BAB II

PERENCANAAN

1. Jenis bahan pangan yang akan dianalisis adalah cumi-cumi bakar

2. Standar mutu mikrobiologi cumi-cumi berdasarkan SNI.

Acuan SNI : Cumi-cumi ,

No SNI : SNI 2719.3:2011

Tabel 1. Data SNI batas cemaran mikroba cumi-cumi bakar.

No Kriteria Uji Satuan Persyaratan

1 ALT Koloni/g Maksimal 1 x 10 5

2 Escherichia coli APM/g <3

3 Salmonella * Per 25 g Negatif

4 Vibrio Cholerae* Per 25 g Negatif

5 Staphylococcus aureus* Koloni/g Maksimal 1,0 x 10 3

6 Kapang Koloni 0

7 Air % Maksimal 20

8 Garam % Maksimal 15

9 Abu total % 17

10 Abu tak larut asam % 0,3

11 Merkuri (Hg)* Mg/kg Maksimal 0,5

12 Kadmium (Cd)* Mg/kg Maksimal 0,1

13 Timbal (Pb) * Mg/kg Maksimal 0,3

Catatan : * bila diperlukan

3. Lokasi pengambilan contoh

NO Lokasi Waktu tempuh

antara lokasi dan

laboratorium

Penanganan

1 Mie Yogya 10 Menit Dikemas dengan

steroform

2 Mbah Jingkrak 10 Menit Dikemas dengan

steroform

3 Dapur geulis 5 Menit Dikemas dengan

steroform

4 Sea Food Taken 15 Menit Dikemas dengan

steroform

5 Bumbu desa 15 menit Dikemas dengan

steroform

4. Analisis kualitatif dan kuantitatif yang dilakukan.

Tabel 3. Data uji kuantitatif

NO UJI

1 Uji total mikroba

2 Uji koliform

3 Uji kapang khamir

Tabel.3.1 Uji kualitatif

Prosedur

pembuatan Ekstrak Cumi

Cumi di potong-potong dimasukan kedalam blender ,kemudian di blender hingga

halus. Setelah halus ekstrak disaring dengan menggunakan kain saring , agar sisa

sisa cumi yang berukuran besar dapat tersaring. Karena dapat mengganggu proses

pengenceran. Setelah proses penyaringan maka ekstrak pun dapat digunakan

untuk uji lebih lanjut.

NO Uji

1 Uji Proteolitik

2 Uji Lipolitik

3 Uji salmonella

4.1 Uji total mikroba :

20 ml sampel

1 ml

SMA

80 ml larutan pengencer

100

10-1

10-2

10-3

1 ml 1 ml 1 ml

9 ml 9 ml 9 ml

0,1 ml 10

-4

{ PCA

9 ml

10-2

10-5

{

VJA {

APDA

Inkubasi selama 2 hari 37o C dalam keadaan terbalik

Analisis Jumlah koloni

Tabel 5. Data hasil analisis hitung cawan

Tingkat

pengenceran

10 -1

10 -2

10 -3

10-4

10-5

Tabel 6. Alat dan bahan yang dibutuhkan untuk uji total mikroba .

No Nama alat Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Ulangan 4 Jumlah

1 Cawan Petri Total

mikroba :

15 x 5 =

75 total

kapang

khamir :

15 x 5 =

75 Total

S.aureus :

15 x 5 =

75

Total

mikroba :

15 x 5 =

75 total

kapang

khamir :

15 x 5 =

75 Total

S.aureus :

15 x 5 =

75

Total

mikroba :

15 x 5 =

75 total

kapang

khamir :

15 x 5 =

75 Total

S.aureus :

15 x 5 =

75

Total

mikroba :

15 x 5 =

75 total

kapang

khamir :

15 x 5 =

75 Total

S.aureus :

15 x 5 =

75

300 Buah

300 Buah

300 Buah

2 Erlenmeyer

larutan

pengenceran

(100 ml).

Total

mikroba :

1 x 5 = 5

total

kapang

khamir : 1

x 5 = 5

Total

S.aureus :

1 x 5=5

Total

mikroba :

1 x 5 = 5

total

kapang

khamir : 1

x 5 = 5

Total

S.aureus :

1 x 5=5

Total

mikroba :

1 x 5 = 5

total

kapang

khamir : 1

x 5 = 5

Total

S.aureus :

1 x 5=5

Total

mikroba :

1 x 5 = 5

total

kapang

khamir : 1

x 5 = 5

Total

S.aureus :

1 x 5=5

20 Buah

20 Buah

20 Buah

3 Gelas Ukur Total Total Total Total 20 Buah

100 ml mikroba :

1 x 5 = 5

Total

kapang

khamir :

1 x 5

Total

E.coli :

1 x 5

mikroba :

1 x 5 = 5

Total

kapang

khamir :

1 x 5

Total

E.coli :

1 x 5

mikroba :

1 x 5 = 5

Total

kapang

khamir :

1 x 5

Total

E.coli :

1 x 5

mikroba :

1 x 5 = 5

Total

kapang

khamir :

1 x 5

Total

E.coli :

1 x 5

20 Buah

20 Buah

4 Tabung reaksi

*

Total

Mikroba :

4 x 5 = 20

Total

kapang

khamir ;

4 x 5 =20

Total

E.coli :

4 x 5 = 20

Total

Mikroba :

4 x 5 = 20

Total

kapang

khamir ;

4 x 5 =20

Total

E.coli :

4 x 5 = 20

Total

Mikroba :

4 x 5 = 20

Total

kapang

khamir ;

4 x 5 =20

Total

E.coli :

4 x 5 = 20

Total

Mikroba :

4 x 5 = 20

Total

kapang

khamir ;

4 x 5 =20

Total

E.coli :

4 x 5 = 20

80 buah

80 buah

80 buah

5 Pipet mohr

1ml *

Total

Mikroba :

1

Total

kapang

khamir ;

1

Total

E.coli :

1

Total

Mikroba :

1

Total

kapang

khamir ;

1

Total

E.coli :

1

Total

Mikroba :

1

Total

kapang

khamir ;

1

Total

E.coli :

1

Total

Mikroba :

1

Total

kapang

khamir ;

1

Total

E.coli :

1

4 buah

4 buah

4 buah

6 Pipet mohr 10

ml *

3 ulangan x 5 produk = 15 buah 15 buah

1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml

9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

Na +1 % + 1 tetes NR

Inkubasi 30o C, 2 hari

Amati dan hitung (jika atas putih bawah merah =

ditumbuhi bakteri lipolitik)

Tabel 6.1 Kebutuhan Alat pada Uji Kualitatif

No Alat Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

Ulangan

4

Jumlah

1 Cawan 2 x 5 =10 2 x 5 =10 2 x 5 =10 2 x 5 =10 40 buah

Tabel 6.2 Kebutuhan bahan Uji kualitatif

No Bahan Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

Ulangan

4

Jumlah

1 SMA 15 x 2 x

5 = 150

ml

15 x 2 x

5 = 150

ml

15 x 2 x

5 = 150

ml

15 x 2 x

5 = 150

ml

600 ml

100 ml

larutan

pengencer

4.2 Uji Coliform :

50 ml sampel

1 ml 1 ml

1 ml

1 ml

1 ml 0,1 ml

100

1 ml

10-1

1 ml

10-2

1 ml

Uji Penduga

Media : BGLBB

Positif (gas) Negatif

Tabel 7. Alat dan Bahan Uji Penduga Koliform

1. Alat

No Nama Alat Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

Ulangan

4

Jumlah

1 Tabung

reaksi *

9 tabung

x 5

9 tabung

x 5

9 tabung

x 5

9 tabung

x 5

135

Buah

Inkubasi selama 24 Jam dengan suhu 37o C

Gores 1 ose dari tabung positif

pada media EMBA beku

Uji Penguat

negatif

positif

Inokulasi

dalam LB

Gores radian pada

media NA

Uji Lengkap

Inkubasi 24 jam suhu 37o C

Pewarnaan Gram

sampel =

45

sampel =

45

sampel =

45

sampel =

45

2 Erlenmeyer

larutan

pengencer

(100 ml)

1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 20 buah

3 Gelas Ukur

100 ml

1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 20 buah

4 Pipet mohr

1 ml *

1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 20 buah

5 Tabung

durham

9 tabung

x 5

sampel =

45

9 tabung

x 5

sampel =

45

9 tabung

x 5

sampel =

45

9 tabung

x 5

sampel =

45

135

Buah

6 Pipet mohr

10 ml

4 ulangan x 5 produk : 20 20 buah

7 Bunsen 1 buah 1 buah

8 Autoclave 1 buah 1 buah

9 Inkubator 1 buah 1 buah

2. Bahan

N

o

Nama

Bahan

Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Ulangan 4 Jumla

h

1 LB 9 tabung x 9

ml x 5

sampel :

405 ml

9 tabung x 9

ml x 5

sampel :

405 ml

9 tabung x 9

ml x 5

sampel :

405 ml

9 tabung x 9

ml x 5

sampel :

405 ml

1620

ml

2 Larutan

Pengenc

er

100 x 5 =

500 ml

100 x 5 =

500 ml

100 x 5 =

500 ml

100 x 5 =

500 ml

2000

ml

3 NaCl

17 gr

Tabel 8. Data hasil uji penguat

Koliform Fekal Koliform non fekal

Tabel 9. Alat dan bahan uji penguat

1. Alat

No Nama Alat Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

Ulangan

4

Jumlah

1 Cawan

Petri

2 buah 2 buah 2 buah 2 buah 8 buah

2 Jarum ose 1 1 1 1 4 buah

3 Bunsen 1 1 1 1 4 buah

4 Autoclave 1 buah 1 buah

5 Inkubator 1 buah 1 buah

Bahan

No Nama

Bahan

Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

Ulangan

4

Jumlah

1 EMBA 2 buah x

5 sampel :

10

2 buah x

5 sampel :

10

2 buah x

5 sampel :

10

2 buah x

5 sampel :

10

40

Tabel 10. Tabel Alat Uji Pelengkap

No Nama Alat Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

Ulangan

4

Jumlah

1 Cawan

Petri

5 sampel 5 sampel 5 sampel 5 sampel 20 buah

2 Jarum ose 1 1 1 1 4 buah

3 Bunsen 1 1 1 1 4 buah

4 Tabung

reaksi

1 buah x

5 sampel

= 5 buah

1 buah x

5 sampel

= 5 buah

1 buah x

5 sampel

= 5 buah

1 buah x

5 sampel

= 5 buah

20 buah

5 Tabung

Durham

1 buah x

5 sampel

= 5 buah

1 buah x

5 sampel

= 5 buah

1 buah x

5 sampel

= 5 buah

1 buah x

5 sampel

= 5 buah

20 buah

6 Autoclave 1 buah 1 buah

7 Inkubator 1 buah 1 buah

Tabel 11. Tabel bahan uji pelengkap

No Nama

Bahan

Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Ulangan 4 Jumlah

1 NA 1 cawan x

15 ml x 5

= 75 ml

1 cawan x

15 ml x 5

= 75 ml

1 cawan x

15 ml x 5

= 75 ml

1 cawan x

15 ml x 5

= 75 ml

300 ml

2 LB 1 tabung

x 5

sampel x

9 ml : 45

ml

1 tabung

x 5

sampel x

9 ml : 45

ml

1 tabung

x 5

sampel x

9 ml : 45

ml

1 tabung

x 5

sampel x

9 ml : 45

ml

180 ml

Kendala yang dihadapi dan alternatif solusinya

Kendala kendala yang mungkin dihadapi pada praktikum ini adalah

keterbatasan alat. Keterbatasan alat ini dikarenakan penggunaan alat dilakukan

secara bersamaan dengan Program Keahlian lain yang melakukan pengamatan

terhadap mikroba. Hal ini dapat diatasi dengan cara meminimalkan penggunaan

alat-alat tersebut , dengan cara merinci peralatan pada setiap metode praktikum

yang dilakukan. Selain itu keterbatasan alat pun bisa terjadi karena penggunaan

nya bersamaan dengan kelompok yang lain sehingga harus saling tunggu untuk

menggunakan alat tersebut. Hal ini tidak efektif dikarenakan waktu yang terbuang

cukup lama. Jenis sampel yang digunakan oleh kelompok 3 adalah cumi cumi

bakar , dimana penanganannya cukup terbilang sederhana karena jarak

pengambilan sampel ini dari ruang laboratorium ke restaurant tidak memakan

waktu terlalu lama. Pembagian waktu kerja juga menjadi salah satu kendala

dikarenakan banyak nya analisis yang dilakukan pada satu hari tersebut. Selain itu

kemampuan praktikan pun menjadi salah satu kendala lainnya. Untuk itu sebelum

praktikum praktikan harus mengerti tentang metode praktikum yang akan

dilakukan.

UJI IMVIC

Koloni fekal Sebagai kontrol

Kultur murni E. coli

1 koloni

10 ml 10 ml 10

ml

2 ml larfis TB Koser sitrat MRVP

10 ml 10 ml 10 ml

TB Koser Sitrat MRVP

Uji IMVIC

Uji Medium Pereaksi Reduksi Positif

Indol Tryptone Broth Konvacs Merah

Merah metil MRVP Merah metal Merah

Voges proskauer MRVP 5% naftol dan

40% KOH

Warna merah tua

Sitrat Koser sitrat - Timbulnya

kekeruhan

Tabel 12 . Kebutuhan Bahan Uji IMVIC

No Nama

Bahan

Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Ulangan 4 Jumlah

1 Tryothone

broth

9 x 5 = 45

9 x 5 = 45

9 x 5 = 45

9 x 5 = 45

2 g

2 MRVP 9 x 4 x 5 =

180 ~200

9 x 4 x 5

= 180

~200

9 x 4 x 5

= 180

~200

9 x 4 x 5

= 180

~200

13.6 g

3 Koser

sitrat

1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 1 x 5 = 5 20 ml

4 Reagen

kovacks

1 Botol 1 Botol

5 Merah

metil

1 Botol 1 Botol

6 40 %

KOH

1 Botol 1 Botol

7 5 %

Naftol

1 Botol 1 Botol

Kebutuhan Alat Uji IMVIC

No Nama Alat Ulangan Ulangan Ulangan Ulangan Jumlah

1 2 3 4

1 Tabung

reaksi untuk

sampel

8 x 5

sampel :

40

8 x 5

sampel :

40

8 x 5

sampel :

40

8 x 5

sampel :

40

160

2 Tabung

reaksi untuk

pengenceran

sampel

1 1 1 1 4 buah

3 Tabung

reaksi untuk

Kontrol

1 1 1 1 4 buah

4 Jarum Ose 1 1 1 1 4 buah

5 Bunsen 1 1 1 1 4 buah

6 Autoclave 1 buah 1 buah

7 Inkubator 1 buah 1 buah

Uji Salmonnella

PRA ENRICHMEN

Homogenisasi

25 g/25 ml contoh dalam 225 ml Lactose Broth

Inkubasi 24 jam 2 jam, 35o C 1

o C

ENRICHMEN

1 ml 1 ml

9 ml

SCB 9 ml

TTB

Inkubasi 24

jam 2 jam,

35o C 1

o C

HE XLD BSA HE XLD BSA

Inkubasi 24 jam 2 jam, 35o C 1

o C

Ambil 2 atau lebih koloni terduga pada media agar selektif, gores

dan tusuk kedalam media agar miring.

TSI LIA

Inkubasi 24

jam 2 jam,

35o C 1

o C

Identifikasi

Tabel 6.3 Kebutuhan alat uji Salmonella

No Nama Alat Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

Ulangan

4

Jumlah

1 Tabung

Reaksi

4 x 5 =

20

4 x 5 =

20

4 x 5 =

20

4 x 5 =

20

80 buah

2 Cawan

Petri

6 x 5 =

30

6 x 5 =

30

6 x 5 =

30

6 x 5 =

30

120 buah

3 Erlenmeyer 1 1 1 1 5 buah

Tabel 6.4 Kebutuhan bahan uji Salmonella

No Nama

bahan

Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

Ulangan

4

Jumlah

1 TTB 1 x 5 x 9

= 45 ml ~

50

1 x 5 x 9

= 45 ml ~

50

1 x 5 x 9

= 45 ml ~

50

1 x 5 x 9

= 45 ml ~

50

2 g

2 SCB 5 x 9 =

45 ~50

ml

5 x 9 =

45 ~50

ml

5 x 9 =

45 ~50

ml

5 x 9 =

45 ~50

ml

200 ml

3 HE 5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

300 ml

4 XLD 5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

300 ml

5 BSA 5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

300 ml

6 TSI 5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

5 x 15 =

75

300 ml

TTB : Tetrathionat broth

BSA : Bismuth Sulfite Agar

HE :Hecton Enterik

SCB : Selenity Cystine Broth

XLD : Xylose Lysine Desoxycholate

TSI : Triple Sugar Iron