КРАСИТЕЛИВ БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕ

С П Р А В О Ч Н И К

Е.В. СЕЛИВАНОВ

БАРНАУЛ•2003

Селиванов Е.В. Красители в биологии и медицине: Справочник. — Барнаул: Азбука, 2003. — 40 с.

В брошюре представлен обобщенный материал по классификации, применению и но!менклатуре красителей, использующихся для окраски микропрепаратов в биологии и меди!цине, а также наиболее часто используемые индикаторы. Предназначена для биологов, гис!тологов, цитологов, врачей клинической лабораторной диагностики, преподавателей, аспи!рантов, ординаторов и студентов ВУЗов биологических специальностей.

© Селиванов Е.В., 2003 г.© Звягинцев Е.Н., 2003 г. (оформление)© Издательство «Азбука», 2003 г.

ВВЕДЕНИЕ

Красителями, в широком смысле этого слова, называют органические со!единения, обладающие способностью поглощать и преобразовывать световуюэнергию в видимой и ближних ультрафиолетовой и инфракрасной областяхспектра. Поглощая часть световых лучей определенной длины волны, эти соеди!нения становятся цветными.

Применение веществ, способных придавать тот или иной цвет предметам,в том числе волокнам, тканям, поверхности тела, известно с незапамятных вре!мен. Для этого использовались цветные глины, минеральные пигменты, вытяж!ки из растений и животных.

Ремесленники окрашивали ткани в синий цвет, используя индиго, которыйдобывали из листьев растения индигоферы, произрастающего в Индии и Индо!незии. Для получения 3 кг красителя нужно было переработать 100 кг листьеврастения. В красный цвет красили ализарином, извлекая его из корней растениямарены. Для получения красителей использовали также крушину, чернику, ре!зеду, кору дуба, ольхи. Некоторые из красителей, например, пурпур древних,или тирийский пурпур, были дороже золота. Его добывали из улитки!багрянки,обитающей в Средиземном море. Сама улитка не окрашена, но одежда, пропи!танная соком багрянки, при окислении кислородом воздуха окрашиваласьв пурпур. Из десяти тысяч улиток можно было получить всего около 1 г красите!ля; не удивительно, что он так высоко ценился.

Только в XVIII веке стали предприниматься попытки создания дешевых син!тетических красителей. К этому, безусловно, химиков подтолкнуло бурное раз!витие текстильной промышленности и переход к машинному производству.

Первый синтетический краситель был получен в 1855 г. профессором Вар!шавского университета Я. Натансоном. Нагреванием анилина с дихлорэтаномв запаянной трубке он получил соединение красного цвета, окрашивавшеешерсть и шелк в красивый красный цвет. Тремя годами позже, во Франции, Вер!ген получил этот же краситель другим способом и назвал фуксином за сходствоокраски с цветком фуксии. Под этим названием он известен и сейчас. В том же1858 г. П. Грисс открыл реакцию диазотирования, положившую начало синтезуазокрасителей — самого многочисленного класса красителей, и позднее став!шую основой многих гистохимических методик.

Однако не только текстильщики и полиграфисты были заинтересованыв красителях. Начиная с изобретения Леонардо да Винчи микроскопа, началипроявлять все возрастающий интерес к красителям и биологи. Теперь уже невоз!можно достоверно сказать, кому первому пришла в голову мысль использоватькрасители для окраски микропрепаратов, да это и не важно. Идея, что называет!ся, носилась в воздухе. Большинство живых объектов, попадающих в поле зре!ния микроскопа, практически не окрашены, да и клеточные органеллы едва раз!личимы в цитоплазме. Поэтому с возникновением микроскопа появляются и два

3

пути преодоления бесцветности биологических объектов: первый — попытка ре!шить проблему техническими средствами — разработка новых способов осве!щения (косое освещение, люминесценция ), контрастирования (метод фазовогоконтраста, микроскопия в темном поле, в окрашенном темном поле и т. п.); вто!рой — придать объекту окраску с помощью красителя. За последние 300 лет обапути доказали свое право на существование.

Без окраски сегодня невозможно представить ни современную гистологию,ни цитологию, ни многие другие разделы биологии, где используется микро!скоп. Первой классической работой по использованию красителей в микроско!пии принято считать статью П. Эрлиха где описывалась избирательное окраши!вание метиленовым синим нейронов в препаратах головного мозга.

Количество красителей, появившихся за последние 100 лет в арсенале мик!роскопистов, очень велико. Начинающему, да и уже опытному врачу и биологунередко очень трудно ориентироваться в них. Только во 2!м издании Сolor Indexперечислено более 3500 красителей. Правда, не все из них применяются в мик!роскопии. За рубежом основным путеводителем биолога!исследователя по кра!сителям является справочник, издаваемый Комиссией по биологическим краси!телям. Комиссия создана несколькими Американскими научными обществамии постоянно работает при их участии — испытывает новые красители, распрост!раняет информацию об их составе, свойствах и методах использования [напри!мер, см. Cohn et all., eds., Biolgical stains, 7th ed. 1961]. По рекомендации этой ко!миссии в повседневной работе можно использовать только красители, прошед!шие испытания. К сожалению, ученые и работники практических служб бывшегоСССР до сих пор лишены сколько!нибудь подробного справочника по красите!лям, которые нашли применение в современных и классических методиках. Не!редко возникает путаница в названиях, синонимах, способах применения.Без соответствующей литературы разобраться в данном вопросе непросто. Нашаработа призвана хоть немного обобщить сведения о красителях, применяемыхв биологии и медицине.

Для каждого биологического объекта, в зависимости от целей исследова!ния, выбирают свой краситель и свой метод окрашивания. Число таких методовнамного превосходит число красителей. Им посвящено множество солидных на!учных трудов и публикации в журналах. В нашем издании мы только лишьвскользь коснемся отдельных методов, а в большинстве случаев отсылаем чита!телей к специальной литературе.

Отдельное место занимают компоненты для гистохимических реакций. Этиметоды исследования были разработаны сравнительно недавно и основаны нареакциях, в ходе которых образуются окрашенные продукты, в то время как ис!ходные компоненты бесцветны или слабо окрашены. Их нельзя считать красите!лями, но мы все же сочли необходимым вкратце коснуться этой недостаточноосвещенной отечественной литературой темы.

4

ГЛАВА 1.КЛАССИФИКАЦИЯ И НОМЕНКЛАТУРА КРАСИТЕЛЕЙ

Красители, используемые в биологии, можно классифицировать по следую!щим критериям:

1. По источникам получения.2. По химическому составу.3. По использованию или способности окрашивать определенные

структуры.Классификация по источникам получения очень проста, но практического

значения не имеет. Например, такие красители, как индиго или орсеин в нашевремя могут быть получены как из природных источников, так и синтетически.В принципе, различают 3 источника получения красителей: химический синтез,вытяжки из растений и экстракты животного происхождения.

1.1. Химическая классификацияПервая химическая классификация красителей была основана на хромо!

форно!ауксохромной теории цветности, которая объясняла окраску органичес!ких соединений присутствием в их молекулах типичных хромофорных групп.По этому признаку в самостоятельные классы были выделены нитрокрасители,нитрозокрасители, азокрасители и др. Затем к ним добавились группы, объеди!няющие красители по сходству химического строения и методам получения —трифенилметановые, антрахиноновые, индигоидные, сернистые красители. Этаклассификация сохранилась до нашего времени и будет использована в настоя!щем издании:

1. Нитро! и нитрозокрасители.2. Полиметиновые красители.3. Арилметановые красители.4. Хинониминовые красители.5. Азокрасители.6. Азометиновые красители.7. Антрахиноновые красители.8. Кубовые красители:

8.1. индигоидные и тиоиндигоидные;8.2. антрахиноновые;8.3. периноновые;8.4. полициклохиноновые.

9. Антрапиридиновые красители.10. Сернистые красители.11. Фталоциановые красители.12. Флюоресцентные (оптические) отбеливатели.

5

1.2. Рабочая классификация красителей, используемых в биологичес�кой микроскопии

Существует немало рабочих классификаций красителей, использующихсяв биологии. При изложении материала авторы редко придерживаются четкогоразделения. Обычно различают четыре больших группы красителей:

А. Основные (или ядерные) красители. Они избирательно окрашиваютядра клеток и базофильные структуры. Кстати, сам термин «базофиль!ный» появился по названию этой группы красителей, т. к. в переводес латинского basis — основной.

Б. Кислые (или цитоплазматические) красители. Окрашивают преиму!щественно цитоплазму, реже клеточные стенки и т. п.

В. Нейтральные красители. К этой группе, по нашему мнению, должныбыть отнесены и такие красители, которые избирательно окрашиваюткомпоненты цитоплазмы, например, судан III или нильский синий, окра!шивающие капельки жира.

Г. Флюорохромы. Группа красителей, способных флюоресцировать притой или иной длине волны возбуждающего света. Несмотря на то, что мывыделили эти красители в самостоятельную группу, большинство из нихследовало бы отнести к цитоплазматическим или, реже, к ядерным кра!сителям.

1.2.1. Ядерные красителиЯдерные красители представляют собой едва ли не самую многочисленную

группу красителей вообще. Основная цель обработки данными веществами со!стоит в том, чтобы выявить материал, близкий к ДНК или РНК. По механизму ок!рашивания ядерные красители делят на две группы, принципиально отличаю!щиеся друг от друга. Это основные красители и протравные красители.

1.2.1.1. Основные красителиПрименение основных красителей (все они являются «катионными») осно!

вано на образовании соединений типа солей в присутствии ДНК или РНК.А. Азокрасители:

— янус зеленый В;— бисмарк коричневый.

Б. Сафранины:— сафранин Т;— сафранин А;— сафранин О;— феносафранин.

В. Оксазиновые красители:— бриллиантовый крезиловый синий;— крезиловый прочный фиолетовый.

6

Г. Тиазины:— тионин;— азуры С, А, В;— метиленовый синий;— толуидиновый синий.

Д. Трифенилметановые:— пара!розанилин;— кристаллический фиолетовый;— метиловый фиолетовый;— метиловый зеленый;— альциановый синий;

1.2.1.2. Протравные красителиВ основу методик применения протравных красителей легла способность

ряда соединений образовывать ярко окрашенные лаки с ионами металлов — ли!тия, железа, хрома. В эту группу входят:

А. Наиболее известные и используемые красители:— гематоксилин;— кармин (карминовая кислота);— ализарин!цианин;— ализарин;— бразиллин;— галлоцианин.

Б. Малоизвестные и редко применяющиеся красители:— пурпурин;— ализариновый синий;— ализариновый черный;— ализариновый зеленый;— антрапурпурин;— хинализарин;— чисто!синий В;— антраценовый синий.

В зависимости от того, ион какого металла входит в состав протравного реа!гента, конечный цвет окраски может меняться от красного до зеленовато!черно!го. Примеры такой зависимости приведены в таблице 1.

1.2.2. Цитоплазматические красителиЭта группа красителей представлена большей частью сульфоновыми и кар!

боновыми кислотами, которые в тканях прочно связываются с белками и в ре!зультате окрашивают большинство внеядерных структур:

— эозин;

7

— аурамин О;— эритрозин;— родамин В;— родамин 3G;— родамин 6G;— пиронин G;— акрифлавин;— флюоресцеин;— акридиновый оранжевый;— конго красный;— акридиновый желтый;— криофосфин;— нейтральный красный;— толуидиновый синий.Цитоплазматические красители в сочетании с фосфорно!вольфрамовой

кислотой, фосфорно!молибденовой кислотой могут окрашивать специфичес!кие структуры клеток и тканей, например, коллаген. В большинстве методик ци!топлазматические красители используются для контраста после окраски ядерны!ми красителями. Несколько реже прибегают к такому свойству цитоплазматиче!ских красителей, как способность окрашивать живые клетки без нарушенияфункций последних (так называемые витальные красители); в таких методикахприменяют очень большие разведения красителей — от 1:1000 до 1:20000.

1.2.3. Нейтральные красителиГруппа нейтральных красителей невелика. Например, важное практическое

8

еинавзаНардяиксаркотевЦ

lA rC eF

ниразилА йынсарк — —

нирупруП йынсарк — —

нимраK)атолсикяавонимрак(

йынсарк — —

нилизарБ йынсарк йывенчирок!орес йынреч!отавонелез

нилискотамеГ йинис йинис!орес йынреч!орес

нинаицоллаГ — йиниc йынреч!орес

йинисйывонецартнА — йиниc йынреч!орес

Таблица 1Зависимость итоговой окраски от иона металла протравного реагента.

значение имеют красители, окрашивающие жиры:— судан III;— судан IV;— судан черный;— нильский синий.

1.2.4. ФлюорохромыФлюорохромы в данной классификации стоят особняком, потому что эта

группа включает и кислые, и основные красители.Главной отличительной чертой всех этих соединений является способность

излучать свет определенной длины волны под воздействием лучей ультрафио!летового, фиолетового и синего спектра. Молекула красителя, поглотив квантпадающего света, испускает световое излучение большей длины волны, чемдлина волны падающего света. Так, например, флюоресцеин, поглощая светс длиной волны 420!490 нм, излучает свет с длиной волны 520!540 нм. При этомобъекты, окрашенные флюоресцеином в люминесцентном микроскопе, светятсязеленым светом.

Некоторые области применения флюорохромов приведены в таблице 2.

1.3. Номенклатура красителейНазвания красителей, поступающих в продажу на отечественном рынке,

складываются следующим образом (исключения составляют красители с исто!рически сложившимся тривиальным названием — гематоксилин, судан, кармини т. п.).

Первым словом дается групповое обозначение — Метиловый, Метилено!вый, Ализариновый, Прямой, Кислотный, Сернистый, Кубовый, Дисперсный,Основной, Жирорастворимый, Лак и т. п.

Вторым словом в названии красителей обозначается его цвет — желтый,красный, синий и т. д., иногда с качественной характеристикой — ярко!зеленый,чисто!голубой. В некоторых случаях указывается и способ применения, напри!мер, приставка «диазо» для диазотирующихся на волокне красителей или «про!травной» для красителей, требующих предварительной протравы.

После названия цвета ставятся буквенные обозначения, указывающие на от!тенок красителя:

Ж, 2Ж, 6Ж — желтоватый,З — зеленоватый,К,2К — красноватый,С — синеватый.Буква О обозначает основной оттенок данного цвета, по отношению к кото!

рому определяются все другие оттенки данного цвета. Например, Кубовый си!ний К имеет красный оттенок по сравнению с Кубовым синим О. Цифры передбуквами указывают на усиление оттенка. Поэтому, встретив в продаже, напри!

9

мер, Нильский синий А и Нильский синий 2Б имейте в виду, что это один и тотже краситель, но имеющий разные оттенки, что в большинстве случаев не име!ет решающего значения.

10

Таблица 2Области применения некоторых флюорохромов.

(выделены наиболее часто используемые флюорохромы)

иксаркоьлеЦ морхороюлфйымеузьлопсИнозапаиД

яинеджубзовнозапаиДяинечевс

)KНР/KНД(ордЯ

йывежнаройывонидиркАтевсйобулоГ)мн094!024(

мн025

дидоимуидипорПйынелеЗ

)мн065!035(мн085

диморбмуидитЭйынелеЗ

)мн065!035(мн085

АницимоморХтевсйобулоГ)мн634!024(

мн094

нивалфиркАтевсйобулоГ)мн634!024(

мн094

85233тсхёХтелоифартьлУ)мн083!043(

мн034

GнинориПйынелеЗ

)мн065!035(мн085

тафьлусниребреБОнифсофоироK

R3нифсоФ

ырижеынчотелкиртунВ йынсаркйиксьлиНтевсйобулоГ)мн094!054(

мн025

ынотсиг/иклеБ

БнизоЭйынелеЗ

)мн065!035(мн085

РйынсаркйывонизаиТйынелеЗ

)мн065!035(мн085

нивалфофьлуСтелоифартьлУ)мн083!043(

мн034

йицьлакйынчотелкиртунВ 4однИ

иирднохотиМ 321нимадоР

ытицобморТ ниркапеМ мн553 мн524

ииреткаБ йывежнаройывонидиркАтевсйобулоГ)мн094!024(

мн025

ГЛАВА 2.СПРАВОЧНИК ПО ОТДЕЛЬНЫМ КРАСИТЕЛЯМ

Для красителей, выделенных жирным шрифтом, в главе 3 приведены наи!более популярные рецепты и способы окраски.

АЗОКАРМИН [синоним: Розиндулин]. Различают два сорта азокармина:В и G. Азокармин В легче растворяется в воде, поэтому употребляется в вод!ных растворах. Азокармин G (Ж) малорастворим в воде, поэтому его приме!няют в виде насыщенного раствора в уксусной кислоте (аналогично ацето!кармину). Применяется в гистологии для окраски соединительной ткани поГейденгайну или в сочетании с окраской по Пачини. Последний метод име!ет то преимущество, что при окраске целлоидиновых срезов целлоидин ос!тается бесцветным. Неплохие результаты дает окраска ядер и хромосом аце!то!азокармином G.

АЗОФЛОКСИН [синонимы: Кислотный ярко�красный; Амидо�нафтол красный].Применяется в гистохимии в виде 0,1% водного раствора в смеси с нафтаза!рином и хлоридом алюминия для окраски ядер и в виде 0,5% водного рас!твора для дополнительной (после гематоксилина) трехцветной окраски со!единительной ткани по методу Массона, модифицированного Гольднером.

АЗУР I [синонимы: диметилтионина хлорид; азур метиленовый]. Применяетсяв гематологии в качестве составной части сложных красителей для окраскипрепаратов крови. В настоящее время его применение ограничено.

АЗУР II Окраска ядра(ДНК/РНК)представляет собой смесь равных частей мети!ленового синего и азура I. Ранее называли Азуром В или триметилтионином.Как правило, его получали из растворов метиленовой сини при длительномстоянии в щелочной среде. Начало применению в микроскопии положил Ро!мановский в 1891 г., собственно и открывший эту реакцию. Позднейшие из!менения методик и прописей подготовки краски были связаны с улучшени!ем растворителей и удлинению срока годности красок. Так появиласьмодификация краски по Гимза и Паппенгейму, Май!Грюнвальду, Райту.Оказалось, что при стоянии смеси метиленовой синьки и эозина образова!лось новое вещество — азур II. В настоящее время широко применяется в ми!кроскопии для приготовления сложных красок, находящих применение в ге!матологических, бактериологических и гистологических исследованиях.Наибольшее практическое значение имеет готовая смесь по Романовскому!Гимза и Май!Грюнвальду. Обязательной составной частью краски при этомявляется раствор эозина — розового цитоплазматического красителя.Для получения качественной окраски используют забуференную воду.

11

Из отечественных производителей наиболее качественные смеси выпускаеткомпания «Абрис+» (Санкт!Петербург).

АКРИДИНОВЫЕ КРАСИТЕЛИ. Применяются для окрашивания натурального шел!ка и некоторых нетекстильных материалов в желтый (хромофор — водородили алкил) или оранжевый (хромофор — арил) цвет. Важнейшие акридило!вые красители — основной желтый К, основной желтый 3, акридиловыйоранжевый. Получается конденсацией ароматических м!диаминов с альде!гидами с последующей циклизацией (нагреванием с концентрированнойсерной кислоте) и окислением (обычно кислородом воздуха в присутствиисоляной кислоты). Некоторые А. к. биологически активны. Особая группаА. к. — хинакридоны линейные.

АЛИЗАРИН [синоним: 1,2�диоксиантрахинон]. Красные кристаллы, температураплавления 289°С, температура кипения 430°С; растворим в спирте, эфире,бензоле, плохо — в воде. Содержится в виде гликозида в корнях марены кра!сильной (Rubia tinctorium), откуда и добывался с древних времен и исполь!зовался как протравной краситель. В 1863 г. получен синтетически, напри!мер нагреванием (щелочным плавлением) 2!хлорантрахинона или Na!соли2!антрахинонсульфокислоты с NaOH в присутствии нитрита калия (окисли!тель). В ограниченных масштабах применяется как ярко!красный протрав!ной краситель (по алюминиево!кальциевой протраве), окрашивают хлопча!тобумажные материалы, образуется внутрикомплексные соединенияярко!красного цвета с синеватым оттенком, а также как исходный продуктв производстве краплака и некоторых др. красителей. Производные ализа!рина — ализаринкомплексон, используется как металлохромный индикаторв определении Ва, Са, Сd, Сu, In, Sr, Zn, Pb. Наиболее популярна методикаопределения кальция в сыворотке и моче человека с ализарин!комплексо!ном. В микроскопии применяется АЛИЗАРИН ЦИАНИН (марки BBS, R, G),реже сам ализарин в сочетании с хлоридом алюминия в качестве протравно!го красителя для получения очень чистой и четкой окраски ядер. Кроме того,используется как гистохимический реактив для выявления кальция.

АЛИЗАРИНОВЫЙ КРАСНЫЙ С [синонимы: ализарин�3�сульфокислоты натрие�вая соль; хромовый красный ализариновый; ализарин С]. Оранжево!желтыекристаллы; температура плавления 300°С; растворим в воде, спирте, не рас!творим в хлороформе. Реагент для фотометрического определения Al прирH 3,9!4,6, а также Sc, F (предел обнаружения Al=0,04 мкг/мл). Нашел при!менение как кислотно!основной индикатор (при рН 10,0!12,1 переход окрас!ки от фиолетовой к желтой), и металлохромный индикатор для титриметри!ческого определения Zn, Th, Sc, (переход окраски от красной к желтой).С солями двухвалентных металлов дает прочные ярко окрашенные лаки, что

12

используется в гистологии и гистохимии. Так, кальций, образуя лак, хорошоопределяется в замороженных и парафиновых срезах, в окрашенных препа!ратах кости. Лак, образованный с солями железа получил название «желез!ный ализарин» (железо!аммонийные квасцы с ализариновым красным C) и,будучи использован в одной прописи с кристаллвиолетом, интенсивно ок!рашивает в красновато!фиолетовый цвет митохондрии.

АЛИЗАРИНОВЫЙ ЖЕЛТЫЙ [синонимы: протравной желтый, салициловый жел�тый, натриевая соль 5�[(3�нитрофенол)�12�азо]салициловой кислоты]. Жел!тые кристаллы, растворяются в воде и в этиловом спирте. Кислотно!основ!ной индикатор (переход окраски от желтой к коричневой при рH 10,0!12,1).

АЛИЗАРИНОВЫЙ СИНИЙ, АЛИЗАРИНОВЫЙ ЗЕЛЕНЫЙ, АЛИЗАРИНОВЫЙ ЧЕР!НЫЙ (S и P). Группа протравных красителей, в редких случаях могут быть ис!пользованы для окраски ядер (с хромовой, реже алюминиевой протравой).

АМИДО�ЧЕРНЫЙ 10Б [синоним: кислотный сине�черный]. Применяется в мик!роскопии для окрасок гистологических препаратов; в виде насыщенногораствора в смеси 90 г метилового спирта и 10 г ледяной уксусной кислоты —для окраски продуктов электрофореза в полиакриламидном геле; в клини!ческой диагностике — при электрофоретическом исследовании сывороткикрови; для колориметрического определения содержания белка в молоке;в биохимии и гистохимии для выявления белков.

АНИЛИНОВЫЙ ГОЛУБОЙ [синонимы: анилиновый синий, фенилрозанилин].Нерастворимая в воде и растворимая в спирте анилиновая краска синегоцвета. В микроскопической технике применяются, главным образом, препа!раты анилинового синего, растворимые не в спирте, а в воде, получающие!ся путем сульфурирования его и поступающие в лаборатории в виде солейнатрия, аммония или кальция под различными наименованиями (Alkaliblau,Wasserblau, Methylblau, Chinablau, Bleu de Lyon). Растворимые в воде препа!раты анилинового синего в комбинации с кислым фуксином и оранжем ис!пользуются в различных модификациях окраски по Маллори (см. раз!дел 3.2.). Селективно связывается с коллагеновыми волокнами.

АНИЛИНОВЫЙ ЖЕЛТЫЙ. Кислотно!основной индикатор (при рH 1,3!3,3 пере!ход окраски от красной к желтой), в т. ч. для титрования слабых основанийв уксусной кислоте.

АНТРАЦЕНОВЫЙ ГОЛУБОЙ [синонимы: 1,2,4,5,6,8�гексагидроксиантрахинон].Применяется в микроскопии в смеси с сульфатом алюминия в качестве про!травного красителя для окраски ядер.

13

АУРАМИН [синоним: Канарский желтый]. Диарилметановый краситель. Желтыекристаллы, растворимые в воде, спирте, эфире. Аурамин легко гидролизи!руется, поэтому крашение им тканей в текстильной промышленности воз!можно лишь при 50!60°С. Окраски неустойчивы к действию света. Применя!ется в микробиологии и вирусологии для быстрого выявлениякислотоустойчивых бактерий. В бактериологии для обнаружения туберку!лезных бактерий методом флюоресцентной микроскопии по Хагеманну илиДегомье используется Аурамин О.

АУРИН [синонимы: Розоловая кислота; желтый кораллин; 4,4�дигидрокси�5� ме�тилфуксон; иногда розоловой кислотой называют смесь 4,4�дигидроксифук�сона и 4,4�дигидрокси�5�метилфуксона]. Красновато!коричневые кристал!лы, растворимые в спирте. Кислотно!основной индикатор (при рН 6,9!8,0переход окраски от коричневой к красной). Применяется в микроскопии длябактериологических и ботанических целей.

АУРОФОСФИН Ж. Применяется в гистохимии, ботанике, микробиологии в ка!честве флюоресцентного красителя для прижизненного флюорохромирова!ния и обработки фиксированных препаратов.

БИСМАРК КОРИЧНЕВЫЙ [синоним: везувин]. Ценная ядерная краска, относяща!яся к азокрасителям. Дает метахромазию желтоватого тона и хорошо окра!шивает слизь и хрящ. В ботанической микротехнике применяется в виде 2%спиртового раствора. Окрашивает клетчатку. В микробиологии используетсядля окрашивания дифтерийных палочек по Нейссеру.

БРИЛЛИАНТОВЫЙ ЖЕЛТЫЙ. Желтые кристаллы, получаемые азосочетанием ди!азотированной 4,4!диаминостильбен!2,2!дисульфокислоты с фенолом.В щелочной среде меняет окраску на красную. Кислотно!основной индика!тор (в щелочной среде цвет углубляется до красного). Применяется для по!лучения хризофенина.

БРИЛЛИАНТОВЫЙ КРЕЗИЛОВЫЙ СИНИЙ. Суправитальный краситель для ок!раски ретикулоцитов.

БРИЛЛИАНТОВЫЙ ЗЕЛЕНЫЙ [синонимы: основной ярко�зеленый, этиловый зе�леный]. Триарилметановый краситель. Получается конденсацией C6H5CHO cC6H5N (C2H5)2 в присутствии кислотных катионов с последующим окислени!ем продукта конденсации до карбинольного основания и обработкой соот!ветствующими кислотами или ZnCl2. Окраски малоустойчивы к действиюсвета и мокрым обработкам, вследствие чего краситель применяется глав!ным образом для окрашивания нетекстильных материалов (бумаги, древе!

14

сины), а также для изготовления фаналевых лаков. Применяется в бактери!ологических, ботанических, гистологических исследованиях в качестве кра!сителя для микроскопии. В медицине используются бактерицидные и фунги!цидные свойства этого красителя.

БРОМКРЕЗОЛОВЫЙ ЗЕЛЕНЫЙ [синоним: 3,3”,5,5”�тетрабром�м�крезолсуль�фофталеин]. Розовые кристаллы, температура плавления 218!219°С; раство!рим в воде, ледяной уксусной кислоте, бензоле, легко — в спирте, эфире,этилацетате. Кислотно!основной индикатор (переход окраски от желтойк синей при рH 3,8!5,4). Имея высокое сродство к альбумину сывороткикрови, используется для количественного определения альбумина крови.

БРОМТИМОЛОВЫЙ СИНИЙ [синоним: 3,3”�дибромтимолсульфофталеин]. Тем!но!красные кристаллы; температура плавления 200!202°С; растворим в ме!таноле, этаноле, эфире, плохо — в воде и бензоле. Кислотно!основной инди!катор (переход окраски от желтой к синей при рH 6,0!7,6), в т. ч.для титрования карбоновых кислот в акрилонитриле. Неплохо прокрашива!ет белковые отложения. Чаще используется для определения концентрациибелка.

БРОМФЕНОЛОВЫЙ КРАСНЫЙ [синоним: 3,3�дибромфенолсульфофталеин].Красновато!коричневые кристаллы; растворим в спирте, умеренно в воде.Кислотно!основной индикатор (переход окраски от желтой к красной прирH 5,2!6,8.

БРОМФЕНОЛОВЫЙ СИНИЙ. Для определения органических кислот и основанийв смеси воды и несмешивающегося с ней растворителя применяются т. н.амфииндикаторы, которые представляют собой соли кислот, служащих кис!лотно!основными индикаторами (например бромфеноловый синий).

ВИКТОРИЯ ГОЛУБОЙ С. Применяется в микроскопии для бактериологическихи гистологических исследований; для окраски вирусов по Герцбергу.

ГАЛЛОЦИАНИН [синонимы: 7�диметиламино�3H�4�окси�3�оксофеноксазин�1�карбоновая кислота; ализариновый флотский синий АТ; бриллиантовыйхромовый синий Р; ультрабриллиантовый синий Р]. Реагент на Ga и Th. Про!травной краситель, широко используется для окраски ядер (0,5% р!р в 5%железоаммиачных квасцах по Премеру), в смеси с хромовыми квасцами ре!комендован Эйнарсоном для окраски телец Ниссля. Рабочий раствор: 1%в ледяной уксусной кислоте. Применяется в микроскопии для бактериологиии гистологии.

15

ГЕМАТОКСИЛИН [синонимы: кампешевый краситель, синий сандал]. Рабочийраствор: 0,8% в уксусной сиклоте; 1% спиртовой. Реагент на Al, Bi, Cu, Th, Zr.Брутто!формула — С16H14О6. Является экстрактом из кампешевого дерева,имеет вид бурого кристаллического порошка, хорошо растворимого в спир!те и плохо — в воде. Красящим веществом является не сам гематоксилин,а продукт его окисления — гематеин (C6H12О6). В связи с этим часть гематок!силиновых красок пригодна для работы не сразу после приготовления,а только через некоторое время, в течение которого происходит окислениегематоксилина в гематеин (созревание краски). По мере созревания краскивозрастает и ее красящая способность. Созревания требуют только те гема!токсилиновые красители, которые готовятся без окислителей. В продажеесть и готовый гематеин; приготовляемые из него красящие растворы не тре!буют созревания. Гематоксилин дает окрашивание только при применениипротрав, с которыми он образует солеобразные соединения — лаки. Протра!вами являются соли хрома, железа, меди, алюминия и др. металлов. Наибо!лее употребительны следующие гематоксилиновые краски: Эрлиха, Бемера,Делафильда. Все квасцовые гематоксилины употребляют для окрашиваниятолько в свежефильтрованном виде, т. к. иначе они дают осадки в срезахи тем более обильные, чем старше гематоксилин. Эти краски вследствиепродолжающихся процессов окисления постепенно портятся, а потому их го!товят на определенный срок (от 1 до 2 лет). Менее всего устойчив гематокси!лин Бемера, он сохраняется примерно 1 год. Гораздо более стойки (до 2 лет)гематоксилины Эрлиха и Делафильда. Перезревшие гематоксилины при ок!рашивании дают красноватый оттенок.

ГЕНЦИАНОВЫЙ ФИОЛЕТОВЫЙ [синоним: генцианвиолет] Представляет собойсмесь метилвиолета и кристаллвиолета. Один из наиболее распространен!ных красителей. Применяется в водных и спиртовых растворах. Быстро вы!мывается спиртами. Окрашивает ахроматиновые элементы в митотическихфигурах, окрашивает мицелий грибов, причем часто дифференцирует ми!целий и конидиеносцы. Применяется в гистологии для окраски ядер и маз!ков, фиксированных осмиевой кислотой, а также для последовательной ок!раски фиксированных препаратов сафранином, генциановым фиолетовым,оранжевым Ж при выявлении центросомы, нитей веретена, лигниновых ни!тей, полярной лучистости и других ахроматиновых структур клетки.

ДАЛИЯ ФИОЛЕТОВЫЙ. Краситель для микроскопии. Применяется в гистологиидля метахроматического выявления амилоида и для окраски аксона нерв!ных клеток.

ДИАЗОЛИ. Принятое название диазосоединений ароматических аминов, устой!чивых к длительному хранению. В азосочетание с азосоставляющими всту!

16

пают при растворении без предварительной обработки. Производные4!аминодифениламина стабильны в виде хлорида диазолия. Диазоли — по!рошки от светло!серого до коричневого цвета, хорошо растворимы в воде;при нагревании могут взрываться. В названиях диазолей рядом со словом«диазоль» стоят слово и индекс (буква), указывающие цвет и оттенок наи!более важного красителя, получаемого с участием данного диазоля (напри!мер, диазоль оранжевый О, диазоль красный 4С). Получаются диазоли об!работкой диазотированного амина при 0!5°С раствором хлорного цинкаили натриевой соли кислоты, после чего диазоли выделяют, смешиваютс наполнителем, например, сульфатом алюминия, и сушат при 50°С. Борф!тористоводородные соли получают обработкой диазотированного аминараствором буры и фтороводорода при 3!5°С. Диазоли — диазосоставляю!щие (азосоставляющие — азотолы) применяют для холодного крашенияцеллюлозных волокон. Применение диазолей исключает на текстильныхпредприятиях стадию диазотирования. Диазоли алый 2Ж, К применяютсяв гистохимии ферментов в качестве диазосоставляющей для выявления кис!лой фосфатазы методом одновременного азосочетания. Диазоль бордоприменяется в гистохимии ферментов в качестве диазосоставляющей длявыявления щелочной фосфатазы. Диазоль гранат Ж применяется для гисто!логических целей, диазоли красный А, К, ТР, диазоли синий О, С — как диа!зосоставляющие. Диазоль красный Ж применяется в гистохимии для выяв!ления ароматических аминов и фенолов по Пирсу. Диазоль розовыйО применяется в качестве диазосоставляющей для проведения фенилгидра!зин!формазановой реакции на альдегиды и для выявления гранул арген!таффинных клеток. Диазоль синий 2К применяется в гистологии ферментовв качестве диазосоставляющей для выявления неспецифических эстераз,щелочной фосфотазы, β!глюкуронидазы и фосфатазы лейкоцитов в мазкахкрови. Диазоль синий 2С применяется в качестве диазосоставляющей в ге!матологических и гистологических исследованиях. Диазоль фиолетовыйиспользуется как диазосоставляющее в гистологии. Диазоль черный К при!меняется в гистохимии для выявления кислой фосфатазы. Диазоль черныйС применяется в качестве диазосоставляющей для выявления щелочной фо!сфомонэстеразы.

КАРМИН [синонимы: кошениловый карминовый, карминовая кислота, кар�мин 40NF]. Красные кристаллы, температура плавления 136°С, растворимв воде, спирте, концентрированной серной кислоте, растворах щелочей, не!растворим в бензоле, хлороформе. Добывается из насекомых Coccus cacti —тли кошенили. Поэтому продаваемые сорта различны по своему качествуи составу. Кармин, который раньше был основным красителем гистологов,в настоящее время используется все реже. Относится к протравным ядернымкрасителям. Используются для окраски биологических объектов лаки кар!

17

мина с литием, алюминием, бором. Наиболее известен литиевый карминОрта, квасцовый кармин Мейера, борный кармин. В цитологии для окраскихромосом часто используют насыщенный раствор кармина в 45% уксуснойкислоте. Комплексонометрический индикатор для определения лантанои!дов при рН 3,7 (переход окраски от фиолетовой к желтой), реагент для лю!минесцентного определения бора, фотометрического определения бораи таллия. Реагент на другие редкоземельные элементы.

КИСЛОТНЫЕ КРАСИТЕЛИ. Содержат сульфогруппы, реже карбоксильные груп!пы, иногда — гидроксильные группы вместе с нитрогруппами. Обычно выпу!скаются в виде натриевых солей, которые лучше растворяются в воде. В вод!ных растворах они диссоциируют с образованием цветных анионов.Красители обладают сродством к волокнам, имеющим амфотерный харак!тер. Номенклатура кислотных красителей несколько отличается от общепри!нятой для других групп. Так, первым словом в названии красителя указыва!ется его принадлежность к кислотным красителям, например, Кислотныйрубиновый Н2СМ. Буква Н перед буквенным обозначением указывает наспособ крашения шерсти из нейтральной ванны. Буква М означает, что кра!ситель является металлсодержащим. В биологической микроскопии приме!нение кислотных красителей довольно ограничено. Чаще всего они приме!няются в комплексном окрашивании для докраски или в отдельныхспецифических методиках. Кислотный алый применяется в микроскопиидля гистологических и гистохимических исследований, в частности для диф!ференцирования основных белков, типа гистонов по Хидену. Кислотныйбордо применяется в микроскопии в качестве красителя для дополнитель!ной окраски после гематоксилина и других ядерных красителей. Кислотныйпрочный фуксиновый Б (азофуксин) применяется в микроскопии, в частно!сти, в виде 1% водного раствора для дополнительной окраски после гемола!уна и дифференцировки в алюмокалиевых квасцах с целью выявления эле!идина по Мартинотти. Кислотный ярко!голубой применяется в гистохимииферментов в виде лейкоформы для выявления пероксидазы, окрашиваю!щейся под действием красителя в зеленовато!синий цвет.

КОНГО КРАСНЫЙ [синоним: конгорот]. Красно!коричневые кристаллы, раство!римы в воде, спирте, нерастворимы в эфире. Получается азосочетаниембис!диазотированного бензидина с нафтионовой кислотой. Прямой краси!тель. Окраска несветопрочна и изменяется под действием сильных кислот досиней, вследствие чего для крашения тканей не применяется и используетсяв качестве индикатора на минеральные кислоты. При действии слабых кис!лот, например, карбоновых типа уксусной, протонируется только одна азо!группа (образующийся краситель имеет серо!фиолетовый цвет). Применя!ется в обычной микроскопии для бактериологических, ботанических,

18

и гистологических исследований, в частности для выявления поливинилпир!ролидона, амилоида по Бенихольду, для биологических окрасок, эластич!ных нитей и каротина, для прижизненной обработки объектов и в качестведобавки к питательным средам (лактоза конго красный). В цитологии при!меняется в виде 0,5% растворов. Хорошо окрашивает мицелий грибов.В флюоресцентной микроскопии в качестве дополнительного красителя дляконтрастирования микроскопической картины. При растворении в воде да!ет коллоидные растворы, которые очень удобны для изучения внутриклеточ!ного пищеварения. Дополнительным плюсом служит его способность в за!висимости от кислотности среды менять окраску.

КРИСТАЛЛИЧЕСКИЙ ФИОЛЕТОВЫЙ [синоним: кристаллвиолет]. Темно!фио!летовые с бронзовым блеском кристаллы; растворим в воде, спирте, и мно!гих других полярных органических растворителях. Получается из деметила!мина: действием n!(CH3)2NC6H4CHO c последующим окислением,конденсацией с кетоном Михлера в присутствии РОСl3 или взаимодействи!ем с СH2О. Кислотно!основной индикатор в водной (при рH 0,8!2,6 переходокраски от зеленой к синей) и неводной (для титрования карбоновых кислотв ледяной уксусной кислоте) средах. В остальных областях применения вы!теснен более дешевым красителем основной фиолетовый. Применяетсяв микроскопии в сочетании с йодом для определения грам!положительныхмикроорганизмов, окраски хромосом на срезах, как составная часть раство!ра Ниссера для окраски дифтерийных палочек и как добавка к питательнымсредам; в гистологии в качестве компонента красителя Вейгерта для окраши!вания эластичной ткани и срезов железным ализарином!кристаллвиолетомпо Бенда для выявления митохондрий.

МАЛАХИТОВЫЙ ЗЕЛЕНЫЙ Часто применяется в комбинации с конго. Применя!ют крепкие 3!7% водные растворы. Окрашивают клетчатку. Широко приме!няется для окраски в бактериологии. Применяется в микроскопии для бота!нических и гистологических исследований: для окраски гистологическихсрезов и спор микроорганизмов, в качестве добавки к питательным средам(агар!малахитовый зеленый по Лефлеру).

МЕТИЛЕНОВЫЙ ГОЛУБОЙ [синонимы: метиленовый синий, метиленовая синь].Кристаллы с бронзовым блеском; растворимы в воде с окрашиванием рас!твора в темно!синий цвет, спирте, хлороформе. Получен совместным окис!лением вначале n!(CH3)2NC6H4NH2 c Na2S2O3, а затем и с C6H5N(CH3)2 (окис!литель — бихромат натрия в разбавленной серной кислоте) c последующейциклизацией и обработкой ZnCl2 и HCl. Основной тиазиновый краситель.Окрашивает хлопок (по таниновой протраве) и шелк в ярко!голубой цвет,однако окраски малоустойчивы к действию света, вследствие чего Метиле!

19

новый голубой для крашения текстильных материалов не используется.Применяется для получения фаналевых лаков, металлохромный индикатордля определения Мg, Ca, Cd, Co2+, Ni, Zn при рH 10; окислительно!восстано!вительный индикатор (приобретает синюю окраску); реагент для обнаруже!ния некоторых анионов, например, ClO4; наружный и внутренний антисеп!тик; антидот при отравлениях цианидами, угарным газом и сероводородом;для окрашивания бумаги, для изготовления цветных карандашей и полигра!фических красок (в последнем случае обычно применяется гидрат двойнойсоли с хлористым цинком). Применяется в лазерной технике. Из!за низкойсветостойкости в крашении тканей не применяется. Данный краситель ши!роко применяется в микроскопии в виде водных и спиртовых растворов.Входит как важная составная часть во многие красящие растворы, напри!мер, метиленовый синий по Леффлеру, в бактериологии раствор метилено!вого синего в разведении 1:40, для прижизненных (витальных) окрасок раз!ведение 1:5000.

МЕТИЛОВЫЙ ЗЕЛЕНЫЙ [синоним: двойная цинковая соль]. Трифенилметано!вый краситель, производное кристаллвиолета. Применяется для выявленияДНК (при окрашивании смесью метиловый зеленый — пиронин), уксусно!кислый раствор метилового зеленого используется в биологии для быстройокраски ядер простейших. В виде 1% водного раствора — краситель для од!ревесневших оболочек. В иммунологии нашел широкое применение дляподкраски препаратов в НСТ!тесте для контрастирования образовавшегосяформазана в нейтрофилах и моноцитах.

МЕТИЛОВЫЙ ЖЕЛТЫЙ [синонимы: деметиловый желтый, п�диметиламиноаазо�бензол, масляно�желтый]. Оранжево!желтые кристаллы; температура плав!ления 114!117°С; растворим в спирте. Кислотно!основной индикатор (пере!ход окраски от красной к оранжево!желтой при рН 2,9!4,0). применяетсяв микроскопии очень ограничено — только в некоторых случаях для окраскижиров и в комбинации с другими красителями. Основная область примене!ния — в виде индикатора при титровании.

МЕТИЛОВЫЙ КРАСНЫЙ [синонимы: п�диметиламинобензол�2�карбоновая кис�лота]. Фиолетовые кристаллы, температура плавления 175°С (с разложени!ем), плохо растворим в воде, хорошо — в спирте и ледяной уксусной кисло!те. Выпускается также в водорасторимой форме в виде Nа!соли.Кислотно!основной индикатор (при рН 4,4!6,2 переход окраски от краснойк желтой), в т. ч. для титрования аминов в 1,4!диоксане и хлороформе, ад!сорбционный индикатор для аргентометрии (переход окраски от желтойк оранжево!красной).

20

МЕТИЛОВЫЙ ОРАНЖЕВЫЙ [синонимы: п�(п�диметиламинофенилазо) бензо�сульфонат натрия, гелиантин]. Оранжево!желтые кристаллы, растворимв воде, нерастворим в спирте. Получается азосочетанием диазотированнойсульфаниловой кислоты с диметиланилином. Кислотный желтый краситель,непригодный из!за чувствительности к кислотам для окрашивания каких!либо материалов, но являющийся благодаря этому одним из важнейшихкислотно!основных индикаторов. При подкислении до рН 3,1 окраска изжелтой переходит в оранжевую в результате образования соли, строение ко!торой отвечает гидразоновой формуле. Применяется в микроскопии для ги!стологических целей.

МЕТИЛОВЫЙ ФИОЛЕТОВЫЙ [синонимы: основной фиолетовый К, метилвио�лет]. Фиолетовые кристаллы, растворим в воде, ограничено — в полярных ор!ганических растворителях. Смесь триарилметановых красителей схожегостроения, получаемая окислением диметиланилина кислородом воздухав присутствии СuSO4 с последующей обработкой соляной кислотой. Окраскаотличается яркостью, но малоустойчива к действию света. Краситель исполь!зуют для изготовления полиграфических красок, фиолетовых чернил, копи!ровальной бумаги, штемпельных красок, карандашей, лент для пишущих ма!шинок, а также для получения фаналевых лаков. Применяется также каккислотно!основной индикатор (при рН 0,2!3,2 переход окраски от желтойк фиолетовой). Применяется в гистохимии для метахроматического выявле!ния амилоида, в бактериологии — для окраски по Граму.

МУРЕКСИД [синоним: аммоний пурпуровокислый]. Темно!красные кристаллы,растворим в воде (0,17% при 20°С), хуже — в спирте, нерастворим в эфире.Комплексонометрический индикатор для определения кальция при рН>10,Zn при рН 8!9, Ag при рН 10!11,5 (переход окраски от розовой или краснойк фиолетовой), Со при рН 8!10, Сu при рН 7!8, Sb при рН 2,6 (от оранжевойк красной), Ni при рН 8,5!11,5 (от желтой к пурпурной), Th при рН 2,5 (отжелтой к розовой); реагент для фотометрического определения Ca, Sr и не!которых других элементов. Применяется в гистохимии в качестве насыщен!ного раствора в 0,1 н растворе KCN в качестве лакообразующего соединениядля выявления отложения кальция. В гематологии в качестве металлоинди!катора для определения кальция в сыворотке крови.

НЕЙТРАЛЬНЫЙ КРАСНЫЙ [синонимы: толуиленовый красный, нейтральрот].Применяется в основном в водных растворах. Чаще всего нейтральный крас!ный используют как прижизненный (витальный) краситель при микроскопиипростейших, водорослей, грибов при разведении 1:10000. Более концентри!рованные растворы используют при бактериологических, ботанических и ги!стологических окрасках. Иногда используется для окраски ядер.

21

НИЛЬСКИЙ СИНИЙ [синонимы: сульфат нильский голубой, нильблаусульфат,нильский синий А, сульфат основной оксациновой краски нильблау]. В вод!ных растворах эта краска диссоциирует на синюю соль (окрашивающуюв синий цвет ядра и протоплазму клеток) и красное основание (растворимоев жирах). Эта краска неодинаково окрашивает жиры и различные жиропо!добные вещества: нейтральные жиры — в розовый цвет, эфиры холестери!на — в розово!фиолетовый, фосфатиды и цереброзиды — в голубой, жир!ные кислоты и мыла — в темно!синий. Окрашенные препараты требуютнемедленного исследования, т. к. при длительном хранении все закрашива!ется в один синий цвет. Окраска имеет ориентировочное значение — позво!ляет разбираться в природе жировых веществ и служит дополнением к дру!гим способам окраски. Она заслуживает внимания в тех случаях, когда нетвозможности использовать для дифференцировки жиров и жироподобныхвеществ более совершенные способы, например, исследование в поляризо!ванном свете. Применяется в микроскопии в качестве жирорастворимогокрасителя для выявления липидов. Реже применяется в качестве витального(прижизненного красителя) в разведении 1:1000. Хорошо окрашивает в жи!вом виде мицелий мучнисторосяных грибов. Применяется для окраски сито!видных трубок (48 часов в 0,001% водном растворе нильского синего, затем70° спирт, докраска 1% эозином). Иногда нильский синий готовят на насы!щенном растворе пикриновой кислоты в 50° спирте.

НИТРАЗИНОВЫЙ ЖЕЛТЫЙ [синоним: динатриевая соль 2,4�динитробензолазо�1�нафтол�3,6�дисульфокислоты]. Красные кристаллы, растворим в водеи 80° спирте. Кислотно!основной индикатор (при рН 6,4!6,8 переход окра!ски от ярко!желтой к синей). Применяется в микроскопии для гистологичес!ких целей.

ОРАНЖЕВЫЙ G [синоним: оранж G]. Один из важнейших цитоплазматическихкрасителей. В микроскопии используется для второй окраски, т. е. для под!краски цитоплазмы после окраски ядерными красителями.

ОРСЕИН [синоним: орцеин]. Принадлежит к группе ядерных красителей. Иногдаего применяют для окраски эластической ткани. Основным «местом» приме!нения орсеина является окраска хромосом (делящихся клеток) и выявленияядерного хроматина при скрининговых цитогенетических исследованиях. Ис!пользуют в виде насыщенного раствора на уксусной кислоте (ацетоорсеин).

ОСНОВНОЙ КОРИЧНЕВЫЙ 4К. Применяется в микроскопии для окраски бакте!риологического и гистологического материала.

ПАРАФУКСИН КИСЛЫЙ. Принадлежит к группе цитоплазматических красите!

22

лей. Используется нечасто. Является вторым окрашивающим компонентом.

ПАРАФУКСИН ОСНОВНОЙ [синонимы: парарозанилина гидрохлорид, тетраги!драт]. Один из основных красителей. Применяется для окраски ядер илидругого базофильного материала в ботаническом, гистологическом и бакте!риологическом исследованиях. Иногда используют вместо основного фук!сина для приготовления реактива Шиффа.

ПИРАЗОЛОНОВЫЙ ЖЕЛТЫЙ [синоним: тартразин]. Применяется в гистохимиидля окрашивания муцинов.

ПИРОНИН Б. Применяется в гематологии для окраски форменных элементовкрови.

ПИРОНИН Ж. Принадлежит к группе флюоресцентных красителей и нашел ши!рокое применение в люминесцентной микроскопии ботанических, зоологи!ческих, гистологических, микробиологических объектов.

ПРЯМЫЕ КРАСИТЕЛИ. Разнородная группа красителей, сведения о которыхпредставлены в табл. 3.

Таблица 3Наиболее часто применяемые прямые красители.

РОДАМИН G [синонимы: моногидрохлорид этилового эфира 2�[6�(этиламино)�3�(этиламино)�2,7�диметил�3,4�ксантен�9�ил]�бензойной кислоты]. Фио!летовые кристаллы, растворимые в воде и спирте. Реагент для экстракцион!но!люминесцентного определения In; люминесцентный кислотно!основнойиндикатор (при рН 1,0!1,3 цвет люминесценции меняется от оранжевогок розовому). В микроскопии нашел применение Родамин 6G как красительдля люминесцентной микроскопии.

РОДАМИН С [синоним: родамин В]. Красно!фиолетовые кристаллы, температу!ра плавления 210°С (с разложением), растворим в воде, спирте, ацетоне. Ре!

23

еинавзаН еиненемирП

йывозюрибйомярП яицьлакйинежолтояинелвяывялдиимихотсигВ

йынсаркйомярПогоньлетинлоподметупвоницумяинелвяывялдиимихотсигВ

яинавишарко

йывозорйомярПиатрипсоговолинивилопяинелвяывялдиимихотсигВ

анодилорриплинивилоп

йобулог!отсичйомярП .анартскедяинелвяывялдиимихотсигВ

агент для люминесцентного определения Gl. Наиболее часто родамин С ис!пользуют в ботанической цитологии, гистологии, энтомологии, микробио!логии в качестве красителя люминесцентной микроскопии для прижизнен!ного окрашивания нейтральных растительных жиров, митохондрий,цитоплазмы.

СУДАНЫ. Среди этих азокрасителей, объединенных нами под одним общим на!званием, различают несколько красителей, хорошо знакомых гистологам:Судан I, Судан II, Судан III, Судан черный. Практически все они обладают од!ними и теми же свойствами — окрашивают нейтральные жиры.

CУДАН II [синоним: жирорастворимый оранжевый 2К]. Относится к классу азо!красителей. Применяется в микроскопии в качестве красителя.

СУДАН III [синоним: жирорастворимый красный Ж]. Нейтральный азокраситель;нерастворим в воде, растворим в спирте, ацетоне, жирах. Продажный суданIII представляет собой смесь нескольких красителей: суданов красного,оранжевого и желтого; количественные соотношения их в разных сортах не!одинаковы. Судан желтый является примесью, бесполезной для окраски жи!ра. Основное применение судан III нашел в гистологии и цитологии для об!наружения жиров и липоидов. Окраска основана на экстракции красителя изспирта более хорошим растворителем — жиром. Судан III позволяет обнару!жить все жиры. По их окраске можно с некоторой вероятностью говоритьо типе жира. Так наиболее интенсивно окрашиваются нейтральные жиры —в ярко красный цвет, холестерин и его эфиры — в желтовато!красный цвет,а фосфатиды и цереброзиды — в бледно!желтый. Интенсивность окраскичаще всего зависит от свежести материала, имеет значение и продолжитель!ность окрашивания. Еще больше снижает ценность такой окраски и тот факт,что в гистологическом материале жиры и жироподобные вещества встреча!ются в смешанном виде.

САФРАНИНЫ. Группа азиновых красителей, производные 9!фенилфеназинасходного строения. Простейший сафранин — феносафранин, получаетсяокислением смеси п!фенилендиамина и анилина бихроматом калия, при!меняется как десенсибилизатор в фотографии. Наиболее известен сафра!нин Ж, который получают окислением эквимолярной смеси п!толуилен!диамина, о!толуидина и анилина бихроматом калия в кислой среде,при этом образуется смесь изомеров и гомологов (содержат 1!3 метиль!ные группы), которые близки по цвету и свойствам. Сафранины — вишне!во!красные красители, обладают низкой светостойкостью. Применяютсядля крашения бумаги и кожи, десенсибилизаторы в фотографии. В микро!скопии применяют в качестве основных красителей сафранины Ж, А или

24

О. Сафранин О выявляет большее количество субклеточных структур, чемазур А или тионин. Его часто используют для получения свежих солей ди!азония, окрашивающих энтерохромафинные гранулы в сине!черный цвет.Применяется в микроскопии для бактериологических, ботанических и ги!стологических исследований.

ТИОНИН 2!водный [синонимы: 7�амино�3�имино�3H�фенотиазин, фиолетовыйЛаута]. Реагент для определения Al, Fe2+, Hg2+, Pb. Применяется в обычноймикроскопии для выявления мукополисахаридов, базофилии клеток и тиг!роидных телец в нервных клетках. По Уиндлу и Ласки в микологии — для ди!ференциальной окраски мицелия патогенных грибов в тканях растений. Ок!рашивает флоэму в фиолетовый цвет. Применяют чаще в виде 0,1%раствора в карболовой кислоте.

ТИАЗИНОВЫЙ КРАСНЫЙ. Применяется в микроскопии в качестве красителя длягистологии и для флюоресцентной микроскопии.

ТОЛУИДИНОВЫЙ ГОЛУБОЙ. Применяется в микроскопии для гистологическихисследований и в качестве красителя для флюоромикроскопии.

ТРИПАНОВЫЙ ГОЛУБОЙ. Применяется в микроскопии для гистологических це!лей и как краситель для прижизненного окрашивания по Гольдману.

ТРИПАНОВЫЙ КРАСНЫЙ. Применяется в микроскопии для окрашивания гисто!логических препаратов и как витальный краситель.

ТРОПЕОЛИН 00 [синонимы: оранжевый IV, натриевая соль 4�фениламиноазо�бензол�4�сульфокислоты, дифениламиновый оранжевый, оранжевый GS,оранжевый N, прочный желтый, кислотный желтый Д, анилиновый желтый].Оранжево!желтые кристаллы, растворим в воде и спирте. Кислотно!основ!ной индикатор (при рН 1,3!3,3 переход окраски от красной к желтой), в томчисле для титрования слабых оснований в среде уксусной кислоты. Приме!няется в микроскопии.

ТРОПЕОЛИН 000 [синонимы: кислотный оранжевый, оранж II]. Применяетсяв микроскопии.

ФЕНОЛОВЫЙ КРАСНЫЙ [синонимы: фенолсульфофталеин, сульфенфталь].Красные или коричневые кристаллы, растворим в спирте, плохо растворимв воде. Выпускается также в водорастворимой форме в виде натриевой илиаммонийной соли. Кислотно!основной индикатор (при рН 6,4!8,2 переходокраски от желтой к красной). Применяется в микробиологии в качестве ин!

25

дикатора для тканевых культур и как добавка к питательным средам.

ФЕНОЛФТАЛЕИН. Кристаллы, температура плавления 259!263°С, плохо раство!рим в воде, растворим в спирте и эфире. Кислотно!основной индикатор(при рН 8,2!10 приобретает малиново!красный цвет), слабительное средст!во (пурген). Применение: как исходный продукт для получения фенолфта!леинфосфата и других производных.

ФЕНОСАФРАНИН. Применяется в бактериологии в качестве красителя, в гисто!химии для выявления сурамина, в качестве восстановительно!окислитель!ного индикатора.

ФЛОКСИН. Применяется в микроскопии для ботанических и гистологическихисследований.

ФЛЮОРЕСЦЕИН. Применение: краситель для люминесцентной микроскопии,проточно!цитометрического анализа. Широкое применение нашла соль —флюоресцеина изотиацианат. Его используют как метку различных антител.При возбуждении ультрафиолетом или крайним фиолетом светится ярко!зеленым светом.

ФОСФИН. Применяется в флюоресцентной микроскопии в качестве красителяпри определении жировых включений в гистопрепаратах.

ФУКСИНЫ. Ярко!красные триарилметановые красители. Кристаллы, раствори!мы в воде. Наиболее известны: собственно фуксин (смесь нескольких краси!телей), получаемый совместным окислением анилина, о! и п!толуидиновнитробензолом в присутствии FeCl3 при 100!175°С; парарозанилин, синтези!руемый конденсацией формальдегида с анилином и о!толуидином. Окрас!ки обличаются яркостью, но невысокой устойчивостью, особенно к дейст!вию света. Используются фуксины главным образом для окрашивания нетекстильных материалов (бумаги, кожи и др.), а также для приготовлениякрасных чернил, карандашей. Для окрашивания нетекстильных материаловиспользуются и трисульфокислоты фуксинов, имеющие по одной сульфо!группе в каждом бензольном кольце. Продукт присоединения 3 молекулН2SО3 к собственно фуксину (т. н. фуксинсернистая к!та) — аналитическийреагент на альдегидную группу. В практических целях применяются Фуксинкислый и Фуксин основной.

ФУКСИН ОСНОВНОЙ [синоним: мажента]. Ядерный краситель. Применяетсяв обычной микроскопии для бактериологических, ботанических, гистологи!ческих целей (см. раздел 3.1.).

26

ФУКСИН КИСЛЫЙ. Цитоплазматический краситель, окрашивает соединитель!ную ткань (эластические волокна). Используется для приготовления пикро!фуксина, окраске по Маллори (см. раздел 3.2.).

ХИНОЛОВЫЙ СИНИЙ. [синоним: цианин]. Применяется в микроскопии для ок!рашивания жиров, костного слоя, одревеснелых мембран.

ХРИЗОИДИН. Индикатор, применяется в микроскопии для цитологических, эн!томологических и гистологических исследований и в качестве витальногокрасителя, в бактериологии — для окраски дифтерийных палочек.

ЦИАНАЛ ГОЛУБОЙ 43 [синоним: альциановый синий]. Применяется в качествеспецифического красителя на муцины.

ЭВАНСА ГОЛУБОЙ [синоним: синий Эванса]. Применяется в гистохимии дляприжизненного окрашивания мукополисахаридно!протеиновых ком!плексов. Широко используется в иммунофлюоресцентном анализе дляподкрашивания фона препарата. При этом структуры, окрашенные спе!цифическими антителами, светятся ярко!зеленым светом (за счет флюо!ресцеина) а все остальные структуры — темно красные за счет флюорес!ценции синего Эванса.

ЭОЗИН [cиноним: 1,3,6,8�тетрабромфлюоресцеин]. Синтетический краситель,тетрабромпроизводное флюоресцина. Получается действием брома нафлюоресцеин в присутствии NaClO3. Красные кристаллы. Натриевая соль —кислотный краситель (окрашивает натуральный шелк в ярко!розовый цветс желтой флюоресценцией). Из!за низкой устойчивости к действию светаприменяется главным образом для приготовления красных чернил и каран!дашей, губной помады, румян, для окрашивания бумаги, моторных топлив,биологических препаратов, парфюмерных изделий, как компонент полигра!фических красок; динатриевая соль эозина (эозин желтоватый, эозин Н) —кислотно!основной люминесцентный индикатор (при рН 1!3 появляется зе!леная люминесценция); адсорбционный индикатор для аргенометрическогоопределения Вr и I (цвет люминесценции меняется от красного к фиолетово!му). Выделяют в виде натриевой, калиевой и аммониевой соли. Различаютмного сортов эозина, из них наибольшее распространение имеют эозинжелтый (растворимый в воде), голубоватый (растворимый в спирте), эрит!розин (растворимый только в спирте). Среди отечественных марок различа!ют эозины: К (калий) и Н (натрий), оба водорастворимые, применяютсяв микроскопии; эозин БА применяется в медицине в качестве диагностичес!кого реактива при анализе крови. Употребляются эозины в 0,25!0,5% вод!ных и спиртовых растворах. Для приготовления спиртовых растворов можно

27

пользоваться любым сортом эозина и брать спирт различной крепости (от40 до 70°); они окрашивают сильнее водных. Иногда пользуются раствора!ми эозина, подкисленными уксусной кислотой, примерно из расчета 1 каплякрепкой уксусной кислоты на 100 мл раствора эозина (подкислять лучшеспиртовые растворы эозина, ибо водные с течением времени могут мутнетьи давать осадки). Такие подкисленные растворы показаны в том случае, ког!да ткани плохо воспринимают обычный (не подкисленный) краситель. Рас!творы эозина розового цвета, в такой же цвет они окрашивают и ткани. Сро!ки окрашивания весьма различны (от 5!10 секунд до 3!5 мин) и зависят отсорта, способа приготовления и концентрации красителя.

ЭРИОГЛАУЦИН А [синонимы: азур синий АЕG, альфазурин FG, патентный кар�миново�синий]. Окислительно!восстановительный индикатор (переход ок!раски от зеленой к синевато!красной).

ЭРИОХРОМ СИНЕ!ЧЕРНЫЙ С. Применяется в микроскопии для окрашивания.

ЭРИОХРОМ ЧЕРНЫЙ Т. Применяется в гистохимии для выявления кальция в тка!нях беспозвоночных.

ЭРИТРОЗИН [синоним: 1,3,6,8�тетраиодфлюоресцеин]. Красные кристаллы.Растворяется во многих органических растворителях, плохо в воде. Получа!ется действием иода на флюоресцеин в присутствии КIO3. Применение: кис!лотный красный краситель для натурального шелка (устойчивость окрасокк свету невысокая); пищевой краситель (разрешен в большинстве стран);для окрашивания бумаги, косметических средств; для приготовления чер!нил, карандашей, лаков, полиграфических красок. Применяется в микро!скопии для микробиологических, гистологических исследований.

ЭРИТРОЗИН ЖЕЛТОВАТЫЙ. Применяется в микроскопии для бактериологичес!ких и гистологических исследований.

ЭТИДИУМ БРОМИД. Широко распространенный краситель для окрашиванияДНК, ядер и хромосом в люминесцентной микроскопии, проточной цитоме!трии. Также флюоресцентный краситель для окраски ДНК при ПЦР! илиЛЦР!анализе (внесенный в гели и буферы для электрофореза, окрашиваетДНК в ярко!красный цвет. Результат наблюдают в лучах ультрафиолетовойлампы.

ЯДЕРНЫЙ ПРОЧНЫЙ КРАСНЫЙ [синоним: кальциевый красный]. Применяетсяв микроскопии для гистологических целей.

28

ЯНУС ЗЕЛЕНЫЙ. Применяется в микроскопии в качестве красителя для прижиз!ненного окрашивания митохондрий и лейкоцитов; для прижизненного ок!рашивания хондриосом, грибков, простейших животных и крови. Наиболеепопулярен для прижизненного выявления митохондрий. С этой целью ис!пользуют 0,01!0,05% водные растворы. Препараты не рекомендуется на!крывать покровным стеклом, т. к. для полноценной окраски требуется нали!чие кислорода.

29

ГЛАВА 3.НАИБОЛЕЕ ИЗВЕСТНЫЕ РЕЦЕПТЫ КРАСИТЕЛЕЙ И СПОСОБОВ ОКРАСКИ

3.1. Рецепты красителей3.1.1. Анилиновый черныйАнилиновый черный. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1,5 гСпирт 96 град.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50 мл80% уксусная кислота . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 млВода дистиллированная . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40 млВсе компоненты смешивают и добиваются растворения красителя. Отстаива!

ют при комнатной температуре 3 дня. После фильтрации краситель готов.

3.1.2. Бриллиантовый крезиловый синий1 г сухого красителя растворяют в 100 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Ис!

пользуется для суправитальной окраски ретикулоцитов в медицинских клиниче!ских исследованиях. Для этого смешивают раствор краски и крови 1:1 и через 20минут делают мазок на предметном стекле.

3.1.3. ГаллоцианинГаллоцианин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,15 гХромовые квасцы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5,0 гВода . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 мл5 г хромовых квасцов растворяют в 100 мл воды и добавляют 0,15 г галлоци!

анина. Смесь встряхивают, а затем нагревают до кипения. Кипятят 5 мин. Послеэтого раствор охлаждают, фильтруют и доводят объем водой через фильтр до100 мл. Краситель должен иметь рН 1,6. Галлоцианин с хромовыми квасцами да!ет соединение краплак!катион, который с фосфатными группами нуклеиновыхкислот (ДНК, РНК) образует соли темно!синего цвета. Чтобы исключить влияниебелков, окрашивание нуклеиновых кислот нужно вести при рН 1,5!1,6. Окраши!вание продолжается до 2 суток.

3.1.4. Гематоксилины3.1.4.1. Гематоксилин Эрлиха

Гематоксилин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 гСпирт 96° . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 млГлицерин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 млВода дистиллированная. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 млЛедяная уксусная кислота . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 млКвасцы алюмокалиевые . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 г2 г гематоксилина растворяют в 100 мл спирта прибавляют последовательно

воду, глицерин, квасцы и уксусную кислоту. Полученный раствор наливают

30

в широкогорлую банку, завязывают марлей и в таком виде оставляют стоять насвету для созревания. Краска созревает долго (самое раннее использование че!рез 14 дней), в течение нескольких недель и месяцев. Вначале красящий растворимеет светло!коричневый цвет, а по мере созревания становится темно!вишне!вым и приобретает приятный запах; при этом краска значительно усыхает. Со!зревший раствор фильтруют и хранят в плотно закрытой посуде. Достаточно со!зревшая краска окрашивает срезы в течение 3!5 минут.

Гематоксилин Эрлиха является одним из лучших красящих растворов гема!токсилина. В отличие от других, он может быть использован и для окраски поспособу Ван!Гизон (вместо железного гематоксилина Вейгерта).

3.1.4.2. Гематоксилин Генденгайна (железный гематоксилин Генденгайна)

Данный гематоксилин относится к протравным вариантам красителя, т. е.для правильной окраски препараты необходимо протравить раствором квасцов.В способе Генденгайна используется протрава 3% раствором железо!аммоний!ных квасцов (квасцы должны быть обязательно прозрачно!фиолетовыми).

0,5 г (по другим рецептам 1 г) гематоксилина растворяют в 10 мл спиртаи прибавляют 90 мл воды. После этого раствор должен «созревать» в открытомсосуде не менее 3!4 недель. Перед использованием разбавляют в 2 раза водой.

Препараты на сутки помещают в протраву, промывают и на сутки кладут в ге!матоксилин.

3.1.4.3. Гематоксилин Бемера40 г простых алюмокалиевых квасцов растворяют при нагревании в 400 мл

дистиллированной воды; после охлаждения фильтруют в широкий стакан, вли!вают 20 мл 10% спиртового раствора гематоксилина (на 96° спирте) и завязыва!ют стакан марлей. Оставляют стоять на свету, лучше на солнце, на 2!3 недели длясозревания. Только что приготовленная краска представляет прозрачную блед!но!фиолетовую жидкость, не пачкающую стекла. По мере созревания она всебольше темнеет и превращается в темно!фиолетовую непрозрачную жидкость,оставляющую след на стекле. Созревшую краску фильтруют в чистую склянкуи прибавляют для предупреждения плесени несколько кристалликов тимола иликамфары. Такая краска вначале окрашивает срезы за 5!10 минут и лишь спустянекоторое время (1!2 месяца) — в течение 1!2!3 минут.

3.1.4.4. Гематоксилин Делафильда60 г алюмоаммонийных квасцов растворяют при нагревании в 400 мл дис!

тиллированной воды, по охлаждении фильтруют в широкогорлую банку (илистакан), прибавляют 40 мл 10% спиртового раствора гематоксилина, завязыва!ют марлей и держат на свету (на солнце); через 4 дня фильтруют и прибавляют100 мл глицерина и 100 мл чистого метилового (либо этилового) спирта. Остав!

31

ляют стоять на свету в широкогорлой банке еще 3!4 дня, пока краска не станетсовершенно темной, после этого снова фильтруют, но уже в чистую склянкус пробкой. Краска приобретает хорошие красящие свойства через 1!2 месяца по!сле приготовления. Гематоксилин Делафильда окрашивает сильнее, чем гема!токсилин Бёмера.

3.1.4.5. Гематоксилин ГанзенаСмысл приготовления этого раствора состоит в том, что не требуется ждать

когда гематоксилин созреет. Роль окислителя вместо воздуха здесь играет пер!манганат калия.

К 200 мл свежего гематоксилина Бемера прибавляют 3 мл 5%!ного водногораствора марганцовокислого калия; полученную смесь нагревают до кипенияи затем быстро охлаждают в холодной воде. Краску готовят на срок не более по!лугода; перед употреблением фильтруют. Срезы окрашиваются в течение не!скольких минут.

3.1.4.6. Гематоксилин КарациКак и гематоксилин Ганзена, этот рецепт призван сократить сроки созрева!

ния гематоксилина. На этот раз окислителем выступает йодноватокислый ка!лий — KJO3.

В 400 мл воды вливают 100 мл глицерина. Добавляют 0,5 г гематоксилина,25 г алюмокалиевых квасцов и 0,03 г йодноватокислого калия. Через неделюкраска приобретает красящую силу. Продолжительность окраски препаратов 1!2 часа.

3.1.5. ГенцианвиолетДля окрашивания хромосом используют 1% водный раствор (1 г красителя

в 100 л воды). Окраска длятся 3!5!7 минут в зависимости от объекта. Фиксацияокраски — раствором Люголя.

Для окрашивания микроорганизмов используют следующую пропись:Генцианвиолет . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 гСпирт 96° . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 мл5% раствор фенола . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 млПосле растворения краски в спирте, полученный раствор вливают в раствор

фенола. Данный раствор используют для окраски по Граму.

3.1.6. Кармины3.1.6.1. Ацетокармин (уксуснокислый кармин).

В колбу с обратным холодильником (можно заменить воронкой) наливают45 г ледяной уксусной кислоты, прибавляют 55 мл дистиллированной воды и 1 гкармина (карминовой кислоты). Растворение ведут на водяной бане в течениечаса. После отстаивания, раствор фильтруют. Оставшийся на фильтре кармин

32

можно использовать повторно.Ацетокармин чаще всего используют для окраски ядра, хромосом, в цитоло!

гических препаратах.

3.1.6.2. Квасцовый кармин5 г алюмокалиевых или алюмоаммонийных квасцов растворяют в 100 мл во!

ды. В полученный раствор вносят 2 г кармина и кипятят на медленном огне в те!чение часа. Остужают и фильтруют. Добавляют 1 мл формалина для предотвра!щения прорастания бактерий и грибов.

Квасцовый кармин используют чаще всего для окраски тотальных мелкихпрепаратов в зоологии. При использовании кармина для окраски срезов — не!обходимо брать не 2 г краски, а всего 1 г, тогда кармин не перекрашивает срезы.

3.1.6.3. Борный карминВ 100 мл воды растворяют 4 г тетрабората натрия (буры), добавляют 2 г кар!

мина и нагревают до кипения. После остывания добавляют 100 мл 70° этиловогоспирта. Настаивают 5!7 недель. Перед использованием фильтруют.

Борный кармин — один из самых старинных рецептов красителей. Продол!жительность окраски — 1!3 дня, затем дифференцировка в солянокислом спир!те — 1!3 дня. Окрашенные борным кармином препараты прекрасно заливаютсяв парафин. Хорош борный кармин и для окраски тотальных препаратов.

3.1.6.4. Кармин по БлажинуКармин по Блажину — это не столько рецепт, сколько способ окраски.

При этом способе используются 2 раствора:1. 0,3 г кармина растворяют в 100 мл 30% раствора молочной кислоты.2. К 100 мл воды добавляют 0,5 мл полуторахлорного железа и две капли

1% раствора фенола.После окраски в течение 4!6 часов в растворе молочнокислого кармина пре!

параты переносят на 16!24 часа в раствор № 2. Способ используется для окрас!ки тотальных препаратов цестод и трематод.

3.1.6.5. Литиевый кармин ОртаВ 100 мл воды помещают 2 г карбоната лития и 2,5 г кармина, нагревают до

кипения и кипятят 10!15 минут. После охлаждения фильтруют. Срезы окрашива!ют 5!10!20 минут, после чего переносят в 1% солянокислый спирт. Нельзя поме!щать срезы после окраски сразу в воду, поскольку они обесцветятся и кармин незафиксируется на ядрах.

3.1.7. КристаллвиолетКристаллвиолет используют в виде водных 0,02% растворов (бактериоло!

гия) или 1% раствора (окраска хромосом).

33

Для окрашивания микроорганизмов используют следующую пропись:Кристаллвиолет . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 гСпирт 96° . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 мл5% раствор фенола . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 мл

После растворения краски в спирте, полученный раствор вливают в растворфенола. Данный раствор используют для окраски по Граму.

3.1.8. Лакмоид2 г лакмоида растворяют в 100 мл 45% уксусной кислоты и кипятят 2 часа

в колбе с обратным холодильником (можно заменить воронкой). Доводят во!дой до первоначального объема. Фильтруют. Используют ацетолакмоид исклю!чительно для окраски хромосом.

3.1.9. Метиленовый синийБольшинство рабочих растворов метиленовой сини готовится из насыщен!

ного спиртового раствора (3 г метиленового синего в 100 мл спирта).1. Стандартный раствор метиленовой сини для окрашивания: насыщенный

раствор метиленового синего — 1 мл, вода 40 мл. Раствор используютв течение месяца.

2. Метиленовый синий по Леффлеру: в 100 мл воды добавляют 30 мл на!сыщенного раствора метиленового синего и 1 мл 1% раствора KOH. В ста!рых руководствах рекомендуется выдерживать этот раствор для «созре!вания» в течение не менее 1 месяца.

3.1.10. Метиловый зеленыйВ зоологии метиловый зеленый используется без предварительной фикса!

ции объекта. При этом краситель является и фиксатором тоже. При этой методи!ке в 100 мл воды растворяют 2 г метилового зеленого и 1 мл ледяной уксуснойкислоты. Чаще всего используется для окраски простейших прямо под покров!ным стеклом. В лабораторной медицине 1% раствор метиленового зеленого ис!пользуют для подкраски препаратов в НСТ!тесте (тест на активность ферментов«дыхательного взрыва» в нейтрофилах).

Надо иметь ввиду, что очень часто краситель (особенно российских произ!водителей) представляет собой смесь метилового зеленого и метиленового си!него. Использовать надо либо очищенный с помощью хлороформа краситель,либо покупать чистые импортные реагенты.

3.1.11. Нильский синийНильский синий используют в виде 1% водного раствора красителя.

3.1.12. Оранжевый ЖТипичный цитоплазматический краситель. Используется для докраски цито!

34

плазмы после ядерных красок. Применяется в виде 0,5% водного раствора.

3.1.13. Орсеин1 г орсеина растворяют в 100 мл 45% уксусной кислоты. Тщательно размеши!

вают и фильтруют. Чаще всего применяют для окраски хромосом. Незаменимыйреагент в «буккальном тесте» — выявление ДНК в соскобе с слизистой щеки. Ши!роко используется в медицинской генетике.

3.1.14. Судан IIIВажнейший краситель для окраски жиров.

3.1.14.1.Насыщенный раствор Судана III0,3 г Судана растворяют в 100 мл 70° спирта. Нагревают осторожно на водя!

ной бане на закрытом огне 5 мин. После охлаждения и фильтрации красительготов. Время окрашивания 10!20 минут.

3.1.14.2.Щелочной Судан по ГерксгеймеруВ колбу помещают 0,3 г Судана, 70 мл 96° спирта, 2 г NaOH и 30 мл воды. На!

гревают осторожно на водяной бане на закрытом огне 5 мин. После охлажденияи фильтрации краситель готов. Этот состав обладает более высокими красящи!ми свойствами. Время окрашивания 3!5 минут. После него препараты отличнопрокрашиваются гематоксилином.

3.1.14.3.Ацетоновый Судан0,5 г Судана растворяют в смеси равных частей спирта и ацетона. Смесь на!

стаивают в течение недели. После фильтрации раствор готов. Хранить в плотнозакрывающейся емкости. Время окрашивания 3!5 минут.

3.1.14.4.Молочнокислый Судан0,5 г красителя настаивают в течение недели в концентрированной молоч!

ной кислоте. Данный состав используют для выявления липидов у бактерий.

3.1.15. Тионин10 мл насыщенного раствора тионина смешивают с 100 мл 1% раствора фе!

нола. Окраска 5!10 мин.

3.1.16. ЭозинЦитоплазматический краситель для докраски препаратов. Используют 0,1%,

0,25%, 0,5% водные и спиртовые растворы. Срок окраски 1!5 мин. Является обя!зательным компонентом комбинированных окрасок: Гематоксилин!эозин,Азур!эозин.

35

3.1.17. ФуксинБольшинство рабочих растворов фуксина готовится из насыщенного спирто!

вого раствора (10 г основного фуксина в 100 мл спирта).

3.1.17.1.Фуксин основной карболовый (Циля)10 мл насыщенного раствора растворяют в 100 мл 5% раствора карболовой

кислоты (фенола).

3.1.17.2.Водный раствор основного фуксина.1 мл раствора фуксина Циля смешивают с 9 мл воды. Готовить ex tempore,

т. к. раствор нестоек.

3.1.18. Эозин)азуровые смеси.Смеси готовят ex tempore из двух стабильных растворов:

1. 0,1 % водный раствор эозина;2. 0,1% раствор Азура II.

В 100 мл дистиллированной воды (лучше забуференной фосфатным буфе!ром рН 6,8) вливают 10 мл р!ра эозина и 10 мл р!ра Азура II. Смесь стабильна 4!6 часов, затем выпадает осадок.

3.2. Методы окраски3.2.1. Окраска по МаллориОкраска по Маллори очень популярна в различных лабораториях и руковод!

ствах. Так, в зоологии окраска срезов по Маллори дает очень эффектные гисто!логические картины: ядра красные, мышцы фиолетовые, соединительная тканьголубая. Именно последнее обстоятельство определило применение этой окра!ски в патоморфологической лаборатории. Здесь окраска по Маллори использу!ется для выявления коллагена.

В основе метода лежит уникальное свойство анилинового синего окраши!вать коллагеновые волокна, а кислого фуксина — эластические волокна в крас!ный цвет. В результате окраски коллагеновые волокна — темно!синие, ядра, эри!троциты, эластические волокна — красные, амилоид, гиалин и слизь — голубые,мышечная ткань — оранжевая, нейроглия — красно!фиолетовая.

Готовят три раствора, используемых для окраски:1. 0,5% раствор кислого фуксина;2. 1% раствор фосфорно!молибденовой кислоты;3. Комбинированный красящий раствор состава:

Анилиновый синий (водорастворимый) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,5 гОранжевый Ж. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2,0 гЩавелевая кислота (крист.) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2,0 гВода . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 мл

36

Смесь нагревают, охлаждают, фильтруют.

Методика окраски:1. 2!3 мин окрашивают срезы в фуксине;2. быстро споласкивают в воде;3. помещают на 2!5 мин в фосфорно!молибденовую кислоту;4. быстро споласкивают в воде;5. 1!2 мин окрашивают в комбинированном красящем растворе;6. дифференцируют в 96° спирте.

3.2.2. Окраска по Романовскому)ГимзаПрименяется преимущественно для окраски мазков крови и т. п. Иногда ис!

пользуют в зоологической и ботанической практике для мелких объектовГотовый концентрировнный раствор красителя (например, Диахим Геми!

стейн!Р фирмы «Абрис+», г. Санкт!Петербург) перед применением разводятнейтрализованной (забуференной) водой в соотношении 1:10!1:12. Окрашива!ют этим раствором фиксированные мазки 10 минут. Промывают забуферен!ной водой.

При окраске срезов краситель разводят в соотношении 1:50, срок окраскиудлиняется до 4!6 часов.

3.2.3. Окраска по ПаппенгеймуБолее удобна для мазков крови, чем предыдущая, не требует фиксации. Да!

ет более четкие результаты.Не фиксированные мазки заливают неразведенной готовой краской Май!

Грюнвальда (это смесь эозина и метиленовой сини, которая не содержит сле!дов азура, но готовится на метиловом спирте; вследствие этого приобретаетсвойства фиксатора) на 3 минуты. Наливают небольшое количество воды. Че!рез 1 минуту, не споласкивая, заливают рабочим раствором красителя Рома!новского!Гимза на 10!12 минут. По окончании окраски споласкивают в забу!ференной воде.

3.2.4. Окраска по ГрамуОкраска по Граму является важнейшим дифференциально!диагностичес!

ким признаком бактерий. Очень важно все операции проделать правильнои точно по времени. Необходимы 3 раствора:

1. Карболовый раствор генцианвиолета или кристаллвиолета (см раздел3.1.).

2. Раствор Люголя (1 г кристаллического йода, 2 г иодида калия растворяютв 300 мл воды, дают отстояться 1 сутки).

3. Карболовый фуксин Циля, водный раствор (см. раздел 3.1.17.2.).4. 96° спирт.

37

Методика окраски:1. Мазок фиксируют в пламени спиртовки.2. На мазок кладут фильтровальную бумагу и наносят карболовый

раствор генцианвиолета или кристаллвиолета ровно на 1 минуту.3. Удаляют фильтровальную бумагу и, не смывая, наносят на 1 мину!

ту раствор Люголя.4. Сливают раствор Люголя и прополаскивают 35!40 с в 96° спирте.5. Дополнительно окрашивают препарат раствором фуксина в тече!

ние 2 минут.6. Промывают водой. Сушат.

Грам!положительные бактерии окрашены в сине!фиолетовый цвет, грам!отрицательные — в розово!красный цвет.

38

1,2,4,5,6,8!гексагидроксиантрахинон 131,2!диоксиантрахинон 121,3,6,8!тетрабромфлюоресцеин 271,3,6,8!тетраиодфлюоресцеин 282,4!динитробензолазо!1!нафтол!3,6!ди!

сульфокислоты динатриевая соль 223,3”,5,5”!тетрабром!м!крезолсульфофта!

леин 153,3”!дибромтимолсульфофталеин 153,3!дибромфенолсульфофталеин 154,4!дигидрокси!5! метилфуксон 144,4!дигидроксифуксон 144!фениламиноазобензол!4!сульфокисло!

ты натриевая соль 255![(3!нитрофенол)!12!азо]салициловой

кислоты натриевая соль 137!амино!3!имино!3H!фенотиазин 257!диметиламино!3H!4!окси!3!оксофенок!

сазин!1!карбоновая кислота 15alkaliblau 13bleu de Lyon 13chinablau 13cафранины 6methylblau 13wasserblau 13азокармин 11азокармин G 11азокармин В 11азокрасители 5, 6азометиновые красители 5азофлоксин 11азофуксин 18азур I 11азур II 11азур В 11азур метиленовый 11азур синий АЕG 28азуры 7акридиловый оранжевый 12акридиновые красители 12акридиновый желтый 8акридиновый оранжевый 8акрифлавин 8ализарин 3, 7, 12ализарин С 12ализарин цианин 12ализарин!3!сульфокислоты натриевая

соль 12

ализаринкомплексон 12ализариновый желтый 13ализариновый зеленый 7, 13ализариновый красный C 12ализариновый синий 7, 13ализариновый флотский синий АТ 15ализариновый черный 7, 13ализарин!цианин 7альфазурин FG 28альциановый синий 7, 27амидо!нафтол красный 11амидо!черный 10Б 13аммоний пурпуровокислый 21анилиновый голубой 13анилиновый желтый 13, 25анилиновый синий 13, 36анилиновый черный 30антрапиридиновые красители 5антрапурпурин 7антрахиноновые красители 5антраценовый голубой 13антраценовый синий 7арилметановые красители 5аурамин 14аурамин О 8, 14аурин 14аурофосфин Ж 14ацето!азокармин G 11ацетокармин 11, 32ацетоновый судан 35ацетоорсеин 22бисмарк коричневый 6, 14борный кармин 18, 33бразиллин 7бриллиантовый желтый 14бриллиантовый зеленый 14бриллиантовый крезиловый синий 6, 14,

30бриллиантовый хромовый синий Р 15бромкрезоловый зеленый 15бромтимоловый синий 15бромфеноловый красный 15бромфеноловый синий 15везувин 14виктория голубой C 15галлоцианин 7, 15, 30гелиантин 21гематеин 16

39

ПРЕДМЕТНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ

гематоксилин 7, 11, 16гематоксилин Бемера 31гематоксилин Ганзена 32гематоксилин Генденгайна 31гематоксилин Делафильда 31гематоксилин Караци 32гематоксилин Эрлиха 30гематоксилины 30генцианвиолет 16, 32, 37генциановый фиолетовый 16далия фиолетовый 16двойная цинковая соль 20деметиловый желтый 20диазоли 16диазоль алый 2Ж 17диазоль алый К 17диазоль бордо 17диазоль гранат Ж 17диазоль красный 4С 17диазоль красный K 17диазоль красный А 17диазоль красный Ж 17диазоль красный ТР 17диазоль оранжевый О 17диазоль розовый О 17диазоль синий 2К 17диазоль синий 2С 17диазоль синий О 17диазоль синий С 17диазоль фиолетовый 17диазоль черный К 17диазоль черный С 17диметилтионина хлорид 11дифениламиновый оранжевый 25железный ализарин 13железный гематоксилин Генденгайна 31желтый кораллин 14жирорастворимый красный Ж 24жирорастворимый оранжевый 2К 24индиго 3индигоидные красители 5кальциевый красный 28кампешевый краситель 16канарский желтый 14кармин 7, 17кармин 40NF 17кармин по Блажину 33карминовая кислота 7, 17кармины 32квасцовый кармин 33

квасцовый кармин Мейера 18кислотные красители 18кислотный алый 18кислотный бордо 18кислотный желтый Д 25кислотный оранжевый 25кислотный прочный фуксиновый Б 18кислотный рубиновый Н2СМ 18кислотный сине!черный 13кислотный ярко!голубой 18кислотный ярко!красный 11кислые красители 6кислый фуксин 13конго красный 8, 18конгорот 18кошениловый карминовый 17краситель Вейгерта 19краска по Гимза и Паппенгейму 11краска по Май!Грюнвальду 11краска по Райту 11краска по Романовскому!Гимза 11крезиловый прочный фиолетовый 6криофосфин 8кристаллвиолет 13, 16, 19, 33, 37кристаллический фиолетовый 7, 19кубовые красители 5лакмоид 34литиевый кармин Орта 18, 33мажента 26малахитовый зеленый 19масляно!желтый 20метилвиолет 16, 21метиленовая синь 19метиленовый голубой 19метиленовый синий 7, 11, 19, 34метиловый желтый 20метиловый зеленый 7, 20, 34метиловый красный 20метиловый оранжевый 21метиловый фиолетовый 7, 21молочнокислый Судан 35мурексид 21нафтазарин 11нейтральные красители 6, 8нейтральный красный 8, 21нейтральрот 21нильблаусульфат 22нильский синий 6, 9, 22, 34нильский синий А 22нитразиновый желтый 22

40

нитрозокрасители 5нитрокрасители 5окраска по Гейденгайну 11окраска по Герцбергу 15окраска по Гольдману 25окраска по Граму 21, 37окраска по Маллори 13, 27, 36окраска по Массону 11окраска по Нейссеру 14окраска по Паппенгейму 37окраска по Пачини 11окраска по Романовскому!Гимза 37оксазиновые красители 6оранж G 22оранж II 25оранжевый G 22оранжевый GS 25оранжевый IV 25оранжевый N 25оранжевый Ж 16, 34, 36орсеин 22, 35орцеин 22основной желтый 3 12основной желтый К 12основной коричневый 4К 22основной фиолетовый 19основной фиолетовый К 21основной ярко!зеленый 14основные красители 6п!(п!диметиламинофенилазо) бензосуль!

фонат натрия 21парарозанилин 23, 26пара!розанилин 7парафуксин кислый 22парафуксин основной 23патентный карминово!синий 28п!диметиламиноаазобензол 20п!диметиламинобензол!2!карбоновая ки

20периноновые красители 5пикрофуксин 27пиразолоновый желтый 23пиронин 20пиронин G 8пиронин Б 23пиронин Ж 23полиметиновые красители 5полициклохиноновые красители 5протравной желтый 13протравные красители 7

прочный желтый 25прямые красители 23пурпур 3пурпурин 7родамин 3G 8родамин 6G 8, 23родамин G 23родамин В 8, 23родамин С 23розиндулин 11розоловая кислота 14салициловый желтый 13сафранин 16сафранин А 6сафранин О 6, 25сафранин Т 6сафранинЖ 24сафранины 24сернистые красители 5синий сандал 16синий Эванса 27судан I 24судан II 24судан III 6, 9, 24, 35судан IV 9судан по Герксгеймеру 35судан черный 9, 24суданы 24сульфат нильский голубой 22сульфат основной оксациновой краски

нильблау 22сульфенфталь 25тартразин 23тиазиновый красный 25тиазины 7тиоиндигоидные красители 5тионин 7, 25, 35толуидиновый голубой 25толуидиновый синий 7, 8толуиленовый красный 21триметилтионин 11трипановый голубой 25трипановый красный 25трифенилметановые красители 7тропеолин 00 25тропеолин 000 25уксуснокислый кармин 32ультрабриллиантовый синий Р 15фенилрозанилин 13феноловый красный 25

41

фенолсульфофталеин 25фенолфталеин 26феносафранин 6, 24, 26фиолетовый Лаута 25флоксин 26флюоресцеин 8, 9, 26, 27флюоресцеина изотиацианат 26флюоресцентные отбеливатели 5флюорохромы 6, 9фосфин 26фталоциановые красители 5фуксин 3, 26, 36фуксин кислый 27фуксин основной 26фуксин основной карболовый 36фуксины 26хинакридоны линейные 12хинализарин 7хиноловый синий 27хинониминовые красители 5хризоидин 27хризофенин 14хромовый красный ализариновый 12цианал голубой 43 27цианин 27цитоплазматические красители 7чисто!синий В 7Эванса голубой 27эозин 11, 22, 27, 35, 36эозин БА 27эозин голубоватый 27эозин желтоватый 27эозин желтый 27эриоглауцин А 28эриохром сине!черный С 28эриохром черный Т 28эритрозин 8, 27, 28эритрозин желтоватый 28этидиум бромид 28этилового эфира 2![6!(этиламино)!3!(эти!

ламино)!2,7!диметил!3,4!ксантен!9!ил]!бензойной кислоты моногидрох!лорид 23

этиловый зеленый 14ядерный прочный красный 28янус зеленый 29янус зеленый В 6

42

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

Глава 1. Классификация и номенклатура красителей . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51.1. Химическая классификация . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51.2. Рабочая классификация красителей, используемых

в биологической микроскопии . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61.2.1. Ядерные красители . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61.2.2. Цитоплазматические красители . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71.2.3. Нейтральные красители . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81.2.4. Флюорохромы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

1.3. Номенклатура красителей . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

Глава 2. Справочник по отдельным красителям . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

Глава 3. Наиболее известные рецепты красителей и способов окраски . . . . . 303.1. Рецепты красителей . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30

3.1.1. Анилиновый черный . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 303.1.2. Бриллиантовый крезиловый синий . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 303.1.3. Галлоцианин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 303.1.4. Гематоксилины . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 303.1.5. Генцианвиолет . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 323.1.6. Кармины . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 323.1.7. Кристаллвиолет . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 333.1.8. Лакмоид . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 343.1.9. Метиленовый синий . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 343.1.10. Метиловый зеленый . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 343.1.11. Нильский синий. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 343.1.12. Оранж Ж . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 343.1.13. Орсеин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 353.1.14. Судан III . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 353.1.15. Тионин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 353.1.16. Эозин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 353.1.17. Фуксин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 363.1.18. Эозин!азуровые смеси. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36

3.2. Методы окраски . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 363.2.1. Окраска по Маллори . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 363.2.2. По Романовскому!Гимза . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 373.2.3. Окраска по Паппенгейму . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 373.2.4. По Граму . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37

Предметный указатель . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39

43

Селиванов Е.В.

КРАСИТЕЛИ В БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕСПРАВОЧНИК

Сдано в набор 10.07.2003 г. Подписано в печать 01.09.2003 г. Формат 60х841/8.Бумага офсетная. Печать Riso. Гарнитура Фрисет. Усл. печ. л. 2,3.

Тираж 200 экз. Заказ .

Отпечатано в типографии НП «Азбука».Издательская лицензия ИД 01059 от 23.02.2000 г.

Лицензия на полиграфическую деятельность ПЛД № 28!51 от 22.07.1999 г.г. Барнаул, пр. Красноармейский, 98а.

Тел. (3852) 62!91!03, 62!77!25. E!mail: azbuka@rol.ru.