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Directioninternationalele8juillet2015 Page1
Institut Pasteur de Côte d'Ivoire• La réponse au traitement contre le paludisme chez les drépanocytaires : que doit‐on adapter ?
Institut Pasteur de la Guyane• Recherche et formation sur le paludisme à l'Institut Pasteur de Guyane : une expertise reconnue et un atout majeur pour soutenir l'élimination du paludisme en Amazonie
Institut Pasteur de Madagascar• Relever les défis de l'élimination du paludisme à Madagascar : Cibler le réservoir parasitaire et le paludisme à Plasmodium Vivax
1 Direction Internationale le 3 juillet 2015
Institut Pasteur de Côte d’Ivoire
Projet DREPAL
La réponse au traitement contre le paludisme
chez les drépanocytaires : que doit-on adapter ?
CONTEXTE ET JUSTIFICATION DU PROJET La drépanocytose est un sérieux problème de santé publique. Les zones d’endémie palustre en Afrique sont les plus affectées par la maladie mais l’augmentation de la migration des populations favorise la diffusion de la drépanocytose dans d’autres pays comme la France et les Etats Unis. La drépanocytose est une maladie génétique du sang, due à la mutation d’un gène permettant la synthèse d’une partie de l’hémoglobine. En modifiant la forme des globules rouges, la maladie affecte la circulation sanguine. Dans certaines populations africaines et selon des données relativement anciennes, 20 à 40% des sujets sont porteurs du trait drépanocytaire1 En Côte d’Ivoire, la prévalence de la drépanocytose est de 21%. Dans ces zones le paludisme est une cause majeure de morbidité et de mortalité chez les patients drépanocytaires porteurs de la forme homogygote (SS) en provoquant une anémie sévère. Dans les années 1950, les chercheurs ont découvert, que les porteurs drépanocytaires hétérogygotes asymptomatiques étaient protégés contre le paludisme. Cette protection, en favorisant la survie des porteurs de la mutation génétique, permet de maintenir la prévalence du paludisme à un niveau élevé dans les zones géographiques où le paludisme est présent. Selon l’OMS, l’amélioration de la prise en charge des malades drépanocytaires renforce l’augmentation de la fréquence des traits génétiques notamment dans le Nord. Le paludisme est un facteur déclenchant essentiel des crises drépanocytaires [Konotey et al, 1979], une cause fréquente d’hospitalisation [Maharajan et al, 1983] ainsi qu’un facteur de mauvais prosnostic chez les enfants atteints de drépanocytose [Aluoch et al, 1997]. Cela suggère la nécessité d'une prise en charge rapide et efficace chez les patients drépanocytaires atteints de paludisme aigu. Malheureusement peu d'informations à ce jour existent, sur l'efficacité ou l'innocuité du traitement à base d'artémisinine chez les patients
1 Forme hétérogygote de la drépanocytose. Les porteurs du trait drépanocytaire sont capables de synthétiser de l’hémoglobine normale (HbA) et anormale (HbS). Dans ces conditions la maladie peut passer inaperçue
2 Direction Internationale le 3 juillet 2015
drépanocytaires. Les données disponibles indiquent un retard d’élimination des parasites chez les drépanocytaires ce qui suggère une possible résistance du Plasmodium falciparum dans ces populations. Cette résistance pourrait être due à un retard du cycle du parasite lui-même diminuant l’effet du médicament, mais aussi à une élimination différente du médicament par l’organisme drépanocytaire. A l’inverse des éléments récents suggérent que les hémoglobines anormales seraient un facteur important de sélection de parasites résistants aux dérivés de l’artémisinine. Ces éléments soulignent la nécéssite d’un traitement adapté et efficace chez ces sujets pour les préserver eux même mais aussi, pour préserver la comunauté. OBJECTIFS DU PROJET, LOCALISATION, BÉNÉFICIAIRES & IMPACTS
Objectifs
L’objectif principal du projet que nous soumettons au Rotary international est : Étudier et préciser la réponse au traitement contre le paludisme à Plasmodium falciparum chez les sujets drépanocytaires afin de proposer au Programme National de Lutte contre le Paludisme de Côte d’Ivoire (PNLP) des stratégies de prévention et de traitement efficaces pour cette population à risque. Les objectifs secondaires sont : - Mettre en place à l’Institut Pasteur de Côte d’Ivoire les méthodes de typage moléculaire de l’hémoglobine - Mettre en place dans les hôpitaux partenaires, les méthodes de typage biochimique de l’hémoglobine - Réaliser des études de sensibilité des parasites, chez l’homme et en culture, en relation avec la drépanocytose - Réaliser des dosages sanguins de médicaments antipaludiques en relation avec la drépanocytose Le projet se déroulera dans deux sites d’essais cliniques de l’Unité de Paludologie de Côte d’Ivoire depuis 20 ans, d’une part au sud du pays (dans la région du Sud Comoe à l’hôpital d’Ayame Mission Catholique) et d’autre part à Anonkoua-kouté à la périphérie d’Abidjan. En 2012, la prévalence de la drépanocytose chez nos malades inclus dans deux des essais cliniques était d’environ 20%.
Bénéficiaires - Malades atteints de drépanocytose - Programme National de Lutte contre le Paludisme de Côte d’Ivoire - Hopitaux d’Ayame et FSU COM d’Anonkoua-kouté (Formation Sanitaire Urbaine à
base communautaire) - Etudiants de l’Université Felix Houphouet Boigny d’Abidjan, Côte d’Ivoire
3 Direction Internationale le 3 juillet 2015
Impacts:
- Formation des étudiants aux techniques liées aux méthodes de typages moléculaires - Analyse de la réponse thérapeutique aux combinaisons thérapeutiques à base de
dérivés de l’artémisinine chez les drépanocytaires - Mise en place de tests de chimiosensibilité in vitro standardisés en relation avec le
Centre National de Référence du paludisme à l’Institut Pasteur, Paris - Proposition de recommandations au Programme National de Lutte contre le Paludisme
de Côte d’Ivoire concernant la prise en charge du paludisme chez ces sujets à risque - Personnels formés à la technique PCR et à l’électrophorèse de l’hémoglobine (Hb)
pour la drépanocytose ORGANISATION DU PROJET Le projet est découpé en 3 workpackages Workpackage 1 Mise en place des méthodes de typage de l’hémoglobine par
électrophorèse et par PCR et obtention de données statistiques Workpackage 2 Etude de la réponse au traitement chez les sujets drépanocytairesWorkpackage 3 Formations
Workpackage 1 : mise en place des méthodes de typage de l’hémoglobine par électrophorèse et par PCR et collecte de données statistiques
1.1 Etude rétrospective de la prévalence des drépanocytoses dans les deux régions du Sud Comoe et de la périphérie d’Abidjan : Le typage de l’hémoglobine par méthode moléculaire sera réalisé à partir d’échantillons sanguins stockés sur buvard au cours d’études menées depuis plus 10 ans ou lors des précédents essais cliniques (CTA). Cinq cents échantillons seront analysés par site ce qui renseignera sur la fréquence et le type de trait génétique retrouvés dans la population de ces deux régions. 1.2 Mise en place de ressources pour le typage de l’hémoglobine dans les deux centres de santé et formation du personnel Les hopitaux partenaires - d’Ayamé et le (FSU COM) ne disposent pas d’équipement pour le typage de l’hémoglobine. Afin d’améliorer le diagnostic et la prise en charge des patients, deux chaines d’électrophorèse seront acquises et données à ces centres de santé et des techniciens seront formés à l’Institut Pasteur de Côte d’Ivoire afin d’assurer une standardisation des analyses et la « robustesse » des résultats. 1.3 Etude prospectives au cours des essais cliniques 2015-2016 Au cours des projets d’études de la réponse clinique aux dérivés de l’artémisinine, le typage moléculaire des hémoglobines sera réalisé pour 300 patients, sur chaque site des hôpitaux partenaires.
4 Direction Internationale le 3 juillet 2015
Workpackage 2 : Etude de la réponse au traitement chez les sujets
drépanocytaires
2.1 Etude de la réponse clinique au traitement du paludisme Cette étude sera réalisée et financée en collaboration avec le Programme National de Lutte contre le Paludisme 2.2 Etude des marqueurs moléculaires de résistance On étudiera sur trois cents sujets par site, les mutations des gènes de résistance de P. falciparum aux antipaludiques en particulier celui de la résistance à l’artésunate2 du gène K13 propoller 3 2.3 Etude de la résistance en culture (Tests in vitro4) L’objet de ces tests in vitro sera de comparer la réponse en culture des plasmodies (concentration inhibitrice 50% , CI505) chez les drépanocytaires et chez les sujet sains au cours des essais cliniques. Les techniques RSA (the Ring-stage Survival Assay) et Syber Green seront utilisées en relation avec le CNR (Centre National de Référence) du paludisme à l’hôpital Bichat, Paris qui assurera le contrôle qualité. (une convention a été signée entre le CNR de Paris et l’Institut Pasteur de Côte d’Ivoire en 2015). Les médicaments étudiés seront l’artésunate, la Dihydroartémisinine, l’artémether, la quinine, la mono-desethyl-amodiaquine, la luméfantrine. 2.3 Etude de la cinétique des médicaments Des dosages pharmacocinétiques 6de l’artésunate, de l’artémether, de l’amodiaquine et de la luméfantrine seront realisés chez les patients drépanocytaires et chez des témoins, lors des essais cliniques.
Workpackage 3 : Formations
Les formations concerneront à la fois les personnels des hopitaux partenaires, les étudiants que les chercheurs et le personnel de l’Institut Pasteur de Côte d’Ivoire. Elles se feront en relation avec les Centres Nationaux de référence pour la drépanocytose et le paludisme (CNR) français. Une bourse de thèse sera attribuée à un étudiant du département pour travailler sur ce sujet. Les techniciens des hôpitaux périphériques seront accueillis pour la formation, à l’Institut Pasteur de Côte d’Ivoire.
- Formation de deux techniciens des hôpitaux partenaires à l’Institut Pasteur de Côte d’Ivoire : (deux semaines chacun)
2 L’artésunate : médicament antipaludéen dérivé semi‐synthétique du groupe de l'artémisinine qui est une plante utilisée en médecine traditionnelle chinoise. 3 Mutation du gène K13 : mutations qui neutralisent l'artémisinine 4 Se dit de toutes les expériences et recherches pratiquées au laboratoire, en dehors d'un organisme vivant. (On réalise in vitro sur des cultures de cellules, etc.) 5 La concentration inhibitrice médiane (CI50) est une mesure de l'efficacité d'un composé donné pour inhiber une fonction biologique ou biochimique spécifique 6 devenir d'une substance active contenue dans un médicament après son administration dans l'organisme
5 Direction Internationale le 3 juillet 2015
- Formation d’un étudiant ivoirien aux méthodes de Ring-stage Survival Assay et sybergreen au CNR du paludisme (Hopital Bichat Paris, un mois)
- Formation d’un étudiant ivoirien aux méthodes moléculaires de typage de l’hémoglobine : stage au laboratoire de biologie moléculaire de l’Hôpital H. Herriot à Lyon, France (1 mois)
- Stage de deux mois de formation d’un ingénieur en démarche qualité à l’Institut Pasteur à Paris (un mois) et au CNR du paludisme à l’Hôpital Bichat à Paris (un mois)
- Acquisition d’ouvrages techniques pour les étudiants - Présentation des résultats en colloque et développement des collaborations :
déplacement d’un chercheur en France - Mission de collaboration d’un chercheur du Nord à Abidjan - Bourse de thèse pour un étudiant ivorien (36 mois)
EQUIPE DE RECHERCHE Offianan andre TOURE, MD, PhD Investigateur Principal, Responsable Département
Parasitologie Mycologie, Institut Pasteur Côte d’Ivoire
Ronan Jambou, MD, PhD Co-investigateur, Département Parasitologie Mycologie (Institut Pasteur de Côte d’Ivoire) / Département Parasites & Insectes Vecteurs (Institut Pasteur Paris)
Assi Serge Brice, MD, PhD Responsable recherche Programme National de Lutte contre le Paludisme, Côte d’Ivoire
Reverend Père Niakouri François d’Assises
Directeur Hôpital Général d’Ayamé Mission Catholique, Côte d’Ivoire
Sœur Supérieure Joséphine Directrice de la Formation à Base Communautaire d’Anonkoua-koute, Abidjan Côte d’ivoire
BUDGET
6 Direction Internationale le 3 juillet 2015
Projet Paludisme Action 2015 ‐ 2016 du Rotary Détails [euros] Total [euros]
Etudes cliniques chez les enfants 0 (déjà financée) 0
Equipement pour les hôpitaux périphériques partenaires 30 000Chaine Electrophorese (2) pour les deux hôpitaux 30 000
Réactifs pour les études 25 600Réactifs et consommables test in vitro 10 000Réactifs et consommables de biologie moléculaire 10 000Dosage de médicaments 5 000Echanges de matériels pour contrôle qualité avec le CNR de Paris 600
Formation 24 400
Formation de deux techniciens des hopitaux partenaires (deux semaines chacun) à l’Institut Pasteur de Côte d’Ivoire 1 500Formation aux méthodes RSA et sybergreen (1 mois en France) 2 000Formation à l’Hopital H. Herriot à Lyon: (1 mois en France) 2 000Stage de deux mois en demarche 3 000Ordinateur pour étudiant pour l’analyse des séquences 1 000Présentation des résultats 1 250Mission de collaboration d’un chercheur du Nord à Abidjan 1 250Bourse de thèse pour un étudiant ivorien (36 mois) 12 400
TOTAL 80 000
Direction internationale le 17 juin 2015 1
Recherche et formation sur le paludisme à
l’Institut Pasteur de Guyane : une expertise reconnue et un atout majeur pour soutenir l’élimination du paludisme en Amazonie
Lise Musset & Romain Girod
CONTEXTE ET OBJECTIF DE L’ACTION
L’épidémiologie du paludisme a subi de profonds changements ces dernières années en Guyane, avec notamment une forte augmentation de la proportion de cas de paludisme1 à Plasmodium vivax 2 signalés et le développement des sites d’orpaillage clandestin difficilement contrôlables. Les régions présentant une forte activité minière constituent généralement d’importants réservoirs de parasites sur le plateau des Guyanes (Brésil, Guyane, Suriname et Guyana). A partir de ces réservoirs, des parasites résistants aux médicaments peuvent être sélectionnés du fait d’une utilisation incontrôlée des antipaludiques. Depuis l’introduction des nouvelles associations médicamenteuses 3 , de nombreuses alertes ont été émises par les cliniciens sur la possible sélection de parasites résistants dans la région. Au problème de la résistance médicamenteuse des parasites s’ajoute celui de la résistance d’Anopheles darlingi aux molécules insecticides utilisées pour la prévention et la lutte anti-vectorielle. Dans ce contexte, l’Institut Pasteur de la Guyane, Centre National de Référence du paludisme et Centre Collaborateur pour l’OMS pour la surveillance de la résistance aux antipaludiques, a pour objectif de réorienter ses efforts de recherche et de formation en vue de (i) mieux surveiller le niveau de résistance des parasites aux médicaments et des moustiques vecteurs aux insecticides, et de (ii) contribuer au développement d’une lutte efficace contre la maladie, ce au plus grand profit des populations d’Amazonie. L’atteinte de ces objectifs sera facilitée par la complémentarité des travaux des équipes expertes en parasitologie et en entomologie de l’Institut Pasteur de la Guyane.
1 Paludisme : « Le paludisme est une maladie qui peut être mortelle. Elle est dû à des parasites du genre Plasmodium transmis d’une personne à une autre par la piqûre de moustiques du genre Anopheles infectés, appelés «vecteurs du paludisme» 2 Il y a trois espèces de parasites pouvant causer un paludisme en Guyane : Plasmodium falciparum, P. vivax et P. malariae. Plasmodium vivax est l’espèce majoritairement diagnostiquée en Guyane (70%), P. falciparum est la plus dangereuse alors que P. malariae est très rare. 3 Les dérivés de l’artémisinine (artésunate, artéméther) : cette nouvelle classe d’antipaludiques agit au niveau des parasites par la libération de radicaux libres toxiques. Ils sont à la base de toutes les associations aujourd’hui recommandés par l’OMS pour traiter le paludisme dans le monde.
Direction internationale le 17 juin 2015 2
PROJET
En Asie du sud-est, la présence de parasites résistants se manifeste cliniquement chez les patients en cours de traitement, par leur présence persistante au 3ème jour après le début du traitement (retard de clairance4 parasitaire). Génétiquement, ces parasites se caractérisent par la présence de mutations5 au niveau du gène récemment identifié, pfK13. Au laboratoire, in vitro, ces parasites peuvent être identifiés grâce à la mise en œuvre d’une méthode spécifique, le test de survie (ou test RSA, Ring Survival Assay).
Ainsi, des outils de surveillance existent mais en Amazonie, il n’est pas certain que le marqueur génétique (gène pfK13) soit le même qu’en Asie du sud-est. De plus, en Amazonie le niveau de résistance des parasites aux molécules associées aux dérivés de l’artémisinine6 est mal connu. Pour pallier à ce manque de connaissance, prévenir et réduire la dispersion du paludisme dans la population, l’Institut Pasteur de la Guyane propose :
1) de tester la validité du marqueur moléculaire pfK13 chez les parasites résistants du plateau des Guyane et d’identifier les déterminants impliqués dans la résistance à la luméfantrine. Cet aspect du projet aura un impact en termes de santé publique.
2) de former aux techniques nouvelles permettant de caractériser les parasites résistants aux artémisinines (test RSA, génotypage pfK13), au sein de notre et/ou de leur laboratoire, des acteurs travaillant en Amazonie mais aussi de former un jeune scientifique à la recherche en paludologie. Cet aspect du projet aura un impact en termes de formation.
Alors que le Laboratoire de parasitologie de l’IPG maîtrise les techniques de culture et d’étude des parasites (P. falciparum), le maintien de colonies d’anophèles en insectarium reste un défi que doit relever l’Unité d’entomologie médicale afin de pouvoir mener, au laboratoire, des travaux portant sur les interactions entre les parasites et leurs vecteurs. L’IPG dispose depuis peu d’une plateforme dédiée à la recherche en entomologie médicale incluant des insectariums adaptés à l’élevage des anophèles, un laboratoire de sécurité biologique permettant de réaliser des infections expérimentales de moustique par des micro-organismes et un laboratoire dédié aux travaux sur la résistance aux insecticides. Il s’agit donc dorénavant de mettre en place une capacité d’élevage d’Anopheles darlingi, le vecteur majeur du paludisme en Guyane, ainsi que les protocoles d’infection expérimentale ou encore d’évaluation de la résistance aux insecticides.
Le recrutement d’un ingénieur de recherche pour appuyer les chercheurs à la mise en œuvre de ces objectifs parait désormais opportun et judicieux. L’acquisition de ces nouvelles capacités permettra de développer dans l’avenir des programmes de recherche en parasitologie et entomologie portant sur la caractérisation de la compétence vectorielle des espèces anophéliennes, l’étude de l’évolution génétique des parasites chez le vecteur ou encore des mécanismes de résistance aux insecticides. Ces travaux doivent permettre de mieux comprendre les modalités de la transmission du paludisme dans le contexte amazonien et partant, contribuer à améliorer les stratégies de lutte antipaludique en Guyane et dans la région.
L’ensemble de ce programme transversal répond donc aux priorités de santé de la Guyane et de la sous-région et aux besoins existant en termes de formation
4 Clairance : capacité de l’organisme à se débarrasser des parasites. 5 Mutation génétique : Modification de l’information génétique dans le génome du parasite, Plasmodium falciparum. 6 Exemple : la luméfantrine
Direction internationale le 17 juin 2015 4
Bénéficiaires directs Moyens mis en œuvre Impact Méthode / outils Budget Calendrier
Population vulnérable du plateau des Guyanes
Recherche des mutations du gène de résistance pfK13
Adaptabilité du traitement des patients Génotypage Sanger 2 000€ 1er trimestre
Population vulnérable du plateau des Guyanes
Identification des déterminants favorisant la résistance à la
luméfantrine Pérennité des traitements
Pression médicamenteuse, Phénotypage in vitro Génotypage des parasites résistants
(génome entier)
8 000€ 1 an
- Techniciens de laboratoire
- Chercheurs Formation Pérennité de l’action
Phénotypage (RSA: Ring Survival Assay)
Génotypage pfK13 3 000€ 3ème trimestre
Un jeune scientifique Formation Pérennité de l’action Paludologie 27 000€ 1 an
Population vulnérable du plateau des Guyanes
- Mise en place d’un élevage d’Anopheles darlingi, vecteur
majeur du paludisme en Guyane
- Mise en place des protocoles
d’infection expérimentale d’évaluation de la résistance
aux insecticides
Augmentation des capacités de recherche
Optimisation des actions de prévention et de lutte
antivectorielle
Plateforme dédiée à la recherche en entomologie médicale
- Insectariums - Laboratoire dédié à l’étude de la
résistance aux insecticides - Laboratoire de biologie moléculaire - Laboratoire de sécurité biologique
5 000€ 8 mois
Un ingénieur de recherche Recrutement Pérennité de l’action Entomologie médicale 35 000€ 8 mois
1Direction Internationale le 17 juin 2015
RELEVER LES DEFIS DE L’ELIMINATION DU PALUDISME A MADAGASCAR
Cibler le réservoir parasitaire et le paludisme à P. vivax
CONTEXTE Le paludisme à Plasmodium falciparum, responsable de la grande majorité des cas de paludisme et des décès reste une des principales causes de mortalité infectieuse en Afrique subsaharienne. Cependant, l’espèce Plasmodium vivax qui est la plus répandue géographiquement est de plus en plus reconnue comme une cause grave et mortelle de paludisme. Au cours de la dernière décennie, en dépit des efforts considérables qui ont été mis en œuvre pour mieux contrôler cette endémie on dénombre encore 124 à 283 millions de cas de paludisme en 2013, et plus de 367 000 décès, principalement chez les enfants âgés de moins de cinq ans (Rapport OMS 2014). Après plusieurs années successives de baisse, on assiste depuis 2011 à une recrudescence du paludisme dans plusieurs pays (World Malaria Report, 2012-2014) dont Madagascar où, l’endémicité du paludisme à P. falciparum et P. Vivax représente la deuxième cause de mortalité des populations vulnérables du pays après les infections respiratoires. En 2015, Madagascar a connu une recrudescence importante des cas de paludisme avec plus de 60-70% des cas de fièvre dus au paludisme avec une incidence plus élevée chez les adultes alors qu’ils étaient supposés avoir un niveau protecteur d’immunité antipalustre. Ce constat indique que les mesures de lutte actuelles sont insuffisantes. En effet, la résistance des parasites aux anti-paludiques et des moustiques aux insecticides, les changements de l'épidémiologie du paludisme (baisse de la transmission, retard dans l’acquisition de l’immunité), ainsi que les défis logistiques et financiers du maintien des stratégies de lutte créent des situations nouvelles face auxquelles les moyens de lutte actuels sont pris en défaut. OBJECTIFS Cette demande de financement s’inscrit dans ce contexte d’urgence d’apport de moyens pour lutter contre la flambée du paludisme à Madagascar. Elle a pour objectif d'apporter les technologies et les connaissances nécessaires à la formulation de nouvelles stratégies de lutte contre le paludisme à Madagascar en analysant, d’une part les
2Direction Internationale le 17 juin 2015
réponses immunes humorales 1 et cellulaires au cours du paludisme et d’autre part en étudiant la dynamique des interactions Hôte-Parasite (P. falciparum et P. vivax) au cours de l’infection. En particulier, la réalisation de ce projet permettrait de mieux détecter le Plasmodium vivax et d’adapter les traitements pour les patients. Dans cet objectif, nous étudierons plus précisément : - Comment la baisse de la transmission influence les réponses immunes des populations exposées et le risque de contracter des formes graves du paludisme. - Identifier comment les plasmodiums persistent dans leur réservoir et continuent à être transmis. - Etudier le paludisme à P. vivax qui a longtemps été négligé et qui représente actuellement plus de 15% des infections plasmodiales à Madagascar. En effet, P. vivax, plus difficile à contrôler, persiste ou gagne parfois du terrain dans certaines zones d’endémie. Ce parasite a acquis une plasticité 2 qui lui permet d’infecter des globules rouges qu’on lui croyait interdits. Les données récentes de la littérature montrent en effet que sa supposée restriction aux populations humaines « Duffy-positives » 3 n’était que relative et qu’il est capable d’infecter des populations « Duffy-négatives » considérées jusqu'alors comme réfractaires à P. vivax. Cette capacité d'adaptation insoupçonnée jusqu'à très récemment révèle le risque d’une transmission plus efficace et d’un maintien du réservoir de Plasmodium vivax dans les populations Malgaches dont les membres sont Duffy-positifs ou Duffy-négatifs dans des proportions assez équilibrées. PROJET PROPOSÉ ET PÉRÉNNITE DE L’ACTION PAR LA FORMATION Associé à des activités de formation/enseignement et de transfert de technologie et en collaboration les équipes de l’Institut Pasteur à Paris et des Instituts du Réseau international des Instituts Pasteur du Cambodge, de Dakar, de Côte d’Ivoire et au Cameroun, le projet proposé au Rotary international permettra :
o Evaluer l’efficacité des stratégies de lutte contre le paludisme sur le réservoir de parasite assurant la transmission, et leur impact négatif sur l’immunité acquise par les populations humaines de Madagascar afin d’identifier les foyers à haut risque de transmission (“Hot spot“ de réservoirs de P. vivax et P. falciparum) et de morbidité/mortalité.
o Evaluer et analyser la prévalence actuelle des infections à P. vivax par une détection de ses antigènes à la surface des globules rouges et une analyse séro-épidémiologique de la réponse anticorps dirigée contre des antigènes de P. vivax et de P. falciparum.
1Formationd’anticorps2Capacitédetransformation3L'antigène Duffy se trouve sur la surface des globules rouges , et porte le nom du patient dans lequel il a été découvert. La protéine codée par ce gène est une protéine de membrane qui est décrite comme étant le récepteur permettant à Plasmodium vivax d’envahir les globules rouges (dogme aujourd’hui remis en cause). Les polymorphismes de ce gène sont à la base du système de groupe sanguin Duffy. Si la protéine est absente de la surface du globule rouge, le groupe sanguin est « Duffy négatif », « positif » dans le cas contraire.
3Direction Internationale le 17 juin 2015
o Déchiffrer les bases moléculaires (c’est-à-dire identifier les antigènes en cause), immunologiques et fonctionnelles de l’adaptation de P. vivax à une invasion des globules rouges et de leurs réticulocytes4 n’exprimant pas à leurs surfaces l’antigène Duffy, récepteur traditionnel. Le but de cette analyse sera de vérifier si de nouveaux couples de molécules à la surface (antigènes) de Plasmodium vivax et de leurs récepteurs correspondants à la surface des globules rouges qui ont été récemment identifiés arrivent à permettre ce parasite d’envahir les globules rouges. Si c’est le cas, cela permettra de mettre en place de nouvelles stratégies thérapeutiques et/ou vaccinales. Ces antigènes parasitaires sont produits de façon recombinante 5 et seront testés en cytométrie de flux pour vérifier leur capacité d’adhésion aux globules rouges et réticulocytes.
Le développement de ces trois activités repose sur l’acquisition d’un cytomètre en flux permettant de mener conjointement des études immunologiques et parasitologiques sur P. falciparum et P. vivax. Cet équipement permettra aussi
(1) de réaliser des tests plus rapides et non polluants (sans radioactivité) pour surveiller in vitro l’efficacité des traitements anti-paludiques
(2) de poursuivre et affiner la formation des médecins et des scientifiques de Madagascar et du RIIP à la cytométrie en flux et à l’immunologie cellulaire pour pérénniser les techniques au profit des malades BESOINS FINANCIERS Achats d’un cytomètre en flux (6 couleurs) et des consommables associés
68.000 euros
Formation en immunologie 12.000 euros
TOTAL
80.000 euros
Financements déjà obtenus :
1- PTR-IP Paris : Analysis of receptor-ligand interactions involved in host cell invasion by P. vivax merozoites: Building the rationale for a blood stage malaria vaccine. 2015-2017 (achats de réactifs et les missions de terrain).
2- Division International-cours du RIIP : Les Techniques de l’Immunologie : Découvrir les techniques actuelles de l’immunologie par l’étude des mécanismes de la génération de la diversité des anticorps. 19-31 Octobre 2015, Institut Pasteur de Madagascar. Des formations complémentaires sont prévues en 2016.
4 Le réticulocyte est la cellule précédant le stade de globule rouge mature 5Synthèseaulaboratoiredelaprotéined’intérêt
PARTEC Société à Responsabilité Limitée au capital de 7.500 Euros – 14/16 rue Gallieni – 91700 Sainte Geneviève des Bois - France RCS EVRY 444 335 509 – TVA FR44444335509
Crédit Agricole Ile de France - N°compte : 38018627001 92 – Code guichet : 00432 – Code Banque : 18206 – Clé RIB : 92 IBAN : FR76 1820 6004 3238 0186 2700 192 – Code Swift : AGRIFRPP882
Telephone +33(0)676887093
e-mail: [email protected] - http://partec.com
Devis N° PF-180714-KRMad1
CyFlow Space 7 paramètres (Code N° CY-S-3001)
Sources d’excitation
Laser solide bleu 488nm, 50mW
Diode laser rouge 637nm, 40mW
Laser solide violet 405nm, 100mW
7 paramètres dont 5 couleurs de fluorescence
PARTEC S.A.R.L.. 14/16 rue Gallieni 91700 Ste Geneviève des Bois
Mme. Inès VIGAN-WOMAS, Ph.D.
Institut Pasteur Madagascar
Unité d’Immunologie des Maladies Infectieuses
BP 1274, Ambohitrakely
Antananarivo 101, Madagascar
PARTEC S.A.R.L. 14/16 rue Gallieni 91700 Sainte Geneviève des Bois France Téléphone : 01 69 04 87 12
Téléfax : 01 69 04 90 38 E-mail : [email protected] Internet : www.partec.com
Ste Geneviève des Bois, 18 juillet 2014
PARTEC Société à Responsabilité Limitée au capital de 7.500 Euros – 14/16 rue Gallieni – 91700 Sainte Geneviève des Bois - France RCS EVRY 444 335 509 – TVA FR44444335509
Crédit Agricole Ile de France - N°compte : 38018627001 92 – Code guichet : 00432 – Code Banque : 18206 – Clé RIB : 92 IBAN : FR76 1820 6004 3238 0186 2700 192 – Code Swift : AGRIFRPP882
Téléphone 0033(0)676887093
e-mail: [email protected] - http://partec.com
Instrument
Cytomètre en flux équipé de trois lasers d’excitation en lumière directe :
1. Un laser solide bleu de longueur d’onde d’émission : 488 nm pour 50 mW.
2. Ajout d’un laser rouge 637 nm de 40mW
3. Un laser solide violet 405nm de 100mW
Options possibles : Laser bleu 488 nm haute puissance, 200 mW ajustable
Ajout d’un laser vert 532 nm de 30 mW (ou 100 mW au choix)
Ajout d’un laser jaune 561 nm de 100 mW
Ajout d’un laser ultraviolet 375 nm de 16 mW
Ajout d’un laser orange 594 nm de 100 mW
Ou encore de toutes autres sources (infra-rouge…) sur simple demande.
En fonction des configurations, 4 ou 5 sources lumineuses sont adaptables sur le
CyFlow® Space (sans cellule de tri). Avec le module de tri, 2 ou 3 sources d’excitation
maximum sont adaptables.
Ces lasers de dernière génération sont simples et confortables d’utilisation, faible
consommation d’énergie, silencieux,…
7 Paramètres optiques de détection et 1 paramètre de temps : 1 SSC, 1 FSC et 5
couleurs de fluorescence. Filtres montés sur supports amovibles.
Résolution en fluorescence : CV < 2%. Niveau de sensibilité FITC, PE <100 MESF.
Configuration des paramètres optiques:
Laser 488 nm: FSC (forward scatter), SSC (side scatter), 3 couleurs de fluorescence
FL-1 filtre passe-bande interférentiel IBP536DF40 (ex. pour FITC, GFP)
FL-2 filtre passe-bande interférentiel IBP590DF50 (ex. pour PE, YFP)
FL-3 filtre passe-bande interférentiel IBP675DF20 (ex. pour PE-Cy5,PerCP)
PARTEC Société à Responsabilité Limitée au capital de 7.500 Euros – 14/16 rue Gallieni – 91700 Sainte Geneviève des Bois - France RCS EVRY 444 335 509 – TVA FR44444335509
Crédit Agricole Ile de France - N°compte : 38018627001 92 – Code guichet : 00432 – Code Banque : 18206 – Clé RIB : 92 IBAN : FR76 1820 6004 3238 0186 2700 192 – Code Swift : AGRIFRPP882
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Laser 637 nm: 1 couleur de fluorescence
FL-4 filtre passe-bande interférentiel LP680 (ex. pour APC, Syto61)
Laser 405 nm : 1 couleur de fluorescence
FL-5 filtre passe-bande interférentiel IBP455DF50 (ex. pour DAPI, Hoechst)
Options possibles : 7 couleurs supplémentaires de fluorescence sont encore possibles.
Par exemple, sur le laser bleu 488nm : FL-6 filtre passe-bande interférentiel IBP630DF22
(ex. pour PE-TexasRed) et/ou FL-7 filtre passe-haut interférentiel ALP 710 (ex. pour PE-
Cy5.5) et/ou FL-8 filtre passe-haut interférentiel ALP 748 (ex. pour PE-Cy7), sur le laser
rouge 638 nm : FL-9 filtre passe-bande interférentiel IBP700 (ex. pour APC-Cy5.5) et/ou FL-
10 filtre passe-haut interférentiel ALP 748 (ex. pour APC-Cy7, Alexa 700), sur le laser jaune
561nm : filtre passe-bande interférentiel IBP580DF27 (ex. pour Cy3) et/ou filtre passe-
bande interférentiel IBP610DF (ex. pour mCherry, Texas-Red) et/ou filtre passe-bande
interférentiel IBP682DF22 (ex. pour PE-Cy5…), sur une source violette ou UV : FL-11 filtre
passe-bande interférentiel IBP560 (ex. pour Cascade orange) et/ou FL-12 filtre passe-bande
interférentiel IBP520 (ex. pour CFP/YFP, FRET)
Toutes les adaptations spécifiques sur les paramètres ou les filtres sont
envisageables sur demande.
Objectif standard avec une grande ouverture numérique (50x, NA 0,82), une haute
ouverture numérique couplée avec un gel à immersion est disponible sur demande (40x, NA
1,25).
Système Fluidique
Le système fluidique du CyFlow® est totalement indépendant. L’alimentation en liquide de
gaine et liquide de nettoyage s’effectue en circuit fermé sous pression de 1200 mb. Le
liquide de gaine est contenu dans un réservoir de 2 litres positionné à côté de l’appareil. Les
déchets sont collectés dans un réservoir indépendant et amovible pour traitement extérieur.
Détection et alarme lorsque les niveaux des flacons de liquide de gaine et résiduel sont
respectivement trop bas et trop haut.
Utilisation de tubes à échantillon classique 12 x 55 mm. Vitesse d’acquisition > 10 000
événements/s.
1 Cellule de mesure en quartz (200 x 350 µm).
1 Système de pompes et seringues contrôlées par l’ordinateur pour la régulation de la
pression du liquide de gaine et de la vitesse d’injection de l’échantillon ajustable.
(Flux de 0 à 20 µl/s). Volume maximum d’échantillon 1,5 ml.
1 Système “BioSafety”: Protection contre la contamination inter-échantillons et les
risques de contamination
1 Station de comptage volumétrique de l’échantillon pour le calcul de la
concentration. Détection automatique de présence d’échantillon. (Mesure précise du
volume d’échantillon analysé sans ajout de billes).
Analyse sur volume d’échantillon précis pour calcul de concentration (Spécificité
des cytomètres Partec, précision CV. < 2%).
Le liquide de gaine n’est pas consommé entre deux passages d’échantillon, il n’est
uniquement employé que pendant les phases de mesure ou de nettoyage.
PARTEC Société à Responsabilité Limitée au capital de 7.500 Euros – 14/16 rue Gallieni – 91700 Sainte Geneviève des Bois - France RCS EVRY 444 335 509 – TVA FR44444335509
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Acquisition des Données
Traitement du signal en parallèle pour tous canaux optiques à l’aide d’une échelle
logarithmique ajustable: linéaire, ou à 3 ou 4 décades.
Analyse de pics en hauteur, largeur à mi-hauteur et surface (discrimination des doublets).
Convertisseurs analogique / digital 16 bits, trigger sur chaque paramètre ou tous les
paramètres.
Affichage des données sur une gamme de 64 à 32768 canaux pour chaque
histogramme 1 paramètre et de 256 à 1024 canaux pour chaque représentation bi-
paramétrique (dot plot).
La compensation de fluorescence est possible en manuel ou mode semi-automatique à
la fois en temps réel ou après acquisition des données.
Le système informatique permet de ré-analyser les données en modifiant les fenêtres
d’analyse (données list mode), soit en modifiant les compensations après acquisition.
Informatique et Traitement des Données
Gestion des données et acquisition sur PC externe sous Windows™ 7 à l’aide du
logiciel Partec FloMax®. Ecran plat de 22 pouces. Ordinateur avec processeur Intel
Core i3-4130 ≥ 3,4 GHz, 2 GB RAM minimum, Disque dur ≥ 500 GB, Lecteur
enregistreur DVD-RW, caméra vidéo CCD. Connexion Ethernet. Clavier et souris.
Imprimante couleur HP DESKJET ou équivalent + 3 licences déportées FloMax®
pour exploitation des résultats sur PC externes.
Général
Poids: 45 kg
Dimensions: 56 cm Larg. x 65 cm Prof. x 30 cm Haut. + Bouteilles de liquide de gaine
et de liquide poubelle.
Alimentation 220 V -60VA- 50/60Hz., température de fonctionnement : 5 à 40°C
Niveau sonore < 40 décibels
Logiciel
Le programme FloMax® version 2.8 permet l’acquisition et le traitement des données en
format standard FCS et sous environnement Windows™ 7 professional.
Microsoft Office Home and Business 2013
Partec FloMax® report (macro) : saisie d’élément d’identification et traçabilité.
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CyFlow® Space
Pos. N° Com. Item Qté. Prix unitaire Total 1 CY-S -3001 CyFlow® Space
5 paramètres optiques: 3 couleurs, FSC & SSC
Laser solide bleu 50 mW, 488nm
avec ordinateur et écran 22 pouces TFT ultra-plat
incluant un onduleur régulateur de tension (UPS)
Logiciel FloMax® installé sur
le PC + 3 licences déportées Imprimante couleur HP
1 EUR
43 820,00
EUR
43 820,00
2 RDL+1P Diode laser rouge 637nm,
40mW + 1 paramètre
pour Syto 61
1 paramètre optique: PMT, cartes, miroirs et filtres pour APC
Diode laser rouge 637 nm, 40 mW
1 EUR 12 000,00
EUR 12 000,00
3 VL + 1P Laser violet 405nm,
100mW + 1 paramètre
pour DAPI/Hoechst
1 paramètre optique: PMT, cartes, miroirs et filtres pour DAPI/Hoechst
Laser violet 405 nm, 100
mW
1 EUR
20 000,00
EUR
20 000,00
4 07-1431 FCS Express flow RUO 4
avec Dongle
1 EUR 1 500,00
EUR 1 500,00
5 Training Installation et formation
sur site Institut Pasteur à
Madagascar
1 EUR 1 950,00
EUR 1 950,00
6 FRET Transport à Pasteur
Antananarivo
1 EUR 1 500,00
EUR 1 500,00
Prix H.T. EUR
80 770,00
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Délai de livraison : 6 – 8 semaines après réception de la commande
Garantie: 12 mois
Conditions de livraison:
CIP Antananarivo
Conditions de paiement:
30 jours net suivant la date de facturation*
*Les frais des procédures de paiement (ex. transfert bancaire, L/C irrévocable confirmée
etc.) doivent être supportés par l’entité qui achète.
Ce devis est valable pendant 3 mois.
Les tarifs sont indiqués hors taxes et de dédouanement
La formation et l’installation sont comprises.
Les spécifications techniques indiquées dans ce document sont données à titre indicatif et peuvent faire l’objet d’éventuelles modifications.
Sainte Geneviève des Bois,
PARTEC SARL
David BASTIEN Kevin RAGOT
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Réactifs & Consommables recommandés
Pos. N° Com. Item Qté. Prix
unitaire
Total
1 04-2000 Test tubes, plastique 3,5 ml (boîte
de 500 pcs)
1 EUR 10,70
2 04-4007 Liquide de gaine, 5 litres 1 EUR 16,40 3 04-4009 Solution de nettoyage, 250 ml 1 EUR 8,60 4 04-4010 Liquide de décontamination, 250
ml
1 EUR 27,10
5 04-4012 Solution d’hypochlorite 0 EUR 18,60 6 04-0042-
2316
CellTrics® 30 µm, vert,
filtres jetables pour séparation des
cellules et noyaux. Boîte de 250
pcs.
0 EUR 210,00
7 04-0042-
2317
CellTrics® 50 µm, jaune,
filtres jetables pour séparation des
cellules et noyaux. Boîte de 250
pcs.
0 EUR 210,00
8 05-4018 Billes de Calibration 3 µm, Prêt à
l’emploi, 30 tests / 30 ml, pour
émission laser à 488 nm
1 EUR 27,90
9 05-4011 Billes CountCheck green, 50 Tests 0 EUR 37,00 10 05-4012 Concentré de particules rouges
fluorescentes, 5ml
0 EUR 309,30
11 05-4020 Concentré de particules UV 2,5µm
fluorescentes, 3ml
0 EUR 515,70
Prix H.T. EUR ,00
Spécifications du logiciel FloMax® version 2.8
Programme 32 bits sous Windows XP/Vista/Windows7
Résolution: 16 bits / 65536 canaux pour chaque paramètre et une meilleure précision
des analyses numériques en acquisition
Affichage des données sur une gamme de 64 à 32768 canaux sur histogramme 1
paramètre et 256 à 1024 canaux sur représentation 2 paramètres (dot plots)
Amplification linéaire et logarithmique sur 3 ou 4 décades
Mode de calcul basé sur une double précision arithmétique (64 bits)
Stockage des données au format standard List Mode FCS
Taille des particules analysables : 0,2 – 50 µm
Traitement des données, analyse :
Comptage volumétrique réel absolu (spécificité sur tous les cytomètres de Partec)
Analyse d’un volume d’échantillon précis et résultat direct des concentrations en
nombre d’événements par ml (ou µl) sans ajout de standards internes.
Fenêtrage “gating”
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• multiparamétrique: jusqu’à 32 paramètres
• Régions et quadrants: jusqu’à 32 mono- et bi-paramétriques curseurs / régions /
quadrants
• Fenêtres: jusqu’à 32 combinaisons logiques de régions
• Fenêtrage multi couleur / fenêtrage avec ou sans priorité des couleurs
• Régions et quadrants déplaçables et modifiables en taille et forme
• Enregistrement des données « fenêtrées » pour transport et analyse sur un autre
logiciel
• Enregistrement des fenêtres (sous format GAT) pour application sur d’autres
fichiers
• Recherche de pic sur histogramme mono paramétrique avec statistiques
Système de compensation des couleurs
• Système de compensation N-couleur (avec l’état d’auto-fluorescence)
• Valeurs numériques et graphiques des compensations
• Récupération et ré-analyse des données originales non-compensées
• Enregistrement des données compensées pour transport et analyse sur un autre
logiciel
• Enregistrement des fenêtres (sous format CMP) pour application sur d’autres
fichiers
Paramètres calculés
• Création de paramètres calculés selon des expressions arithmétiques ou des
fonctions prédéfinies
• Changement d’échelles des données
• Transformation linéaire ou en différents logarithmes pour divers visualisations
• Ratio, Log, puissance… des analyses avec toutes les combinaisons de paramètres
Analyses et résultats automatiques
• Pic et groups d’analyses et statistiques
• Analyse du contenu en ADN – cycle cellulaire avec différents modèles d’ajustement
• Analyse de ploïdie par la méthode des gaussiennes
• Support de lecture par code barre intégrable
• Génération de Rapport multi pages et multi tubes sous Word ou Excel
• Support via le système d’opération de Windows™
Contrôle de l’appareil et acquisition des données :
Interface simplifiée pour utilisation des fonctions de l’analyse et du traitement des
données en format List-Mode
Représentation graphique en temps réel des résultats jusqu’à 8 histogrammes
Compensation en temps réel ou après analyse
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Crédit Agricole Ile de France - N°compte : 38018627001 92 – Code guichet : 00432 – Code Banque : 18206 – Clé RIB : 92 IBAN : FR76 1820 6004 3238 0186 2700 192 – Code Swift : AGRIFRPP882
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Acquisition des évènements > 10 000/s (vitesse acquisition max. 25 000/s)
Acquisition > 1 million d’événements par fichier
Présélection du nombre de particules à analyser et/ou du temps d’analyse
Acquisition combinée sur 3 spots de lumière d’excitation séparés dans l’espace par
décalage dans le temps (Time-window delay system)
Discrimination des signaux par système d’intégration de hauteur, de largeur et de
surface de pics pour chaque paramètre
Acquisition d’un paramètre de temps pour les analyses de cinétiques
Système de sélection d’un canal en mode déclencheur (trigger) applicable à n’importe
quel paramètre pour l’acquisition des données, ou de tous les paramètres
Acquisition possible en mode panel multi tubes (enregistrable sous format PNL)
compatible avec une automatisation
Maquettes d’histogrammes en modèle
Sauvegarde/impression automatique des résultats
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CyFlow® SpaceYour flexible flow cytometer
Figure 1 CyFlow® Space with Autoloading Station for high-speed auto sampling
CyFlow® Space – its flexibility gives you the space you need for your work
Analysing cells and particles, be it from blood, plasma, tissue, plants, cell cultures or other materials, is an important part of much research and industrial development. To obtain statistically sound results and the confidence to proceed and invest further in your project, you need a high throughput and precise detection of each cell type for your samples. The ability to measure thousands of cells within seconds is a must.
Flow Cytometry (FCM) is the answer. Since it is a non- destructive method, it reflects the real distribution on a cellular level. Quickly and with utmost accuracy. Of course FCM is not new – it has been a proven technology for over 45 years. But there are vast differences in the available solutions and they need to meet your increasing techno-logical demands in both science and development.
In terms of FCM protocols, new fluorochromes with different spectra are launched to the market regularly. To take advan-tage of these changes, the ability to work with optimised excitation lights through different colour lasers and suitable optical filter sets is therefore of essential interest. This calls for instruments that can be customised with respect to their configuration, but at the same time remain user- friendly with a straightforward workflow. You want to concentrate on your research and not on a complicated tool.
‘Space’ means space to grow and adapt The CyFlow® Space is all about offering you flexibility and precision. Thanks to its adaptable configuration, it lets you change in line with your present requirements. And should those needs grow, you can extend it or upgrade it modularly. This kind of flexibility delivers the freedom to operate the instrument in routine settings, in single, specialised research departments or in core facilities with a range of connected working groups. And when you’re done with a particular project, you can adapt it to your next challenge.
Application areasFlexibility, flexibility, flexibility …The CyFlow® Space is an open system with high flexibility: from basic equipment up to a multi-laser and multi-parameter system, you’re sure to benefit whatever your needs.
Forget about the severe limitations of fixed instrument configurations and restricted laser wavelengths. The CyFlow® Space lets you adapt your flow cytometer to your individual applications and can accommodate the most complex customised solutions. With 10+ different lasers, up to 16 parameters and a large range of optical filters to choose from, you can optimise every fluorescence channel as you wish. Upgrades or changes are quick, easy and performed on site if you so wish.
Figure 3 Report of a multi-colour analysis of CD3/CD4/CD45 on CyFlow® Space with FloMax® software
Research field Industrial field
Biomedical research Quality control
Microbiology Industrial biotechnology
Cell biology Industrial microbiology
Biotechnology Food & beverage industry
Agroscience Plant & animal breeding
Marine biology Aqua culture
Environmental science Industrial development
Ease of useThe CyFlow® Space is simple to operate and gives users easy access to the instrument’s full capacities. Taking just five minutes to start up, you can get to work pretty much straight away. And there’s no need to hang around during shutdown either – that’s quick and easy too.
To further its user-friendliness, the CyFlow® Space’s operating software FloMax® is intuitive and efficient. It integrates instrument control, including convenient acquisition and analysis, with on- and offline data analysis and a compensation tool in a single software package. Many of its functions are just a click away, such as digital compensation of colour cross talks. Pre-defined and freely adaptable instrument settings and panel modes facilitate switching between different applications.
FloMax® is dedicated to applications in immunology, cell biology, microbiology, biotechnology, etc. To ensure compat- ibility with many of the most common FCM analysis pro- grams, it uses the Flow Cytometry Standard (FCS) data format and lets you generate individual data reports in flexible formats.
The unique Sysmex Partec counting principle of ‘True Volumetric Absolute Counting’ (TVAC) eliminates the need for time-consuming and cost-intensive use of reference beads for counting purposes. And the integrated CCD camera means you can monitor the signal directly on the display to instantly check the sample flow.
Modular extension possibilitiesIt’s important to us that the devices we deliver find effective, extensive use. As part of the Sysmex Partec FCM concept, the CyFlow® Space can be expanded and upgraded modularly by adding an Autoloading Station and other units, such as a piezo-electric cell sorter device. Upgrade options can also mean adding laser light sources, optical parameters and fluorescence channels.
CyFlow® Space Autoloading StationTo achieve higher throughput, you can add the Autoloading Station, which enables automated and accurate uptake of samples with high-speed sample loading. The station performs a flexible sample-to-sample cleaning procedure with lowest carry-over and can read both 96- and 384-well plates.
Figure 2 Separation of differently sized organisms during a single measurement in a scatter plot: Staphylococcus sp. – Lactobacillus sp. – Saccharomyces cerevisiae.The subsequent analysis comprised mitochondrial activity measurement of Staphylococcus, DNA staining of Lactobacillus, and viability measurement of Saccharomyces.
FL1 s
tain
FSC
FL1 stain
FL3
mit
ocho
ndri
al a
ctiv
ity
FL1 live cells
SSC
FSC
FL3
dead
cel
ls
Saccharomyces cerevisiae
Lactobacillus sp.
Staphylococcus sp.
But what about quality and accuracy? We have the experience …In 1968, the company Partec launched the first commercially available flow cytometer to the market. Since then, we have been tightly focused on developing the technology further in line with market demands and retaining the state of the art. Sysmex Partec stands for the highest precision and quality. ‘Made in Germany’ we now have 45 years of experience in your market, and our technology has been used with great success and acclaim in various fields in industry, research and development.
The high quality of our instruments within our FCM concept delivers systems with great stability and sensitivity. The high precision of the optical bench in the CyFlow® Space system is combined with a powerful electronic and computer system and so forms the basis for real-time signal analysis and processing with high fluorescence and scatter sensitivity.
CyFlow® Space Sorting ModuleThe sorting module is one of Sysmex Partec’s unique techni-cal solutions. It works as a closed system and lets you sort cells and particles precisely, stably and with non-destruc-tive high purity. It combines a high-resolution flow chamber with a piezo element and electric activation. In contrast to standard droplet sorters, the process in Sysmex Partec’s sorters is smooth and reduces mechanical stress – essential for numerous applications with fragile cell types, such as e.g. neuronal stem cells. As a closed sorting solution, it also offers the advantages of sterile sorting of viable cells for subsequent cell culture and aerosol-free sorting to prevent bio-hazardous exposure.
Other modules, such as a light polarisation component or an anaerobic cabinet, are available on request.
Manufacturer: Sysmex Partec GmbHAm Flugplatz 13, 02828 Görlitz, Germany · Phone +49 3581 8746-0 · Fax +49 3581 8746-70 · [email protected] · www.sysmex-partec.com
Sysmex Corporation1-5-1 Wakinohama-Kaigandori, Chuo-ku, Kobe 651-0073, Japan · Phone +81 78 265-0500 · Fax +81 78 265-0524 · www.sysmex.co.jp
You will find your local Sysmex representative’s address under www.sysmex-partec.com
Design and specifications may be subject to change due to further product development.Changes are confirmed by their appearance on a newer document and verification according to its date of issue. © Copyright 2015 – Sysmex Europe GmbH/Sysmex Partec GmbH
CYF
LOW
SPA
CE.
EN.N
.06/
15
Figure 4 Available light sources and exemplary detector configurations
Technical specifications
Lasers / LEDs Detectors Exemplary dyes
BLUE LASER 488 nm (50 mW fixed / adjustable to 200 mW)
Green Orange Orange Red Red I Red II Far Red
FITC / GFP / Alexa Fluor 488PE / YFPPE-Texas Red / PI PE-Cy5 / PerCP PE-Cy5.5 / PerCP-Cy5.5PE-Cy7
RED LASER 638 / 640 nm (25 / 40 mW)
Red I Red II Far Red
APC / APC-Cy5APC-Cy5.5 / Cy5.5APC-Cy7
VIOLET LASER 405 nm (100 mW)
Blue Green Orange
Pacific Blue / Alexa Fluor 405 / CFPCyan / AmCyan / brilliant violet 510Pacific Orange / brilliant violet 605
UV LASER 375 nm (60 mW) HIGH-POWER UV LED 365 nm
Blue DAPI / Hoechst 3342
GREEN LASER 532 nm (30 / 100 mW)
Orange Red
mStrawberry / PEmCherry / PI / PE-Texas Red
YELLOW LASER 561 nm (100 mW)
Orange Red
PE / DS Red / PE-Texas RedPE-Cy5 / PI / mCherry / mRuby
ORANGE LASER 594 nm (50 mW)
Orange Red Red Far Red
Texas Red / Alexa Fluor 594 / mStrawberryAPC / mCherry / mRFP / JRedmPlum
Flexible choice of up to 5/3 light sources (stand-alone analyser/with integrated sorter) Modular optical system with up to 16/8 optical parameters with selected PMTs (stand-alone analyser/with integrated sorter) and time parameter Exchangeable optical filters
Quartz flow cuvette for laminar sample transport and hydrodynamic focusingBiosafety cleaning systemTrue Volumetric Absolute Counting (TVAC) based on mechanical volume measurement
Selectable linear, 3- or 4-decade logarithmic scale16-bit analogue-to-digital converters, selectable trigger parameterPulse height, area and width analysis for doublet discrimination
Based on Microsoft Windows™Master licence for instrument control, data acquisition and data analysisData analysis software for multi-parametric flow cytometry data files in FCS 2.0 or FCS 3.0 standard format
Latest industry standard Windows™ PC with Microsoft Office®
Microsoft Windows™ 7 professional 32-bit operating system22" colour LCD TFT displayDVD-RW, USB and Ethernet ports
Immersion gel couplingCyFlow® Space sorter moduleCyFlow® Space Autoloading Station with CyPad software
approx. 37 kg
main unit: 560 x 300 x 650 mm
Light sources and optics
Flow system
Electronics and signal processing
FloMax® operating software
Computer system
Options
Weight
Dimensions (W x H x D)