(Development of Triphala Niosomes) บทคัดย่อ · Introduction: Triphala is formulation of three dried fruits of Terminalia chebula, Terminalia bellirica, and Phyllathus

February 1-2, 2014 The 6th Annual Northeast Pharmacy Research Conference of 2014“A Celebration of 100 years of Thai Pharmacy and 20 Years of UBU Pharmacy”

Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubonratchathani University, Thailand

(Development of Triphala Niosomes)1, 1, วนัด ีรงัสวีจิติรประภา1*

บทคดัยอ่

บทนํา: ตรผีลาประกอบดว้ยผลไม้ 3 ชนิด คอื Terminalia chebula, Terminalia bellirica และ Phyllathus emblica ในอตัราส่วน1:1:1

จงึ พฒันาสตูรตํารบั ในการนําส่งสารสกดัตรผีลาสมนุไพรส่วนใหญ่มปีรมิาณจาํกดั การพฒันาสตูรตํารบันีโอโซมจงึมคีวามจาํเป็น

วสัดแุละวิธีการ : นําผลไม้ 3 ชนิด อบใหแ้หง้ สกดัดว้ย 95 %ethyl alcohol โดยวธิกีาร maceration 3 รอบ รอบละ 3 วนั ระเหยตวัทําละลายใหแ้หง้โดยใช้ Rotary evaporator ไดส้ารสกดัหยาบ 3 ชนิดมาผสมกนัในอตัราส่วน 1:1:1 สกดัดว้ย95 % ethyl alcohol กรองดว้ยกระดาษกรอง 0.22 mm ระเหยตวัทําละลายใหแ้หง้โดยใช้ Rotary evaporatorเตรยีมเป็นตํารบันีโอโซม วดัขนาด วดัค่า polydispersity index (PDI) วดัค่า zeta potential คํานวณค่า % entrapmentefficiency (%EE) ผลการศึกษา : span20, total lipid 50 mM,cholesterol 15% และ plant extract 0.1% ไดข้นาดของนีโอโซมเท่ากบั164.89± 0.47 mm และรอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัเท่ากบั 47.65± 1.56 และค่า zeta potential มากกว่า 30 mV, ค่า PDI น้อยกว่า 1 อวเิคราะห์ดว้ยโปรแกรมสําเรจ็รูปResponse Surface Methodology (RSM) หาปจัจยัประกอบดว้ย total lipid 50 mM, cholesterol 10 % และ plant extract 0.1% ไดข้นาดของนีโอโซมเท่ากบั 188.10±16.34 nmและรอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัเท่ากบั 46.43±4.20 % สรปุผลการศึกษา : ส่วนประกอบของสูตรตํารบันีโอโซมบรรจุสารสกดัตรผีลา ประกอบดว้ย total lipid 50 mM, cholesterol 10% และ plant extract 0.1%เหมาะสม รอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัสงูสุด

คาํสาํคญั: ตรผีลา การพฒันาสตูร สมของตรผีลา

1Department of Pharmaceutical Chemistry and Technology, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubon Ratchathani University,Ubon Ratchathani 34190, Thailand Corresponding author

February 1-2, 2014 The 6th Annual Northeast Pharmacy Research Conference of 2014“A Celebration of 100 years of Thai Pharmacy and 20 Years of UBU Pharmacy”

Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubonratchathani University, Thailand

Development of Triphala NiosomesThanissa Ramrit 1, Bancha Yingngam1, Wandee Rungseevijitprapa 1,*

Introduction: Triphala is formulation of three dried fruits of Terminalia chebula, Terminalia bellirica, and Phyllathusemblica in equal proportions. This formulation is the most popular Ayurvedic medicines. In present study, we want todeveloped niosomes formulation for loaded Triphala because plant extracts had less amount, the good deliverysystem for deliver plant extract to target action, increase therapeutic and decrease toxicity. Materials and Method:95% Ethyl alcohol extraction of Triphala, filtrated , filtered through 0.22 mm, get rid of 95% ethanol with rotaryevaporator. Developed niosomes formulation for Triphala, determined size, PDI, zeta potential and %entrapmentefficiency (%EE) Results: Factors for developed niosome’s formulation for loaded Triphala component span20, totallipid 50 mM, cholesterol 15% and plant extract 0.1%, this formula had size 164.89± 0.47 mm and %entrapmentefficiency 47.65± 1.56, zeta potential more than 30 mV, PDI less than 1. Optimize formulation with Response SurfaceMethodology (RSM) had component total lipid 50 mM, cholesterol 10% and plant extract 0.1% had size 188.10±16.34nm and %entrapment efficiency 46.43±4.20 % Conclusion : Optimize of formulation niosomes for loaded Triphalacomponent total lipid, cholesterol and plant extract had size and maximum %entrapment efficiency and Triphalaniosomes should storage at room temperature.

Keywords: Triphala, Optimize niosomes for loaded Triphala

February 1-2, 2014 The 6th Annual Northeast Pharmacy Research Conference of 2014“A Celebration of 100 years of Thai Pharmacy and 20 Years of UBU Pharmacy”Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubonratchathani University, Thailand

บทนํา

มากในตํารบัยาอายุรเวทของอนิเดยี ประกอบดว้ยผลไมแ้หง้3 ชนิด คอื Terminalia chebula, Terminalia bellirica และPhyllathus emblica ในอตัราส่วน 1:1:1ว่าเป็นยาอายุวฒันะ ทําให้ชีวิตยืนยาว กระตุ้นระบบการทํางานของร่างกาย ระบบภูมคิุ้มกนั (Sandhyaa et al.,2006)

วัณโรค ปอดบวม เอดส์ ท้องผูก ตรีผลาเป็นแหล่งของVitamin C, ellagic acid, gallic acid, chebulinic acid,bellericanin, ß-sitosterol และ flavanoids (Jagetia etal.,2002) anti-inflammatory,anti-mutagenic,antioxidant, cytoprotective,gastroprotective, myocardial necrosis, hepatoprotective,anti-bacterial และ anti-cancer activity (Mukherjee et al.,2006) T. chebula, T.bellirica และ P. emblica 5α-reductase II(Kumar et al., 2011, 2012)

ชใ้นการนําส่งสารสกดัตรผีลาวิธีการดาํเนินการวิจยั1.อปุกรณ์และสารเคมี

ethanol, span20, cholesterol, methanol,gallicacid,follin-Ciocalteu’s ,Na2CO3,Dimethylsulphoxide,particle size analysis,UV spectrophotometer, dialysisbag, syring2. การเตรียมสารสกดัพืช

สารสกดัพชืแต่ละชนิดไดจ้ากมหาวทิยาลยัเชยีงใหม่นําผลไม้ 3 95 % ethylalcohol โดยวธิกีาร maceration 3 รอบ รอบละ 3 วนั ระเหยตวัทําละลายใหแ้หง้โดยใช้ Rotary evaporator ไดส้ารสกดัหยาบ กรณีหยาบ 3 ชนิดมาผสมกนัในอตัราส่วน 1:1:1สกดัดว้ย 95 % ethyl alcohol กรองดว้ยกระดาษกรอง 0.22mm ระเหยตวัทาํละลายใหแ้หง้โดยใช้ Rotary evaporator3. การพฒันาสตูรตาํรบันีโอโซม3.1 การเตรียมตาํรบันีโอโซม

การเตรียมตํารับนีโอโซมcholesterol และ non-ionic surfactant ละลายดว้ย ethanol

ผ่านเขม็เบอร์ 2120 ml 60 500 rpm

30 นาท ีลดขนาดของนีโอhigh pressure homogenizer

3.21) Non-ionic surfactant

เตรยีมตํารบันีโอโซม โดยกําหนดให้ cholesterolและ plant extract non-ionic surfactantคอื span 20,60, และ 80 เตรยีมเสรจ็ ลดขนาด วดัขนาดวัด PDI ค่า zeta potential และหาค่า %entrapmentefficiency2) Total lipid

เตรียมตํารับนีโอโซม โดยกําหนดให้ plantextract คํานวณระบบ total lipid cholesterolและ non-ionic surfactant เตรยีมเสรจ็ ลดขนาด วดัขนาดวัด PDI ค่า zeta potential และหาค่า %entrapmentefficiency3) Cholesterol

เตรียมตํารับนี โอโซม โดยกําหนดให้ p lantextract และ non-ionic surfactant รอ้ยละของcholesterolขนาด วดั PDI ค่า zeta potential และหาค่า %entrapmentefficiency4) Plant extract

เตรยีมตํารบันีโอโซม โดยกําหนดให้ cholesterolและ non-ionic surfactant ศึกษาร้อยละของ plantextractวัด PDI ค่า zeta potential และหาค่า %entrapmentefficiency4. วิเคราะห์ ResponseSurface Methodology (RSM)

ให้คอื total lipid, cholesterol และ plant

extract เขา้สู่โปรแกรม Response Surface Methodology(RSM)5. การวดัขนาดของนีโอโซม ค่า PDI ค่า zeta potential

ใชน้ีโอโซม 100 µl 900 µl วดัขนาด


ของนีโอโซม วดัค่า PDI วดัค่า zeta potentialparticle size analysis 36. การวิเคราะหห์าร้อยละการกกัเกบ็สารสกดัพืชในนีโอโซม (% entapment efficiency,EE)

การวเิคราะห์ร้อยละการกกัเก็บสารสกดัพชืในนีโอโซมใชว้ธิี direct method ประกอบดว้ย 2 ส่วน คอื ส่วน

บในนีโอโซม โดยปิเปตนีโอโซม1000 µl ใส่ใน dialysis bag เตมิ release media 18

100 µl เติมdimethylsulphoxide 900 µlหาปรมิาณสารประกอบฟลนีอลกิ โดยเทยีบกบัสารมาตรฐานgallic acid 2 คอื การหา

100 µl เติม dimethylsulphoxide900 µl นําไปหาปรมิาณสารประกอบฟลนีอลกิ โดยเทยีบกบัสารมาตรฐาน gallic acid คํานวณหารอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัในนีโอโซม%EE = x100

7. การทดสอบความคงตวัของตาํรบั

อุณหภมูิ 4, 25 and 45 ° C วดัขนาด วดัค่า PDI วดัค่าzeta potential หาค่า % entrapment efficiency (EE) ใน

1, 7, 15, 30, 60 90 วนัการวิเคราะหท์างสถิติ

แสดงผลเป็นค่า mean ± SD และโปรแกรมสาํเรจ็รปู Response Surface Methodology (RSM)ผลการศึกษาวิจยั

non - ionic surfactant เหมาะสมในการเตรยีมตํารบันีโอโซม คอื span 20, total lipid 50 mM, cholesterol15% และ plant extract 0.1 % ไดข้นาดของนีโอโซมเท่ากบั164.89± 0.47 mm ค่า zeta potential มากกว่า 30 mV ค่าPDI น้อยกว่า 1 และร้อยละการกกัเก็บสารสกดัเท่ากบั47.65± 1.56 ( 1- 4) ( 2)

รู 1 size, zeta potential ของ non-ionic surfactant

2 size, zeta potential ของ Total lipid

3 size, zeta potential ของ % cholesterol

4 size, zeta potential ของ % plant extract

1 รอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัในนีโอโซมจากการศกึษาปจัจยัต่างๆFactors %Entrapment efficiencynon-surfactant span 20 14.91 ± 1.14

span 60 10.23 ± 0.22span 80 14.32 ± 0.56

Total lipid 50mM 17.22 ± 0.7030mM 14.91± 1.1425mM 10.21± 0.5810mM 9.56 ± 0.801mM 10.15 ± 0.070.5mM 9.55 ± 0.37

% Cholesterol 0 24.16 ± 0.1315 25.27 ± 2.04330 16.33 ± 0.7945 8.40 ± 0.4780 8.56 ± 0.67

% plant extract 1 10.34 ± 0.310.5 14.60 ± 0.480.25 27.91 ± 0.820.1 47.65 ± 1.560.01 37.43 ± 2.97


2 size, PDI zeta potential และ %EE

ค่ารอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัในแต่ละปจัจยัspan 20 กกัเกบ็ไดส้งูสุดท่ากบัรอ้ยละ 14.91

± 1.14 ปรมิาณ Total lipid 50 mM กกัเกบ็สงูสุดเท่ากบัรอ้ยละ 17.22 ± 0.70 ปรมิาณ cholesterol 15% กกัเก็บสูงสุดเท่ากับร้อยละ 25.27±2.043 และปริมาณสารสกัด0.1 % กกัเกบ็สงูสุดเท่ากบัรอ้ยละ 47.65±1.56 ( 1)

ใช้โปรแกรม RSM พบว่า Total lipid เท่ากบั 50 mM,Cholesterol เท่ากบั 10%, Plant extract เท่ากบั 0.1 % มีขนาดของนีโอโซมเท่ากบั 188.10±16.34 nm และร้อยละการกกัเกบ็เท่ากบั 46.43 +- 4.20 %

5 จากโปรแกรม RSM

90

25 องศา ( 3)

ตารา 3 ความคงตวัของตํารบันีโอโซม

DayPhysicalstability

4°C 25°C 45°C

1 size 166.22±2.84 166.22±2.84 166.22±2.84PDI 0.202±0.04 0.202±0.04 0.202±0.04zeta potential 34.41±0.26 34.41±0.26 34.41±0.26


15 size 173.48±3.86 178.19±2.06 164.11±2.58PDI 0.18±0.02 0.232±0.03 0.172±0.02zeta potential 35±0.97 35.2±1.64 35.97±0.99



90 size 200.93±6.21 170.19±3.36 166.78±2.73PDI 0.301±0.03 0.218±0.11 0.107±.04zeta potential 36.18±2.56 37.71±0.79 35.24±1.54

สรปุผลการศึกษา

RSM ทําใหไ้ด้span 20, total lipid 50

mM, cholesterol 10 % และ plant extract 0.1% ไดข้นาดของนีโอโซม 188.10±16.34 nm และรอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัเท่ากบั 46.43 +- 4.20 %

กิตติกรรมประกาศขอขอบพระคุณทุนวจิยัมหาบณัฑติ สกว. สาขา

Factors Size PDI Zeta potential %EENon-ionic surfactant (span20) 195.56 ±1.52 0.07± 0.03 38.47± 0.98 14.91± 1.14

Total lipid (50mM) 194.89± 1.70 0.08± 0.02 40.68 ±0.25 17.22± 0.70

Cholesterol(15%) 194.33 ±2.54 0.19 ±0.03 38.13± 0.76 25.27 ±2.04Plant extract (0.1%) 164.89± 0.47 0.200 ±0.01 36.68± 0.70 47.65± 1.56

Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR1

Design points above predicted valueDesign points below predicted value245.78

126

X1 = A: AX2 = B: B

Actual FactorC: C = 0.20

1016

2228

3440

15 22

29 36

43 50

120140160

180200220

240

Y1

(nm

)

X1 (mM) X2 (%)



126

X1 = A: AX2 = C: C

Actual FactorB: B = 25.00

0.100.15

0.200.25

0.30

15 22

29 36

43 50

120

140

160180

200

220

240

Y

1 (

nm

)

X1 (mM) X3 (%)



126

X1 = B: BX2 = C: C

Actual FactorA: A = 32.50

0.100.15

0.200.25

0.30

10 16

22 28

34 40

120

140

160

180

200

220240

Y

1 (

nm

)

X2 (%) X3 (%)



9.36

X1 = A: AX2 = B: B


101622

2834

40

15 22

29 36

43 50

0

10

20

30

40

Y

2 (

%)

X1 (mM) X2 (%)



9.36

X1 = A: AX2 = C: C


0.100.15

0.200.25

0.30

15 22

29 36

43 50

0

10

20

30

40

Y

2 (

%)

X1 (mM) X3 (%)



9.36

X1 = B: BX2 = C: C


0.100.15

0.200.25

0.30

10 16

22 28

34 40

0

10

20

30

40

Y2

(%)

X2 (%) X3 (%)


Design Points245.78

126

X1 = A: AX2 = B: B


15 22 29 36 43 50

10

16

22

28

34

40 Y1 (nm)

X1 (mM)

X2

(%)

160

180 2006


Design Points245.78

126

X1 = A: AX2 = C: C


15 22 29 36 43 50

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30 Y1 (nm)

X1 (mM)

X3

(%)

160

180200

220

6


Design Points245.78

126

X1 = B: BX2 = C: C


10 16 22 28 34 40

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30 Y1 (nm)

X2 (%)

X3

(%)

170

180

180

190

200

210

6


Design Points47.54

9.36

X1 = A: AX2 = B: B


15 22 29 36 43 50

10

16

22

28

34

40 Y2 (%)

X1 (mM)

X2

(%)

20

30

6


Design Points47.54

9.36

X1 = A: AX2 = C: C


15 22 29 36 43 50

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30 Y2 (%)

X1 (mM)

X3

(%)

10

20

30

6


Design Points47.54

9.36

X1 = B: BX2 = C: C


10 16 22 28 34 40

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30 Y2 (%)

X2 (%)

X3

(%)

15

20

25

6


เอกสารอ้างอิงJagetia G, Baliga S, Malagi K, et al. The evaluation of

the radioprotective effect of Triphala (anayurvedic rejuvenating drug) in the miceexposed to γ-radiation. Phytomedicine.2002; 9, 99–108.

Kumar T, Rungseevijitprapa W, Chaiyarut C, et al.Screening of steroid 5α-reductase inhibitoryactivity and total phenolic content of Thaiplants. Journal of Medicinal Plants Research.2011. 5(7), pp. 1265-1271

Kumar T, Rungseevijitprapa W, Chaiyarut C, et al. 5α-reductase inhibition and hair growthpromotion of some Thai plants traditionallyused for hair treatment. Journal ofEthnopharmacology. 2012;139, 765–771

Mukherjee P, Rai, Sujay, et al. Clinical study ofTriphala-A well known phytomedicine fromIndia. Iranian J. Pharmacol. Ther. 2006; 5,51–54.

Sandhyaa T, Lathikaa, K, Pandeyb, et al. Potential oftraditional ayurvedic formulation, Triphala, asa novel anticancer drug. Cancer Lett. 2006;231 (2), 206–214.

Documents

(Development of Triphala Niosomes) บทคัดย่อ · Introduction: Triphala is formulation of three dried fruits of Terminalia chebula, Terminalia bellirica, and Phyllathus