Métodos rápidos de identificación. Métodos basados en el ADN para la detección de bacterias...
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Métodos rápidos de identificación. Métodos basados en el ADN para la detección de bacterias patógenas transmitidas por los alimentos Ever Hernández Olivas Universidad Autónoma de Chihuahua Facultad de Ciencias Químicas
Métodos rápidos de identificación. Métodos basados en el ADN para la detección de bacterias patógenas transmitidas por los alimentos Ever Hernández Olivas
Mtodos rpidos de identificacin. Mtodos basados en el ADN para
la deteccin de bacterias patgenas transmitidas por los alimentos
Ever Hernndez Olivas Universidad Autnoma de Chihuahua Facultad de
Ciencias Qumicas Microbiologa de Alimentos
Diapositiva 2
o Enfermedades - bacterias patgenas o La deteccin de bacterias
patgenas (presentes en bajo nmero) o Escondidas en las matrices
alimenticias y pueden estar superadas por el nmero por un alto
contenido de bacterias propias. Introduccin. Reservorio (animales y
por lnea de produccin). Humanos
Diapositiva 3
Mtodos tradicionales (Etapas de enriquecimiento y
pre-enriquecimiento) Son laboriosas y consumen mucho tiempo
Acelerar la deteccin de bacterias patgenas Incrementar la
sensibilidad a la deteccin
Diapositiva 4
Ejemplos de tecnologas que se han aplicado para mejorar los
mtodos para la deteccin de bacterias patgenas en los
alimentos.
Diapositiva 5
AplicacinVentajasProblemas Deteccin directa de patgenos en
alimentos No requiere cultivacin Puede detectar clulas muertas
(PCR). Alto nivel de deteccin debido a un volumen de prueba pequeo.
Inhibicin debido a los componentes de los alimentos. Muy sensibles
a contaminacin de alimentos. confirmacin de cultivo en caldos de
enriquecimiento Rpido y sensible Posible deteccin automtica
Insensible a altas concentraciones de microbiota propia No se
obtiene una colonia, y por eso ms adecuado para detectar muestras
negativas. Caracterizacin de bacterias patgenas obtenidas de
muestras de alimentos Puede separar bacterias virulentas de las no
virulentas por focalizacin de genes virulentos Es posible la
caracterizacin mltiple Otras aplicacionesPuede detectar
especficamente organismos genticamente modificados. Ventajas y los
problemas generales de los mtodos basados en el ADN para la
deteccin y caracterizacin de bacterias patgenas transmitidas por
los alimentos en comparacin con los mtodos basados en la cultura
tradicional
Diapositiva 6
o 20-30 aos o Conocidos por las personas que se ocupan de la
microbiologa alimentaria o La capacidad de dos molculas de ADN de
cadena sencilla in vitro, en las condiciones adecuadas, para formar
ADN de cadena doble mediante apareamiento de bases especficas
(hibridacin). Metodologa para la deteccin e identificacin de
bacterias patgenas por mtodos basados en ADN.
Diapositiva 7
o Mtodos diferentes basados en el apareamiento de bases
especficas o hibridacin de colonias, o una sola fase, ensayos de
hibridacin de lquidos, o PCR o Relevantes para la deteccin de
bacterias en los alimentos.
Diapositiva 8
1.Desnaturalizacin de ADN de la muestra para obtener cadenas
simples objetivo. 2.Unin de primers especficos a el ADN objetivo.
3.La polimerizacin de ADN. PCR ( Reaccin de polimerizacin en
cadena)
Diapositiva 9
Rpida Sensible Especifica Proceso simultaneo (gran numero de
muestras)
Diapositiva 10
Problemtica en la aplicacin de PCR en alimentos.
Diapositiva 11
Diapositiva 12
Puede hacerse mediante la demostracin del fragmento de ADN
correcto mediante electroforesis en gel de agarosa Deteccin de
reaccin positiva Mquinas de PCR semi-automatizadas existentes en el
mercado hacen una determinacin cuantitativa de bacterias patgenas a
partir de cultivos puros posibles.
Diapositiva 13
Mtodos confiables desarrollados para las bacterias patgenas
pertinentes.
Diapositiva 14
Salmonella Escherichia coli Coliformes Shigella Vibrio cholerae
y no cholerae Yersinia Enterocolitica Campylobacter Listeria
monocytogenes Staphylococcus aureus Bacillaceae
Diapositiva 15
Probes and polymerase chain reaction for detection of food-
borne bacterial pathogens, J.E. Olsen et al, International Journal
of Food Microbiology 28 (1995) 1-78 DNA-based methods for detection
of food-borne bacterial pathogens, John Elmerdahl Olsen *, Food
Research International 33 (2000) 257266. Deteccin de patgenos
alimentarios mediante tcnicas de PCR, B. Martn, M. Garriga, J.M.
Monfort y T. Aymerich, IRTA. Tecnologa de los Alimentos. Monells,
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