.C
Tribu Desmodieae
Genero Desmodium
22
Composición Química
Ácido gálico, cinámico, almidón, aminoácidos, carotenoides,
cumarinas, esteroides, fenoles, flavonoides, fructosa,
glucosa, gomas, grasa, mucilagos, resinas, rivoflavina,
taninos, tiamina, triterpenoides, vitamina E y K.
Usos Medicinales
Antimicrobiano, Anticonceptivo, Desintoxicante, Acción
depurativa, fundamentalmente sobre el sistema renal. Es un
excelente diurético y desinflamante de las vías urinarias.
También es desinflamante de la mucosa, sobre todo del
tracto gastrointestinal. Los esteroides y ácidos orgánicos
encontrados le confieren su efecto antiinflamatorio, por ello
se suele utilizar en procesos de gastritis agudas y crónicas.
Además, ayuda a corregir el estreñimiento por su leve acción
catártica. Es antialérgica y se usa en intoxicación por
fármacos.
23
Figura N°1
Manayupa “Desmodium molliculum”
Fuente: Elaboración Propia
2.2.2 Compuestos Polifenoles
Los compuestos polifenoles son compuestos químicos de
origen natural que se encuentran en las plantas y animales,
principalmente como derivados de funciones metabólicas.
Consisten en uno o más anillos aromáticos que portan uno o
más grupos hidroxilos, incluyendo sus derivados funcionales.
Estos anillos pueden estar unidos directamente entre sí, o
pueden estar unidos por medio de cadenas alifáticas
abiertas.19
24
Figura N°2
Clasificación de los Flavonoides
Fuente: Elaboración Propia
2.2.2.1. Aspecto Químico de los flavonoides
Los flavonoides tienen una estructura química muy
definida como se muestra en la figura N°3. Puede
observarse que de manera general son moléculas
que tienen dos anillos bencénicos (o aromáticos,
para los químicos orgánicos) unidos atraves de una
cadena de tres átomos de carbono, puesto que cada
anillo bencénico tiene 6 átomos de carbono.
Figura N°3
Estructura General de los Flavonoides
Fuente: http://farmacia.udea.edu.co/~ff/flavonoides2001.pdf
Polifenoles Flavonoides
isoflavonoides
Daidzeina
Genisteina
Quercitina Flavonoles
25
Los flavonoides se encuentran mayoritariamente
como glucósidos, pero también pueden aparecer en
forma libre (también llamados agliconas flavonoides).
Dentro de cada familia existe una gran variedad de
compuestos, que se diferencian entre sí por el número
y la posición de los grupos hidroxilos, y por los
distintos grupos funcionales que pueden presentar
(metilos, azucares, ácidos orgánicos).
Los principales subgrupos de compuestos flavonoides
son:
Flavonas, flavanoles, isoflavonoides, antocianidinas y
flavonoles.19
2.2.2.2. Flavonas
Poseen un grupo ceto en el carbono C4 y una
insaturacion entre los carbonos C2 y C3. Son los
flavonoides menos abundantes en los alimentos.
Figura N°4
Estructura Química de Flavonas
Fuente:http://www.elsevier.es/es-revista-offarm-4-articulo-
actividad-biologica-los-flavonoides-i—13054406.
26
2.2.2.3. Flavanoles:
Poseen el anillo C saturado y un grupo hidroxilo en el
carbono C3. Pueden aparecer como monómeros o
como polímeros con distintos grados de
polimerización. A diferencia de otros grupos de
flavonoides, sus combinaciones de tipo heterosídico
(entre el grupo reductor del azúcar y un grupo tiol) son
poco habituales. Los flavanoles más representativos
en los alimentos son de tipo flavan-3-ol, y estos
pueden aparecer como monómeros (catequinas),
como dímeros condensados entre sí y como
oligómeros (procianidinas), o bien pueden aparecer
como polímeros (proantocianidinas o taninos
condensados). Epicatequina y catequina son los
compuestos mayoritarios en frutas.
Figura N°5
Estructura Química de Flavanoles
Fuente:http://www.elsevier.es/es-revista-offarm-4-articulo-
actividad-biologica-los-flavonoides-i—13054406
27
2.2.2.4. Antocianidinas:
Son compuestos hidrosolubles, y constituyen uno de
los grupos más importantes de pigmentos vegetales.
Se encuentran principalmente como heterósidos con
los tres anillos de su estructura conjugados.
La glucosilación ocurre principalmente en la posición
3 en las posiciones 5 y 7 del anillo A. También es
posible la glucosilación de las posiciones 3´, 4´ y 5´
del anillo B, aunque esta glucosilación aparece con
menos frecuencia.
Figura N°6
Estructura Química de Antocianidinas
Fuente:http://www.elsevier.es/es-revista-offarm-4-articulo-actividad-
biologica-los-flavonoides-i--13054406
2.2.2.5. Isoflavonoides
Los isoflavonoides poseen un anillo bencénico lateral
en posición C3. Su estructura recuerda a la de los
estrógenos.
28
Los isoflavonoides poseen grupos hidroxilos en los
carbonos C7 y C4 al igual que sucede en la estructura
molecular de la hormona estriol (uno de los tres
estrógenos mayoritarios junto al estradiol y la
estrona).18
Figura N°7
Estructura Básica de los isoflavonoides
Fuente: http://www.elsevier.es/en-revista-offarm-4-articulo-
flavonoides-13028951
En realidad, las isoflavonoides se pueden unir a receptores
de estrógenos, y por ello se clasifican como fitoestrogenos.
Se pueden presentar como agliconas, o a menudo
conjugadas con glucosa, pero son termosensibles y pueden
hidrolizarse durante su procesamiento industrial y durante su
conservación.
Existen 230 tipos de isoflavonoides, 2 de ellas, las más
importantes daidzeina (4´7-dihidroxisoflavona), genisteína
(4´5,7-trihidroxiflavona).
29
Figura N°8
Estructuras Químicas de Daidzeina y Genisteina
Fuente: http://lpi.oregonstate.edu/mic/dietary-
factors/phytochemicals/soy-isoflavones
2.2.2.6. Flavonoles
Se caracterizan por poseer un grupo ceto en el
carbono C4, y una instauración entre los carbonos C2
y C3. Poseen además un gropo hidroxilo adicional en
el carbono C3. Representan el grupo más ubicuo de
polifenoles presente en los alimentos.
La quercitina es el compuesto más representativo.
Las principales fuente de flavonoles son las verduras
y las frutas. La biosíntesis de flavonoles es un
proceso fotosintético. Por ellos estos compuestos se
localizan principalmente en el tejido externo y aéreo
de la planta. La distribución y la concentración de los
flavonoles puede ser distinta incluso en frutas
procedentes de la misma planta; esto se debe a que
la localización de los frutos condiciona la exposición al
sol.
30
Figura N°9
Estructura Química de la Quercetina
Fuente: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0121-
40042009000100011.
2.3. Definiciones de Términos Básicos
Polifenoles: son un grupo de sustancias químicas encontradas en
plantas caracterizadas que tienen al menos un anillo aromático al
que están unidos uno o más grupos hidroxilo.
Flavonoides: son fitoquimicos polifenolicos derivados del
metabolismo secundario de las plantas, juegan un papel importante
en diversos procesos biológicos.
Isoflavonas: son una clase de flavonoides encontrados en las
leguminosas. Están implicados en los mecanismos de defensa de
la planta ante el herbivorismo.
Decocción: llamada también cocimiento, este procedimiento
consiste en llevar a la mezcla de droga a la temperatura de
ebullición del agua, manteniendo esta temperatura durante un
periodo variable.
31
Droga: es la parte de la planta medicinal utilizada en terapéutica.
Principio Activo: sustancia que se encuentran en las distintas
partes de las plantas y que alteran o modifican el funcionamiento
de órganos y sistema del cuerpo humano y animal.
Cromatografía: es el método utilizado principalmente para la
separación de componentes de una sustancia, en el cual los
componentes son distribuidos en dos fases una estacionaria y otra
móvil.
Cromatografía capa fina: es una técnica rápida y sencilla que
tiene como fin separar mezclas de sustancias y poder identificar o
determinar cuantitativamente los componentes individuales de una
sustancia.
Fase estacionaria: es una de las dos fases que forma un sistema
cromatográfico o puede ser un sólido, un gel o un líquido. Si es un
líquido, puede estar distribuido en un sólido el cual puede o no
contribuir al proceso de separación.
Fase móvil: es el fluido que se filtra a través o a lo largo del lecho
estacionario, en una dirección definida.
Factor de retardo: es el cociente entre la distancia recorrida por el
centro de la marcha y la distancia de corrida simultáneamente.
Depuración o desintoxicante: es el proceso mediante el cual el
organismo elimina las toxinas exógenas o endógenas, que alteran
el equilibrio funcional del individuo alterando el estado de salud.
32
Ebullición: se asocia al cambio de fase de un fluido. El cambio de
estado de vapor a partir de un líquido es posible en todo el
intervalo de temperatura limitado entre el punto triple y el crítico de
la sustancia.
Espectrofotometría: es un método cuantitativo de análisis químico
que utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias
químicas. Se conocen como métodos espectrofotométricos y según
sea la radiación utilizada como espectrofotometría de absorción
visible, ultravioleta e infrarroja.
33
CAPÍTULO III
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
3.1. Tipo de Investigación
Tipo de investigación Aplicada
3.2. Nivel de investigación
Nivel de investigación es correlacional
3.3. Método de investigación
Deductivo
Laboratorio
3.4. Diseño de investigación
Experimentales
Nos basaremos en la presencia y concentración de grupos
polifenólico en las muestras antes y después del cocimiento en
diferentes tiempos.
3.5. Población y Muestreo de la Investigación
3.5.1. Población
Sobres de manayupa utilizados en el programa de medicina
alternativa y tradicional de Essalud, del local de Villa el
Salvador.
3.5.2. Muestra
03 sobres de contenido 100g./3.53oz N° Lote MAN-150201
de Manayupa empleados en el programa de medicina
alternativa y tradicional de Essalud, recolectados del local
de Essalud de Villa el Salvador en Noviembre del 2015.
34
3.6. Variables e Indicadores
Variable Independiente (Y):
VARIABLE (Y) INDICADORES
5 minutos luego de ebullición
Tiempo de decocción de manayupa 10 minutos luego de ebullición
“Desmodium molliculum” 15 minutos luego de ebullición
20 minutos luego de ebullición
25 minutos luego de ebullición
30 minutos luego de ebullición
Variable Dependiente (X):
VARIABLE (X) INDICADORES
Contenido de polifenoles a los 5 minutos de decocción.
Contenido de Contenido de polifenoles a los 10 minutos de decocción.
Polifenoles Contenido de polifenoles a los 15 minutos de decocción.
Contenido de polifenoles a los 20 minutos de decocción
Contenido de polifenoles a los 25 minutos de decocción.
Contenido de polifenoles a los 30 minutos de decocción
35
3.7. Procedimiento Técnicas e Instrumentos de Recolección de Datos
3.7.1. Procedimiento
Pesar seis veces 5 gramos de muestra manayupa Essalud
“Desmodium molliculum”.
Poner en cada matraz la muestra pesada con 100ml de
agua destilada y calentar cada matraz a los tiempos dados a
un punto de ebullición por 5min, 10min, 15min, 20min,
25min, 30min.
Filtrar el extracto de muestra con papel de filtro.
Enrrasar a 50 mL con agua destilada cada muestra
Envasar y rotular las seis muestras filtradas en viales
Figura N°10
Hojas y tallos de manayupa “Desmodium molliculum”
Fuente: Elaboración Propia
36
Procedimiento concentrado de muestras por extracción en fase solida
con resina DIAION HP20:
Pesar 2.0g de resina en un matraz cubrir con 5ml de metanol se
mezclara suavemente por agitación durante un minuto.
Luego se centrifugara por 10 min a 25°C.
Luego se enjuagará con agua destilada.
Adsorción de la muestra:
Medir con una pipeta 5 ml del extracto a ser analizada colocar
en un matraz junto con la resina agitar por 5 min y dejar en
reposo por una hora agitando de cuando en cuando.
Lavado:
Se realiza un lavado con agua destilada.
Agitar suavemente por 20 minutos.
Finalmente se filtra, se concentra en placas Petri en baño de
vapor.
Figura N°11
Extracción metanólico con resina
Fuente: Elaboración Propia
37
Procedimiento de la cromatografía capa fina:
Activar las placas cromatografías en la estufa a 105°C por 30 min.
Sacar de la estufa las placas, esperar unos 10 min que se enfrió.
Luego los seis extractos obtenidos se aplicara a las placas en la
línea de siembra a 1.5cm.
Llevarlos a las cubetas, donde previamente se saturó con la fase
móvil compuesta de acetato de etilo: ácido fórmico: ácido acético:
agua 20:2.2:2.2:5.2.
Sacar las placas de las cubetas dejarlas secar al ambiente
Realizar el revelado con el 2- Aminoethyl diphenylborinate
Llevarlo a la luz ultravioleta a una longitud de onda de 360nm.
Figura N°12
Revelador 2-aminoethyl diphenylborinate
Fuente: Elaboración Propia
38
Figura N°13
Cromatografía en capa fina
Fuente: Elaboración Propia
Procedimiento de espectrofotometría ultravioleta
Encender el espectrofotómetro y esperar 10 minutos.
Seleccionar la longitud de onda (258 nanómetros).
Colocar cada muestra en las celdas limpias, dentro del
espectrofotómetro para que se realice la lectura.
39
3.7.2. Técnica
Las muestras de manayupa, se va a someter a decocción en
tiempos variables, los extractos obtenidos serán
concentrados con resina y se analizaran por cromatografía
en capa fina y por espectrofotómetro UV.
Análisis cualitativo en Cromatografía capa fina:
Se realiza mediante la cromatografía en capa fina que permite
resultados comparativos de los tratamientos con dos isoflavonas
estándar que se obtendrán luego del procedimiento de ebullición
con sus respectivos tiempos.
Especificaciones de la cromatografía en capa fina de Manayupa
“Desmodium molliculum” empleado en Essalud.
- Placas cromatografías de silica gel de 15cm x 10cm.
- Aplicación de 10 repiques del extracto a 1.5cm del borde inferior.
La fase móvil es acetato de etilo: ácido fórmico: ácido acético: agua
(20:2.2:2.2:5.2). Deje saturar la cámara cromatografía. Colocar las
placas cromatografías en la cámara hasta que la fase móvil se
mueva.
- El agente revelador consiste en una solución metanolica al 1% de
2- Aminoethyl diphenylborinate y una solución metanolica al 5% de
polietilenglicol.
- Análisis cuantitativo por espectrofotometría Uv:
Tratamiento de la muestra
Coger 2ml de extracto de muestra y diluirlo en 2ml de metanol
en un tubo de ensayo agitarlo suavemente.
40
Dejar reposar y proceder a leer a 258nm
Preparación del estándar.
Pesar 8mg de quercitina en un tubo de ensayo y llevar a
volumen con metanol de 10ml, tomar 1 mL y diluir a 10 mL.
Proceder a leer a 258nm cada muestra.
Pesar 8mg de quercitina en un tubo con 10ml de metanol
(peso/volumen en metanol)
3.7.3. Instrumentos:
Reactivos:
Acetato de etilo
Ácido Acético
Etanol
Metanol
Ácido Fórmico
Agua Destilada
Amoniaco
2- Aminoethyl diphenylborinate
Polietilenglicol
Resina
Materiales y Equipos:
Matraces
Probeta
Bureta
Pipetas
Tubos de ensayos
Placas Petri
Balanza
Cámara flujo laminar
41
Lámpara Uv
Espectrofotómetro Uv
Viales
Papel de filtro
Placas cromatografías
42
CAPÍTULO IV
PRESENTACIÓN, ANALISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
4.1. Análisis e interpretación de Resultados
La interpretación de los resultados se hizo en base al
cromatograma.
4.1.1 Resultados: Cromatografía capa fina
Tabla N°2
Desarrollo de la cromatografía de capa fina para muestras
Fuente: Elaboración Propia
Planta Fase móvil Reactivo Revelador
Componentes a identificar
Resultados Esperados
Desmodium molliculum
Acetato de etilo-ácido fórmico-ácido acético-agua(20:2.2:2.2:5.2)
2- Aminoethyl diphenylborinate
Flavonoides
Isoflavonoides
Amarillo, verde, rojo, fluorescente Azul
fluorescente
43
Tabla N°3
Desarrollo de la cromatografía en capa fina de la muestras estándar
de trabajo de manayupa “Desmodium molliculum”
Fuente: Elaboración Propia
Muestras de la
cromatografía
1 5 min
2 10 min
3 15 min
4 20 min
5 25 min
6 30 min
7 DAIDZEINA
8 GENISTEINA
1 2 6 3 4 5 7 8
44
Figura N°14
Resultados de la cromatografía en capa fina identificación de
isoflavonoides y flavonoides
Fuente: Elaboración Propia
ISOFLAVONOIDES
FLAVONOIDES
Rf: 1
Rf: 3
Rf: 2
Rf: 4
Rf: 6
Rf: 5
Rf: 7
Rf: 9
Rf: 8
5 10
15 20
25 30
Rf: 12
Rf: 11
Rf: 10
Estándar GENISTEINA
Estándar DAIDZEINA
45
Tabla N°4
Distancia recorrida por el disolvente Rf
Rf
5 min
10 min
15 min
20 min
25 min
30 min
Estándar
Daidzeina
Estándar
Genisteina
1 0.22 0.21 0.21 0.21 0.21 0.21 -- --
2 0.31 0.29 0.28 0.29 0.29 0.29 -- --
3 -- 0.35 0.37 0.37 0.38 0.36 -- --
4 -- -- -- 0.41 0.43 0.43 -- --
5 -- 0.46 0.47 0.46 0.47 0.48 -- --
6 0.58 0.54 0.53 0.56 0.56 0.56 -- --
7 0.70 0.66 0.66 0.66 0.66 0.66 -- --
8 0.80 0.73 0.76 0.76 0.76 0.76 -- --
9 0.88 0.84 0.83 0.83 0.84 0.84 -- --
10 0.91 0.89 0.87 0.88 0.86 0.85 -- --
11 0.96 0.94 0.93 0.92 0.91 0.91 -- --
12 0.99 0.98 0.98 0.97 0.98 0.98 0.98 0.97
Fuente: Elaboración Propia
46
4.1.2. Resultados espectrofotométrico
Tabla N°5
Resultados del análisis Espectrofotométrico
Tiempo
Absorbancia de la
muestra
mg/ml
5 minutos 6.000 absorbancia 0.0849 mg/ml
10 minutos 4.252 absorbancia 0.0602 mg/ml
15 minutos 3.3005 absorbancia 0.0467 mg/ml
20 minutos 3.513 absorbancia 0.0497 mg/ml
25 minutos 3.5815 absorbancia 0.0507 mg/ml
30 minutos 3.4115 absorbancia 0.0483 mg/ ml
Fuente: Elaboración Propia
Figura N°15
Variación de la concentración de polifenoles en función al tiempo
Fuente: Elaboración Propia
47
DISCUSION
En el presente trabajo de investigación determina el tiempo de
decocción del Manayupa “Desmodium molliculum” y el contenido
de polifenoles.
Los flavonoides, son un grupo de polifenoles en las plantas, se ha
demostrado que emplea efectos positivos sobre la salud humana y
desempeña un papel importante en la prevención y/o tratamiento
en la inflamación (Acero 2012); como antidiurético (Carrillo 2015);
anticonceptivo (Acaro 2013).
También es importante destacar para un mejor rendimiento de
obtención de polifenoles empleando el método de absorción con
resina. Estos resultados coinciden con los reportados por otro autor
en investigaciones previas realizadas (Young Bod 2014). De
acuerdo al estudio se demostró que el método de absorción con
resina es efectivo para la extracción de flavonoides.
En el proceso de decocción se originó un efecto de disminución en
polifenoles .Estos resultados coinciden con los reportados por otros
autores en investigaciones previas realizadas (Hernández 2005).
De acuerdo a estos autores la disminución observada podría
deberse a la sensibilidad térmica de los compuestos con actividad
antioxidante presentes en el Desmodium molliculum.
Desafortunadamente para el consumo de leguminosas y
particularmente del Desmodium molliculum, es necesaria la
decocción previa, de allí la importancia de la investigacion sobre los
usos del proceso.
Finalmente, de acuerdo a los resultados obtenidos del extracto
acuoso del Manyupa Desmodium molliculum, se concluyeron que
el proceso de decocción degrada los polifenoles presentes en el
Desmodium molliculum, ya que la reactividad de los anillos
aromáticos se ve afectada por la exposición prolongada a altas
temperaraturas13.
48
CONCLUSIONES
El tiempo y la temperatura influyen en la extracción acuosa de los
polifenoles en los extractos Desmodium molliculum. Los mejores
resultados se obtuvieron a los 5 minutos de decocción,
obteniéndose 0.0849mg/ml en contenido de polifenoles.
El contenido de polifenoles en los extractos Desmodium molliculum
disminuyo en un tiempo de decocción a los 10 minutos,
obteniéndose 0.0602mg/ml.
El contenido de polifenoles en los extractos Desmodium
molliculum, presentan una degradación con un valor de
0.0467mg/ml a medida que el tiempo de decocción va avanzando o
es más largo se mantiene una estabilidad hasta los 30 minutos con
un valor de 0.0483mg/ml.
Por lo tanto la disminución de los polifenoles en los extractos de
Desmodium molliculum, podría deberse a la sensibilidad térmica de
los compuestos de actividad antioxidante, también de los procesos
químicos que sufren los polifenoles.
49
RECOMENDACIONES
- Según los resultados obtenidos en el Manayupa “Desmodium
molliculum” debería tener 5 minutos de tiempo de decocción para
evitar la disminución de sus polifenoles y aprovechar sus beneficios
que son muy importantes para la salud.
- Para una mejor conservación de polifenoles es recomendable
mantenerlo en una solución metanólico, para evitar un deterioro de
la muestra obtenida.
- Se recomienda tomar todas las precauciones al momento de
cuantificar los polifenoles como es un ambiente libre de luz para
evitar la degradación de estos compuestos o la lectura al tiempo
determinado en la técnica.
- Consumir este producto, ya que posee grandes beneficios para la
salud y bienestar de las personas es un producto totalmente
natural.
- Realizar un estudio de las propiedades fisicoquímicas de los
extractos de otras plantas sometidos a un proceso de decocción.
50
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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antioxidante de compuestos fenólicos y en extractos
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51
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estractos metanolicos de Glycine max.Univ. del Pais de
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53
ANEXOS
54
ANEXO N°1
MATRIZ DE CONSISTENCIA
55
PROBLEMA GENERAL
OBJETIVO GENERAL
HIPOTESIS GENERAL
TIPO Y NIVEL DE
INVESTIGACION
METODO Y DISEÑO DE
INVESTIGACION
VARIABLE
PROBLEMA Y MUESTRA
¿Cuál es la relación entre el tiempo de decocción de manayupa y el contenido de polifenoles?
PROBLEMA ESPECIFICO - ¿Cuál es el efecto de 5 min de decocción en el contenido de polifenoles? - ¿Cuál es el efecto de 10 min de decocción en el contenido de polifenoles? - ¿Cuál es el efecto de 15 min de decocción en el contenido de polifenoles? - ¿Cuál es el efecto de 20 min de decocción en el contenido de polifenoles? - ¿Cuál es el efecto de 25 min de decocción en el contenido de polifenoles? - ¿Cuál es el efecto de 30 min de decocción en el contenido de polifenoles?
Determinar la relación entre el tiempo de decocción de manayupa “Desmodium molliculum” y el contenido de polifenoles. OBJETIVOS ESPECIFICOS - Determinar el efecto de 5 min de decocción en el contenido de polifenoles. - Determinar el efecto de 10 min de decocción en el contenido de polifenoles. - Determinar el efecto de 15 min de decocción en el contenido de polifenoles. - Determinar el efecto de 20 min de decocción en el contenido de polifenoles. - Determinar el efecto de 25 min de decocción en el contenido de polifenoles. - Determinar el efecto de 30 min de decocción en el contenido de polifenoles.
El tiempo prolongado de decocción de manayupa “Desmodium molliculum” disminuye significativamente el contenido de polifenoles. HIPOTESIS ESPECIFICOS - A los 5 min de decocción disminuye 10% del contenido de polifenoles. - A los 10 min de decocción disminuye 30% del contenido de polifenoles - A los 15 min de decocción disminuye 50% del contenido de polifenoles. - A los 20 min de decocción disminuye 70% del contenido de polifenoles. - A los 25 min de decocción disminuye 90% del contenido de polifenoles. - A los 30 min de decocción disminuye 100% del contenido de polifenoles.
TIPO DE INVESTIGACION Aplicada NIVEL DE INVESTIGACION Correlacional
METODO DE INVESTIGACION: Deductivo Laboratorio Método caso. DISEÑO DE INVESTIGACION: Experimental
VARIABLE INDEPENDIENTE (x): Tiempo de decocción de manayupa “Desmodium molliculum”. INDICADORES: Y1: 5min luego de ebullición. Y2: 10min luego de ebullición. Y3: 15 min luego de ebullición Y4: 20 min luego de ebullición Y5: 25 min luego de ebullición. Y6: 30 min luego de ebullición. VARIABLE DEPENDIENTE(Y): Contenido de Polifenoles. INDICADORES: - Contenido de polifenoles a los 5 minutos de decocción. - Contenido de polifenoles a los 10 minutos de decocción. - Contenido de olifenoles a los 15 minutos de decocción. - Contenido de polifenoles a los 20 minutos de decocción. - Contenido de polifenoles a los 25 minutos de decocción. - Contenido de polifenoles a los 30 minutos de decocción.
POBLACION: Sobres de manayupa utilizados en el programa de medicina alternativa y tradicional de Essalud, del local de Villa el Salvador. MUESTRA: 03 sobres de contenido 100gr./3.53oz N° Lote MAN-150201 de Manayupa empleados en el programa de medicina alternativa y tradicional de Essalud, recolectados del local de Essalud de Villa el Salvador en Noviembre del 2015.
TIEMPO DE DECOCCION DE MANAYUPA “Desmodium molliculum” Y EL CONTENIDO DE POLIFENOLES.
56
ANEXO N°2
CERTIFICADOS DE ANALISIS
57
Foto N°1
Certificado de Análisis de Genisteina
58
Foto N°2
Certificado de análisis de Daidzeina
59
Foto N°3
Certificado de análisis de Resina Diaion HP20
60
ANEXO N°3
FOTOGRAFIAS
61
Foto N°4 Foto N°5
Estándar Daidzeina Estándar Genisteina Foto N°6
Preparación de la muestra “Desmodium molliculum”
62
Foto N°7
Filtración y envasado de las muestras
Foto N°8
Procedimiento a la cromatografía capa fina
Fuente: Elaboración Propia
63
Foto N°9
Preparación del estándar Quercitina
Foto N°10
Espectrofotómetro
