Effect of Agar Concentration and Media Texture on Development in In Vitro Culture

of Eucalyptus camaldulensis Dehnh. x E. urophylla F. Muell.

ผลของความเขมขนของวน และโครงสรางอาหารเพาะเลยงตอการพฒนาชนพชในการเพาะเลยงเนอเยอยคาลปตสลกผสม ขามชนด คามาลดเลนซส × ยโรฟลลา

โดย นางสาวอจฉรยา โชตภวฒน

นสตปรญญาโทสาขาวทยาศาสตรชวภาพปาไม

บณฑตวทยาลย มหาวทยาลยเกษตรศาสตร

ภายใตการควบคมของ

รศ.ดร.สมคด สรพฒนดลก อาจารยทปรกษาวทยานพนธหลก

ดร.สธร ดวงใจ อาจารยทปรกษาวทยานพนธรวม

หวขอการน าเสนอ (Outline)

1. บทน า (Introduction)

2. วตถประสงค (Objectives)

3. อปกรณ และวธการ (Materials and Methods)

4. ผล และวจารณ (Results and Discussion)

5. สรป และขอเสนอแนะ (Conclusion and Recommendation)

บทน า (Introduction)

ทมา: บรษท สยามฟอเรสทร (2552)

บทน า (Introduction) (ตอ)

(Plant Tissue Culture)

เทคนคการเพาะเลยงชนสวนพช (explant) หรอการน าเอาเซลล (cell) เนอเยอ

(tissue) หรออวยวะ (organ) ของพชมาเลยงบนอาหารสงเคราะหสตร

ตางๆ ภายใตสภาพแวดลอมทเหมาะสม ปราศจากเชอ และสามารถชกน า

ใหเกดเปนตนพชทสมบรณและน าออกปลกในสภาพธรรมชาตได

ทมา: สมพร (2552)

การเพาะเลยงเนอเยอยคาลปตส

บทน า (Introduction) (ตอ)

เกบกงพนธด จากตนแมพนธ

ยายออกเรอนเพาะช า

ฟอกฆาเชอใน LAB ยายลงอาหาร เรงการแตกยอด (MS6,CW22)

ตดแบงยอดพรอมกบ ยายลงอาหารยดยอด (G40)

ตดตนทยดยอดแลว ลงอาหารชกน าราก

ยายออกสสภาพแวดลอมปกต ทมา: Siripatanadilok and Thaiutsa (1990)

1. เพอพฒนาโครงสรางอาหารทใชในการเพาะเลยงเนอเยอยคาลปตสลกผสม ใหธาตอาหารสามารถเคลอนยายภายในอาหารไดด

2. เพอเพมปรมาณการผลตกลายคาลปตส

ลกผสม ภายในขวดของแตละข นตอนใหมากขน ลดระยะเวลาการผลต และไดตน

กลาทมคณภาพด

3. เพอลดคาใชจายจากการใชวนในการท าอาหารเพาะเลยงเนอเยอ

ยคาลปตสลกผสม

วตถประสงค (Objectives)

อปกรณ (Material)

Beaker Forceps

Alcohol lamp

Scalpel

Petri dish Laminar Flow

วธการ (Methods)

7. การยายกลาออกปลก

6. การชกน าการเกดรากพช

5. การชกน าการยดยอด

4. การขยายและเพมจ านวนยอด

3. เตรยมชนพชทปราศจากเชอ

2. ศกษาตนทน และการเตรยมอาหารส าหรบเพาะเลยงเนอเย อ

1. การคดเลอกแมพนธยคาลปตส ยคาลปตสลกผสม รหสสายตน H16

Modified MS6, Modified CW22 , Modified G40 และ Modifide Root

เลยงบนอาหารสตร MS6

เลยงบน Modified MS6, Modified CW22

เลยงบน Modified G40

เลยงบน Modifide Root

เลยงในเรอนเพาะช า

วธการ (Methods) (ตอ)

ทมา: บรษท สยามฟอเรสทร (2552)

ทนโรค และแมลง

เหมาะกบพนทดอน และอยในชวงปรมาณน าฝนแลงถงปกต

E. camaldulensis

ดนรวนปนทราย E. urophylla

1. การคดเลอกแมพนธยคาลปตส

วธการ (Methods) (ตอ)

Agar concentration and fiber on media texture in In Vitro culture of Eucalyptus

hybrid clone H16.

Agar (g/l)

Fiber

(sheet/l)

0 25 50 100

1 Tx6 Tx5

2 Tx2 Tx4

3 Tx3

7 Tx1

TX1 TX2 TX3

TX4 TX5 TX6

2. ศกษาตนทน และการเตรยมอาหารส าหรบเพาะเลยงเนอเยอ

วธการ (Methods) (ตอ)

2. การเตรยมอาหารส าหรบเพาะเลยงเนอเยอ (ตอ)

ทมา: Siripatanadilok and Thaiutsa (1990)

Agar (g/l)

Fiber

(sheet/liter)

0 25 50 100

1 Tx6 Tx5

2 Tx2 Tx4

3 Tx3

7 Tx1

วธการ (Methods) (ตอ)

3. เตรยมชนพชทปราศจากเชอ และการดแลเนอเยอระหวางเลยง

น าชนพชทปราศจากเชอซงไดรบความอนเคราะหจากบรษท สยามฟอเรสทร มาสบเพมปรมาณ และเลยงบนอาหารสตรเพมยอด

3100 lux

3000 lux

2000 lux

3100 lux

3000 lux

2000 lux

4 1

5 3 2

วธการ (Methods) (ตอ)

การดแลเนอเยอระหวางการเลยง

วธการ (Methods) (ตอ)

4. การขยายและเพมจ านวนยอด

ยายชนพชเลยงบนอาหารสตรเพมปรมาณยอด

(Modified MS6)

ยายชนพชเลยงบนอาหารสตรเพมปรมาณยอด

และชกน าการยดยอด (Modified CW22)

ลกษณะทใชเปรยบเทยบ

จ านวนยอด

จ านวนยอด และความยาวยอด

วธการ (Methods) (ตอ)

5. การชกน าการยดยอด ลกษณะทใชเปรยบเทยบ

ยายชนพชจาก Modified CW22 เลยงบนอาหาร

สตรชกน าการยดยอด (Modified G40 ) ความยาวยอด

6. การชกน าการเกดรากพช

ยายชนพชจากขอ 5 เลยงบนอาหารสตรชกน า

การเกดราก (Modified Root )

จ านวนราก และความยาวราก

วธการ (Methods) (ตอ)

7. การยายปลกชนพชทออกราก (Plantlets)

น าขวดบรรจช นพชทออกรากวางไวทอณหภมหอง

เปนเวลา 12-24 ชวโมง

ลางรากดวยน าสะอาด

ยายปลกในวสดปลกทมสวนผสมของดนตอถาน

แกลบในอตราสวน 2 ตอ 1

ระยะแรกใหน าทกๆ 15 นาท หลงจากนนจงคอยๆ

ลดความชนลง

บนทกอตราการรอดชวตของกลาอาย1 เดอน

วธการ (Methods) (ตอ)

Data Analysis

เปรยบเทยบคาเฉลยของ

จ านวนยอด ความยาวยอด

จ านวนราก ความยาวรากสงสดตอชนพช

การวเคราะหการเกดราก และอตราการรอดตายของตนกลา

Statistical Analysis

Analysis of Variance

แบบ Two way ANOVA

หาความแตกตางโดยวธ Duncan's Multiple Range Test (DMRT) ทระดบความเชอมน 95 %

รอยละ

8. การวเคราะหขอมล

ผลการศกษา

1. ตนทนวน และไฟเบอรบนอาหารสตรดดแปลงโครงสราง

วน เครองหมายทางการคาตรานางเงอก ราคา 1,400 บาท/กโลกรม

กระดาษช าระเครองหมายทางการคา ตรา Cellox รน Super Extra (ยาวพเศษ) แผนละ 2 ชน คดเปนเงน 0.0325 บาท/แผน (ราคา ณ วนท 08-01-55)

กระดาษช าระ 5,080 แผน ราคาทงหมด 165 บาท

ถากระดาษช าระ 1 แผน ราคา

บาท

บาท

ผลการศกษา (ตอ)

1. ตนทนวน และไฟเบอรบนอาหารสตรดดแปลงโครงสราง (ตอ)

9.80

3.61

5.01 4.42 4.64

3.02

0

2

4

6

8

10

12

Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6

ราคา (บาท/ลตร)

สตรอาหารทดลอง

ผลการศกษา (ตอ)

2. จ านวนยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบนอาหารสตร Modified MS6

4.63

9.65 8.40

9.53

8.78

11.31

0

2

4

6

8

10

12

Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6

จ านวนยอดเฉลย

สตรอาหาร

ผลการศกษา (ตอ)

8.86

8.22

9.06

8

8.2

8.4

8.6

8.8

9

9.2

9.4

2,000 3,000 3,100

จ านวนยอดเฉลย

ความเขมแสง (lux)

2. จ านวนยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบนอาหารสตร Modified MS6

ผลการศกษา (ตอ)

3. จ านวนยอด และความยาวยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบน อาหารสตร Modified CW22

2.19 2.21 2.00 2.34 2.60 2.68

3.60 4.00

2.58

4.65 5.13

8.58

0

2

4

6

8

10

12

Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6

จ านวนยอดเฉลย (ยอด) ความยาวยอดเฉลย (ซม.)

การเจรญเตบโตเฉลยตอชนพช

สตรอาหาร

ผลการศกษา (ตอ)

3. จ านวนยอด และความยาวยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบน อาหารสตร Modified CW22

2.27 2.39 2.35

4.01 4.45

5.80

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

2,000 3,000 3,100

จ านวนยอดเฉลย (ยอด) ความยาวยอดเฉลย (ซม.)

ความเขมแสง (lux)

การเจรญเตบโตเฉลยตอชนพช

ผลการศกษา (ตอ)

4. ความยาวยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบนอาหาร สตร Modified G40

6.27

6.69

6.32 6.33 6.35

6.56

6

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

6.8

Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6

สตรอาหาร

ความยาวยอดเฉลย (ซม.)

ผลการศกษา (ตอ)

6.33

6.47 6.46

6.25

6.3

6.35

6.4

6.45

6.5

2,000 3,000 3,100

ความเขมแสง (lux)

ความยาวยอดเฉลย (ซม.)

4. ความยาวยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบนอาหารสตร Modified G40

ผลการศกษา (ตอ)

0.93 1.75 1.14 1.48 1.35 1.65

4.00

4.95 5.23

6.50

4.68

7.11

0123456789

10

Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6

จ านวนยอด (ยอด) ความยาวยอดเฉลย (ซม.)

การพฒนาของราก

สตรอาหาร

5. ความยาวรากสงสด และจ านวนรากเฉลยตอชนพชทเล ยง บนอาหารสตร Modified Root

ราก (ราก) รากสงสด (ซม.)

ผลการศกษา (ตอ)

5. ความยาวรากสงสด และจ านวนรากเฉลยตอชนพชทเล ยง บนอาหารสตร Modified Root (ตอ)

1.46 1.45 1.37

6.10 5.53 5.05

0

1

2

3

4

5

6

7

8

2,000 3,000 3,100

จ านวนยอด (ยอด) ความยาวยอดเฉลย (ซม.)

ความเขมแสง

การพฒนาของราก

ราก (ราก) รากสงสด (ซม.)

ผลการศกษา (ตอ)

6. เปอรเซนตการเกดรากของชนพชทเล ยงบนอาหาร สตร Modified Root

51.66

80.00

65.00 73.33

83.33

100.00

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6

เกดราก (%)

สตรอาหาร

ผลการศกษา (ตอ)

53.33

76.67 76.67 73.33

90.00 95.00

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6

อตราการรอดตาย (%)

สตรอาหาร

7. อตราการรอดตายของกลาอาย 1 เดอน

สรปการศกษา

1. เพอพฒนาโครงสรางอาหารทใชในการเพาะเลยงเนอเยอ

ยคาลปตสลกผสม ใหธาตอาหารสามารถเคลอนยายภายใน

อาหารไดด

พบวา สตรทดลอง TX6 เปนโครงสรางอาหารทชวยให

ธาตอาหารสามารถเคลอนยายภายในอาหารไดดท สด

2.1 สตรอาหาร Modified MS6 TX6 สามารถเพมจ านวนยอดได

เปน 2 เทาของ Modified MS6 TX1

2.2 สตรอาหาร Modified CW 22TX6 สามารถเพมจ านวนยอด

และยดความยาวยอดไดเปน 2 เทาของ Modified CW 22 TX1

สรปการศกษา (ตอ)

2. เพอเพมปรมาณการผลตกลายคาลปตสลกผสม H16 ภายใน

ขวดของแตละข นตอนใหมากขน ลดระยะเวลาการผลต

และไดตนกลาทมคณภาพด

พบวาเปนการคนพบวธการใหมทมคณคาในดานการเพมผลผลต

กลาภายในขวดเลยง ดงน

สรปการศกษา (ตอ)

2.3 สตรอาหาร Modified G40 ท ง 6 สตรทดลองสามารถ

ยดความยาวยอดไดไมแตกตางกน

2.4 สตรอาหาร Modifide Root TX6ชวยเพมจ านวนรากได

เปน 0.5 เทา ของModifide Root TX1 และสามารถชกน า

การเกดรากไดเรวกวา เมอเปรยบเทยบกบ

Modifide Root TX1

2.5 ตนกลาทเลยงบนสตรอาหาร Modifide TX6 มอตราการรอด ตายสงทสด และมคาเปน 1.75 เทาของ Modifide TX1

พบวา สตรทดลอง TX6 เปนสตรโครงสรางอาหารทมตนทนจาก

วน และไฟเบอรต าทสดและโดยมคาเปน 3 เทา ของ TX1

สรปการศกษา (ตอ)

3. เพอลดคาใชจายจากการใชวนในการท าอาหารเพาะเลยง เนอเยอยคาลปตสลกผสม รหสสายตน H16

ควรมการทดสอบคณภาพของสตรอาหาร TX6 กบยคาลปตส

ลกผสมรหสสายตนอนๆ ทนยมปลกทงภาครฐ และภาคเอกชน

อาจน าเทคนคการปรบโครงสรางอาหารเบองตนไปใชในการศกษาตอ

ในเรองการแกปญหาอาการตางๆ ทมกเกดขนกบเทคนคการ

เพาะเลยงเนอเยอยคาลปตสลกผสม อาท การเกดแคลลส

อาการฉ าน า เปนตน

ขอเสนอแนะ

ขอขอบคณ

รศ.ดร.สมคด สรพฒนดลก อาจารยทปรกษาวทยานพนธหลก

ดร.สธร ดวงใจ อาจารยทปรกษาวทยานพนธรวม

ผศ.ดร.อทยวรรณ แสงวณช อาจารยผควบคมวชาสมมนา

ดร.ประทป ดวงแค อาจารยผควบคมวชาสมมนา

บรษท สยามฟอเรสทร จ ากด เออเฟอสถานทศกษา วสด และอปกรณ

อ าเภอทามวง จงหวดกาญจนบร ดร.นนทชย พงศพฒนานรกษ ใหค าปรกษาดานการวเคราะหผลทางสถต

ขอขอบพระคณคะ

จบการน าเสนอ