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Validation technique du CS-2100i de chez
Sysmex (Siemens)
Jessica Gilliard
Essante 55ème
TAB
Travail effectué au laboratoire ICH de Martigny
Sous la supervision de Madame Gianinetti
11.04.2016
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
1
Résumé
Les analyses d’hémostase sont d’une importance capitale pour le suivi des traitements
anticoagulants, pour les bilans préopératoires et pour la détection de troubles de la
coagulation.
Le laboratoire médical de Martigny a reçu pour validation un nouvel appareil d’hémostase, le
CS-2100i de Siemens. Cette validation a été effectuée pour quatre paramètres: le Temps de
Prothrombine (TP), le Temps de Prothrombine Partiel activé (aPTT), le taux de fibrinogène et
de D-dimères. Nous avons comparé le CS-2100i à deux appareils de référence: le CA-1500 de
Siemens et le miniVIDAS de Biomérieux.
Les résultats de ce processus de validation nous ont permis d’ajouter le CS-2100i à notre
processus de mesure de routine pour les quatre paramètres mentionnés ci-dessus.
Mots clés : CS-2100i, CA-1500, mini VIDAS, hémostase, validation, TP, aPTT, fibrinogène,
D-Dimères
Abstract
Hemostasis analysis are of crucial importance for the follow-up of anticoagulant treatments,
for presurgical checkups and for the detection of other clotting disorders.
The medical laboratory of Martigny received a new Siemens CS-2100i hemostasis testing
apparatus, which we had to validate. The validation was done for four parametres :
Prothrombin Time (PT), activated Partial Thromboplastin Time (aPTT), and fibrinogen and
D-dimer levels. We compared the CS-2100i with both Siemens CA-1500 and Biomérieux
miniVIDAS as reference.
The results of this validation process allowed us to add the CS-2100i to our routine
measurement process of the four aforementionned parameters.
Key words: CS-2100i, CA-1500, mini VIDAS, hemostasis, validation, PT, aPTT, fibrinogen,
D-dimer
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
2
Table des matières
Résumé _____________________________________________________ 1
Abstract _____________________________________________________ 1
1 Introduction ______________________________________________ 4
1.1 Théorie sur l’hémostase ________________________________________ 4
1.1.1 L’hémostase primaire _______________________________________________ 4
1.1.2 L’hémostase secondaire _____________________________________________ 5
1.1.2.1 Le temps de prothrombine (TP) ____________________________________ 6
1.1.2.2 Le temps de thromboplastine partielle activée (aPTT) ___________________ 7
1.1.2.3 Le fibrinogène __________________________________________________ 8
1.1.3 L’hémostase tertiaire ________________________________________________ 9
1.1.3.1 Les D-dimères _________________________________________________ 9
2 But ________________________________________________________ 9
3 Matériel et méthodes ________________________________________ 10
3.1 CS-2100i ____________________________________________________ 10
3.1.1 Principe de l'appareil _______________________________________________ 10
3.1.2 Réactifs, contrôles et échantillons _____________________________________ 13
3.2 CA-1500 _____________________________________________________ 14
3.2.1 Principe de la méthode _____________________________________________ 14
3.2.2 Réactifs, contrôles et échantillons _____________________________________ 15
3.3 MiniVIDAS ___________________________________________________ 15
3.3.1 Principe de la méthode _____________________________________________ 15
3.3.2 Réactifs, contrôles et échantillons _____________________________________ 17
4 Résultats ________________________________________________ 18
4.1 Pour le temps de prothrombine _________________________________ 20
4.1.1 Critères de comparaison ____________________________________________ 20
4.1.2 Critères de précision _______________________________________________ 22
4.1.3 Incertitude de mesure ______________________________________________ 24
4.1.4 Critères d’exactitude _______________________________________________ 24
4.2 Pour le temps de thromboplastine partielle activée _________________ 25
4.2.1 Critères de comparaison ____________________________________________ 25
4.2.2 Critères de précision _______________________________________________ 26
4.2.3 Incertitude de mesure ______________________________________________ 28
4.2.4 Critères d’exactitude _______________________________________________ 28
4.3 Pour le dosage du fibrinogène __________________________________ 29
4.3.1 Critères de comparaison ____________________________________________ 29
4.3.2 Critères de précision _______________________________________________ 30
4.3.3 Incertitude de mesure ______________________________________________ 32
4.3.4 Critères d’exactitude _______________________________________________ 32
4.4 Pour le dosage des D-dimères __________________________________ 33
4.4.1 Critères de comparaison ____________________________________________ 33
4.4.2 Critères de précision _______________________________________________ 34
4.4.3 Incertitude de mesure ______________________________________________ 36
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3
4.4.4 Critères d’exactitude _______________________________________________ 36
5 Discussion ______________________________________________ 37
5.1 Interprétation pour le TP _______________________________________ 38
5.1.1 Critères de comparaison ____________________________________________ 38
5.1.2 Critères de précision _______________________________________________ 39
5.1.3 Critère d’exactitude ________________________________________________ 40
5.1.4 Incertitude de mesure ______________________________________________ 40
5.2 Interprétation pour l’aPTT ______________________________________ 41
5.2.1 Critères de comparaison ____________________________________________ 41
5.2.2 Critères de précision _______________________________________________ 41
5.2.3 Critère d’exactitude ________________________________________________ 42
5.2.4 Incertitude de mesure ______________________________________________ 42
5.3 Interprétation pour le taux de fibrinogène _________________________ 43
5.3.1 Critères de comparaison ____________________________________________ 43
5.3.2 Critères de précision _______________________________________________ 43
5.3.3 Critère d’exactitude ________________________________________________ 44
5.3.4 Incertitude de mesure ______________________________________________ 44
5.4 Interprétation pour les D-Dimères _______________________________ 45
5.4.1 Critères de comparaison ____________________________________________ 45
5.4.2 Critères de précision _______________________________________________ 46
5.4.3 Critère d’exactitude ________________________________________________ 46
5.4.4 Incertitude de mesure ______________________________________________ 47
6 Conclusion ________________________________________________ 47
Remerciements ______________________________________________ 48
Lexique ____________________________________________________ 48
Bibliographie ________________________________________________ 49
Annexes ____________________________________________________ 51
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
4
1 Introduction
En tant que future technicienne en analyse biomédicale, je dois dans le cadre de ma dernière
année de formation effectuer un travail de diplôme en lien avec la profession. J’ai effectué
celui-ci au laboratoire de l’institut central (ICH) à Martigny. Pour mon travail de diplôme,
l’équipe du laboratoire de Martigny a décidé de me donner comme sujet la validation
technique du nouvel appareil d’hémostase de chez Sysmex (le CS-2100i).
L’ICH compte 8 sites répartis entre Vevey et Brig. Ces différents sites sont soit composés de
laboratoires spécialisés, c’est le cas de Sion uniquement, soit de laboratoires polyvalents pour
les autres sites comme c’est le cas à Martigny. Le laboratoire de Martigny effectue des
analyses de chimie clinique, d’hématologie, d’hémostase et d’immunohématologie, de
sérologie et d’immunologie pour l’hôpital de Martigny, pour des médecins privés ainsi que
pour l’Hôpital de Saint-Amé et la clinique CIC. (1)
1.1 Théorie sur l’hémostase L'hémostase est une branche médicale dont l'importance clinique est prépondérante lors
d'interventions chirurgicales ou lors du suivi de traitements post-chirurgicaux comme la mise
en place d'un traitement avec des anticoagulants pour éviter des thromboses post-opératoires
ou lors d’autres troubles de la coagulation. La détection des troubles de la coagulation est
primordiale pour les patients présentant des déficits au niveau des facteurs de la coagulation
d'origines diverses. Les conséquences de ces troubles peuvent être de gravité variable suivant
le problème détecté.
L'hémostase est un processus physiologique permettant l'arrêt du saignement. Elle est
contrôlée par de nombreux régulateurs tels que des activateurs ou des inhibiteurs de la
coagulation qui permettent d'éviter des hémorragies ou à l'opposé des thromboses. (2)
L'hémostase peut être divisée en trois étapes qui sont respectivement: (2)
1. L'hémostase primaire
2. L'hémostase secondaire (coagulation)
3. L'hémostase tertiaire (fibrinolyse)
Ces trois étapes nécessitent trois acteurs principaux : les vaisseaux sanguins, les plaquettes et
des protéines. Ces protéines sont celles de la coagulation et de la fibrinolyse (2)
1.1.1 L’hémostase primaire
Cette étape peut être divisée en un temps vasculaire et un temps plaquettaire. (3)
Le temps vasculaire consiste en une vasoconstriction du vaisseau. Elle intervient
immédiatement après la lésion de celui-ci, car différentes molécules libérées vont l'induire.
Ces molécules sont relâchées par les tissus lésés et par les plaquettes (sérotonine). Il n'y a pas
que des molécules chimiques qui sont impliquées dans ce processus. Les récepteurs de la
douleur ainsi que les cellules musculaires lisses lésées le sont aussi. Cette vasoconstriction va
permettre un ralentissement du saignement grâce à la diminution du diamètre du vaisseau
sanguin. (3)
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
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5
Le temps plaquettaire est divisé en trois étapes distinctes qui se déroulent directement après la
lésion. Celles-ci aboutissent à la formation du clou plaquettaire hémostatique. Ces différentes
étapes sont: (3)
1. La phase d'initiation: les plaquettes se lient au site de la lésion.
2. La phase d'extension: recrutement d'autres plaquettes grâce aux agonistes solubles
produits dans les granules alpha des plaquettes (ADP, thromboxane A2, thrombine).
Ceci permet l'activation des plaquettes lorsque les agonistes se lient aux plaquettes
circulant à proximité de la lésion.
3. La phase de perpétuation: stabilisation du caillot constitué des plaquettes et de la
fibrine.
1.1.2 L’hémostase secondaire
L'hémostase secondaire est le processus permettant la coagulation. Il est divisé en 3 étapes:
(4) (5)
1. L’initialisation: lors de la lésion, le facteur tissulaire (FT) est exposé à la circulation
sanguine donc aux plaquettes, aux facteurs, etc. Ceci engendre le début de la cascade
d'activation. Cette étape aboutit à la formation d'un complexe FXa/FVa (le « F »
correspond à facteur et le « a » à activé) se liant à la surface des cellules de
l'endothélium.
2. L’amplification: une faible quantité de prothrombine est transformée en thrombine
sous l'effet du complexe FXa/FVa. La thrombine active les plaquettes et les facteurs
VIII, V et XI. Les plaquettes activée vont fixer les facteurs VIIIa, Va et IXa.
3. La propagation: le complexe FVIIIa/FIXa va transformer le FX en FXa à la surface
des plaquettes activées. Puis, le même complexe FXa/FVa que lors de la phase
d'initialisation est alors formé. Cependant, cette fois-ci, il l’est à la surface des
plaquettes. Ce complexe transforme d'importantes quantités de prothrombine en
thrombine. Ce pic de thrombine permet la transformation du fibrinogène en fibrine ;
donnant naissance à un caillot de fibrine soluble. Le facteur XIII stabilise le caillot et
le rend ainsi insoluble et résistant à la fibrinolyse.
Il existe une schématisation de la cascade de l'hémostase secondaire. Celle-ci peut être
séparée en trois parties distinctes: (4)
1. La voie intrinsèque activée par un activateur de la phase de contacte
2. La voie extrinsèque activée par le facteur tissulaire.
3. La voie commune permet d'aboutir à la formation de la fibrine. (débute au FXa)
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6
Figure 1: Schéma de la cascade de la coagulation (6)
Les différentes voies de la cascade de la coagulation peuvent être explorées grâce à quatre
types de tests de première intention. Ces tests sont: (5) (7)
Le temps de prothrombine ou temps de Quick (TP)
Le temps de thromboplastine partielle activée (aPTT)
La mesure du taux de fibrinogène
Le temps de thrombine (TT)
Dans mon travail, je vais uniquement présenter les trois premiers tests (TP, aPTT et
fibrinogène) car ce sont ceux que nous effectuons au laboratoire de Martigny. De plus, ce sont
les trois tests de première intention pour lesquelles nous avons dû faire une validation avec les
D-dimères.
1.1.2.1 Le temps de prothrombine (TP)
Le temps de prothrombine est utilisé pour d'explorer la voie extrinsèque. Pour ce faire, au
laboratoire de Martigny, nous utilisons un réactif Dade® Innovin®. Il contient du facteur
tissulaire, de la thromboplastine, du calcium et des phospholipides synthétiques qui
remplacent les plaquettes. Une fois le réactif additionné au plasma citraté, la thromboplastine
et le calcium vont activer la coagulation pour obtenir de la thrombine. Ensuite, celle-ci va
permettre la transformation du fibrinogène présent dans le plasma en fibrine (fin de la
coagulation) (7). Le réactif utilisé au laboratoire contient un neutralisateur d’héparine à une
concentration de 2.0 unités/ml. Ce neutralisateur donne la possibilité au test d’être moins
sensible à l’héparine (anticoagulant fréquemment administré après les opérations). (8)
Figure 2: Schéma du déroulement de la réaction dans la cuve échantillon lors du test du
TP (7)
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7
Le TP est utilisé pour tester les différents facteurs de la voie extrinsèque. Le résultat est
obtenu en secondes puis est transformé en pourcentage grâce à une courbe de calibration (7).
Le résultat en pourcent devrait se situer dans l’intervalle de référence. Celui-ci est entre 70 et
140% pour le laboratoire de Martigny. Si le résultat en pourcent n'est pas dans cet intervalle
cela nous indique un problème d'un ou plusieurs facteurs de la voie extrinsèque ou de la voie
commune. Pour déterminer si le problème vient d’une des voies ou d'un autre problème
physiologique comme un déficit congénital ou acquis en facteurs, une anomalie de la
fibrinoformation, etc. Il faut appeler le service afin de savoir si le patient est sous traitement
ou non. S’il ne l’est pas, l’hématologue doit être avertit du résultat. Les résultats obtenus pour
les autres tests effectués au laboratoire doivent être observés car ils peuvent nous guider sur la
cause du problème. Certains tests de chimie nous permettent de localiser la source du trouble
de la coagulation. Par exemple : les tests hépatiques, car la majorité des facteurs sont produit
par le foie et le dosage de la vitamine K car les FVII, FX et FII sont vitamine k-dépendants.
Le résultat obtenu est aussi utile au médecin dans le cas de suivi d’un traitement aux anti-
vitamines K (AVK). Lors de traitement au AVK le TP est volontairement abaissé grâce à
l’anticoagulant, afin d’éviter de possibles risques thrombo-emboliques ou autres. (9) (8)
Le résultat est aussi rendu en INR (international normalized ratio) pour permettre une
normalisation de celui-ci afin de garantir son interprétation universelle. L'INR est obtenu à
l'aide d'un calcul : (7) (8)
INR= (TP patient (sec)/TP plasma ctrl (sec))ISI
L'indice ISI (Indice de Sensibilité International) est spécifique à chaque réactif et représente
la sensibilité de ce dernier. Le résultat en INR est primordiale pour des suivis de traitements
aux anticoagulants (p.ex.: traitement à l’anti-vitamine K, à l’héparine) (7). Chez un patient
sans traitement en anticoagulant l’INR est de 1.0. L’intervalle thérapeutique pour une
personne sous traitement aux AVK (Anti-Vitamine K) se situe entre 2 et 3. (10)
Figure 3: Schéma représentant différente valeurs d’INR et leur signification vis à vis du
traitement aux AVK. (10)
1.1.2.2 Le temps de thromboplastine partielle activée (aPTT)
L'aPTT permet l'exploration de la voie intrinsèque. Pour cela, nous utilisons deux réactifs au
laboratoire de Martigny (7). Le premier est constitué d’un activateur de la phase de contact
(soit silice, kaolin, célite ou acide ellagique) et de phospholipides, c’est la pathromtine® SL
(11). Ce réactif nécessite d’être incubé à 37°C avec le plasma durant 2 minutes. Le deuxième
réactif est composé de calcium à une concentration de 0.025M, c’est le CaCl2 (12). Pour
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8
effectuer ce test, nous devons d’abord incuber le plasma citraté avec le premier réactif
contenant les phospholipides. Cela permet de débuter la cascade de coagulation. Par contre,
elle va s’interrompre au facteur IX car celui-ci a besoin du Ca++
pour être activé et permettre
la poursuite de la cascade. Le Ca++
se trouve dans le réactif CaCl2 qui est ajouté au mélange
réactionnel après le temps d’incubation (7) (13). Une fois ajouté, celui-ci va permettre à la
cascade de la coagulation de se poursuivre jusqu’à la formation du caillot de fibrine.
Figure 4: Schéma du déroulement de la réaction lors du test de l’aPTT (7)
L’aPTT permet de tester les facteurs de la voie intrinsèques ainsi que le fibrinogène, le
kininogène de haut poids moléculaire et la prékallicréine (7).
Le résultat est obtenu en secondes, celui-ci doit se situer entre 25 et 36 secondes, soit
l’intervalle de référence au laboratoire de Martigny. Si le résultat ne se situe pas dans
l’intervalle, nous pouvons supposer qu’il y a un problème avec un ou plusieurs facteurs de la
voie intrinsèque ou de la voie commune. Il faut être attentif car ces troubles des différentes
voies peuvent aussi être dues à d’autres troubles (p.ex. troubles hépatiques, carence en
vitamine en vitamine K). Pour cette raison, il faut observer l’ensemble des résultats d’un
patient et voir s’il est sous anticoagulant avant de pouvoir poser un diagnostique. Dans le cas
ou le patient est sous anticoagulant, le résultat obtenu est utile au médecin pour effectuer un
suivi du traitement. L’aPTT est surtout utilisé pour le suivi de traitement aux différentes
héparines (héparine non fractionnée, héparine de bas poids moléculaire (HBPM)). Pour
l’HBPM, l’aPTT peut être que légèrement allongé, ce n’est pas le meilleur test pour contrôler
le traitement. Il faudrait utiliser le dosage de l’anti-Xa (13) (14)
1.1.2.3 Le fibrinogène
Ce test permet de déterminer le taux de fibrinogènes présents dans le plasma du patient. Afin
d'obtenir le taux réel de fibrinogène présent, il faut impérativement faire le test avec un excès
de thrombine pour que cette dernière ne soit pas limitante dans l’analyse. (7) (15)
Figure 5: Schéma du déroulement du test lors du test du dosage du fibrinogène (7)
Obtenu en seconde, le résultat doit être transformé en gramme par litre grâce à la courbe de
calibration (7). L'intervalle de référence du laboratoire de Martigny se trouve entre 1,8 et 4,0
g/L. Le taux de fibrinogène peut être augmenté suite à un syndrome inflammatoire ou lors de
grossesse. Une diminution du taux peut aussi être observée lors d’insuffisance hépatique, lors
d’anomalie du fibrinogène (dysfibrinogénémies, hypofibrinogénémies, afibrinogénémies).
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1.1.3 L’hémostase tertiaire
L’hémostase tertiaire se nomme aussi fibrinolyse et intervient lors de deux étapes du
processus de réparation de la lésion. Premièrement, elle agit lors de la formation du caillot de
fibrine pour prévenir la dispersion du processus de coagulation. Deuxièmement, une fois la
lésion réparée, le processus de fibrinolyse s'active afin de détruire le caillot de fibrine. Ce
dernier processus s'effectue en deux étapes: (16) (17)
1. La transformation du plasminogène (dans le plasma) en plasmine sous l'effet de
l'activateur tissulaire du plasminogène (t-PA) et de l'urokinase.
2. La dégradation de la fibrine, du fibrinogène et des facteurs V, VIII par la plasmine.
La fibrine ainsi dégradée se décompose en produits de dégradation de la fibrine
(PDF), dont font partie les D-dimères.
Pour éviter une dissémination du phénomène de fibrinolyse, des inhibiteurs sont
présents. Ce sont l’alpha2-antiplasmine, le TAFI (Thrombine Activatable Fibrinolysis
Inhibitor) et le PAI-1&2 (2 activateurs du plasminogène). (16)
Figure 6: Schéma du processus de la fibrinolyse et ces activateurs et inhibiteur (16)
1.1.3.1 Les D-dimères
Les D-dimères sont des produits de dégradation réticulée de la fibrine. Ces produits
apparaissent lorsque le phénomène de fibrinolyse est activé pour contrebalancer le processus
de coagulation (18). Le dosage des D-dimères nous permet de détecter la présence d’une
éventuelle thrombose veineuse profonde ou d’une embolie pulmonaire en nous basant sur le
seuil de positivité (cut-off). Celui-ci est de 500μg/L, en dessous de ce seuil le résultat est
négatif. En dessus du seuil, il est positif. (18)
2 But Le but de ce travail est d’éprouver la validité des tests du nouvel appareil d'hémostase CS-
2100i de chez Sysmex (Siemens). La validation est effectuée pour quatre tests. Trois de ces
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10
tests sont validés entre le nouvel appareil et le CA-1500 de chez Siemens (pour le TP, l’aPTT
et le fibrinogène). Le dernier de ces tests est validé entre le CS-2100i et le miniVIDAS de
chez Biomérieux (pour les D-dimères).
3 Matériel et méthodes
3.1 CS-2100i
3.1.1 Principe de l'appareil
Dans ce chapitre, je vais détailler le principe de fonctionnement de l'appareil. Le CS-2100i est
un automate d'hémostase capable de mesurer de multiples paramètres et de faire une
observation pré-analytique de l’échantillon. Celle-ci permet de définir l'aspect du plasma afin
d'éviter de possibles interférences lors de la mesure ou de mesurer le niveau de remplissage
du tube citraté. (19)
Le CS-2100i est constitué d'un détecteur composé d'une lampe halogène comme source
lumineuse. La lumière est décomposée en différentes longueurs d'onde variable (340 nm, 405
nm, 575 nm, 660 nm et 800 nm) à l'aide d'un système de disques à cinq filtres. Ces longueurs
d’onde permettent d'effectuer plusieurs mesures dans chacun des emplacements de détections.
La lumière émise arrive dans les divers emplacements du détecteur à l'aide de fibres optiques.
La lumière transmise à la sortie de la cuvette est détectée par les photodiodes puis est
transformée en signal électrique. Ce signal est traité par un micro-ordinateur qui détermine le
temps de coagulation et la variation de l'absorbance (Delta OD/min). (20)
Figure 7: Schéma du mécanisme de détection de la lumière transmise (21)
Le CS-2100i utilise plusieurs méthodes basées sur la détection de la lumière transmise à des
longueurs d'ondes différentes afin de pouvoir effectuer en parallèle des mesures de divers
paramètres. Ceux-ci sont mesurés à l'aide de trois méthodes qui sont de coagulation,
immunologique ou chromogénique (21). Cette dernière ne sera pas présentée dans ce travail,
car elle n’est pas utilisée pour les analyses effectuées au laboratoire de Martigny. Les autres
méthodes sont présentées ci-dessous.
L’analyse selon la méthode de la coagulation se fait grâce à une mesure turbidimétrique et
chronométrique en parallèle. Pour le TP et l’aPTT la longueur d’onde utilisée par défaut est
de 660 nm et la longueur d’onde secondaire est de 800nm. Cette dernière est utilisée en cas
d’erreur lors de la mesure (« Transmitted Light High Error » et « Turbidity Level Over
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11
Error »), l’appareil change automatiquement pour la longueur d’onde secondaire. Tandis que
pour le fibrinogène la longueur d’onde utilisée est de 405 nm (20). Lors de la mesure, le
chronomètre est arrêté au moment où un changement de turbidité est détecté (apparition du
caillot de fibrine) dans la cuve de réaction. Cette cuve contient le mélange réactif et du
plasma du patient ou du contrôle. La méthode de mesure expliquée ci-dessus est utilisée pour
déterminer le temps de prothrombine (TP), la mesure du temps de de thromboplastine
partielle activée (aPTT) et la mesure du taux de fibrinogène. L'INR quant à lui est calculé par
l'appareil à partir du résultat du TP en seconde grâce à la courbe de calibration. Le temps de
coagulation est obtenu grâce à la méthode de détection du point de coagulation. C’est une
méthode de détection en pourcentage liée à la mesure de la coagulation par turbidimétrie.
Cette méthode permet de calculer le temps de coagulation. Pour ce faire, le micro-ordinateur
attribue le zéro pourcent à l’intensité lumineuse transmise juste après l’ajout du réactif initiant
le processus de coagulation, mais, avant l’apparition de la coagulation. Le cent pourcent
correspond alors à l’intensité lumineuse à la fin de la coagulation. La courbe créée avec toutes
les valeurs de l’intensité lumineuse au cours de la mesure va permettre de déterminer le temps
de coagulation qui se trouve au 50% de la valeur totale. (22) (20)
Figure 8: Graphique représentant La méthode de détection du point de coagulation en
pourcent (20)
La méthode immunologique est utilisée pour le dosage des D-dimères. L’appareil mélange
dans une cuve de réaction le plasma patient ou contrôle avec du réactif latex pour engendrer
une réaction. Il mesure alors la variation de l’absorbance une fois que des caillots de latex
(réaction antigène- anticorps) sont formés dans la cuve de réaction. (22)
L’observation pré-analytique de l’échantillon par l’appareil consiste, comme dit plus haut, en
deux analyses distinctes : la mesure du remplissage du tube citraté et l’aspect du plasma. La
mesure du remplissage se fait grâce à l’aiguille échantillon qui indique le niveau de liquide.
Ce niveau correspond à la distance entre la position haute de l’aiguille et la surface du liquide
dans le tube. Ce niveau doit se trouver dans les intervalles enregistrés dans l’appareil. (23)
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Figure 9: Méthode de mesure du remplissage du tube (23)
La méthode permettant de déterminer l’aspect du plasma se nomme détection HIL
(Hémolyse, Ictère et Lipémie). Pour cette analyse, l’appareil effectue trois mesures
d’absorbance à l’aide de trois longueurs d’onde (405nm, 575nm et 660nm). La combinaison
des trois résultats permet à la machine de déterminer s’il y a une substance interférente et
laquelle. Pour l’hémolyse, il y a un pic qui apparait à 405nm et à 575nm. Pour l’ictère, le CS-
2100i détecte un pic uniquement à 405nm. Enfin pour la lipémie, l’appareil détecte une
absorbance pour les trois longueurs d’onde. (23)
Figure 10: Schéma représentant la méthode de détection HIL. (23)
D’après le graphique ci-dessus, nous pouvons en déduire que l’ictère n’interfère pas pour les
mesures des paramètres du TP et de l’aPTT car leurs mesures se font à 660 nm ou à 800 nm.
Par contre pour le dosage du fibrinogène s’effectuant à 405 nm, l’ictère interfère dans les
résultats car la bilirubine donne un pic d’absorbance à cette même longueur d’onde (405 nm).
Dans ce cas le résultat du fibrinogène doit être obtenu avec une autre méthode qui ne souffre
pas de cette interférence (méthode mécanique sur le KC4 au laboratoire de Martigny). La
lipémie quant à elle crée des interférences pour les trois tests (TP, aPTT et fibrinogène), donc
comme précédemment les résultats doivent être obtenus avec une autre méthode (sur le KC4).
Pour l’hémolyse nous devons de toute façon faire repiquer le patient car ce sont les consignes
de la procédure du laboratoire. Mais si l’on observe le graphique, nous pouvons voir que
l’hémolyse influence uniquement le dosage du fibrinogène (450 nm) et pas celui du TP et de
l’aPTT (660 nm ou 800 nm). (24)
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13
3.1.2 Réactifs, contrôles et échantillons
Tous les réactifs utilisés sur le CS-2100i proviennent de chez Siemens.
Les réactifs utilisés pour les analyses sont:
Réactifs Dade®
Innovin®
(25)
1. Pathromtin
® SL (11)
Cacl2 (12) Dade®
Réactifs
Thrombine
(26)
INNOVANCE
® D-Dimer (18) 2. Dade®
Tampon
véronal
d’Owren (27)
N° de lot 3. 539325 536678 539760 547232 45670 * 1) 547054
2) 547077
Date
d’expiration
2017-11-09 2016-09-08 2020-02-
17
2017-01-12 2017-09-13 1) 2016-07-16
2) 2017-09-20
Test effectué TP aPTT aPTT fibrinogène D-dimère Dilution des
fibrinogènes
Stabilité dans
l’appareil
4 jours 14 jours 4 jours 1 jour 30 jours avec le
bouchon dans la
chambre froide
1 jour
*INNOVANCE® D-Dimer (réactifs pour les D-dimères)
N° lot boîte:45670
N° lot par réactif:
o Reagent: 561503
o Buffer: 561703
o Supplement: 561803
o Diluant: 561603
o Calibrator: 561903
Les contrôles utilisés sont :
Contrôles Dade® Ci-
Trol® 1
Dade®
Ci-Trol®
2
Dade®
Ci-Trol®
3
INNOVANCE®
D-Dimères
contrôle 1
INNOVANCE
® D-Dimères
contrôle 2
N° de lot 528157 548255 548455 1) 560792
2) 560793 560694
Date
d’expiration
2016-10-13 2018-05-05 2017-09-21 1) 2017-08-17
2) 2017-09-07 2017-09-07
Test
effectué
avec
TP, aPTT et
fibrinogène
TP et aPTT TP et aPTT D-Dimère D-Dimère
Les échantillons utilisés pour le comparatif patient sont des échantillons patients
provenant de la routine du laboratoire. Pour la précision intra-série et inter-série, nous
avons utilisé certains contrôles répertoriés ci-dessus. Ces contrôles sont le Dade® Ci-
Trol® 1 et l’INNOVANCE® D-Dimère contrôle 1.
Les contrôles utilisés pour vérifier les réactifs et le bon fonctionnement de l'appareil
proviennent de chez Siemens. Pour contrôler le TP, l’aPTT et fibrinogène, nous utilisons les
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
14
contrôles Dade® Ci-Trol® 1, 2 et 3.Pour les D-Dimères, nous utilisons les Innovance® D-
Dimères contrôle 1 et 2.
3.2 CA-1500
3.2.1 Principe de la méthode
L’analyse des échantillons sur le CA-1500 repose sur plusieurs méthodes : néphélémétrique,
chromogénique et immunologique. La méthode néphélémétrique permet d’effectuer le TP,
l’aPTT et le fibrinogène sur le CA-1500. Cette méthode de détection de la coagulation est
couplée à une méthode chronométrique. La coagulation se manifeste par un changement de
turbidité du mélange réactionnel lors de l’apparition du caillot de fibrine. Une lampe LED
envoie alors un signal lumineux à 660 nm sur la cuve réactionnelle. La quantité de lumière
diffractée par la solution est modifiée en intensité avec l’apparition du caillot. Une photodiode
capte ensuite la lumière difractée et la convertit en signaux électriques. Le microordinateur de
l’appareil traite les données reçues. (28) (29)
Figure 11: Schéma représentant au court du temps la variation de l'intensité lumineuse
mesurée lors du processus de coagulation (29)
La détection du point de coagulation se base sur une évaluation faite par l’appareil grâce à la
méthode de détection en pourcentage. Le point de coagulation se trouve à un pourcentage
déterminé par le protocole de test (50% pour le TP). Le zéro pourcent correspond à la quantité
de lumière diffractée après le début de la détection et le cent pourcent à la quantité de lumière
diffractée à la fin de la coagulation. Les deux types de mesure sont utilisés ensemble afin de
créer un graphique représentant l’intensité lumineuse diffractée en fonction du temps. Ce
graphique généré par le micro-ordinateur lui sert pour déterminer le point de coagulation. (29)
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Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
15
Figure 12: graphique représentant la méthode de détermination du point de coagulation
en pourcentage (29)
3.2.2 Réactifs, contrôles et échantillons
Réactifs Dade®
Innovin®
(25)
4. Pathromti
n® SL
(11)
Cacl2 (12) Dade®
Réactifs
Thrombine
(26)
INNOVANCE
® D-Dimer
(18)
5. OVB (27)
N° de lot 6. 539325 536678 539760 547232 45670 * 1)547054
2)547077
Date
d’expiration
2017-11-09 2016-09-08 2020-02-17 2017-01-12 2017-09-13 1)2016-07-16
2)2017-09-20
Test effectué TP aPTT aPTT fibrinogène D-dimère Dilution des
fibrinogènes
Stabilité
dans
l’appareil
4 jours 14 jours 4 jours 2 jours 30 jours avec le
bouchon dans la
chambre froide
1 jour
Les échantillons utilisés pour le comparatif patient sont des échantillons patients
provenant de la routine du laboratoire.
3.3 MiniVIDAS
3.3.1 Principe de la méthode
Le miniVIDAS de chez Biomérieux est un appareil permettant d’effectuer des tests
immunologiques pour différentes analyses. A Martigny, ceux-ci sont Epstein Baar Virus
(EBV), Varicelle, Procalcitonine (PCT), Hormone Chorionique Gonadotrope (HCG), virus
d’immunodéficience humaine (HIV) et le dosage des D-dimères. Dans le cadre de ce travail,
nous avons uniquement utilisé le dosage des D-dimères. Pour pouvoir effectuer un test, il faut
insérer une barrette contenant les réactifs du test où le plasma du patient sera chargé ainsi
qu’un cône couvert d’antigènes spécifiques pour chaque test.
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16
Figure 13: Schéma d'une barrette et de ses différents (30)
Le principe du miniVIDAS est basé sur une méthode immunoenzymatique couplée à une
lecture de la fluorescence produite par l’action d’une enzyme (30). L’analyse se fait en trois
étapes: (31)
Aspiration de l’échantillon par le cône et lavage de l’excédent d’échantillons non fixés
sur les anticorps.
1. Aspiration du conjugué par le cône, suivi aussi d’un lavage pour éliminer le
conjugué non fixé.
2. Révélation par aspiration et refoulement du substrat. L’enzyme du conjugué va
alors catalyser la réaction d’hydrolyse du substrat. Ce substrat est alors
transformé en un produit fluorescent qui va être lu à 450nm.
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17
Le signal est proportionnel à la concentration d’antigènes présents dans l’échantillon. (31)
3.3.2 Réactifs, contrôles et échantillons
Le Réactif pour le dosage des D-dimères est:
VIDAS® D-Dimer Exclusion II DEX 2 (31)
N° lot de la boîte: 1004337870
Date d'expiration: 2016-09-14
Les échantillons utilisés pour le comparatif patient sont des échantillons patients provenant de
la routine du laboratoire.
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18
4 Résultats Dans ce chapitre, je vais présenter les résultats que nous avons obtenus pour les différents
critères de validation pour chacun des tests à valider. Je vais commencer par détailler les
différentes recommandations du rapport de validation, fourni par le FAMH d’hématologie de
l’ICH, sur la manière d’effectuer la validation pour chacun des paramètres (TP, aPTT,
fibrinogène et D-Dimères) à évaluer (cf. annexe : Rapport de validation).
Critère de comparaison
Pour effectuer le comparatif patient, nous avons suivi les recommandations du rapport de
validation du CS-2100. Nous avons donc effectué la comparaison en analysant : 30
échantillons patients pour le TP et pour l’aPTT ; et 20 échantillons patients pour le
fibrinogène et pour les D-Dimères. Les analyses ont d’abord été faites sur le CA-1500
(l’appareil de référence) et ensuite sur le CS-2100i (le nouvel appareil) pour le TP, aPTT et le
fibrinogène. Par contres pour les D-Dimères l’appareil de référence est le miniVIDAS. Ces
différents échantillons doivent être représentatifs de tout le domaine physiologique. Nous
avons donc plus précisément sélectionné pour:
o Le TP: 10 échantillons dont les valeurs sont supérieures à 70%, 10
échantillons dont les valeurs se situent entre 20 et 70% et 10 échantillons
dont les valeurs se situent entre 0 et 20%.
o L’aPTT: 15 échantillons dont les valeurs sont inférieures à 36 secondes, 10
échantillons dont les valeurs se situent entre 36 et 70 secondes et 5
échantillons dont les valeurs sont supérieures à 70 secondes.
o Le fibrinogène: 5 échantillons dont les valeurs sont inférieures à 1.0 g/L, 5
échantillons dont les valeurs se situent entre 1.0 et 1.8 g/L, 5 échantillons
dont les valeurs se situent entre 1.8 et 4.0 g/L et 5 échantillons dont les
valeurs sont supérieures à 4.0 g/L.
o Les D-Dimères: 5 échantillons dont les valeurs sont inférieures à 400 μg/L,
10 échantillons dont les valeurs se situent entre 400 et 600 μg/L et 5
échantillons dont les valeurs sont supérieures à 600 μg/L.
Dans les différents tableaux de ce chapitre, il y a les valeurs des doubles que l’appareil a fait
et le résultat final rendu dans le dossier WindMlab du patient. Le résultat final correspond à la
moyenne des résultats des doubles. Cependant, nous devons être attentif car, pour le TP et le
fibrinogène, la moyenne est effectuée sur les résultats en seconde et non pas sur les résultats
en pourcent (TP) ou en gramme par litre (fibrinogène).WinDMLab est le programme
informatique permettant de gérer les dossiers patients. C’est dans ce programme que nous
enregistrons les demandes d’analyse, que nous visualisons les résultats des tests et que nous
validons ces derniers. Pour les D-Dimères, par contre, les analyses sont effectuées en simple.
Critère de précision
Le critère de précision est séparé en deux parties distinctes: la précision intra-série
(répétabilité) et la précision inter-série (reproductibilité).
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19
Pour évaluer la répétabilité de l’appareil, nous avons, comme indiqué dans le rapport de
validation, effectué 10 mesures de suite d’un même échantillon. Dans notre cas, nous avons
utilisé des plasmas contrôles (Ci-Trol 1 ou Innovance D-Dimères contrôle 1). Ces analyses
doivent être faites dans des conditions similaires, c'est-à-dire avec le même lot de réactif et le
même appareil pour chacun des paramètres testés.
Pour évaluer la reproductibilité de l’appareil, le rapport de validation spécifie d’effectuer
l’analyse d’un contrôle de qualité interne (CQI) sur plusieurs jours à un rythme d’une fois par
jour. Ces analyses doivent être effectuées dans des conditions similaires : même échantillon,
même lot réactif et même appareil. Nous avons donc décidé d’analyser sur trente jours un
CQI pour chacun des paramètres à évaluer. En effet, pour tester le critère d’incertitude, nous
avons besoin de ces valeurs.
Critère d’incertitude
Pour évaluer l’incertitude de mesure pour l’appareil, le rapport de validation nous demande
d’analyser trente fois le même CQI pour chaque paramètre à évaluer. Les résultats utilisés
sont ceux obtenus pour la détermination de la reproductibilité comme expliqué ci-dessus.
Critère d’exactitude
Pour évaluer le critère d’exactitude pour chacun des paramètres, nous devons analyser deux
Contrôle Qualité Externe (CQE) du Centre Suisse de Contrôle de Qualité (CSCQ). Les
résultats obtenus sont envoyés à l’organisme CSCQ s’occupant des contrôles de qualité.
Celui-ci nous renvoie ensuite le rapport contenant les résultats de l’enquête effectuée avec les
résultats attendus pour chaque analyse. Les enquête d’hémostase au lieu environ tous les trois
mois. La premières a été faite le 1er mars et la suivante aura lieu dans le courant du mois de
juin.
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20
4.1 Pour le temps de prothrombine
4.1.1 Critères de comparaison
Voici le tableau récapitulatif des résultats obtenus pour le comparatif patient entre le CA-
1500 et le CS-2100i pour le paramètre du TP. La gamme de résultats obtenus permet de
couvrir la majeure partie du domaine physiologique (0 et 120%). Et nous pouvons observer
que les résultats obtenus sont assez similaires entre les deux appareils que cela soit dans les
valeurs hautes ou les valeurs basses.
NLAB TP -
CA-1500
TP 1
CS-2100i
TP 2
CS-2100i
TP final
CS-2100i
Unité % % % %
21511-31906 111 112 115 112
21511-31815 106 103 108 105
21511-31926 73 72 71 71
21511-31920 104 108 108 108
21511-31857 100 101 101 101
21511-31854 96 97 99 97
21511-31861 74 72 72 72
21511-31917 111 115 118 115
21511-31958 102 103 103 103
21511-37787 108 103 103 103 >70%
21511-31888 50 49 50 49
21511-31876 30 29 29 29
21511-31990 29 28 28 28
21511-31985 34 34 34 34
21511-31946 25 26 26 26
21511-31957 69 68 69 68
21511-32007 34 34 34 34
21511-31995 25 25 25 25
21511-31927 27 27 27 27
21511-32271 22 22 22 22 Entre 20 et 70%
21511-31873 16 15 15 15
21511-31954 18 18 18 18
21511-31999 20 20 19 19
21511-31997 16 16 16 16
21511-32245 8 6 6 6
21511-37470 17 15 15 15
21511-37402 14 13 13 13
21511-37110 14 13 14 14
21511-37080 15 16 16 16
21511-37167 15 16 16 16 <20%
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21
Les INR ci-dessous sont ceux correspondant au TP (en pourcent), obtenus pour les
échantillons du tableau précédent. Ces INR sont calculés par l’appareil à partir de la courbe
de calibration que nous avons fait lors de l’ouverture du lot de réactif. Nous observons que les
résultats obtenus sur les deux appareils sont très proches les uns des autres.
NLAB INR -
CA-1500
INR 1
CS-2100i
INR 2
CS-2100i
INR final
CS-2100i
Unité - - - -
21511-31906 1.0 0.95 0.94 0.95
21511-31815 1.0 0.99 0.97 0.98
21511-31926 1.2 1.16 1.16 1.16
21511-31920 1.0 0.97 0.97 0.97
21511-31857 1.0 1.00 1.00 1.00
21511-31854 1.0 1.02 1.01 1.02
21511-31861 1.1 1.16 1.16 1.16
21511-31917 1.0 0.94 0.94 0.94
21511-31958 1.0 0.99 0.99 0.99
21511-37787 1.0 0.99 0.99 0.99
21511-31888 1.4 1.4 1.39 1.4
21511-31876 2.2 2.19 2.19 2.19
21511-31990 2.2 2.23 2.23 2.23
21511-31985 1.9 1.92 1.93 1.93
21511-31946 2.5 2.42 2.42 2.42
21511-31957 1.2 1.19 1.18 1.19
21511-32007 1.9 1.9 1.89 1.9
21511-31995 2.6 2.5 2.52 2.51
21511-31927 2.4 2.32 2.34 2.33
21511-32271 2.8 2.77 2.8 2.79
21511-31873 3.7 3.68 3.68 3.68
21511-31954 3.3 3.19 3.19 3.19
21511-31999 3.1 3.03 3.04 3.04
21511-31997 3.6 3.56 3.59 3.58
21511-32245 7.8 8.05 8.05 8.05
21511-37470 3.4 3.64 3.66 3.66
21511-37402 4.1 4.15 4.18 4.17
21511-37110 4.1 4.14 3.92 4.03
21511-37080 3.9 3.56 3.56 3.56
21511-37167 3.9 3.57 3.59 3.58
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Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
22
4.1.2 Critères de précision
Répétabilité (précision intra-série)
L’échantillon utilisé pour évaluer la précision intra-série du temps de Quick est le Ci-Trol 1.
La valeur cible pour ce contrôle pour le TP est de 105% et pour l’INR de 0.98. Nous pouvons
donc voir que les résultats obtenus sont très proches de la valeur cible et dans les intervalles
de deux écart-types.
Paramètres TP
Ci-Tol 1
Lot 528157
2016/10/13
INR
Ci-Tol 1
Lot 528157
2016/10/13
Unités % -
1 105 0.98
2 105 0.98
3 105 0.98
4 108 0.97
5 105 0.98
6 103 0.99
7 105 0.98
8 105 0.98
9 105 0.98
10 105 0.98
Moyenne 105 0.98
CV % 1.03 0.00
SD. 1.09 0.00
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Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
23
Reproductibilité (précision inter-série)
Nous avons utilisé le Ci-Trol 1 pour obtenir les trente valeurs qui vont nous servir à évaluer
ce critère. Nous remarquons que les valeurs obtenues sont dans les intervalles de référence
pour les deux paramètres évalués. D’ailleurs la moyenne des résultats obtenus est proche de la
valeur cible correspondante pour le TP en pourcent et pour l’INR.
Paramètres TP INR
Ci-Trol 1
lot: 528157
Exp:
2016/10/13
Ci-Trol 1
lot: 528157
Exp:
2016/10/13
Cible 2 SD 105 %
(96.6 – 113.4
%)
0.98
(0.9 – 1.06)
Unités % -
1 103.0 0.99
2 103.0 0.99
3 107.6 0.97
4 105.2 0.98
5 103.0 0.99
6 107.6 0.97
7 107.6 0.97
8 105.2 0.98
9 105.2 0.98
10 100.8 1.00
11 103.0 0.99
12 100.8 1.00
13 98.7 1.01
14 107.6 0.97
15 105.2 0.98
16 105.2 0.98
17 105.2 0.98
18 100.8 1.00
19 100.8 1.00
20 103.0 0.99
21 103.0 0.99
22 105.2 0.98
23 100.8 1.00
24 103.0 0.99
25 105.2 0.98
26 105.2 0.98
27 103.0 0.99
28 103.0 0.99
29 105.2 0.98
30 103.0 0.99
Moyenne 103.8 1.00
CV % 2.22 0.01
SD 2.31 0.01
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
24
4.1.3 Incertitude de mesure
Nous avons utilisé les résultats obtenus pour les trente valeurs de la reproductibilité pour
évaluer l’incertitude de mesure. Pour l’incertitude de mesure, nous avons uniquement besoin
du coefficient de variation en pourcent et de l’écart-type mesuré afin de pouvoir l’évaluer.
Ci-Trol 1
lot: 528157
Exp: 2016/10/13
Ci-Trol 1
lot: 528157
Exp: 2016/10/13
Cible 2 SD 105 %
(96.6 – 113.4 %)
0.98
(0.9 – 1.06)
Moyenne 103.8 1.00
CV % 2.22 0.01
SD 2.31 0.01
4.1.4 Critères d’exactitude
Lors de mon stage, nous avons reçu un seul CQE et nous avons obtenu un résultat de 27% et
un INR à 2.3 pour le TP. Cependant, nous n’avons pas encore reçu en retour les résultats de
l’évaluation pour ce contrôle.
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
25
4.2 Pour le temps de thromboplastine partielle activée
4.2.1 Critères de comparaison
Voici le tableau récapitulatif des résultats obtenus pour le comparatif patient entre le CA-
1500 et le CS-2100i pour le paramètre de l’aPTT. La quasi-totalité du domaine physiologique
(20 et 120 secondes) est couvert grâce à ces valeurs. Nous observons que les résultats obtenus
sont très similaires entre le CA-1500 et le CS-2100i surtout pour les valeurs normal et basse,
mais nous avons des différences un peu plus grande dans les valeurs hautes (>70sec).
NLAB PTT -
CA-1500
PTT 1
CS-2100i
PTT 2
CS-2100i
PTT final
CS-2100i
Unité sec sec sec sec
21511-31906 28 28 28 28
21511-31815 37 36 37 37
21511-31888 33 34 34 34
21511-31876 35 35 35 35
21511-31920 31 31 31 31
21511-31857 33 33 33 33
21511-31854 29 29 29 29
21511-31917 28 27 28 28
21511-31958 28 28 28 28
21511-37787 25 24 24 24
21511-37503 28 29 29 29
21511-37247 23 25 25 25
21511-37395 31 33 33 33
21511-38808 34 33 33 33
21511-38836 33 31 32 32 < 36 sec
21511-31926 41 41 42 41
21511-31873 49 51 52 51
21511-31861 44 44 44 44
21511-31954 50 50 50 50
21511-31999 50 50 51 50
21511-31957 38 37 37 37
21511-31997 48 48 49 49
21511-37788 58 63 63 63
21511-37755 43 44 44 44
21511-37369 54 58 59 58 36 à 70 sec
21511-42302 90 99 102 100
21512-11538 82 76 77 77
21512-10547 111 114 113 113
21512-09297 118 114 115 114
21512-13566 75 75 77 76 >70 sec
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
26
4.2.2 Critères de précision
Répétabilité (intra-série)
Pour évaluer la répétabilité pour ce test, nous avons suivi les instructions du rapport de
validation. Nous avons obtenu les résultats suivant en utilisant le Ci-Trol 1 comme plasma
échantillon. Pour ces résultats, nous remarquons que ceux-ci se trouve dans les intervalles de
référence du contrôle (30.3 – 35.5 sec) et ils s’ont aussi proches de la valeur cible (32.9 sec).
Paramètres aPTT
Ci-Tol 1
Lot 528157
2016/10/13
Unités sec
1 31
2 32
3 31
4 31
5 31
6 31
7 31
8 31
9 31
10 31
Moyenne 31
CV % 0.19
SD. 0.06
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
27
Reproductibilité (inter-série)
Pour évaluer, la reproductibilité de ce test nous avons suivi les instructions dictées par le
rapport de validation. Et nous avons utilisé le Ci-Trol 1 comme échantillons pour les tests.
Toutes les valeurs obtenues se situent dans l’intervalle de référence.
Paramètres aPTT
Ci-Trol 1
lot: 528157
Exp: 2016/10/13
Cible 2 SD 32.9 sec
(30.3 – 35.5 sec)
Unités sec
1 32.2
2 32.1
3 32.2
4 32.3
5 32.1
6 31.8
7 31.9
8 32.3
9 32.2
10 32.0
11 32.7
12 36.8
13 36.6
14 31.6
15 32.7
16 32.5
17 32.5
18 32.7
19 33.0
20 33.1
21 33.1
22 33.4
23 33.9
24 32.3
25 35.7
26 34.9
27 31.5
28 32.6
29 32.4
30 32.4
Moyenne 32.9
CV % 4.13
SD 1.36
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
28
4.2.3 Incertitude de mesure
Les résultats utilisés pour évaluer ce critère sont ceux obtenus pour la précision inter-série.
Pour l’évaluation du critère d’incertitude nous avons uniquement besoin du coefficient de
variation en pourcent et de l’écart-type mesuré.
Paramètres aPTT
Ci-Trol 1
lot: 528157
Exp: 2016/10/13
Cible 2 SD 32.9 sec
(30.3 – 35.5 sec)
Moyenne 32.9
CV % 4.13
SD 1.36
4.2.4 Critères d’exactitude
Nous avons analysé le contrôle de qualité externe envoyé par le CSCQ pour tester le
paramètre de l’aPTT. Cependant, nous n’avons pas encore reçu en retour les résultats de
l’enquête. Le résultat obtenu est de 91 secondes.
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
29
4.3 Pour le dosage du fibrinogène
4.3.1 Critères de comparaison
Nous avons obtenu les résultats ci-dessous en effectuant ce comparatif patient entre le CA-
1500 et le CS-2100i pour le fibrinogène. Les résultats obtenus permettent d’avoir un panel de
valeurs couvrant la majorité du domaine physiologique (0.2 et 7.0 g/L). Les résultats obtenus
sur avec le CA-1500 et avec le CS-2100i sont très proches entre eux pour tous le domaine
physiologique testé.
NLAB Fibrinogène
CA-1500
Fibrinogène 1
CS-2100i
Fibrinogène 2
CS-2100i
Fibrinogène
final
CS-2100i
Unité g/L g/L g/L g/L
21511-39400 0.64 0.68 0.66 0.66
21511-39501 0.76 0.76 0.79 0.77
21511-42840 0.64 0.65 0.60 0.62
21511-42837 0.69 0.69 0.65 0.67
21511-42829 0.88 0.88 0.89 0.88 < 1 g/L
21512-00324 1.85 1.85 1.83 1.83
21512-00298 1.23 1.24 1.26 1.25
21512-00246 1.13 1.16 1.22 1.18
21512-00787 1.1 1.07 1.11 1.09
21512-00971 1.32 1.44 1.38 1.4 1.0 à 1.8 g/L
21511-37501 3.34 3.81 3.72 3.72
21511-37402 2.22 2.39 2.36 2.36
21511-37110 2.84 3.19 3 3.06
21511-37788 3.5 3.63 3.55 3.55
21511-37755 3.27 3.47 3.4 3.4 1.8 à 4.0 g/L
21511-38740 6.55 6.65 6.79 6.65
21512-00324 5 5.77 5.77 5.77
21511-37395 4.15 4.58 4.45 4.45
21512-00246 4.81 4.71 4.78 4.71
21512-04128 5 5.66 5.56 5.56 > 4.0 g/L
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
30
4.3.2 Critères de précision
Répétabilité (intra-série)
Pour évaluer la répétabilité de ce test nous avons suivi les mêmes instructions du rapport de
validation que pour le TP. Nous remarquons que les valeurs obtenue avec le Ci-Trol 1 sont
proches de la valeur cible (2.61 g/L).
Paramètres Fibrinogène
Ci-Tol 1
Lot 528157
2016/10/13
Unités g/L
1 2.59
2 2.59
3 2.54
4 2.63
5 2.54
6 2.63
7 2.54
8 2.59
9 2.59
10 2.63
Moyenne 2.59
CV % 1.54
SD. 0.04
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
31
Reproductibilité (inter-série)
Pour évaluer la reproductibilité de ce test nous avons suivi les mêmes instructions que pour le
TP. Pour ce critère, tous les résultats se situent dans l’intervalle de référence (2.41 – 2.81 g/L)
du contrôle sauf la valeur 3 (2.32 g/L) qui est en-dessous.
Paramètres Fibrinogène
Ci-Trol 1
lot: 528157
Exp: 2016/10/13
Cible 2 SD 2.61 g/L
(2.41 – 2.81 g/L)
Unités g/L
1 2.59
2 2.43
3 2.32
4 2.43
5 2.54
6 2.54
7 2.50
8 2.59
9 2.50
10 2.63
11 2.59
12 2.39
13 2.54
14 2.46
15 2.63
16 2.63
17 2.46
18 2.43
19 2.54
20 2.59
21 2.54
22 2.46
23 2.54
24 2.63
25 2.46
26 2.50
27 2.43
28 2.59
29 2.59
30 2.50
Moyenne 2.52
CV % 3.17
SD 0.07
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
32
4.3.3 Incertitude de mesure
Pour le critère d’incertitude du fibrinogène, nous avons travaillé de la même façon que pour
les deux tests précédents (TP et aPTT). Les résultats sont ceux des critères de reproductibilité.
Pour ce critère, nous avons besoin que du coefficient de variation en pourcent (3.17 g/L) et de
l’écart-type mesuré (0.07 g/L).
Paramètres Fibrinogène
Ci-Trol 1
lot: 528157
Exp: 2016/10/13
Cible 2 SD 2.61 g/L
(2.41 – 2.81 g/L)
Moyenne 2.52
CV % 3.17
SD 0.07
4.3.4 Critères d’exactitude
Le résultat obtenu pour le CQE pour l’analyse du fibrinogène est de 2.7 g/L. Cependant, nous
n’avons pas encore reçu en retour les résultats de l’évaluation pour ce contrôle.
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
33
4.4 Pour le dosage des D-dimères
4.4.1 Critères de comparaison
Voici le tableau récapitulatif des résultats obtenus pour le comparatif patient entre le CA-
1500 et le CS-2100i pour le dosage des D-Dimères. La gamme de résultat obtenu permet de
couvrir la quasi-totalité du domaine physiologique (50 et 10’000 μg/L). Les cinq échantillons
marque en rouge dans le tableau sont de part est d’autre de la valeur seuil (500 μg/L). De ce
faites, les résultats sont positifs pour le miniVIDAS (>500 μg/L) et négatifs sur le CS-2100i
(<500 μg/L). Nous avons également remarque des différences plus important entre les
résultats dans les valeurs hautes (> 600 μg/L).
NLAB DDEVidas DDE CS-2100
Unité μg/L μg/L
21601-28459 384 345
21601-30314 213 280
21601-38662 199 224
21601-37397 199 258
21601-45735 326 228 < 400 μg/L
21512-38386 527 451
21601-07731 490 343
21601-09401 558 342
21601-17333 529 489
11111-30144 516 479
21601-29260 414 324
21601-25177 564 684
21512-06006 493 450
21601-38994 570 569
21601-37286 593 439 entre 400 et 600 μg/L
21601-30197 1983 2368
21601-29514 1145 907
21601-29624 741 548
21601-44528 667 518
21602-00665 3442 3767 > 600 μg/L
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
34
4.4.2 Critères de précision
Répétabilité (intra-série)
Pour évaluer la répétabilité de ce test, nous avons suivi les mêmes instructions du rapport de
validation que pour le TP. Nous remarquons que les résultats obtenus se situent dans
l’intervalle de référence du contrôle (260 – 400 μg/L).
Paramètres D-dimères
Contrôle 1
lot : 560792
2017/08/17
Unités μg/L
1 315
2 309
3 309
4 333
5 326
6 344
7 313
8 339
9 363
10 304
Moyenne 326
CV % 5.8
SD. 19.03
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
35
Reproductibilité (inter-série))
Pour évaluer la reproductibilité de ce test, nous avons suivi les mêmes instructions que pour le
TP. Pour ce critère tous nos résultats se trouvent dans l’intervalle de référence. Nous
observons quand même de plus grande variation entre les résultats que pour les trois autres
paramètres évalués par le rapport de validation.
Paramètres D-dimères
Contrôle 1
Lot: 560793
Exp: 2017/09/07
Cible 2 SD 330 μg/L
(260 – 400 μg/L)
Unités μg/L
1 324
2 324
3 327
4 335
5 329
6 319
7 330
8 379
9 332
10 333
11 297
12 367
13 320
14 327
15 367
16 364
17 345
18 338
19 320
20 348
21 329
22 329
23 332
24 327
25 319
26 350
27 350
28 308
29 342
30 322
Moyenne 334
CV % 5.42
SD 18.09
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
36
4.4.3 Incertitude de mesure
Pour les D-Dimères, nous avons suivi la procédure du rapport de validation et les résultats
obtenus sont ceux du critère de reproductibilité. Nous avons besoin uniquement du coefficient
de variation en pourcent et de l’écart-type mesuré pour évaluer ce critère.
Paramètres D-dimères
Contrôle 1
Lot: 560793
Exp: 2017/09/07
Cible 2 SD 330 μg/L
(260 – 400 μg/L)
Moyenne 334
CV % 5.42
SD 18.09
4.4.4 Critères d’exactitude
Le dosage des D-Dimères sur le CQE a donné un résultat de 2794 μg/L.
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
37
5 Discussion
Dans ce chapitre, je vais d’abord commencer par présenter les différentes conditions
d’acceptabilité des résultats des différents critères de la validation. Ceci, afin d’éviter de
nombreuses répétitions inutiles tout au long de ce chapitre. Ces conditions se trouvent dans le
rapport de validation fourni par le FAMH d’hématologie de l’ICH (cf. annexe : Rapport de
validation).
Toutes les conditions citées ci-dessous sont les même quel que soit le test à valider par ce
rapport.
Critère de comparaison :
Pour valider le critère de comparaison, il faut effectuer un graphique de type régression selon
Passing Bablock à l’aide des résultats patients obtenus sur les deux appareils. La régression
selon Passing Bablock est un modèle mathématique utilisé pour trouver une relation linéaire
entre deux techniques de mesure (32). Les valeurs de l’appareil de référence (CA-1500) se
trouvent en abscisse et les valeurs obtenues sur le CS-2100i (valeurs finales) se trouvent en
ordonnée. Pour pouvoir valider le paramètre, la pente de la droite formée par les résultats
obtenus doit être comprise entre 0.9 et 1.1, donc proche de 1. La raison d’une telle valeur
repose sur le fait que si nous traçons une droit avec des valeurs identiques pour x et y (des
résultats identiques sur les deux appareils), la droite possèderait alors une pente égale à 1.
Pour valider la comparaison, il faut aussi que le coefficient de corrélation soit supérieur à 0.9.
Celui-ci est le reflet de la dispersion des résultats autour de la droite de régression. (32)
Critère de précision :
Le critère de précision est divisé en deux sous-critères qui sont la répétabilité et la
reproductibilité. Lors de la validation des résultats obtenus à l’aide des échantillons contrôles
(Ci-Trol1 et Innovance contrôle D-Dimères 1), ceux-ci sont soumis à la même condition.
Cette dernière est que la valeur B doit être inférieure à la valeur A pour que le paramètre soit
jugé acceptable. La valeur A correspond à la Tolérance QUALAB qui est définie par le
CSCQ (3s). Cette Tolérance QUALAB est obtenue en multipliant la moyenne des dix valeurs
mesurées par la tolérance CQI QUALAB (en pourcent), le résultat final est ensuite divisé par
100. La valeur B correspond à la Tolérance calculée selon la règle des 3 écarts-types. Elle est
obtenue en multipliant l’écart-type mesuré lors des tests par 3.
Critère d’exactitude :
Pour évaluer le critère d’exactitude, nous devons effectuer deux contrôles de qualité externe
(CQE) différent pour le Centre Suisse de Contrôle de Qualité (CSCQ). Une fois le CQE
exécuté et les valeurs renvoyées à l’organisme responsable de l’enquête, nous devons attendre
les résultats en retour afin de les comparer avec les valeurs obtenues. Nous devons ensuite
calculer le biais en pourcent (biais %) obtenu et celui-ci doit être inférieur à la tolérance
QUALAB en pourcent.
Biais % = ((valeur obtenue - valeur vrai)/ valeur vrai) x 100
La valeur vraie correspond au résultat rendu par le CSCQ pour le CQE.
Critère d’incertitude :
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
38
Pour évaluer l’incertitude de mesure, nous devons nous baser sur le coefficient de variation en
pourcent (CV %) calculé à l’aide du passage des contrôles (Ci-Trol1 et Innovance contrôle D-
Dimères 1) sur trente jours. Le CV% est calculé à partir de la moyenne et de l’écart-type.
CV% = (moyenne/ écart-type) x 100
5.1 Interprétation pour le TP
5.1.1 Critères de comparaison
Nous avons obtenu le graphique suivant pour le TP après avoir entré les résultats dans le
programme Methode validator et avoir sélectionné le type de graphique (Passing Bablock en
droite de régression).
Figure 14: Passing Bablock pour le TP
Pour mon graphique, la pente de la droite de régression est égale à 1.000 donc dans
l’intervalle demandé par le rapport de validation (entre 0.9 et 1.1). Le coefficient de
corrélation est quant à lui égal à 0.999. Comme pour la pente, la valeur obtenue correspond
aux critères du rapport de validation.
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
39
Pour l’INR, le graphique pour le Passing Bablock en droite de régression est le suivant.
Figure 15: Passing Bablock pour l'INR
La pente est égale à 1.000 et le coefficient de corrélation est équivalent à 0.997. Les deux
résultats se trouvent dans les intervalles de référence dictés par le rapport de validation.
5.1.2 Critères de précision
Répétabilité
Analytes Unités Tolérance
QUALAB
en %
Moyenne A* SD
mesuré
B*
TP % 15 105 15.75 1.09 3.27
INR 15 0.98 0.147 0.00 0.00
A : (moyenne des valeurs mesurées X la tolérance QUALAB %) / 100
B : SD mesuré X 3
Nous pouvons dire que le critère de répétabilité est acceptable pour le TP en pourcent et pour
l’INR, car la valeur B et bien inférieure à la valeur A.
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
40
Reproductibilité
Analyte Unités Cible
fabricant
Tolérance
fabricant
Tolérance
QUALAB
en %
Moyenne A* SD
mesuré B*
TP % 105 4.2 15 103.8 15.57 2.31 6.93
INR 0.98 0.04 15 1.00 0.15 0.01 0.03
A : (moyenne des valeurs mesurées x la tolérance QUALAB) / 100
B : SD mesuré x 3
Pour le TP en pourcent et l’INR, le critère dicté par le rapport de validation (B<A) est
acceptable au vu des résultats obtenus lors de ce test.
5.1.3 Critère d’exactitude
Analyte organisme Enquête/
date
Unités Résultat cible Biais % Tolérance %
TP CSCQ 01.03.2016 % 27 15
INR 2.3 15
TP CSCQ %
INR
Pour ce test, nous n’avons pas encore reçu de résultats en retour de la part du CSCQ. Nous ne
pouvons donc pas évaluer ce critère pour le moment.
5.1.4 Incertitude de mesure
Analyte Unités Moyenne CV% SD mesuré 2 SD n
TP % 103.8 2.22 2.31 4.61 30
INR 1.00 1.00 0.01 0.02 30
Nous avons effectué l’analyse pour le TP en pourcent et pour l’INR. Pour les deux, nous
avons des CV% inférieurs à 10 %. Les résultats obtenus sont acceptables.
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
41
5.2 Interprétation pour l’aPTT
5.2.1 Critères de comparaison
Après avoir entré les résultats obtenus pour l’aPTT dans le programme Methode validator,
nous avons obtenu le graphique suivant pour le Passing Bablock en droite de régression.
Figure 16: Passing Bablock pour l'aPTT
La pente de la droite de régression est égale à 1.000 et le coefficient de corrélation est égal à
0.994. Pour ces deux critères, les résultats obtenus se trouvent dans les intervalles indiqués
dans le rapport de validation.
5.2.2 Critères de précision
Répétabilité
Analytes Unités Tolérance
QUALAB
en %
Moyenne A* SD
mesuré
B*
aPTT sec 25 31 7.75 0.06 0.18
A : (moyenne des valeurs mesurées X la tolérance QUALAB) / 100
B : SD mesuré X 3
Si nous nous référons à la condition de validation des résultats (B<A), nous pouvons dire que
nos résultats sont bons car la valeur B (0.18) est inférieure à la valeur A (7.75).
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
42
Reproductibilité
Analyte Unités Cible
fabricant
Tolérance
fabricant
Tolérance
QUALAB
en %
Moyenne A* SD
mesuré B*
aPTT sec 32.9 1.3 25 32.9 8.26 1.36 4.08
A : (moyenne des valeurs mesurées X la tolérance QUALAB) / 100
B : SD mesuré X 3
Pour ce critère, les résultats sont acceptés car après avoir calculé les valeurs A et B, celles-ci
correspondent à la condition (B<A) posée dans le rapport de validation.
5.2.3 Critère d’exactitude
Analyte organisme Enquête/
date
Unités Résultat cible Biais % Tolérance %
aPTT CSCQ 01.03.2016 sec 91 25
aPTT CSCQ sec 25
Pour ce test, n’ayant pas encore reçu les résultats en retour de la par du CSCQ. Nous ne
sommes actuellement pas en mesure d’évaluer ce critère.
5.2.4 Incertitude de mesure
Analyte Unités Moyenne CV% SD mesuré 2 SD N
aPTT sec 32.9 4.13 1.36 2.72 30
Le CV% obtenu pour ce test est inférieur à 10%, nous pouvons donc dire que celui-ci est
acceptable.
Jessica Gilliard Travail de Diplôme en hémostase
Essante 55ème TAB Laboratoire ICH Martigny
43
5.3 Interprétation pour le taux de fibrinogène
5.3.1 Critères de comparaison
Le graphique Passing Bablock en droite de régression obtenu avec les résultats du fibrinogène
est le suivant.
Figure 17: Passing Bablock pour le fibrinogène
La pente de la droite de régression est égale à 1.084, la valeur se trouve donc dans les
intervalles de référence. Le coefficient de corrélation quant à lui est égal à 0.996, donc
supérieur à 0.9 comme indiqué dans les critères de validation du rapport.
5.3.2 Critères de précision
Répétabilité
Analytes Unités Tolérance
QUALAB
en %
Moyenne A* SD
mesuré
B*
Fibrinogène g/L 15 2.59 0.389 0.04 0.12
A : (moyenne des valeurs mesurées X la tolérance QUALAB) / 100
B : SD mesuré X 3
Pour ce critère, nous pouvons dire que le résultat est acceptable car il correspond à la
condition de validation du rapport.
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44
Reproductibilité
Analyte Unités Cible
fabricant
Tolérance
fabricant
Tolérance
QUALAB
en %
Moyenne A* SD
mesuré B*
Fibrino
gène
g/L 2.61 0.1 15 2.52 0.378 0.08 0.24
A : (moyenne des valeurs mesurées X la tolérance QUALAB) / 100
B : SD mesuré X 3
Nous pouvons définir ce critère comme acceptable puisque la valeur B (0.24) est inférieure à
la valeur A (0.378).
5.3.3 Critère d’exactitude
Analyte organisme Enquête/
date
Unités Résultat cible Biais
%
Tolérance
%
Fibrinogène CSCQ 01.03.2016 g/L 2.7 15
Fibrinogène CSCQ g/L 15
Pour ce test, n’ayant pas encore reçu les résultats en retour de la par du CSCQ. Nous ne
sommes actuellement pas en mesure d’évaluer ce critère.
5.3.4 Incertitude de mesure
Analyte Unités Moyenne CV% SD mesuré 2 SD N
Fibrinogène g/L 2.52 3.17 0.07 0.16 30
Le coefficient de variation (en pourcent) est inférieur à 10%, nous pouvons donc le définir
comme acceptable.
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45
5.4 Interprétation pour les D-Dimères
5.4.1 Critères de comparaison
Le graphique Passing Bablock obtenu avec les résultats pour les D-dimères est le suivant.
Figure 18: Passing Bablock pour le D-Dimère
La pente de la droite de régression a pour valeur 0.963. Cette valeur se situe dans les
intervalles de référence indiqués dans le rapport de validation. Pour le coefficient de
corrélation, j’ai obtenu 0.988. La valeur du coefficient de corrélation est bien supérieure à 0.9
comme précisé dans le rapport de validation.
Par contre, pour cinq des dix échantillons dont la valeur est proche de la valeur seuil (cut-off à
500 μg/L), nous avons obtenu des résultats inférieurs à 500 μg/L sur le CS-2100. Sur le
miniVIDAS ceux-ci était supérieurs au seuil. Après avoir observé les indications cliniques
pour les différents patients nous nous sommes rendu compte qu’aucun de ceux-ci ne
présentaient de thrombose ou d’embolie.
Nous avons aussi remarqué des différences dans les résultats des valeurs hautes. Après avoir
effectué des recherches, nous avons trouvé que les anticorps-hétérophiles peuvent provoquer
ce genre d’interférence. Suite à des téléphone avec Siemens, ceux-ci nous ont confirmé que ca
pouvait être le cas.
Les anticorps hétérophiles sont des anticorps humains capables de réagir avec les anticorps
présents dans les réactifs des tests immunologiques. Il en existe plusieurs types qui sont : les
anticorps humains anti-animaux, les anticorps humains anti-idiotypes et les facteurs
rhumatoïdes. Ces trois types d’anticorps réagissent avec des parties différentes de l’anticorps
du réactif. Ils réagissent soit avec la portion Fc, soit avec la portion Fab. Ces anticorps ont
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46
donc la capacité de modifier les résultats des dosages immunologique dans des sens différents
(fausse augmentation ou fausse diminution du résultat). Les fabricants peuvent rajouter dans
les kits réactifs des agents bloquants capables de diminuer les interférences produites par ces
anticorps. Pour le CS-2100i, le kit de réactifs du dosage des D-Dimères a été conçu pour
limiter au maximum les interférences avec des anticorps hétérophiles, mais il n’y a pas de
précision si des agents bloquants, on été utilisé dans le kit. Par contre pour les réactifs du
miniVIDAS, il est précisé que des plasmas patients contenant des anticorps dirigés contre des
composants du réactif peuvent causer des interférences, mais aussi que les facteurs
rhumatoïdes ne font pas d’interférences jusqu’à une concentration de 400 UI/ml. (33) (34)
Malgré la présence d’interférences dans les valeurs hautes (>600 μg/L), nous pouvons utiliser
les résultats. Car ce qui est important avec le dosage des D-Dimères c’est de savoir si le
résultat est supérieur ou inférieur au cut-off (500 μg/L).
5.4.2 Critères de précision
Répétabilité
Analytes Unités Tolérance
QUALAB
en %
Moyenne A* SD
mesuré
B*
D-Dimères μg/L 21 326 68.46 19.03 57.09
A : (moyenne des valeurs mesurées X la tolérance QUALAB) / 100
B : SD mesuré X 3
Le critère de répétabilité peut être accepté car les résultats obtenus pour A et B respectent la
condition du rapport de validation.
Reproductibilité
Analyte Unités Cible
fabricant
Tolérance
fabricant
Tolérance
QUALAB
en %
Moyenne A* SD
mesuré B*
D-
Dimères
μg/L 330 20 21 334 70.14 18.09 54.
27
A : (moyenne des valeurs mesurées X la tolérance QUALAB) / 100
B : SD mesuré X 3
Pour ce critère la valeur B (54.27) est inférieure à la valeur A (70.14), nous pouvons donc
accepter les résultats.
5.4.3 Critère d’exactitude
Analyte organisme Enquête/
date
Unités Résultat cible Biais
%
Tolérance
%
D-Dimères CSCQ 01.03.2016 μg/L 2794 21
D-Dimères CSCQ μg/L 21
Pour ce test, n’ayant pas encore reçu les résultats en retour de la par du CSCQ. Nous ne
sommes actuellement pas en mesure d’évaluer ce critère.
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47
5.4.4 Incertitude de mesure
Analyte Unités Moyenne CV% SD mesuré 2 SD N
D-Dimères μg/L 334 5.42 18.09 36.18 30
Le CV% obtenu est inférieur à 10%. Nous pouvons donc le définir comme acceptable.
6 Conclusion Ce travail a pour but de valider les quatre tests d’hémostase sur le CS-2100i de chez Siemens,
en les comparants avec les tests effectués sur les appareils de référence qui sont le CA-1500
de chez Siemens et le miniVIDAS de chez Biomérieux.
Pour résumer, nous avons défini les différents critères comme corrects. Pour la comparaison
toutes les pentes sont entre 0.9 et 1.1 et tous les coefficients de corrélation sont supérieurs à
0.9. Pour la répétabilité (précision intra-série) et pour la reproductibilité (précision inter-
série), les résultats sont aussi définis comme corrects. Pour le critère d’exactitude, nous
n’avons pas pu évaluer les résultats car l’évaluation de ce critère n’est pas encore terminée. Et
finalement pour l’incertitude de mesure est correct pour les quatre paramètres à évaluer.
Nous avons rencontré plusieurs problèmes. Tous d’abord, nous avons eu de la difficulté à
obtenir des échantillons patients dont les résultats étaient dans les valeurs basses (<20%) pour
le TP, ou dans les valeurs hautes pour l’aPTT (>70sec), le fibrinogène (4.0g/L) et les D-
Dimère (>600 μg/L). Deuxièmement, nous nous sommes retrouvés face à des résultats pour
les D-Dimères dont la signification clinique différait. Les résultats se trouvaient de part et
d’autre du cut-off en fonction de l’appareil utilisé. Après une analyse des différents cas
problématiques, nous nous sommes rendu compte que pour aucun d’entre eux, il n’y avait pas
de présence de thrombose ou d’embolie. En conclusion, nous pouvons affirmer que le CS-
2100i est plus fiable que le miniVIDAS car les résultats qu’il a rendus pour ces différents
patients correspondaient à la clinique du patient. Troisièmement les écarts dans les résultats
des valeurs hautes des D-Dimères, sont en partie expliqués par la problématique des
interférences avec des anticorps hétérophiles. Mais dans ces cas, les résultats sont fiables et
peuvent être rendus au médecin car de toute façon supérieur au cut-off.
Nous avons donc pu valider les quatre paramètres. De plus, nous avons pu mettre en route les
tests (TP, aPTT et fibrinogène) en routine à partir du 06 janvier 2016. Pour les D-Dimères,
nous l’avons fait à partir du 1er mars 2016. C’est le Dr. Pierre-Yves Lovey, responsable
FAMH d’hématologie au laboratoire de Martigny qui a validé nos résultats obtenus pour le
rapport de validation.
D’un point de vue personnel, ce travail de diplôme m’a permis de mettre en pratique et de
mieux comprendre beaucoup de notions théoriques d’hémostase. Mais aussi de pouvoir
travailler sur un projet de manière autonome tout en étant sous la supervision de Madame
Gianinetti et de Monsieur Sarrasin en cas de besoin. De plus cela m’a permis de bien
connaître le mode de fonctionnement de l’appareil en travaillant avec régulièrement et en
devant résoudre quelques problèmes rencontrés lors de l’utilisation. Pour conclure, je peux
dire que ce travail de diplôme a été une expérience très enrichissante pour moi.
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48
Remerciements J’adresse mes remerciements aux personnes qui m’ont aidé pour la réalisation de mon travail
de diplôme.
En premier lieu je remercie Madame Gianinetti, TAB cheffe. En tant que référant pour mon
travail de diplôme, elle m’a aiguillée pour la pratique à effectuer et pour les améliorations à
faire sur mon dossier. Et Monsieur Sarrasin, TAB responsable, qui m’a fourni une aide pour
la pratique et pour mes différentes questions théoriques.
En second lieu je tiens à remercier Madame Badoux pour le temps qu’elle a consacré à la
relecture et à la correction de mon travail.
Et finalement, je remercie toutes l’équipe du laboratoire de Martigny pour le temps qu’ils
m’ont consacré ainsi que pour l’expérience qu’ils m’ont transmise tous au long de mon stage.
Lexique Hémostase : Processus physiologique permettant l’arrêt d’une hémorragie.
Fibrinolyse : Processus aboutissant à la destruction de caillot de fibrine.
Tests hépatiques : Analyses de laboratoire permettant de voir s’il y a un problème ou non au
niveau du foie.
Méthode immunologique : Méthode dont le principe de mesure se repose sur la détection
d’une réaction antigène-anticorps.
Méthode chromogénique : Méthode dont le principe de mesure se repose sur la détection d’un
produit coloré obtenu après une réaction chimique.
Méthode turbidimétrique : Méthode de mesure dont le principe repose sur la détection d’un
trouble dans le liquide à mesurer.
Méthode néphélémétrique : Méthode de mesure dont le principe de détection repose sur la
mesure de la lumière diffusée perpendiculairement à la lumière entrant dans la cuve de
réaction.
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Bibliographie 1. Hôpital du Valais. Laboratoire, Institut Centrale des Hôpitaux (ICH). [En ligne] [Citation :
18 02 2016.] http://www.hopitalduvalais.ch/fr/professionnels-de-la-sante/institut-central-
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2. Dr. J.Noetzli, Mme Elena Guirao, Dr. Elena Bianchi et Dr. Sabine Blum. Cours
d'hémostase. CHUV Lausanne : s.n., 2014-2015. p. 3.
3. —. Cours d'hémostase. CHUV Lausanne : s.n., 2014-2015. pp. 3-8.
4. —. Cours d'hémostase. CHUV Lausanne : s.n., 2014-2015. pp. 9-15.
5. Barelli, Stefano. Troubles de l'hémostase. romande.labmed.ch. [En ligne] 04 03 2013.
[Citation : 25 01 2016.]
http://romande.labmed.ch/fileadmin/redaktion/zz_testbild/Romandie/pdf/Kursunterlagen/201
3_03_04_Barelli.pdf.
6. Vincentbourquin.files.wordpress. [En ligne] 05 2013. [Citation : 17 03 2016.]
https://vincentbourquin.files.wordpress.com/2013/05/capture-d_c3a9cran-2013-05-08-c3a0-
17-28-52.png?w=630.
7. Dr. J.Noetzli, Mme Elena Guirao, Dr. Elena Bianchi et Dr. Sabine Blum. Cours
d'hémostase. Chuv Lausanne : s.n., 2014-2015. pp. 21-27.
8. Matthey-Guirao, Elena. Hémostase: Exploration de la coagulation 1-2. Lausanne : s.n.,
2014. pp. 5-22.
9. Angelillo-Scherrer, Anne. Maladies hémorragiques résultant de déficits factoriels. 2008-
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10. Hôpitaux universitaires de Genève. hug-ge.ch. Votre traitement anticoagulant par AVK
(antivitamines K). [En ligne] août 2013. [Citation : 29 02 2016.] http://www.hug-
ge.ch/sites/interhug/files/documents/avk_08_13.pdf. Réf. 435383.
11. Products, Siemens Healthcare Diagnostics. Pathromtin® SL.
12. —. Solution de chlorure de Calcium Cacl2. 2012.
13. Matthey-Guirao, Elena. Hémostase: Exploration de la coagulation 1-2. Lausanne : s.n.,
2014. pp. 24-30.
14. Alberio, S. Blum et L. Anticoagulants. 2015. pp. 1-8.
15. Matthey-Guirao, Elena. Hémostase: Exploration de la coagulation 1-2. Lausanne : s.n.,
2014. pp. 37-42.
16. Dr. J.Noetzli, Mme Elena Guirao, Dr. Elena Bianchi et Dr. Sabine Blum. Cours
d'hémostase. Chuv Lausanne : s.n., 2014-2015. p. 16.
17. —. cours d'hémostase. CHUV Lausanne : s.n., 2014-2015. p. 76.
18. Products, Siemens Healthcare Diagnostics. Innovance D-Dimer. 2013.
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50
19. Sysmex, Scientific Research Division. CS-2000i/CS-2100i- Evaluation and check
algorithm. 2011. p. 5.
20. —. CS-2000i/CS-2100i- Evaluation and check algorithm. 2011. pp. 9-11.
21. Sysmex. Operator's manual (mode d'emploi). 2012. pp. 1-6 .
22. —. Operator's manual (mode d'emploi). 2012. pp. 9-1 à 9-9.
23. Sysmex, Scientific Research Division. CS-2000i/CS-2100i- Evaluation and check
algorithm. 2011. pp. 20-23.
24. Gianinetti, Céline. PV du colloque du 25.02.2016. Martigny : s.n., 2016.
25. Products, Siemens Healthcare Diagnostics. Dade® Innovin®. 2012.
26. PRoducts, Siemens Healthcare Diagnostics. Dade® réactifs thrombine. 2014.
27. Products, Siemens Healthcare Diagnostics. Dade® Tampon véronal d'Owren. 2012.
28. Sysmex®. Manuel de formation. 2005. pp. 7-11.
29. Sysmex. Manuel d'utilisation du système Sysmex CA-1500. 2002. pp. 10-1 à 10-10-5.
30. ICHV. VIDAS. 24 04 2015. Réf.GU-0470.
31. Biomérieux. VIDAS® D-Dimer Exclusion II. 2015.
32. Bystranowski, G. Cours sur l'évaluation d'une méthode.
33. J.A. Rouvière, J. Devignes, E. de Maistre, A. Kennel, F. Chabot et T. Lecompte.
Incohérence entre deux méthodes de dosage des D-dimères: un cas d'interférence d'anticorps
humain anti-souris. John Libbey Eurotext. [En ligne] juillet- août 2008. [Citation : 25 01
2016.] http://www.jle.com/fr/revues/abc/e-
docs/incoherence_entre_deux_methodes_de_dosage_des_d_dimeres_un_cas_dinterference_d
anticorps_humain_anti_souris_278314/article.phtml?tab=texte.
34. Lepage, Raymond. Les problèmes de réactivité croisée et d'interférence hétérophiles
dans les tests immunologiques. sqbc. [En ligne] 2005. [Citation : 25 01 2016.]
sqbc.qc.ca/home/tiki-download_file.php?fileId=87 ·.
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51
Annexes
RAPPORT DE VALIDATION DU CS-2100
Site de Martigny
Version du 07.04.2016
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Rédigé par : Céline Gianinetti Date : 2015-12-21 Approuvé par : Dr. Lovey Date :
VALIDATION VERIFICATION
Objectifs
L’objectif de ce rapport est de vérifier l’appareil d’hémostase CS-2100 de la maison Siemens.
Cet automate remplacera les CA-1500 des sites de Sierre, Martigny, Monthey. Le CS-2100
sera également installé sur les sites de Montreux et Vevey et sera utilisé comme appareil de
back-up sur le site de Sion.
Domaine d’application et responsabilités
Domaine d’application et choix de la méthode
Les paramètres concernés sont : TP, aPTT, fibrinogène et D-Dimères. Si d’autres paramètres
sont installés par la suite, ils feront l’objet de validations individuelles.
La vérification/validation du CS-2100 est effectuée comparativement à l’automate CA-1500
pour les sites de Sierre, Martigny, Monthey, Montreux et Vevey, à l’automate CS-5100 pour
le site de Sion. Les contrôles internes et externes employés pour l’évaluation des
performances analytiques ainsi que les critères de réussites sont spécifiés dans la procédure
d’évaluation.
Responsabilité
Céline Gianinetti est responsable de l’évaluation en collaboration avec Etienne Sarrasin. Elle
assure également le suivi du présent rapport d’entente avec le FAMH responsable
d’hématologie, Dr Pierre-Yves Lovey.
Installation et formation
L’automate a été installé le 19.11.2015 par le technicien de la maison Siemens, Danilo
Mazzarela. Une formation a été donnée par Caroline Cassayre le 20.11.2015 pour Céline
Gianinetti et Etienne Sarrasin.
Procédure et critères d’acceptabilité
Critères de précision
La précision intra-série (répétabilité), déterminée sur au moins 10 mesures consécutives du
même échantillon, et la précision inter-série (reproductibilité), déterminée sur les résultats
d’un CQI mesuré une fois par jour sont évaluées par :
A : Tolérance QUALAB définie par le CSCQ (3s) = moyenne des 10 valeurs mesurées x
tolérance CQI QUALAB (%).
B : Tolérance calculée (selon règle 3s) = écart-type mesuré x 3
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53
Les résultats sont définis acceptables si :
B < A
L’incertitude de mesure pour chaque paramètre sera établie par le passage d’au moins 30
contrôles et sur la base du coefficient de variation en %.
Critères d’exactitude
L’exactitude de la méthode sera déterminée par la comparaison avec les résultats des 2
prochains CQE du CSCQ pour le TP, aPTT, fibrinogène et D-Dimères.
Le résultat est considéré comme conforme si la différence avec la valeur cible, exprimée en %
est inférieure à la tolérance de la QUALAB sur les CQE.
Critères de comparaison
La procédure prévue est la suivante :
TP : passage de 30 échantillons compris entre 0 et 120% :
10 échantillons dont les valeurs sont >70%
10 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 20 et 70%
10 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 0 et 20%.
aPTT : passage de 30 échantillons compris entre 20 et 120 secondes :
15 échantillons dont les valeurs sont <36 sec
10 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 36 et 70 sec
5 échantillons dont les valeurs sont >70 sec.
Fibrinogène : passage de 20 échantillons compris 0,2 et 7,0 g/L :
5 échantillons dont les valeurs sont <1,0 g/L
5 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 1,0 et 1,8 g/L
5 échantillons dont les valeurs sont comprises entre 1,8 et 4,0 g/L
5 échantillons dont les valeurs sont >4,0 g/L.
D-Dimères : passage de 20 échantillons entre 50 et 10'000 µg/L :
5 échantillons dont les valeurs sont <400 µg/L
10 échantillons dont les valeurs comprises entre 400 et 600 µg/L
5 échantillons dont les valeurs sont >600 µg/L.
La comparaison des valeurs des différents paramètres est validée si la pente déterminée selon
le Passing-Bablok a une valeur d’environ 1 (comprise entre 0,9 et 1,1).
Le coefficient de corrélation doit être > 0,9.
Incertitudes de mesures
L’incertitude de mesure pour chaque paramètre sera établie par le passage d’au moins 30
contrôles et sur la base du coefficient de variation en % et du SD mesuré.
Performances de la méthode
La validation s’est déroulée du 23.11.2015 au 18.12.2015.
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54
Précision
La précision intra-série a été déterminée à partir de l’échantillon : Citrol 1, lot 528157, exp : 2016-10-13 pour TP, INR, aPTT et fibrinogène. Innovance DDE C1, lot 560792, exp : 2017-08-17 pour D-Dimères.
Analytes Unités Tolérance QUALAB
en %
Moyenne A : moyenne des valeurs mesurées x tolérance QUALAB
SD mesuré B : SD mesuré x 3
TP % 15 105 15.75 1.09 3.27
INR 15 0.98 0.147 0.00 0.00
aPTT sec 25 31 7.75 0.06 0.18
Fibrinogène g/L 15 2.59 0.389 0.04 0.12
D-Dimères µg/L 21 326 68.46 19.03 57.09
La précision inter-série a été déterminée à partir d’un CQI pour chaque paramètre. Citrol 1, lot 528157, exp : 2016-10-13 pour TP, INR, aPTT et fibrinogène. Innovance DDE C1, lot 560793, exp : 2017-09-07 pour D-Dimères.
Analytes Unités Cible fabricant
Tolérance fabricant
Tolérance QUALAB
en %
Moyenne A : moyenne des valeurs mesurées x tolérance QUALAB
SD mesuré
B : SD mesuré
x 3
TP % 105 4.2 15 103.8 15.57 2.31 6.93
INR 0.98 0.04 15 1.00 0.15 0.01 0.03
aPTT sec 32.9 1.3 25 32.9 8.255 1.36 4.08
Fibrinogène g/L 2.61 0.1 15 2.52 0.378 0.08 0.24
D-Dimères µg/L 330 20 21 334 70.14 18.09 54.27
Exactitude
L’exactitude a été déterminée par évaluation du biais systématique de nos résultats obtenus
par rapport aux valeurs cibles définies dans les tests d’aptitude suivants :
Analytes Organisme Enquête/ date
Unités Résultat Cible Biais % Tolérance % (Q) QUALAB (C) CSCQ
TP CSCQ 2016-03 % 27 15
INR 2.3 15
aPTT CSCQ 2016-03 sec 91 25
Fibrinogène CSCQ 2016-03 g/L 2.7 15
D-Dimères CSCQ 2016-03 µg/L 1567 21
TP CSCQ % 15
INR 15
aPTT CSCQ sec 25
Fibrinogène CSCQ g/L 15
D-Dimères CSCQ µg/L 21
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55
Comparaison
La comparaison des résultats pour TP (% et INR), aPTT (sec), fibrinogène (g/L) et D-
Dimères (µg/L) nous montre les pentes de régression et coefficients de corrélation suivants :
Paramètres Unités Pente de la droite de
régression Coefficient de corrélation
TP % 1.000 0.999
INR 1.000 0.997
aPTT sec 1.000 0.994
Fibrinogène g/L 1.084 0.996
D-Dimères µg/L 0.963 0.988
Incertitudes de mesures
Les résultats des contrôles, au moins 30 passages, ont servi à établir les incertitudes de
mesure pour chaque paramètre. Citrol 1, lot 528157, exp : 2016-10-13 pour TP, INR, aPTT et fibrinogène. Innovance DDE C1, lot 560793, exp : 2017-09-07 pour D-Dimères
Analytes Unités Moyenne CV% SD mesuré
2SD n
TP % 103.8 2.22 2.31 4.61 30
INR 1.00 1.00 0.01 0.02 30
aPTT sec 32.9 4.13 1.36 2.72 30
Fibrinogène g/L 2.52 3.17 0.08 0.16 30
D-Dimères µg/L 334 5.42 18.09 36.18 30
Commentaires
Précision
La précision intra-série sur un même échantillon nous montre des résultats corrects.
La précision inter-série déterminée à partir des contrôles de qualité interne nous montre
également des résultats corrects.
L’exactitude déterminée sur les CQE du xxx nous montre également des résultats excellents,
corrects, (à sélectionner) puisque les différences en % sont inférieures, limite (à sélectionner)
à la tolérance QUALAB.
Comparaison
Le CS-2100 donne des résultats pour TP, aPTT, fibrinogène et D-Dimères en correcte
corrélation (coefficient ≥ 0.9) à ceux du CA-1500 (TP. aPTT, FG) et MiniVidas (DDE).
Les différentes pentes de la droite de régression sont comprises entre 1.00 et 1.084.
Cependant, sur 10 échantillons dont les résultats se trouvent proche du cut-off de 500µ g/L, 5
résultats obtenus avec le CS-2100 sont inférieurs à 500 alors qu’ils sont supérieurs à 500 avec
le MiniVidas. La consultation de leur dossier clinique n’a révélé aucune thrombose alors
qu’aucun examen radiologique n’a été réalisé pour l’exclure et que les médecins ont reçu le
résultat du MiniVidas. Les diagnostics étaient : probable fracture de côte, épigastralgie,
hypertension dans un contexte anxieux, douleurs abdominales.
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Conclusion
Les tests ont été validés le 05.01.2016 par le Dr Pierre-Yves Lovey, responsable FAMH
d’hématologie. L’automate a été mis en production le 06.01.2016 pour le TP, aPTT et
fibrinogène et le 01.03.2016 pour les D-Dimères
Références et documents annexes
Documents associés
Résultats des tests pour la corrélation entre le CS-2100 et le CA-1500
Résultats des passages des contrôles.
Ces résultats sont annexés au présent rapport sur Intraqual Dynamic.
Littérature
1) QUALAB : Directive pour le contrôle de qualité interne
2) QUALAB : Contrôle de qualité externe obligatoire
3) Office fédéral de métrologie, « Validation de méthodes d’essais », Document n° 706.f,
Edition du 14 août 1996.
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