ANTICORPII

MONOCLONALI

SISTEMUL IMUNITAR

Immunis = scutit Sistemul imunitar = totalitatea proceselor

biologice, a organelor, a celulelor, a produsilor celulari care asigura protectia impotriva infectiilor

Imunitatea Nespecifica Specifica

ANATOMIA SISTEMULUI IMUNITAR

Amigdale si adenoide

Ganglioni limfaticiVase limfatice

Timus

Ganglioni limfatici

Splina

Placi PeyerApendice

Maduva hematogena

CELULELE SISTEMULUI IMUNITAR

Celula stem multipotenta

Celula stem hematopoetica

Plachete

Macrofag

EritrocitePMN eozinofil

PMN neutrofil

Megacariocit

Mastocit

PMN bazofil

Limfocit T

Celula NK

Celula dendritica

Limfocit B

Celula progenitoare limfoida

Celula progenitoare

mieloida

Monocit

Maduva

Os

ACTIVAREA LB SI PRODUCEREA DE ANTICORPI

Celula prezentatoare de Ag

Antigen

Anticorp circulant

Procesarea Ag

HLA clasa II

Antigen

Th activat

HLA clasa II si Ag procesat sunt expuse

Anticorpi

Plasmocit

Celula prezentatoare de Ag

Rec. de Ag specific LB

LBLimfokine

ANTICORPII

Lanturi grele

Paratop

Regiune constanta

Lanturi usoare

ANTICORPII

IgA, IgD, IgE, IgG

IgA

IgM

PRODUCEREA ANTICORPILOR MONOCLONALI

Plasmocite producatoare de Ac

Antigen

Fuzionarea celulelor HIBRIDOM Mielom

Anticorpii monoclonali sunt purificati

Clonele dorite se cultiva sau se congeleaza

Testarea clonelor

Hibridoamele se separa si se cultiva

Cultivarea hibridoamelor

Mentinerea hibridoamelor in soareci

PRODUCEREA ANTICORPILOR MONOCLONALI

1. Antigenul (celule, componente ale membranei celulare, microorganisme, etc.) se injecteaza soarecelui

2. Cand titrul de anticorpi serici a crescut corespunzator, se realizeaza splenectomia si se colecteaza LB

3. Se obtine hibridomul prin fuzionarea LB murine cu celule provenite din mielom

4. Se cultiva hibridoamele si se colecteaza anticorpii

PROBLEME

HAMA = human anti-mouse antibodies Dupa 10-14 zile Eruptie cutanata (urticarie) Bronhospasm Hipotensiune Soc anafilactic

TEHNICI DE INGINERIE GENETICA

Soareci transgenici (gene pentru Ig umane) Mab himerici =

Regiuni variabile murine Regiuni constante umane

Mab umanizati = Regiuni hipervariabile murine 95% umani

Bacteriofagi/plasmide

APLICATIILE ANTICORPILOR MONOCLONALI

Diagnostic

Terapie

Cercetare

APLICATIILE ANTICORPILOR MONOCLONALI

Diagnostic

Imunohistochimie Imunofluorescenta Radioimunodetectie (RIA)

Medicamente Hormoni Proteine Toxine Droguri

Imunodetectie enzimatica (ELISA)

IMUNOHISTOCHIMIE DIRECTA

IMUNOHISTOCHIMIE INDIRECTA

IMUNOHISTOCHIMIE

IMUNOHISTOCHIMIE

IMUNOFLUORESCENTA

IMUNOFLUORESCENTA

APLICATIILE ANTICORPILOR MONOCLONALI

Terapie

Infliximab –TNFα Abciximab – GpIIb/IIIa Omalizumab – IgE Rituximab – CD20 Alemtuzumab – CD52 Trastuzumab – HER2 Bevacizumab – VEGF

IMUNOTERAPIE

Anticorp

Celula tumorala mamara

Factor de crestere

Herceptin blocheaza receptorul

Cresterea se opreste

Radioizotop

Antigen

Distrugerea celulei tumorale

Herceptin

APLICATIILE ANTICORPILOR MONOCLONALI

Cercetare

Imunohistochimie Identificarea unor molecule Purificarea unor structuri