Ispitivanje citotoksičnog delovanjap j g jdijetarnih izotiocijanata

i njihova upotreba i njihova upotreba u dijetetskim suplementima

Aleksandra Konić-RistićZorica JuranićTatjana StanojkovićIvan StankovićIvan Stanković

Epidemiološke studije (~300)

voće, povrće, integralne žitarice

smanjenje incidence malignih bolesti

Fitohemikalije

smanjenje incidence malignih bolesti

Fitohemikalijenenutritivni biološki aktivni sastojci namirnica

GLUKOZINOLATI

IZOTIOCIJANATIIZOTIOCIJANATIBrassica chinensis,kineski kupus

Nasturtium officinale, potočarka,kres salata

Brassica oleracea var. capitata,glavičasti kupus

Brassica oleracea var. italica, brokola

Brassica oleracea var. botrytis,karfiol

Brassica oleracea var. sabauda, kelj

Brassica oleracea var. gemmifera,kelj pupčar, prokula

GLUKOZINOLATI IZOTIOCIJANATIGLUKOZINOLATI IZOTIOCIJANATIMIROZINAZA

Izotiocijanat Glukozinolat(prekursor)

Dijetarni izvori

Alil izotiocijanat (AITC)

Sinigrin Brokoli, prokule, kupus, repa, slačica, rotkvica

Benzil izotiocijanat(BITC)

Glukotropeolin Kupus, zelena salata

Feniletil izotiocijanat(PEITC)

Glukonasturcin Kres salata (potočarka)

Sulforafan (SFN) Glukorafanin Brokoli, prokule, kupusp

Mehanizmi antikancerskog delovanjaMehanizmi antikancerskog delovanja izotiocijanata

Indirektno antioksidativno delovanje- inhibicija enzima I faze detoksifikacije

indukcija enzima II faze detoksifikacije- indukcija enzima II faze detoksifikacije

Inhibicija ćelijske proliferacije

Indukcija ćelijske diferencijacije

Inicijacija zastoja u ćelijskom ciklusuInicijacija zastoja u ćelijskom ciklusu

Indukcija apoptoze

Ciljevi:Ciljevi:

Ispitivanje antiproliferativnog delovanja dijetarnih izotiocijanata na malignim ćelijskim linijama in vitro

Ispitivani izotiocijanati:

SULFORAFAN (SFN)

BENZIL IZOTIOCIJANAT (BITC)

FENILETIL IZOTIOCIJANAT (PEITC)

Maligne humane ćelijske linije:Maligne humane ćelijske linije:

HeLa ćelije karcinoma grlića matericeHeLa ćelije karcinoma grlića materice

LS 174 ćelije karcinoma kolonaj

Fem-x ćelije melanoma

Ispitivanje antiproliferativnog delovanja kl lizotiocijanata na mononuklearnim ćelijama

periferne krvi (PBMC)ti li i- nestimulisanim

- stimulisanim fitohemaglutininom (PHA)

Utvrđivanje selektivnosti antitumorskog delovanjaj

IC 50 (M)IC 50 (M)ćelijska linija

supstancaHeLa Fem-X LS-174 PBMC PBMC+P

HA

SULFORAFAN 13.59 1.53 6.67 0.73 16.09 2.44 29.34 5.30 15.20 5.39

BENZIL IZOTIOCIJANAT

5.04 1.73 2.76 0.58 14.30 5.16 45.74 8.90 21.92 4.63

FENILETIL IZOTIOCIJANAT

12.00 1.97 6.22 0.32 18.23 3.04 23.41 7.13 30.87 1.33

Vrednosti IC 50 (µM) određene MTT esejem nakon 72h delovanja ispitivanih supstanci na humane maligne ćelijske linije, PBMC i PBMC stimulisane fitohemaglutininomPBMC stimulisane fitohemaglutininom

IC50 IC50IC50

IC50IC50PBMC/

IC50 HeLa

IC50 PBMC+PHA/IC50 HeLa

IC50 PBMC/IC50 Fem-x

PBMC+PHA/IC50 Fem-x

IC50 PBMC/IC50 LS-174

IC50PBMC+PHA/IC50 LS-174

SFN 2.16 1.12 4.39 2.28 1.82 0.94

BITC 9.07 4.35 16.57 7.94 3.19 1.53

PEITC 1.95 2.57 3.76 4.96 1.28 1.69

Indeks selektivnostiIndeks selektivnosti –– odnos IC50 vrednosti dobijenih na PBMC odnos IC50 vrednosti dobijenih na PBMC i IC50 vrednosti na malignim ćelijskim linijamai IC50 vrednosti na malignim ćelijskim linijama

BITC - najjače delovanje u pogledu inhibicije ćelijske proliferacijećelijske proliferacije

SFN i PEITC bli k j či d l jSFN i PEITC – bliska jačina delovanjaOsetljivost ćelijskih linija:

Fem-x > HeLa > LS 174izotiocijanati deluju citotoksično i na PBMC j jsa ili bez prisustva fitohemaglutinina

Zaključak

-kompletna toksikološka analiza - uslov primene izotiocijanata kao hemiopreventivnih i h i k i ih hemioprotektivnih agenasa

zabluda o netoksičnosti dijetarnih sastojaka!-zabluda o netoksičnosti dijetarnih sastojaka!

Dalja istraživanja:-ispitivanje mehanizama delovanja ostalih izotiocijanata

-sinteza analoga sa manjom toksičnošću

-ispitivanje sinergističkog delovanja ITC i ostalih j g g jsastojaka namirnica (Se, vitamin C)

prevencija

OPTIMALNADIJETA

p jbolesti

promocijaDIJETA promocijazdravlja