View
8
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
UJI EFEK INHIBISI ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI
INFUSA DAUN SALAM (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.) DAN DAUN
SISIK NAGA (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price).
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Desty Sandy Oktoviana Liunokas
NIM: 168114106
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2020
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
i
UJI EFEK INHIBISI ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI INFUSA
DAUN SALAM (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.) DAN DAUN SISIK
NAGA (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price).
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Desty Sandy Oktoviana Liunokas
NIM: 168114106
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2020
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
“Sebab Aku ini mengetahui rancangan-rancangan apa yang ada pada-Ku
mengenai kamu, demikianlah firman TUHAN, yaitu rancangan damai
sejahtera dan bukan rancangan kecelakaan, untuk memberikan kepadamu
hari depan yang penuh harapan”
(Yeremia 29:11)
Skripsi ini aku persembahkan untuk :
Tuhan Yesus Kristus yang telah memberikan kekuatan, pengetahuan, hikmat dan
akal budi sehingga dapat menyelesaikan skripsi ini.
Kedua orang tua tercinta yang tidak pernah berhenti mendukung dalam doa dan
memberi semangat
Semua keluarga dan sahabat yang selalu memberi semangat dalam penyusunan
skripsi ini
Almamater tercinta Universitas Sanata Dharma Yogyakarta
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ......................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN .................................................................... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN.................................................................. iv
HALAMAN PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................ v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ..................... vi
PRAKATA .................................................................................................. vii
DAFTAR ISI ............................................................................................... x
DAFTAR TABEL ....................................................................................... xii
DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xiii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xiv
ABSTRAK .................................................................................................. xv
ABSTRACT .................................................................................................. xvi
PENDAHULUAN....................................................................................... 1
METODE PENELITIAN ............................................................................ 4
Alat dan Bahan ......................................................................................... 4
Pengumbulan Tumbuhan ......................................................................... 4
Determinasi Tumbuhan ............................................................................ 4
Pembuatan Simplisia ................................................................................ 5
Pembuatan Infusa ..................................................................................... 5
Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis .... 5
Uji Efek Inhibisi Xantin Oksidase ........................................................... 6
Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 7,5 ............................................ 6
Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase 0,1 unit/mL ................... 6
Pembuatan Larutan Substrat Xantin .................................................... 6
Pembuatan Larutan Asam Klorida 1 N................................................ 7
Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ........................................ 7
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Blanko ................................ 7
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Blanko ............................................. 7
Pembuatan Larutan Standar Allopurinol 1000 µg/mL ........................ 7
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Standar Allopurinol ............ 8
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Standar Allopurinol ......................... 8
Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Infusa Daun Sisik Naga ............. 8
Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Infusa Daun Salam .................... 9
Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Kombinasi ................................. 9
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Sampel................................ 9
Pengujin Efek Inhibisi Larutan Sampel ............................................... 9
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
Perhitungan Nilai IC50 ......................................................................... 10
Analisis Data Statistik ......................................................................... 10
HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................... 12
Penyiapan Bahan ...................................................................................... 12
Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode KLT ..................................... 13
Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase..................................... 15
KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................... 19
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 20
LAMPIRAN ................................................................................................ 23
BIOGRAFI PENULIS ................................................................................ 49
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
DAFTAR TABEL
Tabel I. Hasil Uji KLT Flavonoid ......................................................... 15
Tabel II. Nilai IC50 Allopurinol, Infusa Daun Salam, Infusa Daun Sisik
Naga, dan Kombinasi ............................................................... 17
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1 Hasil Elus KLT Infusa Tunggal Daun Salam, Infusa Tunggal
Daun Sisik Naga, dan Kombinasi ........................................ 14
Gambar 2. Transformasi Xantin Menjadi Asam Urat untuk XO ........... 16
Gambar 3. Struktur Allopurinol ............................................................. 17
Gambar 4. Daun Tumbuhan Salam ........................................................ 28
Gambar 5. Daun Tumbuhan Sisik Naga ................................................ 28
Gambar 6. Serbuk Simplisia Daun Salam .............................................. 28
Gambar 7. Sebuk Simplisia Daun Sisik Naga ........................................ 28
Gambar 8. Kurva Allopurinol Repetisi 1 ............................................... 36
Gambar 9. Kurva Allopurinol Repetisi 2 ............................................... 36
Gambar 10. Kurva Allopurinol Repetisi 3 ............................................... 36
Gambar 11. Kurva Kombinasi Repetisi 1 ................................................ 37
Gambar 12. Kurva Kombinasi Repetisi 2 ................................................ 38
Gambar 13. Kurva Kombinasi Repetisi 3 ................................................ 38
Gambar 14. Kurva Infusa Tunggal Daun Sisik Naga Repetisi 1 ............. 39
Gambar 15. Kurva Infusa Tunggal Daun Sisik Naga Repetisi 2 ............. 40
Gambar 16. Kurva Infusa Tunggal Daun Sisik Naga Repetisi 3 ............. 40
Gambar 17. Kurva Infusa Tunggal Daun Salam Repetisi 1 ..................... 41
Gambar 18. Kurva Infusa Tunggal Daun Salam Repetisi 2 ..................... 42
Gambar 19. Kurva Infusa Tunggal Daun Salam Repetisi 3 ..................... 42
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat pengesahan determinasi salam .................................. 23
Lampiran 2 Surat pengesahan determinasi sisik naga............................ 24
Lampiran 3. Certificate of analysis xantin oksidase ............................... 25
Lampiran 4. Certificate of analysis xantin .............................................. 26
Lampiran 5. Gambar tumbuhan dan serbuk daun salam dan daun sisik .
naga ..................................................................................... 28
Lampiran 6. Data penimbangan serbuk simplisia tumbuhan daun salam
dan daun sisik naga untuk infusa ........................................ 29
Lampiran 7. Data penimbangan bahan KLT ........................................... 29
Lampiran 8. Data perhitungan nilai Rf ................................................... 30
Lampiran 9. Pembuatan larutan xantin oksidase..................................... 31
Lampiran 10. Pembuatan larutan substrat xantin ...................................... 32
Lampiran 11. Pembuatan Larutan Asam klorida ...................................... 32
Lampiran 12. Data panjang gelombang .................................................... 32
Lampiran 13. Pembuatan larutan seri standar allopurinol ........................ 33
Lampiran 14. Pembuatan larutan seri infusa daun salam, daun sisik naga
dan kombinasi ..................................................................... 33
Lampiran 15. Data uji penghambatan enzim xantin oksidase................... 35
Lampiran 16. Sertifikat CE & BU............................................................. 43
Lampiran 17. Data uji statistik .................................................................. 44
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
ABSTRAK
Hiperurisemia adalah keadaan dimana kadar asam urat berlebih di dalam
tubuh. Asam urat adalah produk dari metabolisme purin yang mengendap di
persendian sehingga menimbulkan rasa nyeri yang hebat dan kaku. Xantin
oksidase (XOD) mengkatalisasi oksidasi hipoksantin dan xantin menjadi asam
urat, yang memiliki peran penting dalam pembentukan asam urat. Metabolit
sekunder yaitu flavonoid yang terdapat pada tanaman daun salam dan daun sisik
naga dapat berperan sebagai inhibitor xantin oksidase. Penelitian ini bertujuan
untuk mengetahui aktivitas kombinasi infusa daun salam (Syzygium polyanthum
(Wight) Walp dan daun sisik naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) dalam
penghambatan enzim xantin oksidase. Tahapan penelitian ini meliputi penyiapan
sampel, determinasi tumbuhan, pembuatan simplisia, pembuatan infusa, pengujian
efek inhibisi enzim xantin oksidase untuk menentukan nilai IC50 dimana
allopurinol digunakan sebagai pembanding, dan pengujian kandungan senyawa
flavonoid dengan metode KLT.
Hasil pengujian KLT didapatkan bahwa daun sisik naga dan daun salam
mengandung flavonoid. Hasil uji efek penghambatan enzim xantin oksidase pada
infusa tunggal daun salam diperoleh nilai rata-rata IC50 sebesar 45.674 µg/mL,
pada infusa tunggal daun sisik naga diperoleh nilai rata-rata IC50 sebesa 41.637
µg/mL, sedangkan pada kombinasi diperoleh nilai rata-rata IC50 sebesar 33.246
µg/mL. Berdasarkan hasil uji statistika dengan uji one way anova menyatakan
bahwa hasil yang didapatkan berbeda bermakna secara signifikan antara sampel
dengan allopurinol yang dinyatakan dengan p<0.05.
Kata kunci : Hiperurisemia, xantin oksidase, infusa daun salam, infusa sisik naga,
konsentrasi inhibisi IC50.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
ABSTRACT
Hyperuricemia is a condition in which excess uric acid levels in the body.
Uric acid is a product of purine metabolism which settles in the joints, causing
intense pain and stiffness. Xanthine oxidase (XOD) catalyzes the oxidation of
hypoxanthine and xanthine to uric acid, which has an important role in the
formation of uric acid. Flavonoids as secondary metabolites found in salam leaves
and sisik naga can act as xanthine oxidase inhibitors. This study aims to determine
the activity of the combination of salam infusion (Syzygium polyanthum (Wight)
Walp and sisik naga infusion (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) in the
inhibition of xanthine oxidase enzymes. The stages of this research included
sample preparation, plant determination, manufacturing of simplicia, making
infusion, testing the inhibitory effect of the xanthine oxidase enzyme to determine
the IC50 value where allopurinol was used as a comparison, and testing the content
of flavonoid compounds using the TLC method.
The results of the TLC test showed that sisik naga leaves and salam leaves
contain flavonoids. The test results of the inhibitory effect of the enzyme xanthine
oxidase on a single infusion of salam leaves obtained an average IC50 value of
45,674 µg / mL, for single infusion of sisik naga leaves an average IC50 value was
41,637 µg / mL, and the combination obtained an average IC50 value. 33,246 µg /
mL. Based on the results of the statistical test on the one way ANOVA test, it was
stated that the results obtained were significantly different between the samples
with allopurinol which was stated with p <0.05.
Keywords: Hyperuricemia, xanthine oxidase, salam leaf infusion, sisik naga leaf
infusion, inhibition concentration (IC50).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
PENDAHULUAN
Asam urat adalah produk dari metabolisme purin yang mengendap di
persendian dan membentuk kristal kecil sehingga menimbulkan rasa nyeri yang
hebat dan kaku, juga pembesaran dan penonjolan sendi yang bengkak. Pada
kondisi tertentu dapat terjadi peningkatan kadar asam urat dalam darah melebihi
batas normal yang disebut hiperurisemia. Hiperurisemia dapat disebabkan oleh
tingkat produksi asam urat yang berlebih, ekskresi asam urat melalui ginjal yang
berkurang atau kombinasi keduanya (Ernawati et al, 2014). Pada sebagian besar
penelitian epidemiologi, disebut sebagai hiperurisemia jika kadar asam urat serum
orang dewasa lebih dari 7,0 mg/dl pada laki-laki dan lebih dari 6,0 mg/dl pada
perempuan (Dianati, 2015).
Xantin oksidase merupakan enzim yang berperan dalam mengkatalisis
oksidasi hipoxantin menjadi xantin kemudian menjadi asam urat. Xantin oksidase
sangat penting dalam metabolisme purin, karena dapat menghasilkan asam urat
dengan cara mengubah hipoxantin menjadi xantin (Unno et al, 2004).
Penghambatan xantin oksidase dapat menghalangi terjadinya proses biosintesis
asam urat yang menjadi salah satu pendekatan terapeutik untuk pengobatan
hiperurisemia (Putri et al, 2016).
Daun salam (Syzygium polyanthum (Wight) Walp dapat digunakan dalam
pengobatan asam urat. Kandungan utama yang dimiliki daun salam meliputi
saponin, triterpen, flavonoid total sebesar 0,19 %, tanin, polifenol, dan alkaloid.
Flavonoid kuersetin dan miresetin pada tanaman salam diduga berkhasiat dalam
menghambat kerja enzim xantin oksidase (Muhtadi et al, 2012).
Daun sisik naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) memiliki
kandungan metabolit sekunder yaitu tanin, fenol, minyak atsiri, dan flavonoid.
Beberapa penelitian menyatakan bahwa tumbuhan sisik naga memiliki
kemampuan sebagai antioksidan, antikanker, dan antimikroba (Sumito et al.,
2016). Menurut Cos et al (1998) flavonoid adalah sekelompok senyawa alami
yang memiliki aktivitas biologi dan farmakologi sebagai antibakteri, anti kanker,
antioksidan, efek antimutagenik dan penghambatan beberapa enzim telah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
dibuktikan. Dalam penelitian tersebut dikatakan bahwa flavonoid memiliki
aktivitas penghambatan enzim xantin oksidase.
Obat sintetik yang biasa digunakan untuk mengatasi asam urat adalah
allopurinol. Allopurinol bekerja menghambat pembentukan asam urat dari
prekursornya (xantin dan hipoxantin) dengan menghambat aktivitas enzim xantin
oksidase. Allopurinol memberikan efek samping yaitu ruam kulit, leukopenia,
masalah gastrointestinal, sakit kepala, dan urtikaria (Wells et al, 2015).
Penggunaan obat sintetik salah satunya yaitu allopurinol dalam mengatasi asam
urat memberikan beberapa efek samping, sehingga banyak masyarakat yang lebih
memilih untuk memanfaatkan tanaman herbal sebagai pengganti obat sintetik.
Katno (2002) menemukan bahwa bahan alami memiliki efek samping yang lebih
kecil dibandingkan obat sintesis walaupun dikonsumsi dalam jangka waktu yang
lama. Faktor pendorong terjadinya peningkatan penggunaan obat herbal di negara
maju adalah usia harapan hidup yang lebih panjang pada saat prevalensi penyakit
kronik meningkat, adanya kegagalan penggunaan obat modern untuk penyakit
tertentu di antaranya kanker serta semakin luas akses informasi mengenai obat
herbal di seluruh dunia (Sukandar, 2006).
Bentuk sediaan infusa merupakan bentuk sediaan yang sederhana dan
mudah untuk dikonsumsi oleh masyarakat. Infusa merupakan sediaan cair yang
dibuat dengan mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90˚C selama
15 menit (Khafidhoh et al, 2015). Pada umumnya masyarakat Indonesia mengolah
tanaman obat secara konvensional yaitu dengan merebusnya menggunakan air.
Air memiliki kemampuan mengekstrak senyawa polar yang terdapat pada
tanaman obat lebih baik dibandingkan dengan etanol (Devi et al, 2019).
Penelitian Andriani et al (2016) mengatakan bahwa rata-rata perbedaan
hasil penurunan kadar asam urat sebelum dan sesudah pemberian air rebusan daun
salam adalah 1,40 mg/dL, hasil ini menunjukkan adanya penurunan kadar asam
urat antara sebelum dan sesudah diberikan air rebusan daun salam pada penderita
asam urat. Penelitian mengenai efek penghambatan tumbuhan sisik naga pohon
inang teh oleh Silviana (2019) didapatkan nilai IC50 yang menunjukkan bahwa
ekstrak metanol memiliki daya hambat aktivitas xantin oksidase yang lebih baik
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
dibandingkan dengan ekstrak etil asetat dan ekstrak diklorometana. Penelitian
mengenai uji penghambatan enzim xantin oksidase kombinasi daun salam dan
daun sidaguri oleh Telaumbanua (2018) menunjukan bahwa kombinasi infusa
daun salam dan daun sidaguri memiliki efek yang lebih baik dibandingkan dengan
infusa tunggal daun salam dalam penghambatan aktivitas xantin oksidase.
Berdasarkan ketiga penelitian diatas yang mengatakan infusa daun salam dan
ekstrak metanol sisik naga pohon inang teh memiliki aktivitas xantin oksidase,
sehingga peneliti tertarik untuk melakukan pengujian efek penghambatan xantin
oksidase pada kombinasi infusa daun salam dan daun sisik naga.
Dengan demikian, peneliti ingin mengetahui kemampuan kombinasi infusa
daun salam dan daun sisik naga dalam menurunkan kadar asam urat. Pemberian
kombinasi bahan aktif bertujuan untuk memberikan efek sinergisme atau efek
antagonis untuk melihat keefektifan ekstrak saat diberikan secara kombinasi
dibandingkan dengan pemberian secara tunggal. Kombinasi yang menguntungkan
adalah kombinasi bahan aktif yang memberikan efek sinergis (Syahrir et al,
2016). Efek sinergi adalah hasil dari menggabungkan dua atau lebih senyawa
kimia untuk menghasilkan efek yang lebih besar daripada efek tunggalnya.
Sebaliknya, antagonis adalah fenomena di mana kombinasi senyawa
menghasilkan efek keseluruhan yang kurang dari efek senyawa tunggal (Bulusu et
al, 2016 ).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan adalah spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu) ,
timbangan analitik (Ohaus), pH meter (Ohaus), vortex mixer (Stuart Scientific),
microtube (Eppendorf), oven (Memmert), hot plate, rotary evaporator (Butchi),
corong buchner, bejana maserasi, pipet mikro (Stuart Scientific), tabung reaksi
(Pyrex), beaker gelas, (Pyrex), labu ukur (Pyrex), dan alat-alat gelas lainnya
(Pyrex).
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun salam, daun sisik
naga, aquades bebas CO2, KH2PO4 1 M, HCl 1 N (Pa), dapar fosfat 0,05 M,
NaOH 1 M (Pa), kuarsetin, Substrat Xantin (Sigma Aldrich), Allopurinol, Enzim
Xantin Oksidase (Sigma Aldrich).
Pengumpulan Tumbuhan
Tanaman Salam diambil dari CV Merapi Farmasi dengan spesifikasi
berupa daun segar warna hijau, utuh tidak berlobang, bersih, daun keempat dari
pucuk dan keempat dari pangkal batang. Pencucian dilakukan terlebih dahulu
untuk menghilangkan kotoran yang menempel seperti debu. Bagian daun
dipisahkan dari bagian tanaman lain yang terikut saat pengumpulan, kemudian
dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang melekat lalu
ditiriskan sampai sisa air menghilang.
Tanaman Sisik naga diambil dari CV Merapi Farmasi dengan spesifikasi
daun fertil, warna hijau, tidak berlubang dan bersih. Pencucian dilakukan terlebih
dahulu untuk menghilangkan kotoran yang menempel seperti debu. Bagian daun
dipisahkan dari bagian tanaman lain yang terikut saat pengumpulan, kemudian
dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang melekat
selanjutnya ditiriskan sampai sisa air menghilang.
Determinasi Tumbuhan
Determinasi pada tumbuhan sisik naga dan daun salam dilakukan di
Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma, Yogyakarta. Bagian tumbuhan yang digunakan dalam determinasi adalah
keseluruhan bagian tumbuhan sisik naga dan salam.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
Pembuatan Simplisia
Daun tanaman salam dan daun sisik naga dikeringkan dalam oven pada
suhu 40ºC sampai kering, dikatakan kering jika daun dapat hancur ketika diremas
dengan tangan. Daun tanaman salam dan daun sisik naga yang telah kering
kemudian diserbuk menggunakan alat penyerbukan, lalu diayak dengan ayakan
no.40 mesh.
Pembuatan Infusa
Infusa daun salam dan daun sisik naga masing-masing dibuat dengan
cara serbuk kering yang sudah diayak kemudian ditimbang sebanyak 10 gram dan
dicampur dalam panci dengan aquades 100 mL dilakukan secara bertahap sedikit
demi sedikit, kemudian panaskan di atas tangas air selama 15 menit terhitung
mulai suhu mencapai 90o
sambil sekali-kali diaduk. Selanjutnya disaring selagi
panas menggunakan kain flanel dan ditambahkan air panas secukupnya melalui
ampas sehingga diperoleh volume 100 mL. Hasil infusa dipekatkan menggunakan
vacuum rotary evaporator, kemudian dipanaskan di atas waterbath sampai
mendapakan ekstrak kental. Ekstrak kental kemudian dikeringkan didalam oven
pada suhu 40oC sampai mendapatkan ekstrak kering.
Infusa kombinasi daun salam dan daun sisik naga dibuat dengan cara
ditimbang masing-masing daun salam 5 gram dan daun sisik naga 5 gram
dicampur dalam panci dengan aquades 100 mL dilakukan secara bertahap sedikit
demi sedikit, kemudian panaskan di atas tangas air selama 15 menit terhitung
mulai suhu mencapai 90o
sambil sekali-kali diaduk. Selanjutnya disaring selagi
panas menggunakan kain flanel dan ditambahkan air panas secukupnya melalui
ampas sehingga diperoleh volume 100 mL. Hasil infusa dipekatkan menggunakan
vacuum rotary evaporator, kemudian dipanaskan di atas waterbath sampai
mendapakan ekstrak kental. Ekstrak kental kemudian dikeringkan didalam oven
pada suhu 40oC sampai mendapatkan ekstrak kering.
Uji Kandungan Flavonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis
Infusa tunggal daun salam, daun sisik naga, dan kombinasinya yang
digunakan untuk identifikasi secara KLT dibuat dengan melarutkan masing-
masing 0,1 gram infusa dengan aquades. Infusa ditotolkan pada fase diam silika
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
60 GF254 dengan menggunakan pipa kapiler jarak 2 cm dari tepi bawah lempeng
plat KLT dan dibiarkan mengering. Plat dimasukkan ke dalam bejana tertutup
yang telah dijenuhkan dan fase gerak dibiarkan merambat sampai batas jarak
rambatnya. Fase gerak yang digunakan yaitu n-butanol-asam asetat-air (10: 2,5:
12,5). Plat diangkat dan dikeringkan lalu bercak diamati dengan sinar tampak
pada panjang gelombang 254 nm dan 365 nm dengan pereaksi semprot AlCl3.
Bercak yang muncul dibandingkan dengan standar yaitu kuersetin. Jarak tiap
bercak dari titik awal penotolan sampai titik akhir bercak diukur dan dicatat,
kemudian dihitung nilai Rf dari setiap bercak.
Uji Efek Inhibisi Xantin Oksidase
Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase dilakukan pada
infusa daun salam tunggal, infusa daun sisik naga tunggal, dan kombinasi infusa
daun salam dan daun sisik naga. Prosedur penelitian merujuk pada Owen et.al dan
Umamaheswari et.al.
Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 7,5
Kalium dihidrogen phosfat (KH2PO4) ditimbang sebanyak 6,805 gram
dilarutkan dalam 600 mL aquadest bebas CO2 kemudian ditambahkan 18 ml
larutan NaOH 2 N dan diencerkan dengan aquadest bebas CO2 hingga 1000 mL.
Atur pH sampai 7,5 dengan menambahkan NaOH 0,2 N atau HCl 0,2 N.
Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase 0,1 unit/mL
Enzim xantin oksidase ditimbang sebanyak 9,0875 mg, kemudian
dilarutkan dengan dapar fosfat pH 7,5 dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL
selanjutnya ditambahkan dapar fosfat pH 7,5 hingga batas tanda.
Pembuatan Larutan Substrat Xantin
Substrat xantin ditimbang sebanyak 15,21 mg dan dilarutkan dengan
beberapa tetes NaOH 0,2 N hingga larut, kemudian dimasukkan ke dalam labu
ukur 100 mL dan ditambahkan aquadest bebas CO2 sampai batas tanda. Larutan
induk diambil 15 mL kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL dan
ditambahkan aquadest bebas CO2 hingga batas tanda.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
Pembuatan Larutan Asam Klorida 1 N
Sebanyak 8,33 mL asam klorida pekat diencerkan dengan aquadest bebas
CO2 hingga 100 mL.
Penentuan Optimasi Panjang Gelombang Maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan sebelum pengujian
untuk menetukan nilai serapan secara optimum. Larutan dapar fosfat 0,05 M pH
7,5 diambil sebanyak 3,9 mL, dimasukkan kedalam tabung reaksi dan
ditambahkan 2 mL larutan substrat xantin oksidase, kemudian diinkubasi selama
15 menit. Larutan xantin oksidase 0,1 mL ditambahkan dan digojok hingga
homogen lalu diinkubasi kembali selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan
penambahan 1 mL HCl 1 N. Pengukuran serapan dilakukan menggunakan
spektrofotometer pada panjang gelombang 200-400 nm.
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Blanko
Sebanyak 3,9 mL larutan dapar fosfat 0,05 M dimasukkan ke dalam
tabung reaksi dan ditambahkan 2 mL larutan substrat xantin oksidase kemudian
diinkubasi selama 15 menit. Setelah itu, ditambahkan 0,1 mL dapar fosfat dan
digojog hingga homogen, kemudian larutan diinkubasi pada suhu 30oC selama 30
menit. Reaksinya dihentikan dengan penambahan 1 mL HCl 1 N. Selanjutnya
diukur serapannya menggunakan spekrofotometer UV pada panjang gelombang
maksimum dan pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Blanko
Sebanyak 3,9 mL larutan dapar fosfat 0,05 M dimasukkan ke dalam
tabung reaksi dan ditambahkan 2 mL larutan substrat xantin oksidase kemudian
diinkubasi selama 15 menit. Setelah itu, ditambahkan 0,1 mL enzim xantin
oksidase dan digojog hingga homogen, kemudian larutan diinkubasi pada suhu
30oC selama 30 menit. Reaksinya dihentikan dengan penambahan 1 mL HCl 1 N.
Selanjutnya diukur serapannya menggunakan spekrofotometer UV pada panjang
gelombang maksimum dan pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.
Pembuatan Larutan Standar Allopurinol 1000 µg/mL
Tablet allopurinol digerus kemudian ditimbang sebanyak 10 mg dan
dilarutkan dengan beberapa tetes NaOH 1 N kemudian dimasukkan ke dalam labu
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
ukur 10 mL dan ditambahkan dengan aquades bebas CO2 hingga batas tanda
sehingga didapatkan konsentrasi 1000 µg/mL. Standar allopurinol dibuat dengan
mengencerkan larutan induk, diambil masing-masing 5; 10; 25; 50; dan 100 µL
dan dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL kemudian ditambahkan aquades bebas
CO2 hingga batas tanda sehingga akan diperoleh larutan standar allopurinol
dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL.
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Standar Allopurinol
Larutan uji dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL diambil
masing-masing 1 mL kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan
ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 2,9 mL dan 2
mL substrat xantin oksidase kemudian dilakukan pra inkubasi selama 15 menit.
Ditambahkan 0,1 mL dapar fosfat 0,05 pH 7,5 kemudian digojog hingga homogen
dan diinkubasi selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N
sebanyak 1 mL kemudian diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV
pada panjang gelombang maksimum. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Standar Allopurinol
Larutan uji dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL diambil
masing-masing 1 mL kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan
ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 2,9 mL dan 2
mL substrat xantin oksidase kemudian dilakukan pra inkubasi selama 15 menit
pada suhu 30oC. Ditambahkan 0,1 mL larutan enzim xantin oksidase 0,1 U/ml
kemudian digojog hingga homogen dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu
30oC. Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL kemudian
diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang gelombang
maksimum. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.
Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Sampel Infusa Daun Sisik Naga 1000
µg/mL
Sebanyak 10 mg sampel infusa daun sisik naga ditimbang dan dilarutkan
dengan aquades bebas CO2 hingga homogen dalam 10 mL labu ukur, sehingga
didapatkan konsentrasi 1000 µg/mL. Pembuatan larutan seri infusa dibuat dengan
dipipet masing masing 0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1 mL dimasukkan kedalam labu ukur
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
10 mL dan dicukupkan volumenya dengan air bebas CO2, sehingga akan
didapatkan larutan uji infusa konsentrasi 10; 25; 50; 75; 100 µg/mL.
Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Sampel Infusa Daun Salam 1000 µg/mL
Sebanyak 10 mg sampel infusa daun sisik naga ditimbang dan dilarutkan
dengan aquades bebas CO2 hingga homogen dalam 10 mL labu ukur, sehingga
didapatkan konsentrasi 1000 µg/mL. Pembuatan larutan seri infusa dibuat dengan
dipipet masing masing 0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1 mL dimasukkan kedalam labu ukur
10 mL dan dicukupkan volumenya dengan air bebas CO2, sehingga akan
didapatkan larutan uji infusa konsentrasi 10; 25; 50; 75; 100 µg/mL.
Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Sampel Infusa Kombinasi Daun Salam
dan Daun Sisik Naga 1000 µg/mL
Sejumlah 10 mg kombinasi infusa daun salam dan daun sisik naga
perbandingan 1:1 ditimbang dan dilarutkan dalam 10 mL air bebas CO2 hingga
homogen, sehingga didapatkan konsentrasi 1000 µg/mL. Pembuatan larutan seri
infusa dibuat dengan dipipet masing masing 0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1 mL
dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL dan dicukupkan volumenya dengan air
bebas CO2, sehingga akan didapatkan larutan uji infusa konsentrasi 10; 25; 50; 75;
100 µg/mL.
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Sampel
Larutan uji daun salam, daun sisik naga, atau kombinasi daun salam dan
sisik naga dengan konsentrasi 10; 25; 50; 75; 100 µg/mL diambil masing-masing
1 mL kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan dengan
larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 2,9 mL dan 2 mL substrat xantin
oksidase kemudian dilakukan pra inkubasi selama 15 menit. Ditambahkan 0,1 mL
dapar fosfat 0,05 pH 7,5 kemudian digojog hingga homogen dan diinkubasi
selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL
kemudian diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang
gelombang maksimum.
Pengujian Efek Inhibisi Larutan Sampel
Larutan uji daun salam, daun sisik naga, atau kombinasi daun salam dan
sisik naga dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL diambil masing-
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
masing 1 mL kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan
dengan larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 2,9 mL dan 2 mL substrat
xantin oksidase kemudian dilakukan pra inkubasi selama 15 menit. Ditambahkan
0,1 mL enzim xantin oksidase kemudian digojog hingga homogen dan diinkubasi
selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL
kemudian diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang
gelombang maksimum.
Perhitungan Penghambatan Enzim Xantin Oksidase (IC50)
Perhitungan % aktivitas inhibitor enzim xantin oksidase dapat dihitung
dengan rumus :
% Inhibisi = (1-
) x 100%
Keterangan :
A : Perubahan absorbansi larutan uji tanpa ekstrak tumbuhan sisik naga (Blanko
(abs dengan enzim) – Kontrol blanko (abs tanpa enzim))
B : Perubahan absorbansi larutan uji dengan ekstrak tumbuhan sisik naga
(Sampel (abs dengan enzim) – Kontrol sampel (abs tanpa enzim))
Nilai IC50 dihitung menggunakan rumus persamaan regresi untuk
menentukan y = a + bx. Aktivitas inhibisi dinyatakan dengan Inhibition
Concentration 50% (IC50) yaitu konsentrasi sampel yang dapat menghambat kerja
enzim xantin oksidase sebanyak 50%. Nilai IC50 didapatkan dari nilai x setelah
mengganti y = 50.
Analisis Data Statistik
Data pengujian kandungan flavonoid dengan menggunakan metode KLT
dibuat dalam bentuk tabel yang selanjutnya hasil dideskripsikan. Data uji
penghambatan xantin oksidase dihitung nilai absorbansi setiap sampel, persen
inhibisi, dan selanjutnya dihitung IC50 menggunakan metode regresi linear.
Analisis Shapiro-Wilk digunakan untuk melihat data terdistribusi normal
atau tidak. Jika data terdistribusi normal maka dapat dilakukan uji Anova satu
arah dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan data antar
kelompok. Apabila data yang didapatkan tidak terdistribusi normal maka
dilakukan uji Kruskal-Wallis. Pada uji Anova satu arah atau Kruskal-Wallis yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
dilakukan apabila didapatkan hasil nilai P<0.05, dilanjutkan analisis Post-Hoc
untuk mengetahui kelompok yang berbeda bermakna. Dilakukan uji Post-Hoc
dengan menggunakan uji Scheffe apabila hasil data didapatkan terdistribusi
normal tetapi jika hasil data yang didapatkan tidak terdistribusi normal, maka
digunakan uji Mann-Whitney. Hasil nilai P<0.05 menunjukkan bahwa terdapat
perbedaan rerata bermakna antara dua kelompok data.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penyiapan Bahan
Tanaman daun salam dan daun sisik naga diambil dari CV Merapi Farmasi.
Daun salam diambil dengan spesifikasi berupa daun segar warna hijau, utuh tidak
berlobang, bersih, daun keempat dari pucuk dan keempat dari pangkal batang.
Daun Sisik naga diambil dengan spesifikasi daun fertil, warna hijau, tidak
berlubang dan bersih.
Dilakukan determinasi pada tanaman daun salam dan daun sisik naga yang
telah dikumpulkan. Tujuan dilakukan determinasi pada tanaman salam dan sisik
naga yaitu untuk memastikan kebenaran identitas tanaman dengan jelas. Hasil dari
determinasi menunjukan tanaman yang digunakan benar merupakan tanaman
salam Syzygium polyanthum (Wight) Walp dan sisik naga Pyrrosia piloselloides
(L.) M.G.Price. Hasil didukung dengan adanya surat keterangan dari
Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas Farmasi, Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta.
Tanaman daun salam dan daun sisik naga yang digunakan dalam
determinasi selanjutnya dicuci terlebih dahulu untuk menghilangkan kotoran yang
menempel seperti debu. Bagian daun dipisahkan dari bagian tanaman lain yang
terikut saat pengumpulan, kemudian dicuci dengan air mengalir untuk
menghilangkan kotoran yang melekat lalu ditiriskan sampai sisa air menghilang.
Setelah dilakukan pencucian, kedua tanaman dirajang untuk memperkecil ukuran
sehingga mudah untuk dikeringkan. Selanjutnya daun sisik naga dan daun salam
dikeringkan menggunakan oven dengan suhu 40oC sampai kering, dikatakan
kering jika daun dapat hancur ketika diremas dengan tangan. Tujuan dilakukan
pengeringan yaitu untuk mengurangi kadar air yang terdapat pada daun salam dan
daun sisik naga. Daun tanaman salam dan daun sisik naga yang telah kering
kemudian diserbuk menggunakan alat penyerbukan, lalu diayak dengan ayakan
no.40 mesh. Penyerbukan sangat penting karena dapat meningkatkan luas
permukaan partikel yang kontak dengan pelarut sehingga pelarut dapat masuk ke
dalam serbuk dan zat kimia berupa metabolit sekunder pada serbuk simplisia akan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
keluar dan bercampur dengan zat penyari sehingga proses penyarian dapat
berlangsung efektif.
Proses ekstraksi serbuk simplisia daun sisik naga dan daun salam
menggunakan metode ekstraksi pelarut secara panas yaitu infudasi. Pada
umumnya infusa merupakan teknik umum yang digunakan untuk ekstraksi
tanaman obat (Handa et al, 2008). Infusa merupakan sediaan cair yang dibuat
dengan mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90˚C selama 15
menit (Khafidhoh et al, 2015). Penggunaan bentuk sediaan infusa dikarenakan
sediaan infusa merupakan bentuk sediaan yang sederhana dan mudah untuk
dikonsumsi oleh masyarakat. Kandungan flavonoid pada daun memiliki sifat non
polar sampai polar karena adanya kandungan senyawa aglikon ataupun bentuk
glikosida. Ekstraksi infusa menggunakan pelarut polar yaitu air. Senyawa yang
memiliki tingkat kepolaran yang sama dengan pelarut akan lebih mudah
bercampur. Dengan demikian, diharapkan flavonoid dapat tersari pada sediaan
infusa (Sutrisna et al, 2010).
Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode KLT
Dilakukan pengujian kandungan kimia pada infusa daun salam dan daun
sisik naga dengan menggunakan metode KLT. Pengujian kandungan kimia
bertujuan untuk mengetahui kandungan flavonoid yang terdapat pada infusa di
mana flavonoid memilki kemampuan dalam penghambatan xantin oksidase.
Pengujian dilakukan dengan membandingkan nilai Rf pada standar dengan infusa.
Standar yang digunakan pada pengujian flavonoid yaitu kuersetin, karena
kuersetin merupakan flavonoid golongan flavonol yang memiliki gugus keto pada
atom C-4 dan juga gugus hidroksil pada atom C-3 dan C-5 yang bertetangga
(Azizah et al, 2014). Sampel dan standar ditotolkan pada fase diam yaitu silika 60
GF 254 kemudian dielusi pada chamber yang berisi fase gerak yaitu n-butanol-
asam asetat-air dengan perbandingan (10: 2,5: 12,5). Fase gerak yang digunakan
bersifat sangat polar sehingga bisa memisahkan senyawa flavonoid yang juga
bersifat polar. Eluen yang baik ialah eluen yang bisa memisahkan senyawa dalam
jumlah yang banyak dengan ditandai munculnya noda (Forestryana, 2020).
Sebelum digunakan plat KLT harus diaktivasi dengan menggunakan oven pada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
suhu 110oC selama 30 menit untuk menghilangkan air yang terdapat pada plat
KLT (Bele, 2011). Hasil elusi kemudian disemprot pereaksi AlCl3 untuk
mendeteksi senyawa fenolik, selanjutnya dideteksi dibawah sinar UV pada
panjang gelombang 365 nm dan 254 nm. Pengamatan bercak dilakukan pada sinar
tampak, sinar UV 254 dan sinar UV 365 nm.
Flavonoid adalah salah satu golongan senyawa fenolik terbesar dalam
tanaman dan merupakan salah satu metabolit sekunder. Struktur karbon dasar dari
flavonoid mengandung 15 karbon dengan 2 cincin aromatik yang dihubungkan
oleh jembatan 3-karbon (Wildman, 2007). Adanya kandungan flavonoid pada
tumbuhan menandakan adanya aktivitas antioksidan. Flavonoid merupakan salah
satu antioksidan alami (Kristanti et al, 2019).
Gambar 1. Hasil elusi KLT Infusa tunggal daun salam (A), infusa tunggal
daun sisik naga (B), kombinasi infusa daun salam dan sisik naga (C),
kuersetin (D)
Pengujian kandungan kimia pada infusa dilakukan dengan metode KLT
secara kualitatif. KLT merupakan metode yang dapat menganalisis sampel dalam
jumlah yang banyak secara paralel dalam satu waktu yang bersamaan dengan
waktu yang relatif lebih cepat dibandingkan kromatografi kolom (Rafi et al,
2017). Hasil positif adanya kandungan senyawa flavonoid ditandai dengan
terbentuknya bercak berwarna kuning setelah disemprot dengan AlCl3.
A B C D D A C B
Visual Lampu UV 365 nm
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
Tabel I. Hasil Uji KLT Flavonoid
No. Sampel
Visual setelah reagen
semprot (AlCl3)
Deteksi UV 365 nm setelah
reagen semprot (AlCl3)
Warna Rf (cm) Warna Rf (cm)
1. Kuersetin Kuning 0.98 Biru 0.82
2. Infusa
Kombinasi Kuning 0.96 Biru 0.78
3. Infusa Daun
Salam Kuning 0.8 Biru 0.7
4. Infusa Daun
Sisik Naga Kuning 0.98 Biru 0.78
Berdasarkan pengujian KLT pada sampel infusa daun salam, daun sisik
naga, dan kombinasi hasilnya menunjukan kemungkinan adanya kandungan
flavonoid jenis kuersetin yang dapat ditunjukan dengan adanya perubahan warna
menjadi warna kuning di bawah sinar UV pada panjang gelombang 365 nm dan
nilai Rf yang didapatkan mendekati nilai Rf pada pembanding kuersetin.
Pembanding kuersetin menghasilkan bercak berwarna kuning setelah dideteksi di
bawah sinar UV pada panjang gelombang 365 nm dengan nilai Rf sebesar 0.78
cm setelah disemprot pereaksi AlCl3.
Uji Penghambatan Enzim Xantin Oksidase
Enzim xantine oksidase (XO) merupakan enzim yang mengkatalisasi
oksidasi hipoksantin dan xantin menjadi asam urat. Hidroksilasi purin dikatalisis
oleh XO dan terutama konversi xantin menjadi asam urat yang lebih bertanggung
jawab untuk beberapa penyakit seperti asam urat, penyakit ginjal dan
pembentukan batu dalam sistem kemih (Mehta et al, 2014). Selama reoksidasi
xantin oksidase, oksigen molekular beraksi sebagai elektron akseptor,
memproduksi radikal superoksida dan hidrogen peroksida.
Xantin + 2O2 + H2O Asam urat + 2O2- + 2H
+
Xantin + O2 + H2O Asam urat + H2O2
(Mehta et al, 2014)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
Gambar 2. Transformasi xantin menjadi asam urat oleh XO (Kostic et al, 2015).
Dengan demikian, penggunaan inhibitor XO yang menghambat sintesis asam urat
dalam tubuh dapat menjadi salah satu pendekatan terapi untuk pengobatan
hiperurisemia dan asam urat kronis (Liu et al, 2016).
Pengujian enzim xantin oksidase diawali dengan pendahuluan dimana
dilakukan penentuan suhu inkubasi, waktu inkubasi, pH larutan, dan konsentrasi
substrat xantin yang merujuk pada Umamaheswari et al. Dilakukan penentuan
serapan panjang gelombang maksimum pada rentang 200-400 nm. Nilai panjang
gelombang maksimum yang didapatkan yaitu 287,60 nm dilihat dari nilai
absorbansi tertinggi yang didapatkan. Nilai panjang gelombang maksimum
digunakan dalam penentuan serapan pada sampel. Suhu inkubasi yang digunakan
yaitu 30oC selama 15 menit untuk pra inkubasi dan 30 menit untuk inkubasi, pH
yang digunakan yaitu 7,5, dan konsentrasi substrat xantin yaitu 0,15 mM.
Pada pengujian enzim xantin oksidase dilakukan pembuatan larutan
kontrol blanko dan blanko yang bertujuan sebagai pembanding terhadap larutan
sampel untuk melihat aktivitas penghambatan xantin oksidase tanpa ekstrak uji.
Standar yang digunakan dalam pengujian enzim xantin oksidase yaitu allopurinol
dengan variasi konsentrasi yaitu 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL dengan diencerkan
dengan larutan induk 1000 µg/mL.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
Gambar 3. Struktur Allopurinol (Pacher et al, 2006)
Allopurinol digunakan sebagai pembanding, dikarenakan allopurinol
memiliki mekanisme kerja sebagai inhibitor enzim xantin oksidase. Dilihat dari
mekanismenya, allopurinol termasuk inhibitor reversibel kompetitif. Suatu
inhibitor kompetitif memiliki struktur mirip dengan substrat yang menyebabkan
adanya kompetisi antara substrat dengan inhibitor dalam mengikat sisi aktif enzim
(Wulandari et al, 2012). Senyawa standar yang digunakan dalam penelitian bukan
merupakan senyawa murni tetapi dalam bentuk sediaan tablet sehingga
kemungkinan hasil yang didapatkan pada penentuan nilai IC50 pembanding
kurang sesuai. Nilai IC50 allopurinol yang didapatkan dilihat pada Tabel II
berturut-turut yaitu 12.655; 15.111; 17.387 µg/mL dengan rata-rata yaitu 15.051
µg/mL.
Tabel II. Nilai IC50 allopurinol, infusa daun salam, infusa daun sisik naga, dan
kombinasi infusa daun salam dan sisik naga
Repitisi Allopurinol
Infusa Daun
Salam
Infusa Daun
Sisik Naga
Infusa
Kombinasi
IC50 (µg/mL)
1 12.655 45.665 41.780 33.494
2 15.111 46.045 41.605 33.088
3 17.387 45.313 41.526 33.156
Rerata 15.051 45.674 41.637 33.246
SD 2.366 0.366 0.129 0.217
CV (%) 15.720 0.802 0.312 0.654
Pada pengujian enzim xantin oksidase dilakukan pembuatan larutan
sampel dengan konsentrasi 10; 25; 50; 75; 100 µg/mL diencerkan dari larutan
induk 1000 µg/mL. Nilai IC50 sampel infusa daun salam ditunjukan pada Tabel II
berturut-turut yaitu 45.665; 46.045; 45.313 µg/mL dengan nilai rata-rata yaitu
45l.674 µg/mL. Nilai IC50 sampel infusa daun sisik naga berturut-turut yaitu
41.780; 41.605; 41.526 µg/mL dengan nilai rata-rata yaitu 41.637 µg/mL.
Sedangkan nilai IC50 sampel kombinasi infusa daun salam dan daun sisik naga
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
berturut-turut yaitu 33.494; 33.088; 33.156 µg/mL dan nilai rata-rata yaitu 33.246
µg/mL.
Dari hasil nilai IC50 yang didapatkan pada standar allopurinol dan sampel
maka disimpulkan bahwa allopurinol memiliki efek penghambatan xantin
oksidase yang paling baik dikarenakan allopurinol memiliki nilai IC50 yang paling
kecil dibandingkan sampel. Semakin kecil nilai IC50 suatu senyawa maka
kemampuan dalam penghambatan enzim xantin oksidase semakin baik. Pada
ketiga sampel yang diuji menunjukan bahwa infusa kombinasi daun sisik naga
dan daun salam memiliki efek penghambatan xantin oksidase yang lebih baik
dibandingkan infusa tunggal daun salam dan infusa tunggal daun sisik naga dilihat
dari nilai IC50 yang didapatkan paling mendekati nilai IC50 pembanding
allopurinol. Peningkatan persen penghambatan IC50 pada infusa kombinasi
disebabkan karena adanya efek sinergis antara daun salam dan daun sisik naga.
Efek sinergis yang dihasilkan oleh kombinasi dapat disebabkan karena adanya
kombinasi dari dua jenis antioksidan pada daun salam dan daun sisik naga
sehingga menghasilkan potensi aktivitas total antioksidan yang lebih tinggi
(Marianne, 2018). Hasil uji statistik dengan menggunakan uji one way Anova
menyatakan bahwa hasil yang didapatkan berbeda bermakna secara signifikan
antara sampel dan allopurinol dilihat dari nila p<0.05.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa
kombinasi daun sisik naga memiliki kemampuan penghambatan enzim xantin
oksidase yang baik dengan rata-rata nilai IC50 yaitu 33.246 µg/mL. Belum dapat
dipastikan adanya kandungan flavonoid pada identifikasi kimia daun salam dan
daun sisik naga dikarenakan nilai Rf yang berbeda dengan pembanding kuersetin.
SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk memastikan apakah benar
adanya kandungan flavonoid pada sampel dikarenakan hasil KLT yang
didapatkan kurang nyata.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
DAFTAR PUSTAKA
Andriani, A., Chaidir, R., 2016. Pengaruh Pemberian Air Rebusan Daun Salam
(Syzygium Polyanthum) Terhadap Penurunan Kadar Asam Urat. Research
of Applied Science and Education, 10(2), 117.
Azizah, D, N., Kumolowati, E., Faramayuda, F., 2014. Penetapan Kadar
Flavonoid Metode AlCl3 pada Ekstrak Metanol Kulit Buah Kakao
(Theobroma cacao L.). Kartika Jurnal Ilmiah Farmasi, 2(2), 48.
Bele, A, A., Khale, A., 2011. An Overview on Thin Layer Chromatography.
International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2(2),
258.
Bulusu, K, C., Guha, R., Mason, D, J., Lewis, R, P, I., Muratov, E., Motamedi, Y,
K., Cokol, M., Bender, A., 2016. Modelling of Compound Combination
Effects and Applications to Efficacy and Toxicity : State-of-the-art,
Challenges and Perspectives. Drug Discovery Today, 21 (2), 226.
Cos, P., Ying, L., Calomme, M., Hu, J.P., Cimanga, K., 1998. Structure-Activity
Relationship and Classification of Flavonoids as Inhibitors of Xanthine
Oxidase and Superoxide Scavengers. Journal of Natural Products, 61 (1),
71.
Devi, S., Rahmah, M., and Jannah, N, R., 2019. Analisis Infusa dan Ekstrak
Etanol Tamarindus indica L, Scurrula Sp, Mimosa pudica D Segar dan
Kering Sebagai Inhibitor Enzim Amilase. Jurnal Natur Indonesia, 17 (2),
28.
Dianati, N, A., 2015. Gout and Hyperuricemia. Jurnal Majority, 4 (3), 82.
Ernawati., Susanti, H., 2014. Penghambatan Aktivitas Xanthine Oxidase oleh
Ekstrak Etanol Sarang Semut (Myrmecodia tuberosa (non Jack) Bl.)
Secara In Vitro. Pharmaciana, 4(1), 16.
Forestryana, D., and Arnida., 2020. Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi
Lapis Tipis Ekstrak Etanol Daun Jeruju (Hydrolea Spinosa L.). Jurnal
Ilmiah Farmako Bahari, 11 (2), 121.
Handa, S, S., Khanuja, S, P, S., Longo, G., and Rakesh, D, D., 2008. Extraction
Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. United Nations
Industrial Development Organizations and the International Centre for
Science and High Technology.
Katno., Pramono, S., 2002. Tingkat Manfaat dan Keamanan Tanaman Obat dan
Obat Tradisional. Fakultas Farmasi, UGM.
Khafidhoh, Z., Dewi, S, S., Iswara, A., 2015. Efektivitas Infusa Jeruk Purut
(Citrus hystrix DC.) Terhadap Pertumbuhan Candida albicans Penyebab
Sariawan Secara in vitro. Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan,
Universitas Muhammadiyah Semarang.
Kostić,D.A., Dimitrijević,D.S., Stojanović,G.S., Palić,I.R., et al., 2015. Xanthine
Oxidase :Isolation,Assays of Activity, and Inhibiton. Hindawi
Publishing Corporation. Journal of Chemistry, volume 2015, pp.1-8.
Kristanti, A.N., Aminah, N.S., Tanjung, and M., Kurniadi, B., 2019. Buku Ajar
Fitokimia. Airlangga University Press.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
Liu, K., Wang, W., Guo, B, H., Gao, H., Liu, Y., 2016. Chemical Evidence for
Potent Xanthine Oxidase Inhibitory Activity of Ethyl Acetate Extract of
Citrus aurantium L. Dried Immature Fruits. Moleculas, 21 (302), 1.
Marianne, M., 2018. Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Etanol
Rimpang Temu Giring (Curcuma Heyneana) dan Daun Pugun Tanoh
(Curanga Fel-Terrae) Menggunakan Metode Diphenyl
Picrylhydrazil(DPPH). TALENTA Conference Series: Tropical Medicine
(TM), 1(2), 399.
Mehta, S.K., Nayeem, N., 2014. Natural Xanthine Oxidase Inhibitors for
Management of Gout : A review. Research and Reviews : Journal of
Medical and Health Sciences. 3(3), 5.
Muhtadi., Retnani, I., and Wahyuningtyas, N., 2012. Penghambatan Ksantin
Oksidase oleh Kombinasi Ekstrak Tempuyung (Sonchus Arvensis) dan
Salam (Syzgium Polyanthum) pada Mencit Hiperurisemia. Jurnal
Biomedika, 4 (1), 17.
Owen, P.L., Johns, T., 1999. Xanthine Oxidase Inhibitory Activity of
Northeastern North American Plant Remedies Used for Gout. Journal of
Ethnopharmacology, 64, 150-153.
Pacher, P., Nivorozhkin, A., Szabo, C., 2006. Therapeutic Effects of Xanthine
Oxidase Inhibitors : Renaissance Half a Century after the Discovery of
Allopurinol. Pharmacological Reviews, 58(1), 91.
Putri, N.E., Rissyelly., and Mauldina, M.G., 2016. Uji Penghambatan Xantin
Oksidase secara In Vitro Ekstrak Kulit Rambutan. Journal of
Pharmaceutical Sciences and Research, 3 (1), 13.
Rafi, M., Heryanto, R., and Septaningsih, D, A., 2017. ATLAS Kromatografi
Lapis Tipis Tumbuhan Obat Indonesia. Pusat Studi Biofarmaka Tropika
LPPM, Institute Pertanian Bogor.
Silviana, N, C., 2019. Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase Ekstrak
Tumbuhan Sisik Naga (Pyrroadsia piloselloides (L.) M.G.Price) Pohon
Inang The. Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Sukandar, E, Y., 2006. Tren dan Paradigma Dunia Farmasi. Industri Klinik
Teknologi Kesehatan. Departemen Farmasi FMIPA, Institut Teknologi
Bandung.
Sumito, J.S., Khotimah, S., and Linda, R., 2016. Uji Bioaktivitas Fraksi Metanol
dan Etil Asetat Tumbuhan Sisik Naga (Drymoglossum piloselloides (L)
pressl.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi.
Jurnal Protobiont, 5 (1), 30.
Sutrisna, E, M., Wahyuni, A, S., Azmi, U., 2010. Efek Ekstrak Etanol Daging
Buah Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa (Scheff.) Boerl.) Terhadap
Penurunan Kadar Asam Urat pada Mencit Putih Jantan yang Diinduksi
Potassium Oxonate. Pharmacon, 11(2), 63,67.
Syahrir, N.H.A., Afendi, F.M., Susetyo, B., 2016. Efek Sinergis Bahan Aktif
Tanaman Obat Berbasiskan Jejaring Dengan Protein Target. Jurnal Jamu
Indonesia, 1 (1), 36.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
Telaumbanua, A, K., 2015. Uji Penghambatan Enzim Xantin Oksidase Kombinasi
Infusa Daun Salam (Syzygium polyanthum Wigh) dengan Infusa Daun
Sidaguri (Sida rhombifolia L.). Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Umamaheswari, M., Asokkumar, K., Sivashanmugam, A.T., Remyaraju, A.,
Subhadradevi, V., and Ravi, T.K., 2009. In Vitro Xanthine Oxidase
Inhibitory Activity of The Fractions of Erythrina stricta Roxb. Journal of
Ethnopharmacology, 124, 647-648.
Unno, T., Sugimoto, A., Kakuda, T., 2004. Xanthine Oxidase Inhibitors from the
Leaves of Lagerstroemia speciosa (L.) Pers. Journal of
Enthnopharmacology, 93, 391.
Wells, B.G., Dipiro, J.T., Schwinghammer, T.L., Dipiro, C.V., 2015.
Pharmacotherapy Handbook 9th
edition, McGraw-Hill Companies.
Wildman, R.E.C., 2007. Handbook of Nutraceuticals and Functional Foods
Second Edition. CRC Press Taylor & Francis Group.
Wulandari, S., Subandi., Muntholib., 2012. Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak
Etanol Kulit Melinjo (Gnetum gnemon) Relatif Terhadap Allopurinol.
Universitas Negeri Malang.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi yang berjudul “Uji Efek Inhibisi Enzim
Xantin Oksidase Kombinasi Infusa Daun Salam
(Syzygium polyanthum (Wight) Walp dan Daun Sisik
Naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price)” memiliki
nama lengkap Desty Sandy Oktoviana Liunokas.
Penulis dilahirkan di Jayapura pada tangga 26 Oktober
1997 sebagai anak ke dua dari tiga bersaudara, dari
pasangan Petrus Liunokas dan Evy Susianti. Penulis
menempu pendidikan formal di TK Ria Pembangunan
Sentani (2002-2003), SD YPPK Bonaventura Sentani (2003-2009), SMP Negeri 2
Sentani (2009-2012), SMA Negeri 1 Sentani (2012-2015) dan kemudian
melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma pada
tahun 2016. Semasa kuliah penulis aktif dalam beberapa kegiatan fakultas seperti
anggota BEMF divisi Penelitian dan Pengembangan (2016-2017), seksi acara
Kampanye Informasi Obat (2017), Bendara Herbal Garden Team (2017-2018),
Sekretaris SEMNAS dan HCC dalam kegiatan Future Pharmacist in Action 3
(2018), dan asisten praktikum Farmakognosi Fitokimia (2018-2019).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
Recommended