Diaz Arias Laura Rodriguez Muoz Sintia

DIPLOMADO EN HEMATOLOGA Y BANCO DE SANGREMDULO IV (13 de Setiembre de 2015)CLASE 3

PRUEBAS PRETRASFUSIONALES

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DEFINICION Las pruebas prestransfuncionales son pruebas inmunohematologicas cuyo principio es la hemaglutinacin y su objetivo principal es evitar la destruccin intravascular de los hemates en un receptor.Objetivo: Transfundir al paciente hemoconponentes de excelente calidad , para evitar el contagio de enfermedades infeccionas y reacciones postransfuncionlaes.3

PRINCIPIOS INMUNOLOGICOS DE LA TRASFUSION Las clulas sanguneas , eritrocitos, leucocitos y plaquetas( en su membrana tiene protenas o polisacridos que pueden actuar con Ag y provocar Ac en las personas que carecen de ellos.Al .Antieritrocitario : Ac contra Ag ERITROCITARIOS.Al. Antiplaquetaria : Ac contra Ag de las PLAQUETAS. A Este fenmeno se le denomina aloinmunizacion.

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Los Ac pueden aparecer de forma natural ( los Ac contra Ag del sistema ABO que aparecen en todos los individuos) o provocados por trasfusin o embarazo.

A los Ac Aloinmunes contra Ag eritrocitarios diferentes a los del sistema ABO , se les denomina ANTICUERPOS IRREGULARES.

La destruccin de las clulas trasfundidas que son causadas por los Ac del receptor es una reaccin inmunolgica del organismo.5

Consecuencia clnica de la aloinmunizacion Depende el tipo de Ac( IgG o Ig M ).Los Ac ERITROCITARIOS producen reaccin hemoltica inmediata grave ( Ac ABO).MENOS grave o retardada ( Ac frente a otros Ag) y enfermedad hemoltica del recin nacido.EN caso de Ac anti plaquetaria puede provocar reacciones febriles transfusionales, refractariedad plaquetaria ( Ac HLA o propios de las plaquetas ) y purpura neonatal inmune.

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PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD (Pcom)

Sirve para evitar la reaccin hemoltica aguda y aseguran la compatibilidad entre donante-receptor.Las pruebas analticas de laboratorio detectan posibles Ac en el receptor con Ag de las clulas trasfundidas: - Grupo sanguneo y RH - Detencin de anticuerpos irregulares - Pruebas cruzadas mayor o menor segn sea el caso.7

Lo mas comn se realiza entre el suero del receptor y clulas rojas del donante e investigan la presencia de posibles Ac en suero mediante su reaccin en diferentes medios fsicos - qumicos.Para detencin de una reaccin hemoltica en casos de incompatibilidad eritrocitaria y la facilidad tcnica para realizar la Pcom con hemates , estas se llevan acabo en los casos de la transfusin .8

GRUPO SANGUINEO Los grupos sanguneos se dividen en: Grupo hemtico, constituido por Ag eritrocitarios Grupo srico, constituido por Ac antieritrocitarios Estos grupos constituyen el sistema ABO y el sistema RH .

Otros grupos sanguneos: Sistema MNS, Sistema Duffy, Sistema P, Sistema Lutheran (Lu), Sistema Kell, Sistema Lewis,Sistema Kidd (Jk), Sistema Fisher, Sistema I.9

SISTEM ABO10

FACTOR RHEs una protena adicional que puede estar presente en la membrana de los hemates .Cuando una persona tiene esta proteina se le considera RH positivo pero si esta ausente RH negativo.El RH esta constituido por un complejo de seis antgenos fundamentales, formados por tres pares de genes alelos : - Cc - Dd - Ee11

El antgeno de mayor poder de sensibilizacion es el D y le sigue en importancia el e y el E.12

ANTIGENO DUAg DU : Es una variable dbil del Ag D, poco frecuente pero es comn en los individuos de raza Negra(22%). Este Ag da reacciones dbiles o Negativas con el Ac anti D siendo detectado por la prueba indirecta de la antiglobulina Coombs.Clasificacin: - Variante Du debil - Du adquirido - Du hereditario13

Tcnica DUVerificar grupo Rh (-) Lavar 3 veces GR del paciente a 1000 r.p.m por1 min.Tubo : Agregar dos gotas de suspensin de GR al 5 % del paciente + 2 gotas de Anti D . Mezclar y centrifugar a 1000 r.p.m por 1 min.Incubar a 37 c por 30 min. Centrifugar Lavar 3 veces con S.S.F En el tercer lavado decantar el sobrenadante , agregar 2 gotas de Ig GC3d centrifugar y observar.

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INTERPRETACION

AGLUTINACION: POSITIVONO AGLUTINA :NEGATIVO

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DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO ABO/RHA) DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO EN TUBO:Objetivo: Detencin de grupos sanguneos. 1)Se coge tres tubos de ensayo y se rotulan con :A ,B y D.2 ) Con ayuda de una pipeta Pasteur se echa una gota de sangre diluida al 5% en cada tubo .3) Se aade 1 gotas de Rvo Anti A al tubo A , B al tubo B Y Anti D al tubo D.4) Se mezcla centrifuga por 1min. A 1000 r.p.m observar aglutinacin.16

Interpretacin: :Presencia de aglutinacin la reaccin un botn en la base del tubo indica positivo en este caso A POSITIVO17

PRUEBA SERICA ,INVERSA O REVERSASu principio es la hemaglutinacin y su objetivo es determinar la presencia o ausencia de Ac Anti A y Anti B en suero es una confirmacin cruzada del grupo globular directo.

PREPARACION:Seleccionar GR del grupo A y GR del grupo B.Lavar 3 veces con S.S.F a 1000 r.p.m por 1 min.Hacer dilucin al 2 5 % con S.S.F.18

METODO EN FASE SERICARotular 2 tubos como A y BAgregar 2 gotas (100 ul) de suero del paciente a cada tubo.Al tubo A agregar 1 gota ( 50ul) de clulas A y al tubo B , Tambin y mezclar.Centrifugar por 1 min. 1000 r.p.mObservar: SI hay aglutinacin y/o hemolisis , re suspendiendo el botn de clulas del fondo del tubo.Estabilidad al 100% 48 horas a 4 c.

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GRUPO INVERSO EN TARJETA

AGLUTINACION :APOSITIVO igual 4+AUSENCIA DE AGLUTINACION : NEGATIVO20

FENOTIPIFICACION DE RH21

PRUEBAS CRUZADAS22

PRUBA CRUZADA MAYOR23

CONCEPTO24

Los hemates y el suero deben ser incubados el tiempo suficiente para que puedan reaccionar incluso Ac muy poco potentes.Para preparar la suspensin de hemates del donante se utiliza sangre contenida en los segmentos de la bolsa.25

Para realizar la prueba se rotulan dos tubos en cada uno se coloca 1 Gota de suspensin al 5% de hemates del donante y dos gotas de suero del receptor.FASE IAadir 2 gotas de suero del receptor .Agregar : una gotas de suspensin de eritrocitos al 5 % donante .Centrifugar 1000 r.p.m por un 1 min.INTERPRETACION: aglutinacin POSITIVO ( detener la prueba)NEGATIVO continuar Fase II26

FASE IIAgregar 2 gotas de albumina y mezclar.Incubar 37 c durante 30 min.Centrifugar 1000 r.p.m INTERPRETACION: AGLUTINACIONPOSITIVO( detener la reaccin )NEGATIVO continuar FASE III27

FASE IIITubo lavar 3 veces con SSF a 3000 r.p.m durante 2 min. Luego desechar el sobrenadante Agregar 2 gotas reactivo control globina poliespecifico Ig g C3d .Centrifugar por 1 mi. a 1000 r.p.m inmediatamente observar.Interpretacion: AGLUTINACIONPOSITIVO ( detener la prueba )NEGATIVO (compatible)28

INTERPRETACION

La PRUEBA es compatible si no hay aglutinacin y indica incompatibilidad ya que significa que algn Ac del suero se ha unido a los eritrocitos del donante.29

30PRUBA CRUZADA MENOR

CONCEPTO31

Detecta anticuerpos irregulares en el suero del donador y ratifica algn error de clasificacin ABO/Rh.

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