Direktni preparati

Izolacija i identifikacija uzročnika Molekularne i imunološke metode

Prve indicije da li prisutan infektivni agens

tinktorijalne i morfološke osobine mikroorganizma –izbor terapije i pre same izolacije uzročnika

Najmanje 104 uzročnika u ml/gr da bi se lako ustanovili na mikroskopskom preparatu

Primer – urin – pronalaženje jedne bakterije u vidnom polju – 105-106 bakterija u 1 ml

Bojenje po Gramu – utvrđuje se oblik, građa ćelijskog zida

Romanovski top bojenja – bojenje po Wright-u ili

Giemsa-i – prirodan izgled preparata – uočavanje svih ćelija koje se nalaze na mestu infekcije

Gnoj – mnoge vrste - Staphylococcus aureus,

Streptococcus spp, Trueperella pyogenes,

Corynebacterium pseudotuberculosis,

Enterotoksemija – preparat tanka creva telad i jagnjad

- Clostridium perfringens

Campylobacter fetus – abortusi, sterilitet ovce i krave

– vaginalni iscedak ili sadržaj stomaka fetusa

Dezenterija svinja – feces ili skarifikat kolona –Brachyspira hyodysenteriae

Brucella spp., Nocardia asteroides, Chlamydophila

abortus, Chlamydophila pecorum, Chlamydophila felis

Mycobacterium bovis , Mycobacterium avium ,

Mycobacterium lepraemurium , Mycobacterium avium

subspecies paratuberculosis

Bacillus anthracis, Mycoplasma haemofelis, Borrelia

anserina, Dermatophilus congolensis

Bacillus anthracis

Leptospira spp, Microsporum i Trichophyton spp,

Aspergillus fumigatus,Candida albicans

Selektivne podloge

Diferencijalne podloge

MacConkey agar

Manitol slani agar

Podloge za obogaćenje Specijalne podloge

Podloge sa hromogenima

Actinomyces bovis

Bacteroides species

Clostridium species

Actinobaculum suis

Fusobacterium species

Peptoniphilus species

Brachyspira hyodysenteriae.

Actinobacillus pleuropneumoniae

Actinomyces viscosus

Brucella species

Campylobacter jejuni i C. fetus(optimalno 6% O2, 10% CO2, 84% N2)

Dermatophilus congolensis

Francisella tularensis

Haemophilus species

Histophilus species

Taylorella equigenitalis

Actinobacillus pleuropneumoniae, Brucella spp, Campylobacter spp. i Haemophilus spp. kao kapnofilizahtevaju prisustvo 5-10% CO2

Clostridium spp, Bacteroides spp, Fusobacterium spp i Serpulina hyodysenteriae kao anaerobnimikroorganizmi odsustvo O2.

Određenu temperaturu Campylobacter jejuni, Serpulina hyodysenteriae od 42 oC

Leptospira spp. od 28-30 oC

Listeria monocytogenes i Yersinia spp. od 4oC kod hladnogobogaćivanja

Okom vidljiva formacija nastala od jedne bakterije

24-48 h – većina brzo rastućih vrsta 48-72 h - većina brzo rastućih vrsta na selektivnim podlogama • 4–6 days:

Brucella species

Campylobacter species

Nocardia asteroides

Mycoplasma species

Atipične mycobacteria

• 2–3 nedelje većina vrsta dermatofita (T. verrucosum do 5 nedelja) i Mycobacterium avium

• 3–8 nedelje Mycobacterium bovis

• 4–16 nedelje Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis

10-2

10-510-4

10-3

Utvrđivanje relativnog broja mikroorganizama olakšava interpretaciju.

Velika razlika 1-2 kolonije ili veliki broj

Obogaćivanje pre zasejavanja na podloge nije obično neophodno.

Citološki nalaz – izolacija čak i većeg broja mikroorganizama bez inflamacije ne ukazuje na infekciju

Izuzetak infekcije prouzrokovane sa Cryptococcus spp.

Morfološki izgled na mikroskopskom preparatu

Tintorijelne osobine - sposobnost bojenja

Uslovi kultivisanja

Izgled kolonija na hranljivim podlogama

Fiziološke i biohemijske karakteristike

Antigenska građu

Patogena svojstva

Bojenje po Gram-u – oblik i primanje boje

Rast ili odsustvo rasta na MacConkey agaru

Katalaza i oksidaza test

Pokretljivost

Oksidativno fermentacioni (O-F) test – podloga po

Hugh i Leifson-u

Bojenje po Gram-u

LANA test L-alanine-4-nitroanilide

Test sa 3% KOH

Osetljivost na vancomycin

Rast ili odsustvo rasta na MacConkey agaru

Katalaza i oksidaza test

Pokretljivost

Oksidativno fermentacioni (O-F) test – podloga po

Hugh i Leifson-u

Zbog posedovanja različitih enzima bakterije se

odlikuju određenim metaboličkim profilom

Ispitivanje njihovih fizoloških i biohemijskih osobina

obezbeđuje preciznu identifikaciju vrste

mikroorganizama