Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de...

“Inmunoglobulinas, Gamapatías, Mieloma

Múltiple y Mononucleosis infecciosa”

INMUNOGLOBULINAS

INMUNOGLOBULINAS

Glicoproteínas originadas como productos de las células B diferenciadas que median la porción humoral de la respuesta inmune actuando como anticuerpos.

Pueden encontrarse circulando en sangre, en las secreciones o unidas a la superficie de las membranas de los linfocitos B.

La función primaria de los anticuerpos es de ligarse con especificidad a antígenos y llegar a la inactivación o remoción de sustancias que sean extrañas al cuerpo (patógenos). 3

Composición• 2 cadenas polipeptídicas

ligeras L• 2 cadenas pesadas H• Unidas por puentes

bisulfuro• 2 mitades iguales, cada una

formada por una cadena H y una L

• Segmento amino terminal (región variable)

• Segmento carboxiterminal (región constante) 4

Sustancias que actúan

sobre la molécula de

Ig

Papaína Pepsina

5

Cuando son fragmentadas se dividen en 3 segmentos:• 2 Fragmentos Fab que

contienen la estructura que es capaz de enlazarse al antígeno.

• Un fragmento Fc o cristalizable que no puede unirse al antígeno.

6

PAPAÍNA

7

Pepsina

• Pepsina corta las moléculas de Igs en la misma región que la papaína pero en el lado carboxiterminal de los puentes disulfuro, produciendo un fragmento F(ab’)2 en que los dos brazos de unión del Ag de la molécula de Ac permanecen unidos.

Fragmentos Fab

Idénticos

Cadena ligera entera

Mitad aminoterminal de la cadena pesada

Se combina con el antígeno

Responsable del reconocimiento y unión con el Ag

Fragmento FcMitad de la cadena pesada (carboxiterminal)

No se combina con el antígeno

Determina especificidad y clase de los Ag

Fija complemento.

Propiedades de los segmentos

8

Cadenas ligeras • Tipo Kappa (κ) ó Lambda (λ)• Moléculas de Ac contienen 2 cadenas L κ ó 2

cadenas L λ (no una de cada tipo)• Cantidad de móleculas con cadenas L κ es

mayor.

Cadenas pesadasIdentificadas por las diferencias antigénicas se clasifican en

• Gamma (ϒ)• Alpha (α)• Miú (μ)• Delta (δ)• Epsilon (ε)

Clases de cadenas polipeptídicas

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IgG: cadena pesada gamma

(γ)

IgA: cadena pesada alfa (α)

IgD: cadena pesada delta (δ)

IgM: cadena pesada miú (μ)

IgE: cadena pesada epsilón

(ε)

Clasificación de las Inmunoglobulinas

10

Las formas solubles de las IgM y de la IgA pueden polimerizarse, gracias a la

asociación de una proteína denominada cadena J que mantiene

unida la estructura polimérica mediante puentes disulfuro con los extremos Ct de la cadena pesada

correspondiente. 11

Propiedades biológicas

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Se secreta en la leche materna, por eso es responsable de la inmunidad fetal y la del

recién nacido.

Atraviesa la barrera placentaria*

Se une rápidamente con macrófagos y neutrófilos, para destruir patógenos.

Más abundante (80% del total de las Igs).

Mayor concentración en el suero.

Inmunoglobulina G

13

Inmunoglobulina A

13% del total de inmunoglobulinas.

Se encuentra específicamente en secreciones serosas y mucosas, como son la leche o las lágrimas.

Rica en hidratos de carbono.

Mayor actividad antiviral.

Actúa protegiendo la superficie corporal y los conductos secretores.

Genera, junto con la IgG, la inmunidad al recién nacido, al encontrarse en la leche.

14

6% del total de Igs.

Su mayor concentración

está en el suero.

Respuesta rápida, aglutinante eficaz

Mayor actividad antibacterial.

Aparece en los linfocitos B unida a su membrana plasmática.

Se manifiesta en la respuesta inmunitaria primaria activando el sistema del complemento*.

Inmunoglobulina M

15

Inmunoglobulina D

Su mayor concentración está en tejido conjuntivo e

intersticial (0.1%)

Su función puede estar relacionada

con la activación de

los LB

Primeras Igs sintetizadas

por los linfocitos B.

16

Mayor concentración

en piel y epitelios

Concentraciones muy bajas en el

suero y secreciones al

exterior (0,002%)

Su concentración aumenta en los procesos

alérgicos, asma y parasitosis. *

Inmunoglobulina E

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IgG IgA IgM IgD IgE

Peso molecular 150 165-185 900 185 200

Coeficiente de Sedimentación 7S 7S-11S 19S 7S 7S-9S

Valencia al unirse al antígeno 2 2 ó 4 5 (10) 2 2

Propiedades físicas y químicas

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Ig G Ig A Ig M Ig D Ig E

Cadena Liviana λ, κ λ, κ λ, κ λ, κ λ, κ

Cadena Pesada γ α µ δ ε

Sub-clases 4 2 1 1 1

Vida media 21-25 5.8 5.1 2.8 2.2

% de Inmunoglobulinas 80 13 6 0.1 0.002

Concentración Sérica ( mg/100ml) 560-1900 60-350 45-145 0.3-4.0 0.03

% de Carbohidratos 3 8 12 13 12

Caraterísticas generales

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Pruebas de identificaciónpara los trastornos

de las inmunoglobulinas

• Α-1-Antitripsina• Globulina Fijadora

Tirotoxina• α1 Glucoproteína

Ácida• α1 Lipoproteína

• Ceruloplasmina α• Haptoglobina• HDL• EPO• α2 Macroglobulina• α2 lipoproteína

• Transferrina• β2 plasminógeno• Β lipoproteína• C3 (Complement

• Diferentes tipos de anticuerpos.

Alfa 1 Alfa 2

Beta 1Gamma

21

GlOBULINAS

Electroforesis de proteínas séricas

• Mide los tipos de proteína en suero

Inmunoelectroforesis

• Detecta el tipo de Ig monoclonal aumentada que produce un gran pico.

Inmunodifusión radial simple

• Cuantifica la concentración sérica de Ig monoclonal (proteína M).

22

Electroforesis de proteína sérica• Se utiliza acetato de celulosa• Ventajas velocidad aplicación de micro cantidades de proteínas se adapta a los procedimientos

histoquímicos de tinción

23

Electroforesis de proteína sérica

Sección A• Una pequeña

cantidad de suero u otro líquido se aplica en una tira de acetato de celulosa.

24

Sección B • Se lleva a cabo una electroforesis de

la muestra en un amortiguador de electrolitos.

25

Sección C• Se visualizan bandas separadas de proteínas en posición

característica después de teñirse.Sección D • El análisis, al densitómetro, de las tiras de acetato de celulosa

convierte las bandas en picos característicos de albúmina, alfa 1 globulina, alfa 2 globulina, beta globulina y gama globulina.

26

Suero normal

Mieloma de IgG con pico gamma

27

Suero normal

Macroglobulinemia de Waldenstrom con pico IgM

28

Suero normal

Hipergammaglobulinemia policlonal

29

Suero normal

Agammaglobulinemia

30

InmunoelectroforesisSeparación

electroforética de proteínas

Precipitación

inmunitaria de

proteínas

Difusión de proteínas

Identifica proteínas individuales en:• Suero• Orina• Otros líquidos

biológicos

31

Técnica de Inmunoelectroforesis• Se vierte el agar semisólido en un

portaobjeto y se corta un pozo para el antígeno y una hendidura para el antisuero en el agar.

32

El pozo de antígeno se llena con suero humano.

33

• El suero se prepara por electroforesis.

34

• La hendidura de antisuero se llena con antisuero contra suero humano total.

35

• El suero y el antisuero se difunden en el agar.

36

• Las líneas de precipitación de las proteínas séricas individuales.

37

• Comparación de los patrones de electroforesis de proteínas séricas e inmunoelectroforesis de suero normal.

38

Inmunodifusión Radial Simple

Medio de soporte de agarosa sobre una placa de vidrio . Y

Y

Y Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

YY

Y

Y

Y

Y

Y

YEl agar contiene el anticuerpo contra el antígeno por estudiar en una posición fija, por lo tanto este anticuerpo no migra.

39

Sección A: la caja petri se llena con una solución semisólida de agar que contiene el anticuerpo contra el antígeno por estudiar. Después de que el agar se endurece, el pozo central se llena con una cantidad determinada de material que contiene el antígeno por estudiar.

Anti-S

40

Sección B: se permite que el antígeno por estudiar se difunda rápidamente desde el pozo central durante 24 a 48 horas.

41

Sección C: en el sitio en el que el antígeno por estudiar se encuentra con su anticuerpo correspondiente en el agar, se presenta la precipitación. Después de que ha procedido la reacción en su totalidad o durante un tiempo determinado, se forma un anillo con bordes nítidos.

42

Sección D: mediante una dilución seriada de una cantidad conocida estándar de antígeno S, S/2, S/4, S/8 se forman anillos de magnitud creciente progresiva. Se puede calcular la cantidad de antígeno desconocido y se compara con un estándar.

S

S/2

S/4

S/8

43

GAMMAPATÍAS

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Enfermedades inmunoproliferativas que se caracterizan por la proliferación maligna de uno o varios clonos de células plasmáticas productoras de inmunoproteínas.

Se clasifican según el patrón electroforético que se observa por densitometría en: • Monoclonales• Policlonales• Inmunodeficiencias

Definición

45

Monoclonales• Hipergammaglobulinemia de base estrecha debido a la

proliferación de una sola clona de células plasmáticas las cuales secretan un solo tipo de inmunoglobulinas.

46

Patrón normal

IgG aumentada

Policlonales• Hipergammaglobulinemia de base ancha debido a la

proliferación de varias clonas de células plasmáticas las cuales secretan varios tipos de inmunoglobulinas.

47

Clasificación de las Inmunodeficiencias

Hipogammaglobulinemia

Reducción en conc.

TODAS Igs

Disgammaglobulinemia

Reducción en conc.

ALGUNAS Igs

Agammaglobulinemia

Ninguna Ig.

48

Mieloma M

últiple

49

Proliferación anormal de un clono de células plasmáticas, que da lugar a producción elevada de una Ig causando una hiperproteínemia.

Se puede dar HipoGB e incluso AGB cuando los plasmocitos no son secretadas.

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• Dolor de hueso y en la espalda

• Anemia• Hipercalcemia• Insuficiencia renal• Aumento de la

susceptibilidad a infecciones

• Parálisis derivada del tumor• Fracturas patológicas

Clínica

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Hallazgos hematológicos• Anemia normocítica

normocrómica• Velocidad de

eritrosedimentación elevada• Hematíes en pilas en

monedas (Fenómeno de Rouleaux)

• Aumento de plasmocitos en estudio de m.o

Laboratorio

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• Determinación química de los niveles de álbumina y globulina.

• La electroforesis de proteínas séricas o de orina.

• Inmunoelectroforesis: permite detectar el tipo de Ig monoclonal aumentada que produce un gran pico.

• Inmunodifusión radial simple: cuantifica la concentración sérica de Ig monoclonal (proteína M).

• Frecuentemente Ig G está aumentada, seguida en frecuencia Ig A, y raramente, Ig M, Ig D e Ig E.

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Pruebas de Laboratorio

54

• Proteínas Totales: evidencia el aumento de las proteínas que generalmente se encuentran entre 9-12 gr. (N: 3 - 4 gramos)

• Medir niveles de Nitrógeno de urea, la creatinina, el ácido úrico, que en MM se encuentran elevados en suero.

• Médula ósea: suelen mostrar un aumento del número de células plasmáticas.

Pruebas de Laboratorio

• Es causada por síntesis asincrónica de cadenas pesadas y livianas por parte de las células plasmáticas, lo que da como resultado la aparición en orina de proteína de Bence – Jones que representa la eliminación de la cadena liviana sintetizada y no acoplada a la cadena H.

• Se encuentran en la orina puesto que son pequeñas, y por tanto son fácilmente aclaradas por los riñones.

• Prueba de precipitación al calor Las cadenas livianas son insoluble a 56 0C y precipitan. 55

Proteinuria de Bence-Jones

56

Características de los Plasmocitos

Plasmoblasto (célula mielomatosa inmadura)

• Morfología• Grande• Redonda u ovoide

• Núcleo• Redondo• Excéntrico •Uno ó más nucléolos• Cromatina reticulada y

delicada• Citoplasma • Basófilo • Sin granulación

Plasmocito (célula miolomatosa madura)

• Morfología• Ovoide •Más estrecho en un extremo que

en el otro• Núcleo • Excéntrico• Cromatina densa• Sin nucléolos

• Citoplasma• Color azul intenso • Halo claro perinuclear acromófilo

• Función: sintetizar y secretar inmunoglobulinas (Ac) contra los Ag

Variantes de Plasmocitos • Tamaño extraordinario • 2 a 3 núcleos

Inclusiones intracelulares

Célula de Mott vacuolas en citoplasma

Cuerpos de Russell

pequeños cuerpos

eosinofílicos

Depósito cristalino de

proteínas

Célula en llama citoplasma eosinofílico

brillante

60

Variantes de Plasmocitos

Cuerpos de Russell

Célula de Mott

Depósito cristalino de proteínas

Célula en llama

Macroglobulinemia

de Wald

estrom

Etiopatogenia• Proliferación anormal de clonos de células plasmáticas,

denominados células Linfoplasmocitarias. • Los plasmocitos producen IgM.• También se producen cantidades apreciables de

aglutininas al frío, responsables del fenómeno de Raynaud.

• Aumenta la viscosidad de la sangre y hay tendencias a trastornos hemorrágicos y anemia hemolítica.

Célula maligna que se encuentra en una etapa de desarrollo entre el linfocito B maduro y la célula plasmática.

Características• Núcleo • Tamaño irregular • Cromatina oscura

• Citoplasma• Intensamente basófilo.

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Células linfoplasmocitarias

 Laboratorio

Hallazgos Hematológicos• Anemia normocítica

normocrómica• Hematíes en pilas de moneda • Velocidad de eritrosedimentación

elevada• Ligera trombocitopenia• Fibrosis reticulínica en estudio de

médula ósea con aumento en la proliferación de células linfoplasmocitaria

• Electroforesis de proteínas séricas Presenta una banda estrecha de proteína homogénea IgM.

• Pruebas de coagulación: tendencia a hemorragia debido al reclutamiento de las plaquetas por la proteína monoclonal, lo que origina una prolongación del tiempo de sagrado.

• Test de SIA: útil para gammapatías monoclonales y para detectar la presencia de macroglobulinas. Se fundamenta en la baja solubilidad de las macroglobulinas en solventes de contenido electroforético, por lo que precipitan.

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Pruebas de laboratorio

MONONUCLEOSIS INFECCIOSA

Mononucleosis Infecciosa (Enfermedad Del Beso)

• Agente etiológico• VEB (Herpesviridae)

• Transmisión• Saliva• Contacto oral íntimo• Compartiendo cepillos de dientes y vasos

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Hallazgos Clínicos

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Hallazgos de Laboratorio• Ac IgM que se desarrollan por un estímulo “X”• Reaccionan contra antígeno específico no siendo el

mismo que lo produjo.• Hemolizan los eritrocitos de:• Carnero• Caballo• Buey

• No hemolizan los eritrocitos humanos

Anticuerpos heterófilos

• 1a semana: leucopenia ( 3mil GB X mm3)

• 2da y 3ra semana: leucocitosis (10milGB x mm3).

• Frotis periférico: linfocitos reactivos de 50-90%

Cuadro hemático

71

• NúcleoExcéntricoIrregularHendidurasCromatina con espacios

claros (Apariencia de nucleolos)

• CitoplasmaTono azul intenso (basofilia)Múltiples vacuolasBordes rasgados o alargados

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LINFOCITOS REACTIVOS

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•No son patognomónicos de MI•Puede presentarse en herpes, rubéola, sarampión y CMV

Pruebas serológicas basadas en la detección del título de anticuerpos heterófilos de la MI• Monotest• Estudio de anticuerpos virales IgM ó IgM ANTI VCA• Prueba de Inmunofluorescencia Indirecta para la

determinación del VEB

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Monotest• Prueba rápida sobre portaobjetos que utiliza eritrocitos de caballo

formulados, como indicador inmunológico con exactitud del 99%.

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Hematíe de caballo

Suero del paciente Mezclar durante 2min

POSITIVO NEGATIVO

Estudio de anticuerpos virales IgM ó IgM ANTI-VCA

• Basada en que durante la infección primaria con VEB se originan Ac contra varios Ag específicos del VEB.

• Su utilidad se debe a que 10-15% de los pacientes con MI pueden ser heterófilos negativos si son sometidos a una sola prueba durante la primera semana de la enfermedad, por lo que esta prueba indicará si la enfermedad es reciente o aguda.

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Antígeno similar al humano

Suero del paciente en estudio conteniendo el Ac

incubado con la sección que tiene el Ag

Prueba de Inmunofluorescencia Indirecta para la determinación del VEB • Es específica

• Permite detectar y confirmar la presencia del VEB ya que ninguno de los virus humanos que pertenecen al grupo del los virus herpes reacciona con los cultivos celulares del linfoma de Burkitt.

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YY

Substrato: tejido animal

Anticuerpo unido a fluoresceína dirigido contra Igs humanas

• Positividad de IFIRevelan que el paciente posee en su suero Ac contra VEB, si se observan dichos Ac como áreas fluorescentes dentro de las células infectadas por el virus. Se obtiene una fluorescencia brillante de color verde porque varios anticuerpos fluorescentes pueden unirse a uno de los anticuerpos del paciente.

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