F Focar de infectii nosocomiale cu Klebsiella de infectii nosocomiale cu Klebsiella... · Klebsiella pneumoniae : impactul clinic infectii oportuniste la pacientii imunocompromisi, diabet, alcoolism, pacienti cu dispozitive invazive, nou nascuti

  • Published on
    01-Feb-2018

  • View
    219

  • Download
    5

Embed Size (px)

Transcript

  • FFocar de infectii nosocomiale cu Klebsiella

    pneumoniae la nou-nascuti: valoarea investigatiei microbiologice

    moleculare

    Brindusa-Elena Lixandru1, Codruta Romanita Usein1, Maria Condei1, Daniela Cristea1, Elena-Carmina Dragulescu1, Ileana Luminita Coldea1,

    Felicia Antohe2, Irina Codita1,3

    1INCDMI Cantacuzino, Bucuresti2IBPC N. Simionescu, Bucuresti

    3UMF Carol Davila, Bucuresti

  • Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

    Klebsiella pneumoniae : introducere Klebsiella pneumoniae : introducere Caracteristici :

    > Enterobacteriaceae

    > Bacili Gram-negativi

    > Oxidaza-negativi

    Aero-anaerob

    Imobil

    Tractul digestiv al omului (30%) si al animalelor

    3 subspecii: subsp. pneumoniae, ozenae, rhinoscleromatis

    Testarea sensibilitatii la antibiotice :Grupul 2 de Enterobacterii: producerea naturala de penicilinaza de nivel scazut (SHV-1 cromozomala) inhibata de acidul clavulanic si tazobactam

    Rezistenta naturala la: aminopeniciline (ampicilina, amoxicilina) carboxipeniiline (ticarcilina), ureidopeniciline (piperacilina)

    Fara rezistenta naturala la C1G, C2G, carbapeneme, aminoside, quinolone, TE, C, SXT

  • Klebsiella pneumoniae : impactul clinicKlebsiella pneumoniae : impactul clinic infectii oportuniste la pacientii imunocompromisi, diabet,

    alcoolism, pacienti cu dispozitive invazive, nou nascuti

    Tractul urinar si respirator: cele mai frecvente situsuri de infectie

    Raspandire rapida prin mainile personalului medical

    A -2 a cauza a septicemiilor dupa E. coli

    Rata de mortalitate crescuta

    Focare cu tulpini rezistente (BLSE), diseminare clonala

    Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

  • Klebsiella pneumoniae: mecanisme de rezistenta la Klebsiella pneumoniae: mecanisme de rezistenta la beta-lactaminebeta-lactamine Producerea de -lactamaze: mecanismul principal de rezistenta

    la -lactamine la bacteriile Gram-negative. plasmide cu gene de rezistenta BLSE (beta-lactamaze cu spectru extins):

    Prima BLSE descrisa la o tulpina de K. pneumoniae (1983) BLSE derivate din penicilinze TEM, SHV, prin modificarea 1 sau 2 aa din

    situsul activ al enzimei Dupa 2000 CTX-M un grup nou BLSE cu raspandire modiala E. coli ++++, K

    pneumoniae, Salmonella typhimurium, Proteus mirabilis

    Cefalosporinaze plasmidice (ex: CMY-2): achizitia de gene de tip AmpC prin intermediul plasmidelor de la speciile natural producatoare (Enterobacter, Serratia, Morganella, Citrobacter freundii)

    Carbapenemaze: KPC+++, VIM,NDM, OXA-48

    Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

  • Obiectiv:

    Investigarea unor tulpini izolate dintr-un focar de infectii nosocomiale intr-o sectie de nou-nascuti

    Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

  • Material si metode

    8 izolate clinice8 izolate clinice Provenienta Provenienta

    2 nou- nascuti 2 nou- nascuti Prelevate clinice: Prelevate clinice:

    Hemocultura Hemocultura Secretie pulmonara/traheobronsicaSecretie pulmonara/traheobronsica Secretie nazalaSecretie nazala Exsudat faringian Exsudat faringian

    Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

  • Material si metode Confirmare diagnosticConfirmare diagnostic

    Metode conventionale: teste biochimice in Metode conventionale: teste biochimice in househouse

    Metoda automata VITEKMetoda automata VITEK Testarea sensibilitatii la antibiotice:Testarea sensibilitatii la antibiotice:Metoda disc difuziei Kirby Bauer (CLSI): Metoda disc difuziei Kirby Bauer (CLSI):

    amoxilcilina, amoxicilina+ acid clavulanic, ticarcilina, piperacilina, piperaclina + tazobactam, cefalexin, cefuroxim, cefixim, cefotaxim, ceftazidim, aztreonam, ertapenem, imipenem, gentamicina, tobramicina, amikacina, acid nalidixic, ofloxacin, ciprofloxacin, tetraciclina, cloramfenicol, trimetoprim / sulfametoxazol

    Test de sinergie dublu-discTest de sinergie dublu-discDetectare gene prin PCR : Detectare gene prin PCR :

    blaCTX-MblaCTX-MblaTEMblaTEMblaSHVblaSHV

  • Material si metode

    Tipizare : Metode fenotipice:

    Lizotipare Antibiotipare

    Metode moleculare: Electroforeza in camp pulsator (pulsed field gel

    electrophoresis = PFGE) a fragmentelor de ADN genomic obtinute cu enzima de restrictie XbaI

  • Rezultate - teste fenotipice

    Toate cele 8 tulpini au fost confirmate ca fiind K. pneumoniae

    Toate tulpinile au prezentat acelasi pattern de sensibilitate / rezistenta: R: AMX, TIC, PRL, CXM, KF, CTX, CN, SXT I: AMC, CFM, CAZ, NA S: TZP, IMP, ETP, ATM, AK, TOB, CIP, OFX, C, TE

    Fenotip BLSE

    Toate tulpinile au fost lizorezistente (netipabile prin lizotipie)

  • Rezultate - teste moleculare

    CTX grup1 (CTX-M-15++++?)

    SHV TEM

    Rezultate PCR1 2 3 4 5 6 7 8 M+ 1 2 3 4 5 6 7 8 M+ 1 2 3 4 5 6 7 8 M+

    Legenda1-8 tulpini K. pneumoniae 9- martor pozitiv10martor negativ 11- apa12- marker greutate moleculara

  • Rezultate-teste moleculare

    Legenda:1,6,11-Salmonella ser..Braenderup H9812

    2 - 5, 7 -10- tulpini K.pneumoniae

    Rezultate PFGE

    Similaritate 100% a profilurilor obtinute - clonalitatea si inrudirea epidemiologica a tulpinilor

  • Concluzii

    Utilizarea metodelor fenotipce si moleculare a permis confirmarea unui focar de infectie nosocomiala care a evoluat intr-o sectie de reanimare nou-nascuti.

    Analiza PFGE reprezinta gold standard pentru demonstrarea clonalitatii tulpinilor din focar

    Focar de infectii nosocomiale cu Klebsiella pneumoniae la nou-nascuti: valoarea investigatiei microbiologice moleculare Slide 2 Klebsiella pneumoniae : impactul clinic Klebsiella pneumoniae: mecanisme de rezistenta la beta-lactamineObiectiv:Material si metodeSlide 7Slide 8Rezultate - teste fenotipiceRezultate - teste moleculareRezultate-teste moleculareConcluzii