7
Direct evidence for the Homo^Pan clade Rainer Wimmer 1y , Stefan Kirsch 2y , Gudrun A. Rappold 2 & Werner Schempp 1 * 1 Institute of Human Genetics and Anthropology, University of Freiburg, Breisacher Str. 33, 79106 Freiburg, Germany; Tel: +49 761 270 7062; Fax: +49 761 270 7041; E-mail: [email protected] 2 Institute of Human Genetics, University of Heidelberg, INF 328, 69120 Heidelberg, Germany *Correspondence y These authors have contributed equally to this work Received 13 July 2001; received in revised form and accepted for publication by M. Schmid 27 September 2001 Key words: comparative mapping, evolutionary breakpoints, in-situ hybridization, phylogeny, primates, Y chromosome Abstract For a long time, the evolutionary relationship between human and African apes, the `trichotomy problem', has been debated with strong differences in opinion and interpretation. Statistical analyses of different molecular DNA data sets have been carried out and have primarily supported a Homo^Pan clade. An alternative way to address this question is by the comparison of evolutionarily relevant chromosomal breakpoints. Here, we made use of a P1-derived arti¢cial chromosome (PAC)/bacterial arti¢cial chromo- some (BAC) contig spanning approximately 2.8 Mb on the long arm of the human Y chromosome, to comparatively map individual PAC clones to chromosomes from great apes, gibbons, and two species of Old World monkeys by £uorescence in-situ hybridization. During our search for evolutionary breakpoints on the Y chromosome, it transpired that a transposition of an approximately 100-kb DNA fragment from chromosome 1 onto the Y chromosome must have occurred in a common ancestor of human, chimpanzee and bonobo. Only the Y chromosomes of these three species contain the chromosome-1-derived fragment; it could not be detected on the Y chromosomes of gorillas or the other primates examined. Thus, this shared derived (synapomorphic) trait provides clear evidence for a Homo^Pan clade independent of DNA sequence analysis. Introduction In his article `Evidence as to Man's Place in Nature', Thomas H. Huxley concluded that `it is quite certain that the Ape which most nearly approaches man, in the totality of his organ- ization, is either the chimpanzee or the gorilla' (Huxley 1863). Ever since, the evolutionary relationship between humans and African great apes, the `trichotomy problem', has received con- siderable attention. Great expectations were raised by molecular methods, when these were ¢rst introduced, regarding their presumed power to re- solve the human^chimpanzee^gorilla trichotomy (Sarich & Wilson 1967, Ferris et al. 1981, Sibley & Alquist 1984, 1987, Goldman et al. 1987, Djian & Green 1989, Caccone & Powell 1989, Sibley et al. 1990, Kawamura et al. 1991, Horai et al. Chromosome Research 10: 55^61, 2002. 55 # 2002 Kluwer Academic Publishers. Printed in the Netherlands

Direct evidence for the Homo-Pan clade

Embed Size (px)

Citation preview

������ ������� �� ��� �������� � ���

������ ������� ��� �� �������� ������ �� �������� � ������ ����������������� � ���� ������� ��� ������������� ���������� � ��������� ���������� ���� ��� !"#$ ��������� ������% &��' ()! $" * # #$*% ��+' ()! $" * # #)"% ,-����' �������./�0�����-�������������������� � ���� �������� ���������� � ���������� �1� �*2� $!"*# ���������� ������34��������������&���� ������� ���� ����������� �5����� �� ���� .��0

�������� � ��� �!!" �������� �� ������� ��� ��� �������� �� ��#�������� # $� ������ �% ������#�� �!!

6�� .����' ����������� ������& ����������� #���'������ ��-���� � #����(����� �� ��&�� ��������) ����������

��������

*�� � ���& ���� ��� ����������� ������������ #��+��� ����� ��� � ����� ���� ��� ,��������� ���#���-��� #��� ��#���� +��� �����& �� ������� �� ������� ��� ��������������� ����������� ���� ��� � �� �������������� ./� ���� ���� ���� #��� ������� ��� ��� ���� �������� ��������� � ���07�� ������ ������������� +� �� ������� ���� 1������� �� # ��� ���������� � ������������� �������� �����������#���'������� 2��� +� ���� ��� � � 34������� ����5���� ���������� 63�789#�������� ����5���� ������4���� 6:�78 �����& �������& �����;������ ��<$# �� ��� ���& ��� � ��� ����� ) ���������� �������������� ��� ���������� 3�7 ������ �� ����������� ��� &���� ���� &�##��� ��� �+� �������� =�� ����� ���'� � # >���������� ��-���� � #����(������ .����& ��� ������ �� ����������� #���'������ �� ��� ) ���������� �� ���������� ���� � ������������� � �� �����;������ !!4'#./� ��&���� ��� ���������� ���� ��� ) ���������� ���� ���� �������� �� � ������ ��������� ����� �������(�� ��� #���#�� =�� ��� ) ����������� � ����� ����� ������� ������� �������������44������� ��&����" �� ����� ��� #� �������� �� ��� ) ����������� � &������� �� ��� ������������� �;������� ?��� ���� ������ ������� 6� �����������8 ����� �������� ����� �������� �� ����07�� ����� ����������� � ./� ��1����� ���� ����

����������

@� ��� ������� ,,������� �� �� 8��9� 7���� ��1�����- ?����� 2� 2�;�� ��������� ���� ,���� 1���� ������� ���� ��� ��� +���� ���� ����� ���������� ��� �� ��� ������� � ��� ��&��4�(����� �� ������ ��� �������(�� �� ��� &������-62�;�� <A�8� B��� ����� ��� ����������� ������������ #��+��� ������ ��� � ����� &����

���� ��� ,��������� ���#���- ��� �������� ���4������#�� ���������� ����� �;���������� +��� ������# ��������� ������� +��� ����� +��� 5������������� ��&�����& ����� �������� ��+�� �� ��4����� ��� �����0�������(��0&������ ��������� 6������ � ������ CA% *����� �� ��� C< ��#�� � ��1���� C<D C<% ������� �� ��� C<% .E���� ����� C<C 7������ � 3�+��� C<C ��#�� �� ��� CC! ��+����� �� ��� CC 2���� �� ���

4��������� :������� ��F GG0A �!!�� GG� �!!� 6��.�� �������� 7���������� 7������ �� ��� 1����������

GA :� ;����� �� ���

CC� ��&��� CCD ������� �� ��� CC<8�2�+���� ����������� ���� ��� � ./� ��1��������� ���� #��� ������������� ��� ������� ������������ �1������� ��������� ��������& �� ���&������ ����� ���� (�� ��� ����� ������� ��������������� #��+��� ��� 7�� ��� ��������� #��� ���������� #������ � ����� ����� ������4��� ��������� � ������ 6CC%8 ������� ������������������� ./� ��1����� �������� �� � ��������4��� ���� ��� ��� � D ����������� ���� ���� ��������� � �����0�������(�� ����� �+� ��������(��0&������ ����� ��� ��� � �����0&������ ������ 2�� ���� ��� ������� #����;������ # ����� �� ��� 6�!!!8 ��� # 7��� �H� 6�!!8� :��� ������� �������� ���� ����� �������& ������� �� ��� ���07�� ������ .��������� ������� ��� ��������&���� ������� �� ��������(��0&������ ������������ 6�����+� CC�8��##� �� ��� 6�!!!8 ���+�� ���� �� �;���������������&���� ���� ��� � �� �4������ ���������� ������ ��#��� �� ��&������ � �������� ���� ������� �������#�� +��� ���� ��������� �� ��&�� �

2��� +� ������ ���������� �������� �� ������<7�� ����� ����& � �� ����� �;������������������� �� ���� � 34������� ����5���� ������4���� 63�789#�������� ����5���� ����������6:�78 �����& �������& �����;������ ��<$#�� ��� ���& ��� � ��� ����� ) ������������ ������������ ��� 3�7 ������ �� �������������������� ��� &���� ���� &�##��� ���

�+� ������� � =�� ����� ���'� � # >������������-���� � #����(������ �� ���+ ���� ��� �����4�������� � � ����� ./� ��&���� � �����;�4����� !! '# ��� ���������� ���� ��� )���������� ���� ���� �������� �� � �������������� � ����� �������(�� ��� #���#��

������� � �� �������

4��������� �����������

7��������� ������� +��� �������� ����� ������&&�������4���������� ���������� #����� ����� ��� ��'�� ��� ����� 6��� �������8�������(�� 67�� ����������� 8 � &� �������(���� #���#� 67�� ��������8 +������ ��+���� &������6 ������ ������� �������8 ������� ��+���� &������6 ������ ������� �������8 �������� ����&����67���� �������� ������8 :������ ����&����67���� �������� ��������8 +����4������&�##�� 6�������� ���8 ��&4������ ����1��68����� ����������8 ��� ���#����� ���'� 61������ ��������8� �������� ������� +��� ������� �� ��� ���������� ������������� ���� � �������� ������������ +��� ������� +��� ������������&� 6G! �&9��8 ��� ����'�� �� � +���4������4��& ��� ������4 ��� ����������� � ���������������� =�� ������ ��� #������ ���� +��� ���4

������ "� ������� ��&���(����� � � �������� ��#�������� � ��� ���& ��� ��������������� ��&��� � ��� ����� ) ���������� >��'��# ��� ���������� ��� ��� �I*� ��&���� ��� =�&���(����� � ��� )1 ��������������� ��&��� ��� ������&� �� 3�79:�7 ������� ���B����&�� ���+ � � AG!4'# ��#�������� ��� ������� ����������& � 3�7 ��� :�7 ������ ������& �� ���� ��&���� 3��5;�� �3 D ��� G�������� 3�7 ������ ��� ���5; �3 :�7 ������� 7����� ���'�� �� &���� +��� ���� �� ��� *@�2 �;��������� �� ����� �������������������� �������� 3�7 �34%A*!� 6������8 ������5�� � �� ����� � ��&������ ���������F � �����& ��&��� �� )1�� � ��&���������� �� 1D� ��� � +��' ��&��� �� ������ )1���� 3�7 �3D4G��@!% 6��&��8 �������� �����& ��&���� �� )1�� ��� J������:�7 �34������ 6�� �8 ������5�� �������� � ��&������ ������������� ����& ������ �����& ��&���� �� ��� )4��������������� ��&�����������& )1�� ���������& ��� �������� � ���������� ��1������� /��� ���� ���� ����� +�� � #����(�� +������ ����������� �����+����� ��&���� +���� ���� #��� �#������� �� ������� ��� �2=J &��� ���������& ������ HH=)/7!�,$-�D*!G ��� ��� �����������������&��� �� J����9)���� +�� ����� ��� ��������� ������������ � ��� &������ ����������� � ��� E������� ��&����� ��1������ ������� ��� :�7 ��� 3�7 ����� ���4 ��&����� +��� ���� �� �������� �������� ��� ������������& ������ �� ��� ��1������ :�7 ������ ��� ��� 2���� ������ 3��E���� H��&�4����� ��1����� ���������� #��+��� ��� )4������� :�7 ������ 6��������� /��� �7!�C��7!�G!� ��� �7!!%�D%8 ��� ������ ��� ��� ������&��� ��&���� 6��������� /��� �* �%<<< ��� J��� �H�GD<%G ����HDDGA%G ��� 1D�8 +��� ���� �� ��������� ��� ��&���(����� � ��� E������� ��&���� �� ��� ��1����� ������ @� ��� ������� � ��; ���������� ��������� � )4����������� �������&����� 6���K ��� �� ��� CCC" H��� � 3�&� CCC8 �;������ ��� A�C4'# ��&������ ���� � �� J9)4������& #���' ��� �����#������� �� � ���&������ ) ����������� ��#��1����� #���'�&� � ����J9)4������& #���' ��� �� � ����������� ��� ��� ��� ���& � ��� A�C4'# ��&���� �� ����� )� +��� ��� ����� A�C4'# ��&������������& �� )1 6��1����� ���������� ��� <<L #��+��� ��� )1 ��� J� ��� ��� C%L #��+��� ��� )1 ��� )� ��� 8� ?�� ��1������ #��� E������� ��&���� �� )1 �� +��� �� ����������& ������ ������� �������� � F 2��?@@ $B� ���

$B�� ����� B�MH H" ��������� ���4���������� ��1������� �� � �� ������ �� $B� ��� $B����� ���� � ��&&� 6CCA8�

=����� �������� �� ��� 2���03�� ����� G%

������� �� ������� ������� ��������� ������������+��� ���������� �� >���������� ��-���� � #���4�(����� ��� +��� ������ �� �<!�7 ����� ����

������������ ��4���� �������>����� ?���@

3���� �� *@�2 ��� ������ +��� ������� +��� �/��� ����+�� # ������ ��&������ �� ������#�� # ������ ��� 6CC�8� *@�2 ����& HH=)/7!�,$-�D*!G�� � ���'�� �� ��� ��������������� &��� �2=J6��� �� ��� CC%8 �� +��� �� ��� 3�7 ��� :�7������ ������� ��� ��� )4����������� �����&6H��� � 3�&� CCC" ������ �� ��� ����#������8���������� ����+�� ��� ������� �� ������#��6������� �� ��� CCG8� *�� ����������� ������4���� �������& +��� � ����� ����������44�����5� �������& ���#� 6��� 2�����#��&8 ��+����4������ &�##�� ��� ���#����� ���'� ��������� ��������� +��� ����� ����5�������+�� ������� 6����� �� ��� CC�8�

������������ ���������� ��� �������

3����������� +��� ��������� ����& � I���� �;��4���� ���>���������� ���������� �1������ +������&��4#������� 5����� �� �;�������� � ��� &������� #��� 67����� ?�������&��� :������#���M?8� .����& �;������� ��� �;�������� 5����� +�������&�� ����+��& �� ��;����� �4 ��� ���&� ��4������&� @��&�� � ��&� ��&��5������ ��� �����4����� +��� �#������ ����& � #���'4���4+����77. ������ 63����������� ����' ��* D!!"����' ?����� �I8 ��������� �� ��� �;�������7����� ������� ��� ��&���� ���&� ��1���������������� ��� ��� � �� ����� $�������� N�����CG! ���������

���� �� �� ���������

3� ��&��������� ��� ����� ) ���������� �� � ������ ���&�� ��� ��� ������ #��� ���+� �����#�� ������� +���� ���������� �� #� ���� ���� �������& ��&�� �� ��� ����������� ������ 6������ �� ��� �!!! ���� �� ��� �!!! ��#���& �? ���4����� �!!!8� 7���������� ������& � ����� ) ���������� &���� ��� &��� ��������� ����������� � ��&��� �������� # >���4������� ��-���� � #����(����� 6*@�28 ��� ���+����� ) ����������� �������&������ ��� ���5���

�� ��� ���4�����#����& ) ����������� �������������� � ��� ��������������� ��� ��;4��������4��& ��&��� �� ��&��� �������� 6��O��� �� ��� CC<CCC8� .����& ��� ������ �� ����������� #���'4������ +����� � ��5��� ��&���� �� ��� ���& ���� ��� ) ���������� +� ��� ����� �����������*@�2 ������& � ���������� ������ ��� � �����)4����������� 3�7 �����& �� ������������ ������ &���� ���� &�##��� ��� =�� ��������'� � 6������ �� ��� �� �����������8� ?��3�7 �����& ����� �����;������ ��< $# �� ���;�4��� )1�� ��������& ��� ������ �I*�4��&���6���&��� �� ��� CCC8� 2��� +� ������ ��� ���4�������� *@�2 ������� �� ��&��� �������� ����& ���#��� � ������ ���;���� �� �I*� 6*�&��� 8�@� ���������� �� �����;������ !!4'# ������ ��34������� ����5���� ���������� 63�78 �34%A*!� �������� �� � ����'��& �#��������� ��������� ��� �� �� ��5���& ��� �� ��&������ ������ ��� 7�� ��� ������� *@�2 +��� ���� 3�7����� �� ����� ��������� ������ �������� ����;������ ��&���� �� )1�� �� +��� �� � +��'�������4� #����(����� ��&��� ���� ������ �� )1���6*�&��� �8� ���������&� +� �������� �����&��&���� ���� �� ��� ��#��������� ��&��� � ��� ���&��� � ����� ���������� ��&&�����& ������1������ +����� �34%A*!� ��� ������� ��������5�� �� ���������� 1D�� H�'�+��� ���������(�� ��� #���#� ����� �34%A*!� ��&������� ���� �� ����� ���������� ) ����������� �������������� 6*�&��� �� #8� /� �34%A*!���&���� +��� �������#�� �� ��� ) ���������� � +������ ��+���� &������ 6*�&��� ��8 ��� ���������+���� &������ 6��� ���+�8 +���� ��� �����&��&���� �� ���������� �������� �� ��� �������+� ��#�������� @� ������ #� ��������� ���� ������� ����� ��&��� �� ����������� ���� �� ������4���� � ��� &������� 6��� *�&��� ��8� ?��� �� #� ����������� �� � +� ���� � ���������� ��1�������&��������� ����� �� ������������9�����5���������� ����������� �������&������� *@�2 ������� �� �34%A*!� ���� ���5��� �� ���������� +��� �#������ �� ��� �������� ����&����6*�&��� ��8 ��� ��� :������ ����&���� 6������+�8 �� +��� �� �� ��� +����4������ &�##��6��� ���+�8 ��� ��&4������ ����1�� 6*�&��� ��8��� ��� ���#����� ���'� 6*�&��� � 8� =�� *@�2������� �#������ +��� 3�7 ����� �34%A*!� ���4#���� +��� ��� ������� � ��� �������& �;�������������& � ����� ����������44�����5� �������&

G< :� ;����� �� ���

���#� �� &�##�� ��� ���#����� ���'� ������������ ��� �������&��� ��&����� �� ����� 1D���� ���� �� &�##�� ���������� C ��� �����#����� ���'� ���������� G�

@� ������ #� ����� ���� ����� �� � #���' � J���9)1 ������& � �����;������ G!! '#�� ���&�� ������ �� �34%A*!�� ��������&� *@�2���� ��� +��� ������ ��� ���� J0) ������&���#���' ������� ��&���� �� ����� )1�� ���J����� 6*�&��� �8 ��� ���� ���������� ����J0) ��&��� ������� �� ������������� ����������� ��� &���� ���� ��� #��� ������� � =�� �����

���'� �� ?��� ��� ���5������ � ��� ���&����1����� � �34%A*!� �� ���������� �� &��4���� �����&� ��&&���� ���� ���� ���������� ��� �����4���� ��������� +���� ��� ) ����������� �34%A*!� ����&������ ���� #� ����������� �� � ������������� 6� �����������8 ����� �� ����� �����4��(�� ��� #���#�� @� ����� �� ���5�� ������������ +� ��� ����� *@�2 +��� � 3�7 ������������ ��� ����� ���������� 1D� ������������� ��� ������ ��� &���� �����@����� ��� ���� � #����(����� ������� �� ������#������ +��� ��� )4����������� 3�7 �����

������ *� *@�2 � ����� )4����������� 3�7 ����� �34%A*!� 6#�����0*@?7F &����8 �� ������� ��&��� ��������� ?�������4������� ������ HH=)/7!�,$-�D*!G �� ��� ��������������� &��� �AB 6��&�;�&����0?�@?7F ���8 ������ �� �� ���������������� �� E��&��& ��� � #����(����� � 5����� � ��� ���������� 7���� �34%A*!� ��&���� 6�� ��� �������� ���&� � ����2=J4��&���8 ��� ���� �� ��� ) ����������� ��� ���� �����&�� ��&���� �� ����������� � �������(�� ��� ��� #���#� ����/� �34%A*!� ��&���� +��� �������#�� �� ��� ) ����������� � +������ ��+���� &������ ��� �������� ����&���� ��� ��&4����������1�� ��� ��� ���#����� ���'� �� +���� ��� �����& ��&���� ������ �� ����� ����������� ���������� ���������� G ����1�������� �� ����� ���������� 1 �� ���#����� ���'� 6��� $������8� 7���������� ��� ���'�� # ����� #����

=����� �������� �� ��� 2���03�� ����� GC

�34%A*!� +��� �#������� ?�� ������ ��������� � ��� >��'��& ��1������ � ��� ����������4������&��� ��&���� +����� ��� )4�����&6*�&��� 8 ��������� ���� ��� ����� �� � ��������;������ !!4'# ��&���� ��� ������4���� �� ��� ) +�� �������� # � ������������������������ ��������� 6�� �� ��� �!!!8 �#���G0A ������� ���� �&��

*�� �������� ������� ���� ������������� �������� �������� �� � ������ �������� � �����

�������(�� ��� #���#� 6*�&��� �8 ��� ����� ����������� ����� ��� ���������& �������� �� ����07�� ������ ?�� ������� � ���� ���� ������ ���+��& �� ����������� � ��&����������� ���#���� +��� ��� ������� � ��� ./���1����� ���� ��� ��+ ������� ���������� �������� �� � ���07�� ������ ?���� ������� ���� �����&��� �������(� ��� ��+�� � )4������������������ �� ��������& ��� ����������� ������ � ���'����

������ �� .��&��� � ��� ����������� *@�2 ������& � 3�7 �34%A*!� 6 #�;��8 �� �4#����� ����&���� � ����������) ��� ��������� � =������� ������ ��������� /��� ���� ��� �������&��� ��&����� � ����� 1D� ��� ���� �� &�##�� ����������C1 ��� �� ���#����� ���'� ���������� G1 6��� $������8� ?�� �� ��&������ ���� �� ����5�� � ��� $����� 6CC�8� $ � ������� ���� #� ��� ��������

A! :� ;����� �� ���

����� �� �����

�� ����' ��� ��� ��������� ��� ��� (��,��������- �� �����&��� �� '���� ��������& #����������� ��� ���� ��� ���'� � :��&�� ����� ���;������� ��������� ���������� ������� �P��&����� ������ ���� �� �� ���� �� ���������� �� +����� .�#���� $�����4��������� �� �������� ����� ����������� ?��� +��' +�� ��������� # &����� ��� ��� .������� *�������&�&�����4���� � 6���� �D9%4" �� �<!9!4�8�

��������

�����+� 3 6CC�8 B�������� ��� ����������� �� ��� �����4������ 1����� !"�F AD0ADA�

7������ � 3�+��� �� 6C<C8 ./� �����&���� ����& �����4����� ,�������� #!F C�G0CD��

7��� *47 H� �42 6�!!8 ������� �����&����� #��+��������� ��� ����� ��������� ��� ��� � ������ ������������(� � ��� ������ �������� � ������ ��� �������(������ C �� ���� "$F DDD0DGA�

.E��� 3 ����� 2 6C<C8 M�������� �;������� � ��� ����������&��� ��� ��� ����������� � ��� ���������� 7��� 1��� ������� ��� $"F <DD%0<DG�

*����� �.������ �7 :��+��$ 6C<8 B���������� ���� ������ ��� ������ #���� �� ������&� ���� � �������������./�� 7��� 1��� ���� ��� ��� %$F �D��0�D�A�

��##� � 7������ $ ����� : 6�!!!8 �� �4������ ���������� ����&��� ������� �� ��&�������� 7��� 1��� ���� ��� ���&%F �!0���

��O��� : ��Q�(��� * �������� R �� ��� 6CC<8 ������ )�����������F �������4�����5� �������&������ � =�D:�8 ��� &�7E ������ �����&��� � 3�� ��� �:E�8�������� ����� &F ��A0���

��O��� : $ ���' . ������� ) �� ��� 6CCC8 ?������������ � �:E ���� ��� ��������� ��������������� ��&��� ������� ���+ ��������������� #������ �� � ���&������ � ��������������� �� 8�� ���� $F �!%0�!%<�

������� . ������ ���� 3 =-:���� �� 6C<%8 � ����������� ��&�� � ��� �������� �������� �� ��������� # �+�4����������� ������� ���������������� 7��� 1��� ������� ��� $#F ��!%0���

������� $ 3����� 7� 7(�������' � �� ��� 6CC<8 ?�+��� ��� ��&������ ������5������ � �������� #���� �� ./� ���4����� ������������ # ����� ���������8�� 7��������� ,���&F G<G0GC<�

2���� � ����� ) 2� ���'� � �� ��� 6CC�8 $��-� ����� ������������ �������� # ������������� ./� &������& � C8�� ,��� !'F ��0D��

2�;�� ?2 6<A�8 ,������� �� �� 8��9� 7���� �� 1������ /�+)��'F 3� �������� � 7��

����� � ����#��& � ���� �� � �� ��� 6CC�8 �������������� � &������ �������&������ �� &���� ���� ��� &�##��� # ���������� �������&� 7��� 1��� ���� ��� ��� $&F<A0<AG�

�� ) B������ BB ���+���( � /������� �. 6�!!!8 ��������� � ����������� ��������� ��� ����� ���� �� ��������& �����&������ ���������� ����� :�� ��F GC%0A!�

��#���& $� ? ���4����� 7 6�!!!8 /�+ ���� �� ��+ �����4� ��� ��� ����� ) ���������� ������� ��� ����������&����� ���� �"F �GA0�A��

��+����� � ?���#� 2 ������#� ) ������'� � ������ /R��� � 6CC8 B���������� ���� � ������&��#���� �������������& ��&��� �� &������ �� ��������� ���� �� =�� ��������'� �� 8�� ���� ,��� $F %D�0%G��

H��� :? 3�&� . 6CCC8 *��� ����������� ������ �� ��� �����J ����������� ������� ($"F CAD0CA%�

$����� �. 6CC�8 3������ ���&���F ���&&��& ��� &���� 1�����!"!F ���0��D�

��� B ����� : *�'��� $ �� ��� 6CC%8 3����������������������� �����������& � ����� �����#�; &��� ����� &��+�� ������ �� ���������� ����� ������� ��� ?����� � �������1����� ���� �"F GD0A��

���� ? H��&���� 7 7����� ? �� ��� 6CC�8 �����5� ������������ ���������� ��������� � ��� #���'����� ��&��� �� <1�D� :��'��� � ������ ����� # ������4����� >��������� �� ����� #����(������ ���� 4���� 4����� #F AC0%D�

��&��� � 6CCD8 H����� � ��� &������&���� �������� ��� ������#��� � �������� �� ��&�� � �� C 7��� ���������&#F <0<<�

������ $ 6CC%8 $�������� �� ��&�� � ��� ���������F�� ������� ��� �������� ����������� ./� ��1����� ��������� 8�� ���� ,��� �#F �D<0�AG�

���&��� 7� :������ 7� ������ � �� ��� 6CCC8 ?�� ����������&��� � ������� ��5���& ��� �I*� ���� �� ������� ��������� ���;���� )1 �������� ����� ��������#�� ��1������� C8�� ���� !"F A%!0A%%�

������ M ������ �7 6CA%8 @�������&���� ���� ����� ��������� ���������� ������� �'$F �!!0�!��

�����) ����� � ?�'����� / 6�!!!8 ./� �������� ��� ���������� ��������F ��� ��������� ���#��� ���������� 8��7��������� ,��� �#F �GC0�%G�

������� � :��'��� � �������� � �� ��� 6CCG8 7����������������& � E::84 ��� &�7E4������� ������� �� ������ �������� ����� 4���� :�� !F ��%0��D�

������ = 3�������� � =� ��� 3� �� ��� 6�!!!8 ?�� &��������&�� � ����������� ��� ������� ������� �� �;����B��������F � ) ���������� ������������ ������� (&�FGG0GC�

���� 3 ���& * R�������� 3� �� ��� 6�!!!8 3��������� &������������������� ��� ��1����� ��������� �� ��� ) ����������&����� 7��� 1�� ���� ��� ��� &%F %�GD0%�GC�

��#�� 7� ��1���� �B 6C<D8 ?�� �� ��&�� � ��� ���������������� �� ��������� # ./�0./� � #����(������ 8��,��� (�F �0G�

��#�� 7� ��1���� �B 6C<%8 ./� � #����(����� �������� � �������� �� ��&�� ������� ��� �� �;������ ���� ���� C8�� ,��� ("F CC0��

��#�� 7� 7������' �� ��1���� �B 6CC!8 ./� � #����(4����� �������� � �������� �� ��&�� F ������ ��� � ��� �����C 8�� ,��� !�F �!�0��A�

���� �*� ��&&� �. 6CCA8 ?�&&��� ��� ����� ./� �����4����� ������ �� ��� ����� &������ 7��� 1�� ���� ������ &!F DD�0DD<�

=����� �������� �� ��� 2���03�� ����� A