Enumerasi Pny TengSiang

8/18/2019 Enumerasi Pny TengSiang

1/14

1. PENDAHULUAN

1.1 Tinjauan pustaka

Teknik yang digunakan untuk mengetahui jumlah mikroba disebut dengan enumerasi.

Enumerasi adalah teknik perhitungan jumlah mikroba dalam suatu media tanpa

mengidentifikasikan jenis mikroba (bakteri, jamur, yeast), yang bertujuan untuk

menentukan jumlah sel dari suatu kultur bakteri secara kuantitatif (Cappucino &

herman, 1!"#). $nalisis kuantitatif mikrobiologi pada bahan pangan penting dilakukan

untuk mengetahui mutu bahan pangan dan menghitung proses penga%etan yang akan

diterapkan pada bahan pangan tersebut (ardia', 1!!).

$da beberapa macam teknik enumerasi yang dapat digunakan untuk mengukur jumlah

sel, antara lain dengan hitungan mikroskopis langsung (direct microscopic count ),

hitungan ca%an ( plate count ), atau elektrolisis dengan bantuan alat yang disebut

penghitung Coulter (Coulter counter ) (adioetomo, 1!!#).

Teknik enumerasi ada beberapa macam, yaitu perhitungan mikroskopis secara langsung,

perhitungan massa*unsur sel, pengukuran turbidimetrik, dan perhitungan tak langsung

dengan menggunakan bantuan ca%an petri. +ada percobaan, teknik enumerasi yangdilakukan adalah enumerasi mikroskopik secara langsung, dan juga teknik enumerasi

secara tidak langsung dengan menggunakan ca%an petri yaitu dengan menggunakan pour

plates dan spread plates. $da beberapa cara enumerasi, antara lain perhitungan

mikroskopis secara langsung, perhitungan massa sel atau unsur-unsur sel, pengukuran

turbidimetrik untuk peningkatan massa sel dan metode perhitungan secara tak langsung

pada ca%an (Cappucino & herman, 1!"#). ikatakan perhitungan mikroskopik secara

langsung karena dilakukan penghitungan di ba%ah mikroskop langsung sesuai sel-sel

yang terlihat. edangkan metode ca%an dikatakan tidak langsung karena memakai

pengandaian dengan satu koloni sebagai satu sel sehingga hasil akhirnya tidak

menunjukkan jumlah sel yang sebenarnya. +ada prinsipnya perhitungan sel secara tak

langsung berarti mempelajari bahan-bahan seperti makanan, air, dan susu dan dalam

beberapa kasus mempelajari udara yang membutuhkan perhitungan banyaknya


2/14

mikroorganisme dalam suatu substansi. /anyak cara telah diusahakan untuk memecahkan

permasalahan ini antara lain meliputi perhitungan mikroskopis secara langsung,

perhitungan massa sel atau unsur-unsur sel, pengukuran turbidimetrik untuk peningkatan

massa sel dari kekeruhan medianya serta metode perhitungan secara tak langsung pada

ca%an (Cappucino & herman, 1!"#).

+ada percobaan enumerasi metode ca%an, proses yang dilakukan ada macam, yaitu

spread plates dan pour plates. +ada metode pour plates, sampel yang sudah diencerkan,

dituang langsung ke dalam ca%an petri, setelah itu baru dimasukkan media agar cair yang

suhunya sudah turun menjadi 02C. 3emudian ca%an petri digoyang dan diratakan di atas

meja, lalu ditunggu sampai media memadat. +enurunan suhu sampai 02C ini

dimaksudkan supaya mikroorganisme tidak mati karena terkena suhu yang tinggi.

+enggunaan lebih dari 0 4C menyebabkan kematian atau kerusakan sel mikrobia yang

tidak tahan suhu tinggi dan menyebabkan kondensasi yang berlebihan pada ca%an petri

setelah agar memadat (ardia', 1!!). edangkan pada metode spread plates, media agar

dituang dulu ke dalam ca%an petri, dan ditunggu sampai padat, baru kemudian sampel

yang sudah diencerkan dimasukkan ke dalam ca%an dan diratakan dengan cara

menggoyang-goyangkannya. +ercobaan enumerasi dengan menggunakan metode spread

plates dan pour plates merupakan perhitungan koloni dengan menggunakan metode

ca%an.

Pour plates disebut juga metode tuang sedangkan spread plates disebut juga metode

permukaan. alam metode tuang, sejumlah sampel dari pengenceran yang dikehendaki

dimasukkan ke dalam ca%an petri kemudian ditambah agar cair steril yang sudah

didinginkan dan digoyang-goyang supaya sampel menyebar secara merata. edangkan

metode permukaan dimulai dengan membuat agar ca%an kemudian sampel yang telah

diencerkan dimasukkan ke dalam permukaan agar tersebut dan diratakan dengan batang

gelas melengkung yang telah steril (ardia', 1!!).

3euntungan enumerasi secara langsung adalah cara penghitungan yang cepat dan

diperoleh informasi tambahan tentang ukuran dan bentuk mikroba yang sedang dihitung


3/14

dan jumlah sel yang diperoleh meliputi sel yang hidup dan sel yang mati. $kan tetapi

enumerasi secara langsung juga memiliki kelemahan yaitu sel yang mati tidak dapat

dibedakan dengan sel yang hidup. 3oloni sel yang bergerombol terkadang dapat

menyulitkan dalam mengklasifikasikan jenis koloni (chlegel & chmidt, 1!!0).

5etode perhitungan ca%an didasarkan pada anggapan bah%a setiap sel yang dapat hidup

akan berkembang menjadi satu koloni. 6adi jumlah koloni yang muncul pada ca%an

merupakan indeks bagi jumlah organisme yang dapat hidup yang terkandung dalam

sampel (adioetomo, 1!").

3euntungan metode hitungan ca%an adalah hanya sel hidup yang dihitung, kita dapat

langsung menghitung jumlah koloni yang terdapat dalam ca%an petridish secara langsung

dengan mata kita, beberapa jenis jasad renik dapat dihitung sekaligus, dapat digunakan

untuk isolasi dan identifikasi jasad renik karena koloni yang terbentuk mungkin berasal

dari suatu jasad renik yang mempunyai penampakan pertumbuhan spesifik. edangkan

kelemahan metode hitungan ca%an adalah hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah

sel yang sebenarnya karena beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk 1 koloni,

medium dan kondisi inkubasi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai yang berbeda,

jasad renik yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat dan membentuk

koloni yang kompak dan jelas, tidak menyebar, serta memerlukan persiapan dan %aktu

inkubasi yang cukup lama sehingga pertumbuhan koloni dapat dihitung (ardia', 1!!).

/erbeda dengan metode hitungan ca%an di mana digunakan medium padat, dalam

metode 5+7 digunakan medium cair di dalam tabung reaksi, di mana perhitungan

dilakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif yaitu yang ditumbuhi jasad renik

setelah inkubasi pada %aktu dan suhu tertentu. +engamatan tabung yang positif dapat

dilihat dengan mengamati timbulnya kekeruhan, atau terbentuknya gas di dalam tabung

kecil (tabung urham) yang diletakkan pada posisi terbalik, yaitu untuk jasad renik

pembentuk gas. alam metode 5+7, dari setiap pengenceran dimasukkan 1ml masing-

masing ke dalam tabung yang berisi medium, di mana untuk setiap kali pengenceran

digunakan tiga atau lima seri tabung. etelah inkubasi, dihitung jumlah tabung yang


4/14

positif dan kombinasi tabung positif tersebut dicocokkan dengan tabel 5+7, dan nilai

5+7 sampel dihitung dengan rumus

5+7 sampel 8 7ilai 5+7 dari tabel 9tengahtabung n pengencera : :

1

(ardia', 1!!)

alam percobaan saat memakai metode 5+7 medium yang dipakai berbentuk cair.

5etode 5+7 dilakukan dengan cara mengencerkan beberapa tabung reaksi yang berisi

mikroba, biasanya dari # hingga tabung. ;alu tabung itu diinkubasi dan kemudian

diamati apakah ada mikroba yang tumbuh atau tidak. /ila ada mikroba yang tumbuh,

maka disebut tabung positif, tetapi bila tidak tumbuh, maka disebut tabung negati


5/14

2. MATERI DAN METODA

.1 5$TE>?

.1.1 $lat

+eralatan yang digunakan dalam praktikum ini adalah ca%an petri, tabung reaksi, rak

tabung reaksi,


6/14

3. HASIL PENGAMATAN

$. Tabel pengamatan itungan Ca%an

3elompok 5etoda Bambar 6umlah koloni

C1 +our +late

+engenceran 122

preader #22

1. bening

. putih keruh

#. gelembung udarapread +late 122 preader #22

1. +utih lebih muda

. +utih keruh

#. /ening

+our +late

+engenceran 12-1

preader #22

pread +late 12-1 0D9121

# +our +late

+engenceran 12-

preader #22

pread +late 12- preader #22

0 +our +late

+engenceran 12-#

preader #22

pread +late 12-# preader #22


7/14

#2-#22

+our +late

+engenceran 12-0

preader #22

pread +late 12-0 preader #22

= +our +late

+engenceran 12-

preader #22

1. +utih tipis

pread +late 12- !0 koloni

!0 9 12

1. +utih tebal

/. 5etoda 5+7

6umlah tabung yang ()6umlah koloni

12-1 12- 12-#

# 1

(12

#=,2

−

8 #=

4. PEMBAHASAN

+ercobaan yang dilakukan kali ini adalah enumerasi. alam percobaan ini ada dua

metode enumerasi yang dilakukan, yakni metode hitungan ca%an dan 5+7. Fntuk

metode hitungan ca%an bakteri yang digunakan yaitu Bacillus subtilis. edangkan pada

metode 5+7 bakterinya E.coli.Teknik yang digunakan untuk mengetahui jumlah

mikroba disebut dengan enumerasi. $da beberapa macam teknik enumerasi yang dapat


8/14


9/14

meningkatkan tegangan yang dicatat oleh recorder serta dapat menunjukkan jumlah total

sel, dan metode ini disebut metode electronic cell chamber.

. illution +latting

$da dua cara yang dapat ditempuh yaitu dengan menghitung komponenkimia di dalam

sel seperti 7$ atau dengan menghitung oksigen atau karbondioksida yang diserap atau

dihasilkan selama respirasi atau fermentasi. Cara kedua yaitu dengan menggunakan

perhitungan jumlah mikroorganisme secara tak langsung karena tidak bisa mengetahui

jumlah mikroorganisme namun hanya bisa mengetahui @ atau @ptical ensity dengan

bantuan spektrofotometer. ;angkah-langkah yang harus ditempuh adalah sebagai

berikut

• /ahan makanan atau sumber mikroorganisme lain ditimbang sebanyak gram dan

diencerkan di dalam erlenmeyer dengan aAuades sampai


10/14

daya atau dengan kata lain penggunaan sumber daya harus memperhatikan jumlah

mikroba di dalam sumber daya tersebut, seperti misalnya sumber daya air dan tanah.

;angkah-langkah yang harus ditempuh untuk mengkondisikan pertumbuhan

mikroorganisme agar tumbuh tidak bergerombol atau tiap koloni harus saling terpisah,

yaitu

/ahan makanan atau sumber mikroorganisme lain ditimbang sebanyak gram

dan diencerkan di dalam erlenmeyer dengan aAuades sampai


11/14

suhu sampai 02H0 4C (media agar membeku pada 02 4C). +enggunaan lebih dari 0 4C

menyebabkan kematian atau kerusakan sel mikrobia yang tidak tahan suhu tinggi dan

menyebabkan kondensasi yang berlebihan pada ca%an petri setelah agar memadat. al

ini sesuai dengan percobaan, di mana pada metode ca%an, sampel diencerkan terlebih

dahulu berkali-kali, sehingga diperoleh jumlah koloni yang semakin sedikit dan semakin

tanpak jelas. Tetapi pada beberapa kelompok, masih tampak pada pengenceran yang lebih

banyak, hasil koloni yang diperoleh justru semakin banyak dan justru spreader . ?ni

mungkin terjadi karena teknik pengenceran yang dilakukan belum memenuhi standar,

sehingga hasil yang diperoleh belum sesuai dengan teori.

3egagalan yang sering dilakukan pada saat enumerasi adalah larutan pengencer yang

tidak steril, jumlah koloni yang tumbuh kurang dari #2 atau bahkan lebih dari #22 koloni

dan suhu media harus berkisar antara 022-02 C sehingga dapat diketahui bah%a

kegagalan dalam penghitungan koloni secara spread plates dan pour plates dikarenakan

larutan pengencer yang tidak steril. 6ika larutan pengencer tidak steril maka akan

menyebabkan tumbuhnya mikroorganisme kontaminan sehingga dapat menggagalkan

hasil percobaan (Cappuccino & herman, 1!!#).

+engenceran yang kurang tinggi akan didapatkan jumlah koloni yang melebihi #22

koloni ( spreader ). 3esalahan cara enumerasi disebabkan oleh

$dsorbsi bakteri pada permukaan alat-alat gelas yang digunakan.

$danya pertumbuhan, motilitas, dan agregasi sel-sel mikrobia.

>eproduksibilitas ketebalan cairan pengisi di antara dasar petak gelas penutup.

(;ay, 1!!0).

Fntuk memenuhi persyaratan statistik maka ca%an yang dipilih haruslah ca%an yang

memiliki atau mengandung koloni antara #2-#22 koloni. 3arena kita tidak akan dapat

menghitung secara tepat jumlah koloni tersebut maka kita melakukan beberapa tahap

pengenceran. engan jumlah koloni antara #2-#22 kita diperkirakan telah memperoleh

jumlah koloni secara tepat (adioetomo, 1!!#).


12/14

5enurut adioetomo (1!!#), untuk memenuhi persyaratan statistik maka ca%an yang

dipilih untuk penghitungan koloni adalah ca%an yang mengandung #2-#22 koloni. 3ita

tidak dapat menghitung koloni secara tepat oleh karena itu dalam melakukan

penghitungan sebelumnya kita harus melakukan beberapa tahap pengenceran. esuai

dengan hasil pengamatan, didapatkan semakin tinggi pengenceran maka semakin sedikit

jumlah koloninya karena setiap kali dilakukan pengenceran maka jumlah koloninya akan

berkurang. alam praktikum ini kami melakukan sebanyak enam tahap pengenceran

sehingga jumlah koloni yang dapat dihitung adalah pengenceran 12-1 dan 12-.

alam metoda 5+7 sesuai dengan hasil pengamatan jumlah koloni yang diperoleh

sebanyak 2 koloni. asil ini diperoleh dari pengamatan tabung reaksi dengan

pengenceran 12-1, 12-, 12-# dengan mengamati ada atau tidaknya gelembung udara di

dalam tabung durham. Tabung durham berfungsi sebagai tempat untuk menampung gas

yang dihasilkan dari aktifitas kerja mikroba yang terdapat dalam media tersebut. $pabila

tidak terdapat gelembung udara pada tabung durham maka dapat dipastikan dalam media

tersebut tidak terdapat mikroba. alam metoda 5+7, media yang digunakan %ujudnya

berbeda dengan metoda ca%an. alam metoda 5+7 mengunakan media cair sedangkan

pada metoda hitungan ca%an menggunakan media padat.

Tabung durham dalam praktikum ini berfungsi sebagai penampung jasad renik penimbul

gas. +engamatan tabung yang positif dapat dilihat dengan mengamati timbulnya

kekeruhan, atau terbentuknya gas di dalam tabung kecil (tabung urham) yang

diletakkan pada posisi terbalik, yaitu untuk jasad renik pembentuk gas

(ardia', 1!!).

5. KESIMPULAN

Enumerasi merupakan teknik perhitungan jumlah mikroorganisme pada suatu media

tanpa identifikasi jenis mikroba, bertujuan umenentukan jumlah sel suatu kultur

secara kuantitatif


13/14

alam praktikum metode 5+7 menggunakan medium cair sedangkan pada metode

hitungan ca%an menggunakan medium padat (agar).

+ada enumerasi dengan metode hitungan ca%an ini terdapat


14/14

;ay, /. I. (1!!0). $nalisis 5ikroba dalam ;aboratorium. +T >aja Brafindo +ersada.

6akarta.

chlegel, . B. & 3. chmidt. (1!!0). 5ikrobiologi Fmum. Badjah 5ada Fni

Documents

Enumerasi Pny TengSiang