DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TERMOTOLERANTES POR

Curso Taller REDCAM 2020: Estandarización de las mediciones analíticas requeridas para la estimación del Índice de Calidad de Aguas Marinas y Costeras

– ICAM.

2-13 de noviembre de 2020, Santa Marta D.T.C.H., Colombia

DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TERMOTOLERANTES POR FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES

(SM 9221 E) Tania Liceth Córdoba Meza

INVEMAR – Investigador científico

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Flanders, Belgium

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Cambio climático: Carbono azul y adaptación basada en ecosistemas marinos y costerosSanta Marta, Julio 6-10 de 2020


(SM 9221 E)

Anaerobias facultativas.

Gram negativas, no

esporuladas.

Capaces de fermentar la

lactosa como fuente de

energía con producción de

gas y acido en presencia de

sales biliares a una

temperaturas de 45,5°C

por un periodo de 24h.

¿Que son los

Coliformes?

• Indicadores de la calidad

sanitaria del agua.

• Tracto intestinal

• Enteropatógenos.

• Contaminación fecal

reciente.

• E. coli

Importancia Biológica

Cuantificación de

coliformes

Matrices Ambientales.

La densidad bacteriana se

puede estimar mediante la

tabla NMP usando el

número de tubos positivos

en las diluciones múltiples.

Técnica de Fermentación

De Múltiples Tubos



(SM 9221 E)

ASPECTOS

IMPORTANTESColiformes termotolerantes

(SM 9221 E)

01Una vez recolectada la muestra, se recomienda que

se analice dentro de las siguientes 2 horas, en caso de

no poderse, se debe mantener bajo refrigeración (4 -

8 °C) por un tiempo máximo de 24 h.

02 Para todas las muestras se emplearán como

mínimo tres series de cinco tubos.

03Todos los tubos empleados en esta técnica

contendrán campanas de Durham, de forma

invertida en su interior, con el fin de retener el gas

producido en el proceso de fermentación.

04 Para aguas con concentraciones bajas, se

recomienda siempre iniciar a partir de porciones

de 10 mL de la muestra.



(SM 9221 E)

1FASE

PRESUNTIVA

En esta fase se busca la recuperación y

rápido desarrollo de los microorganismos

capaces de fermentar la lactosa como

fuente de energía, para ello se emplea el

Caldo Lauril Triptosa el cual contiene

este azúcar.

2FASE

CONFIRMATIVA

En la fase confirmativa, se busca

determinar los coliformes termotolerantes

fundamentado en la capacidad que

poseen estas bacterias para fermentar la

lactosa presente en el Caldo EC y

producir gas a una temperatura de 44,5

°C por un periodo de 24 horas.



(SM 9221 E)

DILUCIONES

RECOMENDADAS SEGÚN EL

TIPO DE MUESTRAS 10mL – 1 mL – 0,1 mL

Para aguas superficiales limpias(Marinas o Estuarinas)

10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5

Para aguas de moderada contaminación o aguas

residuales tratadas

10-3, 10-4, 10-5, 10-6

Aguas contaminadas o aguas residuales sin

tratamiento



(SM 9221 E)

Fase Confirmativa

• Se agita la muestra vigorosamente 25 veces aprox.

Fase Presuntiva

• Se inocula en caldo Lauril doble y sencillo cada serie de cinco tubos (mínimo 3 series) con los

volúmenes de muestras determinados.

Fase presuntiva

• Se lleva a incubar a 35°C ± 0,5°C por 24 ± 2h o 48 ± 3h. Pasado el tiempo, se selecciona los tubos positivos (Producción de gas y turbidez )



(SM 9221 E)

Fase Confirmativa

•A partir de cada tubo positivo proveniente de la fase de pre-

enriquecimiento o fase presuntiva se toman 2 asadas y se transfiere al tubo

con Caldo EC

Fase Confirmativa

• Se lleva a incubar a 44,5°C ± 0,2 °C por 24 ± 2h, Pasado el tiempo, se selecciona los tubos positivos (Producción

de turbidez y gas dentro de la campana de Durham o por efervescencia).

Confirmación con agares selectivos


Fase Confirmativa

•Calcular la concentración en NMP según la tabla y registrar su valor.


¡Gracias!

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