Validation technique du CS-2100i de chez Sysmex (Siemens) · Key words: CS-2100i, CA-1500, mini VIDAS, hemostasis, validation, PT, aPTT, fibrinogen, D-dimer . Jessica Gilliard Travail

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Validation technique du CS-2100i de chez

Sysmex (Siemens)

Jessica Gilliard

Essante 55ème

TAB

Travail effectué au laboratoire ICH de Martigny

Sous la supervision de Madame Gianinetti

11.04.2016

Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase

Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny

1

Résumé

Les analyses d’hémostase sont d’une importance capitale pour le suivi des traitements

anticoagulants, pour les bilans préopératoires et pour la détection de troubles de la

coagulation.

Le laboratoire médical de Martigny a reçu pour validation un nouvel appareil d’hémostase, le

CS-2100i de Siemens. Cette validation a été effectuée pour quatre paramètres: le Temps de

Prothrombine (TP), le Temps de Prothrombine Partiel activé (aPTT), le taux de fibrinogène et

de D-dimères. Nous avons comparé le CS-2100i à deux appareils de référence: le CA-1500 de

Siemens et le miniVIDAS de Biomérieux.

Les résultats de ce processus de validation nous ont permis d’ajouter le CS-2100i à notre

processus de mesure de routine pour les quatre paramètres mentionnés ci-dessus.

Mots clés : CS-2100i, CA-1500, mini VIDAS, hémostase, validation, TP, aPTT, fibrinogène,

D-Dimères

Abstract

Hemostasis analysis are of crucial importance for the follow-up of anticoagulant treatments,

for presurgical checkups and for the detection of other clotting disorders.

The medical laboratory of Martigny received a new Siemens CS-2100i hemostasis testing

apparatus, which we had to validate. The validation was done for four parametres :

Prothrombin Time (PT), activated Partial Thromboplastin Time (aPTT), and fibrinogen and

D-dimer levels. We compared the CS-2100i with both Siemens CA-1500 and Biomérieux

miniVIDAS as reference.

The results of this validation process allowed us to add the CS-2100i to our routine

measurement process of the four aforementionned parameters.

Key words: CS-2100i, CA-1500, mini VIDAS, hemostasis, validation, PT, aPTT, fibrinogen,

D-dimer



2

Table des matières

Résumé _____________________________________________________ 1

Abstract _____________________________________________________ 1

1 Introduction ______________________________________________ 4

1.1 Théorie sur l’hémostase ________________________________________ 4

1.1.1 L’hémostase primaire _______________________________________________ 4

1.1.2 L’hémostase secondaire _____________________________________________ 5

1.1.2.1 Le temps de prothrombine (TP) ____________________________________ 6

1.1.2.2 Le temps de thromboplastine partielle activée (aPTT) ___________________ 7

1.1.2.3 Le fibrinogène __________________________________________________ 8

1.1.3 L’hémostase tertiaire ________________________________________________ 9

1.1.3.1 Les D-dimères _________________________________________________ 9

2 But ________________________________________________________ 9

3 Matériel et méthodes ________________________________________ 10

3.1 CS-2100i ____________________________________________________ 10

3.1.1 Principe de l'appareil _______________________________________________ 10

3.1.2 Réactifs, contrôles et échantillons _____________________________________ 13

3.2 CA-1500 _____________________________________________________ 14

3.2.1 Principe de la méthode _____________________________________________ 14


3.3 MiniVIDAS ___________________________________________________ 15

3.3.1 Principe de la méthode _____________________________________________ 15


4 Résultats ________________________________________________ 18

4.1 Pour le temps de prothrombine _________________________________ 20

4.1.1 Critères de comparaison ____________________________________________ 20

4.1.2 Critères de précision _______________________________________________ 22

4.1.3 Incertitude de mesure ______________________________________________ 24

4.1.4 Critères d’exactitude _______________________________________________ 24

4.2 Pour le temps de thromboplastine partielle activée _________________ 25





4.3 Pour le dosage du fibrinogène __________________________________ 29





4.4 Pour le dosage des D-dimères __________________________________ 33






3


5 Discussion ______________________________________________ 37

5.1 Interprétation pour le TP _______________________________________ 38



5.1.3 Critère d’exactitude ________________________________________________ 40


5.2 Interprétation pour l’aPTT ______________________________________ 41





5.3 Interprétation pour le taux de fibrinogène _________________________ 43





5.4 Interprétation pour les D-Dimères _______________________________ 45





6 Conclusion ________________________________________________ 47

Remerciements ______________________________________________ 48

Lexique ____________________________________________________ 48

Bibliographie ________________________________________________ 49

Annexes ____________________________________________________ 51



4

1 Introduction

En tant que future technicienne en analyse biomédicale, je dois dans le cadre de ma dernière

année de formation effectuer un travail de diplôme en lien avec la profession. J’ai effectué

celui-ci au laboratoire de l’institut central (ICH) à Martigny. Pour mon travail de diplôme,

l’équipe du laboratoire de Martigny a décidé de me donner comme sujet la validation

technique du nouvel appareil d’hémostase de chez Sysmex (le CS-2100i).

L’ICH compte 8 sites répartis entre Vevey et Brig. Ces différents sites sont soit composés de

laboratoires spécialisés, c’est le cas de Sion uniquement, soit de laboratoires polyvalents pour

les autres sites comme c’est le cas à Martigny. Le laboratoire de Martigny effectue des

analyses de chimie clinique, d’hématologie, d’hémostase et d’immunohématologie, de

sérologie et d’immunologie pour l’hôpital de Martigny, pour des médecins privés ainsi que

pour l’Hôpital de Saint-Amé et la clinique CIC. (1)

1.1 Théorie sur l’hémostase L'hémostase est une branche médicale dont l'importance clinique est prépondérante lors

d'interventions chirurgicales ou lors du suivi de traitements post-chirurgicaux comme la mise

en place d'un traitement avec des anticoagulants pour éviter des thromboses post-opératoires

ou lors d’autres troubles de la coagulation. La détection des troubles de la coagulation est

primordiale pour les patients présentant des déficits au niveau des facteurs de la coagulation

d'origines diverses. Les conséquences de ces troubles peuvent être de gravité variable suivant

le problème détecté.

L'hémostase est un processus physiologique permettant l'arrêt du saignement. Elle est

contrôlée par de nombreux régulateurs tels que des activateurs ou des inhibiteurs de la

coagulation qui permettent d'éviter des hémorragies ou à l'opposé des thromboses. (2)

L'hémostase peut être divisée en trois étapes qui sont respectivement: (2)

1. L'hémostase primaire

2. L'hémostase secondaire (coagulation)

3. L'hémostase tertiaire (fibrinolyse)

Ces trois étapes nécessitent trois acteurs principaux : les vaisseaux sanguins, les plaquettes et

des protéines. Ces protéines sont celles de la coagulation et de la fibrinolyse (2)

1.1.1 L’hémostase primaire

Cette étape peut être divisée en un temps vasculaire et un temps plaquettaire. (3)

Le temps vasculaire consiste en une vasoconstriction du vaisseau. Elle intervient

immédiatement après la lésion de celui-ci, car différentes molécules libérées vont l'induire.

Ces molécules sont relâchées par les tissus lésés et par les plaquettes (sérotonine). Il n'y a pas

que des molécules chimiques qui sont impliquées dans ce processus. Les récepteurs de la

douleur ainsi que les cellules musculaires lisses lésées le sont aussi. Cette vasoconstriction va

permettre un ralentissement du saignement grâce à la diminution du diamètre du vaisseau

sanguin. (3)



5

Le temps plaquettaire est divisé en trois étapes distinctes qui se déroulent directement après la

lésion. Celles-ci aboutissent à la formation du clou plaquettaire hémostatique. Ces différentes

étapes sont: (3)

1. La phase d'initiation: les plaquettes se lient au site de la lésion.

2. La phase d'extension: recrutement d'autres plaquettes grâce aux agonistes solubles

produits dans les granules alpha des plaquettes (ADP, thromboxane A2, thrombine).

Ceci permet l'activation des plaquettes lorsque les agonistes se lient aux plaquettes

circulant à proximité de la lésion.

3. La phase de perpétuation: stabilisation du caillot constitué des plaquettes et de la

fibrine.

1.1.2 L’hémostase secondaire

L'hémostase secondaire est le processus permettant la coagulation. Il est divisé en 3 étapes:

(4) (5)

1. L’initialisation: lors de la lésion, le facteur tissulaire (FT) est exposé à la circulation

sanguine donc aux plaquettes, aux facteurs, etc. Ceci engendre le début de la cascade

d'activation. Cette étape aboutit à la formation d'un complexe FXa/FVa (le « F »

correspond à facteur et le « a » à activé) se liant à la surface des cellules de

l'endothélium.

2. L’amplification: une faible quantité de prothrombine est transformée en thrombine

sous l'effet du complexe FXa/FVa. La thrombine active les plaquettes et les facteurs

VIII, V et XI. Les plaquettes activée vont fixer les facteurs VIIIa, Va et IXa.

3. La propagation: le complexe FVIIIa/FIXa va transformer le FX en FXa à la surface

des plaquettes activées. Puis, le même complexe FXa/FVa que lors de la phase

d'initialisation est alors formé. Cependant, cette fois-ci, il l’est à la surface des

plaquettes. Ce complexe transforme d'importantes quantités de prothrombine en

thrombine. Ce pic de thrombine permet la transformation du fibrinogène en fibrine ;

donnant naissance à un caillot de fibrine soluble. Le facteur XIII stabilise le caillot et

le rend ainsi insoluble et résistant à la fibrinolyse.

Il existe une schématisation de la cascade de l'hémostase secondaire. Celle-ci peut être

séparée en trois parties distinctes: (4)

1. La voie intrinsèque activée par un activateur de la phase de contacte

2. La voie extrinsèque activée par le facteur tissulaire.

3. La voie commune permet d'aboutir à la formation de la fibrine. (débute au FXa)



6

Figure 1: Schéma de la cascade de la coagulation (6)

Les différentes voies de la cascade de la coagulation peuvent être explorées grâce à quatre

types de tests de première intention. Ces tests sont: (5) (7)

Le temps de prothrombine ou temps de Quick (TP)

Le temps de thromboplastine partielle activée (aPTT)

La mesure du taux de fibrinogène

Le temps de thrombine (TT)

Dans mon travail, je vais uniquement présenter les trois premiers tests (TP, aPTT et

fibrinogène) car ce sont ceux que nous effectuons au laboratoire de Martigny. De plus, ce sont

les trois tests de première intention pour lesquelles nous avons dû faire une validation avec les

D-dimères.

1.1.2.1 Le temps de prothrombine (TP)

Le temps de prothrombine est utilisé pour d'explorer la voie extrinsèque. Pour ce faire, au

laboratoire de Martigny, nous utilisons un réactif Dade® Innovin®. Il contient du facteur

tissulaire, de la thromboplastine, du calcium et des phospholipides synthétiques qui

remplacent les plaquettes. Une fois le réactif additionné au plasma citraté, la thromboplastine

et le calcium vont activer la coagulation pour obtenir de la thrombine. Ensuite, celle-ci va

permettre la transformation du fibrinogène présent dans le plasma en fibrine (fin de la

coagulation) (7). Le réactif utilisé au laboratoire contient un neutralisateur d’héparine à une

concentration de 2.0 unités/ml. Ce neutralisateur donne la possibilité au test d’être moins

sensible à l’héparine (anticoagulant fréquemment administré après les opérations). (8)

Figure 2: Schéma du déroulement de la réaction dans la cuve échantillon lors du test du

TP (7)



7

Le TP est utilisé pour tester les différents facteurs de la voie extrinsèque. Le résultat est

obtenu en secondes puis est transformé en pourcentage grâce à une courbe de calibration (7).

Le résultat en pourcent devrait se situer dans l’intervalle de référence. Celui-ci est entre 70 et

140% pour le laboratoire de Martigny. Si le résultat en pourcent n'est pas dans cet intervalle

cela nous indique un problème d'un ou plusieurs facteurs de la voie extrinsèque ou de la voie

commune. Pour déterminer si le problème vient d’une des voies ou d'un autre problème

physiologique comme un déficit congénital ou acquis en facteurs, une anomalie de la

fibrinoformation, etc. Il faut appeler le service afin de savoir si le patient est sous traitement

ou non. S’il ne l’est pas, l’hématologue doit être avertit du résultat. Les résultats obtenus pour

les autres tests effectués au laboratoire doivent être observés car ils peuvent nous guider sur la

cause du problème. Certains tests de chimie nous permettent de localiser la source du trouble

de la coagulation. Par exemple : les tests hépatiques, car la majorité des facteurs sont produit

par le foie et le dosage de la vitamine K car les FVII, FX et FII sont vitamine k-dépendants.

Le résultat obtenu est aussi utile au médecin dans le cas de suivi d’un traitement aux anti-

vitamines K (AVK). Lors de traitement au AVK le TP est volontairement abaissé grâce à

l’anticoagulant, afin d’éviter de possibles risques thrombo-emboliques ou autres. (9) (8)

Le résultat est aussi rendu en INR (international normalized ratio) pour permettre une

normalisation de celui-ci afin de garantir son interprétation universelle. L'INR est obtenu à

l'aide d'un calcul : (7) (8)

INR= (TP patient (sec)/TP plasma ctrl (sec))ISI

L'indice ISI (Indice de Sensibilité International) est spécifique à chaque réactif et représente

la sensibilité de ce dernier. Le résultat en INR est primordiale pour des suivis de traitements

aux anticoagulants (p.ex.: traitement à l’anti-vitamine K, à l’héparine) (7). Chez un patient

sans traitement en anticoagulant l’INR est de 1.0. L’intervalle thérapeutique pour une

personne sous traitement aux AVK (Anti-Vitamine K) se situe entre 2 et 3. (10)

Figure 3: Schéma représentant différente valeurs d’INR et leur signification vis à vis du

traitement aux AVK. (10)

1.1.2.2 Le temps de thromboplastine partielle activée (aPTT)

L'aPTT permet l'exploration de la voie intrinsèque. Pour cela, nous utilisons deux réactifs au

laboratoire de Martigny (7). Le premier est constitué d’un activateur de la phase de contact

(soit silice, kaolin, célite ou acide ellagique) et de phospholipides, c’est la pathromtine® SL

(11). Ce réactif nécessite d’être incubé à 37°C avec le plasma durant 2 minutes. Le deuxième

réactif est composé de calcium à une concentration de 0.025M, c’est le CaCl2 (12). Pour



8

effectuer ce test, nous devons d’abord incuber le plasma citraté avec le premier réactif

contenant les phospholipides. Cela permet de débuter la cascade de coagulation. Par contre,

elle va s’interrompre au facteur IX car celui-ci a besoin du Ca++

pour être activé et permettre

la poursuite de la cascade. Le Ca++

se trouve dans le réactif CaCl2 qui est ajouté au mélange

réactionnel après le temps d’incubation (7) (13). Une fois ajouté, celui-ci va permettre à la

cascade de la coagulation de se poursuivre jusqu’à la formation du caillot de fibrine.

Figure 4: Schéma du déroulement de la réaction lors du test de l’aPTT (7)

L’aPTT permet de tester les facteurs de la voie intrinsèques ainsi que le fibrinogène, le

kininogène de haut poids moléculaire et la prékallicréine (7).

Le résultat est obtenu en secondes, celui-ci doit se situer entre 25 et 36 secondes, soit

l’intervalle de référence au laboratoire de Martigny. Si le résultat ne se situe pas dans

l’intervalle, nous pouvons supposer qu’il y a un problème avec un ou plusieurs facteurs de la

voie intrinsèque ou de la voie commune. Il faut être attentif car ces troubles des différentes

voies peuvent aussi être dues à d’autres troubles (p.ex. troubles hépatiques, carence en

vitamine en vitamine K). Pour cette raison, il faut observer l’ensemble des résultats d’un

patient et voir s’il est sous anticoagulant avant de pouvoir poser un diagnostique. Dans le cas

ou le patient est sous anticoagulant, le résultat obtenu est utile au médecin pour effectuer un

suivi du traitement. L’aPTT est surtout utilisé pour le suivi de traitement aux différentes

héparines (héparine non fractionnée, héparine de bas poids moléculaire (HBPM)). Pour

l’HBPM, l’aPTT peut être que légèrement allongé, ce n’est pas le meilleur test pour contrôler

le traitement. Il faudrait utiliser le dosage de l’anti-Xa (13) (14)

1.1.2.3 Le fibrinogène

Ce test permet de déterminer le taux de fibrinogènes présents dans le plasma du patient. Afin

d'obtenir le taux réel de fibrinogène présent, il faut impérativement faire le test avec un excès

de thrombine pour que cette dernière ne soit pas limitante dans l’analyse. (7) (15)

Figure 5: Schéma du déroulement du test lors du test du dosage du fibrinogène (7)

Obtenu en seconde, le résultat doit être transformé en gramme par litre grâce à la courbe de

calibration (7). L'intervalle de référence du laboratoire de Martigny se trouve entre 1,8 et 4,0

g/L. Le taux de fibrinogène peut être augmenté suite à un syndrome inflammatoire ou lors de

grossesse. Une diminution du taux peut aussi être observée lors d’insuffisance hépatique, lors

d’anomalie du fibrinogène (dysfibrinogénémies, hypofibrinogénémies, afibrinogénémies).



9

1.1.3 L’hémostase tertiaire

L’hémostase tertiaire se nomme aussi fibrinolyse et intervient lors de deux étapes du

processus de réparation de la lésion. Premièrement, elle agit lors de la formation du caillot de

fibrine pour prévenir la dispersion du processus de coagulation. Deuxièmement, une fois la

lésion réparée, le processus de fibrinolyse s'active afin de détruire le caillot de fibrine. Ce

dernier processus s'effectue en deux étapes: (16) (17)

1. La transformation du plasminogène (dans le plasma) en plasmine sous l'effet de

l'activateur tissulaire du plasminogène (t-PA) et de l'urokinase.

2. La dégradation de la fibrine, du fibrinogène et des facteurs V, VIII par la plasmine.

La fibrine ainsi dégradée se décompose en produits de dégradation de la fibrine

(PDF), dont font partie les D-dimères.

Pour éviter une dissémination du phénomène de fibrinolyse, des inhibiteurs sont

présents. Ce sont l’alpha2-antiplasmine, le TAFI (Thrombine Activatable Fibrinolysis

Inhibitor) et le PAI-1&2 (2 activateurs du plasminogène). (16)

Figure 6: Schéma du processus de la fibrinolyse et ces activateurs et inhibiteur (16)

1.1.3.1 Les D-dimères

Les D-dimères sont des produits de dégradation réticulée de la fibrine. Ces produits

apparaissent lorsque le phénomène de fibrinolyse est activé pour contrebalancer le processus

de coagulation (18). Le dosage des D-dimères nous permet de détecter la présence d’une

éventuelle thrombose veineuse profonde ou d’une embolie pulmonaire en nous basant sur le

seuil de positivité (cut-off). Celui-ci est de 500μg/L, en dessous de ce seuil le résultat est

négatif. En dessus du seuil, il est positif. (18)

2 But Le but de ce travail est d’éprouver la validité des tests du nouvel appareil d'hémostase CS-

2100i de chez Sysmex (Siemens). La validation est effectuée pour quatre tests. Trois de ces



10

tests sont validés entre le nouvel appareil et le CA-1500 de chez Siemens (pour le TP, l’aPTT

et le fibrinogène). Le dernier de ces tests est validé entre le CS-2100i et le miniVIDAS de

chez Biomérieux (pour les D-dimères).

3 Matériel et méthodes

3.1 CS-2100i

3.1.1 Principe de l'appareil

Dans ce chapitre, je vais détailler le principe de fonctionnement de l'appareil. Le CS-2100i est

un automate d'hémostase capable de mesurer de multiples paramètres et de faire une

observation pré-analytique de l’échantillon. Celle-ci permet de définir l'aspect du plasma afin

d'éviter de possibles interférences lors de la mesure ou de mesurer le niveau de remplissage

du tube citraté. (19)

Le CS-2100i est constitué d'un détecteur composé d'une lampe halogène comme source

lumineuse. La lumière est décomposée en différentes longueurs d'onde variable (340 nm, 405

nm, 575 nm, 660 nm et 800 nm) à l'aide d'un système de disques à cinq filtres. Ces longueurs

d’onde permettent d'effectuer plusieurs mesures dans chacun des emplacements de détections.

La lumière émise arrive dans les divers emplacements du détecteur à l'aide de fibres optiques.

La lumière transmise à la sortie de la cuvette est détectée par les photodiodes puis est

transformée en signal électrique. Ce signal est traité par un micro-ordinateur qui détermine le

temps de coagulation et la variation de l'absorbance (Delta OD/min). (20)

Figure 7: Schéma du mécanisme de détection de la lumière transmise (21)

Le CS-2100i utilise plusieurs méthodes basées sur la détection de la lumière transmise à des

longueurs d'ondes différentes afin de pouvoir effectuer en parallèle des mesures de divers

paramètres. Ceux-ci sont mesurés à l'aide de trois méthodes qui sont de coagulation,

immunologique ou chromogénique (21). Cette dernière ne sera pas présentée dans ce travail,

car elle n’est pas utilisée pour les analyses effectuées au laboratoire de Martigny. Les autres

méthodes sont présentées ci-dessous.

L’analyse selon la méthode de la coagulation se fait grâce à une mesure turbidimétrique et

chronométrique en parallèle. Pour le TP et l’aPTT la longueur d’onde utilisée par défaut est

de 660 nm et la longueur d’onde secondaire est de 800nm. Cette dernière est utilisée en cas

d’erreur lors de la mesure (« Transmitted Light High Error » et « Turbidity Level Over



11

Error »), l’appareil change automatiquement pour la longueur d’onde secondaire. Tandis que

pour le fibrinogène la longueur d’onde utilisée est de 405 nm (20). Lors de la mesure, le

chronomètre est arrêté au moment où un changement de turbidité est détecté (apparition du

caillot de fibrine) dans la cuve de réaction. Cette cuve contient le mélange réactif et du

plasma du patient ou du contrôle. La méthode de mesure expliquée ci-dessus est utilisée pour

déterminer le temps de prothrombine (TP), la mesure du temps de de thromboplastine

partielle activée (aPTT) et la mesure du taux de fibrinogène. L'INR quant à lui est calculé par

l'appareil à partir du résultat du TP en seconde grâce à la courbe de calibration. Le temps de

coagulation est obtenu grâce à la méthode de détection du point de coagulation. C’est une

méthode de détection en pourcentage liée à la mesure de la coagulation par turbidimétrie.

Cette méthode permet de calculer le temps de coagulation. Pour ce faire, le micro-ordinateur

attribue le zéro pourcent à l’intensité lumineuse transmise juste après l’ajout du réactif initiant

le processus de coagulation, mais, avant l’apparition de la coagulation. Le cent pourcent

correspond alors à l’intensité lumineuse à la fin de la coagulation. La courbe créée avec toutes

les valeurs de l’intensité lumineuse au cours de la mesure va permettre de déterminer le temps

de coagulation qui se trouve au 50% de la valeur totale. (22) (20)

Figure 8: Graphique représentant La méthode de détection du point de coagulation en

pourcent (20)

La méthode immunologique est utilisée pour le dosage des D-dimères. L’appareil mélange

dans une cuve de réaction le plasma patient ou contrôle avec du réactif latex pour engendrer

une réaction. Il mesure alors la variation de l’absorbance une fois que des caillots de latex

(réaction antigène- anticorps) sont formés dans la cuve de réaction. (22)

L’observation pré-analytique de l’échantillon par l’appareil consiste, comme dit plus haut, en

deux analyses distinctes : la mesure du remplissage du tube citraté et l’aspect du plasma. La

mesure du remplissage se fait grâce à l’aiguille échantillon qui indique le niveau de liquide.

Ce niveau correspond à la distance entre la position haute de l’aiguille et la surface du liquide

dans le tube. Ce niveau doit se trouver dans les intervalles enregistrés dans l’appareil. (23)



12

Figure 9: Méthode de mesure du remplissage du tube (23)

La méthode permettant de déterminer l’aspect du plasma se nomme détection HIL

(Hémolyse, Ictère et Lipémie). Pour cette analyse, l’appareil effectue trois mesures

d’absorbance à l’aide de trois longueurs d’onde (405nm, 575nm et 660nm). La combinaison

des trois résultats permet à la machine de déterminer s’il y a une substance interférente et

laquelle. Pour l’hémolyse, il y a un pic qui apparait à 405nm et à 575nm. Pour l’ictère, le CS-

2100i détecte un pic uniquement à 405nm. Enfin pour la lipémie, l’appareil détecte une

absorbance pour les trois longueurs d’onde. (23)

Figure 10: Schéma représentant la méthode de détection HIL. (23)

D’après le graphique ci-dessus, nous pouvons en déduire que l’ictère n’interfère pas pour les

mesures des paramètres du TP et de l’aPTT car leurs mesures se font à 660 nm ou à 800 nm.

Par contre pour le dosage du fibrinogène s’effectuant à 405 nm, l’ictère interfère dans les

résultats car la bilirubine donne un pic d’absorbance à cette même longueur d’onde (405 nm).

Dans ce cas le résultat du fibrinogène doit être obtenu avec une autre méthode qui ne souffre

pas de cette interférence (méthode mécanique sur le KC4 au laboratoire de Martigny). La

lipémie quant à elle crée des interférences pour les trois tests (TP, aPTT et fibrinogène), donc

comme précédemment les résultats doivent être obtenus avec une autre méthode (sur le KC4).

Pour l’hémolyse nous devons de toute façon faire repiquer le patient car ce sont les consignes

de la procédure du laboratoire. Mais si l’on observe le graphique, nous pouvons voir que

l’hémolyse influence uniquement le dosage du fibrinogène (450 nm) et pas celui du TP et de

l’aPTT (660 nm ou 800 nm). (24)



13

3.1.2 Réactifs, contrôles et échantillons

Tous les réactifs utilisés sur le CS-2100i proviennent de chez Siemens.

Les réactifs utilisés pour les analyses sont:

Réactifs Dade®

Innovin®

(25)

1. Pathromtin

® SL (11)

Cacl2 (12) Dade®

Réactifs

Thrombine

(26)

INNOVANCE

® D-Dimer (18) 2. Dade®

Tampon

véronal

d’Owren (27)

N° de lot 3. 539325 536678 539760 547232 45670 * 1) 547054

2) 547077

Date

d’expiration

2017-11-09 2016-09-08 2020-02-

17

2017-01-12 2017-09-13 1) 2016-07-16

2) 2017-09-20

Test effectué TP aPTT aPTT fibrinogène D-dimère Dilution des

fibrinogènes

Stabilité dans

l’appareil

4 jours 14 jours 4 jours 1 jour 30 jours avec le

bouchon dans la

chambre froide

1 jour

*INNOVANCE® D-Dimer (réactifs pour les D-dimères)

N° lot boîte:45670

N° lot par réactif:

o Reagent: 561503

o Buffer: 561703

o Supplement: 561803

o Diluant: 561603

o Calibrator: 561903

Les contrôles utilisés sont :

Contrôles Dade® Ci-

Trol® 1

Dade®

Ci-Trol®

2

Dade®

Ci-Trol®

3

INNOVANCE®

D-Dimères

contrôle 1

INNOVANCE

® D-Dimères

contrôle 2

N° de lot 528157 548255 548455 1) 560792

2) 560793 560694

Date

d’expiration

2016-10-13 2018-05-05 2017-09-21 1) 2017-08-17

2) 2017-09-07 2017-09-07

Test

effectué

avec

TP, aPTT et

fibrinogène

TP et aPTT TP et aPTT D-Dimère D-Dimère

Les échantillons utilisés pour le comparatif patient sont des échantillons patients

provenant de la routine du laboratoire. Pour la précision intra-série et inter-série, nous

avons utilisé certains contrôles répertoriés ci-dessus. Ces contrôles sont le Dade® Ci-

Trol® 1 et l’INNOVANCE® D-Dimère contrôle 1.

Les contrôles utilisés pour vérifier les réactifs et le bon fonctionnement de l'appareil

proviennent de chez Siemens. Pour contrôler le TP, l’aPTT et fibrinogène, nous utilisons les



14

contrôles Dade® Ci-Trol® 1, 2 et 3.Pour les D-Dimères, nous utilisons les Innovance® D-

Dimères contrôle 1 et 2.

3.2 CA-1500

3.2.1 Principe de la méthode

L’analyse des échantillons sur le CA-1500 repose sur plusieurs méthodes : néphélémétrique,

chromogénique et immunologique. La méthode néphélémétrique permet d’effectuer le TP,

l’aPTT et le fibrinogène sur le CA-1500. Cette méthode de détection de la coagulation est

couplée à une méthode chronométrique. La coagulation se manifeste par un changement de

turbidité du mélange réactionnel lors de l’apparition du caillot de fibrine. Une lampe LED

envoie alors un signal lumineux à 660 nm sur la cuve réactionnelle. La quantité de lumière

diffractée par la solution est modifiée en intensité avec l’apparition du caillot. Une photodiode

capte ensuite la lumière difractée et la convertit en signaux électriques. Le microordinateur de

l’appareil traite les données reçues. (28) (29)

Figure 11: Schéma représentant au court du temps la variation de l'intensité lumineuse

mesurée lors du processus de coagulation (29)

La détection du point de coagulation se base sur une évaluation faite par l’appareil grâce à la

méthode de détection en pourcentage. Le point de coagulation se trouve à un pourcentage

déterminé par le protocole de test (50% pour le TP). Le zéro pourcent correspond à la quantité

de lumière diffractée après le début de la détection et le cent pourcent à la quantité de lumière

diffractée à la fin de la coagulation. Les deux types de mesure sont utilisés ensemble afin de

créer un graphique représentant l’intensité lumineuse diffractée en fonction du temps. Ce

graphique généré par le micro-ordinateur lui sert pour déterminer le point de coagulation. (29)



15

Figure 12: graphique représentant la méthode de détermination du point de coagulation

en pourcentage (29)


Réactifs Dade®

Innovin®

(25)

4. Pathromti

n® SL

(11)

Cacl2 (12) Dade®

Réactifs

Thrombine

(26)

INNOVANCE

® D-Dimer

(18)

5. OVB (27)

N° de lot 6. 539325 536678 539760 547232 45670 * 1)547054

2)547077

Date

d’expiration

2017-11-09 2016-09-08 2020-02-17 2017-01-12 2017-09-13 1)2016-07-16

2)2017-09-20

Test effectué TP aPTT aPTT fibrinogène D-dimère Dilution des

fibrinogènes

Stabilité

dans

l’appareil

4 jours 14 jours 4 jours 2 jours 30 jours avec le

bouchon dans la

chambre froide

1 jour

Les échantillons utilisés pour le comparatif patient sont des échantillons patients

provenant de la routine du laboratoire.

3.3 MiniVIDAS

3.3.1 Principe de la méthode

Le miniVIDAS de chez Biomérieux est un appareil permettant d’effectuer des tests

immunologiques pour différentes analyses. A Martigny, ceux-ci sont Epstein Baar Virus

(EBV), Varicelle, Procalcitonine (PCT), Hormone Chorionique Gonadotrope (HCG), virus

d’immunodéficience humaine (HIV) et le dosage des D-dimères. Dans le cadre de ce travail,

nous avons uniquement utilisé le dosage des D-dimères. Pour pouvoir effectuer un test, il faut

insérer une barrette contenant les réactifs du test où le plasma du patient sera chargé ainsi

qu’un cône couvert d’antigènes spécifiques pour chaque test.



16

Figure 13: Schéma d'une barrette et de ses différents (30)

Le principe du miniVIDAS est basé sur une méthode immunoenzymatique couplée à une

lecture de la fluorescence produite par l’action d’une enzyme (30). L’analyse se fait en trois

étapes: (31)

Aspiration de l’échantillon par le cône et lavage de l’excédent d’échantillons non fixés

sur les anticorps.

1. Aspiration du conjugué par le cône, suivi aussi d’un lavage pour éliminer le

conjugué non fixé.

2. Révélation par aspiration et refoulement du substrat. L’enzyme du conjugué va

alors catalyser la réaction d’hydrolyse du substrat. Ce substrat est alors

transformé en un produit fluorescent qui va être lu à 450nm.



17

Le signal est proportionnel à la concentration d’antigènes présents dans l’échantillon. (31)


Le Réactif pour le dosage des D-dimères est:

VIDAS® D-Dimer Exclusion II DEX 2 (31)

N° lot de la boîte: 1004337870

Date d'expiration: 2016-09-14

Les échantillons utilisés pour le comparatif patient sont des échantillons patients provenant de

la routine du laboratoire.



18

4 Résultats Dans ce chapitre, je vais présenter les résultats que nous avons obtenus pour les différents

critères de validation pour chacun des tests à valider. Je vais commencer par détailler les

différentes recommandations du rapport de validation, fourni par le FAMH d’hématologie de

l’ICH, sur la manière d’effectuer la validation pour chacun des paramètres (TP, aPTT,

fibrinogène et D-Dimères) à évaluer (cf. annexe : Rapport de validation).

Critère de comparaison

Pour effectuer le comparatif patient, nous avons suivi les recommandations du rapport de

validation du CS-2100. Nous avons donc effectué la comparaison en analysant : 30

échantillons patients pour le TP et pour l’aPTT ; et 20 échantillons patients pour le

fibrinogène et pour les D-Dimères. Les analyses ont d’abord été faites sur le CA-1500

(l’appareil de référence) et ensuite sur le CS-2100i (le nouvel appareil) pour le TP, aPTT et le

fibrinogène. Par contres pour les D-Dimères l’appareil de référence est le miniVIDAS. Ces

différents échantillons doivent être représentatifs de tout le domaine physiologique. Nous

avons donc plus précisément sélectionné pour:

o Le TP: 10 échantillons dont les valeurs sont supérieures à 70%, 10

échantillons dont les valeurs se situent entre 20 et 70% et 10 échantillons

dont les valeurs se situent entre 0 et 20%.

o L’aPTT: 15 échantillons dont les valeurs sont inférieures à 36 secondes, 10

échantillons dont les valeurs se situent entre 36 et 70 secondes et 5

échantillons dont les valeurs sont supérieures à 70 secondes.

o Le fibrinogène: 5 échantillons dont les valeurs sont inférieures à 1.0 g/L, 5

échantillons dont les valeurs se situent entre 1.0 et 1.8 g/L, 5 échantillons

dont les valeurs se situent entre 1.8 et 4.0 g/L et 5 échantillons dont les

valeurs sont supérieures à 4.0 g/L.

o Les D-Dimères: 5 échantillons dont les valeurs sont inférieures à 400 μg/L,

10 échantillons dont les valeurs se situent entre 400 et 600 μg/L et 5

échantillons dont les valeurs sont supérieures à 600 μg/L.

Dans les différents tableaux de ce chapitre, il y a les valeurs des doubles que l’appareil a fait

et le résultat final rendu dans le dossier WindMlab du patient. Le résultat final correspond à la

moyenne des résultats des doubles. Cependant, nous devons être attentif car, pour le TP et le

fibrinogène, la moyenne est effectuée sur les résultats en seconde et non pas sur les résultats

en pourcent (TP) ou en gramme par litre (fibrinogène).WinDMLab est le programme

informatique permettant de gérer les dossiers patients. C’est dans ce programme que nous

enregistrons les demandes d’analyse, que nous visualisons les résultats des tests et que nous

validons ces derniers. Pour les D-Dimères, par contre, les analyses sont effectuées en simple.

Critère de précision

Le critère de précision est séparé en deux parties distinctes: la précision intra-série

(répétabilité) et la précision inter-série (reproductibilité).



19

Pour évaluer la répétabilité de l’appareil, nous avons, comme indiqué dans le rapport de

validation, effectué 10 mesures de suite d’un même échantillon. Dans notre cas, nous avons

utilisé des plasmas contrôles (Ci-Trol 1 ou Innovance D-Dimères contrôle 1). Ces analyses

doivent être faites dans des conditions similaires, c'est-à-dire avec le même lot de réactif et le

même appareil pour chacun des paramètres testés.

Pour évaluer la reproductibilité de l’appareil, le rapport de validation spécifie d’effectuer

l’analyse d’un contrôle de qualité interne (CQI) sur plusieurs jours à un rythme d’une fois par

jour. Ces analyses doivent être effectuées dans des conditions similaires : même échantillon,

même lot réactif et même appareil. Nous avons donc décidé d’analyser sur trente jours un

CQI pour chacun des paramètres à évaluer. En effet, pour tester le critère d’incertitude, nous

avons besoin de ces valeurs.

Critère d’incertitude

Pour évaluer l’incertitude de mesure pour l’appareil, le rapport de validation nous demande

d’analyser trente fois le même CQI pour chaque paramètre à évaluer. Les résultats utilisés

sont ceux obtenus pour la détermination de la reproductibilité comme expliqué ci-dessus.

Critère d’exactitude

Pour évaluer le critère d’exactitude pour chacun des paramètres, nous devons analyser deux

Contrôle Qualité Externe (CQE) du Centre Suisse de Contrôle de Qualité (CSCQ). Les

résultats obtenus sont envoyés à l’organisme CSCQ s’occupant des contrôles de qualité.

Celui-ci nous renvoie ensuite le rapport contenant les résultats de l’enquête effectuée avec les

résultats attendus pour chaque analyse. Les enquête d’hémostase au lieu environ tous les trois

mois. La premières a été faite le 1er mars et la suivante aura lieu dans le courant du mois de

juin.



20

4.1 Pour le temps de prothrombine

4.1.1 Critères de comparaison

Voici le tableau récapitulatif des résultats obtenus pour le comparatif patient entre le CA-

1500 et le CS-2100i pour le paramètre du TP. La gamme de résultats obtenus permet de

couvrir la majeure partie du domaine physiologique (0 et 120%). Et nous pouvons observer

que les résultats obtenus sont assez similaires entre les deux appareils que cela soit dans les

valeurs hautes ou les valeurs basses.

NLAB TP -

CA-1500

TP 1

CS-2100i

TP 2

CS-2100i

TP final

CS-2100i

Unité % % % %

21511-31906 111 112 115 112

21511-31815 106 103 108 105

21511-31926 73 72 71 71

21511-31920 104 108 108 108

21511-31857 100 101 101 101

21511-31854 96 97 99 97

21511-31861 74 72 72 72

21511-31917 111 115 118 115

21511-31958 102 103 103 103

21511-37787 108 103 103 103 >70%

21511-31888 50 49 50 49

21511-31876 30 29 29 29

21511-31990 29 28 28 28

21511-31985 34 34 34 34

21511-31946 25 26 26 26

21511-31957 69 68 69 68

21511-32007 34 34 34 34

21511-31995 25 25 25 25

21511-31927 27 27 27 27

21511-32271 22 22 22 22 Entre 20 et 70%

21511-31873 16 15 15 15

21511-31954 18 18 18 18

21511-31999 20 20 19 19

21511-31997 16 16 16 16

21511-32245 8 6 6 6

21511-37470 17 15 15 15

21511-37402 14 13 13 13

21511-37110 14 13 14 14

21511-37080 15 16 16 16

21511-37167 15 16 16 16 <20%



21

Les INR ci-dessous sont ceux correspondant au TP (en pourcent), obtenus pour les

échantillons du tableau précédent. Ces INR sont calculés par l’appareil à partir de la courbe

de calibration que nous avons fait lors de l’ouverture du lot de réactif. Nous observons que les

résultats obtenus sur les deux appareils sont très proches les uns des autres.

NLAB INR -

CA-1500

INR 1

CS-2100i

INR 2

CS-2100i

INR final

CS-2100i

Unité - - - -

21511-31906 1.0 0.95 0.94 0.95

21511-31815 1.0 0.99 0.97 0.98

21511-31926 1.2 1.16 1.16 1.16

21511-31920 1.0 0.97 0.97 0.97

21511-31857 1.0 1.00 1.00 1.00

21511-31854 1.0 1.02 1.01 1.02

21511-31861 1.1 1.16 1.16 1.16

21511-31917 1.0 0.94 0.94 0.94

21511-31958 1.0 0.99 0.99 0.99

21511-37787 1.0 0.99 0.99 0.99

21511-31888 1.4 1.4 1.39 1.4

21511-31876 2.2 2.19 2.19 2.19

21511-31990 2.2 2.23 2.23 2.23

21511-31985 1.9 1.92 1.93 1.93

21511-31946 2.5 2.42 2.42 2.42

21511-31957 1.2 1.19 1.18 1.19

21511-32007 1.9 1.9 1.89 1.9

21511-31995 2.6 2.5 2.52 2.51

21511-31927 2.4 2.32 2.34 2.33

21511-32271 2.8 2.77 2.8 2.79

21511-31873 3.7 3.68 3.68 3.68

21511-31954 3.3 3.19 3.19 3.19

21511-31999 3.1 3.03 3.04 3.04

21511-31997 3.6 3.56 3.59 3.58

21511-32245 7.8 8.05 8.05 8.05

21511-37470 3.4 3.64 3.66 3.66

21511-37402 4.1 4.15 4.18 4.17

21511-37110 4.1 4.14 3.92 4.03

21511-37080 3.9 3.56 3.56 3.56

21511-37167 3.9 3.57 3.59 3.58



22

4.1.2 Critères de précision

Répétabilité (précision intra-série)

L’échantillon utilisé pour évaluer la précision intra-série du temps de Quick est le Ci-Trol 1.

La valeur cible pour ce contrôle pour le TP est de 105% et pour l’INR de 0.98. Nous pouvons

donc voir que les résultats obtenus sont très proches de la valeur cible et dans les intervalles

de deux écart-types.

Paramètres TP

Ci-Tol 1

Lot 528157

2016/10/13

INR

Ci-Tol 1

Lot 528157

2016/10/13

Unités % -

1 105 0.98

2 105 0.98

3 105 0.98

4 108 0.97

5 105 0.98

6 103 0.99

7 105 0.98

8 105 0.98

9 105 0.98

10 105 0.98

Moyenne 105 0.98

CV % 1.03 0.00

SD. 1.09 0.00



23

Reproductibilité (précision inter-série)

Nous avons utilisé le Ci-Trol 1 pour obtenir les trente valeurs qui vont nous servir à évaluer

ce critère. Nous remarquons que les valeurs obtenues sont dans les intervalles de référence

pour les deux paramètres évalués. D’ailleurs la moyenne des résultats obtenus est proche de la

valeur cible correspondante pour le TP en pourcent et pour l’INR.

Paramètres TP INR

Ci-Trol 1

lot: 528157

Exp:

2016/10/13

Ci-Trol 1

lot: 528157

Exp:

2016/10/13

Cible 2 SD 105 %

(96.6 – 113.4

%)

0.98

(0.9 – 1.06)

Unités % -

1 103.0 0.99

2 103.0 0.99

3 107.6 0.97

4 105.2 0.98

5 103.0 0.99

6 107.6 0.97

7 107.6 0.97

8 105.2 0.98

9 105.2 0.98

10 100.8 1.00

11 103.0 0.99

12 100.8 1.00

13 98.7 1.01

14 107.6 0.97

15 105.2 0.98

16 105.2 0.98

17 105.2 0.98

18 100.8 1.00

19 100.8 1.00

20 103.0 0.99

21 103.0 0.99

22 105.2 0.98

23 100.8 1.00

24 103.0 0.99

25 105.2 0.98

26 105.2 0.98

27 103.0 0.99

28 103.0 0.99

29 105.2 0.98

30 103.0 0.99

Moyenne 103.8 1.00

CV % 2.22 0.01

SD 2.31 0.01



24

4.1.3 Incertitude de mesure

Nous avons utilisé les résultats obtenus pour les trente valeurs de la reproductibilité pour

évaluer l’incertitude de mesure. Pour l’incertitude de mesure, nous avons uniquement besoin

du coefficient de variation en pourcent et de l’écart-type mesuré afin de pouvoir l’évaluer.

Ci-Trol 1

lot: 528157

Exp: 2016/10/13

Ci-Trol 1

lot: 528157

Exp: 2016/10/13

Cible 2 SD 105 %

(96.6 – 113.4 %)

0.98

(0.9 – 1.06)

Moyenne 103.8 1.00

CV % 2.22 0.01

SD 2.31 0.01

4.1.4 Critères d’exactitude

Lors de mon stage, nous avons reçu un seul CQE et nous avons obtenu un résultat de 27% et

un INR à 2.3 pour le TP. Cependant, nous n’avons pas encore reçu en retour les résultats de

l’évaluation pour ce contrôle.



25

4.2 Pour le temps de thromboplastine partielle activée



1500 et le CS-2100i pour le paramètre de l’aPTT. La quasi-totalité du domaine physiologique

(20 et 120 secondes) est couvert grâce à ces valeurs. Nous observons que les résultats obtenus

sont très similaires entre le CA-1500 et le CS-2100i surtout pour les valeurs normal et basse,

mais nous avons des différences un peu plus grande dans les valeurs hautes (>70sec).

NLAB PTT -

CA-1500

PTT 1

CS-2100i

PTT 2

CS-2100i

PTT final

CS-2100i

Unité sec sec sec sec

21511-31906 28 28 28 28

21511-31815 37 36 37 37

21511-31888 33 34 34 34

21511-31876 35 35 35 35

21511-31920 31 31 31 31

21511-31857 33 33 33 33

21511-31854 29 29 29 29

21511-31917 28 27 28 28

21511-31958 28 28 28 28

21511-37787 25 24 24 24

21511-37503 28 29 29 29

21511-37247 23 25 25 25

21511-37395 31 33 33 33

21511-38808 34 33 33 33

21511-38836 33 31 32 32 < 36 sec

21511-31926 41 41 42 41

21511-31873 49 51 52 51

21511-31861 44 44 44 44

21511-31954 50 50 50 50

21511-31999 50 50 51 50

21511-31957 38 37 37 37

21511-31997 48 48 49 49

21511-37788 58 63 63 63

21511-37755 43 44 44 44

21511-37369 54 58 59 58 36 à 70 sec

21511-42302 90 99 102 100

21512-11538 82 76 77 77

21512-10547 111 114 113 113

21512-09297 118 114 115 114

21512-13566 75 75 77 76 >70 sec



26


Répétabilité (intra-série)

Pour évaluer la répétabilité pour ce test, nous avons suivi les instructions du rapport de

validation. Nous avons obtenu les résultats suivant en utilisant le Ci-Trol 1 comme plasma

échantillon. Pour ces résultats, nous remarquons que ceux-ci se trouve dans les intervalles de

référence du contrôle (30.3 – 35.5 sec) et ils s’ont aussi proches de la valeur cible (32.9 sec).

Paramètres aPTT

Ci-Tol 1

Lot 528157

2016/10/13

Unités sec

1 31

2 32

3 31

4 31

5 31

6 31

7 31

8 31

9 31

10 31

Moyenne 31

CV % 0.19

SD. 0.06



27

Reproductibilité (inter-série)

Pour évaluer, la reproductibilité de ce test nous avons suivi les instructions dictées par le

rapport de validation. Et nous avons utilisé le Ci-Trol 1 comme échantillons pour les tests.

Toutes les valeurs obtenues se situent dans l’intervalle de référence.

Paramètres aPTT

Ci-Trol 1

lot: 528157

Exp: 2016/10/13

Cible 2 SD 32.9 sec

(30.3 – 35.5 sec)

Unités sec

1 32.2

2 32.1

3 32.2

4 32.3

5 32.1

6 31.8

7 31.9

8 32.3

9 32.2

10 32.0

11 32.7

12 36.8

13 36.6

14 31.6

15 32.7

16 32.5

17 32.5

18 32.7

19 33.0

20 33.1

21 33.1

22 33.4

23 33.9

24 32.3

25 35.7

26 34.9

27 31.5

28 32.6

29 32.4

30 32.4

Moyenne 32.9

CV % 4.13

SD 1.36



28


Les résultats utilisés pour évaluer ce critère sont ceux obtenus pour la précision inter-série.

Pour l’évaluation du critère d’incertitude nous avons uniquement besoin du coefficient de

variation en pourcent et de l’écart-type mesuré.

Paramètres aPTT

Ci-Trol 1

lot: 528157

Exp: 2016/10/13

Cible 2 SD 32.9 sec

(30.3 – 35.5 sec)

Moyenne 32.9

CV % 4.13

SD 1.36


Nous avons analysé le contrôle de qualité externe envoyé par le CSCQ pour tester le

paramètre de l’aPTT. Cependant, nous n’avons pas encore reçu en retour les résultats de

l’enquête. Le résultat obtenu est de 91 secondes.



29

4.3 Pour le dosage du fibrinogène


Nous avons obtenu les résultats ci-dessous en effectuant ce comparatif patient entre le CA-

1500 et le CS-2100i pour le fibrinogène. Les résultats obtenus permettent d’avoir un panel de

valeurs couvrant la majorité du domaine physiologique (0.2 et 7.0 g/L). Les résultats obtenus

sur avec le CA-1500 et avec le CS-2100i sont très proches entre eux pour tous le domaine

physiologique testé.

NLAB Fibrinogène

CA-1500

Fibrinogène 1

CS-2100i

Fibrinogène 2

CS-2100i

Fibrinogène

final

CS-2100i

Unité g/L g/L g/L g/L

21511-39400 0.64 0.68 0.66 0.66

21511-39501 0.76 0.76 0.79 0.77

21511-42840 0.64 0.65 0.60 0.62

21511-42837 0.69 0.69 0.65 0.67

21511-42829 0.88 0.88 0.89 0.88 < 1 g/L

21512-00324 1.85 1.85 1.83 1.83

21512-00298 1.23 1.24 1.26 1.25

21512-00246 1.13 1.16 1.22 1.18

21512-00787 1.1 1.07 1.11 1.09

21512-00971 1.32 1.44 1.38 1.4 1.0 à 1.8 g/L

21511-37501 3.34 3.81 3.72 3.72

21511-37402 2.22 2.39 2.36 2.36

21511-37110 2.84 3.19 3 3.06

21511-37788 3.5 3.63 3.55 3.55

21511-37755 3.27 3.47 3.4 3.4 1.8 à 4.0 g/L

21511-38740 6.55 6.65 6.79 6.65

21512-00324 5 5.77 5.77 5.77

21511-37395 4.15 4.58 4.45 4.45

21512-00246 4.81 4.71 4.78 4.71

21512-04128 5 5.66 5.56 5.56 > 4.0 g/L



30



Pour évaluer la répétabilité de ce test nous avons suivi les mêmes instructions du rapport de

validation que pour le TP. Nous remarquons que les valeurs obtenue avec le Ci-Trol 1 sont

proches de la valeur cible (2.61 g/L).

Paramètres Fibrinogène

Ci-Tol 1

Lot 528157

2016/10/13

Unités g/L

1 2.59

2 2.59

3 2.54

4 2.63

5 2.54

6 2.63

7 2.54

8 2.59

9 2.59

10 2.63

Moyenne 2.59

CV % 1.54

SD. 0.04



31

Reproductibilité (inter-série)

Pour évaluer la reproductibilité de ce test nous avons suivi les mêmes instructions que pour le

TP. Pour ce critère, tous les résultats se situent dans l’intervalle de référence (2.41 – 2.81 g/L)

du contrôle sauf la valeur 3 (2.32 g/L) qui est en-dessous.


Ci-Trol 1

lot: 528157

Exp: 2016/10/13

Cible 2 SD 2.61 g/L

(2.41 – 2.81 g/L)

Unités g/L

1 2.59

2 2.43

3 2.32

4 2.43

5 2.54

6 2.54

7 2.50

8 2.59

9 2.50

10 2.63

11 2.59

12 2.39

13 2.54

14 2.46

15 2.63

16 2.63

17 2.46

18 2.43

19 2.54

20 2.59

21 2.54

22 2.46

23 2.54

24 2.63

25 2.46

26 2.50

27 2.43

28 2.59

29 2.59

30 2.50

Moyenne 2.52

CV % 3.17

SD 0.07



32


Pour le critère d’incertitude du fibrinogène, nous avons travaillé de la même façon que pour

les deux tests précédents (TP et aPTT). Les résultats sont ceux des critères de reproductibilité.

Pour ce critère, nous avons besoin que du coefficient de variation en pourcent (3.17 g/L) et de

l’écart-type mesuré (0.07 g/L).


Ci-Trol 1

lot: 528157

Exp: 2016/10/13

Cible 2 SD 2.61 g/L

(2.41 – 2.81 g/L)

Moyenne 2.52

CV % 3.17

SD 0.07


Le résultat obtenu pour le CQE pour l’analyse du fibrinogène est de 2.7 g/L. Cependant, nous

n’avons pas encore reçu en retour les résultats de l’évaluation pour ce contrôle.



33

4.4 Pour le dosage des D-dimères



1500 et le CS-2100i pour le dosage des D-Dimères. La gamme de résultat obtenu permet de

couvrir la quasi-totalité du domaine physiologique (50 et 10’000 μg/L). Les cinq échantillons

marque en rouge dans le tableau sont de part est d’autre de la valeur seuil (500 μg/L). De ce

faites, les résultats sont positifs pour le miniVIDAS (>500 μg/L) et négatifs sur le CS-2100i

(<500 μg/L). Nous avons également remarque des différences plus important entre les

résultats dans les valeurs hautes (> 600 μg/L).

NLAB DDEVidas DDE CS-2100

Unité μg/L μg/L

21601-28459 384 345

21601-30314 213 280

21601-38662 199 224

21601-37397 199 258

21601-45735 326 228 < 400 μg/L

21512-38386 527 451

21601-07731 490 343

21601-09401 558 342

21601-17333 529 489

11111-30144 516 479

21601-29260 414 324

21601-25177 564 684

21512-06006 493 450

21601-38994 570 569

21601-37286 593 439 entre 400 et 600 μg/L

21601-30197 1983 2368

21601-29514 1145 907

21601-29624 741 548

21601-44528 667 518

21602-00665 3442 3767 > 600 μg/L



34



Pour évaluer la répétabilité de ce test, nous avons suivi les mêmes instructions du rapport de

validation que pour le TP. Nous remarquons que les résultats obtenus se situent dans

l’intervalle de référence du contrôle (260 – 400 μg/L).

Paramètres D-dimères

Contrôle 1

lot : 560792

2017/08/17

Unités μg/L

1 315

2 309

3 309

4 333

5 326

6 344

7 313

8 339

9 363

10 304

Moyenne 326

CV % 5.8

SD. 19.03



35

Reproductibilité (inter-série))

Pour évaluer la reproductibilité de ce test, nous avons suivi les mêmes instructions que pour le

TP. Pour ce critère tous nos résultats se trouvent dans l’intervalle de référence. Nous

observons quand même de plus grande variation entre les résultats que pour les trois autres

paramètres évalués par le rapport de validation.


Contrôle 1

Lot: 560793

Exp: 2017/09/07

Cible 2 SD 330 μg/L

(260 – 400 μg/L)

Unités μg/L

1 324

2 324

3 327

4 335

5 329

6 319

7 330

8 379

9 332

10 333

11 297

12 367

13 320

14 327

15 367

16 364

17 345

18 338

19 320

20 348

21 329

22 329

23 332

24 327

25 319

26 350

27 350

28 308

29 342

30 322

Moyenne 334

CV % 5.42

SD 18.09



36


Pour les D-Dimères, nous avons suivi la procédure du rapport de validation et les résultats

obtenus sont ceux du critère de reproductibilité. Nous avons besoin uniquement du coefficient

de variation en pourcent et de l’écart-type mesuré pour évaluer ce critère.


Contrôle 1

Lot: 560793

Exp: 2017/09/07

Cible 2 SD 330 μg/L

(260 – 400 μg/L)

Moyenne 334

CV % 5.42

SD 18.09


Le dosage des D-Dimères sur le CQE a donné un résultat de 2794 μg/L.



37

5 Discussion

Dans ce chapitre, je vais d’abord commencer par présenter les différentes conditions

d’acceptabilité des résultats des différents critères de la validation. Ceci, afin d’éviter de

nombreuses répétitions inutiles tout au long de ce chapitre. Ces conditions se trouvent dans le

rapport de validation fourni par le FAMH d’hématologie de l’ICH (cf. annexe : Rapport de

validation).

Toutes les conditions citées ci-dessous sont les même quel que soit le test à valider par ce

rapport.

Critère de comparaison :

Pour valider le critère de comparaison, il faut effectuer un graphique de type régression selon

Passing Bablock à l’aide des résultats patients obtenus sur les deux appareils. La régression

selon Passing Bablock est un modèle mathématique utilisé pour trouver une relation linéaire

entre deux techniques de mesure (32). Les valeurs de l’appareil de référence (CA-1500) se

trouvent en abscisse et les valeurs obtenues sur le CS-2100i (valeurs finales) se trouvent en

ordonnée. Pour pouvoir valider le paramètre, la pente de la droite formée par les résultats

obtenus doit être comprise entre 0.9 et 1.1, donc proche de 1. La raison d’une telle valeur

repose sur le fait que si nous traçons une droit avec des valeurs identiques pour x et y (des

résultats identiques sur les deux appareils), la droite possèderait alors une pente égale à 1.

Pour valider la comparaison, il faut aussi que le coefficient de corrélation soit supérieur à 0.9.

Celui-ci est le reflet de la dispersion des résultats autour de la droite de régression. (32)

Critère de précision :

Le critère de précision est divisé en deux sous-critères qui sont la répétabilité et la

reproductibilité. Lors de la validation des résultats obtenus à l’aide des échantillons contrôles

(Ci-Trol1 et Innovance contrôle D-Dimères 1), ceux-ci sont soumis à la même condition.

Cette dernière est que la valeur B doit être inférieure à la valeur A pour que le paramètre soit

jugé acceptable. La valeur A correspond à la Tolérance QUALAB qui est définie par le

CSCQ (3s). Cette Tolérance QUALAB est obtenue en multipliant la moyenne des dix valeurs

mesurées par la tolérance CQI QUALAB (en pourcent), le résultat final est ensuite divisé par

100. La valeur B correspond à la Tolérance calculée selon la règle des 3 écarts-types. Elle est

obtenue en multipliant l’écart-type mesuré lors des tests par 3.

Critère d’exactitude :

Pour évaluer le critère d’exactitude, nous devons effectuer deux contrôles de qualité externe

(CQE) différent pour le Centre Suisse de Contrôle de Qualité (CSCQ). Une fois le CQE

exécuté et les valeurs renvoyées à l’organisme responsable de l’enquête, nous devons attendre

les résultats en retour afin de les comparer avec les valeurs obtenues. Nous devons ensuite

calculer le biais en pourcent (biais %) obtenu et celui-ci doit être inférieur à la tolérance

QUALAB en pourcent.

Biais % = ((valeur obtenue - valeur vrai)/ valeur vrai) x 100

La valeur vraie correspond au résultat rendu par le CSCQ pour le CQE.

Critère d’incertitude :



38

Pour évaluer l’incertitude de mesure, nous devons nous baser sur le coefficient de variation en

pourcent (CV %) calculé à l’aide du passage des contrôles (Ci-Trol1 et Innovance contrôle D-

Dimères 1) sur trente jours. Le CV% est calculé à partir de la moyenne et de l’écart-type.

CV% = (moyenne/ écart-type) x 100

5.1 Interprétation pour le TP


Nous avons obtenu le graphique suivant pour le TP après avoir entré les résultats dans le

programme Methode validator et avoir sélectionné le type de graphique (Passing Bablock en

droite de régression).

Figure 14: Passing Bablock pour le TP

Pour mon graphique, la pente de la droite de régression est égale à 1.000 donc dans

l’intervalle demandé par le rapport de validation (entre 0.9 et 1.1). Le coefficient de

corrélation est quant à lui égal à 0.999. Comme pour la pente, la valeur obtenue correspond

aux critères du rapport de validation.



39

Pour l’INR, le graphique pour le Passing Bablock en droite de régression est le suivant.

Figure 15: Passing Bablock pour l'INR

La pente est égale à 1.000 et le coefficient de corrélation est équivalent à 0.997. Les deux

résultats se trouvent dans les intervalles de référence dictés par le rapport de validation.


Répétabilité

Analytes Unités Tolérance

QUALAB

en %

Moyenne A* SD

mesuré

B*

TP % 15 105 15.75 1.09 3.27

INR 15 0.98 0.147 0.00 0.00

A : (moyenne des valeurs mesurées X la tolérance QUALAB %) / 100

B : SD mesuré X 3

Nous pouvons dire que le critère de répétabilité est acceptable pour le TP en pourcent et pour

l’INR, car la valeur B et bien inférieure à la valeur A.



40

Reproductibilité

Analyte Unités Cible

fabricant

Tolérance

fabricant

Tolérance

QUALAB

en %

Moyenne A* SD

mesuré B*

TP % 105 4.2 15 103.8 15.57 2.31 6.93

INR 0.98 0.04 15 1.00 0.15 0.01 0.03

A : (moyenne des valeurs mesurées x la tolérance QUALAB) / 100

B : SD mesuré x 3

Pour le TP en pourcent et l’INR, le critère dicté par le rapport de validation (B<A) est

acceptable au vu des résultats obtenus lors de ce test.

5.1.3 Critère d’exactitude

Analyte organisme Enquête/

date

Unités Résultat cible Biais % Tolérance %

TP CSCQ 01.03.2016 % 27 15

INR 2.3 15

TP CSCQ %

INR

Pour ce test, nous n’avons pas encore reçu de résultats en retour de la part du CSCQ. Nous ne

pouvons donc pas évaluer ce critère pour le moment.


Analyte Unités Moyenne CV% SD mesuré 2 SD n

TP % 103.8 2.22 2.31 4.61 30

INR 1.00 1.00 0.01 0.02 30

Nous avons effectué l’analyse pour le TP en pourcent et pour l’INR. Pour les deux, nous

avons des CV% inférieurs à 10 %. Les résultats obtenus sont acceptables.



41

5.2 Interprétation pour l’aPTT


Après avoir entré les résultats obtenus pour l’aPTT dans le programme Methode validator,

nous avons obtenu le graphique suivant pour le Passing Bablock en droite de régression.

Figure 16: Passing Bablock pour l'aPTT

La pente de la droite de régression est égale à 1.000 et le coefficient de corrélation est égal à

0.994. Pour ces deux critères, les résultats obtenus se trouvent dans les intervalles indiqués

dans le rapport de validation.


Répétabilité


QUALAB

en %

Moyenne A* SD

mesuré

B*

aPTT sec 25 31 7.75 0.06 0.18

A : (moyenne des valeurs mesurées X la tolérance QUALAB) / 100

B : SD mesuré X 3

Si nous nous référons à la condition de validation des résultats (B<A), nous pouvons dire que

nos résultats sont bons car la valeur B (0.18) est inférieure à la valeur A (7.75).



42

Reproductibilité


fabricant

Tolérance

fabricant

Tolérance

QUALAB

en %

Moyenne A* SD

mesuré B*

aPTT sec 32.9 1.3 25 32.9 8.26 1.36 4.08


B : SD mesuré X 3

Pour ce critère, les résultats sont acceptés car après avoir calculé les valeurs A et B, celles-ci

correspondent à la condition (B<A) posée dans le rapport de validation.



date

Unités Résultat cible Biais % Tolérance %

aPTT CSCQ 01.03.2016 sec 91 25

aPTT CSCQ sec 25

Pour ce test, n’ayant pas encore reçu les résultats en retour de la par du CSCQ. Nous ne

sommes actuellement pas en mesure d’évaluer ce critère.


Analyte Unités Moyenne CV% SD mesuré 2 SD N

aPTT sec 32.9 4.13 1.36 2.72 30

Le CV% obtenu pour ce test est inférieur à 10%, nous pouvons donc dire que celui-ci est

acceptable.



43

5.3 Interprétation pour le taux de fibrinogène


Le graphique Passing Bablock en droite de régression obtenu avec les résultats du fibrinogène

est le suivant.

Figure 17: Passing Bablock pour le fibrinogène

La pente de la droite de régression est égale à 1.084, la valeur se trouve donc dans les

intervalles de référence. Le coefficient de corrélation quant à lui est égal à 0.996, donc

supérieur à 0.9 comme indiqué dans les critères de validation du rapport.


Répétabilité


QUALAB

en %

Moyenne A* SD

mesuré

B*

Fibrinogène g/L 15 2.59 0.389 0.04 0.12


B : SD mesuré X 3

Pour ce critère, nous pouvons dire que le résultat est acceptable car il correspond à la

condition de validation du rapport.



44

Reproductibilité


fabricant

Tolérance

fabricant

Tolérance

QUALAB

en %

Moyenne A* SD

mesuré B*

Fibrino

gène

g/L 2.61 0.1 15 2.52 0.378 0.08 0.24


B : SD mesuré X 3

Nous pouvons définir ce critère comme acceptable puisque la valeur B (0.24) est inférieure à

la valeur A (0.378).



date

Unités Résultat cible Biais

%

Tolérance

%

Fibrinogène CSCQ 01.03.2016 g/L 2.7 15

Fibrinogène CSCQ g/L 15





Fibrinogène g/L 2.52 3.17 0.07 0.16 30

Le coefficient de variation (en pourcent) est inférieur à 10%, nous pouvons donc le définir

comme acceptable.



45

5.4 Interprétation pour les D-Dimères


Le graphique Passing Bablock obtenu avec les résultats pour les D-dimères est le suivant.

Figure 18: Passing Bablock pour le D-Dimère

La pente de la droite de régression a pour valeur 0.963. Cette valeur se situe dans les

intervalles de référence indiqués dans le rapport de validation. Pour le coefficient de

corrélation, j’ai obtenu 0.988. La valeur du coefficient de corrélation est bien supérieure à 0.9

comme précisé dans le rapport de validation.

Par contre, pour cinq des dix échantillons dont la valeur est proche de la valeur seuil (cut-off à

500 μg/L), nous avons obtenu des résultats inférieurs à 500 μg/L sur le CS-2100. Sur le

miniVIDAS ceux-ci était supérieurs au seuil. Après avoir observé les indications cliniques

pour les différents patients nous nous sommes rendu compte qu’aucun de ceux-ci ne

présentaient de thrombose ou d’embolie.

Nous avons aussi remarqué des différences dans les résultats des valeurs hautes. Après avoir

effectué des recherches, nous avons trouvé que les anticorps-hétérophiles peuvent provoquer

ce genre d’interférence. Suite à des téléphone avec Siemens, ceux-ci nous ont confirmé que ca

pouvait être le cas.

Les anticorps hétérophiles sont des anticorps humains capables de réagir avec les anticorps

présents dans les réactifs des tests immunologiques. Il en existe plusieurs types qui sont : les

anticorps humains anti-animaux, les anticorps humains anti-idiotypes et les facteurs

rhumatoïdes. Ces trois types d’anticorps réagissent avec des parties différentes de l’anticorps

du réactif. Ils réagissent soit avec la portion Fc, soit avec la portion Fab. Ces anticorps ont



46

donc la capacité de modifier les résultats des dosages immunologique dans des sens différents

(fausse augmentation ou fausse diminution du résultat). Les fabricants peuvent rajouter dans

les kits réactifs des agents bloquants capables de diminuer les interférences produites par ces

anticorps. Pour le CS-2100i, le kit de réactifs du dosage des D-Dimères a été conçu pour

limiter au maximum les interférences avec des anticorps hétérophiles, mais il n’y a pas de

précision si des agents bloquants, on été utilisé dans le kit. Par contre pour les réactifs du

miniVIDAS, il est précisé que des plasmas patients contenant des anticorps dirigés contre des

composants du réactif peuvent causer des interférences, mais aussi que les facteurs

rhumatoïdes ne font pas d’interférences jusqu’à une concentration de 400 UI/ml. (33) (34)

Malgré la présence d’interférences dans les valeurs hautes (>600 μg/L), nous pouvons utiliser

les résultats. Car ce qui est important avec le dosage des D-Dimères c’est de savoir si le

résultat est supérieur ou inférieur au cut-off (500 μg/L).


Répétabilité


QUALAB

en %

Moyenne A* SD

mesuré

B*

D-Dimères μg/L 21 326 68.46 19.03 57.09


B : SD mesuré X 3

Le critère de répétabilité peut être accepté car les résultats obtenus pour A et B respectent la

condition du rapport de validation.

Reproductibilité


fabricant

Tolérance

fabricant

Tolérance

QUALAB

en %

Moyenne A* SD

mesuré B*

D-

Dimères

μg/L 330 20 21 334 70.14 18.09 54.

27


B : SD mesuré X 3

Pour ce critère la valeur B (54.27) est inférieure à la valeur A (70.14), nous pouvons donc

accepter les résultats.



date

Unités Résultat cible Biais

%

Tolérance

%

D-Dimères CSCQ 01.03.2016 μg/L 2794 21

D-Dimères CSCQ μg/L 21





47



D-Dimères μg/L 334 5.42 18.09 36.18 30

Le CV% obtenu est inférieur à 10%. Nous pouvons donc le définir comme acceptable.

6 Conclusion Ce travail a pour but de valider les quatre tests d’hémostase sur le CS-2100i de chez Siemens,

en les comparants avec les tests effectués sur les appareils de référence qui sont le CA-1500

de chez Siemens et le miniVIDAS de chez Biomérieux.

Pour résumer, nous avons défini les différents critères comme corrects. Pour la comparaison

toutes les pentes sont entre 0.9 et 1.1 et tous les coefficients de corrélation sont supérieurs à

0.9. Pour la répétabilité (précision intra-série) et pour la reproductibilité (précision inter-

série), les résultats sont aussi définis comme corrects. Pour le critère d’exactitude, nous

n’avons pas pu évaluer les résultats car l’évaluation de ce critère n’est pas encore terminée. Et

finalement pour l’incertitude de mesure est correct pour les quatre paramètres à évaluer.

Nous avons rencontré plusieurs problèmes. Tous d’abord, nous avons eu de la difficulté à

obtenir des échantillons patients dont les résultats étaient dans les valeurs basses (<20%) pour

le TP, ou dans les valeurs hautes pour l’aPTT (>70sec), le fibrinogène (4.0g/L) et les D-

Dimère (>600 μg/L). Deuxièmement, nous nous sommes retrouvés face à des résultats pour

les D-Dimères dont la signification clinique différait. Les résultats se trouvaient de part et

d’autre du cut-off en fonction de l’appareil utilisé. Après une analyse des différents cas

problématiques, nous nous sommes rendu compte que pour aucun d’entre eux, il n’y avait pas

de présence de thrombose ou d’embolie. En conclusion, nous pouvons affirmer que le CS-

2100i est plus fiable que le miniVIDAS car les résultats qu’il a rendus pour ces différents

patients correspondaient à la clinique du patient. Troisièmement les écarts dans les résultats

des valeurs hautes des D-Dimères, sont en partie expliqués par la problématique des

interférences avec des anticorps hétérophiles. Mais dans ces cas, les résultats sont fiables et

peuvent être rendus au médecin car de toute façon supérieur au cut-off.

Nous avons donc pu valider les quatre paramètres. De plus, nous avons pu mettre en route les

tests (TP, aPTT et fibrinogène) en routine à partir du 06 janvier 2016. Pour les D-Dimères,

nous l’avons fait à partir du 1er mars 2016. C’est le Dr. Pierre-Yves Lovey, responsable

FAMH d’hématologie au laboratoire de Martigny qui a validé nos résultats obtenus pour le

rapport de validation.

D’un point de vue personnel, ce travail de diplôme m’a permis de mettre en pratique et de

mieux comprendre beaucoup de notions théoriques d’hémostase. Mais aussi de pouvoir

travailler sur un projet de manière autonome tout en étant sous la supervision de Madame

Gianinetti et de Monsieur Sarrasin en cas de besoin. De plus cela m’a permis de bien

connaître le mode de fonctionnement de l’appareil en travaillant avec régulièrement et en

devant résoudre quelques problèmes rencontrés lors de l’utilisation. Pour conclure, je peux

dire que ce travail de diplôme a été une expérience très enrichissante pour moi.



48

Remerciements J’adresse mes remerciements aux personnes qui m’ont aidé pour la réalisation de mon travail

de diplôme.

En premier lieu je remercie Madame Gianinetti, TAB cheffe. En tant que référant pour mon

travail de diplôme, elle m’a aiguillée pour la pratique à effectuer et pour les améliorations à

faire sur mon dossier. Et Monsieur Sarrasin, TAB responsable, qui m’a fourni une aide pour

la pratique et pour mes différentes questions théoriques.

En second lieu je tiens à remercier Madame Badoux pour le temps qu’elle a consacré à la

relecture et à la correction de mon travail.

Et finalement, je remercie toutes l’équipe du laboratoire de Martigny pour le temps qu’ils

m’ont consacré ainsi que pour l’expérience qu’ils m’ont transmise tous au long de mon stage.

Lexique Hémostase : Processus physiologique permettant l’arrêt d’une hémorragie.

Fibrinolyse : Processus aboutissant à la destruction de caillot de fibrine.

Tests hépatiques : Analyses de laboratoire permettant de voir s’il y a un problème ou non au

niveau du foie.

Méthode immunologique : Méthode dont le principe de mesure se repose sur la détection

d’une réaction antigène-anticorps.

Méthode chromogénique : Méthode dont le principe de mesure se repose sur la détection d’un

produit coloré obtenu après une réaction chimique.

Méthode turbidimétrique : Méthode de mesure dont le principe repose sur la détection d’un

trouble dans le liquide à mesurer.

Méthode néphélémétrique : Méthode de mesure dont le principe de détection repose sur la

mesure de la lumière diffusée perpendiculairement à la lumière entrant dans la cuve de

réaction.



49

Bibliographie 1. Hôpital du Valais. Laboratoire, Institut Centrale des Hôpitaux (ICH). [En ligne] [Citation :

18 02 2016.] http://www.hopitalduvalais.ch/fr/professionnels-de-la-sante/institut-central-

ichv/laboratoires.html.

2. Dr. J.Noetzli, Mme Elena Guirao, Dr. Elena Bianchi et Dr. Sabine Blum. Cours

d'hémostase. CHUV Lausanne : s.n., 2014-2015. p. 3.

3. —. Cours d'hémostase. CHUV Lausanne : s.n., 2014-2015. pp. 3-8.

4. —. Cours d'hémostase. CHUV Lausanne : s.n., 2014-2015. pp. 9-15.

5. Barelli, Stefano. Troubles de l'hémostase. romande.labmed.ch. [En ligne] 04 03 2013.

[Citation : 25 01 2016.]

http://romande.labmed.ch/fileadmin/redaktion/zz_testbild/Romandie/pdf/Kursunterlagen/201

3_03_04_Barelli.pdf.

6. Vincentbourquin.files.wordpress. [En ligne] 05 2013. [Citation : 17 03 2016.]

https://vincentbourquin.files.wordpress.com/2013/05/capture-d_c3a9cran-2013-05-08-c3a0-

17-28-52.png?w=630.


d'hémostase. Chuv Lausanne : s.n., 2014-2015. pp. 21-27.

8. Matthey-Guirao, Elena. Hémostase: Exploration de la coagulation 1-2. Lausanne : s.n.,

2014. pp. 5-22.

9. Angelillo-Scherrer, Anne. Maladies hémorragiques résultant de déficits factoriels. 2008-

2009. p. 38.

10. Hôpitaux universitaires de Genève. hug-ge.ch. Votre traitement anticoagulant par AVK

(antivitamines K). [En ligne] août 2013. [Citation : 29 02 2016.] http://www.hug-

ge.ch/sites/interhug/files/documents/avk_08_13.pdf. Réf. 435383.

11. Products, Siemens Healthcare Diagnostics. Pathromtin® SL.

12. —. Solution de chlorure de Calcium Cacl2. 2012.


2014. pp. 24-30.

14. Alberio, S. Blum et L. Anticoagulants. 2015. pp. 1-8.


2014. pp. 37-42.


d'hémostase. Chuv Lausanne : s.n., 2014-2015. p. 16.

17. —. cours d'hémostase. CHUV Lausanne : s.n., 2014-2015. p. 76.

18. Products, Siemens Healthcare Diagnostics. Innovance D-Dimer. 2013.



50

19. Sysmex, Scientific Research Division. CS-2000i/CS-2100i- Evaluation and check

algorithm. 2011. p. 5.

20. —. CS-2000i/CS-2100i- Evaluation and check algorithm. 2011. pp. 9-11.

21. Sysmex. Operator's manual (mode d'emploi). 2012. pp. 1-6 .

22. —. Operator's manual (mode d'emploi). 2012. pp. 9-1 à 9-9.

23. Sysmex, Scientific Research Division. CS-2000i/CS-2100i- Evaluation and check

algorithm. 2011. pp. 20-23.

24. Gianinetti, Céline. PV du colloque du 25.02.2016. Martigny : s.n., 2016.

25. Products, Siemens Healthcare Diagnostics. Dade® Innovin®. 2012.

26. PRoducts, Siemens Healthcare Diagnostics. Dade® réactifs thrombine. 2014.

27. Products, Siemens Healthcare Diagnostics. Dade® Tampon véronal d'Owren. 2012.

28. Sysmex®. Manuel de formation. 2005. pp. 7-11.

29. Sysmex. Manuel d'utilisation du système Sysmex CA-1500. 2002. pp. 10-1 à 10-10-5.

30. ICHV. VIDAS. 24 04 2015. Réf.GU-0470.

31. Biomérieux. VIDAS® D-Dimer Exclusion II. 2015.

32. Bystranowski, G. Cours sur l'évaluation d'une méthode.

33. J.A. Rouvière, J. Devignes, E. de Maistre, A. Kennel, F. Chabot et T. Lecompte.

Incohérence entre deux méthodes de dosage des D-dimères: un cas d'interférence d'anticorps

humain anti-souris. John Libbey Eurotext. [En ligne] juillet- août 2008. [Citation : 25 01

2016.] http://www.jle.com/fr/revues/abc/e-

docs/incoherence_entre_deux_methodes_de_dosage_des_d_dimeres_un_cas_dinterference_d

anticorps_humain_anti_souris_278314/article.phtml?tab=texte.

34. Lepage, Raymond. Les problèmes de réactivité croisée et d'interférence hétérophiles

dans les tests immunologiques. sqbc. [En ligne] 2005. [Citation : 25 01 2016.]

sqbc.qc.ca/home/tiki-download_file.php?fileId=87 ·.



51

Annexes

RAPPORT DE VALIDATION DU CS-2100

Site de Martigny

Version du 07.04.2016



52

Rédigé par : Céline Gianinetti Date : 2015-12-21 Approuvé par : Dr. Lovey Date :

VALIDATION VERIFICATION

Objectifs

L’objectif de ce rapport est de vérifier l’appareil d’hémostase CS-2100 de la maison Siemens.

Cet automate remplacera les CA-1500 des sites de Sierre, Martigny, Monthey. Le CS-2100

sera également installé sur les sites de Montreux et Vevey et sera utilisé comme appareil de

back-up sur le site de Sion.

Domaine d’application et responsabilités

Domaine d’application et choix de la méthode

Les paramètres concernés sont : TP, aPTT, fibrinogène et D-Dimères. Si d’autres paramètres

sont installés par la suite, ils feront l’objet de validations individuelles.

La vérification/validation du CS-2100 est effectuée comparativement à l’automate CA-1500

pour les sites de Sierre, Martigny, Monthey, Montreux et Vevey, à l’automate CS-5100 pour

le site de Sion. Les contrôles internes et externes employés pour l’évaluation des

performances analytiques ainsi que les critères de réussites sont spécifiés dans la procédure

d’évaluation.

Responsabilité

Céline Gianinetti est responsable de l’évaluation en collaboration avec Etienne Sarrasin. Elle

assure également le suivi du présent rapport d’entente avec le FAMH responsable

d’hématologie, Dr Pierre-Yves Lovey.

Installation et formation

L’automate a été installé le 19.11.2015 par le technicien de la maison Siemens, Danilo

Mazzarela. Une formation a été donnée par Caroline Cassayre le 20.11.2015 pour Céline

Gianinetti et Etienne Sarrasin.

Procédure et critères d’acceptabilité

Critères de précision

La précision intra-série (répétabilité), déterminée sur au moins 10 mesures consécutives du

même échantillon, et la précision inter-série (reproductibilité), déterminée sur les résultats

d’un CQI mesuré une fois par jour sont évaluées par :

A : Tolérance QUALAB définie par le CSCQ (3s) = moyenne des 10 valeurs mesurées x

tolérance CQI QUALAB (%).

B : Tolérance calculée (selon règle 3s) = écart-type mesuré x 3



53

Les résultats sont définis acceptables si :

B < A

L’incertitude de mesure pour chaque paramètre sera établie par le passage d’au moins 30

contrôles et sur la base du coefficient de variation en %.

Critères d’exactitude

L’exactitude de la méthode sera déterminée par la comparaison avec les résultats des 2

prochains CQE du CSCQ pour le TP, aPTT, fibrinogène et D-Dimères.

Le résultat est considéré comme conforme si la différence avec la valeur cible, exprimée en %

est inférieure à la tolérance de la QUALAB sur les CQE.

Critères de comparaison

La procédure prévue est la suivante :

TP : passage de 30 échantillons compris entre 0 et 120% :

10 échantillons dont les valeurs sont >70%

10 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 20 et 70%

10 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 0 et 20%.

aPTT : passage de 30 échantillons compris entre 20 et 120 secondes :

15 échantillons dont les valeurs sont <36 sec

10 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 36 et 70 sec

5 échantillons dont les valeurs sont >70 sec.

Fibrinogène : passage de 20 échantillons compris 0,2 et 7,0 g/L :

5 échantillons dont les valeurs sont <1,0 g/L

5 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 1,0 et 1,8 g/L

5 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 1,8 et 4,0 g/L

5 échantillons dont les valeurs sont >4,0 g/L.

D-Dimères : passage de 20 échantillons entre 50 et 10'000 µg/L :

5 échantillons dont les valeurs sont <400 µg/L

10 échantillons dont les valeurs comprises entre 400 et 600 µg/L

5 échantillons dont les valeurs sont >600 µg/L.

La comparaison des valeurs des différents paramètres est validée si la pente déterminée selon

le Passing-Bablok a une valeur d’environ 1 (comprise entre 0,9 et 1,1).

Le coefficient de corrélation doit être > 0,9.

Incertitudes de mesures

L’incertitude de mesure pour chaque paramètre sera établie par le passage d’au moins 30

contrôles et sur la base du coefficient de variation en % et du SD mesuré.

Performances de la méthode

La validation s’est déroulée du 23.11.2015 au 18.12.2015.



54

Précision

La précision intra-série a été déterminée à partir de l’échantillon : Citrol 1, lot 528157, exp : 2016-10-13 pour TP, INR, aPTT et fibrinogène. Innovance DDE C1, lot 560792, exp : 2017-08-17 pour D-Dimères.

Analytes Unités Tolérance QUALAB

en %

Moyenne A : moyenne des valeurs mesurées x tolérance QUALAB

SD mesuré B : SD mesuré x 3

TP % 15 105 15.75 1.09 3.27

INR 15 0.98 0.147 0.00 0.00

aPTT sec 25 31 7.75 0.06 0.18

Fibrinogène g/L 15 2.59 0.389 0.04 0.12

D-Dimères µg/L 21 326 68.46 19.03 57.09

La précision inter-série a été déterminée à partir d’un CQI pour chaque paramètre. Citrol 1, lot 528157, exp : 2016-10-13 pour TP, INR, aPTT et fibrinogène. Innovance DDE C1, lot 560793, exp : 2017-09-07 pour D-Dimères.

Analytes Unités Cible fabricant

Tolérance fabricant

Tolérance QUALAB

en %

Moyenne A : moyenne des valeurs mesurées x tolérance QUALAB

SD mesuré

B : SD mesuré

x 3

TP % 105 4.2 15 103.8 15.57 2.31 6.93

INR 0.98 0.04 15 1.00 0.15 0.01 0.03

aPTT sec 32.9 1.3 25 32.9 8.255 1.36 4.08

Fibrinogène g/L 2.61 0.1 15 2.52 0.378 0.08 0.24

D-Dimères µg/L 330 20 21 334 70.14 18.09 54.27

Exactitude

L’exactitude a été déterminée par évaluation du biais systématique de nos résultats obtenus

par rapport aux valeurs cibles définies dans les tests d’aptitude suivants :

Analytes Organisme Enquête/ date

Unités Résultat Cible Biais % Tolérance % (Q) QUALAB (C) CSCQ

TP CSCQ 2016-03 % 27 15

INR 2.3 15

aPTT CSCQ 2016-03 sec 91 25

Fibrinogène CSCQ 2016-03 g/L 2.7 15

D-Dimères CSCQ 2016-03 µg/L 1567 21

TP CSCQ % 15

INR 15

aPTT CSCQ sec 25

Fibrinogène CSCQ g/L 15

D-Dimères CSCQ µg/L 21



55

Comparaison

La comparaison des résultats pour TP (% et INR), aPTT (sec), fibrinogène (g/L) et D-

Dimères (µg/L) nous montre les pentes de régression et coefficients de corrélation suivants :

Paramètres Unités Pente de la droite de

régression Coefficient de corrélation

TP % 1.000 0.999

INR 1.000 0.997

aPTT sec 1.000 0.994

Fibrinogène g/L 1.084 0.996

D-Dimères µg/L 0.963 0.988

Incertitudes de mesures

Les résultats des contrôles, au moins 30 passages, ont servi à établir les incertitudes de

mesure pour chaque paramètre. Citrol 1, lot 528157, exp : 2016-10-13 pour TP, INR, aPTT et fibrinogène. Innovance DDE C1, lot 560793, exp : 2017-09-07 pour D-Dimères

Analytes Unités Moyenne CV% SD mesuré

2SD n

TP % 103.8 2.22 2.31 4.61 30

INR 1.00 1.00 0.01 0.02 30

aPTT sec 32.9 4.13 1.36 2.72 30

Fibrinogène g/L 2.52 3.17 0.08 0.16 30

D-Dimères µg/L 334 5.42 18.09 36.18 30

Commentaires

Précision

La précision intra-série sur un même échantillon nous montre des résultats corrects.

La précision inter-série déterminée à partir des contrôles de qualité interne nous montre

également des résultats corrects.

L’exactitude déterminée sur les CQE du xxx nous montre également des résultats excellents,

corrects, (à sélectionner) puisque les différences en % sont inférieures, limite (à sélectionner)

à la tolérance QUALAB.

Comparaison

Le CS-2100 donne des résultats pour TP, aPTT, fibrinogène et D-Dimères en correcte

corrélation (coefficient ≥ 0.9) à ceux du CA-1500 (TP. aPTT, FG) et MiniVidas (DDE).

Les différentes pentes de la droite de régression sont comprises entre 1.00 et 1.084.

Cependant, sur 10 échantillons dont les résultats se trouvent proche du cut-off de 500µ g/L, 5

résultats obtenus avec le CS-2100 sont inférieurs à 500 alors qu’ils sont supérieurs à 500 avec

le MiniVidas. La consultation de leur dossier clinique n’a révélé aucune thrombose alors

qu’aucun examen radiologique n’a été réalisé pour l’exclure et que les médecins ont reçu le

résultat du MiniVidas. Les diagnostics étaient : probable fracture de côte, épigastralgie,

hypertension dans un contexte anxieux, douleurs abdominales.



56

Conclusion

Les tests ont été validés le 05.01.2016 par le Dr Pierre-Yves Lovey, responsable FAMH

d’hématologie. L’automate a été mis en production le 06.01.2016 pour le TP, aPTT et

fibrinogène et le 01.03.2016 pour les D-Dimères

Références et documents annexes

Documents associés

Résultats des tests pour la corrélation entre le CS-2100 et le CA-1500

Résultats des passages des contrôles.

Ces résultats sont annexés au présent rapport sur Intraqual Dynamic.

Littérature

1) QUALAB : Directive pour le contrôle de qualité interne

2) QUALAB : Contrôle de qualité externe obligatoire

3) Office fédéral de métrologie, « Validation de méthodes d’essais », Document n° 706.f,

Edition du 14 août 1996.