Emésztőszervi betegségek(PEC/PEMS) járványtani és virológiai

vizsgálata pulykaállományokban

Rusvai Miklós, Demeter Zoltán, Coman Alina, Palade Alina

Emésztőszervi betegségek (entericdiseases, ED) pulykaállományokban

• PEC (Poult enteritis complex)– hasmenés, levertség,

alomevés, immunszuppresszió és megemelkedettmortalitás

– nagy gazdasági károk

• PEMS (Poultenteritis and mortality syndrome)– hasonló klinikai

tünetek és kórbonctani elváltozások

– magas (akár 100%)morbiditás ésmortalitás

A PEC/PEMS kórképben esetleg szerepet játszó kórokozók

• Pulyka astrovírus– Pulyka astrovírus 1 (TAstV-1)– Pulyka astrovírus 2 (TAstV-2)– Avian nephritis vírus (ANV)?

• Pulyka coronavírus (TCV)• Avian reovírus (ARV)• Avian rotavírus (AvRV)• Vérzéses bélgyulladás vírus (HEV)• Pulyka parvovírus (TuPV)• Enteropathogén E. coli törzsek

Pulyka astrovírus (TAstV)• Astroviridae• csillag alakú, nem burkos, 28-30 nm• egyszálú, pozitív RNs

• Avian nephritis vírus (ANV)– vesekárosodás napos

csirkékben– ragályos – eltérő pathogenitás– pulykaállományokban is

kimutatták

TCV, ARV, AvRV, HEV• Pulyka coronavírus (TCV)

– Coronaviridae– kerekded vagy pleomorf, burkos, 120 nm – ss RNs

• Avian reovírus (ARV)– Reoviridae– ikozahaedrális, 60-70 nm– ds RNs

• Avian rotavírus (AvRV)– a reovírusokhoz hasonló morfológia– a kapszidban küllőszerű rendeződés („rota”)

• Vérzéses bélgyulladás vírusa (HEV)– Adenoviridae– ikozahaedrális, 70-90 nm– ds DNs

Pulyka parvovírus (TuPV)

• újabban: az USA számos államában előfordul csirke- és pulyka-állományokban(Zsák et al., 2009)

• teljes genomszekvencia(Day and Zsák, 2010)

• Előfordul magyarországi csirke és pulykaállományok ban is(Palade et al., 2011)

• parvovírus-szerű részecskék 10 napos hasmenéses csirkék bélhomogenizátumában (Kisary et al., 1984)

• naposcsirkék kísérleti fertőzése tisztított vírussal –klinikai tünetekben megnyilvánuló RSS (Kisary et al., 1985)

• vírusazonosítás molekuláris biológiai módszerekkel: Parvoviridae (Kisary et al., 1985)

TuPV

Day and Zsák, 2010

PEC/PEMS: tünetek

Szétnövés, tollasodási zavar, fejlődésben való visszamaradás (4-5 hetes pulykapipék)

PEC/PEMS: tünetek

Hasmenéstől összetapadt tollak a cloaca körül

PEC/PEMS: kórbonctani elváltozások

Kitágult vérerek, emésztetlen, nyálkás tartalommal telt vékonybelek, enteritis

PEC/PEMS: kórbonctani elváltozások

Vékonybélgyulladás, gázos tartalommal telt vakbelek (dysbacteriosis jele)

Kórszövettan

A bélbolyhok megrövidülése és összeolvadása, a mucosaenyhe denudatioja, enteritis

Kórszövettan

A bélbolyhok megrövidülése és összeolvadása, a mucosasúlyosfokú denudatioja, enteritis

Kórszövettan

Gyulladásos sejtes beszűrődés: histiocyták, lymphocytákés granulocyták

Kórszövettan

Gyulladásos sejtes beszűrődés: histiocyták, lymphocytákés néhány granulocyta

Kórszövettan

A Lieberkühn crypták kitágulása

Kórszövettan

Kitágult Lieberkühn crypták, ellaposodott epithelium,desquamalódott sejtek

Kórszövettan

A bursa Fabricii enyhe lymphoid depletioja

Regeneratio jelei avékonybélben

jejunum, H&E

Gócos, multifocalispancreatitis pancreas, H&E

Pulykaállományok

• 18 állomány 2008 – kék

• 31 állomány 2009 – narancssárga

6 -43 napos állatok, klinikaiPEC/PEMS, megemelkedettmortalitás

Primerek Targeted virus Targeted gene Primer name and sequence (5’-3’) Size (bp) Annealing

ChPV / TuPV NS1 PVF1: TTCTAATAACGATATCACTCAAGTTTCPVR1: TTTGCGCTTGCGGTGAAGTCTGGCTCG 561 55

ANV GP1 ANV-ORF1-f: AGATACGCTTGCTCGTCTTGANV-ORF1-r: CCTCTAACCGGCGATATTCT 608 53

TAstVs ORF-1b TAPG-L1:TGG TGG TGY TTY CTC AAR ATAPG-R1:GYC KGT CAT CMC CRT ARC A 601 55

TAstV-2 capsid ORF 2 MKCAP8F:TCA TCA TCC TCT CAC ACT GGMKCAP19R:AGC AGC AGT AGG TGG CAG TG 802 53

TCV nucleocapsid TCV-NF:GGT AGC GGT GTT CCT GATCV-NR:CCC TCC TTA CCT TTA GT 598 53

HEV CP1 HEV-CP1-F: GGTTCGTGAACATTGGAGACHEV-CP1-R: CAGGCACAACAGGTGTAACT 155 48

ARV S4 S4-F13:GTG CGT GTT GGA GTT TCC CGS4-R1133:TAC GCC ATC CTA GCT GGA 1120 53

AvRV NSP4 NSP4-F30:GTG CGG AAA GAT GGA GAA CNSP4-R660:GTT GGG GTA CCA GGG ATT AA 630 55

PCR és RT-PCR eredmények

Year Farm/House TuPV ARV AvRV TastV-2 HEV TCV ANV TAstVs

B-369/4 + - - - - + - -

B-284 + - - - - - - -

B-486/2 - - + - - - - +

B-369/9 + - - - - - - +

B-23/1 + - - - - + - -

B-281 + - - - - - - -

B-122 - - - - - - - +

B-496 - - + - - - - +

B-589/4 + - + - - - - +

B-589/1 + - + - - - - +

B-547 + - - - - + - +

B-470/2 - - - - - - - +

B-288 + - + - - - - +

B-584 + - - - - - - +

B-369/1 - - + - - + - -

B-501 + + - - - - + +

B-23/8 - - - + - - - +

B-23/3 + - - - - - - +

2008

B-291/11 - - - - - - - +B-87 - - + - - - - +B-280 + - - - - - - +B-232 + - - - - - - +B-160 - - - - - - + +B-164/3 - - - - - + - -B-307/2 + - - - - - - -B-307/8 - - - - - - - +B-649 - + + + - - - +B-557 - - - + - - - +B-297 - - - + - - - +B-893 - - - + - - - +B-125 + - + - - - - +B-169/7 + - + + - + - +B-184 - + - + - - - +B-27 - - - + - - - +B-70 + - - - - - - +B-31/2 + - + - - - - +B-315 - + - + - - - +B-465/9 + - - - - - - +B-164/1 + - - - - - - +B-346 + - + - - - - +B-320/4 - - - - - - - +B-164/4 - + - - - + - -B-31/5 + - - - - - - +B121 - + - + - - - +B-648/1 - - - - - - - +B-307/6 - - + - - - - +B-546 - + - + - - - +B-671 - - + + - - - +B-648/2 - - - + - - - +

2009

TAstVsANVTCVHEVTastV-2AvRVARVTuPVFarm/HouseYear

Cleavage site recognitionenzimes emésztés

561bpChPV

415bp 146bp

enzimes emésztés

238bp

561bpTuPV

323bp

561bp

enzimes emésztés

323bp 146bp

TuPV like

92bp

RFLP-analízis

emésztetlen

enzimes emésztés

415bp 146bp

561bpChPV

enzimes emésztés

323bp 238bp

561bpTuPV

561bp

enzimes emésztés

323bp 146bp

TuPV like

92bp

PCR és RT-PCR összesítés

• TAstVs: 41/49 (83,67%) 13/49 TAstV-2 (26,53%)

• TuPV: 25/49 (51,02%)

• AvRV: 14/49 (28,57%)

• ARV: 7/49 (14,28%)

• TCV: 7/49 (14,28%)

• ANV: 2/49 (4,08%)

• HEV: 0

Statisztikai elemzés• szignifikánsan negatív értékek aTAstV-2 és TuPV

előfordulása között (p: 0.02) • pozitív, “majdnem” szignificáns korreláció a TAstV-2 és

ARV előfordulása között (p: 0.057)

P-értékek

TuPV ARV AvRV TAstV-2 TCV ANV TAstVs

TuPV NA 1 1 0.02 1 1 1ARV NA NA 1 0.057 1 1 1AvRV NA NA NA 1 1 1 1

TAstV-2 NA NA NA NA 1 1 1TCV NA NA NA NA NA 1 0ANV NA NA NA NA NA NA 1

TAstVs NA NA NA NA NA NA NA

Következtetések • a bélbolyhok megrövidülése, enyhe denudatioja és

összeolvadása• enterocyta desquamatio• 2 esetben E. coli• Legmagasabb előfordulási arány: astrovírusok• ANV pulykaállományokban• Újabban felismert kórokozó TuPV: gyakori (51,02%)• a pulykaállományokban a csirke- és pulykaparvovírus

egyaránt előfordul• létezik egy „átmeneti” (pulykaparvovírus-szerű) genotípus• negatív korreláció: TAstV-2 and TuPV• pozitív korreláció : TAstV-2 and ARV

Thank you for your attention!