Evaluation des IgG fixées sur les plaquettes à l'aide d'un test utilisant une...

Revue Franqaise de Transfusion et Immuno-h6matologie Tome XXVI - - N ° 2 - - 1983 173

TECHNOLOGIE

Evaluation des IgG fix6es sur les plaquettes

~t l'aide d'un test utilisant une antiglobuline radio.active

p a r J .Y . M u l l e r , C. P a t e r e a u et C. Do ine l

Laboratoire d'Immunologie leuco-plaquettaire, Centre National de Transfusion Sanguine, PARIS.

L A na tu re au to - immune des p u r p u r a s th rombop6n iques idiopathi- ques (PTI) a 6t6 sugg6r6e il y a long temps pa r les exp6riences

d'HARRINGTON [6] et de SrlULMA~ [23, 24]. De trbs n o m b r e u s e s m6tho- des ont ~t6 propos6es pou r rechercher des auto-ant icorps anti- p laquet ta i res soit dans le s6rum des pat ients , soit fix6s in vivo sur leurs plaquet tes . Les diffdrentes approches techniques ont 6t6 r6cem- men t discut6es [21].

Les m6thodes sdriques sont plus ais6es h p ra t ique r lots des throm- bocytop6nies e x t r 6 m e s ; pa r contre, lorsqu 'el les sont positives, il peu t 6tre difficile de d6mont re r que l ' an t icorps mis en 6vidence est un auto-ant icorps, et non un a11o-anticorps d ' immunisa t ion .

Les mdthodes p laquet ta i res ont l ' inconv6nient m a j e u r de ndces- si ter des volumes de sang re la t iveinent impor t an t s afin d 'ob ten i r un n o m b r e suff isant de p laquet tes chez les suje ts tr6s th rombop6- niques. Leur intdr6t pr incipal serai t de t6moigner de la f ixat ion

Manuscrit re cu le 14-4-1982.

174 M U L L E R J.Y. et coll.

in vivo des Ig sur les p laquet tes . Un de leurs aspects in tdressants est dgalement de p e r m e t t r e une 6valuation quant i ta t ive des IgG fixdes sur les p laquet tes (IgG-P). La mdthode de f ixat ion d 'une ant iglobul ine radio-active proposde pa r SOULI~R et coll. [25] a 6t6 adoptde pa r plus ieurs 6quipes [18, 2] pou r en faire un tes t direct ut i l isable dans les PTI. Nous voudr ions r a p p o r t e r ici une mdthode pa r f a i t emen t s tandardisde et quant i ta t ive de ce tes t adaptd ~ l '6tude des IgG-P chez des pa t ien ts th rombopdn iques et chez des sujets normaux.

MATERIEL ET METHODES

PrGparation et 6valuation de l'antiglobuline

L'ant iglobul ine utilisGe est une ant iglobul ine de ch~vre, radio-iodde dont la prGparat ion a ~t6 antGrieurement ddcrite [25]. Son activit6 spGcifique est de 20.10 -6 Ci/i~tg. E11e reconnal t spdci f iquement la chaine ~" des IgG 1, IgG 2, IgG 3 et IgG 4 humaines .

La co r respondance ent re la quanti t6 d 'ant iglobul ine fixGe et le n o m b r e de molGcules d 'IgG-P dGtectdes est fai te grfice h u n sys tbme de rGfdrence. Ce sys tbme est 6tabli ~t pa r t i r de quantitGs dGfinies d ' IgG anti-D sp~cif iquement fixde sur des hGmaties R1R 1 d 'aprbs la mdthode de ROCHNA et de HUGHES-JONES [22]. L'allo-antisGrum utilis6 pou r les p rdpara t ions d ' IgG anti-D a un t i t re de 1/1024. La purifica- t ion des IgG est fai te pa r 2 prGcipitations successives au sulfate d 'amn-lonium suivies pa r une ch roma tog raph ie sur DEAE Sephadex A50. Une par t ie de l ' IgG anti-D purifide est radio-iodGe (la tech- nique utilis6e est la mGme que celle ddcrite pour l 'antiglobuline). L'activit6 spGcifique ob tenue est de 10 -2 /xCi/t~g pou r une concentra- t ion protdique de 1 m g / m l .

L'activit6 spdcifique anti-D de la solut ion marqude est ddtermin6e 37 ° C pa r 3 absorp t ions successives, para l l6 lement sur des hdma-

ties O R1R 1 et O r r en excbs. Elle est dgale h 0,5 %, soit 5 ~g par ml.

L 'dtalonnage est fai t g pa r t i r de dilutions croissantes de 100 [xl d ' IgG anti-D marqudes et froides (du 1/1 au 1/128) qui sont absorbdes sur 100 txl de suspensions h 10 % (1> d 'h6mat ies O R1R 1 et O r r pendan t 2 h h 37 ° C sous agitation.

Les al iquots con tenan t les dilutions d ' Ig anti-D froides, sont, apr6s lavage, incubus avec 500 ~1 d 'ant iglobul ine co r re spondan t h 80.10 .0 Ci pendan t 30 minutes suppldmenta i res .

(1) 100 ~1 h 10 % = lOS hdmaties.

EVALUATION DES lgG F1XEES 175

Dans t o u s l e s cas, la radio-activit6 absorb6e sur les 6rythrocytes est compt6e, apr~s lavage, darts un compteur gamma, et les fixations sp6cifiques d6termin6es par soustract ion des comptages sur les h~ma- ties O rr aux comptages sur les h6maties O R1R1, routes les r6actions 6tant faites en double.

Consid6rant l 'activit6 sp6cifique de l ' IgG anti-D, le poids mold- culaire des immunoglobulines, il est possible de calculer le hombre de mol6cules IgG anti-D fix6es sp6cifiquement sur les h6maties O RIR 1 et d '6tudier la qualit6 d'antiglobuline fix6e par cette IgG anti-D darts les m~mes conditions.

La corr61ation entre le nombre de mol6cules d ' IgG anti-D et la quanti t6 d'antiglobuline fix6e peut 6tre calcul6e.

La droite de r6f6rence a 6t6 6tablie au cours de 10 exp6riences ind6pendantes avec 10 lots de marquage diff6rents de l 'antiglobuline.

La stoechiom6trie de la r6action IgG anti-IgG n '6tant pas connue, les r6sultats sont exprim6s en nombre de sites de fixation de l'anti- globuline (SFA).

LE TEST DE FIXATION DE L'ANTIGLOBULINE RADIO-ACTIVE

SUR PLAQUETTES

Les malades

Nous avons d6termin6 le nombre de SFA de 412 malades throm- bop6niques. N 'ont 6t6 retenus darts cette 6tude que les malades pour lesquels nous connaissions le hombre de plaquettes le jour du test.

Malheureusement, les modalit~s th6rapeutiques ne sont pas con- hues pour tous ces malades, ce qui fait que les rdsultats ne peuvent ~tre interpr6t6s en fonct ion des t ra i tements re~us.

Cet 6chantillon de malades est compos6 de la mani~re suivante :

PTI :221 dont 134 adultes et 87 enfants.

Maladies immunologiques autres : 39 malades dont 9 lupus 6ryth6- mateux diss6min6s, 16 connectivites mixtes et syndrome de Felty, 14 syndromes d 'Evans.

Syndromes lymphoprolif6ratifs : 33,

Syndromes my~loprolif6ratifs : 14,

Leucoses aigu~s : 12.

Thrombop6nies au cours d'aplasies : 13 ; d ' insuffisance h6patique : 29 ; cancers extra-hdmatopo'i6tiques : 17.

Thrombop6nies immunoallergiques : 34.

176 M U L L E R J .Y . et coll.

Les t6moins

98 donneurs t6moins.

de sang bien por tan ts ont 6t6 utilis6s comme

Pr6paration des plaquettes

Le sang est pr61ev6 sur EDTA ~t 5 % (1 vol./9 vol. de sang). Le plasma riche en plaquettes est obtenu apr~s centr ifugat ion h 20 ° C 3 minutes h 850 g. Chez les patients tr~s thrombop6niques, on augmente le hombre de plaquettes disponibles pour le test en r6p6- tant cette centr ifugat ion aprbs dilution du culot globulaire an demi en solut6 physiologique contenant 0,33 % d'EDTA. Le ou les PRP r6unis sont ensuite centrifugals 15 minutes h 2200 g ~t 20 ° C.

Les plaquettes, aprbs 3 lavages, sont remises en suspension en solut6 physiologique contenant 1 '°A0 d'acide de sodium, et num6r6es au Thrombocoul te r c2)

La concentra t ion est ajustde ~t 106 plaquettes/~l et contr616e par une nouvelle numdrat ion. Le test lui-m6me est effectu6 dans les 48 h suivant le pr61~vement, les plaquettes de certains malades se lysant spontan6ment au-del~t de ce d61ai.

50 ~l de la suspension plaquettaire sont incub6s 30 minutes h 37 ° C avec 500 txl d'antiglobuline. Apr~s centrifugation 10 minutes

10 000 g, les plaquettes sont soigneusement lav6es deux fois en saline contenant 2,5 960 d 'a lbumine bovine et 0,3 % de Tween ~3). Apr~s une centr ifugat ion suppl6mentaire, le surnageant est d6cantd et la radio- activitd du culot plaquet taire est 6valu6e darts un compteur gamma.

Chaque test est effectu6 en double. Pour calculer la quantit6 d ' IgG par plaquette, on utilise la moyenne des r6sultats que 1'on reporte sur la courbe.

Inf luence du nombre de plaquettes

Afin d 'dtudier l ' influence du nombre de plaquettes par tube, et les limites dans lesquelles ce test est utilisable, nous avons 6tudi6 de fa~on rdp~titive les m6mes plaquettes en faisant varier leur con- centrat ion de 1.105 plaquet tes par Ixl h 1.106 lxl, ce qui correspond

une variat ion de 5.10 G h 50.106 plaquettes par essai.

(2) Thrombocoulter C, COULTRONICS France, Margency. (3) Tween 20 - Polyoxy6thyl~ne Sorbitan monolaurate Sigma.

EVALUATION DES lgG F1XEES 177

R E S U L T A T S

La c o u r b e de r6f6rence

La q u a n t i t 6 d ' a n t i g l o b u l i n e fix6e, que l que soit le lot ut i l is6, a t o u j o u r s 6t6 t r6s f o r t e m e n t corr616e avec la q u a n t i t 6 d ' IgG anti-D p r 6 a l a b l e m e n t abso rb6e su r les 6 ry throcy tes .

Cependan t , q u a n d les r6su l t a t s o b t e n u s avec les d i f f6 ren t s lots d ' an t i - g lobu l ine on t 6t6 compar6s en t r e eux et c h a q u e c o u r b e o b t e n u e tes t6e s t a t i s t i q u e m e n t , deux lots su r dix on t 6t6 6cart~s. Les h u i t lots r e s t a n t s on t 6t6 rassemb16s a f in de d6f in i r la d ro i t e de r6f6rence qu i est r ep r6sen t6e su r la f igure 1.

3 2

o x 3E o.

m 4 Z

¢D q

~ 2 z ,<[

• I I I I I I I 2 4 8 16 3 2 6 4 1 2 8

A N T I . D M O L E C U L E S x 1 0 -1°

FIG. 1. - - Etude de la corrdlation entre le nombre de mol6cules d'IgG anti-D radio-actives fix6es sp6cifiquement sur 100 itxl de suspension ~ 10 % d'h6maties O R1R1 et la quantit6 d'antiglobuline fix6e par le m~me nombre d'IgG anti-D froides,

La r e l a t i on e n t r e le l o g a r i t h m e n a t u r e l des moldcu les IgG anti-D fix6es su r les 6 ry th rocy tes et le l o g a r i t h m e de la radio-act iv i t6 de l ' a n t i g l o b u l i n e fixde su r les 6 ry th rocy tes est u n e f o n c t i o n corres-

Log y - - 5,590 p o n d a n t ~ la f o r m u l e s u i v a n t e : Log x = ofi~x

0,6 est le n o m b r e de moldcu les d ' IgG fixdes et y les c p m d ' a n t i g l o b u l i n e

178 MULLER J.Y. et coll.

c o r r e s p o n d a n t s . C h a q u e n o u v e a u lo t de m a r q u a g e de l ' a n t i g l o b u l i n e n ' e s t u t i l i s6 que s ' i l ne d i f f6 re p a s s t a t i s t i q u e m e n t de la c o u r b e de r6 f6 rence .

V a l e u r s n o r m a l e s

La v a l e u r n o r m a l e d u n o m b r e de S F A a 6t6 ddf in ie s u r 98 t 6 m o i n s n o r m a u x . Dans les c o n d i t i o n s h a b i t u e l l e s , avec des c o n c e n t r a t i o n s e n t r e 5 e t 50.108 p l a q u e t t e s p a r t ube , la m o y e n n e o b t e n u e es t 351 --+- 252 (4~, la l i m i t e s u p 6 r i e u r e de l ' i n t e r v a l l e de c o n f i a n c e 99 % es t 999 I g G / p l a q u e t t e . I1 a 6t6 cho i s i c o m m e l i m i t e s u p 6 r i e u r e de la n o r m a l e .

Les t e s t s r6p6 tds chez les t 6 m o i n s n e m o n t r e n t p a s de v a r i a t i o n s s i gn i f i c a t i ve s p e n d a n t u n e d u r 6 e de c o n s e r v a t i o n des p l a q u e t t e s de 5 j o u r s . L o r s q u e des q u a n t i t 6 s d 6 c r o i s s a n t e s de p l a q u e t t e s s o n t u t i l i s6es , les r 6 s u l t a t s r e s t e n t s t a b l e s jusqu '~t u n e c o n c e n t r a t i o n de 1.105 p l a q u e t t e s / ~ l . Des q u a n t i t 6 s p lu s f a i b l e s de p l a q u e t t e s condu i - s e n t h u n e s u r e s t i m a t i o n d u n o m b r e de S F A p r o b a b l e r n e n t d u e ~ u n e f i x a t i o n n o n sp6c i f i que de l ' a n t i g l o b u l i n e s u r le t ube .

Les m a l a d e s

Les r 6 s u l t a t s o b t e n u s chez 221 m a l a d e s a t t e i n t s de PTI s o n t pr6, sen t6s dar ts le t a b l e a u I . 78,7 % d ' e n t r e eux o n t u n t e s t pos i t i f . Chez les s u j e t s a d u l t e s pos i t i f s , i l ex i s t e u n e cor r61a t ion e n t r e l ' i n t e n s i t 6 d e l a t h r o m b o p 6 n i e et le n o m b r e de S F A ( r ---- - - 0,49).

Darts les a u t r e s t h r o m b o p 6 n i e s 6 tud i6es , on o b s e r v e u n e g r a n d e f r 6 q u e n c e de 1 ' a u g m e n t a t i o n d u n o m b r e de SFA (Tab l . [ I ) . Le p o u r -

TABLEAU I Rdsultats du test de [ixation directe de l'antiglobuline anti-IgG

chez 221 patients ayant un PTL

NOMBRE DE SITES IgG-P (SFA)

< 10~ 103 ~ 5.103 <

>~ 5.10~-- 104 < >~ 104

TOTAUX . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

NOMBRE DE M.4,LADES

ENFANTS

24 37 12 14

87

AOULlv_.S

23 56 26 29

134

TOTAL

47 93 38 43

221

(4) I1 s'agit de la d6viation standard et non de l 'erreur standard.

EVALUATION DES lgG F1XEES 179

cen tage de tes ts pos i t i f s s e m b l e r e l a t i v e m e n t i n d d p e n d a n t de la n a t u r e i m m u n e ou suppos6e i m m u n e de la t h r o m b o p 6 n i e . Toutefo is , les r6 su l t a t s les p lus pos i t i f s son t o b t e n u s darts les PTI de l ' adu l te , les m a l a d i e s a u t o - i m m u n e s , les t h r o m b o p 6 n i e s i m m u n o a l l e r g i q u e s .

I1 est ~t r ioter que darts le l upus le n o m b r e de SFA s e m b l e inddpen- d a n t de l ' i n t ens i t 6 de la t h r o m b o p d n i e .

TABLEAU II Augmentation moyenne des SFA en fonction du diagnostic

et du nombre de plaquettes chez 412 malades et 98 tdmoins normaux.

0/o DE POSITIF

PTI adultes ... PTI enfants

Maladies auto-immunes dont

L E D Connectivites mixtes

P.R. syndromes de Felty

AHAI (syndrome d'Evans)

Lymphomes, syndro- mes lymphoprolif6- ratifs

L L C My61omes, macroglo-

bulin6mies .. Hodgkins

Divers : Syndromes my61oproli-

fdratifs Leucoses aiguEs . . . . . . Aplasies idiopathiques. Insuffisances h6pati-

ques Carcinomes

Thrombopdnies immu- noallergiques

H6parine Autres

Tdmoins

NOMBRE DE

MALADES

134 87

39

9

16

14

33 22

14 12 13

29 17

34 17 17

98

MALADIES

82,8 72,4

87,2

100

75

92,9

78,8 81,8

71A 75

92,9 75 84,6

69 82,3

91,2 100 82,3

MOYENNE DE SITES PAR

PLAQUETTE (SFA)

13 623 6 969

20 934

56 965

11 882

4 339

7 769 8 258

6 288 7 307

4 792 6 616 8 689

5091 8 739

14 478 11 224 18 429

351

MOYENNE DU NOMBRE

DE PLAQUETTES (109/])

44,53 27,91

I 68 i

I 80,33

59,67

67,15

40,04 30,83

76,6 34,33

68,58 60,11 36,73

50,75 41,86

55,10 81,53 23

> 200

180 M U L L E R J.Y. et coll.

DISCUSSION

L'6.valuation quanti tat ive des IgG-P a fait l 'objet de nombreux travaux, et plusieurs m6thodes ont 6t4 propos4es [1, 4, 15], le test util isant une antiglobuline radio-active a d6jh 6t6 propos4 par d'au- tres [2, 18]. Nous rappor tons darts ce travail une m6thode standar- dis6e d'6valuation quanti tat ive des IgG-P. Le syst~me de r6f6rence utilis6 ici a l e double int~r6t d 'une par t de faire correspondre une quantit6 d 'ant icorps h une quanti t4 d'antiglobuline, d 'aut re par t d 'obtenir une bonne s tandardisat ion des diff4rents lots de marquage de cette antiglobuline. Les valeurs normales qui ont 6t6 d6finies chez 98 t6moins sont dans l 'ensemble plus basses que celles obtenues par d autre~ auteurs dans d 'autres techniques [5, 7, 12, 15], ou par une technique semblable [2]. D'autres 6quipes t rouvent des valeurs pro- ches [11, 27].

Les raisons de ces discordances pourra ient 6tre li6es h diff6rents facteurs :

--premihrement, l 'antiglobuline dans les conditions ofa elle est utilis6e, ne sature pas les IgG-P fix~es h la surface des plaquettes et la relation entre la quantit6 d'IgG-P et la quantit6 d'antiglobuline n 'est pas forc6ment lin6aire (5);

- - deuxi~mement, malgr6 des comptages attentifs, la numera t ion des plaquettes compor te une certaine impr6cision qui intervient lorsque l 'on rappor te le hombre de mol6cules d ' IgG d4tect4es au hombre de plaquettes ;

- - troisi6mement, les lavages des plaquettes dont l ' impor tance a 6t6 soulign6e ~ plusieurs reprises [15,26] sont un facteur suppl4- mentaire d ' incerti tude.

Quoi qu'il en soit, aucune de ces raisons ne nous semble suscep- tible d 'expliquer compl6tement los variations observ6es et dans l'en- semble los m6thodes de d6viation du compl6ment donnent un taux physiologique plus 61ev6 que los m6thodes directes de fixation d 'une antiglobu]ine. Ces facteurs de variat ion jouent probablement un r61e encore plus impor tan t chez les malades off, en raison de thrombo- p6nies extremes, on pout 4tre amen6 h prat iquer un test dans des conditions limites quant au hombre de ptaquettes mises en r~action. N4anmoins, dans notre test, l '6tude syst4matique de ce facteur chez

(5) C'est pour cette raison que plusieurs auteurs ont propos6 d'exprimer les r6sultats en sites de combinaison de l'antiglobuline avec les plaquettes [2].

EVALUATION DES lgG FIXEES 181

les t6moins nous a mont r6 que les r6sul tats pouvaien t 6tre inter- prdt6s jusqu'~t 5.10 ~ p laquet tes pa r r6action. Dans la pra t ique, ceci condui t h consid6rer que jusqu 'h 10 000 p l a q u e t t e s / m m a, le tes t peu t 6tre va lab lement interpr6t6. Dans no t re sdrie de PTI, 78,7 % de pa t ien ts ont un taux 61ev6 de SFA. Cette f r6quence est h peu prbs conforme /~ ce qui a 6t6 observ6 dans d ' au t res sdries [1, 5, 18, 29, 13, 14, 17, 19]. Par contre, cer ta ins au teurs t rouvent de 90 h 100 % de PTI posit ifs [2, 3, 7, 26].

Dans un travai l ant6rieur, la compara i son des r6sultats obtenus pa r no t re m6thode, et ceux obtenus pa r un test quant i ta t i f type Dixon et ROSSE [30] a mont r6 qu 'une bonne corr61ation existait en t re ces 2 m6thodes. Quelles que soient les diff6rences observ6es entre les diverses mdthodes il est ma in t enan t bien 6tabli que l ' augmenta t ion des IgG-P n 'es t ni cons tante ni sp6cifique des PTI.

Nous pr6sentons ici des r6sultats m o n t r a n t que les SFA peuvent 6tre augment6es dans des maladies o/1 l 'origine i m m u n e de la throm- bop6nie n 'es t pas 6vidente. Ceci conf i rme diff6rents t ravaux ant6- r ieurs [9, 10, 12, 17].

La signification de l ' augmenta t ion des IgG-P dans ces diff6rents 6tats pa thologiques n 'es t pas 6tablie.

I1 ne semble gubre douteux qu 'une pa r t des p u r p u r a s th rombo- p6niques id iopathiques soit de na ture au to- immune et que la fixa- t ion d 'un auto-ant icorps ant i -plaquet te rende compte d 'une par t ie ou de la totali t6 de l'616vation des SFA.

A cet 6gard, les 6preuves d'61utions prat iqu6es pa r BORNE et coll. [1] ont mont r6 que l 'on pouvai t me t t r e en 6vidence une activit6 auto-ant icorps dans l'61uat.

La spdcificit6 de ces auto-ant icorps est encore ac tue l lement real connue, il semble que dans cer ta ins cas l 'auto-ant icorps ne puisse se fixer sur les p laquet tes de th rombas thdniques .

Quant aux sous-classes d ' IgG en cause, les 6tudes dont nous disposons [1, 8] ne p e r m e t t e n t pas d ' a f f i rmer qu'elles diff6rent sens ib lement de la r6par t i t ion des sous-classes d ' IgG du s6rum.

De toutes faqons, il pa ra i t p e u vra i semblab le que les t h r o m b o - p6nies des syndromes my61oprolif6ratifs, des L.A., ou des aplasies m6dulla i res puissent ~tre li6es h des auto-ant icorps.

Pour expl iquer l ' augmenta t ion des IgG-P dans ces cas, diff6rentes hypoth6ses ont 6t6 fa i tes :

- - l ' augmenta t ion des IgG-P pour ra i t 6tre li6e d 'une fa~on ou d 'une aut re h la m6gacaryo-cytopoi6se [20], dans ce cas les p laquet tes de

182 M U L L E R Z Y . et coll.

taille augmentde souvent observ6e dans les th rombop6nies , pour- t a len t avoir un n o m b r e de sites accru p o u r les I g G ,

- - l ' augmenta t ion des IgG-P pour ra i t ref l6ter non pas des auto- an t icorps mais des complexes i m m u n s [28, 29]. En effet, h la diff6- fence des 4rythrocytes les p laquet tes ont un r6cepteur pou r le frag- m e n t Fc des immunoglobul ines , et pour ra i en t donc 6tre sensibilis6es pa r des complexes i m m u n s et d6trui tes dans le syst6me phagocytai re .

Al ternat ivement , on pen t p r o p o s e r ainsi que Font fai t TRENT et coll. [28] que le t r a n s p o r t de complexes i m m u n s soit une fonct ion no rma le des p laquet tes , ceci pour ra i t expl iquer pourquoi , lots d 'une th rombopdn ie d 'or igine centra le on observera i t une augmenta t ion des IgG-P seu lement due au fait qu' i l y a moins de p laquet tes pou r fixer une quanti t4 cons tan te de complexes immuns . I1 est enfin pos- sible que plus ieurs de ces m6can ismes puissent s 'associer et que leur jux tapos i t ion vienne rendre difficile l ' in te rpr4 ta t ion des r4sultats.

Ainsi MUELLER-EcKHARDT [20] sugg6re que les PTI ont en g6n6ral un taux d 'IgG-P plus i m p o r t a n t que les th rombop4n ies non immunes (et ceci h h o m b r e de p laquet tes comparab le ) . Cet au teur pense que le taux d 'IgG-P observ6 lors des tb rombop6n ies immunes pour ra i t ~tre dfi g l ' augmenta t ion observde darts 1 'ensemble des th rombo- p6nies, plus celle li6e g la f ixation spdcifique d 'auto-ant icorps .

Dans le pr4sent travail , nous n ' avons pas d'61dment pour appr6cier cet te in te rprd ta t ion et cela pa rce que l '6chanti l lon de malades 6tudi6s est tr6s disparate .

Si toutefois une telle in te rpr6 ta t ion devait ~tre retenue, ceci vou- dra i t dire que le taux d 'IgG-P doit 6tre in terpr6t6 non pas pa r r a p p o r t aux chiffres observ6s chez des t4moins ayant un h o m b r e no rma l de p laque t tes mais p lu t6 t pa r r a p p o r t h une valeur moyenne observ4e dans des th rombop4n ies non i m m u n e s de m6me impor tance .

Malheureusement , la re la t ion ent re la th rombop6n ie et le n o m b r e d'IgG-P observ6es n 'a, dans l ' ensemble des cas, ni une express ion simple, ni une corr41ation nette.

L' intdr6t p ra t ique de l '6valuat ion des IgG-P dans les diff6rentes th rombop4nies n ' es t donc pas ac tue l lement c la i rement 6tabli, il semble que l 'on doive a t t endre des t ravaux h venir des pr6cisions sup4rieures quant h la na tu re des IgG-P et quan t h leur lien direct avec la dimi- nut ion du h o m b r e de p laquet tes [16].

Ce n 'es t qu 'alors , clue les r6sul ta ts observ6s, ainsi que leur varia- t ion lors du suivi de malades , p o u r r o n t 6tre convenab lement inter- pr4t6s.

EVALUATION DES lgG F1XEES 183

RESUME

Une m6thode d '6valuat ion des IgG fix6es h la surface des pla- quet tes (IgG-P) est pr6sent6e. Cette m6thode repose sur la f ixation sur les p laquet tes d 'une ant iglobuline de ch6vre anti-IgG humaine . Chaque nouveau lot de m arquage de l 'ant iglobuline est 6tudi6 avec un sys tbme de rdf6rence ut i l isant une IgG anti-D et des h6mat ies O R1R1 et O rr. Le syst~me est utilis6 pou r s tandard ise r et val ider les antiglobulines. I1 p e r m e t en out re de faire co r r e spondre une quan- tit6 d 'ant iglobul ine fix6e h u n h o m b r e de mol6cules~ d ' IgG pr6ala- b l emen t d6termin6 et doric de d6finir un h o m b r e de sites de f ixation de l 'ant iglobuline (SFA) ~t la surface des plaquet tes . Le taux moyen des IgG-P observ6 chez 98 t6moins est de 351 +-- 252 SFA par plaquet te . La l imite sup6rieure de l ' intervalle de confiance 99 % choisie c o m m e l imite sup6rieure de la no rmale est de 999 SFA/plaquet te .

Le test a 6t6 utilis6 chez 412 malades th rombop6niques , 78,7 % des PTI ont un taux a n o r m a l e m e n t 61ev6 de SFA. Toutefois, une incidence i m p o r t a n t e de r6sul tats posit ifs est observ6e darts d ' au t res th rombop6nies sans qu 'un m6canisme au to - immun puisse 6tre invo- qu6. Ces positivitds posent le p robl~me de la signification des IgG-P, et de leur nature .

D 'aut res t ravaux sont n6cessaires pou r d6finir le r61e relat i f des auto-ant icorps; des complexes i m m u n s ou des modif ica t ions de la m e m b r a n e p laque t ta i re dans l ' augmenta t ion des IgG-P.

SUMMARY

A me thod of evaluat ion of platelet bound IgG (PA IgG) is described. This me thod rely upon the f ixation of a radio-labelled goat an t i -human IgG on platelets. Each new ba tch of labelling of the ant iglobulin is tes ted wi th a re ference sys tem using a semi- pur i f ied anti-D IgG and O R1R 1 and O r r erythrocytes . This sys tem is used for tile s tandard iza t ion and the val idat ion of the antiglobulin, and it allows t o m a k e co r respond an am o un t of ant iglobulin to a known quant i ty of IgG molecules. The no rma l level of PA IgG in 98 heal thy controls was found to be 351 -+ 252 antiglobulin combining sites (ACS) per platelet . The uppe r l imit (99 % confident limit) in the controls is 999 ACS per platelet . 412 th rombocy topen ic pat ients have been tested, 78,7 % of ITP had an elevated PA IgG.

However posi t ive resul ts are also f requent in o ther th rombocyto- penia even when an i m m u n e m e c h a n i s m cannot be evoked.

184 MULLER J.Y. et coll.

T h e s e p o s i t i v e r e s u l t s r a i s e t h e p r o b l e m of t h e s i g n i f i c a t i o n o f PA IgG a n d of t h e i r e x a c t n a t u r e .

F u r t h e r d a t a s a r e n e c e s s a r y to a s c e r t a i n t h e ro l e of a u t o - a n t i b o d i e s , i m m u n e s c o m p l e x e s o r of p l a t e l e t m e m b r a n e m o d i f i c a t i o n s in PA IgG i n c r e a s e .

Nous remerc ions Mademoise l le Florence TASSEL pour son a ide pr6cieuse dans la r6al isat ion et 1 ' i l lustration du manuscr i t .

Docteur J.:Y. MULLER,

Centre Nat ional de Transfus ion Sanguine, Labora to i re d ' Immunolog ie leuco-plaquet ta i re 6, rue Alexandre-Cabanel, 75739 PARIS Cedex 15.

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