Determinación de Azúcares Reductores

CARLOS ALBERTO GARCIA MOGOLLÓN Ver 2.0

Contenido

• Procedimientospreliminares

• Fundamento

– Titulo

• Métodos

– Curvas patrón

¿Tipode

CHO´s?

Mezcla deCHO´s

CHO simple

Específicos(Caracterización)

Específicos(Generales)

Acondicionamiento

Procedimientos NOEspecíficos

CromatografíaElectroforesis

QuímicosReductométricos Instrumentales

DensitometriaRefractometría

PolarimetríaSacarimetría

Identificación y cuantificación

Métodos deseparación

Enzimáticos

Azúcares Reductores

Complejación

DNS

Degradación

FCB, Lane Eynon, MunsonWalker, Somogyi-Nelson, Luff-

Schoorl

Antrona

Fenol-sulfuro

Fehling

Determinación del titulo

Sln glucosa [conocida] = Xg de glucosa en 1000ml Sln.

Titulación

Xg -------------- 1000mlT -------------- G

Xg. GT=------------Titulo

1000

Sln Muestra [desconocida] = Yg en 1000ml Sln.

Titulación

G´ -------------- T1000ml ------------- Y

1000. TY=------------= g AR/L sln.

G´

Lane-Eynon(AOAC Method 923.09,920.183b)

(AOAC 1965, p. 495).

FCBFehling-Causse-Bonnans modificado

En el método FCB se titula con el reactivo de Fehlingcaliente en dos etapas, primero se añade una cantidadde reactivo de Fehling tal que se lleve a cabo la totalreducción y después se determina el punto final conazul de metileno por goteo, es necesario un control dela temperatura y se sugieren dos titulaciones.(Pomeranz y Meloan 2000)

Deben gastarse alrededor de 5-6 ml de la soluciónpatrón para decolorar 10 ml de reactivo de FCB. Si elvolumen gastado cae fuera de estos valores hay quemodificar la velocidad de adición hasta lograr el valorindicado. La velocidad de goteo encontrada como óptimaserá la empleada al valorar las soluciones problema

Solución de glucosa o azúcar invertido 0,5%

Valoración de Sln. muestra: Se titulan 10 ml de reactivo FCB según el procedimientoseguido en a) pero esta vez cargando la bureta con la solución de azúcares solubles obtenida

a partir de la muestra (filtrado). El gasto de esta valoración debe estarcomprendido entre 3 y 8 ml, si no es así hay que modificar laconcentración de la solución de azúcares.Nota 1: Es conveniente que el agregado de solución de azúcares (patrón y problema) se hagaal principio a razón de 1 gota/segundo y después del agregado de azul de metileno, a 1gota/3 segundos.Nota 2: Se debe tener sumo cuidado en la observación del punto final de la titulación, puesla coloración amarilla cambia rápidamente a parda.

1. Titulación

2. Titulación

Luff-Schoorl

Azúcar reductor

Fenol-Ácido sulfúrico(4, 7-9, AOAC Method 44.1.30)

Fenol

Under proper conditions, the phenol-sulfuric method is accurate to ~2%.

Color amarrillo-naranja

Ácidosulfúrico

Absorbance is measured at 490 nm

Lane- Eynon(AOAC Method 923.09,920.183b)

Munson-Walker

Somogyi-Nelson

(AOAC Method 906.03)

Is based on reductionof Cu2+ ions to Cu" ions by reducing sugars. TheCut ions then reduce an arsenomolybdate complex,which is prepared by reacting ammonium molybdate[(NHJ~~24] and sodium arsenate (Na2HAs07) insulfuric acid. Reduction of the arsenomolybdatecomplex produces an intense, stable, blue color thatis measured spectrophotometrically 520nm

Based on reduction of copper(lI} ions in alkaline solutionto copper(I) ions that precipitate as the brick-red oxideCU20.

The precipitate of cuprous oxide can be determinedgravimetrically (AOAC Method 31.039, 14th ed.), bvtitration with sodium thiosulfate (AOAC Method31.040, 14th ed.), by titration with potassiumpermanganate (AOAC Method 31.042, l"th ed.)

Antrona-Acido Sulfúrico

La reacción de Antronaconstituye la base de unmétodo conveniente para la

determinación de hexosas,aldopentosas y ácidoshexourónicos,.

Tomar 2 mL de muestra y agregar 2 mLde reactivo de antrona

Agitar y tapar el tubo firmemente

Colocar en baño de agua aebullición durante 15 min

Colocar en baño de agua a temperatura ambientepara equilibrar la y dejar en la oscuridad

Medir la absorbancia a 620 nmdespués de 20-30 min.

La solución azul verdosa muestra una absorción máximade 625 nm aunque algunos carbohidratos pueden mostrarotros colores.

DNSÁcido 3,5-dinitrosalicílico

color amarillo café

MÉTODO FUNDAMENTO PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Luff-schoorl Los azúcares reductores en presencia

de una solución de cobre (II), se

oxidan y el exceso de cobre (II) se

valorará por yodometría.

Se diluye la muestra, hasta que tenga de

15-60mg de azucares reductores se

clarifica y se filtra

Musson y Walker Gravimetrico. El oxido cuproso se

separa por filtración y se pesa.

Clarificar la muestra con acetato de

plomo y el exceso se precipita con

oxalato.

Antrona Se determinan azucares totales. Las

azucares forman un complejo azul

verdoso que se observa a 625nm.

Se realizan diluciones de manera que se

obtenga una concentración de azucares

en el rango de 5-50ppm.

DNS El ácido 3,5-dinitrosalicílico se reduce

a ácido 3-amino-5-nitrosalicílico en

presencia de azucares reductores

Se realizan diluciones de manera que se

obtenga una concentración de azucares

en el rango de 200-1000ppm

Somogyi-Nelson Utiliza el tartrato de cobre alcalino y

el yodato de potasio. El exceso de

yodo se valorará por yodometría.

Secado, diluir la muestra clarificar y filtrar

MÉTODO CONDICIONES OPERATIVAS CÁLCULOS

Luff-Schoorl Muestra de 12-25ml

25ml del reactivo de luff

almidón al 1% Na2S2O3 0.1N

KI al 30%m-v

H 2SO4 25ml al 25%

ml gastados = Vblanco -Vmuestra

En la tabla de luff se determina los mg de

azucares presentes.

Musson y Walker Feling 50ml, muestra 50ml, Éter En las tablas de musson y walker

Antrona 2,5ml de la muestra, 200mg de antrona,

100ml de H 2SO4 96% solución estándar de

glucosa

Realizar curva estándar y mediante esta

determinar la concentración de azucares

DNS 1ml de DNS, 1ml de la muestra solución

estándar de glucosa diluida de 200-

1000ppm

Realizar curva estándar y mediante esta

determinar la concentración de azucares

Somogyi-Nelson Tartatro de cobre, KIO3 almidón al 1%,

Na2S2O3 0.1N

DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES EN MIELPOR EL MÉTODO DE ÁCIDO DINITROSALICÍLICO (DNS).

Preparación de la muestraMielSe peso en un beaker 50 ml enuna balanza analítica y seadiciono 0.5gr de miel, luego seadiciono 40 ml de aguadestilada, se tomaron 20ml desolución y se depositaron en unmatraz y se aforo hasta 250 mlcon agua destilada.

Jugo Tampico•Medimos 0.96 ml y 1.44 ml dejugo Tampico y adicionamos cadamuestra a un matraz aforándolascon agua destilada hasta 500 ml,para reducir la concentración hasta400 ppm y 600ppmrespectivamente.• De la solución diluida tomamos20 ml y agregamos a cadamuestra 5 ml de agente clarificante(acetato de plomo). Yposteriormente filtramos.

Muestra1

(400ppm)

Muestra2

(400ppm)

Muestra3

(400ppm)

Muestra4

(600ppm)

Muestra5

(600ppm)

Muestra6

(600ppm)

Muestra7

(400ppm)

Muestra8

(400ppm)

Muestra9

(400ppm)Blanco

Cantidad dejugo utilizado

(ml.)0.96 0.96 0.96 1.44 1.44 1.44 0.96 0.96 0.96 x

Cantidad deacetato deplomo (ml.)

5 5 5 5 5 5 x x x x

Adición deagua destilada

(ml.)8 8 8 8 8 8 8 8 8 8

Reactivo DNSutilizado (ml.)

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Tiempo deebullición

(min.)5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

Absorbanciamedida (nm.)

0.171 0.169 0.172 0.261 0.260 0.260 0.191 0.189 0.189 0

Datos DNS: Jugo Tampico

WALTER JOSÉ MARTÍNEZ BURGOS, LUIS JAIME PEREZ CORDOBA : 2006

Tubo ml. de s/nestándar

ml. de aguadestilada

Concentraciónfinal (ppm)

Absorbancia(575 nm)

1 0.0 1.0 0 -

2 0.2 0.8 200 -

3 0.4 0.6 400 -

4 0.6 0.4 600 -

5 0.8 0.2 800 -

6 1.0 0.0 1000 -

Solución estándar: Disolver 1 gr. de glucosa anhidra en 1000ml de agua destilada, luego se realizaron las diluciones.

Cálculos: DNS: Jugo Tampico

Cálculos: DNS: Jugo Tampico

Cálculos: DNS: Jugo Tampico

Cálculos: DNS: Jugo Tampico

Taller de estudio