REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO

COMPONENTESANTIGENO

ANTICUERPO C. P

L.TCITOQUINAS

L-Memoria

SENSIBILIZACION

HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO

FASES DE LA REACCION1.- F. Oculta… - unión Ag-ac estable pero imperceptible

- forman complejos inmunes circulantes

- neutralización del antígeno

- opsonización .

2.- F. Visible…. - exteriorizacion de la reaccion

- demostración del anticuerpo producido

mediante pruebas serológicas Ag-ac

- reacciones de hipersensibilidad inmediata

o reacciones de hipersensibilidad tardía

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO

DETERMINACION DE LA REACCION

Ag-ac, EN LABORATORIO

Pruebas serológicas ( Inmunoserologia )

1.- Directas:

Demostración del ac, mediante un Ag conocido

Demostración del Ag, mediante un ac conocido

2.- Indirectas:

Demostración del choque Ag-ac, mediante un

anti-anticuerpo específico

Pruebas Serológicas Ag-ac

FACTORES MODULADORES

• FENOMENO DE ZONA (PROZONA): Una reacción Ag-ac , es perceptible si los dos componentes están en

proporción similar. - exceso de cualquiera de los dos componentes puede inhibir la

reaccion• CONCENTRACION SALINA Y ph : cantidad minima de electrolitos para exteriorizar la reaccion Ag-Ac

- soluc. Fisiológica(9ml de NaCl) optimo - ph ( 6 - 8.5 ). Optimo < o > concentracion inhibrn reacciones

inmunologicas• TEMPERATURA Y AGITACIÓN : - temperatura óptima ( 37- 40°C ) > mayor altera anticuerpos - permite una mayor expresión de determinantes antigénicos

TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS

PROPIEDADES• Revelan generalmente determinados sistemas de reacción

Antígeno-anticuerpo.• El anticuerpo induce cambios en el Antígeno: • ( aglutinación , precipitación, etc.)• Técnicas simples detectan concentraciones altas de Ag o ac.• Técnicas complejas detectan concentraciones muy bajas de

Ag o ac.

Clasificación• Técnicas simples:

- de precipitación, Aglutinación,

- Fijación de Complemento, etc.• Técnicas con conjugados:

- Inmunofluorescencia ( I-F )

- Radioinmunoensayo ( R.I.A )

- Inmunoenzimoensayo (ELISA)

TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS

Técnicas simplesVentajas

- Fácil implementación, técnicas sencillas

- No requieren mayor equipamiento.

- Bajo costo de operación- Resultados reproducibles- Fácilmente cuantificables- Reactivos de fácil consecución y de caducidad manejable.

Técnicas simples Desventajas:- Detectan concentraciones

altas de Ag o Ac.- Posibilidad de fenómeno

de Zona- Menos sensibles y menos

específicas.- Cada técnica detecta un

solo tipo de anticuerpo ( precipitinas, aglutininas)

REACCIONES DE PRECIPITACION

COMPONENTES

• Antígeno: Reactivo comercial soluble.

• Anticuerpo: Precipitinas (IgG) en el suero del pcte.

• Reacción (+): formación de precipitados ( m.líquidos)

formación de halos de difusión (m.sólidos)

REACCIONES DE PRECIPITACION

TIPOS1. En medio líquido:

2. En medios sólidos: en soporte de gel difunden los componentes ( halos de difusión )

Difusión simple Difusión doble

Precipitado

granular fino

Halos de turbidez

+

-Ej. Reacc. De Oudin, Eleck y Outcherloni (difteria)

Ej. Reacc . de V.D.R.L

REACCIONES DE AGLUTINACIONCOMPONENTES

• Antígeno: Reactivo comercial adsorvido en soportes

1. Para glucósidos…. Como soporte utilizan Eritrocitos. Ej. Antígeno de Klebsiellas,

Salmonellas, Tuberculina, etc.

2. Para Lípidos….. Como soporte…..cristales de colesterol y lecitina.

Ej. Antígeno cardiolipínico, Reacc. De V.D.R.L.

3. Para Proteínas… Como soporte…..partículas de látex o eritrocitos Ej. Reacciones de PCR, FR, Tests de embarazo, otros.

( En ciertos casos se puede adsorver el ANTICUERPO en lugar del ANTIGENO ).

Anticuerpo: Generalmente presente en el suero del pcte

REACCIONES DE AGLUTINACION

Tipos de reacción

1.- Aglutinación Directa: El antígeno (aglutinogeno) forma parte de una célula y es aglutinado por un anticuerpo comercial.(aglutinina)

ej. Aglutinación de antígenos de eritrocitos ( sist. ABO, Rh ).

A B A-B O

A B A B

RH +

RH -

A A B B

O

RH + RH -

Reacciones de Aglutinación

2.- Aglutinación indirecta:- Los Antígenos o los anticuerpos comerciales están fijados en

SOPORTES:

a) partículas de LATEX, Ej. Reacciones de FR, PCR, GRAVINDEX, etc

b) en ERITROCITOS ( R. de Hemaglutinación ).

Ej. Reacciones de DNA,Toxoplasma, etc.

- Los anticuerpos o antígenos que se buscan, están en el suero del

paciente.

LATEX

IgM Anti-PCR

Suero pcte….PCR

LATEX

IgG

Suero Pcte…Anti IgG ( F.R)

P.C.R F.R

Reacciones de aglutinación

Ventajas1. Mas sensible y específica que la anterior.

2. Sujeta con menos frecuencia a fenómeno de zona.

3. Reactivos más variados

4. Evaluación cualitativa y cuantitativa a simple vista

Desventajas1. Falsas negativas en exceso de anticuerpo

2. Problemas técnicos dependientes de los soportes

Otras Reacciones de Aglutinación

1. Reacciones de Hemaglutinación: - Utilizan Eritrocitos como soportes del antígeno o del anticuerpo

- La reacción positiva se expresa mediante aglutinación visible de los eritrocitos

2. Reacciones de Hemólisis: - Utilizan al Eritrocito como soporte del antígeno o anticuerpo.

- La reacción positiva induce + permeabilidad de la membrana del eritrocito

con liberación de hemoglobina al medio externo.

Otras Reacciones de Aglutinación

3. Reacciones de Inhibición de la Hemólisis:

Fundamento: Utilizan al eritrocito para demostrar en pctes, infección por bacterias productoras de

HEMOLISINAS ( estreptolisinas O ).

La reacción positiva ( HEMOLISIS ) detecta ausencia

de anti-estreptolisinas O …(ASTO NEGATIVO).

La reacción negativa ( NO HEMOLISIS ) detecta presencia de antiestreptolisinas…(ASTO POSITIVO).

Reacción de inhibición de la hemólisis“ A.S.T.O ”

Suero A.S.T.O (+) Suero A.S.T.O (-)

Eritrocitos O

Estreptolisina

Suero con

antiestreptolisina

Eritrocitos O

Estreptolisina O

Suero sin

Antiestreptolisina O

NO HEMOLISIS HEMOLISIS

Paciente enfermo Suero control

REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO

COMPONENTES1.- Anticuerpo (IgG o IgM). (FIJADOR DE COMPLEMENTO)

2.- Antígeno: comercial

3.- U. de Complemento: (Suero fresco de un animal)cobayo

4.- Sistema Hemolítico: ( eritrocitos de conejo,sensibilizados)

complejo ERITROCITO-anticuerpo

F de C +++ Lisis (----- ) F de C ------ Lisis (++++)

REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO

Propiedades1.-Alta sensibilidad y especificidad ( + de 80%)

2.-Detecta pequeñas concent. de anticuerpo ( 1 mcgr. ). IgG-IgM

3.- Utiliza Antígenos solubles o particulados.

4.- Utilizado para titular anticuerpos o control de calidad de

la técnicas anteriores.

5.- Técnica laboriosa., No utilizada de rutina

ej. Reacc. De Waserman…dx de sífilis

Técnica para dosificar Complemento total o sus unidades

TECNICAS CON CONJUGADOS

.- VENTAJAS:

- Altamente específicas y sensibles ( 90-96% ).- Detectan concentraciones muy bajas de Ag o ac.- Pueden establecer cualquier tipo de Igs. ( IgD-IgE ).- Reacciones tanto cualitativas como cuantitativas.

.- DESVENTAJAS:

- Requieren implementación costosa.- Reactivos de corta caducidad, costosos y en kits de multiples tests.- Algunas pruebas son de manejo cuidadoso ( recíduos en el RIA ).

TECNICAS COMPLEJAS CONANTICUERPOS o ANTIGENOS MARCADOS

(“Conjugados”)

TIPOS DE REACCIONES

• 1.- Inmunofluorescencia ( I.F).. marcador mas comun el Isotiocianato de

fluoresceina(permite la visualizacion con luz ultravioleta)

• 2.- Radioinmunoensayo ( R.I.A).. anticuerpo esta marcado con sust radioactivas como el Yodo

radiactivo ( Y125 - Y131 ).

• 3.- Enzimoinmunoensayo (E.L.I.S.A).. Cutiliza como marcador substractos enzimaticos como

fosfatasa alcalina o peroxidasas

METODOS PRINCIPALES

1.- Método Directo- En una sola etapa- Técnica más simple…. Mas costosa….menos utilizada ..poca disponibilidad de

conjugados

a.- Conjugado: Anticuerpo específico + Marcador de la reacción.

b.- Antígeno: Muestra clínica del paciente

cortes de tejido a estudiar obtenidos con crióstato y

fijados a una placa de vidrio

Positivo

a b b

METODOS PRINCIPALES

2.- Método Indirecto• 1.- Etapa: Fase oculta.- el antígeno comercial fijo en las paredes de un tubo se une al anticuerpo que está en la muestra del paciente.

• 2.- Etapa: Fase demostrativa.- el conjugado: un segundo anticuerpo dirigido contra el Anticuerpo específico del paciente, se une al idiotipo de este.• 3.- La muestra positiva se detecta mediante captación de la substancia utilizada como marcador del conjugado, mediante aparatos adecuados que valoran la concentracion del Ac.

METODOS PRINCIPALES

2.- Método Indirecto• 1.- Etapa: Fase oculta.-

• 2.- Etapa: Fase demostrativa.-

Fluorómetro

Contador gamma

Espectofotómetro