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LE MILIEU DE HUGH ET LEIFSON
Peptone pancréatique de caséine 2 gExtrait de levure 1 g Chlorure de sodium 5 gPhosphate monopotassique 0,3 gGlucose 10 g Bleu de Bromothymol 0,03 gAgar (gélose) 3 g ED qsp 1 L
Composition
Source de C et N
Source de C à rajouter
solidification du milieu gélose semi solide
Indicateur de pHVert pH basique ou neutre, jaune pH acide
Milieu aqueux
pH = 7,2
Source de C, N, minéraux et vitamines
Source de PÉquilibre ionique
Technique d’ ensemencement
1- Régénérer le tube 20 minutes au bain marie bouillant
2- Ajouter le volume de solution de glucose stérile dans le milieu en surfusion: à 45°C
3- A jouter trois gouttes de suspension bactérienne et refroidir immédiatement le tube sous l’eau froide.4- Ne pas visser le tube à fond
5- Incuber 24 heures à 37°C
lectureVirage de l’indicateur de pH au jaune dans tout le tube. Le milieu est devenu acide.Il y a eu production d’acides lors de l’utilisation du glucose par les bactéries en présence et en absence d’O2.Les bactéries sont fermentatives vis-à-vis du glucose.
Virage de l’indicateur de pH au jaune dans la partie supérieure du tube. Le milieu est devenu acide.Il y a utilisation du glucose par les bactéries en présence d’ O2.
Les bactéries sont oxydatives vis-à-vis du glucose.
Le milieu reste tel qu’il était avant ensemencement. Il n’y a pas de culture.Les bactéries sont inertes vis-à-vis du glucose
Le milieu Citrate de Simmons
Sulfate de magnésium 0,2 g
Phosphate monopotassique 1 g Phosphate bipotassique 1 gCitrate de sodium 2 gNaCl 5 g Bleu de Bromothymol 0,08 gAgar (gélose) 15 g ED qsp 1 L
Composition
Equilibre osmotique
Indicateur de pHVert pH basique ou neutre, jaune pH acide
pH = 6,8
Sources minérales
Seule source de C
6 7,6
Ensemencement
Faire une strie centrale avec une suspension en eau physiologique ou directement à partir d’une colonieNe pas visser le bouchon à fondIncuber 24 h à 37°C
Milieu de Clark et Lubs
Peptone trypsique ou polypeptone 5 à 7 gGlucose 5 gPhosphate bipotassique 5 gED qsp 1 L
Composition
Source de C
pH = 7
Sources minérales
Source minérale
Ensemencement
Ensemencer avec 5 à 10 gouttes de suspension bactérienne.Ne pas visser le bouchon à fondIncuber 24 h à 37°C
Test RM
Après incubation, prélever 2 mL du milieu et les déposer dans un tube à hémolyse.Ajouter 1 à 2 gouttes de rouge de méthyle.Observer. 4,5 6,8
Test VP
Après incubation, prélever 1 mL du milieu et les déposer dans un tube à hémolyse.Ajouter 0,5 mL d’-naphtol et 0,5 mL de soude. Mélanger et incliner le tube.Faire la lecture après 10 à 15 min de contact.
Milieu de Kligler Hajna
Extrait de viande de boeuf 3 gExtrait de levure 3 g Peptone 20 gChlorure de sodium 5 gCitrate ferrique 0,3 gThiosulfate de sodium 0,3 gLactose 10 gGlucose 1 g Rouge de phénol 0,05 gAgar (gélose) 12 g ED qsp 1 L
Source de C et N
Composition
Equilibre osmotiqueMise en évidence de la formation H1 SSource de soufre, témoin d’oxydo-rédcution
Source glucidique majoritaire
Source glucidique minoritaire
Indicateur de pH
6,5 8,2
pH = 7,4
Ensemencement
2) Piqûre centrale dans le culotFil droit ou pipette boutonnée
1) Stries serrées sur la penteÖse ou pipette boutonnée
Milieu mannitol mobilité nitraté
peptone 20 gNitrate de potassium 2 gMannitol 2 gRouge de phénol à 1 % 4 mLgélose 4 gED qsp 1 L
Composition
Source de C
pH = 8
Sources de C et N
Indicateur de pH
Ensemencement
Apport de nitrates
Piqûre centrale avec le fil droit
Lecture des milieux
Citrate de Simmons
1ère lecture possible
Le milieu ne présente aucune culture.Les bactéries n’utilisent pas le citrate comme source de carbone : CITRATE -
2nde lecture possible
Le milieu présente une culture, l’indicateur de pH a viré au bleu le milieu est devenu basique.Les bactéries ont utilisé le citrate comme source de carbone en produisant des composés alcalinisant le milieu: CITRATE +
Clarck et Lubs
1ère lecture possible
Le milieu est devenu rouge le pH est acide . Il y a eu formation de composés acides par les bactéries au cours de la fermentation du glucose.Les bactéries utilisent la voie des acides mixtes : RM +.
2nde lecture possible
1- Test RM
Le milieu est devenu jaune le pH est basique .Les bactéries n’utilisent pas la voie des acides mixtes lors de la fermentation du glucose : RM -.
2- Test VP
1ère lecture possible
2nde lecture possible
Formation d’une coloration rouge en surface . Il y a formation d’acétoïne et de butanediol dans le milieu lors de la fermentation du glucose. Les bactéries utilisent la voie du butanediol : VP +.
Pas de modification du milieu .Les bactéries n’utilisent pas la voie du butanediol lors de la fermentation du glucose : VP -.
Mannitol mobilité
1ère lecture possible
Le milieu est resté rouge le pH est neutre ou basique .Les bactéries ne fermentent pas le mannitol : MANNITOL -.
2nde lecture possible
1- Utilisation du mannitol
Le milieu est devenu jaune le pH est acide .Les bactéries fermentent le mannitol et produisent des acides qui acidifient le milieu : MANNITOL +.
2- Mobilité
1ère lecture possible
Observation d’une culture dans tout le tube.Les bactéries ont diffusé dans tout le milieu : elles sont MOBILES.
Culture uniquement au niveau de la piqûre centrale.Les bactéries sont IMMOBILES.
2nde lecture possible
Kligler Hajna
1- lecture de la production d’H2 S
Précipité noir de sulfure ferrique
Production d’H2S par les bactéries ! H2S+
Pas de précipité noirbactéries ! H2S-
2- lecture de la production de gaz
Présence de bulles dans la géloseLes bactéries produisent du gaz (H2 ou CO2) au cours de leur fermentation : GAZ +
Pas de bulle dans la gélosebactéries ! GAZ -
3- Lecture de l’utilisation du lactose
Alcalinisation de la pente, les bactéries ne fermentent pas le lactose: LACTOSE -
Acidification du culot lors de la fermentation du glucose : GLUCOSE +
Acidification de tout le milieu lors de la fermentation des glucides : GLUCOSE + et LACTOSE +
Le milieu reste orangé. Les bactéries n’utilisent pas le glucose et le lactose.GLC - et LAC -
Pente jaune
Culot rouge
Acidification du milieu en aérobiose lors de l’utilisation des glucides : LAC + et GLC + oxydatif
Recherche de la -galactosidase
Elle s’effectue sur un tube de Kligler LAC -
1) Faire une suspension épaisse à partir de colonies prélevées sur la pente
2) Ajouter stérilement un disque ONPG
3) Incuber à 37°C pendant 30 minutes
1) Le tube reste incolore. absence de la -galactosidase : ONPG -
2) La suspension est colorée en jaune présence de la -galactosidase : ONPG +, mais absence de la perméase.
Kligler Hajna
1- lecture de la production d’H2 S
Précipité noir de sulfure ferrique
Production d’H2S par les bactéries ! H2S+
Pas de précipité noirbactéries ! H2S-
2- lecture de la production de gaz
Présence de bulles dans la géloseLes bactéries produisent du gaz (H2 ou CO2 a)u cours de leur fermentation : GAZ +
Pas de bulle dans la gélosebactéries ! GAZ -
3- Lecture de l’utilisation du lactose
Pente rouge
Culot jaune
Alcalinisation de la pente, les bactéries ne fermentent pas le lactose: LACTOSE -
Acidification du culot lors de la fermentation du glucose : GLUCOSE +
Tube jaune
Acidification de tout le milieu lors de la fermentation des glucides : GLUCOSE + et LACTOSE +
Tube orange
GLC - et LAC -
Pente jaune
Acidification du milieu en aérobiose lors de l’utilisation des glucides : LAC + et GLC + oxydatif
Culot rouge
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