Uji Bahan Alam Ifa

BAB I

UJI SKRINING DAN AKITIVITAS ANTIMIKROBA DARI BAHAN ALAM

BAB I

PENDAHULUAN

A.Latar Belakang

Di Indonesia terdapat berbagai macam tanaman yang dapat berkhasiat obat, namun, pengolahan dan pengidentifikasian belum dilakukan terhadap semua bahan alam yang tersedia tersebut. Oleh karena itu, sebagai seorang farmasis yang bergerak dalam bidang penyediaan obat-obatan untuk konsumsi consume, bertugas untuk meneliti hal tersebut dan kemudian mengembangkannya menjadi bentuk sediaan yang lebih memudahkan untuk digunakan oleh konsumen.

Untuk mencapai hasil yang telah dibicarakan sebelumnya, maka perlu dilakukan suatu pengujian awal yaitu penapisan atau lebih dikena dengan screening untuk melihat apakah suatu bahan alam yang dianggap memiliki aktivitas antimikroba tersebut aktif terhadap jenis mikroba apa, baik itu jamur atau bakteri. Setelah penapisan diambil suatu kesimpulan yang akan digunakan untuk menguji aktivitas antimikroba bahan alam tersebut dengan metode yang sesuai dan menentukan kemampuan bahan alam tersebut dengan hasil pengamatan yang diperoleh.

Mikroorganisme dapat hidup dimana- mana tidak hanya diruang terbuka atau ruang tertutup. Kehidupan mikroorganisme diruang tertutup lebih mudah dikendalikan dibanding ruang terbuka. Sterilisasi ruangan sangat penting dalam bidang kesehatan, seperti ruang steril untuk bedah, ruang operasi, ruang industri farmasi khusus ruang produksi sediaan steril.

Untuk mengetahui jenis apa saja jenis dari mikroba tersebut maka perlu adanya suatu penelitian atau percobaan di dalam laboratorium. Demikian pula tanaman atau tumbuhan perlu adanya suatu penelitian untuk mengetahui adanya satu khasiat atau beberapa khasiat yang terkandung di dalam suatu tanaman tersebut.

B. Rumusan Masalah

Belum diketahui adanya aktivitas antimikroba dari ekstrak gandaria, ekstrak bandotan, ekstrak daun salam dan ekstrak buah meah.

Pada konsentrasi berapa ekstrak gandaria, ekstrak buah merah, ekstrak daun salam dan ekstrak bandotan.

C. Maksud Percobaan

Untuk melakukan pengujian aktivitas antimikroba pada suatu bahan alam dengan mengunakan metode difusi agar dan KLT-bioatografi.D. Tujuan Percobaan

Untuk menentukan aktivitas antimikroba suatu bahan alam dengan mengunakan metode difusi agar dan KLT- bioatografi

Menentukan aktivitas antimikroba yang terdapat dalam ekstrak gandaria, ekstrak buah merah, ekstrak daun salam dan ekstrak bandotanE. Manfaat Percobaan

Dengan adanya bahan alam yang memiliki aktivitas antimikroba dapat dikembangkan dalam bentuk sediaan yang memudahkan penggunannnya, mengurangi terjadinya efek samping yang tidak diinginkan seperti bahan obat sintetik.BAB II

KAJIAN PUSTAKA

A. TEORI UMUM

Program skrining yang luas direncanakan untuk menemukan bahan yang mungkin efektif dalam pengobatan infeksi yang pada saat ini telah resistensi terhadap bahan kemoterapeutika, maupun untuk memperoleh terapi yang aman dan lebih cepat terhadap suatu infeksi (Djide, 2003).

Kegiatan antibiotika untuk pertama kalinya ditemukan oleh sarjana Inggris dr. Alexander Flemming pada tahun 1928 (penisilin). Tetapi penemuan ini baru diperkembangkan dan dipergunakan dalam terapi di tahun 1941 oleh dr.Florey (Oxford). Kemudian banyak zat lain dengan khasiat antibiotik diisolir oleh penyelidik-penyelidik di seluruh dunia, akan tetapi berhubung dengan sifat toksisnya hanya beberapa saja yang dapat digunakan sebagai obat (Tjay, 2001).

Antimikroba adalah bahan bahan atau obat obat yang digunakan untuk memberantas infeksi oleh mikroorganisme pada manusia. Obat obat yang digunakan untuk membasmi mikroorganisme (mikroba) yang menyebabkan infeksi pada manusia, hewan ataupun tumbuhan harus bersifat toksisitas selektif artinya obat atau zat tersebut harus bersifat sangat toksis terhadap mikroorganisme atau mikroba penyebab penyakit, tetapi relatif tidak toksis terhadap jasad inang atau hospes (Djide, 2003).

Obat-obat antimikroba mempunyai 5 mekanisme kerja utama, antara lain (Djide, 2003) :Bersifat sebagai antimetabolit, antimikroba bekerja dengan cara memblok tahap metabolik spesifik mikroorganisme.

Penghambatan terhadap sintesis dinding sel bakteri, antimikroba golongan ini dapat menghambat aktivitas enzim yang dapat merusak dinding sel mikroorganisme.

Penghambatan fungsi permebilitas membran palsma, disini antimikroba bekerja langsung pada membran sitoplasma yang mempengaruhi permeabilitas dan menyebabkan keluarnya senyawa-senyawa intraseluler mikroorganisme atau bakteridalam hal ini antimikroba dapat : (1). Berinteraksi dengan sterol pada membran sitoplasma pada sel-sel jamur seperti amfoterisin B dan nistatin, (2). Merusak membran sitoplasma sel bakteri gram negatif.

Penghambatan sintesis protein, antimikroba ini mempengaruhi fungsi ribosom pada mikroorganisme yang menyebabkan sintesis protein dan lain-lain. Dalam hal ini dapat :

Berinteraksi dengan ribosom 30s

Berinteraksi dengan ribosom 50s.

Penghambatan asam nukleat. Dalam hal ini antimikroba mempengaruhi metabolisme asam nukleat.

Penggunaan antimikroba yang tepat meliputi pertimbangan kepekaan obat terhadap mikroorganisme pathogen dan beberapa factor lain, termasuk keungkinan efek yang merugikan antara lain toksisitas secara langsung, reaksi alergi, gangguan pada flora normal mikroorganisme. Pada keadaan tertentu dibutuhkan pertimbangan-pertimbangan dalam penggunaan kombinasi obat-obta antimikroba dan penggunaannya untuk profilaktis (Djide, 2003).

Pada mulanya diduga mekanisme aktivitas antimikroba adalah antagonisme kompetitif, tetapi nyatanya antagonisme kompetitif jarang terjadi. Salah satu contoh yang berdasarkan atas kejadian ini ialah sulfonamida yang dapat menggantikan kedudukan Para Amino Benzoic Acid (PABA) yang merupakan metabolit esensial dalam sintesis asam folat. Sulfonamida dalam strukturnya analog dengan PABA dan bersaing dengan PABA menempatkan diri dalam pusat enzim yang aktif, sehingga terbentuk asam folat tetapi mencegah pertumbuhan bakteri (Irianto, 2007).

Kekuatan (potensi) antibiotik yang diproduksi harus disesuaikan dengan International Standart Sample dan Satuan Internasional (International Unit). Pada umumnya suatu contoh baku internasional dari suatu antibiotik mengandung sejumlah antibiotik yang telah dimurnikan secara teliti, baik terhadap kekuatannya maupun keaktifannya (Irianto, 2007).

Ada beberapa cara untuk menentukan kekuatan preparat antibiotik. Penentuan ini biasanya dilakukan dalam Laboratorium Pengontrol dibawah pengawasan instansi pemerintah, misalnya di Amerika dilakukan oleh FDA. Cara-cara penetuan ini biasanya dimuat dalam Farmakope dari tiap negara. Pada pemeriksaan ini semua bahan-bahan yang digunakan, medium pembiakan, organime uji, alat-alat harus menurut ketentuan yang telah dibakukan. Penentuan kekuatan ini dapat dilakukan dengan tujuan sebagai berikut (Irianto, 2007) :

Mengitung daerah penghambatan dalam lempeng agar cdapat menentukan konsentrasi terkecil yang masih dapat menghambat pertumbuhan (Minimal Inhibitory Concentration, MIC)

Penentuan kesensitifan (Sensitivy Test) dari suatu antibiotik terhadap organisme yang belum diketahui. Penentuan ini biasanya dilakukan dilaboratorium rumah sakit, dan penting untuk melakukan terapi.

Untuk mengetahhui konsentrasi antibiotik yang dapat tercapai dalam cairan tubuh atau jaringan.

B. . Uraian Bahan

Air suling (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi:Aqua destillata

Sinonim

: Aquades

RM / BM

: H2O / 18,02

Pemerian : Cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau, tidak berasa.

Kegunaan

: Sebagai pelarut dalam pembuatan medium.

Penyimpanan

: Dalam wadah tertutup baik.

Alkohol (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : Aethanolum

Nama lain: Etanol, alkohol

RM / BM : C2H6O / 46,07

RB : CH3-CH2-OH

Pemerian:Cairan tak berwarna, jernih, mudah menguap dan mudah bergerak, bau khas, rasa panas, mudah terbakar dengan memberikan nyala biru yang tidak berasap.

Kelarutan: Sangat mudah larut dalam air, dalam kloroform P dan dalam eter P.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat

Khasiat : Zat tambahan

Kegunaan : Sebagai Antiseptik

DMSO (Ditjen POM, 1979)

Nama Resmi

: Dimethyl sulfoxide

Nama Sinonim

: DMSO

RM/BM

:C2H6SO/78,128

Rumus Struktur: CH3 SO CH3Pemerian

: Sangat higroskopik, praktis tidak berbau atau berwarna, hampir tidak berasa atau rasa agak manis.

Kelarutan

: Larut dalam air, etanol, aseton, eter, kloroform.

Penyimpanan

: Dalam wadah tertutup rapat

Kegunaan

: Sebagai pelarut.

C. Uraian Bakteri

Bacillus subtilisKlasifikasi (Tjitrosoepomo, 2007)

Kingdom: Plantae

Divisio: Protophyta

Class: Schyzomycetes

Ordo: Eubacteriales

Famili: Basillaceae

Genus: Bacillus

Spesies: Bacillus subtilis

Morfologi

Batang dengan ukuran 1x3,4 nm, dapat tersusun seperti bamboo. Spora sentra, gerak negative. Pada kultur tampak koloni putih abu-abu, tepi seperti rambut, tidak ada hemolisis pada agar darah.2. Pseudomonas aeruginosa Klasifikasi (Garity, 2004)

Kingdom: Protista

Divisio: Protophyta

Classis: Schizomycetes

O r d o: Pseudomonales

Familia: Pseudomonaceae

Genus: Pseudomonas

Spesies: Pseudomonas aeruginosa

Morfologi (Garity, 2004 )

Sel tunggal, batang lurus atau melengkung, namun tidak berbentuk heliks. Pada umumnya berukuran 0,5 1,0 m x 1,5 4,0 m. Motil dengan flagelum polar, monotrikus atau multitrikus. Tidak menghasilkan selongsong prosteka. Tidak dikenal adanya stadium istirahat. Gram negatif. Kemoorganotrof. Metabolisme dengan respirasi, tidak pernah fermentatif. Beberapa merupakan kemilitotrof fakultataif, dapat menggunakan H2 dan CO sebagai sumber energi.

3. Staphylococcus aureus

Klasifikasi (Garity, 2004)

Kingdom : Protista

Phylum : Protophyta

Class : Schyzomycetes

Ordo : Eubacteriales

Famili : Micrococcaceae

Genus : Staphylococcus

Spesies : Staphylococcus aureus Morfologi (Djide, 2005 ) Sel-sel berbentuk bola, berdiameter 0,5 sampai 1,5 m terdapat tunggal dan berpasangan, dan secara khas membelah diri pada lebih dari satu bidang sehingga membentuk gerombol yang tidak teratur. Non motil. Tidak diketahui adanya stadium istirahat. Gram positif. Dinding sel mengandung dua komponen utama : peptidoglikan serta asam tekoat yang berkaitan dengannya. Kemoorganotrof. Metabolisme dengan respirasi dan fermentatif. Anaerob fakultatif, tumbuh lebih cepat dan lebih banyak dalam keadaan aerobik. Suhu optimum 35 400C. Terutama berasosiasi dengan kulit, dan selaput lendir hewan berdarah panas. Pertumbuhan pada medium agar abundant, dan koloninya buram dan tidak tembus cahaya, smooth, dan berkilauan dalam penampakannya. Beberapa Staphylococcus bentuk lipochrome pigmen yang memberikan koloni kuning emas atau kuning lemon dimana yang lainnya tidak dan putih.

4. Salmonella typhosa

- Klasifikasi (Garity, 2004)

Kingdom : Protista

Phylum : Protophyta

Class

: Schyzomycetes

Ordo

: Entero

Famili

: Enterobacteriaceae

Genus

: Salmonella

Spesies : Salmonella typhosaMorfologi (Djidje, 2005)

Batang, biasanya motil dengan flagelum peritrikus, catalse positif. Kebanyakan galur akan tumbuh pada medium sintesis tanpa faktor tumbuh khusus, dan dapat menggunakan sitrat sebagai sumber karbon. Fakultatif anaerob.

5. Candida albicans

- Klasifikasi (Tjitrosoepomo, 2007)Kingdom:Eukariotik

Phylum:Mycophyta

Class:Ascomycetes

Ordo:Saccharomycetes

Famili:

Criptococcaceae

Genus:

Candida

Spesies:

Candida albicans Morfologi

Bentuk selnya bermacam macam. Menghasilkan banyak pseudomisellium. Dapat terbentuk miselium sejati dan klamidiospora. Blastospora dapat dijumpai pada posisi yang khas. Candida dikelompokkan dalam jenis cendawan yang tidak mempunyai tahap seksual, tetapi cendawan tidak sempurna ini tidak sepenuhnya tanpa jenis kelamin, pada cendawan ini juga berlangsung plasmogami, ariogami, dan miosis.

Eschericia coli (garity, 2004)

Klasifikasi

Kingdom:Protista

Divisio

:Schizophyta

Class :Schyzomycetes

Ordo:Eubacteriales

Familia:Enterobacteriaceae

Genus: Eschericia

Spesies:Eschericia coliMorfologi

Merupakan suatu golongan bakteri yang menunjukkan sifat sifat yang mendekati fungi / bakteri. Terdapat dalam tanah maupun dalam udara dan sebagian parasit pada tumbuhan tingkat tinggi. Koloni berwarna (tergantung substraknya), mempunyai bau tanah, resisten terhadap penisilin dan streptomiaStreptococcus mutans (Garity,2004)

Klasifikasi

Kingdom:ProcaryotaDivisio:Scotobacteria

Class

:SchyzomycetesOrdo:EubacterialesFamilia:MicrococcaceaeGenus: StreptococcusSpesies:Streptococcus mutansMorfologi Sel berbentuk bola sampai lonjong, berdiameter kurang dari 2 m, terdapat berpasangan atau dalam rantai bila ditumbuhkan dalam medium cair. Kadang kadang terdapat galur motil dalam kelompok serologis D. Gram positif, kemoorganototrof. Metabolisme fermentatif anaerobik fakultatif.

E. Prosedur Kerja

1. Metode KLT Bioautografi (Natsir djide, 2003)

Lempeng diaktifkan dengan pemanansan dalam oven paa suhu 1000C selama 30 menit sebelum digunakan. Ekstrak etil asetat ekstrak rumput laut Turbinaria sp yang menunjukkan aktivitas yang paling tinggi. Ditotolkan pada lempeng KLT ukuran 2 x 8 cm menunakan pipa kapiler. Lalu dikembangkan dengan menggunakan larutan penembang n-heksan : etil asetat (8 : 2) didalam chamber. Lempeng dikeluarkan dari chamber dan diangin-anginkan hingga cairan pengembannya menguap. Kemudian kromatogram yang dihasilkan diamati nodanya dibawah sinar UV pada panjang gelomban 254 nm dan 366 n, serta penampakan noda H2SO4 10%, diberi tanda yang menghasilkan flouresensi dan dihitung nilai Rf-nya. Hasil identifikasi KLT dengan eluen N-heksan : etil asetat (8 : 2) dilanjutkan dengan Uji KLT-Bioautografi langsung dengan cara media GNA steril sebanyak 10 ml dituang kedalam cawan petri steril, lempeng KLT yang telah dielusi dengan eluen yang cocok diletakkan diatas permukaan medium agar yang telah diinokulasi dengan mikroba uji dan dibiarkan selama 60 menit setelah itu lempeng tersebut diangkat dan dikeluarkan. Selanjutnya media diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam (bakteri) dan 270C selama 72 jam (jamur).

2. Metode difusi agar ( Natsir djide, 2003)

Cara difusi agar berlapis, cara ini merupakan modifikasi dari Kirby-Bauer. Perbedaannya pada cara ini menggunakan dua lapis agar. Lpais pertama (based layer) tidak mengandung mikroba sedangkan lapis kedua (seed layer) mengandung mikroba yang nantinya mengunakan pencadang selanjutnya diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 370C.

BAB III

KAJIAN PRAKTIKUM

Alat Yang Dipakai

Adapun alat yang digunakan pada percobaan ini yaitu Autoklaf, Botol coklat, Botol eluen, Cawan petri , Chamber, enkas, Erlenmeyer, Inkubator, Lampu spiritus, Lampu UV 254 dan UV 366, Pinset, Pipa kapiler, Ose bulat, Rak tabung, Spoit 1 ml, 5 ml, 10 ml, Tabung reaksi, dan vial B. Bahan yang digunakan

Adapun bahan-bahan yang digunakan yaitu air steril, alkohol, biakan Staphylococcus aureus, Salmonella thyposa, Bacillus subtilis, Pseudomonas aureginosa, Streptococcus mutans, E. coli, Candida albicans, DMSO, disk blank, kapas, lempeng KLT, medium glukosa nutrient broth (GNA), medium nutrient agar ( NA), medium pepton dekstrosa agar ( PDA), pelarut metanol, eluen kloroform : metanol (1:1) dan tissue.Cara Keja

Uji S krining

Disiapkan 3 cawan petri, cawan petri 1 dibagi mejadi 2 bagian untuk medium PDA, cawan petri 2 dibagi mejadi 3 bagian dan cawan petri 3 dibagi menjadi 4 bagian untuk medium NA. Dilarutkan 10 mg ekstrak gandaria dengan 0,2 ml DMSO dalam vial. Ditambahkan medium PDA/NA sebanyak 9,8 ml ke dalam vial dan dihomogenkan. Dituang ke dalam cawan petri steril secara aseptis. Dibiarkan hingga memadat. Setelah medium memadat, digoreskan biakan mikroba uji pada masing-masing medium. Diinkubasi pada inkubator selama 1 x 24 jam untuk medium NA dan pada enkas selama 3 x 24 jam untuk medium PDA. Dilakukan pengamatan.

Uji aktivitas antimikrobaa. Metode difusi agarDisiapkan alat dan bahan yang akan digunakan. Dimasukkan medium GNA sebanyak 9,8 ml ke dalam vial. Ditambahkan suspensi biakan mikroba sebanyak satu ose ke dalam vial. Dihomogenkan. Dituang ke dalam cawan petri steril secara aseptis dan dibiarkan setengah memadat. Dimasukkan blank disk ke dalam masing-masing konsentrasi ekstrak etanol yaitu 0,5%, 0,1%, 1%. Dibiarkan beberapa saat agar blank disk cukup menyerap konsentrasi yang diujikan. Diletakkan paper disk tersebut di atas permukaan medium GNA untuk masing-masing konsentrasi ekstrak yaitu 0,5%, 0,1 %, 1 %. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37C selama 1 x 24 jam untuk bakteri dan 3 X 24 jam untuk jamur. Diamati dan diukur zona hambatannya.B. Metode KLT-autobiografiDisiapkan alat dan bahan yang akan digunakan. Dimasukkan medium GNA sebanyak 9,8 ml ke dalam vial. Ditambahkan suspensi biakan mikroba sebanyak satu ose ke dalam vial. Dihomogenkan. Dituang ke dalam cawan petri steril secara aseptis dan dibiarkan setengah memadat. Disiapkan ekstrak gandaria dan dilarutkan dengan beberapa tetes DMSO di dalam vial. Ditotolkan ekstrak pada lempeng KLT, kemudian dielusi dengan eluen n-heksan : etil. Diamati pada lampu UV kemudian Ditempelkan selama 30 menit di atas medium pada cawan perti. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37C selama 1 x 24 jam untuk bakteri dan 3 X 24 jam untuk jamur. Diamati dan diukur zona hambatannya.2. Data (Tabel) Pengamatan

a) Uji Screening

KlpSampelBakteri

SASTE. coliSdPaBsVSPAnCA

IDaun gandaria--+-----+

IIBuah merah--+------

IIIDaun salam -+------+

IV

Daun bandotan-+++----+

Keterangan :

+ : ada pertumbuhan bakteri

- : tidak ada pertumbuhan bakteri

b) Uji Difusi Agar

KelompokkonsentrasiDiameter zona hambatan (mm)

EcBsSaPaStSdCa

IGandaria0,1 %0-0---6

0,5%0-0---6

1%25-32---7

IIBunga merah0,1 %-058---

0,5 %-568---

1 %-569---

IIIDaun salam0,1 %-10--6-0

0,5 %-7,6--7-0

1 %-9--8-8

IVBandotan0,1 %0---8108

0,5 %0---0118

1 %9---0119

Keterangan :

+ : ada pertumbuhan bakteri

- : tidak ada pertumbuhan bakteri

B. Pembahasan

Antimikroba (AM) adalah obat pembasmi mikroba, khususnya mikroba yang merugikan manusia.

Bakteriostatik memiliki kemampuan menghambat perkembangbiakan bakteri perkembangbiakan akan berlangsung lagi bila zat telah tiada. Bakterisid memiliki sifat mematikan bakteri. Kerja bakterisidal berbeda dari bakteriostatis dalam hal tidak dapat dipulihkan lagi, yaitu bakteri yang dimatikan tidak dapat lagi berkembangbiak, meskipun sudah tidak terkena zat itu lagi. Dalam beberapa kasus zat tersebut menyebabkan lisis (melarutnya) sel, dalam kasus lain sel tetap utuh dan bahkan dapat terus aktif secara metabolic.

Praktikum ini dilakukan melalui 3 tahap utama yaitu skrinning dimana merupakan tahap awal dalam praktikum ini, yang dilakukan dengan tujuan untuk melihat apakah ekstrak daun salam, bandotan, gandaria, buah merah dapat menghambat pertumbuhan mikroba atau tidak dan diketahui juga mikroba apa saja yang dihambat pertumbuhannya sehingga dapat diketahui bahwa ekstrak itu mengandung senyawa antimikroba yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba.Yang kedua adalah Biotografi KLT dengan cara melihat senyawa yang terkandung didalam tanaman tersebut dan yang ketiga dengan metode difusi agar metode yang dilakukan dengan melihat konsentrasi berapa mikroorganisme tersebut dihambat oleh tanaman tersebut.Adapun cara kerja dari praktikum ini adalah pada uji skrining ekstrak daun salam dilarutkan dalam vial menggunakan pelarut DMSO sebanyak 0,2 ml karena DMSO merupakan pelarut yang bersifat semi polar dengan adanya 2 gugus metal (CH3) pada DMSO ini membuat pelarut ini bersifat nonpolar. Dimana diketahui bahwa semakin banyak rantai C maka akan semakin nonpolar. Gugus metil ini akan berikatan dengan ekstrak bahan alam selanjutnya gugus sulfoksida yang bersifat polar karena berikatan rangkap akan melepaskan electron bebas yang terdapat pada gugus ini akan memperbaiki kelarutan ekstrak dari bahan alam. Selanjutnya ditambahkan medium NA sebanyak 9,8 ml dan dihomogenkan untuk NA bakteri dan PDA untuk jamur . Campuran tersebut dimasukkan dalam cawan petri steril, dan didiamkan hingga memadat. Dimasukkan biakan bakteri kedalam cawan petri sebanyak satu ose dengan digoreskan kepermukaan medium sesuai dengan pembagiannya. Diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 37oC untuk bakteri dan 3 x 24 jam pada suhu 25o C untuk jamur.

Pada uji aktivitas antimikroba dengan metode KLT bioautografi, mula-mula sampel atau ekstrak diencerkan dengan eluen Kloroform : Methanol (1 :1) sampai encer karena apabila tidak encer maka noda yang akan nampak adalah noda yang berekor. Lalu di totolkan pada lempeng dengan menggunakan pipa kapiler, kemudian di elusi dalam chamber dengan eluen n-Heksan : Etil asetat (4 : 1) sampai batas elusi. Eluen n-Heksan : Etilasetat yang dipilih karena noda tampak jelas pada lempeng dengan menggunakan eluen ini setelah dilihat pada lampu UV. Di usahakan pada chamber atau alat-alat yang digunakan tidak mengandung air karena akan terjadi hidrolisis antara air dan eluen. Medium NA seanyak 10 ml dimasukkan kedalam botol vial dan ditambahkan biakan bakteri sebanyak 1 ose dan dihomogenkan dan dipindahkan dalam cawan petri steril, dibiarkan memadat. Lempeng yang telah di elusi dilihat pada lampu UV untuk melihat noda yang ada pada lempeng, setelah itu dimasukkan dalam cawan petri dengan ujung di lipat agar memudahkan pada saat pengambilan lempeng. Kemudian lempeng dirapatkan atau ditekan-tekan, dibiarkan selama 30 menit, dan lempeng di ambil, lalu di inkubasi selama 1 X 24 jam pada suhu 37oC. Lempeng dibiarkan selama 30 menit pada medium GNA agar noda yang terdapat pada lempeng dapat berdifusi pada medium. Pada percobaan ini menggunakan medium GNA karena medium ini bagus untuk pertumbuhan bakteri maupun jamur.

Untuk metode difusi agar, medium GNA sebanyak 9,8 ml dimasukkan ke dalam vial. Ditambahkan suspensi biakan Bacillus subtilis sebanyak satu ose ke dalam vial. Dihomogenkan. Dituang ke dalam cawan petri steril secara aseptis dan dibiarkan setengah memadat. Dimasukkan paper disk ke dalam masing-masing konsentrasi ekstrak etanol yaitu 0,5%, 1%, 1,5%. Dibiarkan beberapa saat agar paper disk cukup menyerap konsentrasi yang diujikan. Diletakkan paper disk tersebut di atas permukaan medium GNA untuk masing-masing konsentrasi ekstrak yaitu 0,5%, 1 %, 1,5 %. Diulangi perlakuan di atas dengan menggunakan suspensi biakan bakteri Staphylococcus aureus dan jamur Candida albiccans. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37C selama 1 x 24 jam untuk bakteri dan pada enkas dengan suhu 25oC selama 3x24 jam untuk jamur. Diamati dan diukur zona hambatannya.Berdasarkan praktikum yang dilakukan diperoleh data untuk Gandaria nilai FK 658,777 dan jumlah kuadrat totalnya 1111,223, Buah merah nilai FK 300,444 dan jumlah kuadrat totalnya -24,44, Daun Salam nilai FK 343,484 dan jumlah kuadrat totalnya 108,276, dan nilai Fk Bandotan 456,333 dan jumlah kuadrat totalnya 239,67.

BAB V

PENUTUP

A. Kesimpulan

Berdasarkan percobaan yang dilakukan diperoleh bahwa hasil uji aktivitas dengan metode difusi agar pada Ekstrak metanol gandaria, ekstrak daun salam, ekstrak buah merah dan ekstrak bandotan memiliki daya aktivitas antimikroba yang baik.

B. Saran

Sebaiknya alat dan bahan yang ada dalam laboratorium d tambah.

DAFTAR PUSTAKA

Dirjen POM, 1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Departemen Kesehatan RI. Jakarta.

Djide, Natsir dkk. 2003. Mikrobiologi Farmasi. Universitas Hasanuddin. Makassar.

Djide, Natsir, 2005. Analisis Mikrobiologi Farmasi, Laboratorium Mikrobiologi Farmasi, Jurusan Farmasi Universitas Hasanuddin, Makassar.

Irianto, Koes., 2007. Mikrobiologi Mengenai Dunia Mikroorganisme, Wyrama Wydia, Bandung.

Pelczar, Michael, J., dan E.C.S. Chan, 1986, Dasar-dasar Mikrobiologi I, UI Press, Jakarta.

Tjay ., Tan Hoan, Rahardja.,2001, Obat-obat Penting, Edisi V, PT Elex Media Komputindo, Jakarta.

Skema Kerja

Uji Skrining

DMSO

Medium NA

9,5 ml

I 0,2 (L II

Ekstrak @ 10 g

1 ose

1 ose

EC SA ST

SM PA VC CA

Diinkubasi pada suhu 37C selama 1 x 24 jam

Diamati bakteri yang positif maka dilanjutkan pada uji aktivitas antimikroba bahan alam

Keterangan :

EC= Escherichia coli

PA= Pseudomonas aeruginosa

SA= Staphylococcus aureus

VC= Vibrio choleraST= Salmonella thyposa

CA= Candida albicans

SM= Streptococcus mutans

Uji Aktivitas Antimikroba

Suspensi biakan bakteri

Medium NA (Nutrient Agar)

I

II

0,2 (l

10

Cawan petri steril


Diamati dan diukur zona hambatan

Pengolahan daMetode KLT Bioautografi

Suspensi biakan bakteri

Medium NA (Nutrient Agar)

I

II

0,2 (l

10

Ditotol dibiarkan

Berdifusi

IV

dibiarkan setengah memadat

III

Ekstrak

Cawan petri steril


Diamati dan diukur nilai Rf-nya

PERHITUNGAN

KELOMPOK 1 ( daun gandaria )

BAKTERIDIAMETER ZONA HAMBATAN (mm)JUMLAHRATA-RATA

0,1 %0,5 %%

E.coli0025258,3

SA00323210,7

CA667196,3

JUMLAH66647625,3

RATA-RATA3321,3

A. Perhitungan Faktor Koreksi (FK)

((Y)2

FK =

r.p

762

=

3.3

5776

=

9

= 641,8

B. Perhitungan Jumlah Kuadrat (JK)

JK Total= ( 02 + 02 + 252 + 02 + 02 + 322 + 62 + 62 + 72) FK

= (0 + 0 + 625 + 0 + 0 + 1024 + 36 + 36 + 49 ) 641,8

= 1770-641,8

= 1128,2

JK Perlakuan = 62 +62 +642 - FK

3

= 36 + 36 + 4096 641,8

3

= 1437,3 - 641,8

3

= 479- 641,8

= 162,8

JK Kelompok= 252 +322 +192 - FK

3

= 625 + 1024 + 361 641,8

3

= 1769,3 641,8

3

= 375,8

JK Galat= JKT JKP - JKK

= 1128,2-162,8-375,8

= 589,6

C. Perhitungan Derajat Bebas (DB)

DB Total

= 9-1

= 8

DB Perlakuan = 3-1

= 2

DB Kelompok = 3-1

= 2

DB Galat

= 8-2-2

= 4

D. Perhitungan Kuadrat Tengah ( KT )

KT Perlakuan= JKP

DBP

= 162,8

2

= 81,4

KT Kelompok= JKK

DBK

= 375,8

2

= 187.9

KT Galat = JKG

DBG

= 589,6

4

= 147,4

KELOMPOK 4 (bandotan )


0,1 %0,5 %1 %

E.coli00993

St80082,7

Sd1011113210,7

CA899268,7

JUMLAH2620297525,1

RATA-RATA6,557,3


((Y)2

FK =

r.p

752

=

3.4

5625

=

12

= 468,75


JK Total = ( 02 + 02 + 92 + 82 + 02 + 02 + 102 +112 + 112 + 82 + 82 + 92 ) FK

= (0 + 0 + 81 + 64 + 0 + 0 + 100 + 121 + 121 + 64+ 64 + 81 ) 468,75

= 696 468,75

= 227,3

JK Perlakuan = 262 +202 +292 - FK

4

= 676 + 400 + 841 468,75

4

= 1917 - 468,75

4

= 479,3-468,75

= 10,6

JK Kelompok= 92 +82 +322 + 262 - FK

3

=81 + 64 +1024 + 676 468,75

3

= 1845-468,75

3

= 615-468,75

= 146,3


= 227,3-10,6-146,3

= 70,4


DB Total

= 9-1

= 8

DB Perlakuan = 3-1

= 2

DB Kelompok = 4-1

= 3

DB Galat

= 8-2-3

= 3


KT Perlakuan= JKP

DBP

= 10,6

2

= 5,3

KT Kelompok= JKK

DBK

=146,3

3

= 48,7

KT Galat = JKG

DBG

= 70 4

3

= 23,5

KELOMPOK 3 (daun salam )


0,1 %0,5 %1 %

ST678217

CA00882,7

Bs107,6926,68,9

JUMLAH1614,62555,618,6

RATA-RATA8

8,6

8,3


((Y)2

FK =

r.p

55,62

=

3.3

3091.4

=

9

= 343,5


JK Total = ( 102 + 7,62 + 92 + 62 + 72 + 82 + 02 + 02 + 82) FK

= (100 + 57,76 + 81 + 36 + 49 + 64+ 0 + 0 + 64) 343,5

= 451,76-343,5

= 108,26

JK Perlakuan = 212 +82 +26,62 - FK

3

= 441 + 64 + 707,56 343,5

3

= 1212,56 - 343,5

3

= 404,2 343,5

= 60,7

JK Kelompok= 162 +14,62 +252 - FK

3

=256 + 213,16 + 625 - ,343,5

3

= 1094, 2 - 343.5

3

= 364,7-343,5

= 21,2


= 108,26-60,7-21,2

= 26,36


DB Total

= 9-1

= 8

DB Perlakuan = 3-1

= 2

DB Kelompok = 3-1

= 2

DB Galat

= 8-2-2

= 4


KT Perlakuan= JKP

DBP

= 60,7

2

= 30,35

KT Kelompok= JKK

DBK

= 21,2

2

= 10,6

KT Galat = JKG

DBG

= 26,36

4

= 6,59

KELOMPOK 2 (bunga merah)


0,1 %0,5 %1 %

Bs055103,3

Sa566175,7

PA889258,3

JUMLAH1319205217,3

RATA-RATA4,36,36,7


((Y)2

FK =

r.p

522

=

3.3

2704

=

9

= 300,4


JK Total = ( 02 + 52 + 52 + 52 + 62 + 62 + 82 + 82 + 92) FK

= (0 + 25 + 25 + 25 + 36 + 36+ 64 + 64 + 81) 300,4

= 356-300,4

= 55,6

JK Perlakuan = 102 +172 +252 - FK

3

= 100 + 289 + 625 300,4

3

= 1014 - 300,4

3

= 338- 300,4

= 37,6

JK Kelompok= 132 +192 +202 - FK

3

= 169 + 361+ 400 - 300,4

3

=930 - 300,4

3

= 310-300,4

= 9,6


= 55,6-33,6-9,6

= 12,4


DB Total

= 9-1

= 8

DB Perlakuan = 3-1

= 2

DB Kelompok = 3-1

= 2

DB Galat

= 8-2-2

= 4


KT Perlakuan= JKP

DBP

= 33,6

2

= 16,8

KT Kelompok= JKK

DBK

= 9,6

2

= 4,8

KT Galat = JKG

DBG

= 12,4

4

= 3,1

LAMPIRAN

KOMPOSISI

1.Medium GNA (Glukosa Nutrien Agar)

Peptone5,0 g

Ekstrak beef 3,0 g

Agar 15 g

Glukosa10,0 g

Aquadest 1000 ml

2.Medium NA (Nutrien Agar)

Ekstrak daging3 g

Pepton5 g

Agar

20 g

Aquadestad 100 ml

IVA MUKRIMA ULFAH CHAERANY PAJRAH S, FARM

150 209 293

Documents

Uji Bahan Alam Ifa