DETECCIDETECCIÓÓN DE OOQUISTES DE N DE OOQUISTES DE CRYPTOSPORIDIUM PARVUMCRYPTOSPORIDIUM PARVUM EN DEPOSICIEN DEPOSICIÓÓN N

MEDIANTE TEST DE SCREENING Y TINCIMEDIANTE TEST DE SCREENING Y TINCIÓÓN DE ZIEHL N DE ZIEHL NEELSENNEELSEN

.

RIVERA N.; GUTIÉRREZ G.;OPAZO M.; ORREGO C.; ESPINOZA M.; HENRÍQUEZ D.; GUERRERO J.;BARRA A.;HINOJOSA M.; QUIROZ E.;ARAYA T.; SAN MARTIN A.; SOTO A.; ARRIAGADA R. nrivera@udec.cl

Carrera de Tecnología Médica, Facultad de Medicina, Universidad de Concepción; Hospital Guillermo Grant Benavente; Hospital Higueras y Consultorio O’Higgins

IntroducciIntroduccióónn

Descrito en niños solo desde mediados de la década de los ’80.

En el inmunocomprometido, especialmente en el SIDA, constituye una temible complicación, ya que se presenta con severidad y refractariedad al manejo.

En el contexto de todas las etiologías de diarrea aguda en pediatría y en numerosos estudios Cryptosporidium, ocupa el cuarto lugar después de Rotavirus, Escherichia coli yCampylobacter.

www.dpd.cdc.gov

IntroducciIntroduccióónnLas personas más susceptibles son los niños, los ancianos y, principalmente, quienes presentan inmunodeficiencia

Se ha demostrado la transmisión zoonótica y antroponóticade este parásito, pero no se conoce con exactitud la importancia relativa de cada una de ellas. 1-2

La presencia de Cryptosporidium (parvum, hominis), ha sido demostrada en Concepción,3-4 no obstante su búsqueda no se hace rutinariamente.

1Lippi E. y Castro P.Parasitol Latinoam58:122-127,2003 FLAP2 www.dpd.cdc.gov3Pinilla y cols. Parasitología al Día 11:77-79,19874Rivera N y cols. Parasitología al Día 19:137-139.1995

¿¿PorPor quéqué no se no se diagnosticadiagnostica??

1. Es muy poco solicitado por los médicos2. Sólo se realiza, si el médico lo solicita.

No obstante, sedimento fecal + lugol y observación con objetivo 40x5

Tinción de Ziehl Neelsen

5 Ellen Jo Baron y cols. Comparison of Three Methods for detection of Cryptosporidium oocystsin a low-Prevalence PopulationJ.Clin.Microb,Jan 1989,p.223-224

ObjetivosObjetivos.

Validar la observación directa de sedimento fecal usando MIF o lugol como técnica de screening en la detección de ooquistes de C. parvum. Adiestrar a los alumnos de Tecnología médica en el diagnóstico de ooquistes de Cryptosporidiummediante Test de Screening y tinción de Z.N.Comparar con la tinción de Ziehl NeelsenDeterminar prevalencia de C. parvum y otros enteroparásitos en Concepción.

Material y mMaterial y méétodotodo

S . F E .E

F a s e t r o f o z o i t i c a F a s e q u i s t i c a

5 m a 1 8 0 0 r p m

B o ta r s o b r e n a d a n te

C o l o c a r u n a g o t a d e s e d i m e n t o f e c a lm a s

M I F

L u g o l

M I F

L u g o l

t io n i n a

Z .N .

M E T O D O D E B U R R O W S

T a m iz a r

C o n c e n t r a r

O b s e r v a r 1 0 x y 4 0 x

O b s e r v a r 1 0 0 x

Muestras positivas a C. parvum para adiestramiento de los alumnos, en ambos métodos.Concentrados de deposición, Método de Burrows.Observación con objetivo 40x, con lugol y MIF (alumnos y Profesor)Tinción de Ziehl Neelsen

ZIEHL NEELSEN MODIFICADOZIEHL NEELSEN MODIFICADO

PREPARACIÓN DE TINCIONES1.Fucsina

Fucsina básica 10gAlcohol etílico al 95% 100mLFenol cristalizado 50mLAgua destilada c.s.p. 1000ml

2.Azul de MetilenoAzul de metileno 2gAcido acético glacial 50mLAgua destilada c.s.p. 1000mL

3.Alcohol ácidoácido clorhídrico 30mlalcohol etílico 95% 970ml

RESULTADOSRESULTADOS

15 de 29 52%35 de 341 (10.3%)

C. Victor Manuel Fernadez 94 de 333 ( 28 %)

C. CostaneraC. Leonera

C. TucapelC, Nonguen

C. Lorenzo ArenasC. Copielemu

C. Sta. SabinaC. Florida

C. Los CerrosC. Pedro de Valdivia

C. Chiguayante

Hospital HiguerasConsultorioO’Higgins

Hospital Guillermo Grant Benavente

Muestras analizadas durante el período de estudio(18 de Mayo al 17 de Junio 2004)

144 de 703 20.4%

OBSERVACIONES REALIZADASOBSERVACIONES REALIZADAS

%2 1.4 0 0.0

0 0.00 0.0

%6 4.14 2.7%

1 0.691 0.69

Falsos positivos40x(Lugol-MIF)100x(Z.N.)Falsos negativos40x(Lugol-MIF)100x(Z.N.)

2 142 1445 139 144Obs.objetivo 100x.Z.N.

4 140 1447 137 144Obs.objetivo40xLugol y MIF

PROFESOR+ - Totaln n n

ALUMNOS+ - Totaln n n

TECNICAUtilizada

Prevalencia de Enteroparásitos en 144 muestras

34 23.614 9.78 5.57 4.82 1.41 0.69

66 45.7

Blastocystis hominisGiardia lambliaEntamoeba coliEndolimax nanaCryptosporidium parvum*Entamoeba histolytica/dispar

Total

Número de casosn %

ESPECIE

CryptosporidiosisCryptosporidiosisPacientes Edad Procedencia otros enteroparasitos

Masculino 2 años Poli ninos HGGB Gl, Bh, Ec,

Femenino 1 año C.Leonera -

COMPARACION DE RESULTADOS OBTENIDOS Y UN ESTUDIO SIMILAR REALIZADO EN

CONCEPCION

Enteroparasitosis en pacientes de Concepción1

1Rivera N. y cols. Parasitología al Día 19:137-139.1995

32.6 9.710.4 0.013.1 5.613.7 23.65.2 4.91.6 0.71.3 0.04.2 0.01.3 0.01.6 1.4

100 1432 040 842 3416 75 14 013 04 05 2

Giardia lambliaAscaris lumbricoidesEntamoeba coliBlastocystis hominisEndolimax nanaEntamoeba histolyticaHymenolepis nanaTrichuris trichiuraChilomastix mesniliCryptosporidium sp.

%1995-2004

Número1995 2004

Enteroparásitos

ResultadosResultadosTabla 1 :Numero de casos positivos en 144 muestras analizadas

66Total 50 de 14434.7%

381864

38921

1234

TotalCasos positivosNúmero de Parásitos por muestra

La edad de los pacientes fluctuo entre 1 mes y 84 años

.ConclusionesConclusionesLa observación con objetivo 40x + lugol o MIF constituye un

buen método de Screening, de bajo costo, para la detección de ooquistes de Cryptosporidium (2.7% de F+ y 0.69% F-).Se requiere un ojo adiestrado (Se sugiere adiestrar ya desde la etapa estudiantil) y ...Confirmación con tinción de Ziehl Neelsen. Se demuestra una vez más, la presencia dCryptosporidium parvum en pacientes de Concepción.(similar prevalencia)

Llama (+) la atención, el descenso de la prevalencia de enteroparásitos y, la ausencia de helmintos en las muestras procesadas en comparación con estudio anterior.

.ImpactoImpacto

Luego de concluido el estudio, se implementa la búsquedarutinaria de ooquistes de Cryptosporidium en pacientes del Consultorio O’Higgins mediante tinción de Z.N. en E.P.S.D. en menores de dos años, habiendo diagnosticado,en Julio, dos casos en hermanos .Los profesionales de los diversos laboratorios han solicitadomuestras positivas a ooquistes de Cryptosporidium y losalumnos están contribuyendo a su adiestramiento.

DETECCIDETECCIÓÓN DE OOQUISTES DE N DE OOQUISTES DE CRYPTOSPORIDIUM PARVUMCRYPTOSPORIDIUM PARVUM EN DEPOSICIEN DEPOSICIÓÓN N

MEDIANTE TEST DE SCREENING Y TINCIMEDIANTE TEST DE SCREENING Y TINCIÓÓN DE ZIEHL N DE ZIEHL NEELSENNEELSEN

.

RIVERA N.; GUTIÉRREZ G.;OPAZO M.; ORREGO C.; ESPINOZA M.; HENRÍQUEZ D.; GUERRERO J.;BARRA A.;HINOJOSA M.; QUIROZ E.;ARAYA T.; SAN MARTIN A.; SOTO A.; ARRIAGADA R. nrivera@udec.cl

Carrera de Tecnología Médica, Facultad de Medicina, Universidad de Concepción; Hospital Guillermo Grant Benavente; Hospital Higueras y Consultorio O’Higgins