TIPOS DE MUTACIONES

•ANOMALÍAS CROMOSÓMICAS

•EXPANSION DE TRIPLETES

•PEQUEÑAS DELECIONES (EN FASE O FRAMESHIFT)

•PEQUEÑAS INSERCIONES (EN FASE O FRAMESHIFT)

•MUTACIONES PUNTUALES

– MISSENSE

– NONSENSE

– SPLICING

metATG TAT AGC ATT CCA TAA AAATATATA.......GGC

glyAAAlys tyr ser ile pro stop

metATG TAT AGC ATT CCA TAA AAATATATA.......GGC

gly

AAAlys

tyr ser ile pro stop

metATG ATA GCA TTC CAT AAA AAT ATA .........GGA

glyAATasn ile ala phe his lys

C

asn ile

TIPOS Y EFECTO DE MUTACIONES

metATG TAT AGC ATT CCA TAA AAATATATA.......GGC

glyAAAlys tyr ser ile pro stop

GGAgly

ATAile

TAAstop

MISSENSE

NONSENSESILENTCAMBIOS PUNTUALES ENSECUENCIA CODIFICANTE

DELECIONES E INSERCIONESEN SECUENCIA CODIFICANTE

DELECIÓN (FRAMESHIFT)

DELECIÓN (EN FASE)

missense/nonsense

splicing

small ins/del

gross ins/del

repeat variations

complex rearrangements

Nombre común Nombre sistemático Efecto

MissenseR243Q c.728 GA cambio de Arg por Gln en la posición 243

I65T c.194 TC cambio de Ile por Thr en la posición 65

Nonsense R111X c.331CT cambio de Arg 111 por codón de parada

Inserción K452fsinsA c.1355insA cambio de la fase de lectura (frameshift)

Deleción P211fsdelC c.632delC cambio de la fase de lectura (frameshift) Y198fs c.593-641del22pb cambio de la fase de lectura (frameshift) DelE3 delE3 deleción del exon 3

Splicing IVS10nt-11g>a c.1066-11ga alteración del splicing IVS12nt1g>a c.1315+1ga alteración del splicing

NOMENCLATURA DE MUTACIONES

aagccagTGACAT....CAGgtga.......ttagCTGG....

EXON 3 EXON 4

IVS3+1 (c.165+1)

IVS3+2 (c.165+2)

INTRON 3

IVS3-3 (c.166-3)IVS3-2 (c.166-2)

IVS3-1 (c.166-1)

nt 100 165 166

NOMENCLATURA DE MUTACIONESDE SPLICING

http://www.hgvs.org/rec.html

Detección de mutaciones

• Muestras : sangre total, raspadura bucal, villi coriónico, amniocitos, biopsias de piel: se extrae el material genético, PCR y secuenciación

- DNA: todo tipo de muestras

- RNA: gen no caracterizado o con muchos exones. Sólo en tejidos que se expresa el gen. Imprescindible para ver mutaciones de splicing. Extracción de RNA, RT-PCR y secuenciación

Exón 11 PAH

Primers para PCR

• 11A: 5’-TGAGAGAAGGGGCACAAATG-3’

• 11B: 5’-GTAGACATTGAGTCCACTCT-3’

AG/GU AGU

EXON EXONYnNYAG/G

UNCURAC

38-18

SITIO 5’ DONADOR DE SPLICING

SITIO 3’ ACEPTOR DE SPLICING

SECUENCIA DE RAMIFICACION

C A A G

EFECTO DE MUTACIONES DE SPLICING

EXON SKIPPING

EFECTO DE MUTACIONES DE SPLICING

RETENCION DE SECUENCIA INTRÓNICA POR UTILIZACION DE SECUENCIA CRIPTICA DE SPLICING

CREACION DE UN SITIO DE SPLICING

In 10Ex 10 Ex 11g t.... ....t t g g g g c c t a c a g

Ex 10 Ex 11

SECUENCIA NORMAL

In 10Ex 10 Ex 11g t... ..... t t a g g g c c t a c a g

Ex 10 Ex 11- ggc cta cag -

SECUENCIA MUTANTE (IVS10nt-11ga)

mRNA NORMAL mRNA MUTANTE

Gly Leu Gln