Guia de validación

GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS EDITADA POR EL COLEGIO NACIONAL DE QUÍMICOS FARMACÉUTICOS BIÓLOGOS MÉXICO, A. C.

OBJETIVO:

Establecer los lineamientos generales mínimos necesarios para llevar a cabo el proceso de

validación de métodos analíticos.

JUSTIFICACIÓN:

Un método analítico es la descripción de la secuencia de actividades, recursos materiales y

parámetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el análisis de un componente

específico(analito) de una muestra.

La validación es el proceso por el cual se demuestra, por estudios de laboratorio, que la

capacidad del método satisface los requisitos para la aplicación analítica deseada; esta actividad

se justifica por los siguientes aspectos:

Moral y Ética,

Aseguramiento de calidad,

Económica, y

Regulatoria.

DEFINICIONES:

Adecuabilidad del sistema.-Verificación de que el sistema opera con base a criterios que

permitan asegurar la confiabilidad de los resultados de un método analítico.

Analito.-Componente específico de una muestra a medir.

Calibración.-Conjunto de operaciones que determinan la relación entre los valores

indicados por un instrumento de medición y los valores conocidos correspondientes a

un patrón de referencia.

Documentación.-Conjunto de información que sustenta una actividad realizada.

Especificaciones.-Descripción del material que incluye la definición de sus propiedades

y características, con las tolerancias de variación de los parámetros de calidad.

Especificidad.-Capacidad de un método analítico para obtener una respuesta debida

únicamente al analito de interés.

Estudio colaborativo.-Reproducibilidad realizada en distintos laboratorios, por

diferentes químicos.

Exactitud.-Concordancia entre un valor obtenido empleando el método y el valor de

referencia.

Estabilidad analítica de la muestra.-Propiedad de una muestra preparada, de conservar

su integridad fisicoquímica y la concentración del analito, después de almacenarse por

un tiempo y condiciones determinadas.

Intervalo.-Concentraciones incluidas entre la concentración superior e inferior del

analito (incluyendo éstas), para las cuales se ha demostrado que el método es preciso,

exacto y lineal.

Límite de cuantificación.-Concentración mínima del analito que se puede determinar

con precisión y exactitud aceptables.

Límite de detección.-Concentración mínima del analito que puede ser detectada, pero no

necesariamente cuantificada.

Linealidad.-Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o por

una transformación matemática, son proporcionales a la concentración del analito.

Metodología de prueba.-Procedimiento para determinar si un producto o materia prima

cumple con las especificaciones establecidas.

Método analítico.-descripción de la secuencia de actividades, materiales y parámetros

que se deben cumplir para llevar a cabo el análisis de un componente específico de la

muestra.

Método analítico desarrollado internamente.-Método desarrollado por el propio

laboratorio.

Método analítico indicativo de estabilidad.-Método cuantitativo capaz de detectar

variaciones en las propiedades del material evaluado, debido a las condiciones de

almacenaje.

Método analítico oficial.-Método que aparece en la literatura oficial reconocida.

Método analítico no oficial.-Método que no aparece en la literatura oficial reconocida.

Muestra.-Porción del material a evaluar.

Muestra analítica.-Porción del material a evaluar de acuerdo al método analítico.

Muestra adicionada.-Porción representativa del material a evaluar, a la que se le

adicionan cantidades conocidas del analito.

Parámetros de desempeño.-Parámetro específico a estudiar en un protocolo de

validación.

Placebo analítico.-Muestra que contiene todos los componentes de un producto a

excepción del analito.

Placebo adicionado.-Muestra e un placebo analítico al cual se le adiciona una cantidad

conocida del analito.

Precisión.-Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el

procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra

homogénea.

Precisión intermedia.-Precisión de un método analítico, expresada como la

concordancia relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas en un

mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos días.

Proporcionalidad.-Relación establecida por una ecuación matemática entre los

resultados obtenidos por dos métodos analíticos.

Protocolo de validación,.Descripción de pruebas específicas para demostrar que un

proceso da resultados que cumplen con los criterios preestablecidos de manera

consistente.

Recobro.-Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado, empleando el

método analítico.

Repetibilidad.-Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia

obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un solo analista, usando

los mismos instrumentos y métodos.

Reproducibilidad.-.Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia

entre determinaciones independientes realizadas por diferentes laboratorios.

Revalidación.-comprobación de que el método analítico mantiene su desempeño cuando

existen cambios en la composición del producto, en el método analítico.

Robustez.-Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarse

variaciones pequeñas pero deliberadas, en los parámetros normales de operación del

método.

Sustancia de referencia.-Sustancia de uniformidad reconocida destinada a utilizarse en

comprobaciones analíticas físicas, químicas o microbiológicas en el transcurso de las

cuales se comparan con la sustancia en evaluación.

Sustancia de referencia primaria.-Sustancia que es designada por tener la más alta

calidad microbiológica, cuyas propiedades se aceptan sin referencia a otras sustancias.

Sustancia de referencia secundaria.-Sustancia cuyas propiedades se asignan por

comparación con una sustancia de referencia primaria, o bien, cuando es certificada

mediante un procedimiento científicamente reconocido.

Tolerancia.-Reproducibilidad de los resultados analíticos obtenidos por el análisis de la

misma muestra bajo diferentes condiciones normales de operación. La robustez y la

tolerancia son conceptos diferentes, ya que el primero se refiere a la influencia de

factores internos del método, mientras que la tolerancia se refiere a factores externos del

método.

Validación del método analítico.-Proceso por el cual se demuestra, por estudios de

laboratorio, que la capacidad del método satisface los requisitos para la aplicación

analítica deseada.

CLASIFICACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS:

Los métodos se clasifican bajo los siguientes criterios:

En función de su estado regulatorio:

a) Métodos farmacopeicos

b) Métodos no farmacopeicos

En función de su aplicación (NOM-059-SSA1 y NOM-073-SSA1):

a) Métodos para producto a granel,

b) Métodos para producto terminado,

c) Métodos para muestra primaria, y

d) Métodos indicadores de estabilidad.

En función de la naturaleza de la respuesta analítica:

a) Métodos físico-químicos.- cuando la respuesta es de carácter físico

(absorción de luz, emisión de luz, voltaje, etc.) o químico(consumo de

iones –OH, consumo de un acomplejante, etc.)

b) Métodos biológicos.- cuando la respuesta es de carácter biológico

(crecimiento de microorganismos, protección, muerte, etc.)

En función de su propósito analítico:

a) Métodos para cuantificar el analito(contenido o potencia)

b) Métodos para establecer la presencia del analito a un limite.

c) Métodos para identificar el analito.

Esta clasificación se utiliza para establecer los parámetros de desempeño a estudiar en la

validación del método analítico.

Cualquier método analítico puede estar constituido por técnicas de separación, extracción, etc.

, y por técnicas de medición (espectrofotometría, volumetría, colorimetría, potenciometría,

etc.) que permiten medir la respuesta del analito en la muestra. A esta técnica se le denomina

Sistema de Medición.

En función de la naturaleza del sistema de medición:

a) Métodos en los cuales el instrumento de medición de la respuesta

analítica, permite medir una señal de ruido (cromatógrafo de

líquidos y de gases, espectrofotómetros, etc.)

b) Métodos en los cuales el instrumento de medición no permite medir

una señal de ruido (buretas, medidor de halos, potenciómetros, etc.)

PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

En función de la aplicación analítica de un método, se indican los parámetros de desempeño a

estudiar. PRUEBAS DE IMPUREZAS

PARÁMETRO DE

DESEMPEÑO

CONTENIDO/

POTENCIA /

VALORACIÓN

CONTENIDO/

VALORACIÓN

LIMITE IDENTIFICACIÓN

PRECISIÓN/ ADECUABILIDAD

DEL SISTEMA

SÍ SÍ SÍ *

LINEALIDAD DEL SISTEMA SÍ SÍ NO NO

ESPECIFICIDAD2 SÍ SÍ SÍ SÍ

EXACTITUD Y REPETIBILIDAD SÍ SÍ NO NO

LINEALIDAD DEL MÉTODO SÍ SÍ NO NO

PRESICIÓN DEL MÉTODO O

PRECISIÓN INTERMEDIA2

SÍ SÍ NO NO

ESTABILIDAD ANALÍTICA2

DE LA MUESTRA

* * NO NO

LIMITE DE DETECCION NO NO SÍ NO

LIMITE DE CUANTIFICACION NO SÍ NO NO

ROBUSTEZ * * * NO

TOLERANCIA * * * NO

*Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza del método.

1. La falta de especificidad de un método analítico, puede ser compensada por otra

alternativa analítica de soporte, como por ejemplo cromatografía de capa fina.

2. También es definido como un estudio de tolerancia.

3. Un método que es exacto y lineal, por definición es específico al placebo analítico o a los

otros componentes de la muestra.

DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN:

Precisión del Sistema:

Metodología.- Preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a la

concentración del analito que represente la concentración de la solución de

referencia utilizada o en ciertos casos, la concentración que represente el 100%

de la muestra procesada para su medición; preparadas por dilución o por pesadas

independientes. Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones.

Calcular S y CV de la respuesta analítica;

Criterios de aceptación:

CV 1.5% para métodos físico-químicos

CV 3% para métodos biológicos

Valores superiores u otro criterio de aceptación deben ser justificados.

Las formulas y el procedimiento se encuentra en el anexo 1.

Adecuabilidad del sistema (Métodos cromatográficos):

Metodología.- Inyectar por quintuplicado la solución de adecuabilidad,

reportar la respuesta del analito, calcular el CV y para cada inyección:

Factor capacidad (K’), resolución (si procede, R), retención relativa (si procede,

Rr), factor de coleo (T), número de platos teóricos (N).


CV 2% para respuesta analítica.

Valores superiores deben ser justificados.

Para cada inyección, se recomienda:

K’>2 ; R>2 ; T<2

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 2.

La evaluación de adecuabilidad del sistema permite verificar que el sistema de

medición funcione adecuadamente, independiente de las condiciones

ambientales.

Antes de la validación del método analítico deben establecerse los criterios para

la operación del sistema para ser evaluados en la validación y verificados de

manera rutinaria al emplear el método analítico. Por ejemplo en el caso de

método volumétricos, el volumen de la titulación de blancos y/o de un volumen

específico de la solución de referencia; en el caso de métodos fotométricos la

lectura de soluciones blanco.

Linealidad del sistema:

Metodología.- Preparar por lo menos por triplicado 5 niveles de concentración

(intervalo) de la solución de referencia ya sea por dilución o por pesadas

independientes. La concentración central debe ser igual a la que se prepara la

solución de referencia en el método o la que represente el 100% en la muestra

procesada para su medición.

Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones de medición, reportar la

relación concentración vs respuesta analítica.

Calcular b1, b0, r2, IC(1).

El intervalo esta en función del propósito del método y se expresa como % de la

concentración de la solución de referencia o en función del contenido del analito

en la muestra.

Para contenido/potencia/valoración se sugiere un mínimo de 20%

Para contenido/valoración de impurezas desde un nivel apropiado hasta un 20%

por arriba de la especificación.

Para métodos indicadores de estabilidad desde un nivel apropiado hasta un 120%

Es critico que el intervalo no excluya valores de concentración que

potencialmente puedan dar lugar al contenido del analito en la muestra.


r2 0.98

IC(1), no debe incluir el cero

Otro criterio de aceptación debe ser justificado.


Es conveniente trazar la gráfica de la concentración (x) vs la respuesta analítica

(y), incluyendo en ella la ecuación, línea de ajuste y el coeficiente de

determinación.

Especificidad:

Metodología.- Establecer las posibles sustancias interferentes y adicionar

cantidades conocidas de éstas, solas o combinadas a la muestra y evaluar su

respuesta bajo las mismas condiciones de análisis.

En métodos de identificación seleccionar sustancias que potencialmente

interfieran en la determinación con base en la estructura del analito.

Para métodos de contenido/ potencia/ valoración, se analizan placebos del

producto y cuando proceda sustancias relacionadas, precursores, homólogos y

una mezcla de ellos con el producto.

Para métodos de contenido/ valoración de impurezas, se adicionan éstas al

analito en niveles que incluya la especificación. Cuando no se dispone de las

impurezas, el analito se somete a condiciones que generen su inestabilidad

química y aplicar el método.

Para métodos de límite de impurezas se analizaran las muestras de impurezas

individualmente, el producto y la mezcla de éstos.

Para métodos indicadores de inestabilidad, si se cuenta con los productos de

degradación, preparar muestras con placebos adicionado de éstos, el placebo

adicionado de analito, el placebo adicionado de analito y productos de

degradación y se analizan con el método.

Si no se cuenta con los productos de degradación se puede favorecer la

inestabilidad del analito en la muestra:

1) Someter el analito, el placebo y la muestra a temperaturas de 20°C por debajo

del punto de fusión del analito de 2 a 4 semanas.

2) Exponer el analito, placebo y muestra a luz UV, fluorescente y/o humedad

relativa.

3) Hacer soluciones del analito, ajustando el pH de 1 a 2 y/o de 10 a 12 y

someterlas a 60°C – 80°C.

4) Adicionar peróxido de hidrógeno para favorecer la oxidación del analito.

El tiempo y las condiciones se seleccionan con el fin de degradar al analito a

niveles del 15 al 30%. Estos estudios no se realizan en analitos con propiedades

reactivas.

Para métodos no selectivos, la especificidad se sustenta con los resultados de

exactitud y linealidad, si el método cumple con los criterios de aceptación.


La respuesta del método solo se deberá al analito.

Exactitud y Repetibilidad del método:

Metodología:

A)Conociendo los componentes de la muestra se preparará el placebo analítico.

A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analítica por

sextuplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de

este en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad por

sextuplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de

este en la muestra. El mismo analista analizara los placebos adicionados

utilizando de referencia la sustancia empleada en la adición al placebo analítico

en las mismas condiciones. Determinar la cantidad recuperada del analito.

B)Si no se conocen los componentes de la muestra, con el método se determina

el contenido del analito y se preparan 6 muestras adicionadas del analito hasta

completar el 100% de éste en la muestra. Las muestras adicionadas se analizan

usando como referencia la sustancia empleada en la adición de la muestra.

Determinar la cantidad recuperada del analito.

La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método.

Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo analítico, al obtener el

cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada

en porcentaje.

Calcular ŷ, S, CV e IC() del porcentaje de recobro.


IC() debe incluir el 100% o que el promedio aritmético del % de

recobro se incluya en el intervalo:

98-102% método cromatográfico

98-102% método volumétrico

97-103% método químico o espectrofotométrico

95-105% método microbiológico

CV del porcentaje de recobro:

No mayor de 2% en método cromatográfico

No mayor de 2% en método volumétrico

No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico

No mayor de 5% en método microbiológico

No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la

especificación del analito en la muestra.


Linealidad del método:

Metodología:

A) Conociendo los componentes de la muestra se preparará el placebo analítico.

A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analítica por

triplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de este

en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad del

analito (intervalo) y preparar el placebo adicionado por triplicado a cada nivel

manteniendo constante la cantidad de placebo analítico en los tres niveles. El

mismo analista analizara los placebos adicionados utilizando de referencia la

sustancia empleada en la adición al placebo analítico en las mismas condiciones.

Determinar la cantidad recuperada del analito.

B) Si no se conocen los componentes de la muestra, con el método se determina

el contenido del analito y se preparan 3 muestras adicionadas del analito hasta

completar el 100% de éste en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e

inferior de la cantidad del analito (intervalo) y preparar la muestra adicionada

por triplicado a cada nivel manteniendo constante la cantidad de muestra en los

tres niveles Las muestras adicionadas se analizan usando como referencia la

sustancia empleada en la adición de la muestra. Determinar la cantidad

recuperada del analito.

La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método.

El intervalo de la concentración del analito adicionado depende del propósito del

método y debe incluir la especificación. La siguiente tabla sugiere intervalos

para el estudio de linealidad, en la cual la especificación se maneja como

porcentaje, por ejemplo el 100% puede representar 100mg/g de muestra, 10ppm,

5mg/ml, etc.

PROPÓSITO ESPECIFICACIÓN INTERVALO MÍNIMO

CONTENIDO/ POTENCIA/

VALORACIÓN

LÍMITE INFERIOR (LI)

LIMITE SUPERIOR (LS)

LI –10% A LS +10%

EJEMPLO

VALORACIÓN

90% - 110%

80% a 120%

Por lo tanto los niveles podrían

Ser 80%, 100% y 120%

UNIFORMIDAD DE DOSIS

75% - 125%

60% a 140%


Ser 60%, 100% y 140%

DISOLUCIÓN

Q = 75%

En el caso conservador de llegar a

tercera etapa, ninguna unidad es menor a

Q –25%

40% a 130%


Ser 40%, 100% y 130%

CONTENIDO/ VALORACIÓN

PARA PRUEBAS DE

IMPUREZAS

LIMITE SUPERIOR (LS)

LS – 20% a LS +20%

EJEMPLO

Sustancias Relacionadas

No debe contener más de 100%

80% a 120%


Ser 80%, 100% y 120%

Reportar la relación cantidad adicionada vs cantidad recuperada. Utilizar el

método de estimación por mínimos cuadrados y calcular b1, b0, r2, IC(1), IC(0)

y CVy/x.

Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo o muestra adicionada al

obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada

expresada en porcentaje. Calcular ŷ, S, CV, IC() del porcentaje de recobro.


1) Cantidad adicionada vs cantidad recuperada: r

2 > 0.98

El IC(1) debe incluir la unidad

El IC(0) debe incluir el cero

El CVy/x del porcentaje de recobro:

No mayor de 2% en método es cromatográfico




No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación

del analito en la muestra.

2) Porcentaje de recobro:

El IC() debe incluir el 100% o el promedio aritmético del % de recobro

se incluya en el intervalo:

98-102% método cromatográfico

98-102% método volumétrico

97-103% método químico o espectrofotométrico

95-105% método microbiológico

CV del porcentaje de recobro:

No mayor de 2% en método cromatográfico




No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación

del analito en la muestra.

Otro criterio de aceptación debe ser justificado.


Es conveniente trazar la gráfica de la cantidad adicionada (x) vs la cantidad

recuperada (y), incluyendo en ella la ecuación, línea de ajuste y el coeficiente de

determinación.

Precisión del Método (Precisión Intermedia o Tolerancia interdía / analista):

Metodología.- Analizar por triplicado una muestra homogénea del producto

que tenga un nivel cercano o igual al 100% (para contenido/potencia/valoración)

o una muestra cuyo contenido este incluido en el intervalo lineal de

concentración de linealidad de método (para impurezas) en dos días diferentes y

por dos analistas diferentes. Reportar el contenido/potencia/valoración del

analito de todas las muestras.

Calcular ŷ, S, CV del contenido/potencia/valoración, utilizando todos los

resultados obtenidos.


CV 2% para métodos cromatográficos y volumétricos

CV 3% para métodos químicos o espectrofotométricos


No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del

analito en la muestra.

Valores superiores deben ser justificados.


Los resultados pueden ser analizados utilizando otros métodos estadísticos

apropiados que permitan sustentar que la precisión del método es aceptable.

Puede ser utilizado un modelo estadístico lineal de diseño experimental ya que

es de utilidad cuando se quiere determinar el grado de tolerancia del método a

fuentes de variación como estimar la variabilidad entre analistas o entre días.

Estabilidad Analítica de la Muestra:

Metodología.- Establecer la etapa de análisis en la cual se desea evaluar la

estabilidad, determinar si en dicha etapa es posible fraccionar (muestras

dependientes) o no (muestras independientes) y las condiciones de almacenaje.

En muestras dependientes, determinar la estabilidad analítica procesando hasta la

etapa preestablecida por triplicado una muestra homogénea, fraccionar cada

preparación de acuerdo a las condiciones de almacenaje de interés. Terminar el

análisis de una de las fracciones de cada preparación

(contenido/potencia/valoración), seguir el análisis de cada una de las fracciones

al término de cada condición de almacenaje utilizando una solución de

referencia recientemente preparada. Reportar el contenido/potencia/valoración

de cada fracción.

En muestras independientes, determinar la estabilidad analítica a partir de una

muestra homogénea, analizando por triplicado (contenido/potencia/valoración

inicial). Simultáneamente y de la misma muestra, procesar el número de

muestras necesarias para cada condición de almacenaje hasta la etapa

preestablecida (preparaciones) por triplicado, seguir el análisis de cada una de

las preparaciones al término de cada condición de almacenaje utilizando una

solución de referencia recientemente preparada. Reportar el

contenido/potencia/valoración de cada preparación.

Calcular ŷ0, ŷ1, di.


di 2% métodos cromatográficos y volumétricos

di 3% para métodos químicos o espectrofotométricos

di 5% para métodos biológicos



Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.


Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos como la

distribución t de Dunnett.

Límite de Detección:

1)LD con base en señal de Ruido:

Metodología.- Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir la

respuesta analítica y presentan una señal de ruido basal.

Determinar la respuesta de blancos (reactivos. Placebos analíticos, etc.) y la

respuesta de muestras analíticas (analitos, placebos adicionados, etc.) en un

intervalo del analito que incluya la especificación de la prueba de impureza

limite. Determinar la cantidad del analito que genere una respuesta con respecto

al blanco en una proporción de 3 a 1, lo que corresponde a la concentración

asociada al limite de detección.


El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.

2)LD con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos:

Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como no

instrumentales.

Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a

valores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezas

limite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Simultáneamente

preparar 5 blancos. Medir las respuestas analíticas. Para la curva de calibración,

sin incluir los blancos, calcular b1, r2 e IC(1).

Para los blancos, calcular Sb de los blancos.

Calcular el límite de detección:

LD=(3.3 Sb) /b1

El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señal

de ruido.


r2 0.98

IC(1), no debe incluir el cero.



3)LD con base en la curva de calibración y la desviación estándar de regresión:


instrumentales.



limite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Medir las

respuestas analíticas.

Calcular b1, r2, Sy/x, IC(1).


LD=(3.3 Sy/x) /b1


de ruido.


r2 0.98




4)LD con base en la curva de calibración y la desviación estándar de la

ordenada al origen:


instrumentales.



limite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Medir las

respuestas analíticas.

Calcular b1, r2, Sbo, IC(1).


LD=(3.3 Sbo) /b1


de ruido.


r2 0.98





Limite de cuantificación:

1)Señal de Ruido:

Metodología.- Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir la

respuesta analítica y presentan una señal de ruido basal.

Determinar la señal de blancos (reactivos. Placebos analíticos, etc.) y la señal de

muestras analíticas (analitos, placebos adicionados, etc.) a concentraciones

conocidas del analito, inferiores o que incluya la especificación del contenido /

valoración de la prueba de impurezas. Determinar la cantidad del analito cuya

señal sea similar o mayor al blanco en una proporción de 10 a 1, lo que

corresponde a la concentración asociada al limite de detección. Verificar que

dicha cantidad corresponda al limite de cuantificación, evaluando la exactitud y

Repetibilidad del valor estimado.


El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba

de impurezas.

2)LC con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos:


instrumentales.


valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la

prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.

Simultáneamente, preparar 5 blancos. Medir las respuestas analíticas. Calcular

b1, r2 e IC(1).

Para los blancos, calcular Sb de los blancos.

Calcular el límite de cuantificación:

LD=(10 Sb) /b1

Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite de

cuantificación.

Criterio de aceptación:

r2 0.98



de impurezas.


3)LC con base en la curva de calibración en la desviación estándar de

regresión:


instrumentales.




Medir las respuestas analíticas.

Calcular b1, r2, Sy/x, IC(1).


LC=(10 Sy/x) /b1


cuantificación.


r2 0.98



de impurezas.


4)LC con base en la curva de calibración y la desviación estándar de la

ordenada al origen:


instrumentales.




Medir las respuestas analíticas.

Calcular b1, r2, Sbo, IC(1).


LC=(3.3 Sbo) /b1


cuantificación.


r2 0.98



de impurezas.



Robustez:

Metodología.- Establecer los factores instrumentales (temperatura y presión

de la columna) y/o no instrumentales (pH de fases) relacionados al método y

sean críticos. En condiciones normales y distintas de operación, analizar la

muestra por triplicado. Reportar el contenido/potencia/valoración del analito en

la muestra de condiciones normal y distintas, expresadas como %.

Calcular ŷ0, ŷ1, di.


di 2% métodos cromatográficos y volumétricos

di 3% para métodos químicos o espectrofotométricos

di 5% para métodos biológicos





Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos como la

distribución t de Dunnett (para 3 o más condiciones) o t de Student (para 2

condiciones), incluyendo la condición normal.

Tolerancia:

Metodología.- Establecer los factores ajenos al equipo (diferentes equipos,

lotes de reactivos) que se presentan al reproducir el método en otras condiciones

de uso. Fijar 2 condiciones de uso y analizar la muestra por triplicado a cada

condición. Reportar el contenido/potencia/valoración del analito en todas las

muestras.

Calcular y, S y CV del contenido/potencia/valoración.


CV 2% métodos cromatográficos y volumétricos

CV 3% para métodos químicos o espectrofotométricos






Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos. Uno de

ellos es aplicar un análisis de varianza con un criterio de clasificación para

determinar si al menos una de las condiciones de uso es diferente, si se concluye

que si, se realiza una prueba estadística de comparaciones múltiples para

identificar aquellas condiciones que dan lugar a resultados diferentes.

SUSTANCIAS DE REFERENCIA:

Las sustancias de referencia constituyen un componente propio del método y una herramienta

en la evaluación de los parámetros de desempeño, lo que permite establecer la confiabilidad de

la metodología. Para su adquisición se debe contar con procedimientos para su manejo y

aplicación, así como registros del uso y con la documentación que avale una buena práctica de

manejo de dichas sustancias.

Manejo.- Cada sustancia de referencia debe almacenarse, manejarse y utilizarse de

acuerdo con las especificaciones correspondientes. Cualquier condición especial de

almacenamiento debe indicarse en el marbete y (o) certificado analítico.

Todas las sustancias deben contar con su identificación y registro, teniendo como

mínimo las siguientes:

Para sustancias de referencia primarias:

A) Nombre de la sustancia de referencia,

B) Cantidad,,

C) Lote del producto,

D) Clave (para uso interno)

E) Fecha de adquisición,

F) Pureza (potencia),

G) Fecha de caducidad

H) Riesgo potencial de manejo, e

I ) Indicaciones especiales.

Para sustancias de referencia secundaria:

A) Nombre de la sustancia de referencia,

B) Cantidad certificada,

C) Lote interno,

D) Clave,

E) Fecha de certificación, y

F) Potencia en relación con la sustancia de referencia.

La información mínima para su registro es:

A) Nombre,

B) Lote,

C) Clave de identificación interna,

D) Procedencia (USP, BP, COSUFAR, etc.),

E) Fecha de adquisición,

F) Fecha de empleo,

G) Uso,

H) Cantidad empleada,

I) Cantidad remanente,

J) Analista que la utiliza, y

K) Caducidad

Para las sustancias de referencia secundaria, conviene además:

A) Nombre,

B) Lote,

C) Cálculos para obtener la potencia,

D) Gráficas,

E) Certificado de análisis del material

En la validación de métodos, estos registros son críticos.

Se debe contar con lineamientos que aseguren la no-utilización de sustancias de

referencia caducas.

Tratamiento:

Cualquier tratamiento previo al que deba someterse la sustancia de referencia lo

debe contemplar la propia metodología, o en su caso, debe especificarse en su

marbete.

Si la sustancia de referencia debe secarse antes de utilizarse, se deberán seguir

las instrucciones de la etiqueta o certificado de análisis; se realizará en otro

envase al original y el excedente se desechará.

Procedencia:

Algunos centros especializados que proveen sustancias de referencia son:

*British Pharmacopoeia (BP), European Pharmacopoeia (EP)

*European Pharmacopoeia Chemical Refernce Substances (EPCRS),

*Comité de Sustancias Farmacéuticas de Referencia (COSUFAR)

*Organización Mundial de la Salud (OMS)

*Secretaría de Salud (SSA), y

*United States Pharmacopeia (USP)

REVALIDACIÓN:

Se deben establecer y justificar criterios apropiados para revalidación de métodos analíticos, así

como mantener un control de cambios. Cualquier cambio crítico a un método analítico da lugar

a uno nuevo y por lo tanto requiere de una validación como tal.

La siguiente tabla establece cambios en el método, su impacto y el parámetro de desempeño a

revalidar:

CAMBIO IMPACTA PARÁMETRO A REVALIDAR

DISPOSITIVO DE MEDICIÓN

DEL INSTRUMENTO DE

MEDICIÓN

VARIACIÓN EN SISTEMA

DE MEDICIÓN

PRECISIÓN DEL SISTEMA

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

CONCENTRACIÓN DE LA

SOLUCIÓN DE REFERENCIA

EXACTITUD DEL MÉTODO LINEALIDAD DEL SISTEMA Y

EXACTITUD DEL MÉTODO

FORMULACIÓN DEL

PRODUCTO

EXACTITUD DEL MÉTODO EXACTITUD Y REPETIBILIDAD

DEL MÉTODO

LINEALIDAD DEL MÉTODO

ESPECIFICIDAD

EQUIPOS VARIACIÓN DEL MÉTODO TOLERANCIA

PROVEEDOR DE COLUMNAS VARIACIÓN DEL MÉTODO TOLERANCIA

COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS:

Cuando se quieren comparar 2 métodos para aplicaciones de contenido/potencia/valoración, se

emplean los siguientes procedimientos:

Estudio de Comparación de Parámetros de Desempeño:

Se utiliza cuando los dos métodos han sido validados y se quiere comparar sus

parámetros de desempeño. En función a su aplicación analítica se indican los

parámetros de desempeño a estudiar:

CAMBIO CONTENIDO/POTENCIA/VALORACIÓN PARÁMETRO A REVALIDAR

ESPECIFICIDAD

PARÁMETROS EXACTITUD Y REPETIBILIDAD

DE LINEALIDAD DEL MÉTODO

DESEMPEÑO PRECISION DEL MÉTODO O PRECISIÓN INTERMEDIA

Los parámetros analíticos a comparar, así como los criterios para establecer la igualdad

de dichos parámetros, son los siguientes:

1) Especificidad:

Debe cumplir para cada método analítico, demostrando su especificidad o

exactitud.

2) Repetibilidad en exactitud:

Metodología.- De los datos de exactitud y Repetibilidad utilizar la información

del porcentaje de recobro. Calcular S2 del porcentaje de recobro de cada

método.


El intervalo de confianza para la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.

Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.


3) Repetibilidad en Linealidad del Método:

Metodología.- De los datos de linealidad del método, utilizar la información

del porcentaje de recobro. Calcular la S2 del porcentaje de recobro de cada

método.





4)Exactitud:

Metodología.- De los datos de exactitud y Repetibilidad, utilizar la

información del porcentaje de recobro. Calcular la S2, ŷ del porcentaje de

recobro de cada método.


El intervalo de confianza para la diferencia de las 2 medias poblacionales del

porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero.


El análisis estadístico de los resultados, presenta 2 situaciones:

a)Los métodos tienen la misma Repetibilidad (varianzas iguales)

b)Los métodos tienen diferente Repetibilidad (varianzas diferentes);

por lo tanto se tiene que realizar el estudio de comparación de Repetibilidad de

ambos métodos.


5) Linealidad del Método:

Metodología.- De los datos de linealidad utilizar la información del porcentaje

de recobro así como la cantidad adicionada y la cantidad recuperada de cada

método. Calcular la


Anexo 15.

6) Precisión del Método:

Metodología.- De los datos de precisión del método, utilizar la información del

contenido/potencia/valoración del analito de cada método. Calcular S2

1 y S2

2.




Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo16.

Estudio de Correlación:

Se utiliza cuando se comparan dos métodos cuyos resultados se expresan en

unidades diferentes.

Se aplica a métodos de contenido/valoración/potencia y los parámetros a evaluar

son:

1) Proporcionalidad:

No necesariamente establecen equivalencia de resultados, sino proporcionalidad,

ya que en muchas ocasiones la respuesta analítica es diferente.

a) Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un placebo

analítico.

Metodología.-Preparar una cantidad suficiente de placebo analítico con los

componentes que están comúnmente en la muestra, de tal modo que pueda ser

analizado por ambos métodos en tres diferentes niveles del analito, que incluya

la especificación.

Del placebo analítico preparado adicionarle analito al nivel inferior. Fraccionar

en tres muestras y analizar cada muestra por ambos métodos bajo las mismas

condiciones de cada método para determinar el contenido/valoración/potencia.

Repetir este procedimiento con el nivel del 100% superior.

Reportar la relación contenido/valoración/potencia de cada método en cada

muestra del método a comparar (y), método de referencia (x). Calcular b1, b0, r2,

IC(1), CVy/x.

b) No se conocen los componentes de la muestra.

Metodología.- Seleccionar 9 muestras del producto cuyo nivel del analito

cumpla con la especificación, fijar una etapa de los métodos analíticos en los

cuales transfiera una mayor o menor cantidad e la muestra con el objeto de poder

variar el nivel del analito. Tener 3 muestras con nivel bajo, 3 niveles

correspondientes al 100% y 3 con un nivel alto del analito. Las 9 muestras se

analizan por ambos métodos en las mismas condiciones analíticas de cada

método. Determinar el contenido/valoración/potencia de cada muestra.

Reportar la relación contenido/valoración/potencia del método a comparar (y), el

método de referencia (x). Calcular b1, b0, r2, IC(1), CVy/x.


El IC(1) no debe incluir el cero.


Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo17.

2) Precisión:

El método no oficial deberá tener una precisión igual a mejor que el método

oficial, o que su precisión sea aceptable para la aplicación analítica.

Inicialmente se debe establecer el método de referencia y el método a comparar.

Metodología.-Tanto con el método de referencia como el método a comparar,

dos analistas en dos días deben analizar por triplicado muestras independientes

(pesadas o alícuotas) de un lote homogéneo de producto, cuyo nivel de analito

esté incluido dentro de la especificación. Reportar el

contenido/potencia/valoración del analito de todas las muestras en % para ambos

métodos.


El intervalo de confianza unilateral inferior, para la razón de varianzas del

método a comparar respecto del método de referencia, no debe exceder el valor

de 1.



DOCUMENTACIÓN:

Las actividades de la validación de un método analítico deben ser sustentadas por los siguientes

documentos:

a) Protocolo, cuyo contenido es:

1. Titulo

2. Propósito u Objetivo,

3. Responsabilidades,

4. Plan de prueba describiendo los parámetros de desempeño que permitan

verificar la aplicación analítica deseada,

5. Criterios de aceptación para cada parámetro,

6. Formato de registro de resultados.

b) Reporte, cuyo contenido es:

1. Titulo,

2. Resultados,

3. Análisis de resultados,

4. Confrontación contra los criterios de aceptación,

5. Conclusión

Es crítico documentar los registros analíticos; dicha documentación deberá estar ordenada y

disponible, en responsabilidad del área de calidad.

CONCORDANCIA CON GUIAS INTERNACIONALES:

Esta guía es equivalente a:

Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures

ICH-Q2Q, March 1995

Guideline on the Validation of Analytical Procedures, Methodology,

Availability. Notice ICHQ2B.

USP24. Validation of Compendial Methods.

Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods CDER.

November 1994, CMC 3.

BIBLIOGRAFIA:

Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 7a Ed. México (2000).

Métodos Analíticos Validación Guías Generales de Validación de la DGCIS,

SSA (1989).

Ley General de Salud (1997)

NMX-CC-1-1990 Sistemas de Calidad Vocabulario

NMX-CC-2-1990 Sistemas de Calidad- Gestión de Calidad, Guía para la

Selección, el Uso de Normas de Aseguramiento de Calidad.

Reglamento de Insumos para la Salud (1998).

Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-1993. Buenas prácticas de

fabricación para establecimientos de la industria químico farmacéutica

dedicados a la fabricación de medicamentos.

NOM-177-SSA1-1998 “Que establece las pruebas y procedimientos para

demostrar que un medicamento es intercambiable”

Guidance for Industry Bioanalytical methods Validation for Human Studies,

December, 1998 FDA.

Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures ICH-Q2A,

March 1995.

Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods, CDER,

November 1994, CMC 3.

Guideline for Industry Analytical Procedures and Methods Validation, August

2000, FDA.

Guideline for submitting Samples and Analytical Data for Methods Validation,

February 1987, FDA.

ICH Harmonised Tripartile Guideline Validation Analytical Procedures

Methodology 6 Nov 1996.

USP24, Validation of Compendial Methods.

Norma Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de medicamentos.

Diseño y Análisis de Experimentos, Montgomery D. C., Grupo Editorial

Iberoamérica, 3ª Ed. México (1991).

ANEXOS:

NUMERO CONTENIDO

1 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL SISTEMA

2 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

3 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA

4 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA EXACTITUD Y Repetibilidad

DEL MÉTODO

5 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL MÉTODO

6 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISION DEL MÉTODO

(PRECISIÓN INTERMEDIA)

7 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ESTABILIDAD ANALÍTICA

DE LA MUESTRA

8 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE DETECCIÓN

9 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE CUANTIFICACION

10 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ROBUSTEZ

11 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA TOLERANCIA

12 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD Y EXACTITUD

PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS

13 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD EN

LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS

14 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN EXACTITUD PARA COMPARACIÓN

DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS

15 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN LINEALIDAD DEL MÉTODO

PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS

16 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN PRECISIÓN DEL

MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS

17 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PROPORCIONALIDAD DE

MÉTODOS EN ESTUDIOS DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE

2 MÉTODOS ANALÍTICOS

18 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL MÉTODO

EN ESTUDIO DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS

19 TABLA ESTADÍSTICA DE LA DISTRIBUCIÓN t DE Student

20 TABLAS ESTADÍSTICAS DE LA DISTRIBUCIÓN F DE FISHER

21 COMENTARIOS RESPECTO A LOS CÁLCULOS Y REGLAS DE REDONDEO

ANEXO 1. FÓRMULAS Y PROCEDIMEITN O DE CÁLCULO PARA PRECISIÓN

DEL SISTEMA.

A)FORMULAS:

Media Aritmética

n

yy

Desviación Estándar

1

22

nn

nS

yy

Coeficiente de variación

100*y

SCV

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:

Tabular los resultados

Calcular y, y2 y determinar n.

Calcular ŷ y S Calcular el CV

ANEXO 2. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA.

A)FORMULAS:

Media Aritmética

n

yy

Desviación estándar

1

22

nn

nS

yy


100*y

SCV





ANEXO 3. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD

DEL SISTEMA.

A)FORMULAS:

Pendiente

221

xxn

yxxynb

Ordenada al origen

n

xbyb

1

0

Coeficiente de determinación

2222

22

yynxxn

yxxynr

Intervalo de confianza para la pendiente

IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1

n

xx

SS xyb

22

1/1

2

2 1

/

n

ybxybyS

o

xy

t0.975, n-2 = Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de

Student.



Calcular x, y, x2, y

2, xy, y determinar n.

Calcular b1, b0, r2

Calcular el Sy/x y Sb’

Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(1)

ANEXO 4. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA EXACTITUD

Y REPETIBILIDAD DEL MÉTODO.

A)FORMULAS:

Media aritmética

n

yy


1

22

nn

nS

yy


100*y

SCV

Intervalo de confianza para la media poblacional

n

StyIC n 1,975.0)( μ

t0.975, n-1 Referirse al anexo 19 para determinar el valor de t de

Student

n = numero de recobros.





Determinar en el anexo 19 t0.975, n-1 y calcular IC()

ANEXO 5. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD

DEL MÉTODO.

5.1 CANTIDAD ADICIONADA VS CANTIDAD RECUPERADA

A)FORMULAS:

Pendiente

221

xxn

yxxynb

Ordenada al origen

n

xbyb

1

0


2222

22

yynxxn

yxxynr


IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb’

n

xx

SS xyb

22

1/'

2

2 1

/

n

ybxybyS

o

xy

t0.975, n-2 = Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de

Student.

Intervalo de confianza para la ordenada al origen

IC(o) = bo t0.975,n-2Sbo

n

xx

x

nSS xybo

22

21/

n

xx

Coeficiente de variación de regresión

100/

/ y

xyxy

SCV

n

yy





Calcular b1, b0, r2



Calcular x y Sbo

Calcular IC(b0)

Calcular el CVy/x

5.2 PORCENTAJE DE RECOBRO

A)FORMULAS:

Media aritmética

n

yy


1

22

nn

nS

yy


100*y

SCV

Intervalo de confianza para la media poblacional

n

StyIC n 1,975.0)( μ





Determinar en el anexo 19 t0.975, n-1 y calcular IC()

ANEXO 6. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN

DEL MÉTODO (PRECISIÓN INTERMEDIA).

A)FORMULAS:

Media aritmética

n

yy


1

22

nn

nS

yy


100*y

SCV






ESTABILIDAD ANALÍTICA DE LA MUESTRA.

A)FORMULAS:

Media aritmética del análisis inicial

on

0

yy0

no = número de muestras del análisis inicial

Media aritmética del análisis de cada condición de almacenaje

1n

1

1

yy

n1 = número de muestras del análisis de la i-ésima condición de almacenaje

Diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición de

almacenaje respecto de la media aritmética del análisis inicial

01 yydi



Calcular y0, y1, y2, y3 y determinar no, n1, n2, n3

Calcular ŷo, ŷ1, ŷ2, ŷ3

Calcular di

ANEXO 8. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE

DETECCIÓN.

8.1 SEÑAL RUIDO

Tabular los resultados.

8.2 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN

ESTÁNDAR DE LOS BLANCOS

A)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIÓN:

Pendiente

221

xxn

yxxynb


2222

22

yynxxn

yxxynr


IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1

n

xx

SS xyb

22

1/1

2

2 1

/

n

ybxybyS

o

xy

n

xbyb

1

0


t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de

Student

B)FORMULA PARA LOS BLANCOS

Desviación estándar de los blancos

1

22

nn

nSb

yy

n = numero de blancos

C)FORMULA PARA EL LIMITE DE DETECCIÓN

1

3.3

b

SLD

b

D)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIÓN




Calcular b1, r2

Calcular el Sy/x y Sb1, bo


E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS


Calcular y, y2, y determinar n.

Calcular Sb

Calcular el LD

8.3 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADA EN LA DESVIACIÓN

ESTÁNDAR DE REGRESIÓN

A)FORMULAS

Pendiente

221

xxn

yxxynb


2222

22

yynxxn

yxxynr


IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1

n

xx

SS xyb

22

1/1

2

2 1

/

n

ybxybyS

o

xy

n

xbyb

1

0

t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Limite de detección

1

/3.3

b

SLD

xy

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO




Calcular b1, r2

Calcular el Sy/x y Sb’, bo


Calcular el limite de detección


ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN

A)FORMULAS

Pendiente

221

xxn

yxxynb


2222

22

yynxxn

yxxynr


IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1

n

xx

SS xyb

22

1/1

2

2 1

/

n

ybxybyS

o

xy

n

xbyb

1

0


Desviación estándar de la ordenada al origen

n

xx

x

nSS xybo

22

21/

n

xx

Limite de detección

1

3.3

b

SLD

bo





Calcular b1, r2



Calcular x y Sbo

Calcular el LD

ANEXO 9. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE

CUANTIFICACIÓN.

9.1 SEÑAL RUIDO

Tabular los resultados.


ESTÁNDAR DE LOS BLANCOS

A)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIÓN:

Pendiente

221

xxn

yxxynb


2222

22

yynxxn

yxxynr


IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1

n

xx

SS xyb

22

1/1

2

2 1

/

n

ybxybyS

o

xy

n

xbyb

1

0


B)FORMULA PARA LOS BLANCOS

Desviación estándar de los blancos

1

22

nn

nSb

yy

n = número de blancos

C)FORMULA PARA EL LIMITE DE CUANTIFICACIÓN

1

10

b

SLC

b

D)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIÓN




Calcular b1, r2



E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS


Calcular y, y2, y determinar n.

Calcular Sb

Calcular el LC

9.3 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADA EN LA DESVIACIÓN

ESTÁNDAR DE REGRESIÓN

A)FORMULAS

Pendiente

221

xxn

yxxynb


2222

22

yynxxn

yxxynr


IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1

n

xx

SS xyb

22

1/1

2

2 1

/

n

ybxybyS

o

xy

n

xbyb

1

0


Limite de cuantificación

1

/10

b

SLC

xy





Calcular b1, r2



Calcular el LC


ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN

A)FORMULAS

Pendiente

221

xxn

yxxynb


2222

22

yynxxn

yxxynr


IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1

n

xx

SS xyb

22

1/1

2

2 1

/

n

ybxybyS

o

xy

n

xbyb

1

0


Desviación estándar de la ordenada al origen

n

xx

x

nSS xybo

22

21/

n

xx

Limite de cuantificación

1

10

b

SLC

b





Calcular b1, r2



Calcular x y Sbo

Calcular el LC

ANEXO 10. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA ROBUSTEZ.

A)FORMULAS:

Media aritmética de la condición de operación.

0

0

n

yyo

no = numero e muestras de la condición normal de operación

Media aritmética del análisis de cada condición de operación diferente a

la condición normal

1

1

1

n

yy

n1 = numero de muestras de la i-esima condición de operación

Diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición respecto de

la media aritmética de la condición normal.

01 y-yid



Calcular y0, y1, y2, y determinar no, n1, n2.

Calcular ŷo, ŷ1, ŷ2.

Calcular di


TOLERANCIA

A)FORMULAS:

Media aritmética

n

yy


1

22

nn

nS

yy


100*y

SCV






REPETIBILIDAD EN EXACTITUD PARA COMPARACIÓN DE 2

MÉTODOS ANALÍTICOS.

A)FORMULAS:

Varianza

1

222

nn

yynS

Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza

para la razón de varianzas, se debe establecer.

S12= varianza menor

S22= varianza menor

Intervalo de confianza para la razón de varianzas.

1,1,975.01

2

11,1,025.0

1

21212

22

222

2

2 nnnn F

SS

FS

S

σσ

F0.025,n2-1, n1-1 y F0.975, n2-1, n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher

n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados

de libertad del numerador; y n1-1 son los grados de libertad de la varianza

menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.

.n1 = numero de recobros del método de varianza menor

.n2 = numero de recobros del método de varianza mayor



Calcular y, y2 y determinar n para cada método analítico

Calcular la varianza de cada método

Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S1

2)

Determinar en el anexo 20 F0.025, n2-1, n1-1y F0.925, n2-1, n1-1

Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.


REPETIBILIDAD EN LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA

COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS.

A)FORMULAS:

Varianza

1

222

nn

yynS



S12= varianza menor

S22= varianza menor


1,1,975.01

2

11,1,025.0

1

21212

22

222

2

2 nnnn F

SS

FS

S

σσ









Calcular el porcentaje de recobro de cada muestra en cada método (y), al

obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad

adicionada expresada en porcentaje.

Calcular Sy, Sy2 y determinar n para cada método analítico



2)

Determinar en el anexo 20 F0.025 n2-1, n1-1y y F0.925, n2-1, n1-1y


ANEXO 14. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN EXACTITUD

PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS.

14.1 COMPARACIÓN DE Repetibilidad DE AMBOS MÉTODOS:

A)FORMULAS:

Varianza

1

222

nn

yynS



S12= varianza menor

S22= varianza menor


1,1,975.01

2

11,1,025.0

1

21212

22

222

2

2 nnnn F

SS

FS

S

σσ







14.2 IGUAL REPETIBILIDA (VARIANZAS EQUIVALENTES):

A)FORMULAS:

Media aritmética del método 1.

1

1

1

n

yy


2

2

2

n

yy

Varianza del método 1.

1

222

11

111

1

nn

yynS


1

222

22

222

2

nn

yynS

Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.

2975.021 21 nntIC 21 y-yμμ






2)



Tabular otra vez los resultados.

Calcular y1, y2, y12, y2

2, y determinar n1 y n2.

Calcular ŷ1, ŷ2 Calcular S1

2, S2

2

Determinar en el anexo 19 t0.975, n1+n2 y calcular IC(1-2)

14.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):

A)FORMULAS:











2)







2, S2

2

Calcular gl

Determinar en el anexo 19 t0.975, gl y calcular IC(1-2)

ANEXO 15. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN LINEALIDAD

DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS

ANALÍTICOS.

15.1 CANTIDAD ADICIONADA (x) VS CANTIDAD RECUPERADA (y):

A)FORMULAS:

Sumatorias

Pendiente del método 1.

Pendiente del método 2.

Ordenada al origen del método 1.

Ordenada al origen del método 2.

Desviación estándar de regresión.

Intervalo de confianza para la diferencia de las 2 pendientes.

Intervalo de confianza para la diferencia de las ordenadas al origen



Calcular x1, x12, x2, x2

2, y1, y1

2, xy1, y2, y2

2, xy1 y

determinar n1 y n2.

Calcular b11, b12, b01, bo2

Calcular Sx/y y Sb11 – Sb12

Determinar en el anexo 19 t0.97523, y calcular IC(1-2)

Calcular x1, x2, Sbo1-Sbo2

Calcular IC(01-02)

15.2 PORCENTAJE DE RECOBRO:

15.2.1 COMPARACIÓN DE Repetibilidad DE AMBOS MÉTODOS

A)FORMULAS:

Varianza


15.2.2 IGUAL Repetibilidad (VARIANZAS EQUIVALENTES)

A)FORMULAS:






15.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):

A)FORMULAS:











2)







2, S2

2

Determinar en el anexo 19 t0.975, gl y calcular IC(1-2)

ANEXO 16. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN PRECISIÓN DEL

MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS.

A)FORMULAS:

Varianza







2)




PROPORCIONALIDAD DE MÉTODOS EN ESTUDIO DE

CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS

ANALÍTICOS.

A)FORMULAS:

Pendiente

Ordenada al origen



Coeficiente de variación de regresión.


Tabular los resultados (datos primarios)



Calcular b1, b0, r2



ANEXO 18. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN

DEL MÉTODO EN ESTUDIOS DE CORRELACIÓN PARA

COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS A)FORMULAS:

Varianza del método oficial.

Varianza del método no oficial.

Limite unilateral inferior de confianza para la razón de varianzas.


Tabular los resultados (datos primarios)

Calcular y1, y12, y

2, y2


Calcular la varianza del método oficial y del método no oficial.

Determinar en el anexo 20 F0.05

Calcular el limite unilateral inferior de confianza para la razón de

varianzas.

ANEXO 19. TABLA ESTADÍSTICA DE LA DISTRIBUCIÓN t DE Student.

GRADOS DE

LIBERTAD

t0.975 GRADOS DE

LIBERTAD

t0.975 GRADOS DE

LIBERTAD

t0.975

1 12.706 26 2.056 51 2.008

2 4.303 27 2.052 52 2.007

3 3.182 28 2.048 53 2.006

4 2.776 29 2.045 54 2.005

5 2.571 30 2.042 55 2.004

6 2.447 31 2.040 56 2.003

7 2.365 32 2.037 57 2.002

8 2.306 33 2.035 58 2.002

9 2.262 34 2.032 59 2.001

10 2.228 35 2.030 60 2.000

11 2.201 36 2.028 61 2.000

12 2.179 37 2.026 62 1.999

13 2.160 38 2.024 63 1.998

14 2.145 39 2.023 64 1.998

15 2.131 40 2.021 65 1.997

16 2.120 41 2.020 66 1.997

17 2.110 42 2.018 67 1.996

18 2.101 43 2.017 68 1.995

19 2.093 44 2.015 69 1.995

20 2.086 45 2.014 70 1.994

21 2.080 46 2.013 71 1.994

22 2.074 47 2.012 72 1.993

23 2.069 48 2.011 73 1.993

24 2.064 49 2.010 74 1.993

25 2.060 50 2.009 75 1.992

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